Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние эмоксипина на некоторые параметры системы мегакариоцит-тромбоцит при длительном холодовом воздействии

на правах рукописи

БРАШ Алексей Александрович

ВЛИЯНИЕ ЭМОКСИПИНА НА НЕКОТОРЫЕ ПАРАМЕТРЫ ГИНГГМЬ! МГГАКАРИОЦИ'Г-ТРОМБОЦИТ ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ ХОЛОДОВОМ ВОЗДЕЙСТВИИ (В ЭКСПЕРИМЕНТЕ)

14 00 25 - Фармакология, клиническая фармакология

АВ ГОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Владивосток 2004

Работа выполнена в ГОУ ВПО Амурская государственная

медицинская академия

Научный руководитель заслуженный деятель науки РФ,

академик ПАНИ, доктор медицинских наук, профессор Доровских Владимир Анатольевич

Официальные оппоненты Доктор медицинских наук, профессор

Кириллов Олег Иванович

Доктор медицинских наук, профессор Маркелова Елена Владимировна

Ведущая организация ГОУ ВПО Алтайский

государственный медицинский университет

Защита "_"_в_часов на заседании

Диссертационного совета К 208 007 02 при Владивостокском государственном медицинском университете (690950, г Владивосток, пр-т Острякова, 2)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан "_"_2004г

Ученый секретарь Диссертационного совета, .

кандидат медицинских наук и И Шмыкова

№Q6~l

7Ш?

г 20/15Г2.

з

Актуальность проблемы.

Значительная часть населения России проживает в климатогсографических условиях которые Женевской конференцией 1964 г рекомендовано называть «высокими широтами» В 1980 г В П Кашачеев отмечал, что для человека высокоширотные территории яв тяются су бэкстремальный Хроническому поражению холодом лиц проживающих в этих условиях способствует сочетание ни;кой температуры среды с другими климатическими факторами Процесс хотодовой адаптации свя',ан с глубокой перестройкой практически всех функциональных систем органи',ма (Грибанов А В Данилова Р И. 1994) Так длительное хотодовое во?дсйствие сопровождается и;мснсниями жирового \псводного и белкового обменов прииотнт 7ч нармпению мстабочизма и регенерации тканей (Ю В Владимиров И А Арчаков 19/2) И 5меняегся течение гипертонической оолезни (Машин А А Касаткина И Ь 19X9) снижается иммунитет (Новицкий И А., 1991. Грибанов А В , Данилова Р И 1994) Холодовое воздействие вызывает изменения в коагуляционном и тромбоцитарном гемостазе - уменьшается количество тромбоцитов в периферической крови (Доровских В А . 1987 г) При длительном воздействии холода повышается адгезивная и агрегационная активность тромбоцитов и активируется коагуляционное звено гемостаза.

Применение препаратов, обладающих антиоксидантными свойствами, позволяет предупреждать изменения тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза в период адаптации к длительному холодовому во'.действию Однако вопрос о влиянии эмоксипина на систему мегакариоцит-тромбоцит при длительном холодовом воздействии не изучался.

В доступной нам литературе данных по данному вопросу нам обнаружить не удалось. С целью выяснения этого вопроса мы провели данное экспериментальное исследование. Цель исследования:

Целью настоящего экспериментального исследования является: изучить влияние препарата эмоксипин на систему мегакариоцит-тромбоцит при длительном холодовом воздействии в сравнении с влиянием ацетилсалициловой кислоты и альфа-токоферола ацетата. Задачи исследования:

1. Изучить влияние длительного холодового воздействия на систему мегакариоцит-тромбоцит у лабораторных животных (крыс)

2. Изучить влияние аспирина на фоне длительного воздействия холода на систему мегакариоцит-тромбоцит у лабораторных животных (крыс)

3 Изучить влияние а-токоферола ацетата на фоне длительного воздействия холода на систему мегакариоцит-тромбоцит у лабораторных животных (крыс)

4 Изучить влияние эмоксипина на фоне длительного воздействия холода на систему мегакариоцит-тромбоцит у лабораторных животных (крыс)

5 Сравнить эффективность применения аспирина а-токофероча ацетата и эмоксипина на фоне длительного холодового воиействия с цель коррекции

ЭОС. Н >.'J i<(iH ШЬНАЯ БИ- ТЬКА

tOftfcPK

изменений в системе мегакариоцит- тромбоцит возникающие при длительном чолодовом во действии Новизна исследования.

Впервые выполнено комплексное исследование с использованием морфологических и функциональных методов системы мсгакариоцит-тромбоцит влияние аспирина.

I I оферо ■ | ; п.'нппм и] пар,шефы системы мчлакарношп-громбопит на фоне .пигеи.ио) о чолодоиого воиепивил Впервые сравнены шменсния ипчаемыч Иа'.щ парами р< I- при применении аспирина, токоферола ацетата и эмокешиша при длительном чолодовом воздействии Положении выносиммс на защтх

1 Дппси.ное чо.шдовос воздействие акгныф_\е] еиием} мегакариоци г-фочбоцпг \ табораториыч животныч (крыс)

2 Приме11е1шс элюкенпина на фоне длительного чоюдовот воздействия вызывает нормализацию пока кнелей системы мегакариоцит-тромбоцит

1 Эмоксипин является наиболее эффективным препаратом для предотвращения влияния холода на систем) мегакариоцш тромбоцит в сравнении с аспирином и альфа-токоферола ацетатом

Налчпо-црактчсская ценное п. работ.

Определены направленность и выраженность изменений в системе мегакариоцит -тромбоцит возникающие при длительном холодовом воздействии Произведена комтексная оценка эффективности влияния эмоксипина в сравнении с препаратами различных фармакологических групп (аспирин, токоферол) при длительном чолодовом воздействии Дана оценка влияния каждого из исслсдусмыч препаратов на систем> мсгакариоцит-тромбоцит при длительном возденет вии холода Апробация работы

Основные положения и материалы диссертации доложены на IV региональной научно-практической конференции "Молодежь XXI века шаг в будущее'" (Благовещенск. 2003), на Четвертой международной научно-практической конференции "Здоровье и образование в XXI веке"" (Москва, 2003), зарегистрирована заявка на изобретение. Структура и объем диссертации.

Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы Диссертация изложена на 139 листах машинописного текста, иллюстрирована 20 таблицами и 31 рисунком. Библиографический указатель включает 198 источников, из которых 67 - российских и 131 - зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Эксисрнмсшальнаи модель длительно! о чолодоного но ¡лепи кии

Модель длительного чолодового воисиствия со ¡давали ежедневно помещая животныч в климатокамер\ ' ГеШтоп ГДР создающую режим постоянного

охлаждения с постоянным притоком воздуха Экспериментальных

животных помещали в климатокамеру ежедневно на три часа утром в одно и то же время Животных интактной группы для контроля также помещали во включенную климатокамеру ежедневно на Ч часа при температуре +24°С

В качестве экспериментальных животных мы использовали самцов крыс массой от 200 до 250 г Всех животных мы распределили на 5 экспериментальных групп ]) Интактная (контроль!) группа - животные содержались в обычных условиях, не получали каких либо фармакологических веществ и не подвергались во '.действию холода. 2) Группа Холод (контроль2) - животные подвергались длитетьномл холодовому во'.лсйствию не получат каких либо фармакологических веществ 1) Гр\ппа Аспирин ("полопытная!) - животные полвергались во'лсйствию холода попчлли ацети 1салици.10в\ ю кисюл\ 4) Ipvnna J око(|]ерол (подопьиная/) -животные подвергались охлаждению получата альфа-токоферола ацетат. 5) Группа Эмоксипин (подопытная!) - животные подвергались длительному во {действию низкой температуры получали эмоксипин Для забора экспериментального материала крыс наркотизировали этаминалом натрия После забора материала животных подвергали эвтаназии путем введения летальной до!ы этаминала натрия Применяемые в эксперимеше фармакологические препарамл Мы применяли аспирин как общепризнанное средство. обладающее антпагрегационными свойствами, как стандарт сравнения Ацетилсалициловую кислоту вводили 5ондом в желудок из расчета 150 мг/кг так как в данной до;ировке у крыс, аспирин снижает агрегацию тромбоцитов в два раза, в течение двух суток (С Л Галян и др. 19%. А А Вакулин. 1998. КМ Лакин. ВП Балуда. 1981. ИА Дементьева 1998) Мы использовали масляный раствор альфа-токоферола ацетата (витамин Е) как традиционное средство, обладающее антиоксидантными свойствами из расчета 10 мг/кг. водили витамин Е - per os, так как в данной дозировке он проявляет свои антиоксидантные свойства. Мы применяли водорастворимый раствор эмоксипина, выпускаемый Таллиннским фармзаводом. Препарат вводили внутримышечно ежедневно в дозе 10 мг/кг (С. В Салкина, 1999). Все препараты вводили за 30 минут до охлаждения экспериментальных животных Морфологические исследования тромбоцитов в периферической крови Кровь для определения количества тромбоцитов брали у наркотизированных крыс из хвостовой вены Подсчет количества тромбоцитов крови проводили пробирочным способом в камере Бюркера с сеткой Горяева с использованием фазовоконтастного микроскопа при зеленом светофильтре (Feisly, Ludvin, 1949) Одновременно с подсчетом общего количества тромбоцитов в камере определяли абсолютное число пластинок больших размеров (мегатромбоциты диаметром более 2.5 мкм) с помощью окулярометрической сетки, в последующем мы вычисляли их процентное содержание относительно общего количества тромбоцитов Для морфологических исследований пластинок готовили ма ?ки крови В тромбоцитограмме определяли процентное содержание юных >,рслых старых дегенеративных и ваку оли 5ированных тромбоцитов (Кост 1975) После определения относительного содержания тромбоцитов различной степени зрелости

рассчитывали их абсолютное количество в крови в пересчете на 1 мкл объема крови животного

Исследование функциональной активности тромбоцитов

Функциональную активность тромбоцитов изучали в плазме крыс, богатой тромбоцитами Функциональную активность тромбоцитов \ подопытных крыс

." .".¡ли "рч огр т. с» mi il ipo ,iaipcr.ü'iiii ¡р^мп^нптои г, б^мюп in "Г,пт1т,гч< п г,} * - г _ с мсгмл. :г>> пч'ом 'ipciOMCipi \P2I10 Попрись) ч

IT' 1 С',!,' ,'ЧОГ ) / r .I'll <or^¡ ^ I pi)! ¡> '\|M|i| ! I оГ/CCf!^ ICIIIICM П0С1..П/1СЧ1 "¡

про» 5волл1с.1ем прибора В качестве инд\мора агрегации использовали АДФ в концентрации 2 мкг/мл прои ».водимый фирмой "Технология - Стандарт" Приююв leiiiic раствора АДФ и опред^ .прег.щии тромбоцитов прои;води.п! и соответствии с инстрхкциями изготовшетеи прибора и ди;пностического набора "АДФ"

При анализе агрегатограмм \ читывали степень скорость время афегации и степени дезагрегации Степень дезагрегации оценивали по уровню светопропускания плазмы через 5 мин) г после внесения инд\ ктора агрегации, измеряли в процентах Морфоло! пмсскпс исследования коепки о мозга

В костном мозге животных опрсдстяти абсолютное количество мнелокариоцитов. находящихся в канале всей бедренной кости (Maul/. 1957) Определив в камере Горяева содержание мнелокариоцитов в I ми, пол}ченной взвеси с известной степенью разбавления, вычисляли их абсолютное количество в костном мозге всей бедренной кости экспериментальных животных Данные представляли в пересчете на 100 грамм массы животного Для морфологических исследований из костного мо ira бедренной кости готовили ма;ки После определения относительного содержания меикариоцитов вычислят« их абсотюгное количество во всем костном мозге бедренной кости в пересчете на 100 граммов массы животного (крыс) В мегакариоцитограмме определяли количество мегакариоцитов 1-й, И-й и Ш-й степени зрелости (Odell, Jackson, 1968. 1970) После определения относительного содержания мегакариоцитов различной степени зрелости рассчитывали их абсолютное содержание в костном мозге всей бедренной кости в пересчете на 100 граммов массы животного.

Статистическая обработка полученных результатов

Все экспериментальные данные были подвергнуты статистической обработке. На первом этапе определяли тип распределения исследуемого признака Для принятия решения о типе распределения признака в группах полученных данных статистическая обработка результатов эксперимента проводилась с использованием W критерия Шапиро - Уилка (Shapiro-Wilk's W test) В связи с тем, что в нашем эксперименте опыты заканчивались гибелью животных, мы использовали критерии сравнения для независимых групп В дальнейшем использовали Т - критерий Стьюдента для независимых групп или U - критерий Мана - Уитни (Mann-Wlime\ U-tesl) в ?ависимости от типа определения Для описания распределения исслсд\емого признака для гр\пп с непараметрическим распредетснием изхчаемого

признака в выборке, мы использовали медиану, нижний и верхний квартили: для групп с параметрическим типом распределения медиану и стандартное отклонение

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние щу чаемых гфеиаранж на сисн'му мсгакарношммромбошм на 7 дсчп. JkCllCpilMCin л

Значения изучаемых нами параметров системы мегакариоцит-тромбоцит на 7 день эксперимента у всс\ экспериментальных гр\пп представлены в таблицы 1а и 16 В костном мо',гс подопытных животных (крыс) на 7 день охлаждения отмечались и;мснения характерные для напряжения мегакариоцитопоэм наиболее выраженные в группе холод Препараты в ра>, личном степени ком пенс ир\ ют ишенения происходящие в костном мо',ге Однако tici\ci оixicnип» in; тчное в шянме на мегакариоцитограмму применяемых в опытах препаратов Гокофсрол способствует наилучшему сохранению количества мегакариоцигов I степени фслости в то время, как аспирин наилучшим образом компенсирует вменения количества мегакариоцитов II и ТП степени зрелости эмоксипин в целом оказывает средний по выраженности эффект на мегакариоцитограмму крыс подвергшиеся холодовому воздействию в течение 7 дней, в сравнении с аспирином и токоферолом Длительное хололовос воздействие вызывает уменьшение общего количества тромбоцитов в крови и увеличении процентного и абсолютного количества юных тромбоцитов и мегатромбоцитов. и уменьшение количества фелых и старых тромбоцитов Применяемы препараты способствуют снижению выраженности этих изменений, препараты оказывают разнонаправленный эффект, так аспирин в наибольшей степени препятствует снижению общего количества тромбоцитов, снижению количества зрелых и старых тромбоцитов, а эмоксипин и токоферол способствуют нормализации количества и процентного содержания юных тромбоцитов и мегатромбоцитов, этот эффект наиболее выражен у эмоксипина. Обращает на себя внимание, что применение аспирина на фоне длительного холодового воздействия вызывает появление вакуолизированных тромбоцитов. Измерение агрегационной активности так же показало, что препараты имеют разно направленный характер и если аспирин наилучшим образом способствует нормализации степени агрегации, скорости агрегации и времени агрегации тромбоцитов, то эмоксипин и токоферол в большей степени влияют на степень агрегации тромбоцитов на 5 минуте, нормализуя дезагрегацию тромбоцитов

Влияние изучаемых препаратов на систему мегакариоцит-тромбоцит на 14 день эксперимента

Значения изучаемых нами параметров системы мегакариоцит-тромбоцит на 14 день эксперимента у всех экспериментальных групп представлены в таблицы 2а и 26 В костном мо5гс подопытных животных (крыс) на 7 день охлаждения отмечались изменения характерные для напряжения мегакариоцитопоэ sa наиболее выраженные в группе холод Препараты в различной степени и ра;нонаправлено компенсируют изменения. происходящие в костном \iosre Pas личное влияние на

Уровень изучаемых параметров в нанеримсн i 11ькы\ ip_\iirw\ h<i 7 чень im.i еримсн i

пока!, leuii иптактиая \оюд осппрми то O.jk ¡10 1 моксипин

М НК/ВК м ПК Вк М 11 К/В К М 1k ВК м 11К.ВК

\Гк шцсчо* h 101 OK 1 (Юг) 39 9 39 7/40 2 43 6** 42 9' 44 1 П 7 "О (1 i9 * 42 1 Г I 42 7 1 1 ** 41 9 42 5

О in МГЦ('о) 02 0 20'0 20 0 31** 0 29 0 -1 (| 22 0 18 п 11 0 37 II "6 0 38 ) 28 0 28 0 3

\Гч. МГЦ ( М(Г s.icroK'ЮОг) 0 0« 0 0784)0X1 0 131* * 0 124 0 р- (1 (РХ < 069/ 0 113 0 14) 0 52 0 160 , | 1 lL ** 0 1 18/ 0 126

От МГЦ 1 (%) 20 3 20 2'20 5 24 1** 23 9' 24 5 :i 2 ^ 19 9 10 » 20 2 ~2 0 21 9 22 1

Olli МГЦ II (%) 64 9 64 8'65 0 4** 31 6 V < 63 2 (>2 0 о4 X 41 2 ** -0 1 12 1 8 6 * 46 9' 50 1

Ol н МГЦШ (%> 148 14 5' 14 8 43 6** 42 6' 4- 9 14 6 12.* 16 8 39 2 » " о .,9 fc ji 5 * * 27 0 31 2

АГи. МГЦ1 Г И)" мсгокЛ ООг) 0016 0 016/0 017 ооз2* 0 1150' 0 0->4 0 018 0 016 0 023 ооч I) 1 0 032 1 02( «* U 026 0 028

Afw. МГЦ II ('10' ктеюк/lOOi) 0 052 0 050/0 052 0 043* * 0 041' 0 045 0 0*0 0 04*. 0 059 0 064 * | 0 ! 64 0 065 0 058 * 0 055' 0 065

\GL МГЦШ ("10" ктсток/ЮОг) 0012 0.011'0.0 И 0 057* ♦ 0 0*4-' 0 0*9 0 011 0 009/ 0019 0.061 *< 0 ( 0 064 0 03( ** 0 035' 0 036

Котатсство 1 рочбоцтов 101", литр 441 433/451 331 ** 328 345 4125 г80 0' 4 ДО 0 39S * >8 1/ 410 -Л51 к* 380 0' 400.0

Ко п'к'чвоМТр К)'" пир 48 47 1/48 5 59 9 57 4 ь: 1 47 5 40 0 62 0 52 0 М 4 ">5 0 16 0 45 0' 51 0

От Mlp 109 10 6/11 2 IT7 17 1 ls 0 11 0 " 1 U 8 |! 1 1 ' 0 13 6 р 1 1 1 X 12 9

11рммсч<жия

М - мешана, НК - нижний квартиль, ВК - верхний мтртть. и цивненпн с исходным урчим jm * \ рове ь i*<0 05 ** \роиень Р<0 005;

V ронепь изучаемых параметров в экспериментальных группах 11,1 7 леш. жспернмспга (продолжение 1ао 1а)

1 Р>1111с1 ингакгная холод аишрт! юкофероч 4МОКс1 111 п

пок.1 ытели М НЮ'ВК М нк/вк М 1ТСВК М Т1К.ВК М НК ВК

Юши. фомбоишы °п 10 9.7/10.1 19.5 ** 190 20 0 14 5 4 0 18 0 13 3 13 0 14 0 12 0 * 11 4 12 0

Зрс 11.1С 1р0\100ЦИ|Ы % 89.1 88.9/90.3 80 0 ** 80 0' 41 0 84 0 * * М 0 86 0 8ч 2 * ЧЧ (1 86 и 48 0 * 86 9 88 2

С 1.р 11С тромиоци-™ % 0 X 0.6/1 1 0.0 0 о< 00 0 ч 11 1 5 0 Ь 0 4 0 6 0 1 * 0 « 0 1

До! спсрчптпыс 1ромооцитм "о 0 -/- 00 О.О'О 0 (I (I о о о 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0.0 0 0

пли шропапные. грпмооттл "о 0 00 0.0/0 0 0 1 0 0/(1 2 0 0 о о о о 0 (1 0 0 0 0

Юные |ромС)ои1иы 10|1''.Ш1р 44.1 43 7 44 6 65.9 62 9' 67 4 61 7 8 6 "У 2 54 3 41 3 .46 0 45 ч 4' 2 46 7

1ре 1ЫС |римооцигы Ю' лшр 393 8 393.4 402 3 266 9 ** 264 8< 276 0 3." 4 13 5 354 1 338 7 * * 31') 2 342 6 338 * * 3 50 2 356 8

Си фЫ1. цхптошпиЮ 1 пир 3.5 2 6/4 6 00 »** Г) 0 _ 0 6 6 2 3 1 4 2 1 О 4 0 0 0 1

Дочпсрштиыс ф1 МООЦН II 1 10 " пир 0 -/- 00 0 0 0 0 0 II II1) 0 4 о о ) 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Н 1к\ч 1и шроилипые фО\ГО01Ш1Ы 10 0 пир 0 -/- 0.0 0 0 0 0 о: II 0 0 8 С 0 К) 0 0 0 0 0 0 00

С 1 ( Гг^нк и аиии I %} 66.1 65 8/66 5 81 3 ** 79 7/ Кб 4 71 7 О 9 1 77 6 "6 X -¡1 1 78 4 ** У 4' 78 9

.н реищш (мин сек) 3 00 2 52'3.08 2-33* 2 24 : 3(, 2 42 V 2 ч9 •1 ;•-> : 4о 2 Я** 1 зо 241

С м>ри^ 1 к а! рог,1 ции <" | мин) 64 15 63 2/64.7 71 5 ** 69 9' "2 0 64 1 1-4 1 64 й 67 « ч 68 1 (>8 ' 68 3 69 4

\1 рс. 1,11111)1 на 5 минуте 57 45 54 9/59 9 67 15 ** 63 2/ 68 4 4<! 3 -3 0 1"" 8 44 5 44 0 44 0 37 2 36 41 37 8

Примечания

М медиана, НК - нижний квартиль, ВК - верхний квартиль; в сранпешш с исходным чроипем уровень 1М).иг> ** >ропеш, Р<0 005;

мегакариоцитограмму применяемых в опытах препаратов заключается в следующем, так токоферол и эмоксипин действуют сходным образом однако выраженность влияния эмоксипина более значима в сравнении с токоферолом Влияние аспирина в целом выражается в предотвращении увеличения количества мегакариоцитов но за счет

форм Эмоксипин п|;сим\ш.сс7ьишо i_u\]\nuei абсолютное ко iii'^lii j i.

nnmroi; 1 ' 1 "4f IÏC p nr<l 11 fcç 'P^ "" ' (^r ^ 11 ipf,r ffffTr>f 1 !' И CTJ" ^ [fff

костном moîте - эмоксипин тк vit E оказывает схотные эффекты а аспирин вьнывас! pcîKHi'i дисбаланс в мегакариоцитограмме в строну незрелых' форм Дипельпое хо.шдовое во5делслвие на 14 день вынлвле! чмсньшенис общею количества ¡ромбоцитов в крови и увеличении прицеп i hoi о и абсолютного количества юных 1ромбоцитов и mciафомбоцитов и уменьшение количества фелых и старых тромбоцитов Применяемые препараты способствуют снижению выраженности этих тменений. препараты оказывают ра'.нонаправленный эффект так эмоксипин в наибольшей степени препятствует снижению общего количества тромбоцитов увеличению количества мегатромбоцитов увеличению их ироистпного содержания, в наибольшей степени предупреждает увеличение юных тромбоцитов аспирин, напротив, усиливает влияние холода снижая общее количество тромбоцитов, снижая количество мегатромбоцитов юных и зрелых тромбоцитов ниже уровня интактпой группы Применение аспирина на фоне длительной Холодовой натру;ки вьпываст увеличение количества старых тромбоцитов количество которых превышает уровень интактной группы Кроме того применение аспирина выбывает появление вакуолизированных и дегенеративных форм тромбоцитов

Агрегационная активность тромбоцитов на 14 день охлаждения увеличена во всех экспериментальных группах, наименее выражена в группе аспирин, однако в наибольшей степени на дезагрегационную активность тромбоцитов влияет эмоксипин, снижая больше всех изучаемых нами препаратов степень агрегации на 5 минуте.

В целом на 14 день охлаждения влияние изучаемых нами препаратов складывалось следующим образом' эмоксипин и токоферол оказывали однонаправленные эффекты, направленные на компенсацию холодового воздействия, причем эмоксипин проявлял большую эффективность чем токоферол Применение аспирина на фоне длительного холодового воздействия привело к усилению действия низкой температуры, выражающееся в резком смещением мегакариоцитограммы влево, более выраженном снижении количества тромбоцитов, появлением в периферической крови дегенеративных и вакуолизированных форм тромбоцитов Возможно, именно функциональная не состоятельность тромбоцитов образующихся при применении аспирина обуславливает его эффективные агрегационные свойства

г> « *

1 аблица 2а

Уровень изучаемых параметров к жсиеримеша 1ып>]\ |р\ппах па 14 лень ^о.ерпх.еи I

МОК 1 Ы К 1И тппкшая \0 10 1 лет рпп 101 .1100 1 | мокемпин

М нк/вк VI II 1С г, К XI Нк'ВК \1 1 К ПК I \1 НК/ВК

А т. М1Щ*10" клеток. 1001) 39 9 39 7'40 2 56 7** 57 2 49 5 *> 48 9 49 9 50** *1) | -5 4 510 | 4* 6 45 9

Огн МГЦ(%) 02 0.20'0 20 0.53** 0 51 0 *6 0 4 ** 0 г 0 5 0 44 *. 04ч ' г 41 0 50 ' 0 40 0 42

А 6с. М1 Ц С10" к 1еток.'1П0г) 0 08 0 078,0 081 0 29(1* * 0 288' 0 318 0 210 0 18* 0 240 0 246 к* О 2 12 1 0 18ч 0 252 | 0 18 V 0 193

Оти М1Ц1 ("„) 20 3 20.2/20.5 29 4** 29 0 30 0 62.0 6(1 0 64 0 26 8 ** 2(ч) I 22 8 27 0 | ** | / 24 0

0111 М1 Ц II (°о) 64 9 64 8/65.0 34 2** Ч 0 35 0 34 0 ** 30 0 35 0 40 0 39 0 52 Г 41 о; * *0 0 53 0

Отн М1 Ц III 14 X 14 5/14 8 36 4** ;5 ~ 37 7 4 5 ** 2 0 10 0 зз ;> ** 32 0 ' 2" 7" Я4 0 > " 23.0» 26 0

Хос МГ Ц 1 сю' ктсюк. 100г) 0.016 0 016'0.017 0 086* 0 08*/ 0 094 0 132 ** 0 111 0 14~ 0 066 * * 0 0(.ч | о 04м 0 068 I -* 0 043' 0.044

А(к МГЦ II СИ)" к кюк-1 ООг) 0.052 0 050-0.052 0 102* * 0 09* 0 108 0 069 0 060 0 072 0 100 * К О')* | 0 09ч 0 03 I * 0 091 0 104

\йс М1 Ц III (*|(Г К 101 о к 1 (Юг) 0012 0 011/0 013 0 110* + 0 107 0 113 II 010 0 004 0 (118 0 1 ** (1 ОчО | 0 148 0 086 | ■** 0 044' 0 051

Ко III чей во фОМООЦМПШ 10и/лнгр 441 433 '451 284 0 *+ 282 II 286 0 2*1 5 ** 2-1 0' 2*4 0 * * 280 1 62 >00 ' ?59 365

Кшшчеыно МТр 10|и шип 48 47 1/48 5 *9ъ 61 0 2.4 0 2^ 0 34 0 51 2 *0 0 , -2 1 55.0 , * 52 0 54 0

01 н М 1 р ' 10 9 10 6/11.2 21 1 * * 20 6 21 3 1 1 3 Ц1 0 1 > 0 17 ч ** Г ' * 18 1 ' 41 14 3 1*0

1 ¡риме'ынми

М - меди. 1на, НК - нижнин квартиль. ВК - верхним киар I иль; в ер тмешш с исходным уров.юм > рове! I. 1 0.15, ** уровень Р<~0 005:

Уровень изучаемых параметров в экспериментальных гр>nn.ix на 14 день жспернмента (предо шеиие таб 2а)

I рмпы ингакшая холод Hv нирш. юкоферо 1 »MOKU1UM

пока '.alcill М НК/ВК М нювк Ы ПК' ВК М 11К НК XI 1 К ВК

Юные ф0чС0ЦП1Ы°п 10 9 7,101 195 ** 19 0 20 0 12< 10 о 12 0 0 16 0 Р0 13 0 1 • 0 13 0

3[Xjlble |р0\К>0ЦИ1Ы % 89.3 88 9/90.3 80 0 ** 80 0' 81 0 -ТЧ <; ** -•> (I -9 0 83 0 82 4 84 0 0 ** 8(.9 8^ 0

(. Г ipi.lL* ТрОМООЦМТЫ "о 08 0 6'1 1 00 *** 1) IV 0 0 11 и И) 1), 120 0 0 0 0, 0 0 0 0 1' 0, 0 0

Лс ciKpaiimin-rc тромооинты % 0 -/- 0 0 0 0,0 0 О 1 0 0 0 1 о о 0 0 0 0 0 0 0 0/0 0

В ik>o ипироканиые тромбоциты "о 0 00 0 0/0 0 0 1 0 0 0 5 0 0 п 0 0 1) 0 11 0 0 0 0

ff И] ыс тромбоциты 10 шф 44 1 43 7/44 6 65.9 ** 62 9, 67 4 Ч> (1 * * 24 4 30 5 49 7 44 0 50 4 4-1 1 -ч 7 4*' 5

ipi. lbiL iрпмГшшпы 11)' пир 393 8 393 4/402.3 266 9 264 8 276 1) 194 '1 140 4 14S 1 241 Ч 23^2 252 0 314 X 31" 6

С 1 api.R ipoMouiui ш [0lOi'imp 3 5 2 6/4.6 00 ** 0 0' 0 0 ** 23 1 30 5 о 0 * 0 0 0 0 0 0 ** 0 0 00

Дсгакраптшае фочбоШПЫ Ю10 tiwip 0 0 0 (1 О'О 0 0 2" 0 0 0 3 (1 0 о О'О 0 0 0 0 0,00

В IkVO Ml ilipon 1НПЫС ipnMonnnii.1 MJjih ip 0 -/- 00 0 0 00 0 2 0 0 12 0 0 п 0 0 0 0 0 0 О'О 0

С iсменi ,прегации(%) 66 1 65 8/66 5 84.7 ** 84 2! 85 1 72 4 ** ^2 4 ""3 2 "7 4 ** 77 0 " 8 76 1 7 76 5

Время агрегации (мин сек) з-оо 2:52/3:08 2 20* 2 14 2 26 1 3 N 1 -1 - 2 43 3 27 2 чх 3 40 7 "Ч * : 16 2 30

(. короегь агрегации ("и мин) 64 15 63.2/64.7 81.3 ** 80 3' 82 3 67 ** 66 4 68 0 "3 0 <•* 72 0 73 9 73 7 ** - •> 1 74 5

Aipci ацня на 4 минуте ('»> 57 45 54 9/59 9 70.9 ** 67 5' 73 7 (>2 " 59 о (.5 9 61 1 6 64 4 48 2 ** 4 1 1 50 9

Примечания

М медиана, НК - нижний квартиль, ВК -верхний квартиль, в сравнит и l исходным уровнем * уровень Р<0.05. ** уроисш. Р-'О 005.

Влияние изучаемых препаратов на систему мегакариоцитмромбоци! на 21 день эксперимента Значения изучаемых нами параметров системы мегакариоцит-тромбоцит на 21 день эксперимента у всех экспериментальных групп представлены в таблицы За и 36

В костном мозге подопытных животных (крыс) на 7 день охлаждения отмечались

iiímcij^i »* - i хара: 1ор:.ые ди напр'м^шы четакириоцитопо^ ;л наиболее ьырл/кенные в группо холол Препараты в различной степени и разнонапрлвлеио компенсируют "^í.l1' ррг" \r л 1 • го ч i г ц. г1" i ч Р ü „,с л а^Л'Ч! ск i , 11i. ч,^ > ,чечс1 ,.я i группе холод и влияние препаратов на фоне длиельного чолодовою воиеиствия на 21 день сходны с типовыми на 14 день ох'лалгдення однако влияние хо юда менее

ЬМрЛ/!,с:Н) а КО\! ■ ICÜCUJJN iOU!Ll ! HUI ПС ПрСПЛрЛШП JMOKCHI1HH II lOkOljlLpüJ UO.ICC

г.ырал сно В то/ice время влияние аспирина по своей направленное!и не пленилось, и. но сути, усиливает да^твис нижих /емператур ил систему чегакарноцпт-тромбоцит Применяемы нами препараты, токоферол и эмоксипин действуют сходным образом однако влияние эмоксипина более выражено в сравнении с vil Е Влияние аспирина в целом выражается в предотвращении увеличения количества мегакариоцитов но ;а счет незрелых форм Эмоксипин преимущественно сохраняет абсолютное количество и процентное соотношение в no.ibiy более ;рслы\ форм (мсюкариоциты I и 11 степени зрелое i и) На 21 день охлаждения наиболее эффективно предупреждает изменения в костном Mosre - эмоксипин тк м( Е окашваст сходные эффекты а легшрин вьнываст режни дисбаланс в метакариоцитограмме в сторону нсфелых форм Длительное холодовое воздействие, на 21 день, вьиывает уменьшение общего количества тромбоцитов в крови и увеличении процентного и абсолютного количества юных тромбоцитов и мсгафомбоцитов и уменьшение количества фелых и старых тромбоцитов Применяемые препараты способствуют снижению выраженности этих вменений препараты оказывают разнонаправленный эффект, так эмоксипин в наибольшей степени препятствует снижению общего количества тромбоцитов, увеличению количества мегатромбоцитов, увеличению их процентного содержания: в наибольшей степени предупреждает увеличение юных тромбоцитов, аспирин, напротив, усиливает влияние холода, снижая общее количество тромбоцитов, снижая количество мегатромбоцитов. юных и зрелых тромбоцитов ниже уровня интактной группы Применение аспирина на фоне длительной Холодовой нагрузки вызывает увеличение количества старых тромбоцитов количество которых превышает уровень интактной группы Кроме того, применение аспирина вызывает появление вакуолизированных и дегенеративных форм тромбоцитов. Агрегационная активность тромбоцитов на 21 день охлаждения увеличена во всех экспериментальных группах, наименее выражена в группе аспирин, однако в наибольшей степени на дезагрегационную активность тромбоцитов влияет эмоксипин снижая больше всех изучаемых нами препаратов степень агрегации на 5 минуте В цстом можно сказать что ишенения в группе холод и влияние препаратов на фоне длительного холодового воиействия на 21 день сходны с

Уровень изучаемых параметров в экеперимешальных 1 р\мнач на 21 день жспсрпмсны

мимч.ис'ш ингакчная хочол .11. пирии 1 окоф^ро 1 Л О! ишин

М НК'ВК М ПК ВК М ПК ПК М ПК ПК М 11К.ВК

\гк м шею" к мок 100[) 39.9 39 7/40.2 44.8** 44 6/ 44 9 44 " * * 44 6 44 8 42 Ч 42 Ь 4? 0 40 1 40 0 42 1

От МГЦ (%) 0.2 0 20/0.20 0 488* ♦ 0 46/ 0 48 0 4 ** 0 4 0 4 0 41 ** (1 40 0 42 0 »0 0 16 0 4

Аос М1 Ц 0 08 0 078/0.081 0.211* 0 207, 0 165 0 161 0 177 0 ГО 0 158 О 144'

(«Ю' к 1сюк/100|) * 0214 ** 0 166 ** 0 180 0 164

Отн МГЦ 1 (%) 20 3 20.2/20.5 70.5** 70 0/ 72 0 65 0 ** 65 0 68 0 26 5 *ж 20 0 29 0 40 5 39 0 43 0

Ош МГЦ И (%) 64.9 64 8/65.0 20 5** 20 0/ 21 0 26 5 26 0 ' 28 0 61 7 ** 01 0- 6» 0 49 5* -9 0 52 0

Ош М1 Ц III (%) 14.8 14 5/14.8 9.0** 7 О1' 100 8 0 7 0 ь 9 0 10 8 ** 10 0 12 0 10 0 Ч 0' 10 0

\(Х МГЦ I (Ч(Гк 1СЮК ЮОг) 0.016 0 016'0.017 0.150* ♦ 0 143' 0 153 I) 10') *>!< 0 102 0 113 0 047 ** 0 046 0 050 0 062 0 062' 0 067

\йс М1 ЦИ 0.052 0 050'0.052 0.043* 0.041/ (1 045 0 041 0 110 О 109/ 0 076 0 071.

(*1(|'' к мок/1000 * 0 044 ** 0 046 ** 0 110 0 0У0

\бс М1ЦШ ею" к 1С 1 ОК. 1 ООО 0.012 ООН'0.013 0.019* * 0 015' 0 021 0 оп ** 0.011 0 015 0 019 *# (1 018 0 020 0 015 0 014/ 0 016

Ко П1ЧСС1ВО 441 433/451 297 2841 356 5 ЗМ1 0 405 ччо 422 413

1 ромооии Н1И 1 0 ЛИ ф ** 300 ** *б0 0 ** 410 * 425

Ко шчссгип МТр ] 0 ' ш гр 48 47 1/48.5 50 0 * 44 0 51 0 о 20 0 2 1 0 Ч 2 * 50 0 52 0 14 5 Ч* 19 0 40 0

От М1р% 109 10 6/11.2 17 1 16 71 17 5 6 4 ** 5 (1 ь 9 12 8 ** 12 0 1 * 1 9 5 ** •V 9 Ч 9

Примечания

М медиана, 11К - нижний квартиль, ВК - верхний квартиль, в сравнении с исходным уровнем * уровень Р<0 05. ** уровень 1М).005,

Тоб шна 36

Уровень изучаемых параметров в зксперимеитальпых группах на 21 лень жсиеримешл (продол,i еп te uiö За")

ф\Г|П1 интакгн,щ \олод ,!1ПИ|ШН TOKOl 11 >> Kl. IilH

IIOK.l мгечн М НК/ВК м НК вк м Hk'/BK X1 llk 13k V 11К BK

Юные фомбоциты °/« 10 9 7/10 1 2d 5 ** 2 3 0> 25 0 8 5 7 0, то 12 12 ( 134 1 i 0 9 У 100

Зрение тромбоциты % 89 3 88 9Л>0 3 75 * ** 7* 0 77 0 7(> 3 ** 74 0/ 0 8T 1 84 86 2 - 1 0 "'s o' 80 0

С 1 ipus. фомбициш °и 0 8 0 6/1 1 0 0 ** 0 (V 0 0 15 3 ** 14 0 17 0 2(i (1 ~ 2 7 1 ' 0 10 8, 12 0

Дс! еисраитш.-е фОмГюЦИ 1 1.1 0 -1 0 0 0 0 О'О 0 0 2" 0 10 2 0(1 о о о о (Ml 0 О'О 0

Впкч о in .нроаднные фоибоШПЫ % 0 -- 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 2 0 0 0 (1 0 0 (1 0 0 O'O 0

Юш.к фочбоцигы К)" шт.' 44 1 43.7-'44 6 72 2 ** 64 8\ 75 0 29 S ** 24 5, i-i 9 T2 I 44 2' 42 3 Г 2 40 0 42 4

Зретс фомбофтты 1П 1111р 393 8 393 4/402 3 22' 3 ** 21" 6' 230 2 270 (. + * 25(i S 2ч 6 346 2 IV 344 4 3 ' i (1 329 9 336 0

С bipi 1С ipoMÖoUHlbllO1'1 1игр 3 5 2 6/4 Ь (1 0 0 0 0 0 5* 4 ** 50 8/ 49 0 ' N 2 ) 11 1 4 6 44 0' 50 8

, [li t-нер и гвнме фочооцты 10"1 Жф 0 -/- 0 0 0 0,0 0 (1 " 0 4 0 - U (1 о о о о с 0 0 0 0 0

BiKV Ш lipiHMllUUC фОМ'ЧМШГЫ К)"' титр 0 -• 0 0 о О'О о 0 2 0 (1 (1 - 0 ( о и о il 0 0 0 0 0 0

С luiult. и pudUHU (J<|) 66 1 65 8 66 5 8 7 "" 0 77 s 64 5 6S, 1 (,Ч "4 14 5 -1 1 1 71 8

Время Ii рсг.щнн (мни сек) 3 00 2 "52/3 08 2 20* 2 24 2 3 ) 2 5S 2 51/ т (19 T > i 1 ¡ 2 4> I 42 2 36 2 52

Cko|4ilii iqjerauHH ("о мин) 64 15 63 2/64 7 81 3 Л* б"0 68 7 h9 2 68 'О 0 61 A4 4 66 1 с .0 6- 1 66 7

Афсглщ я на * минуте С»> 57 45 54 9/59.9 70 9 * + 64 0 70 61 2 58 5/ 64 " 61 - 40 i ' 65 6 60 (1 47 * 63 5

Примечания

М - медиана, НК - нижний квартиль. ÖK - верхний квартиль; в сравнении с походным уровнем - уроьень I' -С US. ** VpORCIIb I1 0 005.

таковыми на 14 день охлаждения однако влияние холода менее выражено а компенсирующее влияние препаратов эмоксипин и токоферол более выражено В тоже время влияние аспирина по своей направленности не изменилось и по сути усиливает действие низких температур на систему мсгакариоцит- тромбоцит

Во¡чп-.п'п именно функциональная гс состоятельность тромбоцитов образующихся при применении аспирина обуславливает сю эффективные .нриационные свойства

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом материалы данной работы свидетельствуют что длительно воиействис низкой температуры приводит к активации системы мсгакариоцит тромбоцит Приволяшее к напряжению тромбоиитопоэза и \всличеншо агреганионной активноин !ромоопи!ов Применение (фармакологических препаракж по;воляе! снижать выраженное! ь процессов протекающих в системе мегакариоцит-тромбоцит Среди изученных нами препаратов аспирин, токоферол, эмоксипин наибольше перспективным для применения в клинической практике (после проведения клинических испытаний) является эмоксипин

ВЫВОДЫ

1) Длительное холодовос воиействис вызывает активацию системы мегакариоцит-тромбоцит. выражающееся в увеличении количества мислокариоцитов в костном мозге, увеличением процентного и абсолютного количества мегакариоцитов. сдвигом мегакариоцитарной формулы влево уменьшением общего количества тромбоцитов, увеличением количества юных тромбоцитов и увеличением количества мегатромбоцитов. увеличением степени агрегации и скорости агрегации тромбоцитов и уменьшением времени агрегации и дезагрегации тромбоцитов.

2) Применение аспирина на фоне длительного холодового воздействия усиливает воздействие низкой температуры, приводя к более раннему и боле, выраженному сдвигу мегакариоцитограммы влево, появлением в периферической крови дегенеративных и вакуолизированных тромбоцитов.

3) Применение а-токоферола ацетата позволяет в незначительной степени корригировать изменения в системе мегакариоцит-тромбоцит возникающие при длительном холодовом воздействии, в результате происходит увеличение количества тромбоцитов в периферической крови, снижается выраженность изменений в мегакариоцитограмме, уменьшается агрегационная активность тромбоцитов

4) Применение эмоксипина позволяет корригировать изменения в системе мегакариоцит-тромбоцит выражающиеся в снижении процентного и абсолютного содержания мегакариоцитов в сравнении с группой холод нормализацией абсолютного количества мегакариоцитов различной степени зрелости увеличении общего количества тромбоцитов уменьшении количества юных тромбоцитов и

мегатромбоцитов, увеличении количества зрелых тромбоцитов,

снижение агрегационной активности тромбоцитов в сравнении с группой холод 5) Из изученных нами препаратов наиболее перспективным является применение эмоксипина. т к а-токоферола ацетат вызывает сходные эффекты но в гора ¡до менее выраженной форме, а применение аспирина вышвает дн-фуш циональныс нарушения в системе мсыкариоцнг-тромбоцнт

ПР А KT ИЧЕ С КИ Е РЕКОМЕНДАЦИИ

1) Провести клинические исследования, позволяющие детально описать тменсння в системе мегакариоцит тромбоцит у людей при длительном во {действий холода и приеме ацемпелициловои кислоты

2} В практическом {дравоохра нении cie,i\ci с о^торо/кноетыо иа'.нлчль аспирин и препараты, содержащие ацсипсалищповмо кислоту пациентам подвергающимся холодовому во ¡действию

1) Представ.щсются перспективными исследования эмоксипина как

корректора и{мснений системы мегакариоцит-громбоциг во{никающи.\ у человека при длительном холодовом во {действии

4) Перспективными является изучение возможности применение в ктиническои практике эмоксипина при длительном во ¡действии холода и пару шениях в системе мегакариоцит тромбоцит

ОСНОВНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Браш А А Влияние токоферола на количество тромбоцитов при тромбоцитопоэзстиму лирующем состоянии у крыс, в начальный период чолодовой адаптации //Тезисы докладов 2-межвузовской научно-практической конференции "Молодежь XXI века шаг в будущее" -Благовещенск, 2001, с. 36-37

2 Браш A.A., Доровских В.А «Влияние эмоксипина на агрегационную активность тромбоцитов in vitro» Всероссийский съезд фармакологов -Москва, 2003, - с. 230

3. Браш А.А. Доровских В.А «Влияние кислоты ацетилсалициловой на тромбоцитарный гемостаз в период адаптации к длительному холодовому воздействию» Материалы четвертой региональная конференция молодежь XXI шаг в будущее, Благовещенск, 2003 г, С 225-226

4. Браш A.A., Доровских В.А. «Влияние альфа-токоферола ацетата на тромбоцитарный гемостаз в период адаптации к длительному холодовому воздействию» Материалы четвертой региональная конференция молодежь XXI шаг в будущее, Благовещенск, 2003г. С 243-244

5 Браш А А «Влияние препаратов различных фармакологических групп на пока ¡алели системы мегакариоцит-тромбоцит при длительном холодовом воиействии в эксперименте» Научные тр\ды 4-й Международная научно практическая конференция «Здоровье и обраювание в XXI веке» Москва. 2003 год. с 103

6 Браш А А., В А Доровских, В А. Максименко, В И Тиханов. А П Матыцин Изменение количества мегакариоиитов в костном мозге крыс под влиянием холода Тезисы докладов X Российско-Японского медицинского симпозиума Якутек. 200"! с 97-98

7 Браш А А. В А Доровских. В И Тиханов А П Матыцин. В А Максименко Изменение количества мегакариоцитов в костном мозге крыс при приеме аспирина и действии холода Тезисы докладов X Российско-Японского медицинского симпозиума Якутск 20(Я с 98-99

8 Брат А А В А Доровских А П Матыцин В А Максименко В И Тиханов Изменение количества миелоцитов и мегакариоцитов в костном мозге крыс при приеме эмоксипиня и действии холода Тезисы докладов X Российско-Японского медицинского симпозт ма Як\тск. ¿00 > с 99

Лицеи'ИЯ ПДЛ №14-28 oi 25 10 20011 Чак 4>пр Форчат60\841 16 Vl i П т 1 00 Тираж 100 ж По (писано и иечап 04 10 2004г Печать офсетная с оригинпа ака чика Отечаино г. ihhoiрафии « 1ея» 67500 г Ьъповещенск \.i Ленина 167

РНБ Русский фонд

2006-4 20394