Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние некоторых антибиотиков на иммунологические свойства организма при иммуносупрессиях

г г -. I ( у

а

3 ш

На правах рукописи

1

САКАЕВА Дина Дамировна

ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ АНТИБИОТИКОВ НА ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ОРГАНИЗМА ПРИ ИММУНОСУПРЕССИЯХ

14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа -1996

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университете.

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

Доктор медицинских наук, профессор Д.Н.Лазарева

Доктор медицинских наук, профессор С.А.Еникеева

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

Доктор медицинских наук, профессор Х.М.Насыров ' Доктор медицинских наук, профессор В.А.Стригин

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Российский государственный медицинский университет ( г.Москва)

Зашита состоится 5 июня 1996 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета К.084.35.02 при Башкирском государственном медицинском университете (450000, г.Уфа, ул. Ленина д.З).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан 3 мая 1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Как правило, нарушение иммунологической реактивности сопровождается развитием инфекционных осложнений, причем природа их(возбуднтель) может определяться характером нарушения иммунитета.

Бесспорно, имеется прямая связь между нарушениями иммунитета и развитием инфекций при применении иммунодегтрессантов. Иммунодепрессанты: антиметаболиты, цитостатики, облучение - в настоящее время это средства лечения самых различных болезней соединительной ткани, крови, опухолей и т.д. Во всех этих случаях имеет место подавление разных звеньев иммунитета(Ыеигог1 D. et al, 1988; Thompson R., 1988). На этом фоне часто развиваются инфекционные осложнения, вызванные бактериями, грибами, обостряется латентная инфекция (Coften J., et al, 1982, Kreth H., 1985, Rieger C„ 1985).

Медикаментозное лечение (не говоря уже об иммунодепрессантах) также часто обладает иммуносупрессивным действием, особенно в тех случаях, когда его применяют в течение длительного времени, например, при туберкулезе (Авербах М.М. и др. 1980).

При трансплантации органов и тканей основной причиной нарушений иммунитета и связанных с этим гнойных осложнений является также применение иммунодепрессантов. Однако, например, при пересадке кроветворной ткани (не полностью гистосовместимой) важным фактором нарушения иммунитета является реакция трансплантат против хозяина (Engelhard D., 1985; Persch J. et al, 1986). При опухолевых процессах иммунодепрессия возникает из-за развития интоксикации и в результате стимуляции супрессорных механизмов. Стресс, пожилой, старческий и детский возраст повышают риск развития инфекционных осложнений (Зимин Ю.И. и др. 1985; Гадалов В.П., 1985, Вольф В.Е. и др. 1985; Менделенко М.М. и др. 1986; Aerstad Н. et al, 1983; Mogi G., 1986, Wilson С., 1986;).

В условиях широкого распространения иммунодефицитпых состояний, обусловливающих развитие инфекционных осложнений, возрастает роль антибиотикотерапии.

Практика показывает, что широкое применение антибактериальных препаратов приводит к различным нежелательным побочным явлениям и осложнениям. Одной из сторон побочного действия антибиотических препаратов является влияние их на иммуногенез. В последние годы появилось значительное количество исследований, посвященных разработке данной проблемы. Однако, результаты эти достаточно противоречивы (Сильвестров В.П., Караулов A.B., 1983; Кашкин К.П., Караев З.О., 1984; Николаев А.И., Федоренко. О.Д., 1984; Соловьев Г.М., Петрова И.В., Ковалев C.B., 1987; Raeburn З.А., 1972; Santagata Aurora, 1985; Pocidalo S.S., et al, 1985; O'Grady Francis, 1985; Lesourd B. 1987 и др.).

Антибиотики действуют на иммунную систему непосредственно в отсутствии возбудителя инфекций и косвенно, изменяя антигенную структуру микроба и характер формирования иммунитета в организме.

Иммуномодулирующее действие антибиотиков имеет, безусловно, большое значение в выборе препарата при бактериальных инфекциях в связи с тем, что последние часто являются причиной развития иммунологической недостаточности или следствием ее, а в свою очередь антибиотики в ряде случаев могут усугублять иммунодефицит.

Для повышения эффективности антибиотикотерапии применяют иммуностимуляторы. Однако, иммунофармакологические аспекты

взаимодействия антибиотиков и иммуностимуляторов в условиях иммунодефицита почти не изучены.

Вышеизложенное побудило нас исследовать влияние четырех наиболее широко применяемых в клинике антибиотиков на иммунологические свойства организма в условиях фармакологического иммунодефицита, вызванного введением циклофосфана и азатиоприна. И провести коррекцию измененного иммунного ответа иммуностимуляторами.

Кроме того, изучение влияния антибиотиков на иммунитет представляет самостоятельное значение, так как имеющиеся в литературе сведения довольно противоречивы.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ:

Изучение иммунотропных свойств антибиотиков с целью повышения эффективности антибиотнкотерапии инфекционных осложнений в условиях иммунодефицита.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить влияние антибиотиков на течение экспериментальной инфекции, вызванной протеем, у интактных животных и в условиях иммунодефицита.

2. Выяснить действие гентамнцина, ампициллина, эритромицина и рифампишша на первичный иммунный ответ у интактных животных и на фоне иммунодепрессантов.

3. Исследовать влияние антибиотиков на гиперчувствительность замедленного типа у шггактных животных и при иммунодефицитах.

4. Изучить действие антибиотиков на фагоцитоз и кислородзависимый метаболизм фагоцитов у интактных животных и в условиях иммуносупрессии.

5. Выяснить возможности коррекции измененного иммунного ответа с помощью иммуностимуляторов.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА:

Впервые в сравнительном аспекте и комплексно изучена иммунотропная активность ряда наиболее часто применяемых в клинике антибиотиков у интактных животных и в условиях иммунодефицита.

Новой является вся совокупность данных, раскрывающих влйяние указанных препаратов на гуморальный и клеточный иммунные ответы, функции мононуклеарных фагоцитов и ПЯЛ в зависимости от доз и схем введения, а также степени жесткости супрессии, вызванной цитостатиками.

Новыми являются данные о коррекции метилурацилом, левамизолом и продигиозаном иммунопатий, вызванных совместным введением антибиотиков и цитостатиков или только антибиотиков.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

С практической точки зрения полученные результаты характеризуют гентамицин, рифампицин, ампициллин и эритромицин как фармакологические агенты, обладающие выраженным влиянием на иммунологическую реактивность организма.

Установлена зависимость иммунотропных эффектов препаратов от доз, а также глубины супрессии, вызванной циклофосфаном и азатиоприном, что имеет значение в клинике у больных с онкопатологией, лимфопролиферативными и системными заболеваниями, для трансплантологии.

Данные о корригирующем влиянии иммуностимуляторов на эффекты изучаемых препаратов позволяют оптимизировать существующие схемы лечения инфекционных осложнений, возникших в условиях иммунодефицита.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

- Гентамицин, эритромицин, ампициллин и рифампицин - препараты с выраженной и разнонаправленной иммунотропной активностью.

- Циклофосфан и азатиоприн модулируют иммунотропную активность антибиотиков.

Влияние иммунокорректоров (метилурацила, левамизола и продигиозаиа) на иммунотропные свойства антибиотиков неоднозначно как у интактных животных, так и на фоне иммуносупрессии.

> АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ:

Основные результаты доложены на Всероссийской студенческой конференции "Вопросы клинической и экспериментальной иммунологии"(г.Омск 1990 г.), наХ научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (г.Челябинск 1990г.), на 1-ом сьезде российского научного

общестиа фармакологов "Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств"(Волгоград, 1995 г.), научных конференциях Башкирского государственного медицинского университета, заседаниях общества фармакологов Республики Башкортостан.

ВНЕДРЕНИЕ:

Материалы диссертации включены в учебный план на кафедрах фармакологии Nb и №2 БГМУ, кафедры фармакологии Казанского государственного медицинского университета, а также использованы при написании соответствующего раздела монографии " Иммунотропные свойства лекарственных средств" Е.К.Алехин, Д.Н.Лазарева, C.B.Сибиряк (Уфа - 1993 г.).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 155 страницах машинописного текста, состоит из введения, пяти глав, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 306 источников, в том числе 115 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 33 таблицами и 30 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 2000 белых беспородных половозрелых мышах обоего пола массой 16-20 граммов, мышах линий: СВА - 400, BALB/c -400, полученных из питомника лабораторных животных "Рапполово" АМН России и Чишминского питомника лабораторных животных НПО "Иммунопрепарат". Животные содержались в стандартных условиях и получали стандартный рацион вивария.

Антибиотики вводились в диапазоне терапевтической для человека дозы: минимальной и максимальной. Ампициллин - 50 и 100 мг\кг внутримышечно, эритромицин - 12.5 и 25 мг\кг внутрь, гентамицин - 3 и б мг\кг внутримышечно, рифампицин - 10, 20 и 50 мг\кг внутрь в течение 4-6 дней.

Оптимальные дозы и режим введения иммуностимуляторов были выбраны согласно литературным данным: проднгиозан - 0,5 мкг/кг (З.В.Ермольева, Г.З.Вайсберг, 1976; Д.Н.Лазарева, Е.К.Алехин, 1985);

метилурацил - 200 мг/кг (Д.Н.Лазарева, Е.К.Алехин, 1985); левамизол - 2,5 мг/кг (А.Е.Александрова, Н.В.Заболотпых, 1981; М.З.Каневская и др. 1981;

A. Par, 1980; J.C.Jiacco et al, 1984).

Создавались разные по жесткости модели супрессии: циклофосфан вводился в дозах 50, 100, 150 и 200 мг\кг, либо 50 мг\кг 4 или 5 раз(Васильева

B.И., 1971, Гордиенко С.П., 1973, Петров Р.И.,1980), азатиоприн в дозе 80 мг\кг внутрь пятикратно через день(Алехин Е.К.,Рябчинская Л.А., 1985).

Схемы введения препаратов по отношению к антигенному воздействию указаны при изложении результатов исследования. В работе использованы следующие методы:

1. Модель экспериментального инфекционного процесса.

Влияние препаратов на противонпфекционный иммунитет изучали на модели экспериментального инфекционного процесса, вызванного Pr.mirabilis 4641 (Ермольева З.В. и др., 1976). За животными наблюдали в течение десяти дней, оценивали выживаемость на +3 и +10 сутки и среднюю продолжительность жизни.

2. Метод оценки гуморального иммунитета.

Влияние препаратов и их комбинаций на гуморальный иммунный ответ оценивали по количеству антителобразующих клеток (АОК) в селезенках мышей к эритроцитам барана (ЭБ) по методу N.K.Jerne и A.A.Nordin (1963) в модификации A.J.Cunningham (1965).

3. Методы оценки функциональной активности фагоцитов. Функциональное состояние фагоцитов (полиморфноядерные лейкоциты и

макрофаги) оценивали по способности поглощать частицы латекса и по способности к активации кислородзависимого метаболизма по тесту восстановления нитротетразолиевого синего (НСТ-тест) (Булава Г.В., 1988; Wade В., 1983).

В качестве обьекта фагоцитоза использовали частицы латекса. Поглотительную способность оценивали после 15-минутной инкубации при 37 С микроскопически в фиксированных, окрашенных по Романовскому-Гимзе препаратах по величине фагоцитарной активности (проценту активных фагоцитов), фагоцитарному индексу (число поглощенных частиц латекса на 1

потенциальный фагоцит) и показателю интенсивности фагоцитоза /среднее число частиц латекса, поглощенных каждой участвующей в фагоцитозе клеткой/.

Результаты НСТ-теста учитывали через 30 мин после инкубации суспензии фагоцитов в 0,1 % растворе нитротетразолиевого синего морфологическим методом (Шубин М.Г., Мешшков В.Г., 1978). В окрашенных мазках определяли долю активных клеток, то есть содержащих гранулы восстановленного диформазана, и индекс активации, который характеризуется степенью активации в перераспределении на 1 фагоцит.

Показатели вычисляли для интактпой суспензии фагоцитов /спонтанный НСТ-тест/, в процессе фагоцитоза частиц латекса /индуцированный НСТ-тест/.

4. Методы оценки Т - клеточного иммунитета.

Оценку влияния изучаемых препаратов на Т-клеточный иммунитет изучали на модели контактной аллергии - одной из разновидностей реакции гиперчувствителыюсти замедленного типа (ГЗТ) (Кпор I. е1 а1,1982). Аллергеном служил динитрохлорбензол (ДНХБ), растворенный в ацетоне. Выраженность реакции оценивали по проценту увеличения массы пораженного уха по сравнению со здоровым (Рагауге Л.Р., гаигезэегдиез Н., 1980).

5. Метод оценки токсикологических параметров.

Острую токсичность изучаемых препаратов определяли по методу Литчфилда - Уилкоксона на белых беспородных мышах (Беленький М.Л., 1963). .

б. Статистическая обработка.

Результаты экспериментов обработаны с помощью методов математической статистики. В каждом вариационном ряду вычисляли среднее арифметнческое(М), ошибку среднего(±т). Достоверность различий между исследуемыми группами выявляли с помощью критерия Стыодента. Разницу считали достоверной при р<0.05 (Беленький М.Л.,1963; Гублер Е.В.,1978).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение иммуиотропных свойств антибиотиков и эффективности иммуностимуляторов было начато с интегрального теста-резистентности к

экспериментальной инфекции, вызываемой протеем, в условиях иммунодефицита, достигаемого введением циклофосфана и азатиоприна. Инфекционный агент выбран неслучайно: было учтено, что "иммунокомпрометированные" больные наиболее чувствительны к грамстрицательной флоре (Rogers Т. К., 1985), а инфекционный процесс,

вызванный протеем, не имеет специфичности и будет характерным для всех Гр—

¡k

бактерий.

Предварительные исследования по методу стандартных дисков показали, что возбудитель среднечувствителен к изучаемым антибиотикам. In vivo все они, кроме эритромицина проявили защитные свойства. Эффект эритромицина не был постоянным - с увеличением дозы возбудителя он нивелировался.

На фоне циклофосфана и азатиоприна ампициллин сохранял свои защитные свойства лишь в дозе 100 мг/кг, гентамнцин и рифампицин в обеих, причем последний повышал и выживаемость животных в дозе 10 мг/кг, как на фоне циклофосфана, так и азатиоприна(табл.1), эритромицин же не был эффективен.

Введение иммуностимуляторов с протективной целью показало, что метилурацил ухудшает защитный эффект ампициллина и рифампицина. Это, видимо, связано со стимуляцией пиримидинами роста бактерий (Грех И. Ф., 1968, Бухарин О. В. и др., 1969).

Введение же продигиозана вызывает тенденцию к усилению эффекта ампициллина и рифампицина. На усиление продигиозаном эффекта антибиотиков указывают 3. В. Ермольева, Г. 3. Вайсберг, (1976); Т. О. Попова и др., (1977); Г. П. Кондратенко и др., (1976).

Оптимальной оказалась комбинация метилурацила с эритромицином у животных при циклофосфановой нммуносупрессин: иммуностимулятор, введенный как корректор, усилил эффект антибиотика, который не проявлялся при его изолированном введении. Ряд авторов указывают на усиление действия антибиотиков под влиянием метилурацила (Мавлютова М. Г., Лапиров С. Б., 1989; Лапиров С. Б., Шарипов М. Г., 1989).

Таблица 1.

Влияние гептамшмша и рифампнципа на течение экспериментальной инфекции, вызванной протеем

№ Группа п Число мышей, выживших в разные сроки после заражения Срсдг (ЯЯ продолжительность жизни(суток)

1-ые сутки 3-ые сутки 10-ые сутки

1 Контроль 10 7 7 4 6.4 ± 0.97

2 Циклофосфан 50 мг\кг х 4 раза 12 8 7 3 5.1710.83

3 Рифампицин 10мг\кг 11 10 9 8 8.36 ±0.9

4 Рифампицин 20 мг\кг 11 10 9 7 8.18 ±0.9 * 1-4

5 Циклофосфан + Рифампицин 10мг\кг 10 10 10 10 ♦2-5 10 ± 0 ♦2-5

6 Циклофосфан + » Рифампицин 20 мг\кг 10 10 10 8 9.6 ±0.216 ♦1-6

7 Гентамиции 3 мг\кг 11 11 11 9 9.55 ±0.3 * 1-7

8 Гентамицин б мг\кг 12 11 11 7 8.25 ±0.277 ♦1-8

9 Циклофосфан + Гентамицин 3 мг\кг 10 9 9 9 ♦2-9 9.1 ±0.974 ♦2-9

10 Циклофосфан Гентамицин б мг\кг 10 9 7 7 7.5 ± 0.974

* - различие достоверно

Большая роль в обеспечении антиинфекционной резистентности принадлежит системе мононуклеарных фагоцитов и полиморфноядернмх лейкоцитов(Лазарева Д.Н.,!967). Следующий этап наших исследований был посвящен изучению поглотительной функции и напряженности кнелородзавнеимого метаболизма фагоцитов в НСТ-тестс, поскольку генерация активных форм кислорода - ведущий механизм микробицндности ПЯЛ и макрофагов(КотоУ5ку С.М., Вос1ууеу ]., 1983).

Рнфампиции стимулирует поглотительную функцию нейтрофилов у интактных животных(рис.I). На фойе азатиоприна антибиотик углубляет депрессию поглотительной функции ПЯЛ, вызванную иммуиодспрсссантом, а на фоне циклофосфана увеличивает лишь показатель интенсивности фагоцитоза.

л

Кошроль

Гис.1 Влияние антибиотиков на фагоцитарный индекс нейтрофнлов у интактных животных.

Эритромицин не изменяет поглотительную функцию ПЯЛ у интактных животных и при иммуносупрессии. Рифампицин и эритромицин не оказывают влияния па поглотительную функцию макрофагов у интактных животных и на фоне циклофосфана, а на фоне азатиоприна антибиотики стимулируют ее(рис.2).

1

Рис.2 Влиннис антибиотиков и их сочетании с метилурацилом на фагоцитарный индекс макрофагов при нммупосупресснп, вызванной азатноприном.

(1 - контроль, 2 - азатиоприи, 3 - азатиоприн + гентамицин, 4 - азатиоприн + рифампицин, 5 - азатиоприн + эритромицин, 6 - азатиоприн + ампициллин, 7 -азатиоприн + метилурацил, 8 - азатиоприн + гентамицин + метилурацил, 9 -азатиоприн + рифампицин + метилурацил, 10 - азатиоприн + эритромицин + метилурацил, 11 - азатиоприн + ампициллин + метилурацил).

Эритромицин и рифампицин усиливают спонтанный и индуцированный оксидантный метаболизм ГОШ. В соответствии с современными взглядами на природу фагоцитоза, активация индуцированного оксидантного метаболизма трактуется как свидетельство высокой потенции фагоцитов, их лучшей микробицидности.

Эритромицин сохраняет эту способность и при иммуносупрессиях, а рифампицин на фоне циклофосфана не изменяет, на фоне же азатиоприна угнетает кислородный метаболизм в спонтанном НСТ-тесте.

Кислородзависимый метаболизм макрофагов под влиянием антибиотиков не изменяется у интактиых животных и на фоне циклофосфана. На фоне азатиоприна эритромицин стимулирует спонтанный и индуцированный оксидантный метаболизм макрофагов.

Ампициллин не изменяет поглотительную функцию и кислородзависимый метаболизм ПЯЛ у иитактных животных и при иммуносупрессиях. Гентамицин у интактиых животных и на фоне азатиоприна не изменяет ноглотительиую функцию ГОШ, а на фоне циклофосфана антибиотик стимулирует ее (рис.3). Кислородзависимый метаболизм гентамицин стимулирует в спонтанном НСТ-тесте при иммуносупрессиях.

Цмклофосфан

Рнс.З Влияние антибиотиков на фагоцитарный индекс нейтрофилоп при иммуносупрессии, вызванной цшслофосфа/юм.

и

На поглотительную функцию макрофагов гентамицин не оказал влияния у интактных животных и иа фоне циклофосфана, а на фоне азатиоприна вызывал угнетение се. Введение метилурацила позволило устранить данную депрессию(рис.2).

Не последняя роль в обеспечении антиинфекционной принадлежит гуморальному иммунитету, изучению которого следующей этап наших исследований.

Результаты опытов показали, что эффекты антибиотиков зависят от фазы иммунного ответа, в которую вводится препарат, длительности введения, а также жесткости супрессии, вызываемой иммунодепрессантом. Так, гентамицин у интактньгх животных в некоторых сериях опытов, вызывал достоверное снижение как числа АОК во всей селезенке, так и количества спленоцитов. При самой жесткой циклофосфановой супрессии антибиотик вызывал дальнейшее ее углубление (табл.2), при уменьшении жесткости супрессии этот эффект антибиотика не проявлялся.

Таблица 2

Влияние гентамицина на число АОК в селезенках интактных животных II при супрессии , вызванной циклофосфаппм , введенным в разных дозах.

Серия Группа п Число АОК во всей селезенке, М±ш Количество спленоцитов во всей селезенке, М±ш Число АОК в пересчете на 10 спленоцитов, М±ш

I Контроль 8 37015.39 ± 9170.96 80.94 ± 19.28 754.62 ±255.74

Циклофосфан 200 мг\кг 5 3813.68 ± 525.12 *1-2 68.0 ± 19.31 85.62 ±32.0 ♦1-2

Гентамицин 3 мг\кг 8 49139.7 ± 14578.17 72.81 ± 10.64 903.77 ±332.71

Цнклофосфан + Гентамицин 7 1596.1 ± 332.75 "2-4 30.93 ± 7.64 ♦2-4 67.0 ±23.44

И Контроль 7 62152.72 ± 20032.2 84.3 ± 12.1 813.29 ±201.16

Циклофосфа'И 100 мг\кг 5 2642.07 ± 551.43 »1-2 23.0 ±2.68 ♦1-2 124.1 ±29.54 ♦1-2

Гентамицин 3 мг\кг 8 33048.25 ± 12202.1 *1-3 41.11 ±8.33 ♦1-3 674.75 ±207.13

Циклофосфан + Гентамицин 5 3727.67 ± 529.6 45.63 ± 10.53 ♦2-4 88.36 ± 15.95

резистентности был посвящен

* - различие достоверно

Введение гентамицина до антигенного стимула не изменяет показателей гуморального иммунитета.

Рифампиции, введенный в дозе 10 мг/кг интактным животным и па фоне циклофосфана, снижал содержание АОК в селезенках без изменения числа спленоцитов. Подобная направленность в подавлении гуморального иммунитета позволяет рассматривать ее, не как проявление общетоксического действия антибиотика, а как результат избирательного воздействия на механизмы гуморального иммуногенеза (табл.3). Метилурацил устраняет депрессию антителообразования у "иммунокомлрометированпых" животных, леченных рифампицином.

Таблица 3

Влияние рнфямшщина в дозе 10 мг\кг, введенного в индуктивную фазу иммунного ответа на число АОК в селезенка* интактпых животных и на фоне цнклофосфановоп супрессии разной степени жесткости

Сер ия Группа п Число АОК во всей селезенке, М±т Кол-во сплспоцитов во всей селезенке (млн.), М±ш Число АОК в пересчете на 10 спленоцитов, Mini

Контроль 7 81012.65 ± 45586.74 93.0119.29 1201.171290.22

I Циклофосфан 150 мг\кг 7 2937.54 ± 623.0 * 1-2 65.71 ±21.56 105.7149.38 ♦1-2

Рифампиции с 0 по +3 дни 6 52318.79 ± 16816.55 84.58 16.2 606.0 +184.65

2 + 3 6 2214.72 ± 725.23 52.9215.76 60.4 1 19.7

Контроль 8 164501.78 ± 40252.8 157.191 17.95 1140.94 1307.15

II Циклофосфан 100 мг\кг 8 46032.2 ± 14378.43 *1-2 95.561 14.88 418.64 1150.6

Рифампиции с 0 по +3 дни 7 192434.3 ± 30433.0 111.561 12.97 1769.75 1351.38

2 + 3 6 10711.26 ± 1850.97 ♦2-4 98.75 1 11.64 131.83 126.9 *2-4

* - различие достоверно

У интактных животных левамизол устраняет депрессию антитслообразования, вызванную рифампицином, причем антибиотик усиливает эффект иммуностимулятора, что согласуется с результатами полученными С. М. Фридман, наблюдавшей устранение лсвамизолом угнетающего действия рифампицина.

Введение рифампицина в дозе 50 мг/кг интактным животным и на фоне циклофосфана в течение четырех дней до иммунизации не изменяло показателей антитслогснеза, а введение антибиотика в течение десяти дней интактным животным снижало изучаемые показатели. На фоне циклофосфана же длительное введение рифампицина (50 мг/кг) сопровождалось достоверным возрастанием числа АОК во всей селезенке и в пересчете на 1 миллион спленоцитов. Такое действие антибиотика, видимо связано со снижением эффективности циклофосфана вследствие повышения его метаболизма в печени под влиянием рифампицина, являющегося индуктором микросомальных ферментов печени, о чем свидетельствует снижение токсичности циклофосфана и укорочение длительности гексеналового сна (табл.4). ЛДзо циклофосфана для мышей - 380 мг\кг, а после введения рифампицина в дозе 50 мг\кг в течение 8 дней ЛДзо = 716.5 мг\кг.

Таблица 4

Влияние рифампицина п дозе 10 и 50 мг\кг на длительность гексеналового сна у интактных животных и па фоне циклофосфана

Группа п •Длительность сна(мип) Р

1 Контроль 9 43.07 ±8.0

2 Циклофосфаи 200 мг\кг 9 109.33 ± 11.43 * 1-2 р < 0.005

3 Рифампицин 10 мг\кг 8 34.75 ±2.93

4 Рифампицин 50 мг\кг 7 21.29± 1.51 *1-4 р £ 0.05

5 Циклофосфаи + Рифампицин 10 мг\кг 8 75.5 ± 12.0

6 Циклофосфаи + Рифампицин 50 мг\кг 7 46.57 ±5.0 *2-6 р < 0.005

* - различие достоверно

При введении рифампицина в дозе 50 мг/кг после антигенного стимула интактным животным и на фоне циклофосфана наблюдалось возрастание числа АОК и снижение количества спленоцитов. Подобная направленность действия отражает, по-видимому, неспецифическое цитотоксическое влияние препарата.

Ампициллин и эритромицин не изменяли показателей гуморального иммунитета у интактных животных и на фоне циклофосфана.

На фоне азатиоприна эритромицин и рифамгшцин стимулируют антителогенез, гентамицин угнетает, а ампициллин не изменяет.

Гиперчувствительность замедленного типа - распространенный тин реакций, возникающий при инфекционных заболеваниях и вакцинации.

ГЗТ развивается ко всем видам возбудителей, независимо от их патогенности.

Сложность генеза аллергических реакций замедленного типа и различие в механизме действия отдельных иммунотроппых препаратов обусловливают неоднородность результатов их действия на реакцию ГЗТ.

Нами установлено, что рифампицин и эритромицин у интактных животных не изменяют течения реакции, гентамицин снижает, а ампициллин повышает ее выраженность.

Под влиянием циклофосфана выраженность реакции ГЗТ возрастала, этот факт можно объяснить подавлением цитостатиком Т- и 13-супрессороп (АБЬехоп в. Ь., 1980, М^Биока А. е1 а1, 1984).

Рифампицин и эритромицин, введенные на фоне жесткой цнклофосфановой супрессии (200 мг/кг), снижали индукцию ГЗТ, гентамицин же углублял не жесткую, а мягкую супрессию, ампициллин не изменял течения реакции.

На фоне азатиоприна антибиотики не изменяли течения реакции.

Изолированное применение иммуностимуляторов с протективной целыо у интактных животных и при иммуносупрессии не изменяло течения реакции ГЗТ. Совместное применение рифампицина с иммуностимуляторами, введенными а профилактической схеме интактным животным и при жесткой циклофосфановой сунерссни, усилило выраженность реакции(рис.4).

35 т

3 30 •

3 25 -о

та

5 20

х

I 15 -

г X

5 ю -

о

* 5-

0

1 23 4 б 6 789 10

Рис.4 Влияние комбинированного применения рифампицина с иммуностимуляторами, введенными в профилактической схеме, на течение рсакшш ГЗТ у интактных животных и при иммуносупрссснн, вызванной циклофосфаном,

( I - контроль, 2- рифампицин, 3- рифампицин + мстилурацил, 4 - рифампинин + лсвамизол, 5 - рифампицин + продигиозан, б- циклофосфан 200 мг\кг, 7 -циклофосфан + рифампицин, 8 - циклофосфан + рифампицин + мстилурацил, 9 -циклофосфан + рифампицин + левамизол, Ю - циклофосфан + рифампицин + продигиозан)

При использовании иммуностимуляторов с лечебной целью на фоне рифампицина наблюдалось снижение интенсивности реакции ГЗТ лишь под влиянием левамизола. При жесткой циклофосфановой супрессии снижение выраженности реакции на фоне рифампицина происходило под влиянием левамизола и метилурацила.

В наших опытах комбинация эритромицина с левамизолом у интактных животных снижала интенсивность реакции ГЗТ при введении в лечебной схеме. У "иммунокомпрометированных" циклофосфаном животных на фоне эритромицина лсвамизол при профилактическом и при лечебном введении стимулировал выраженность ГЗТ, мстилурацил - при лечебном, а продигиозан при профилактическом. Применение комбинаций эритромицина с иммуностимуляторами на фоне азатиоприна не изменяет течения реакции ГЗТ.

Введение гентамицина, вместе с иммуностимуляторами как в лечебной, так и в профилактической схеме при циклофосфановой иммуносупрессии не

изменяет течения реакции, на фоне же азатиоприна левамизол с гентамицином еиижают интенсивность ГЗТ.

Применение иммуностимуляторов с лечебной целью у животных, леченных ампициллином, снижает выраженность реакции как в условиях циклофосфановой иммуносупрессии, так и без нее. 13 профилактическом введении стимуляторы не изменяют течения реакции.

На фоне азатиоприна введение как одного ампициллина, так и его комбинаций с иммуностимуляторами не изменяло течение реакции ГЗТ.

Итак, нашими исследованиями расширены представления об иммунотропных свойствах антибиотиков у интактных животных и в условиях фармакологического иммунодефицита, вызванного циклофосфаном и азатиоприном. Применение иммуностимуляторов модулирует характер влияния антибиотиков на отдельные звенья иммунитета у интактных животных и на иммунодепрессивном фоне.

ВЫВОДЫ

1. Влияние изученных антибиотиков на отдельные звенья иммунитета у интактных животных и на фоне иммуносупрессии неоднозначно.

2. Эффективность гентамицина при экспериментальной инфекции, вызванной протеем, сохраняется и на фоне иммуносупрессии. Антибиотик угнетает ГЗТ и антителообразование, а также углубляет жесткую супрессию его, вызванную азатиоприном и большими дозами циклофосфана. На фоне циклофосфана гентамицин способен стимулировать спонтанную метаболическую активность макрофагов и поглотительную способность ПЯЛ.

3. Рифампицин при экспериментальной инфекции проявляет защитный эффект не только у интактных животных, но и при иммуносупрессии. Антибиотик стимулирует фагоцитарную активность ПЯЛ и макрофагов у интактных животных и на фоне иммуносупрессии, вызванной циклофосфаном, а также кислородзависимый метаболизм ПЯЛ у интктных животных. Препарат увеличивает число АОК на фоне азатиоприна, а в больших дозах и при иммуносупрессии, вызванной циклофосфаном.

4. Эритромицин не проявляет терапевтический эффект при экспериментальной инфекции, вызванной протеем, не влияет на гуморальное и клеточное звено иммунитета, а на фоне азатиоприна увеличивает число АОК и угнетает выраженность ГЗТ'при жесткой циклофосфановой иммуносупрессии. Антибиотик стимулирует пейтрофильпый и макрофагальный фагоцитоз.

5. Ампициллин сохраняет терапевтическую активность на фоне иммуносупрессии, не влияя на фагоцитарную активность и антителогенез.

6. Иммунокоррскторы у интактных животных и на фоне иммуносупрессии часто изменяют характер влияния антибиотиков на отдельные звенья иммунитета.

7. Степень депрессии гуморального иммунитета, вызываемая гептамицином уменьшается под влиянием метилурацила и продигиозана. Метилурацил снимает угнетение поглотительной функции макрофагов, вызванные азатиоприном и гентамишшом.

8. Депрессия антителогенеза под влиянием рифампицина устраняется введением метилурацила и лсвамизола. У интактных животных и на фоне циклофосфана профилактическое введение всех изученных иммуностимуляторов в сочетании с рифампицином способно повышать РГЗТ. На фоне азатиоприна метилурацил усиливает стимуляцию рифампицином поглотительной способности макрофагов, но не нейтрофилов.

9. Лечебный эффект эритромицина при протейной инфекции на фоне циклофосфана повышает метилурацил при введении в качестве корректора. При угнетении РГЗТ, вызванной эритромицином па фоне циклофосфана иммуностимуляторы могут устранить его.

10. На фойе ампициллина иммуностимуляторы, как правило, не улучшают состояние иммунитета.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При инфекции на фоне иммуносупрессии, вызванной циклофосфаном и азатиоприном, рационально применение ампициллина или эритромицина (при

чувствительности возбудителя), как антибиотиков не угнетающих систему иммунитета.

2. При лечении гентамиципом и рифампицином на фоне супрессии, вызванной циклофосфаном, необходимо учитывать возможное усилеиие антибиотиками депрессии иммунитета.

3. При инфекциях на фоне иммуносупрессии, вызванной азатиоприиом, рационально применение рифампицина.

4. Применение метилурацила, продигиозана и левамизола па фоне ампициллина нерационально, кроме заболеваний, в основе которых лежит РГЗТ.

5. При антибиотикотерапии метилурацил чаще, чем продигиозан и левамизол проявляет иммунокорригирующий эффект.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Иммунотропные свойства некоторых антибиотиков.-Тез.докладои Всероссийской студенческой научной конференции,- Омск.-1990.-с. 13.

2. Влияние антибиотиков на эффективность илшулосчимуляторон.-Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях-Тез.докладов X научной конференции.-Челябинск.-1990.-с.220.

3. Влияние рифампицина на ангителогенез при иммуносупрессии, вызванной циклофосфаном.-Тез.докл. 55-ой конференции молодых ученых БГМИ.-Уфа.-1990.-с.26.

4. Сочетание иммуностимуляторов как метод коррекции вторичных иммунодефицитов. Экспериментальная и клиническая фармакология,-1993,-№2,с.39-42(соавт: Алехин Е.К., Лазарева Д.Н., Богданова А.Ш., Рябчинская Л.А., Муфазалова H.A.).

5. Проблемы взаимодействия иммуномодуляторов с другими лекарственными препаратами,- Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств: Сборник тезисов 1-го Съезда Российского научного общества фармакологои.-Волгоград,-1995.-е. 13(соавт: Алехин Е.К.,

Лазарева Д.Н., Красилова И.Л., Богданова А.Ш., Рябчинская Л.А., Муфазапова H.A., Шигаев Н.И.).

6. Влияние гентамииина и рифампицина на иммунологические свойства организма при иммуносупрсссии, вызванной циклофосфаном. Нсйроиммунология. Нсйроинфскция. Иейроимидж: Материалы 4-ой научной конференции 25-27 м"ая 1995 г. в Санкт-Петербурге.-Санкт-Петербург: Лики России, 1995.-е. 100-103(соавт: Лазарева Д.Н.).

7. Влияние некоторых антибиотиков на аптителообразование при циклофосфанопой супрессии разной степени жесткости.-Уфа.-Здравоохранение Башкортостана.-№4-5.-1996.-с.39-42.

Подписано в печать 03.04.96. Формат 60х84'/|6. Заказ 48. Тираж 100. Типография ИФ Копи-центр