Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Влияние мелатонина на канцерогенез, индуцируемый уретаном и бенз(а)пиреном у мышей

На правах рукописи

ВЕСНУШКИН Георгий Михайлович

ВЛИЯНИЕ МЕЛАТОНИНА НА КАНЦЕРОГЕНЕЗ, ИНДУЦИРУЕМЫЙ УРЕТАНОМ И БЕНЗ(а)ПИРЕНОМ У МЫШЕЙ

14 00 14 - онкология

14 00 15 - патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

003 159152

Санкт-Петербург 2007

Работа выполнена на кафедре патологии с курсом патологической физиологии ГОУВПО «Мордовский государственный университет им Н П Огарева» и в отделе канцерогенеза и онкогеронтологии ФГУ НИИ онкологии им Н Н Петрова Росмедтехнологий

Научные руководители

Доктор медицинских наук, профессор Анисимов Владимир Николаевич Доктор медицинских наук, профессор Плотникова Надежда Алексеевна

Официальные оппоненты

Доктор медицинских наук, профессор, руководитель лаборатории онкоэндокринологии НИИ онкологии им Н Н Петрова Росмедтехнологий Берштейн Лев Михайлович

Член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патологической анатомии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им И И Мечникова Аничков Николай Мильевич

Ведущее научное учреждение Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им акад И.П. Павлова

Защита диссертации состоится «г'--' » октября 2007 г в 14 часов на заседании диссертационного совета № Д 208 052 01 при НИИ онкологии им Н Н Петрова Росмедтехнологий по адресу 197758, Санкт-Петербург, Песочный-2, ул Ленинградская, д 68

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института и на сайте (www niioncologn ru) с 20 09 2007 Автореферат разослан сентября 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Р В Орлова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В настоящее время заболеваемость злокачественными новообразованиями во всем мире неуклонно растет (D М Parkin et al, 2001) Именно поэтому поиск препаратов, препятствующих развитию рака, является одной из основных задач противораковой борьбы

В последние годы большое внимание уделяется изучению биологических эффектов мелатонина - гормона, синтезируемого в эпифизе (шишковидной железе) животных, преимущественно в ночные часы (В Claustrat et al, 2005) Мелатонин обладает широким спектром физиологических влияний на эндокринную и репродуктивную функцию (В Н Анисимов и соавт, 2003, Ф И Комаров и соавт, 2004, В Claustrat et al, 2005), поведение (Э Б Арушанян, 2005) и экспрессию генов (С В Анисимов и соавт, 2002, S V Amsimov, N Popovic, 2004)

Многочисленные экспериментальные исследования позволили установить, что наиболее важными физиологическими эффектами мелатонина являются контроль цир-кадных и сезонных ритмов, стимуляция многих метаболических процессов, ингибирую-щее действие на пигментный метаболизм, антигонадотропное действие, седативное и галлюциногенное действие на центральную нервную систему, подавление клеточной пролиферации и противоопухолевое действие в условиях экспериментального опухолевого роста Кроме того, мелатонин является одним из сильнейших эндогенных антиоксидантов (Э Б Арушанян, 2004, Л М Берштейн, 2004, Ф И Комаров и соавт , 2004, М А Пальцев, ИМ Кветной, 2006, Т В Кветная, ИВ Князькин, 2003, С Bartsch et al, 2001, R J Reiteret al , 2002)

Несмотря на то, что противоопухолевая активность мелатонина известна довольно давно, в течение длительного периода времени действие мелатонина изучалось, главным образом, in vitro на культурах опухолевых клеток различного гистогенеза (S Cos, Е J Sanchez-Barcelo, 2000) В опытах, выполненных in vitro, показано, что эффект мелатонина зависит от его дозы (С Bartsch et al, 2001)

В опытах in vivo было установлено, что введение экзогенного мелатонина тормозит развитие спонтанных опухолей и канцерогенез молочной железы, индуцируемый введением 7,12-диметилбенз(а)антрацена (ДМБА) или N-нитрозометилмочевины (НММ) у самок крыс (V N Amsimov, 2003, С Aubert et al, 1980, D E Blask, 1993, S A Musatov et al, 1999) Мелатонин также тормозит развитие опухолей шейки матки и влагалища, индуцируемых интравагинальными аппликациями ДМБА (V N Amsimov et al, 2000) и папил-

лом кожи, индуцированных накожными аппликациями бенз(а)пирена (БП) и кротонового масла у мышей (А С Kumar, U N Das, 2000) Мелатонин оказывает подавляющее влияние на канцерогенез толстого кишечника, индуцируемый 1,2-диметилгидразином (ДМГ) (V N Anisimov et al, 1997, В H Анисимов и др, 2003) и гепатоканцерогенез, индуцируемый введением диэтилнитрозамина (ДЭНА) (К В Dakshayani et al, 2005) или ДЭНА с фенобарбиталом у крыс (К M Rahman et al, 2003) В большинстве указанных работ in vivo мелатонин применялся в одной дозе

Анализ данных литературы свидетельствует о том, что результаты большинства исследований являются не вполне убедительными с точки зрения правил и требований, предъявляемых к экспериментам по изучению влияния различных химических соединений на процессы канцерогенеза В некоторых экспериментах мелатонин вводился сравнительно малому числу животных (10-20 животных в группе), в других - введение препарата начинали, когда все животные были старыми, эксперимент заканчивали, когда животные достигали 50 % летальности или в другое произвольное время, аутопсия и корректное патоморфологическое исследование не всегда проводилось (V N Amsimov, 2006) В то же время в литературе имеются сведения о стимулирующем влиянии мелатонина на некоторые опухоли в эксперименте (VN Anisimov et al, 2001, RD Lipman et al, 1998, W Pierpaoli et al, 1991, В И Романенко, 1983, 1985)

Следовательно, для более полного понимания действия мелатонина на канцерогенез, для выявления закономерностей его онкостатического действия необходимы исследования на большем количестве моделей с использованием канцерогенов различного механизма действия и разной органной специфичности

Таким образом, изучение механизмов антиканцерогенного действия мелатонина на моделях индуцированного канцерогенеза, а также исследование дозовой зависимости его эффектов является актуальным направлением экспериментальной онкологии

Цель исследования

Изучить влияние мелатонина при введении в разных дозах на развитие новообразований и перекисное окисление липидов на моделях химического канцерогенеза легких, кожи и мягких тканей у мышей

Задачи исследования

1 Изучить влияние разных доз мелатонина на частоту, множественность и размеры опухолей легких, индуцируемых уретаном у мышей,

2 Изучить влияние разных доз мелатонина на частоту, множественность и разме-

ры опухолей мягких тканей на модели опухолей подкожной клетчатки, индуцируемых бенз(а)пиреном (БП) у мышей, а также латентный период опухолей, продолжительность жизни животных и выживаемость опухоленосителей,

3 Изучить влияние разных доз мелатонина на частоту, множественность и размеры опухолей кожи, индуцируемых БП у мышей, а также латентный период опухолей, продолжительность жизни животных и выживаемость опухоленосителей,

4 Изучить влияние мелатонина на динамику гистологических изменений и про-лиферативную активность в изучаемых опухолях,

5 Изучить динамику некоторых показателей перекисного окисления липидов (ПОЛ) в сыворотке крови и опухолевой ткани у мышей в условиях индуцированного канцерогенеза и при коррекции мелатонином в разных дозах,

6 Проанализировать дозовую зависимость влияния мелатонина на изучаемые морфологические и биохимические показатели,

Научная новизна

В работе впервые исследовано влияние мелатонина на канцерогенез мягких тканей in vivo, продемонстрировано его подавляющее действие на развитие опухолей подкожной клетчатки и их метастатическую активность Также в работе впервые показано, что мелатонин достоверно ингибирует канцерогенез легких, что способствует дифферен-цировке опухолевой ткани Продемонстрировано антиканцерогенное и антиметастатическое действие мелатонина в отношении опухолей кожи На всех изучаемых моделях опухолей установлено антипролиферативное действие мелатонина В работе впервые изучена и проанализирована дозовая зависимость антиканцерогенного действия мелатонина в отношении изучаемых индуцированных опухолей in vivo Показано, что введение мелатонина как в малых (2 мг/л), так и в больших (20 мг/л) дозах оказывает онкопротекторный эффект, наиболее выраженный при введении меньшей дозы В работе проанализировано влияние мелатонина на процессы ПОЛ в условиях индуцированного канцерогенеза и впервые показано, что антиоксидантный эффект меньшей дозы мелатонина (2 мг/л) более выражен, чем эффект большей (20 мг/л) дозы

Научно-практическая значимость работы

Полученные результаты могут служить экспериментальным обоснованием для дальнейшего изучения онкопротекторного потенциала мелатонина, разработки научно-обоснованных рекомендаций по применению мелатонина с целью профилактики злокачественных новообразований

Апробация диссертации

Результаты работы были доложены и обсуждены на VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2006), 5-ой, 6-ой Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2006, 2007), XIII, XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006, 2007), Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мульти-факториальной патологи» (Курск, 2006), Научно-практической конференции молодых ученых и специалистов "Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медици-ны-2006" (Санкт-Петербург, 2006), XI научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им Н П Огарева (Саранск, 2006), XXXIV Огаревских чтениях (научной конференции Мордовского государственного университета им Н П Огарева) (Саранск, 2006), Европейской конференции по старению (Инсбрук, 2006), Российской конференции по фундаментальной онкологии «Петровские чтения» (Санкт-Петербург, 2007), IV научно-практической конференции «Общество, государство и медицина для пожилых» (Москва, 2007), 16-й Международной конференции «СПИД, рак и общественное здоровье» (Санкт-Петербург, 2007), VI Европейском конгрессе Международной ассоциации геронтологии и гериатрии (Санкт-Петербург, 2007)

Положения, выносимые на защиту

1 Введение в ночные часы мелатонина, не оказывая влияния на общую частоту опухолей легких, индуцируемых уретаном у мышей, значительно уменьшает их множественность, размеры, пролиферативную активность, повышает степень дифференцировки опухолевой ткани

2 Мелатонин значительно уменьшает общую частоту развития сарком подкожной клетчатки, индуцируемых БП у мышей, а также их пролиферативную активность и способность к метастазированию, увеличивает латентный период развития опухолей, продолжительность жизни животных и выживаемость опухоленосителей

3 Мелатонин значительно уменьшает общую частоту развития опухолей кожи, индуцируемых БП у мышей, снижая количество злокачественных опухолей, их пролиферативную активность и метастатический потенциал, увеличивает латентный период развития опухолей, продолжительность жизни животных и выживаемость опухоленосителей

4 Введение изучаемых канцерогенов (уретан, БП) животным сопровождается активацией ПОЛ, как в сыворотке крови, так и в ткани опухолей, введение мелатонина уменьшает, а в ряде случаев полностью нивелирует эти изменения

5 Эффект мелатонина на канцерогенез и процессы ПОЛ зависит от дозы препарата с более выраженным эффектом малой дозы (2 мг/л) по сравнению с большой дозой (20 мг/л)

с

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 137 страницах, документирована 10 таблицами и иллюстрирована 78 рисунками Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материала и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (главы 3,4 и 5), обсуждения полученных результатов (глава 6), выводов и библиографического указателя, включающего 225 источников, в том числе 30 отечественных и 195 иностранных

Работа выполнялась в соответствии с научной тематикой кафедры патологии ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н П Огарева» «Изучение антиканцерогенного действия антиоксидантов Использование антиоксидантов с целью лечения онкологических заболеваний и профилактики побочных эффектов химиотерапии злокачественных опухолей» Номер государственной регистрации 01200004102

Работа выполнена при финансовой поддержке грантов Президента Российской Федерации НШ-2293 2003 4 и 5054 2006 4

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы Животные В опытах использовано 386 самок аутбредных белых мышей SHR в возрасте 2 мес массой 20-22 грамма Животных содержали в стандартных условиях содержания вивария при стандартном режиме освещения (12 часов свет 12 часов темнота)

Схема экспериментов Было проведено 3 серии экспериментов В первой серии опытов изучали влияние мелатонина на канцерогенез легких 128 мышей были рандоми-зированно разделены на 4 группы Животным 1-ой, 2-ой и 3-й групп (по 40 животных в группе) однократно внутрибрюшинно был введен уретан (НИИ онкологии им Н Н Петрова), растворенный в изотоническом растворе хлористого натрия в дозе 1 г/кг Со следующего после введения канцерогена дня животные 2-ой и 3-й групп получали с питьевой водой в ночные часы (с 19 00 ч до 07 00 ч ) мелатонин (Sigma, США) в дозах 20 мг/л и 2 мг/л, соответственно Животные 1-ой группы составили контрольную группу и получали питьевую воду без добавления мелатонина Оставшиеся 8 мышей (4-ая группа) не подвергались каким-либо воздействиям и служили интактным контролем

Во второй серии экспериментов изучали влияние мелатонина на опухоли мезен-химального гистогенеза на модели сарком подкожной клетчатки 128 мышей были разделены на 4 группы 3 опытные группы по 40 животных и группа интактного контроля из 8 животных Животным первых трех групп однократно вводили раствор бенз(а)пирена (БП) (Fluka, Busch, Швейцария) в дозе 2 мг/мышь в оливковом масле под кожу поясничной области Животные 2-ой и 3-й групп со следующего дня после введения канцерогена получали мелатонин в дозах 20 и 2 мг/л, соответственно Способ и режим введения мелатонина были аналогичны первой серии экспериментов Животные 1-ой группы составили контрольную группу и получали питьевую воду без добавления мелатонина Мыши 4-ой группы не подвергались каким-либо воздействиям

В третьей серии экспериментов изучали влияние мелатонина на развитие опухолей эпидермального гистогенеза на модели опухолей кожи 130 мышей были поделены на 4 группы 3 опытные группы по 40 животных, 10 оставшихся животных служили интакт-ным контролем Животным первых трех групп на предварительно выбритый участок кожи спинки диаметром 1,5-2 см наносили 0,05 % раствор БП (Fluka, Busch, Швейцария) в ацетоне в объеме 0,2 мл/мышь 2 раза в неделю Животные 2-ой и 3-й групп со следующего дня после введения канцерогена получали мелатонин в дозах 20 и 2 мг/л, соответственно Способ и режим введения мелатонина были аналогичны другим сериям экспериментов Животные 1-ой группы составили контрольную группу по канцерогену и получали питьевую воду без добавления мелатонина Мыши 4-ой группы не подвергались каким-либо воздействиям

Длительность эксперимента составила 28 недель, после чего оставшиеся в живых мыши были умерщвлены путем декапитации

Патоморфологические методы исследования Всех животных, которые погибали или были умерщвлены по истечении срока эксперимента, вскрывали На аутопсии исследовали кожные покровы и внутренние органы У животных, получавших уретан (1 серия), извлекали легкие Легкие фиксировали в жидкости Карнуа (абсолютный спирт хлороформ ледяная уксусная кислота в соотношении 6 3 1) в течение 5 минут, затем в 10 % растворе формалина в течение 5 суток В легочной ткани производили подсчет количества и измерение диаметра опухолевых узлов с помощью бинокулярной лупы MBS-9 2x8 На основании измерения опухолевых узлов в легких было выделено 3 группы новообразований по размеру малые (< 0,5 мм), средние (0,6 - 1 мм) и крупные (> 1 мм) У животных, получавших БП (2-ая и 3-я серии), подсчитывали число опухолей и измеряли их диаметр

Все опухоли, а также ткани и органы подозрительные на наличие опухоли, были

иссечены и зафиксированы в 10 % нейтральном формалине После обычной гистологической обработки ткани были залиты в парафин Тонкие 5-7 мкм гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином и исследовали микроскопически Неоплазии классифицировали согласно рекомендациям Международного агентства по исследованию рака (МАИР) (V S Turusov, U Mohr, 1994) При классификации опухолей легких дополнительно использовали морфологические типы, приводимые в работе JIА Грицюте (1975) В микропрепаратах опухолевой ткани животных определяли митотический индекс (Л П Дьяконов, В И Ситьков, 2000)

Биохимические методы исследования. У всех интактных мышей, а также у 5 - 8 мышей из каждой группы животных, подвергшихся воздействию канцерогенов, определяли содержание малонового диальдегида (МДА) (С Г Конюхова, 1989) и активность ката-лазы (М А Королюк, 1988) в сыворотке крови и в гомогенатах опухолевой ткани МДА представляет собой вторичный (промежуточный) продукт реакций перекисного окисления липидов (ПОЛ) Каталаза является одним из основных ферментов антиоксидантной системы организма, катализирует восстановление перекиси водорода до воды, тем самым, уменьшая образование свободных радикалов (К Н Конторщикова, 2000)

Статистические методы исследования Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием критериев t Стьюдента, точного метода Фишера, у.2 и теста Колмогорова-Смирнова (Е Г Гублер и соавт, 1978) с помощью пакета прикладных программ «МедСтатистика» и «Биостат» С целью оценки и сравнения продолжительности жизни и выживаемости животных была использована модель Гомперца (В Gompertz,

где параметры аир связаны с популяционной скоростью старения и начальной силой смертности, соответственно Кроме того, вычисляли время удвоения силы смертности (mortality rate doubling time, MRDT) как ln(2)/a для каждой группы Параметры модели Гомперца были оценены с использованием метода максимальной вероятности, нелинейной процедуры оптимизации (R Fletcher et al, 1987) и кода «Matlab»

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние мелатонина на канцерогенез легких, индуцируемый уретаном у мышей

Через 6 мес после однократного внутрибрюшинного введения уретана в дозе 1

г/кг у 100% мышей в контрольной группе возникли множественные опухоли легких

1825)

Среднее число опухолей составило 23 i 2,63 на I мышь Среднее число опухолевых углов малого размера (< 0,5 мм) составило Я,7*0,90, а крупных узлов (> I мм) - 3,4±0.65 на мышь. Отмечено преобладание опухолевых узлов среднего размера (0,6-1 мм), число которых на животное составило 10.9±2,25.

Введение мелатонина мышам, получившим инъекции уретана, не влияло на частоту развития опухолей (100%), тогда как существенно уменьшало множественность опухолей. При введении мелатонина в дозе 20 мг/л множественность опухолей уменьшилась на 37,6% по сравнению с контролем и составила 14,4±],20 (р<0,01). Среднее число опухолей малого размера составило 9,(НО,94 на животное (р>0,05). а опухолей средней величины в группе уменьшилось на 65,5% и составило 3,8±0,43 (р<0,01). Среднее число крупных опухолей составило ! ,6±0,29, что на 52 J % меньше, чем в контроле (:" 0.U11) (рис. I).

Мел атонии, вводимый в дозе 2 мг/л, уменьшил среднее число опухолей на мышь на 52,2% но сравнению с контролем, что составило 11,0±0,75 (р<0,001). Число малых опухолей существенно ite изменилось, тогда как число опухолей средней величины и крупных опухолей достоверно уменьшилось на 68,2% и 86,5% по сравнению с контролем, составив, соответственно 3,5±0.45 (р<0,01)и 0,5±0,15 (р<0,001) (рис. I).

уретлн

у||'М * n e.:i ЭТО "ИМ у I ,'Ч • М ел ai VWIMM 20 нг'л 2 мг'л

□ всею им ПО.Б-1 им □>! мм

Рис. I. - Влияние мелатонина при введении в разных дозах на развитие о ну млей легких, у мышей

Различия с группой контроля достоверны: * - р < 0,05; ** - р < 0,01: *** - р< 0,001

Различия между группами, получавшими разные дозы мелатонина, достоверны: а - р < 0,05; Ь - р < 0,001

L0

В группе контроля опухоли легких представляли собой белесоватые упругие образования округлой, реже округло-овальной формы Опухолевые узлы располагались на поверхности легких, слегка приподнимая плевру, реже - в глубине легочной ткани В большинстве случаев опухоли четко отграничены от легочной паренхимы В контрольной группе в 4 случаях (13%) обнаружены множественные опухоли легких, общим числом около 180-200 На продольном срезе легочная ткань полностью замещена разновеликими опухолевыми узлами, разделенными тонкими прослойками коллабированных альвеол

В группах животных, получавших мелатонин, опухолевые узлы во всех случаях были четко отграничены от легочной ткани Множественные опухоли (более 100 на животные) выявлены в 6,5% в обеих группах, получавших мелатонин В большом количестве представлены «милиарные» опухолевые очаги - узлы 0,2-0,3 мм

При микроскопическом исследовании опухоли классифицированы как бронхо-генные аденомы В группе контроля в одном случае была обнаружена аденокарцинома и в 2 случаях - низкодифференцированный плоскоклеточный неороговевающий рак По гистологической структуре преобладали аденомы железистого, реже встречались аденомы железисто-солидного строения В ряде случаев в группе контроля выявлены аденомы ту-булярного строения, значительно реже отмечались аденомы папиллярного строения

В контроле в одном случае выявлена аденокарцинома, которая характеризовалась выраженным клеточным полиморфизмом, множественными митозами и инвазией в окружающую ткань В контрольной серии в двух случаях выявлен плоскоклеточный неороговевающий низкодифференцированный рак Повсеместно в опухоли выявлены вторичные изменения очаги некроза и нагноения

При коррекции мелатонином опухолевые узлы в подавляющем большинстве случаев были четко отграничены от окружающей легочной ткани, а некоторые имели собственную соединительнотканную капсулу Характерна выраженная васкуляризация опухолевой ткани, очаги неоангиогенеза На фоне введения мелатонина отмечено более рыхлое расположение опухолевых клеток в центральной части узлов Стромальный компонент выражен, представлен участками новообразованной соединительной ткани, врастающей между островков опухолевых клеток В аденомах легких мышей, получавших мелатонин, железистая дифференцировка была более выражена по сравнению с контролем, и отчетливо прослеживалась, как в центральной части узлов, так и на периферии опухоли Гистологическая структура опухолей легких у животных, получавших мелатонин в дозах 2 и 20 мг/л, не имела существенных отличий

Митотический индекс в ткани опухолей у мышей, подвергшихся воздействию уретана, составил 0,93±0,25 Введение мелатонина уменьшало митотический индекс до

0,53±0,19 и 0,47±0,17 в группах, получавших препарат в дозах 20 и 2 мг/л, соответственно (в обоих случаях р>0,05)

Введение уретана сопровождалось активацией процессов ПОЛ, о чем свидетельствует повышение содержания МДА на 62,2% (р<0,01) в сыворотке крови, а также активности каталазы на 70,2% (р<0,05) в сыворотке крови и на 36,3% (р>0,05) в ткани легких у мышей по сравнению с соответствующими показателями в интактном контроле Введение мелатонина в обеих дозах существенно уменьшало уровень МДА в сыворотке крови мышей, причем, эффект был более выражен при использовании меньшей дозы мелатонина Уровень МДА в ткани легкого снижался лишь при применении мелатонина в дозе 2 мг/л В обоих изучаемых объектах под влиянием малой дозы мелатонина содержание МДА уменьшалось до субнормальных величин Введение мелатонина в дозе 2 мг/л существенно угнетало активность каталазы в сыворотке крови (в 2,1 раза) и в ткани легкого (в 1,7 раза) мышей с индуцированными уретаном опухолями легких Угнетающее влияние большей дозы мелатонина на активность каталазы было достоверным лишь в ткани опухолей легкого (таблица 1)

Таблица 1 - Содержание МДА и активность каталазы в сыворотке крови и ткани легкого у животных в контроле и при коррекции мепатонином

№ груп пы Воздействие Уровень МДА, мМоль/л Активность каталазы, мккат/л

Сыворотка крови Ткань легкого Сыворотка крови Ткань легкого

1 Интактный контроль 4,98 ± 0,58 (п = 6) 9,64 ±0,62 (п = 5) 0,41 ±0,02 (п = 6) 0,52 ±0,03 <п = 5)

2 Уретан 8,08 ±0,6 (п = 5) 10,88 ± 0,7 (п = 5) 0,7 ±0,1 (п = 5) 0,71 ±0,08 (п = 5)

3 Уретан + Мелатонин, 20 мг/л 5,56 ± 0,76 (п = 8) 10,1 ± 1,79 (п = 8) 0,5 ± 0,07 (п = 5) 0,41 ±0,05 (п = 5)

4 Уретан + Мелатонин, 2 мг/л 3,21 ±0,69 (п = 6) 8,42 ±0,31 (п = 8) 0,33 ± 0,08 (п = 5) 0,44 ± 0,05 (п = 5)

Достоверность различий между группами, р Р12<0,01 Рг з< 0,05 Р2 4 <0,001 Р 3-4 <0,05 Р 2-4 <0,05 Р 1.2 <0,05 Р2-4 <0,05 Р2з< 0,05 Р2.4 <0,05

Таким образом, применение мелатонина существенно подавляло канцерогенез легких, индуцируемый уретаном у мышей Мелатонин, не влияя на частоту развития опухолей, уменьшал множественность аденом легких в 2,1 раза и в 1,6 раза при введении в дозах 2 мг/л и 20 мг/л, соответственно, способствовал дифференцировке опухолевой ткани, уменьшал пролиферативную активность опухолей в 1,76 раза при введении в дозе 20 мг/л ив 1,98 раза - в дозе 2 мг/л Анализ характера распределения опухолей легких по

размерам показал, что под влиянием мелатонина уменьшалось, прежде всего, число крупных опухолей и аденом легкого средних размеров, тогда как множественность мелких опухолей под влиянием мелатонина не изменялась Введение мелатонина уменьшало активацию процессов ПОЛ, вызванную введением уретана в сыворотке крови и ткани легких Антиоксидантный эффект мелатонина имеет обратную зависимость от вводимой дозы гормона

Влияние мелатонина на канцерогенез мягких тканей, индуцируемый БП у мышей

Начиная с 126-х суток после подкожного введения канцерогена, у мышей контрольной группы в месте введения канцерогена возникали опухоли подкожной клетчатки По мере увеличения размеров опухолевые узлы теряли подвижность, становились фиксированными к подлежащим тканям Кожные покровы над опухолью во всех случаях были изъязвлены, волосяной покров отсутствовал В большинстве случаев отмечена инвазия опухолей в подлежащие ткани и органы мышцы спины, паранефральную клетчатку, правую почку, позвоночник Частота развития опухолей составила 72,7% (24 из 33 животных) В контрольной группе у 2 мышей (6,1%) выявлено метастазирование опухолей в печень

При введении мелатонина в дозе 20 мг/л число животных с опухолями составило 35% (14 животных из 40), что на 37,7% меньше по сравнению с контролем (р<0,01) При введении мелатонина в дозе 2 мг/л частота развития опухолей уменьшилась на 41,1% по сравнению с контролем и составила 31,6% (12 животных из 38) (р<0,001) (рис 2)

В группе животных, получавших мелатонин в дозе 20 мг/л, лишь в одном случае отмечалось изъязвление над поверхностью опухоли В остальных случаях, а также группе, получавшей мелатонин в дозе 2 мг/л, нарушения целостности кожных покровов над опухолью не было У мышей обеих подопытных групп, получавших мелатонин, признаков метастатического поражения внутренних органов не было обнаружено

Размеры опухолевых узлов под влиянием мелатонина существенно не изменялись, составляя 29,1±1,28 мм в группе контроля, 28,8±1,27 мм и 29,3±0,81 мм в группах, получавших мелатонин в дозах 20 и 2 мг/л, соответственно (р>0,05)

Средний латентный период развития опухолей в группе контроля составил 150±2,8 суток У мышей, получавших мелатонин в дозе 20 мг/л, средний латентный период развития опухолей увеличился по сравнению с группой контроля и составил 160±1,7 суток (р<0,01, тест Колмогорова-Смирнова) В группе мышей, получавших мелатонин в дозе 2 мг/л, этот показатель увеличился до 165±0,9 суток (р<0,01, тест Колмогорова-Смирнова) (рис ЗА)

801 70 60 50 40 30 20 10

БП

ш

бп ■+ еп +

мелатонин меллтонин 20 мг/л 2 мг/л

Рис. 2. - Частота развития опухолей подкожной клетчатки у мышей, получавших Б! I и разные дозы мелатонина. Различия с группой контроля достоверны: *-рс 0.01; ** - р < 0,00 i

Под влиянием мелатонин^ увеличилась средняя продолжительность жизни животных от i 62±2,S суток в группе контроля до 181±],9 суток и 1S6± 1,7 суток при введении гормона в дозе 20 мг/л л 2 мг/л, соответственно. Статистически достоверным было только изменение в группе, получавшей меньшую дозу мелатонина {р=0,0000023, тест Колмогорова-Смирнова). Ii группе контроля темп роста кривых выживаемости был меньшим, чем в подопытных группах. При коррекции мелатоницом отмечается смещение кривых выживаемости вправо по сравнению с контролем. Наибольший темп нарастания кривых выживаемости отмечался в группе, получавшей меньшую дозу мелатонина (рис. ЗБ).

Показатель времени удвоения смертности (MRDT) оказался наибольшим в группе контроля, составив 19,1 суток. 13 группах, получавших мелатонин, выявлено уменьшение \1RDT до 9,9 суток (р<0,01) и 7,8 суток (р<0,01) при введении мелатонина в большей и меньшей дозе, соответственно.

Средняя продолжительность жизни мышей после появления опухолей составила 12,4±2,22 суток. Введение мелатонина значительно увеличивало продолжительность жизни мышей после развития опухолей. Так в группе, получавшей мелаТОнин 20 мг/л, средняя продолжительность жизни опухоленосителей составила 15,6±5,0 суток (р=0,164, гест Колмогорова - Смирнова). Введение мелатонина в лозе 2 мг/л увеличило выживаемость опухокеноситепей до 2С.6±4,08 сутпк, что на 66,1% больше, чем и контроле (р=0.000008, тест Колмогорова - Смирнова).

100 90

.. во 1

« 70 о

| 60

0

и 50

Ф

3 40

1

о 30 | 20 10

-о- БП

-0- БП + МЛТ 20

-о- БП + МЛТ 2

/ * ,

У *

<г" ,

140 150

Время, сутки

140 <60

Время, сутки

БП + МЛТ 20 -о- БП + МЛТ 2

10 15 20

Время, сутки

в

Рис 3 - Влияние мелатонина на развитие сарком подкожной клетчатки, индуцированных БП у мышей (А), продолжительность жизни животных (Б) и выживаемость опухо-леносителей (В) в условиях канцерогенеза

При микроскопическом исследовании опухоли были классифицированы как пле-оморфный вариант злокачественной фиброзной гистиоцитомы Для них был характерен выраженный клеточный и ядерный полиморфизм, нарушение ядерно-цитоплазматического соотношения, множественность митозов В большинстве случаев отмечались некрозы и кровоизлияния в строме опухолевой ткани Строение опухолей подкожной клетчатки в группе контроля и в группах, получавших мелатонин, было идентичным

Митотический индекс в ткани опухолей у животных, подвергнутых воздействию только БП, составил 6,21±0,63 При коррекции мелатонином в дозе 20 мг/л митотический индекс уменьшился до 4,87±0,47 (р>0,05), а в дозе 2 мг/л - до 3,73±0,30 (р<0,01)

Подкожное введение БП мышам сопровождалось увеличением содержания МДА в 2,6 раза в сыворотке крови, при этом увеличение данного метаболита в ткани опухоли было менее значительно и составило 11,1% Введение мелатонина в обеих дозах достоверно уменьшало содержание МДА в обоих изучаемых объектах до субнормальных показателей Так, в сыворотке крови содержание МДА уменьшилось в 3,1 раза и 4,1 раза при введении мелатонина в дозах 20 мг/л и 2 мг/л, соответственно Уровень МДА в опухолевой ткани уменьшился на 75,7% и 40,4% под действием малой и большой доз мелатонина соответственно Активность каталазы в сыворотке крови мышей, подвергшихся воздействию БП, увеличилась на 25,4% Коррекция мелатонином в дозе 2 мг/л приводила к уменьшению данного показателя на 32% в сыворотке крови и в 2,6 раза в ткани опухоли Большая доза мелатонина не оказывала существенного влияния на активность данного фермента (таблица 2)

Таблица 2 - Содержание МДА и активность каталазы в сыворотке крови й ткани опухоли

у животных в контроле и при коррекции мелатонином

№ груп пы Воздействие Уровень МДА, мМоль/л Активность каталазы, мккат/л

Сыворотка крови Ткань опухоли Сыворотка крови Ткань опухоли

1 Интактный контроль 4,98 ± 0,58 (п = 6) 8,44 ±0,18 (п = 5) 0,41 ±0,02 (п = 6) 0,73 ±0,03 (п = 5)

2 БП 13,1 ±0,63 (п = 10) 9,38 ± 0,26 (п = 5) 0,51+0,05 (п = 9) 0,77 + 0,13 (п = 5)

3 БП + Мелатонин, 20 мг/л 4,18 + 0,39 (п = 6) 6,68 ±0,53 (п = 5) 0,44 ± 0,04 (п = 8) 0,57 ±0,11 (п = 5)

4 БП + Мелатонин, 2 мг/л 3,18 ±0,15 (п = 8) 5,58 ± 0,55 (п = 5) 0,35 ± 0,05 (п = 8) 0,3 ± 0,04 (п = 5)

Достоверность различий между группами, р Р21< 0,001 Рг 4 <0,001 Р1-2 < 0,05 />2 1 <0,01 Рг 4 <0,001 Р1 2 < 0,05 Р24<0,05 Р 2-4 < 0,01

Таким образом, введение мелатонина, не влияя на размеры опухолей, уменьшало частоту развития сарком в 2,1 раза при введении в дозе 20 мг/л и в 2,3 раза при введении в дозе 2 мг/л Кроме того, мелатонин в обеих дозах значительно увеличивал среднюю продолжительность жизни мышей, выживаемость животных после появления опухолей и латентный период развития опухолей, вызывая смещение кривых выживаемости вправо по сравнению с контролем Не оказывая влияния на морфологию опухолей, мелатонин уменьшал их пролиферативную активность в 1,28 раза ив 1,67 раза при введении в дозах 20 мг/л и 2 мг/л соответственно и препятствовал метастазированию сарком в печень

Влияние мелатонина и» канцерогене! кожи, индуцируемый Ы1 у мышей

У мышей контрольной группы с 77-х суток после начала аппликаций БП отмечено появление округлых опухолевидных образований возвышающихся нал поверхностью кожи, размерами 1-2 мм. По мере роста опухоли становились бугристыми, приобретали неправильную форму. В подавляющем большинстве случаев наблюдалось изъязвление опухолей, явления распада с формированием язвы с подрытыми плотными краями и западающим дном с обильными темными наложениями и явлениями гилеркератоза.

Частота развития опухолей кожи у мыщей в группе контроля составила 69,4% (25 животных из 36). При введении мел атонии а в дозе 20 мг/л мышам, получавшим аппликации БП, частота развития опухолей составила 34,3% (12 животных из 35), что на 35,1% меньше, чем н группе контроля (р<0,01). В группе животных, получавших мелатонин в дозе 2 мг/л, опухоли возникали с частотой 43,6% (17 животных из 39), что на 25,8% меньше, чем я контроле (р<0.05) [рис. 4).

БП +

ЕП +

мелатонин мелатонин 20 мг/л 2 мг/л

Рис. 4. - Частота развития опухолей кожи у мышей, получавших БП и разные дозы мелатонина Различия с группой контроля достоверны'. * - р < 0,05; ** - р < 0,01

13 контрольной группе среднее число опухолей на 1 животное составило 3±0,29. При введении мелатонина множественность опухолей уменьшалась до 2,1 ±0,56 (р>0,05) и 2,2*0,23 (р<0,05) при введении в дозах 20 мг/л и 2 мг/л, соответственно.

13 группе контроля у 5 животных (21,7%) обнаружены множественные мстасгазы в легких, Введение мелатонина в обеих дозах не влияло на частоту метастазирования.

13 группе контроля средний размер опухолей составил 5,1±0,51 мм. При коррекции мслатопиком в дозе 20 мг/л их размер уменьшился на 51,8% и составил 2,46±0,24 мм

(р<0,001) Введение мелатонина в дозе 2 мг/л привело к достоверному уменьшению среднего размера опухолей на 28%, составив 3,68±0,37 мм (р<0,05)

В контрольной группе время обнаружения первой опухоли составило 77 суток, а средний латентный период - 114±2,9 суток Введение мелатонина в обеих дозах не приводило к статистически значимому изменению данного показателя

Средняя продолжительность жизни животных в группе контроля составила 136±7,1 суток При введении мелатонина в дозе 20 мг/л продолжительность жизни мышей уменьшилась до 121±6,4 суток (р>0,05), а в дозе 2 мг/л - увеличилась по сравнению с контролем на 15% и составила 157±4,9 суток (р<0,05) Таким образом, малая доза мелатонина достоверно увеличивала продолжительность жизни животных в условиях экспериментального канцерогенеза кожи, тогда как большая доза не влияла на этот показатель

Продолжительность жизни животных после обнаружения опухоли в группе контроля составила 51±1,5 суток При введении мелатонина в дозе 20 мг/л отмечалось уменьшение средней продолжительности жизни опухоленосителей до 40±2,1 суток, что на 20,2% меньше, чем в группе контроля (р<0,001) При коррекции мелатонином в дозе 2 мг/л животные с опухолями жили в среднем 59±2,1 суток, что на 17,2% больше чем в контрольной группе (р<0,001)

Опухоли кожи были представлены плоскоклеточными ороговевающими раками и папилломами Их гистологическая структура в группе контроля и группах, получавших разные дозы мелатонина, не различалась Сформированные папилломы микроскопически представляют собой очаги дифференцированного эпителия, четко отграниченные от окружающих тканей с выраженными явлениями гиперкератоза При малигнизации папиллом атипичные эпителиальные клетки погружались в рыхлую соединительнотканную основу, тяжи эпителия проникали через ножку папилломы, достигая подлежащих участков кожи и проникая в них Выявлялись различные формы дискератоза и всегда выраженный гиперкератоз Для плоскоклеточных ороговевающих карцином кожи было характерно формирование раковых «жемчужин» из рогового вещества

В контрольной группе число животных со злокачественными опухолями (плоскоклеточный ороговевающий рак и папиллома с очагами малигнизации) составило 63,9% от всех животных с опухолями В группе животных, получавших мелатонин в дозе 20 мг/л, злокачественные опухоли были выявлены в 28,6% случаев (р<0,01), а в дозе 2 мг/л -в 33,3% (р<0,05) Число животных с гистологически верифицированными папилломами кожи составило в контроле - 5,6% При коррекции мелатонином в дозах 20 и 2 мг/л число папиллом существенно не отличалось от группы контроля (р>0,05) (рис 5)

Митотический индекс в ткани опухолей у мышей, подвергшихся воздействию

t>!I, составил t,06±0.2S. При введении мелатонина п дозах 20 мг/ft и 2 мг/л митотический индекс составил 0,63±0,18 и 0,69±0.20, соответственно (в обоих случаях р>0,05).

У s' ' .У

У ~ У У И f-â— ** * M к\

БП БП + меллтонин БП + меллгонин

20 мг/л 2 ш/п

□ злокачественные опухоли о папилломы

Рис, 5. — Число животных со злокачественными опухолями и с папилломами в контроле и в подопытных группах; Различия с группой контроля достоверны: * - й < 0,05; ** - р 0,01

Аппликации Ы! вызывали достоверное повышение содержания МДЛ в сыворотке крови в 2,9 рача, а также активности каталазы в 3,7 и и 2,2 раза в сыворотке крови и в ткани опухолей кожи соответственно по сравнению с соответствующими показателями у ин-тактных мышей. Введение мелатонина в дозе 20 мг/л не приводило к существенному изменению уровня МДЛ в обоих изучаемых объектах. Введение мелатонина в дозе 2 мг/л сопровождалось достоверным уменьшением содержания МДА лишь в сыворотке крови (на 25%). Активность каталазы достоверно уменьшалась лишь при введении мелатонина в дозе 2 мг/л на 38% и 87,4% в сыворотке кроил и в опухолевой ткани соответственно (таблица 3),

Таким образом, мслатонин существенно угнетает канцерогенез кожи, индуцируемый Ы1 у 41,1:пей SI ! R уменьшая частоту развития опухолей кожи н частоту развития злокачественных опухолей в 1,9 рзча при введении мелатонина в дозе 2 мг/л и в 2,2 раза при введении в дозе 20 мг/л, Мслатонин, только при введении в малой дозе, уменьшает множественность опухолей кожи в 1,4 раза. Обе дозы мелатонина вызывали уменьшение размеров ùiiyxoneû кожи, с байге выраженным эффектом позы 20 мг/к. Введение обеих доз мелатонина уменьшало выраженность вторичных изменений в опухолях, а также по-

давляло метастазирование опухолей кожи в легкие Введение мелатонина существенно не влияло на латентный период опухолей Однако, при использовании дозы 20 мг/л наблюдалась тенденция к уменьшению данного показателя Мелатонин, вводимый в дозе 20 мг/л, вызывал уменьшение средней продолжительности жизни животных, а также продолжительности жизни мышей после обнаружения опухолей Введение мелатонина в малой дозе достоверно увеличивало вышеуказанные показатели

Таблица 3 - Содержание МДА и активность каталазы в сыворотке крови и ткани опухоли у животных в контроле и при коррекции мелатонином

№ груп пы Воздействие Уровень МДА, мМоль/л Активность каталазы, мккат/л

Сыворотка крови Ткань опухоли Сыворотка крови Ткань опухоли

1 Интактный контроль 4,98 ± 0,58 (п = 6) 4,12 + 0,31 (п = 5) 0,41 ±0,02 (п = 6) 2,66 ± 0,73 (п = 5)

2 БП 14,44 ±0,49 (п = 7) 6,64 ± 1,54 (п = 5) 1,50 ±0,14 (п = 7) 5,74 ±0,44 (п = 5)

3 БП + Мелатонин, 20 мг/л 12,67 ±0,82 (п = 6) 5,06 ± 1,04 (п = 5) 0,93 ±0,01 (п = 7) 5,02 ± 0,99 (п = 5)

4 БП + Мелатонин, 2 мг/л 10,83 ± 0,68 (п = 8) 3,36 ± 0,39 (п = 5) 0,19 ±0,02 (п = 7) 3,58 ± 1,49 (п = 5)

Достоверность различий между группами,/; Р ¡.2 <0,001 Р 2-4 <0,001 P¡2< 0,001 Р м <0,01 Рг 4 <0,001 Рз-4 <0,001 Р 24 <0,01

Таким образом, влияние разных доз мелатонина на различные морфологические показатели в условиях экспериментального канцерогенеза кожи, индуцированного БП у мышей, неоднозначно Так, общая частота опухолей, их размеры, число животных со злокачественными опухолями более значительно уменьшались под действием мелатонина в дозе 20 мг/л В тоже время, мелатонин в этой дозе уменьшал латентный период развития опухолей, продолжительность жизни и выживаемость опухоленосителей, тогда как в дозе 2 мг/л мелатонин, не влияя на латентный период, существенно увеличивал выживаемость опухоленосителей

В наших опытах на трех моделях химического канцерогенеза установлено онко-протекторное и антиоксидантное действие мелатонина Полученный в наших опытах до-зозависимый эффект действия мелатонина согласуется с результатами, полученными другими исследователями в отношении спонтанных опухолей у мышей SHR (V N Anisimov et al, 2003), опухолей молочной железы у мышей TG NK (G N Rao et al, 2000), перевиваемых глиом С6 у крыс Wistar (V Martín et al, 2006), а также в опытах на культурах опу-

холевых клеток феохромоцитомы крыс линии РС12 (М Pawlikowski et al, 2002), клеточных линиях меланомы человека (С Bartsch et al, 2002), клетках MCF-7 (S Cos, E J Sanchez-Barcelo, 2000,2001)

В настоящее время достоверно показано, что оксидативный стресс играет большую роль в процессах канцерогенеза на всех стадиях развития опухоли (J Е Klaumg et al, 1998, К Kramer, 1994) Увеличение интенсивности процессов ПОЛ ранее было установлено в опухолях ободочной кишки (Е Skrzydlewska et al, 2005), молочной железы (F Tas et al, 2005) и в опухолях печени, индуцируемых ДЭНА (Y Sanchez-Parez et al, 2005, J P Singh et al, 2004)

В нашей работе у мышей с опухолями легких, подкожной клетчатки и кожи антиканцерогенное действие мелатонина имело отчетливую корреляцию с его антиоксидант-ным эффектом Это позволяет предположить, что наблюдаемый угнетающий эффект мелатонина на развитие указанных неоплазий связан, по крайней мере, частично, с его способностью понижать интенсивность процессов ПОЛ Подобный механизм был продемонстрирован на моделях рака толстой кишки (В Н Анисимов, М А Забежинский, И Г Попович, 2000, V N Amsimov, 2001а) и канцерогенеза кожи, индуцированного аппликациями БП и кротонового масла (А С Kumar, U N Das, 2000)

ВЫВОДЫ

1 На модели канцерогенеза легких, индуцируемого внутрибрюшинным введением уретана у мышей, установлено, что мелатонин оказывает выраженный онкопротекторный эффект, проявляемый в уменьшении множественности, размеров и пролиферативной активности опухолей, а также в повышении степени их дифференцировки,

2 Мелатонин оказывает антиканцерогенное и антиметастатическое действие в отношении опухолей мягких тканей индуцируемых подкожным введением БП у мышей, снижая частоту их развития и пролиферативную активность, увеличивая латентный период развития неоплазм, а также выживаемость мышей с опухолями,

3 Мелатонин угнетает канцерогенез кожи, индуцируемый аппликациями БП, что проявляется уменьшением частоты, множественности, размеров и пролиферативной активности опухолей, снижением метастатического потенциала опухолей, увеличением латентного периода их развития, а также продолжительности жизни и выживаемости опухо-леносителей,

4 Канцерогенез легких, индуцируемый уретаном, а также канцерогенез мягких тканей и кожи, индуцируемый БП сопровождается активацией процессов ПОЛ в сыворотке крови и тканях-мишенях Применение мелатонина препятствует окислительному стрес-

су, вызываемому этими канцерогенами

5 Установлено, что на всех трех использованных моделях канцерогенеза онкопро-текторный и антиоксидантный эффекты мелатонина были обратно пропорциональны дозе этого пинеального гормона

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные позволят обосновать рекомендации при разработке схем применения мелатонина для профилактики онкологических заболеваний

Список работ, or:;, бликованных по теме диссертации

1 Веснушкин Г М . Плотникова Н А , Семенченко А В , Анисимов В Н Мелатонин угнетает канцерогенез легких, индуцируемый уретаном у мышей // Вопр онкол -2006 -Т 52,№2 -С 164-168

2 Vesnushkin G.M . Plotmkova N А , Anisimov V N , Semenchenko А V Dose-dependent inhibitory effect of melatonin on carcinogenesis induced by benzo[a]pyrene in mice // J Exp Clin Cancer Res -2006 - Vol 25, № 4 -P 507-513

3 Anisimov V N , Popovich IG , Zabezhmski M A , Anisimov S V , Vesnushkin G.M. Vinogradova IA Melatonin as antioxidant, geroprotector and anticarcinogen // Biochim Biophys Acta - Bioenergetics -2006 - Vol 1757, №5-6 -P 573-589

4 Анисимов В H , Забежинский М А , Попович И Г , Алимова И Н Батурин Д А , Веснушкин Г.М . Плотникова Н А , Мусатов С А , Розенфельд С В Является ли мелатонин геропротектором и антиканцерогеном'' // XIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Сборник материалов конгресса - М ,2006 -С 54

5 Плотникова Н А , Анисимов В Н , Веснушкин Г М Влияние разных доз мелатонина на развитие опухолей кожи у мышей в эксперименте Здоровье и Образование в XXI веке Материалы VII Международной научно-практической конференции - М Изд-во РУДН, 2006 - С 52

6 Плотникова Н А , Анисимов В Н , Веснушкин Г М Онкопротекторное действие мелатонина на модели индуцированных мезенхимальных опухолей у мышей Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины Сборник тезисов к научно-практической конференции молодых ученых СПБ Изд-во СПбМАПО, 2006 - С 252-253

7 Плотникова Н А , Веснушкин Г М , Альмяшев А 3 Влияние мелатонина на канцерогенез на модели уретан-индуцированных опухолей легких у SHR мышей // Рос биотерапевтический журнал - 2006 - № 1 - С 49

8 Amsimov V N , Popovich IG , Zabezhinski M A , Amsimov S V , Arutunan A V , Vesnushkin G M.. Vinogradova I A The role of pineal hormone melatonin in aging and cancer // In ECONAG 2006 European Conference on Aging , Innsbruck - 2006 -abstr 70

9 Amsimov V N , Popovich I G , Zabezhinski M A , Amsimov S V , Vinogradova I A , Vesnushkin G M. Melatonin as antioxidant, geroprotector and anticarcinogen limitations and perspectives of clinical applicability // Biochim Biophys Acta - Bioenerget-ics , - 2006 - Suppl 14 -P 107-108

10 Веснушкин Г M . Плотникова Н А , Анисимов В Н Угнетающее влияние мелатонина на канцерогенез кожи, индуцируемый бенз(а)пиреном у мышей // Вопр он-кол - 2007 - Т 53, № 1 - С 60-65

11 Веснушкин Г М . Плотникова Н А Дозозависимое влияние мелатонина на канцерогенез кожи, индуцированный бенз(а)пиреном у мышей // Вопр онкол -2007 -Т 4,№ 1 - С 9

12 Анисимов В Н , Плотникова Н А , Веснушкин Г.М.. Кемайкин С П , Харитонова Т В Влияние мелатонина на динамику развития экспериментальных опухолей мягких тканей у мышей // XIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Сборник материалов конгресса - М , 2007 С 605

13 Анисимов В Н , Забежинский М А , Попович И Г , Виноградова И А , Веснушкин Г М Перспективы применения мелатонина для профилактики преждевременного старения и канцерогенеза // XIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» Сборник материалов конгресса - М , 2007 - С 604

14 Анисимов В Н , Забежинский М А , Попович И Г , Алимова И Н , Батурин Д А , Веснушкин Г М , Виноградова И А , Плотникова Н А , Мусатов С А , Розенфельд С В , Семенченко А В Перспективы применения мелатонина для профилактики преждевременного старения // Тезисы докладов IV научно-практической конференции «Общество, государство и медицина для пожилых и инвалидов» - М, 2007 С 12

15 Amsimov V N , Zabezinski М А , Popovich IG , Alimova IN , Baturm D A , Zavarzina N Yu , Vinogradova IA , Vesnushkin G M.. Rosenfeld S V , Semechenko A V Melatonin its role in the mechanisms of aging and carcinogenesis // Рус Ж «СПИД, рак и общественное здоровье» -2007 -Т 11,№1 -С 106

16 Anisimov V N , Zabezmski M A , Popovich IG , Ahmova IN , Baturin D A , Musatov S V , Zavarzina N Yu , Anisimov S V, Vmogradova IA , Vesnushkm G M.. Plotnikova N A , Rosenfeld S V , Semechenko A V The role of melatonin in mechanisms of aging and carcinogenesis Abstracts of the International Symposium "Interaction of the Nervous and Immune Systems in Healh and Disease" - 2007 - p 12-13

Подписано в печать 17 09 2007 Печ листов 1,5 Формат 60x84 1/16 Заказ 148 Тираж 100

Отпечатано в ОАО "Типография "Рузасвский печатник" 431440, г Рузаевка, ул Трынова, 67а