Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Влияние "Эритрофита" на систему гемостаза при нарушениях свертывания крови

На правах рукописи

Гармаева Евгения Данзанжаповна

ВЛИЯНИЕ «ЭРИТРОФИТА» НА СИСТЕМУ ГЕМОСТАЗА ПРИ НАРУШЕНИЯХ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 7 АПР 2:

005547129

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки «Институт общей и экспериментальной биологии» Сибирского отделения Российской академии наук

Научный руководитель:

Ажунова Татьяна Александровна - доктор биологических наук Официальные оппоненты:

Хитрихеев Владимир Евгеньевич - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Бурятский государственный университет» Министерства образования и науки РФ /медицинский факультет, декан

Борголов Александр Владимирович - кандидат медицинских наук, Государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Республиканский перинатальный центр» Министерства здравоохранения Республики Бурятия, главный врач

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «30 мая» 2014 г. в 13°°часов на заседании Диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

//

Автореферат разослан » апреля 2014 г. Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, доцент

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В настоящее время, несмотря на значительный прогресс в фармакологии и гематологии, проблема профилактики и лечения заболеваний системы гемостаза остается актуальной. Система гемостаза регулируется сложными нейрогуморальными механизмами. Эти механизмы создают условия, при которых начавшийся процесс свертывания, необходимый для остановки кровотечения, не переходит при нормальном функционировании системы в процесс общего внутрисосуди-стого свертывания крови (Сидельников, Кирюшенков, 2004; Синьков и соавт., 2007), Нарушения в системе гемостаза характеризуются распространенным микротромбозом и фибринолизом, что в итоге приводит к коагулопатии потребления за счет дефицита факторов свертывания крови, в результате чего резко повышается риск кровотечения (Шиффман, 2002; 1997). Острый и подострый ДВС-синдром - постоянные спутники всех критических и терминальных состояний, сопровождающихся явлениями шока, деструкцией и/или гипоксией органов и тканей, тяжелыми экзо- и эндогенными интоксикациями, в том числе при всех видах сепсиса, токсикозах беременности, отравлениях ядами, кислотами, щелочами, при ожогах и отморожениях (Непорада и соав., 2008; Cummings, Olsen, 2011). Согласно авторам, применяющим диагностическую шкалу Международного общества тромбоза и гемостаза (ISTN) (Bakhitarietal., 2004; Cauchieetal., 2006), частота ДВС-синдрома среди пациентов, у которых критическая ситуация заставляла заподозрить патологию гемостаза, составляет 22-34%. Значительная распространенность и высокая летальность, сопровождающие это состояние, обусловливают повышенное внимание клиницистов и исследователей к данной проблеме (Воробьев, 2006; Furlongetal., 2007). Такой высокий уровень летальности обусловлен нарушением макро- и микроциркуляции во внутренних органах с развитием полиорганной недостаточности, которая определяет основные клинические проявления ДВС-синдрома. ДВС-синдромом нередко осложняются деструктивные процессы в органах (острая дистрофия печени, инфаркт миокарда, геморрагический и деструктивный панкреатит, возникновение острых язв желудка и кишечника с профузными кровотечениями из них). В связи с этим желудок, кишечник, легкие, почки, печень относятся к так называемым органам-мишеням, особо поражаемым при ДВС-синдроме. Подострые и затяжные ДВС-синдромы наблюдаются при онкологических заболеваниях, трансплантата! органов, протезировании кровеносных сосудов (Кузин и соавт., 1995; Непорада и соавт., 2008; Ко-

чемасов, 2010; Dale, 2005). Из приведенного далеко неполного перечня причин, следует, ДВС-синдром - общепатологический процесс, составляющий часть патогенеза ряда тяжелых заболеваний (Макаров, 1990; Баркаган, 2005; Гольдберг, Крыжановский, 2009; Esmon, 2003).

В соответствии с этим, в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН было разработано новое растительное средство, условно названное «Эритрофит», полученное из листьев Urtica dioica L., травы Polygonum aviculare L., травы Achillea millefolium L., корней и корневищ Zingiber officinalis L. и коры Cinnamomum cassia L. Основанием для разработки указанного средства служили опыт народной и традиционной медицины (Телятьев, 2000; Соколов, 2006).

Целью настоящего исследования явилось определение фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности растительного средства «Эритрофит» при экспериментальных нарушениях свертывания крови и выявление возможных механизмов его гемостатического и антикоагуляционного действия.

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:

- оценить основные фармакологические свойства растительного средства «Эритрофит»;

- определить характер влияния «Эритрофита» на состояние тромбоци-тарного и коагуляционного звеньев системы гемостаза при ДВС-синдроме, индуцированном введением тромбина и циклофосфана;

- выявить фармакотерапевтическую эффективность «Эритрофита» при повреждениях печени и желудка;

- установить основные механизмы гемостатического и антикоагуляционного действия «Эритрофита» при экспериментальных нарушениях системы гемостаза.

Научная новизна. Работа представляет собой фармакологическое исследование нового растительного средства «Эритрофит», полученного по щадящей и ресурсосберегающей технологии. Впервые установлено, что указанное многокомпонентное растительное средство оказывает регулирующее влияние на основные звенья системы гемостаза Показано, что «Эритрофит» при экспериментальном ДВС-синдроме предупреждает чрезмерную активацию свертывающей системы крови, которая превосходит возможности противосвертывающей системы. «Эритрофит» снижает потребление факторов свертывания крови, предупреждает активацию фибринолиза, снижает кровоточивость. При интоксикации цикло-

фосфаном указанное средство нормализует сосудисто-тромбоцитарные механизмы, восстанавливает коагуляционные и фибринолитнческие свойства крови. При токсическом гепатите «Эритрофит» предупреждает развитие признаков дезагрегации тромбоцитов, что способствует нормализации основных показателей в системе сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза. Установлено, что «Эритрофит» обладает антиульцерогенным действием, предотвращает появление дистрофических изменений в слизистой оболочке желудка и кишечника, предупреждает микротромбирование и стаз в сосудах и снижает степень деструктивных изменений в желудке и кишечнике. Выявлено противовоспалительное, антиоксидантное, анти-сгрессорное и мембраностабилизирующее действие «Эритрофита».

Практическая значимость. Разработан способ получения нового растительного средства «Эритрофит», предназначенного для лечения и профилактики нарушений гемостаза. На указанное средство получен Патент РФ «Способ получения средства, обладающего противоязвенной, антистрессорной и гемостатической активностями» (№ 2495674 от 20 октября 2013 г.). Полученные в работе данные используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» Министерства образования и науки РФ (акт внедрения от 18.012013 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

- «Эритрофит» обладает регулирующим действием на систему гемостаза при экспериментальном ДВС-синдроме, вызванном тромбином и циклофосфаном, нормализуя активность свертывающей и противосвер-тывающей систем крови;

- указанное средство оказывает противовоспалительное, антиокислительное, стресспротективное, мембраностабилизирующее действия;

- растительное средство «Эритрофит» восстанавливает сопряженность реакции между свертывающей и фибринолитической системами, снижает тромбоцитопению, сокращает время паренхиматозного кровотечения, способствует активации антикоагулянтной системы ври токсическом гепатите;

- «Эритрофит» оказывает противоязвенное действие, предупреждая возникновение деструктивных повреждений в слизистой оболочке желудка;

- важными механизмами гемостатического и антикоагуляционного действия «Эритрофита» являются восстановление коагуляционных и фибринолитических свойств крови при нарушениях в системе гемостаза.

Апробация материалов диссертации. Основные результаты исследований доложены и обсуждены на: III International scientific conference "Traditional medicine: a current Situation and perspectives of development" (Ulan-Ude, 2008); The 4Л International Symposium on Traditional medicine and innovative drugs (Inner Mongolia, Erdos, 2009); III Всероссийской научной конференции с международным участием «Развитие традиционной медицины в России: опыт, научные исследования, перспективы» (Улан-Удэ, 2010); VI International scientific conference "Traditional medicine: ways of Integration with modern health care" (Ulan-Ude, 2013).

Работа выполнена в лаборатории безопасности биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным Президиумом СО РАН.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, из которых 5 - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 133 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, глав с изложением результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 229 источников, из которых 60 - на иностранных языках. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 7 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследованию подвергалось многокомпонентное растительное средство, условно названное «Эритрофит», представляющее собой экстракт сухой, полученный из 5 видов растительного сырья: листьев крапивы двудомной (Urtica dioica L.), травы горца птичьего (Poligonum aviculare L.) , корней и корневищ имбиря лекарственного (Zingiber officinalis Roskol.), травы тысячелистника обыкновенного (Achillea millefolium L.), коры коричника китайского (Cinnamomum cassia), взятых в соо тношении 3,5:3,0:1,0:2,0:0,5 масс, частей. Сухой полиэкстракт «Эритрофит» получали путем измельчения растительного сырья, экстракции 40 % спиртом этиловым, упаривания в вакууме и последующей быстрой сушкой в вакуум-сушильной установке при 60-70° С. Полученный экстракт представляет собой хорошо растворимый в воде порошок светло-коричневого

цвета со специфическим запахом. С использованием физико-химических методов определен качественный и количественный состав биологически активных веществ (БАВ) «Эритрофита». В указанном растительном средстве содержатся дубильные вещества (4,7 %), флавоноиды (1,51 %), фе-нолкарбоновые кислоты (0,96 %), каротиноиды (3,98 мг%), витамин К (0,15 мг%) (Лубсандоржиева и др., 2008).

Экспериментальная работа выполнена на 320 крысах обоего пола линии Wistar с исходной массой 160-180 г. Животные находились в стандартных условиях вивария в условиях естественного светового режима и на стандартной диете при свободном доступе к воде и пище (Приказ МЗ СССР №1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты проводились в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г.) и правилами «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей» (Страсбург, 1986) и требованиями Приказа МЗ РФ № 708н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Протокол исследования одобрен этическим комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол № 2 от 05.11.2008).

Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапита-ции под легким эфирным наркозом. Отдельные серии экспериментов проводились при использовании суспензии эритроцитов.

Указанное средство вводили животным в дозе 50 мг/кг в форме водного раствора в объеме 10 мл/кг в условиях его курсового введения ежедневно, один раз в сутки. Кратность введения и сроки исследования зависели от условий эксперимента. В отдельных сериях экспериментов в качестве препарата сравнения использовали калефлон в изоэффективной дозе 100 мг/кг (Руководство..., 2000). Во всех экспериментах животные интактной и контрольной групп получали воду очищенную в эквиобъем-ном количестве по аналогичным схемам.

Определение острой токсичности растительного средства «Эритро-фит» проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005).

Показатели периферической крови определяли на автоматическом гематологическом анализаторе «Абакус» (Австрия) со стандартными реактивами. Исследование системы гемостаза проводили согласно методическим рекомендациям (Методы..., 1995) с использованием набора реактивов «Технология-стандарт». Влияние «Эритрофита» на сосудисто-

тромбоцитарное звено системы гемостаза оценивали по количеству тромбоцитов в периферической крови, агрегационной активности и адгезии тромбоцитов (Клиническая..., 1999; Кушкин, 2012). Исследование индуцированной агрегации тромбоцитов проводили на автоматическом анализаторе показателей гемостаза «Минилаб - 701» (Россия). При изучении влияния указанного растительного средства на коагуляционное звено гемостаза определяли показатели внутреннего механизма свертывания крови (аутокоагуляционный тест - АКТ) (Методы..., 1995). Определяли активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) (Баркаган, 1998). Для характеристики внешнего механизма свертывания крови определяли протромбиновое время по А.Квик (Вавилова, 2010). Содержание фибриногена определяли с использованием общепринятых методов (Баркаган, 2001; Рязанцева и соавт., 2008), регистрировали активированное время рекальцификации плазмы (АВР) (Кушкин, 2012), протромбиновое (тромбопластиновое) время (ПВ) (Методы..., 1995). Время паренхиматозного кровотечения определяли с использованием метода В.В. Гацуры (1974).

Оценку противовоспалительной активности растительного средства «Эритрофит» проводили согласно общепринятым требованиям (Руководство..., 2005). Экссудативную фазу воспалительной реакции вызывали субплантарным введением в заднюю лапку крысы 0,1 мл 3 % водного раствора формалина (Стрельников, 1960). Альтеративную фазу воспалительной реакции у крыс моделировали путем подкожного введения в область спинки 0,5 мл 9 % раствора уксусной кислоты с одновременным внутрибрюшинном введением 0,4 мл 10 % раствора декстрана в дозе 300 мг/кг массы животного (Ойвин, Шетель, 1988).

Стресспротективное действие «Эритрофита» исследовали на модели иммобилизационного стресса (Селье, 1960; Модели..., 1977). Определяли индекс Паулса и индекс поражения по методу Е. Komlos и L. Péteos (1987), которые позволяют характеризовать патологический процесс не только по количеству деструкций, но и по степени их различий, а также «защитный индекс», который вычислялся как разность между интегральным показателем поражения слизистой оболочки желудка в контрольной группе животных, принятым за единицу, и аналогичным показателем в группе животных, получавших «Эритрофит» (Ахапкина, 2011).

Для установления спектра ангиоксидантной активности «Эритрофита» и его компонентов использованы методы определения NO-связывающей активности (Covindarajan, 2003), Fe2+ - хелатирующей активности, супероксид

радикал-связывающей активности (Фархутдинов, 2006; Chenetal., 2003; Krishnaihetal., 2011). Для оценки интенсивности свободнорадикального окисления биомакромолекул определяли концентрацию малоновогодиапь-дегида (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981) и гомо-генате печени (Стальная, Гаришвили, 1977); влияние указанного средства на состояние антиоксидантной системы организма оценивали по активности супероксиддисмутазы крови (СОД) (Чевари и соавт, 1985), каталазы сыворотки крови (Королюк и соавт., 1988), содержанию восстановленного глутатиона (ВГ) (Anderson, 1989) в крови. Мембраностабилизирующую активность растительного средства «Эритрофит» определяли in vitro по степени торможения перекисного и осмотического гемолиза эритроцитов донорской крови (Ковалев и соавт., 1986).

Острый ДВС-синдром вызывали путем однократного внутрибрюшин-ного введения животным раствора тромбина в дозе 25 мг/кг массы животных (Балуда, 1977).

Цшслофосфан вводили лабораторным животным внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (МПД), равной 7 мг/кг 1 раз в сутки в течение 10 дней (Руководство..., 2005).

Острый токсический гепатит у крыс вызывали путем подкожного введения 50 % масляного раствора (V/V) четыреххлористого углерода (СС14, тетрахлорметан), один раз в сутки через день в объеме 4 мл/кг массы крыс в течение 4 дней (Руководство..., 2005). Исследования проводили через 7 суток от начала эксперимента.

Для оценки противоязвенного действия указанного средства повреждение желудка вызывали внутрижелудочным введением индометацина в дозе 5 мг/кг 1 раз в сутки в течение 5 дней (Подвигина, 2003).

Для оценки морфофункционального состояния печени подопытных животных использовали ряд гистологических, гистохимических и гисто-энзимологических методов (Микроскопическая..., 1996). Микрофотографирование проводили с помощью цифрового микроскопа «Motic» (Германия).

Для обработки полученных результатов использована программа Statistica 6.0. Различия между экспериментальными группами по исследуемым параметрам считали значимыми при Р<0,05 (Сергиенко, Бондарева, 2006).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исследование фармакологической активности «Эритрофита» Установлено, что острая токсичность БЬ50 «Эритрофита» при однократном внутрижелудочном введении в форме водного раствора в объеме 10 мл/кг в максимальной дозе 5000 мг/кг (максимальное количество средства, растворение которого возможно в указанном объеме воды) не вызывало гибели животных за весь период наблюдения (14 суток); лишь в первые часы на фоне введения высоких доз фитоэкстракта наблюдали ограничение двигательной активности, отказ от пищи. Через 5-6 часов после введения «Эритрофита» животные опытных групп не отличались от крыс контрольной группы по внешнему виду и поведению. Полученные данные позволяют отнести «Эритрофита к группе практически нетоксичных веществ (Руководство..., 2005).

Таблица 1 - Влияние «Эритрофита» на показатели тромбоцнгарнош звена

гемостаза у интактных крыс

Группы животных Время кровотечения, с Кол-во тромбоцитов, X 109/л

спонтанное паренхиматозное

Контрольная (Н20) (п=8) 113,2± 5,52 98,9± 5,67 510,1± 45,53

Опытная 1 («Эритро-фит»), 10 мг/кг (п=7) 100,3± 4,44 81,5± 3,12 538,7± 50,11

Опытная 2 («Эритро-фит»), 50 мг/кг (п=8) 66,1± 2,61' 77,2± 2,13" 698,2± 25,01*

Опытная 3 («Эригро-фит»), 100 мг/кг) (п=7) 75,Ш: 3,42* 75,2± 6,61' 578,9± 23,07

Опытная 4 («Эритро-фиг»), 150 мг/кг (п=7) 80,1± 3,65' 86,7± 6,45 565,4± 34,23

Примечание: - здесь и далее значения, значимо отличающиеся от данных животных контрольной группы при Р <0,05; п - количество животных в группе.

Как следует из данных, приведенных в таблице 1, при введении лабораторным животным «Эритрофита» в дозе 10 мг/кг время паренхиматозного и спонтанного кровотечения и количество тромбоцитов крови не отличались от таковых у крыс контрольной группы. Введение «Эритрофита» в дозах 50, 100 и 150 мг/кг сопровождалось выраженными изменениями в состоянии тромбоцитарного звена гемостаза у белых крыс. При введении указанного средства в дозе 50 мг/кг время спонтанного крово-

течения сокращалось на 42 %, паренхиматозного - на 22 % по сравнению с показателями в контроле. При введении «Эритрофита» в дозах 100 и 150 мг/кг время спонтанного кровотечения сокращалось на 34 и 30 % соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Количество тромбоцитов в крови животных, получавших «Эритро-фит» в дозе 50 мг/кг, увеличивалось на 36 %, 100 мг/кг - на 14 %, 150 мг/кг - на 10 % по сравнению с показателями в контроле.

Полученные данные свидетельствуют, что введение «Эритрофита» в дозе 50 мг/кг характеризуется более выраженным влиянием на показатели тромбоцитарного звена гемостаза у крыс. В дальнейших экспериментах «Эритрофит» использовали в дозе 50 мг/кг.

При введении «Эритрофита» в дозе 50 мг/кг отмечалось снижение индекса активации тромбоцитов на 48 %, агрегационной активности тромбоцитов - на 33 %, уменьшение индекса ретракции сгустка - на 37 %, адгезии тромбоцитов - на 18 % по сравнению с контролем (табл. 2).

Таблица 2 - Влияние «Эритрофита» на индекс активации тромбоцитов и агре-гационную активность тромбоцитов у ингактных крыс_

Показатели Группы животных

Контрольная (Н20) (п=6) Опытная («Эритрофит») (п=7), 50 мг/кг

Индекс активации тромбоцитов, у.е. 2,5±0,10 1,3± 0,21*

Агрегационная активность тромбоцитов, % 46,1± 3,02 31,3± 1,20*

Индекс ретракции, % 54,5± 3,71 34,5± 2,55*

Адгезия тромбоцитов, % 44,8± 4,12 37,0± 1,27*

Как следует из таблицы 3, «Эритрофит» в указанной дозе проявлял антикоагуляционные свойства, о чем свидетельствовало увеличение про-тромбинового и тромбинового времени на 39 и 34 % соответственно, активированное частичное тромбиновое время повышалось на 38 % по сравнению с данными у животных контрольной группы.

Таблица 3 - Влияние «Эритрофита» на показатели коагуляционного звена гемостаза у интактных крыс_

Группы животных АЧТВ, с ПВ, с ТВ, с

Контрольная (Н20) (п=8) 32,1± 2,27 15,2± 1,17 10,5± 1,04

Опытная («Эритрофит»), 50 мг/кг (п=7) 44,5± 3,50* 21,2± 0,70* 14,1± 1,55"

Способность «Эритрофита» оказывать регулирующее действие на коагуляционное звено гемостаза и фибринолиз было подтверждено результатами аутокоагуляционного тестирования. Введение «Эритрофита» в дозе 50 мг/кг сопровождалось увеличением свертывающей активности крови (А) лабораторных животных на 34 % и укорочением времени достижения максимальной свертывающей активности (МА) на 39 % по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы (табл. 4). Наряду с этим, «Эритрофит» в указанной дозе повышал активность анти-коагуляционных и фибринолитических свойств крови, о чем свидетельствовало укорочение времени снижения тромбопластин-тромбиновой активности до 50 % МА (Ф) на 26 % по сравнению с контролем, а также увеличение индекса инактивации тромбина (ИИТ) на 38 % по сравнению с данными у животных контрольной группы.

Таблица 4 - Влияние «Эритрофита» на показатели аутокоагуляционного теста у ингактных крыс___

Показатели Группы животных

Контрольная (Н20) (п=10) Опытная («Эритрофит»), 50 мг/кг (п=11)

А, % 30,5± 2,10 41,1± 2,32"

МА, % 49,9± 3,06 30,5± 4,71

Ф, мин 37,1± 1,10 27,5± 1,46"

ИИТ, у.е. 2,4± 0,11 3,4± 0,33"

Полученные данные свидетельствуют, что «Эритрофит» оказывает влияние на показатели коагуляционного гемостаза и фибринолиза у крыс, проявляя антикоагуляционные свойства.

При установлении спектра антиоксидантной активности «Эритрофита» и его компонентов in vitro установлено, что железосвязывающая активность водных извлечений убывала в ряду: U. dioica>P. avicularé>C. cassicOA. Millefolium> «Эритрофит» >Z. officinale. Степень связывания супероксидного анион-радикала извлечений снижалась в ряду: Z. officinale «Эритрофит» >U. dioica>P. avicularé>C. cassia>A. millefolium. Из отдельных компонентов «Эритрофита» наиболее эффективной радикал-связывающей активностью обладали Z. officinale, P. aviculare и U. dioica. NO-связывающая активность убывала в ряду: С. cassia>U. dioiccOP. avi-cularé> «Эритрофит» >A. millefoliuirOZ. officinale. Антиоксидантная ак-

тивность «Эритрофита» и его компонентов убывала в ряду: С. cassia>A. millefolium>Z. officinalis>P. aviculare> «Эритрофит» >U. dioica.

Таким образом, растительное средство «Эритрофит» и его отдельные компоненты - экстракты сухие из листьев Urtica dioica L.,, травы Polygonum aviculare L., Achillea millefolium L., корней и корневищ Zingiber officinalis L. и коры Cinnamomum cassia L. обладают антиоксидантной активностью в тест-системах in vitro.

Установлено, что «Эритрофит» оказывал выраженное мембраноста-билизирующее действие, существенно уменьшая степень перекисного гемолиза эритроцитов. Так, использование «Эритрофита» на фоне перекисного гемолиза в концентрациях 10"5 и 10"6 М сопровождалось уменьшением степени гемолиза на 29 % по сравнению с данными в контрольных пробах.

Исследование стресспротективного действия «Эритрофита» показало, что профилактическое введение указанного средства в экспериментально-терапевтической дозе сопровождалось выраженным антистрессорным действием, о чем свидетельствовали уменьшение массы надпочечников на 31%, увеличение относительной массы тимуса на 18% и селезенки - на 41% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. При курсовом введении «Эритрофита» в указанной дозе индекс Паулса для точечных кровоизлияний снижался на 17%, для эрозий на 41% и для полосовидных язв - на 27% по сравнению с данными у животных контрольной группы. Показателем эффективности «Эритрофита» также служил «защитный индекс». В нашем случае «защитный индекс» «Эритрофита» более существенно повышался для полосовидных язв в слизистой оболочке желудка. Кроме того, содержание ТБК-активных продуктов в гомогенате желудка крыс, получавших «Эритрофит», снижался на 17 %, диеновых конъюгатов в сыворотке крови - на 40% по сравнению с контролем. Наряду с этим, в сыворотке крови повышалась активность катал азы на 34% по сравнению с аналогичным показателем у крыс контрольной группы.

Таким образом, «Эритрофит» оказывает антистрессорное действие, которое связано с наличием у него антиоксидантной активности и повышением активности эндогенной антиокислительной системы.

Фармакотерапевтическая эффективность растительного средства «Эритрофит» при экспериментальном диссеминированном внутри-сосудистом свертывании крови

У животных опытной группы, получавших «Эритрофит» на фоне введения тромбина, время паренхиматозного кровотечения повышалось на 39% по сравнению с показателями у крыс контрольной группы (рис. 1), количество тромбоцитов возрастало на 43% (рис. 2), индекс ретракции тромбоцитов увеличивался на 24% по сравнению с показателями в контроле.

и

1 1 ■

1 а

Спонтанное Паренхиматозное

И Иитакт ■ Контр, т "Эритрофит"

Рисунок 1 - Влияние «Эритрофита» на время спонтанного и паренхиматозного кровотечения при экспериментальном ДВС-синдроме у крыс (5 сутки).

Рисунок 2 - Влияние «Эритрофита» на количество тромбоцитов (109/л) при экспериментальном ДВС-синдроме у крыс. I - интактная; 2 - контрольная; 3 -«Эритрофит» (5 сутки)

Развитие ДВС-синдрома сопровождается грубыми нарушениями коа-гуляционного звена гемостаза, что подтверждалось удлинением про-тромбинового и тромбинового времени, активированного частичного тромбинового времени и изменениями показателей аутокоагуляционного теста, свидетельствующими о развитии явлений гипокоагуляции у крыс контрольной группы. Вместе с тем, у крыс контрольной группы отмечался резко положительный р-нафтоловый тест, свидетельствующий о присутствии продуктов деградации фибрина (ПДФ). Кроме этого, на фоне введения тромбина наблюдалось существенное повышение показателя Ф и индекса инактивации тромбина, указывающие на активацию антикоа-1улянтной системы. В целом, указанные патологические изменения системы гемостаза, характеризующие нарушение гемостатического баланса в организме, свидетельствуют о развитии ДВС-синдрома.

Введение крысам «Эритрофита» в дозе 50 мг/кг при экспериментальном ДВС-синдроме оказывало регулирующее влияние на показатели, характеризующие функциональное состояние коагуляционного звена и процессов фибринолиза. Так, на фоне введения «Эритрофита» отмечалось укорочение протромбинового и тромбинового времени на 36 и 35% соответственно, АЧТВ сокращалось на 33 %, был менее выражен (3-нафтоловый тест по сравнению с показателями у крыс контрольной группы (табл. 5).

Наряду с этим, на фоне введения испытуемого средства отмечалась нормализация показателей аутокоагуляционного теста: существенное повышение свертывающей активности на начальных этапах образования тромбопластина и тромбина, а также повышение активности противо-свертывающей системы, о чем свидетельствовало укорочение показателя Ф на 35 % по сравнению с контролем и выраженное снижение индекса инактивации тромбина (табл. 6).

Таблица 5 - Влияние «Эритрофита» на показатели коагуляционного звена и фибринолиз при экспериментальном ДВС-синдроме у крыс (5 сутки)_

Группы животных Показатели

ПВ, с АЧТВ, с ТВ, с Р-нафтоловый тест

Интактная 9,4± 0,50 50,4± 0,64 15,6± 0,67 -

Контрольная (тром-бин+Н20) 15,4±0,13 103,5± 0,45 46,4± 1,34 ++

Опытная (тромбин+ «Эритрофит») 9,9± 0,37' 70,2± 0,59" 30,2± 1,09" +

Примечание: (-) — отрицательный; (+) — положительный; С++) —резко положительный.

Таблица 6 - Влияние «Эритрофита» на показатели аутокоагуляционного теста при ДВС-синдроме у крыс (5 сутки)_

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (тромбин+Н20) Опытная (тром-бин+ «Эритрофит»)

Ф,% 35,7± 0,34 29,1± 0,17 19,1± 1,10"

МА, % 54,4± 3,33 33,5± 1,20 45,1± 3,10*

Т], мин 3,0±0,13 3,5± 0,20 2,4± 0,23'

Т2, мин 7,1 ±0,28 12,1± 1,20 7,1±0,22'

Ф, мин 35,7± 0,34 29,1± 2,17 19,1± 1,10"

ИИТ, у. е. 3,3± 0,11 5,2± 0,44 3,1± 0,21'

Таким образом, полученные в работе данные свидетельствуют, что «Эритрофит» в экспериментально-терапевтической дозе обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при остром ДВС-синдроме. Введение «Эритрофита» в указанной дозе сопровождается развитием защитно-компенсаторных механизмов, проявляющихся в повышении активности противосвертывающей и фибринолитической систем, что предупреждает развитие изменений в функциональном состоянии основных звеньев системы гемостаза.

Фармакотерапевтическая эффективность «Эритрофита» при нарушениях в системе гемостаза, вызванных циклофосфаном

Согласно многочисленным исследованиям развитие злокачественных новообразований и применение химиотерапевтических препаратов сопровождается мембранотоксическим действием, связанным с интенсификацией процессов липопероксидации, генераций свободных радикалов (Микуляк и соавт., 2009; Griffiths, 2000). В связи с этим, изучена возможность фармакологической коррекции «Эритрофитом» побочных эффектов циклофосфана на систему гемостаза.

Введение «Эритрофита» на фоне введения животным циклофосфана оказывало выраженное экранирующее действие на проявления нарушений системы гемостаза и показателей периферической крови крыс. Как следует из таблицы 7, при введении циклофосфана содержание гемоглобина в крови снижалось на 32%, эритроцитов - на 47 %, количество лейкоцитов - на 22 % по сравнению с показателями у крыс ингактной группы. При курсовом введении «Эритрофита» содержание гемоглобина в крови повышалось на 32 %, количество эритроцитов - в 1,7 раза, лейкоцитов — на 24 %, моноцитов - в 2,8 раза по сравнению с показателями у животных контрольной группы.

Таблица 7 - Влияние «Эритрофита» на показатели периферической крови на фоне введения циклофосфана (10 сутки)

Показатели Группы животных

Интактная (п=10) Контрольная (цшелофосфан + НгО) (п=8) Опытная (циклофосфан + «Эритро-фит») (п=8)

Гемоглобин, г/л 149,4 ± 5,21 102,8 ± 9,93 136,0 ±3,21'

Эритроциты, 1012 /л 5,9 ±0,17 3,7 ±0,31 6,4 ± 0,17*

Лейкоциты, 109/л 8,0 ± 0,30 6,3 ± 0,38 7,8 ± 0,20'

Гематокрит,% 35,5 ±0,71 20,6 ±2,50 35,7 ±1,50*

Лимфоциты, абс. 13,5± 0,22 3,7± 0,30 3,5± 0,10

Моноциты, абс. 1,0±0Д0 2,6± 0,20 0,9± 0,07*

Таблица 8 - Влияние «Эритрофита» на показатели системы гемостаза у белых

крыс на фоне введения циклофосфана (10 сутки)

Показатели Группы животных

Интактная (п=6) Контрольная (циклофосфан + Н20) (п=5) Опытная (циклофосфан + «Эритрофит») (п=6)

Тромбоциты, 109/л 243,0 ±3,40 310,1 ±15,11 233,2 ±10,15*

Протромбиновое время, с 9,2 ±0,10 26,2 ±1,10 20,4 ±1,70*

Тромбиновое время, с 21,6 ± 1,12 37,3 ± 1,00 17,6 ± 1,15*

Фибриноген, г/л 3,6± 0,12 2,0± 0,12 3,0± 0,20*

Агрегация тромбоцитов с АДФ, с 11,9± 0,30 16,3± 1,10 12,1± 1,11*

АЧТВ, с 27,1± 0,91 36,5±2,10 28,0± 1,10*

Обнаруживалось значительное угнетение плазменно-коагуляционного звена гемостаза при введении циклофосфана, что подтверждалось достоверным удлинением времени свертывания крови на 36 %. При исследовании тромбоцитарного звена у крыс, получавших только циклофосфан, показано, что количество тромбоцитов увеличивалось на 28 %, протром-биновое время возрастало на 43 %, тромбиновое время - на 72 %, АЧТВ -более чем в 2 раза, протромбиновый индекс снижался на 24 %, содержание фибриногена - на 46 % по сравнению с показателями у крыс интактной группы. Курсовое введение «Эритрофита» сопровождалось снижением количества тромбоцитов на 25 %, протромбинового времени - на 22 %, тром-бинового времени - на 33 % и АЧТВ - на 24 %, содержание фибриногена возрастало на 50 % по сравнению с показателями в контроле (табл. 8).

Таким образом, «Эритрофит» в экспериментально-терапевтической дозе нормализует сосудисто-тромбоцитарные механизмы при циклофос-фановой интоксикации, что проявляется в сохранности самих кровяных пластинок и их свойств, восстановлении коагуляционных и фибриноли-тических свойств крови, нивелируется токсическое действие активных форм кислорода, что может быть основанием применения «Эритрофита» при нарушениях гемостаза при проведении противоопухолевой терапии.

Влияние «Эритрофита» на коагуляционное звено гемостаза при тетрахлорметановом гепатите

При ДВС-синдроме поражение печени наблюдается примерно у половины больных, нередко осложняются деструктивными процессами в органах (острая дистрофия печени, геморрагический и деструктивный пан-

креатит). При поражении печени может развиться тяжелая печеночная недостаточность вследствие тромбоза печеночных вен (Gando, 2001). Известно, что при высокой активности воспалительной гепатопатии происходит значительное нарушение функций тромбоцитов с проявлениями ДВС-синдрома (Петрищев, 2003). В этой связи исследовали влияние «Эритрофита» на состояние системы сосудисто-тромбоцитарного гемостаза при остром токсическом гепатите у лабораторных животных.

При курсовом введении «Эритрофита» на 7 (утки эксперимента тромби-новое время укорачивалось на 34 %, повышалась активность механизмов «внешнего» и «внутреннего» путей свертывания крови (укорочение АЧТВ, ПВ) (табл.9).

Наиболее выраженное влияние указанного фитосредства на коагуля-ционный гемостаз при повреждении печени тетрахлорметаном проявлялся на 21 сутки эксперимента: наблюдалась нормализация показателей АЧТВ и ПВ, укорочение ТВ на 44 % по сравнению с данными в контрольной группе, что свидетельствует об увеличении скорости перехода фибриногена в фибрин, повышалась свертывающая активность крови (А) по сравнению с данными у животных контрольной группы (рис. 3), максимальная свертывающая активность (МА) (рис. 4), индекс инактивации тромбина снижался на 41 % по сравнению с контролем (рис. 5).

Таблица 9 - Влияние «Эритрофита» на показатели коагуляционного гемостаза при тетрахлорметановом гепатите у белых крыс_

Группы животных Показатели коагуляционного гемостаза

АЧТВ, с ПВ, с ТВ, с

Интактная(п= 10) 14,8 ±0,14 22,5 ± 0,29 20,6 ± 0,06

7 сутки

Контрольная (CCL4 + Н20)(п=8) 17,8 ±0,24 23,3 ±0,63 32,6± 1,21

Опытная (CCL4+ «Эритрофит» (п=9) 19,0 ±0,44 27,2 ±0,31 21,7± 0,90"

14 сутки

Контрольная (CCL4 + Н20)(п=7) 17,1 ± 0,26 22,8 ±0,51 42,9 ±0,20

Опытная (CCL4+ «Эритрофит») (п=7) 30,2 ± 0,26" 17,5 ±0,68" 30,0 ± 0,67"

21 сутки

Контрольная (CCL4 + Н20) (п=6) 22,9 ±0,23 27,6 ± 0,39 36,5 ± 0,87

Опытная (CCL4+ «Эритрофит») (п=7) 35,0 ± 0,45* 18,7 ±0,31' 20,6 ± 1,50"

Интакт. Контр. "Эритрофмт"

Рисунок 3 - Влияние «Эритрофита» на свертывающую активность крови (А) при СС14-гепатите (21 сутки)

Рисунок 4 - Влияние «Эритрофита» на максимальную свертывающую активность крови (МА) при ССЦ-гепатите (21 сутки)

Рисунок 5 - Влияние «Эритрофита» на индекс инактивации тромбина (усл.ед.) при ССЦ-гепатите (21 сутки). 1 - интактная; 2 - контрольная; 3 - «Эритрофит»

Таким образом, курсовое введение «Эритрофита» в указанной дозе оказывает положительное влияние на систему гемостаза при тетрахлор-метановом гепатите у крыс, восстанавливая сопряженность реакции между свертывающей и фнбринолитической системами, способствует активации антикоагулянтной системы.

Результаты морфометрических исследований показали, что на фоне введения «Эритрофита» при СС14-геггатите на 14 сутки наблюдения количество гепатоцитов с жировой дистрофией снижалось в 1,5раза; число некротизированных гепатоцитов - на 21 % по сравнению с показателями у животных контрольной группы. Более того, при введении животным исследуемого средства количество гипертрофированных и двуядерных гепатоцитов повышалось в среднем в 3,5 раза по сравнению с данными у контрольных животных, что свидетельствует об усилении репаративных процессов в печени животных опытных групп.

Фармакотерапевтическая эффективность «Эритрофита» при ин-дометациновом повреждении желудка

Как известно, при поражении желудочно-кишечного тракта характерны дистрофические изменения слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, микротромбирование и стаз в их сосудах, отмечаются множественные эрозии и геморрагии, в некоторых случаях развиваются мезентеральные тромбозы, ведущие к инфарктам кишечника (Звягинцева, Гриднева, 2005). В этой связи было исследовано антиульцерогенное действие «Эритрофита» при экспериментальном повреждении желудка.

индекс Паулса

Точечные Эрозии Пояосовидные

кровоизлияния язвы

Рисунок 6 -Противоязвенное действие «Эритрофита» при индометациновом повреждении желудка (5 сутки)

Как следует из рисунка 6, при курсовом введении животным исследуемого средства индекс Паулса для точечных кровоизлияний снижался в 1,5 раза по сравнению с показателями в контроле. Следует отметить, что в более заметной степени «Эритрофит» предупреждал образование полосовидных язв. При оценке изменения язвенного индекса по Komlos установлено, что «Эритрофит» снижал количество язвенных дефектов от 2 до 5 мм на 20%, более 5 мм - на 35% по сравнению с данными у животных контрольной группы.

В целом, на фоне повреждения слизистой оболочки желудка крыс ин-дометацином курсовое введение комплексного растительного средства «Эритрофит» приводит к более быстрому заживлению язвенных дефектов слизистой оболочки желудка и уменьшению их размеров по сравнению с данными в контрольной группе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вследствие активации системы свертывания и других факторов, например, нарушения синтеза тромбоцитов и белков системы коагуляции и их усиленного потребления или деградации, может возникнуть истощение факторов свертывания, ингибиторов и тромбоцитов. Эта ситуация приводит к тяжелому нарушению системы коагуляции, результатом чего являются тяжелые кровотечения (Баркаган, 1997; Баркаган и соавт., 2002; Макацария, Панфилова, 2010; Clinical..., 2012).

Полученные в работе данные свидетельствуют, что новое растительное средство «Эритрофит» в экспериментально-терапевтических дозах оказывает регулирующее влияние на основные звенья системы гемостаза, вовлекая в данный процесс как «внешний», так и «внутренний» механизмы свертывания крови и фибринолиза. Показано, что «Эритрофит» обладает широким спектром фармакологической активности, оказывая противовоспалительное, регенераторное, мембраностабилизирующее, анти-стрессорное и антиоксидантное действия благодаря содержанию биологически активных веществ.

Исследование фармакотерапевтической эффективности «Эритрофита» показало, что его профилактическое введение при экспериментальном ДВС-синдроме оказывает регулирующее влияние на механизмы тромбо-цитарного, коагуляционного, антикоагуляционного и фибринолитическо-го звеньев гемостаза, предупреждая нарушение сопряженности свертывающей и противосвертывающей систем.

Полученные в работе данные свидетельствуют, что «Эритрофит оказывает корригирующее влияние на механизмы свертывающей и противо-свертывающей систем гемостаза при цшслофосфановой интоксикации.

При введении животным индометацина «Эритрофит» ограничивает возникновение деструктивных изменений в слизистой оболочке желудка. На фоне повреждения слизистой оболочки желудка крыс индометацином курсовое введение «Эритрофита» приводит к более быстрому заживлению язвенных дефектов слизистой оболочки желудка и уменьшению их размеров.

Важная роль в развитии повреждений органов гепатобилиарной системы отводится расстройствам кровообращения, микроциркуляции, ишемии и гипоксии. В реальной обстановке имеет место сочетание нескольких факторов, обусловливающих развитие характерных синдромов при поражениях печени. Нарушение гемостаза является одним из частых последствий тяжелого поражения факторов свертывающей и фибриноли-■гаческой систем (Минов и соавт., 2010; Ртага, ВагЬш, 1994). При курсовом введении «Эритрофита» при токсическом гепатите снижается время паренхиматозного кровотечения, в заметной степени повышается количество тромбоцитов. «Эритрофит» вызывает укорочение АЧТВ и, тем самым, способствует сохранению тромбоцитарного гемостаза и стимуляции тромбоцитопоэза. Исследование влияния «Эритрофита» на коагуля-ционное звено гемостаза при токсическом гепатите показало, что испытуемое растительное средство способствует нормализации «внутреннего» механизма образования тромбопластина, укорачивает тромбиновое время, сокращает время паренхиматозного кровотечения.

Указанные свойства «Эритрофита» обусловлены присутствием биологически активных веществ, таких как фенольные соединения, полисахариды, кумарины, эфирные масла, сапонины. Не исключается, что присутствие кумаринов обусловливает антикоагулянтное действие. Кумари-новые антикоагулянты, как известно, нарушают образование тромбина и тромбопластина, снижая содержание в крови протромбина и факторов VII, VIII и X свертывания крови, ингибируют превращение фибриногена в фибрин (Виноградова, 1998; ОаПаш, Вгоге, 1991).

выводы

1. «Эршрофит» оказывает регулирующее влияние на основные звенья системы гемостаза: тромбоцшарное, коагуляционное и фибрино-литическое при экспериментальном ДВС-синдроме;

2. Данное средство оказывает выраженное экранирующее действие при циклофосфановой интоксикации, уменьшая выраженность гемато-токсического синдрома, и нормализует показатели свертывающей и про-тивосвертывающей систем;

3. «Эритрофит» обладает антиульцерогенной активностью при повреждении желудка индометацином, способствуя сохранности слизистой оболочки желудка;

4. Установлена выраженная фармакотерапевтическая эффективность растительного средства «Эршрофит» при нарушении системы свертывания крови при токсическом гепатите;

5. «Эритрофит» обладает противовоспалительным, антиоксидант-ным, мембраностабилизирующим и антистрессорным действием.

6. Важными механизмами гемостатического и антикоагуляционно-го действия «Эритрофита» являются восстановление коагуляционных и фибринолитических свойств крови при нарушениях в системе гемостаза.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Azhunova Т. A. The influence of a complex plant remedy on the indices of rat peripherial blood in experimental anemia / T.A Azhunova, P.B. Lubsandorzhieva, E.D. Garmaeva // Materials of the III international scientific conference 'Traditional medicine: a current situation and perspectives of development". - Ulan-Ude, 2008. -P. 90.

2. Lubsandorzhieva P.B. Development of an antianemic plant remedy / P.B. Lubsandorzhieva, E.D. Garmaeva, T.A. Azhunova, Zh. B. Dazhinamzhilov // The 4th International Symposium on Traditional Medicine and Innovative Drugs. -Erdos, 2009. -P.28.

3. Azhunova T.A. Hepatoprotective plant drugs / T.AAzhunova, S.V.Lemza, E.D.Garmaeva // The 4th International Symposium on Traditional Medicine and Innovative Drugs. - Erdos, 2009. - P. 47.

4. Гармаева Е.Д. Влияние фитосредства «Эритрофит» на стадию альтерации воспалительного процесса / Е.Д. Гармаева, Ж.Б. Дашинамжилов, Т. А. Ажу-нова, П.Б. Лубсандоржиева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2009. - №3 (67). -С.316-317.

5. Гармаева Е.Д. Влияние фитосредства «Эритрофит» на тромбоцитарный гемостаз / Е.Д. Гармаева, Т.А Ажунова, Ж.Б. Дашинамжилов, П.Б. Лубсандоржиева//Бюлл. ВСЩСОРАМН. -2010. - №2 (72).-С.171-173.

6. Алексеева Э.А. Фармакотерапевтическая эффективность комплексного растительного средства при экспериментальном повреждении печени циклофос-фаном /Э.А. Алексеева, Е.Д. Гармаева, С.В. Лемза, Т.А.Ажунова, АГ. Мондодо-ев, А.О. Занданов, П.Б. Лубсавдоржиева // Вестник Бурятского государственного университета. -2010. - Вып. 12. - С. 100-102.

7. Ажунова Т.А. Фармакотерапевтическая эффективность растительных экстрактов при экспериментальном повреждении печени /Т.А Ажунова, С.В. Лемза, А.О. Завданов, З.Г. Самбуева, С.М. Николаев, Е.Д. Гармаева// Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - №3. - С.193-197.

8. Гармаева Е.Д. Фармакотерапевтическая эффективность растительного средства при экспериментальном диссеминиро ванном внутрисосудистом свертывании крови /Гармаева Е.Д // Мат-лыШ Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Развитие традиционной медицины в России: опыт, научные исследования, перспективы». - Улан-Удэ, 2010. - С. 348-350.

9. Лубсандоржиева П.Б. О стандартизации растительного средства с антианемическим, гепатопротекгорными свойствами / П.Б. Лубсавдоржиева, Е.Д.Гармаева, Т.А. Ажунова, Ж.Б. Дашинамжилов// Мат-лыШ всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Развитие традиционной медицины в России:опыт, научные исследования, перспективы». — Улан-Удэ, 2010. - С.364-367.

10. Ажунова Т.А. Гепатопротекторные лекарственные средства растительного происхождения /Т.А.Ажунова, Е.Д.Гармаева // Мат-лыШ Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Развитие традиционной медицины в Россиигопыт, научные исследования, перспективы». - Улан-Удэ, 2010. - С.408-409.

11. Дашинамжилов Ж.Б. Противовоспалительное действие сбора «Эритро-фит» /Ж.Б. Дашинамжилов, П.Б. Лубсандоржиева, Е.Д. Гармаева, Т.А Ажунова //Сибирский медицинский журнал. - 2010. - №2. - С. 118 - 120.

12. Лубсандоржиева П.Б. Количественное определение флавоноидов в растительном средстве «Эритрофит» /П.Б. Лубсандоржиева, Ж.Б. Дашинамжилов, Е.Д. Гармаева, Т.А Ажунова// Сибирский медицинский журнал. - 2011. - №1. — С.156-158.

13. Garmaeva E.D. Antioxidant activity of herbal remedy "Erythrophyte" in vitro /E.D. Garmaeva, P.B. Lubsandorzhieva, T.A. Azhunova // Proceedings of the VI international scientific conference "Traditional medicine: ways of integration with modern health care". - Ulan-Ude,2013. -P.75.

14. Пат. № 2495674, Российская Федерация МПК А61К 36/794.Способ получения средства, обладающего противоязвенной, aiггистрессорной и гемостати-ческой активностями / П.Б.Лубсандоржиева, Т.ААжунова, Ж.Б.Дашинамжилов, Е.Д. Гармаева, С.М.Николаев; Заявитель и патентообладатель ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» Сибирского отделения Российской академии наук. № 2012130655/15; заявл. 17.07.2012, опубл. 20.10.2013, Бюл. № 29. -12 с.

Подписано в печать 10.04.2014 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,5 печ. л. Тираж 100. Заказ № 15.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670047 г. Улан-Удэ ул. Сахьяновой, 6.