Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Влияние антиретровирусной терапии на динамику CD4-лимфоцитов и экспрессию Т-клетками иммунологических маркеров у пациентов, инфицированных ВИЧ
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.10
Оглавление диссертации Ситдыкова, Юлия Равильевна :: 2006 :: Москва
Список сокращений.
Введение.
Актуальность проблемы.
Цель и задачи работы.
Научная новизна исследования.
Практическое значение работы.
Апробация диссертации.
Структура и объем диссертации.
Обзор литературы.
1.1 Методы определения количества CD4 лимфоцитов.
1.2 Патогенез иммунологических нарушений при ВИЧ-инфекции.
Механизмы уменьшения количества CD4 лимфоцитов.
Роль активации иммунной системы в патогенезе иммунологических нарушений.
Изменение соотношения «наивных» CD4 лимфоцитов и CD4 Т-клеток памяти.
Изменение экспрессии ко-стимулирующих молекул.
Нарушение ВИЧ-специфичного Т-клеточного ответа.
1.3 Влияние антиретровирусной терапии на динамику СБ4-лимфоцитов и экспрессию Т-клетками иммунологических маркеров.
1.4 Влияние ко-инфекции вируса гепатита С на иммунологический статус и эффективность
ВААРТ у пациентов с ВИЧ-инфекцией.
Собственные исследования.
Глава 1. Материалы и методы исследования.
1.1 Характеристика пациентов.
1.2 Подбор образцов для сравнительного исследования методик подсчета количества CD4 лимфоцитов.
1.3 Методы исследования.
1.4 Определение количества CD4 на проточном цитометре.
1.5 Методы статистической обработки данных.
Глава 2. Результаты исследования.
2.1 Оценка и сравнительная характеристика методов подсчета CD4 Т-лимфоцитов на проточном цитометре.
2.2 Характеристика аномалий фенотипа CD4 и CD лимфоцитов у больных ВИЧ-инфекцией.
2.3 Динамика клинической симптоматики, количества CD4 и CD8 лимфоцитов, вирусной нагрузки под влиянием нтиретровирусной терапии.
2.4 Динамика экспрессии Т-клетками иммунологических маркеров под влиянием ВААРТ.
2.5 Пациенты, не ответившие на терапию.
2.6 Влияние ко-инфекции гепатита С на восстановление иммунной системы.
Обсуждение результатов и заключение.
Выводы.
Введение диссертации по теме "Инфекционные болезни", Ситдыкова, Юлия Равильевна, автореферат
Актуальность проблемы
Инфекция, вызываемая вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), является одной из наиболее актуальных проблем системы здравоохранения. Пандемия ВИЧ-инфекции, по оценочным данным Объединенной программы Организации Объединенных Наций по ВИЧ/СПИДу и Всемирной Организации Здравоохранения, в 2005 году унесла жизни около 3,1 миллионов жителей Земли [12].
Количество российских граждан, инфицированных ВИЧ, с каждым годом увеличивается. Согласно данным Федерального научно-методического центра по профилактике и борьбе со СПИДом к началу 2005 года на территории Российской Федерации было официально зарегистрировано около 315 тысяч человек, живущих с ВИЧ-инфекцией [3]. В течение последних 13 лет в г. Москве, как и в других регионах страны, наблюдался ежегодный рост числа погибших ВИЧ-инфицированных больных [8]. Из-за широкого распространения внутривенных наркотиков ВИЧ инфекция поражает людей преимущественно молодого возраста, что приводит к тяжелым демографическим и социально-экономическим последствиям.
ВИЧ-инфекция характеризуется постепенным снижением CD4 лимфоцитов и прогрессирующей иммунной дисфункцией. Количество CD4 Т-клеток продолжает оставаться основным лабораторным маркером прогрессии ВИЧ-инфекции [74]. Уменьшение количества CD4 лимфоцитов ниже определенного уровня сопровождается повышенным риском развития оппортунистических заболеваний и является критерием для назначения антиретровирусной терапии (ВААРТ). Многочисленными исследованиями показано, что уровень CD4 лимфоцитов перед началом ВААРТ влияет на ее эффективность и вероятность развития у пациента проявлений СПИДа во время лечения [35,52]. У пациентов, принимающих химиопрепараты, необходимо осуществлять мониторинг количества CD4 лимфоцитов 1 раз в
3 месяца для оценки эффективности лечения [15]. Таким образом, количество CD4 лимфоцитов является незаменимым показателем, определяющим прогноз течения заболевания и терапевтическую тактику у пациентов, живущих с ВИЧ.
Несмотря на то, что огромное значение показателя CD4 очевидно, технологии для подсчета количества CD4 лимфоцитов развиваются медленно [74]. Количество проточных цитометров - приборов для определения количества CD4, на территории Российской Федерации до сих пор ограничено. Однако даже в лабораториях, оснащенных проточными цитометрами, для анализа часто используются устаревшие методики. Отсутствие надежной, доступной, а главное, стандартной и общепринятой методики для определения количества CD4 лимфоцитов на проточном цитометре, неизбежно компрометирует результаты и приводит к неправильной оценке состояния пациента, несвоевременному назначению терапии, неадекватному мониторингу эффективности лечения.
Таким образом, апробация и внедрение новых методик для определения количества CD4 лимфоцитов является одной из основных задач для становления инфраструктуры мониторинга ВИЧ-инфекции в Российской Федерации.
Несмотря на то, что появление вторичных заболеваний при, ВИЧ-инфекции напрямую связано со снижением количества CD4 лимфоцитов, активные оппортунистические инфекции могут развиваться и у пациентов с относительно высоким содержанием CD4. Так по данным В.И. Шахгильдяна и соавторов в 1.5% случаев манифестная ЦМВИ наблюдались у пациентов с содержанием CD4 лимфоцитов 100 - 200 кл/мм3 [11]. А.Г. Рахмановой и соавторами - был описан случай токсоплазменного менингоэнцефалита на фоне антиретровирусной терапии у пациентки с количеством CD4 Т-клеток больше 200 в мкл [7] Данные наблюдения свидетельстуют о том, что исследование содержания CD4 недостаточно для того, чтобы в полной мере оценить состояние иммунной системы у ВИЧ-инфицированных пациентов.
Исследование других маркеров фенотипа в настоящее время крайне ограничено. Это объясняется малой изученностью экспрессии поверхностных молекул CD4 и СБ8-лимфоцитами у ВИЧ-инфицированных пациентов и ее клинического значения. Тем временем, определение экспрессии маркеров фенотипа, по мнению многих исследователей, может дать дополнительную информацию о состоянии пациента, прогнозе течения заболевания и эффективности антиретровирусной терапии. У больных ВИЧ-инфекцией CD4 и СББ-лимфоциты имеют ряд аномалий фенотипа, в частности, увеличение экспрессии СБ25-рецептора к интерлейкину 2, СБ95-маркера, обусловливающего повышенную чувствительность к апоптозу, а также маркера активации CD38. Кроме того, наблюдается изменение соотношения «наивных» Т-клеток (зрелых неиммунных лимфоцитов) - ранее не встречавшихся с антигеном, и клеток памяти, отмечается нарушение экспрессии CD28, CD40L - важнейших ко-стимулирующих молекул, необходимых для эффективного иммунного ответа [20]. Вопрос о клиническом значении этих маркеров и возможности коррекции иммунных нарушений под влиянием антиретровирусной терапии остается открытым.
Таким образом, использование современных методик подсчета CD4 Т-клеток и их стандартизация, а также и определение дополнительных иммунологических маркеров необходимо для оптимизации мониторинга ВИЧ-инфекции и оценки эффективности антиретровирусной терапии.
Цель и задачи работы
Цель: разработка методов прогноза эффективности антиретровирусной терапии с помощью исследования динамики количества CD4 лимфоцитов и экспрессии Т-клетками иммунологических маркеров.
Задачи:
1. Оценить точность и надежность современных методов определения количества CD4 лимфоцитов на проточном цитометре
2. Выявить влияние ВИЧ-инфекции на содержание «наивных» CD4 лимфоцитов и CD4 Т-клеток памяти, и оценить их динамику при проведении антиретровирусной терапии.
3. Изучить экспрессию CD4 Т-клетками молекул CD28, CD40L у пациентов, инфицированных ВИЧ, под влиянием антиретровирусной терапии.
4. Оценить содержание CD8+CD38+ (активированных) клеток у ВИЧ-инфицированных пациентов и их динамику в процессе лечения.
5. Исследовать содержание CD8+CD57+ и CD8+CD28+ лимфоцитов при ВИЧ-инфекции и под влиянием антиретровирусной терапии.
6. Оценить экспрессию CD4 Т-клетками рецепторов к интерлейкину 2 (CD25) и CD95 (Fas) и их динамику на фоне антиретровирусной терапии.
7. Определить значение исследуемых иммунологических маркеров для оценки эффективности антиретровирусной терапии и прогноза течения ВИЧ-инфекции.
Научная новизна исследования
Впервые в России у пациентов, инфицированных ВИЧ, исследовано содержание «наивных» CD4 Т-клеток и клеток памяти, изучена частота экспрессии Т-клетками активационных и функциональных маркеров в сравнении с контрольной группой здоровых лиц, а также экспрессия Т-клетками иммунологических маркеров под влиянием антиретровирусной терапии. Впервые была выявлена зависимость исходного фенотипа лимфоцитов и иммунного ответа на лечение.
Практическое значение работы
По результатам данной работы оптимизирована и стандартизована технология подсчета CD4 Т-клеток на проточном цитометре. Подготовлены и выпущены методические рекомендации по определению количества CD4 Т-клеток на проточном цитометре у пациентов, инфицированных ВИЧ. Предложены дополнительные критерии для оценки эффективности антиретровирусной терапии и прогноза течения ВИЧ-инфекции.
Апробация диссертации
Материалы диссертации были доложены на II Российской научно-практической конференции по вопросам ВИЧ-инфекции и парентеральных вирусных гепатитов, г. Суздаль, 2002 г.; на Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией», г. Санкт-Петербург, 2004 г.; на б Международной конференции по лекарственной терапии ВИЧ-инфекции, г. Глазго, 2002 г.; на 9 Европейском конгрессе по СПИД, г. Варшава, 2003 г.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 111 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 2-х глав собственных исследований, обсуждения результатов и заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, содержащего 10 отечественных и 92 зарубежных источника литературы. Работа иллюстрирована 11 рисунками, 6 таблицами и 3 клиническими примерами.
Заключение диссертационного исследования на тему "Влияние антиретровирусной терапии на динамику CD4-лимфоцитов и экспрессию Т-клетками иммунологических маркеров у пациентов, инфицированных ВИЧ"
Выводы
1. Методика трехцветного анализа с гейтированием по CD45 и одно-платформенным методом подсчета абсолютного содержания клеток и методика PLG характеризуются хорошим согласием со стандартной технологией, а также позволяют исследовать образцы крови в течение 72 часов после забора. Методика PLG является более простой в выполнении, и поэтому может быть рекомендована для использования в лабораториях, осуществляющих большое количество исследований.
2. У пациентов, инфицированных ВИЧ, выявлено снижение числа «наивных» CD4 Т-клеток и клеток памяти, а также их соотношения среди популяции СБ4-лимфоцитов: уменьшение доли «наивных» клеток и увеличение доли клеток памяти. Под влиянием антиретровирусной терапии наблюдался прирост обеих субпопуляций CD4 Т-клеток, увеличение соотношения «наивных» клеток и клеток памяти за счет большего прироста числа «наивных» клеток.
3. У больных ВИЧ-инфекцией обнаружено снижение экспрессии CD28 и повышение экспрессии CD40L СБ4-лимфоцитами. На фоне антиретровирусной терапии отмечена тенденция к восстановлению экспрессии этих маркеров.
4. У пациентов, инфицированных ВИЧ, выявлена повышенная экспрессия СБ8-лимфоцитами маркера активации CD38, характеризующаяся наличием прямой корреляции с вирусной нагрузкой и обратной - с количеством CD4 клеток. Под влиянием антиретровирусной терапии происходило уменьшение количества CD8+CD38+ клеток, что свидетельствовало об эффективности лечения.
5. У больных ВИЧ-инфекцией обнаружено снижение экспрессии CD28 и повышение экспрессии CD57 CDS-лимфоцитами, что отражает снижение способности клеток к делению. Под влиянием ВААРТ экспрессия CD28 повышалась, экспрессия CD57 имела волнообразную динамику.
6. Существенных изменений экспрессии С04-лимфоцитами маркера CD25 у больных ВИЧ-инфекцией по сравнению со здоровыми лицами обнаружено не было. В то же время выявлена повышенная экспрессия маркера CD95 (Fas) СЭ4-лимфоцитами, имеющая обратную корреляцию с количеством CD4, что подтверждают существенное значение апоптоза как одного из механизмов уменьшения количества CD4 при ВИЧ-инфекции. Под влиянием ВААРТ экспрессия CD25 и CD95 CD4 клетками снижалась, что отражало уменьшение активации Т-лимфоцитов.
7. Благоприятный прогноз эффективности антиретровирусной терапии связан с высоким соотношением «наивных» CD4 и клеток памяти, относительно низкой экспрессией CD4 Т-лимфоцитами маркера CD95, а также высокой экспрессией CD8 Т-лимфоцитами молекулы CD28 и низкой - маркеров CD38, CD57, обратные тенденции в значениях перечисленных показателей прогнозируют слабый иммунный ответ на лечение.
Практические рекомендации
По результатам выполненной работы рекомендуется следующая тактика иммунологического обследования больных с ВИЧ-инфекцией
1. Для исследования количества CD4 лимфоцитов рекомендуется использовать трех или четырехцветный анализ с гейтированием по CD45 и одно-платформенным методом подсчета абсолютного содержания клеток или методику PLG с одно-платформенным методом. При этом необходимо осуществлять ежедневный контроль качества дозирования, включающий мониторинг скорости потока частиц.
2. У ВИЧ-инфицированных пациентов перед назначением антиретровирусной терапии целесообразно исследовать содержание «наивных» CD4 клеток и клеток памяти, их соотношение, процентное содержание CD4 и CD8 лимфоцитов, экспрессирующих CD28, процентное содержание CD4, экспрессирующих CD95, процентное содержание CD8, экспрессирующих CD38, CD57. Снижение соотношения «наивных» CD4 и клеток памяти, повышение экспрессии CD4 лимфоцитами маркера CD95, повышение экспрессии CD8 лимфоцитами маркеров CD38, CD57 и снижение экспрессии CD28 являются прогностически неблагоприятными факторами в отношении течения заболевания и эффективности лечения.
3. Исследование экспрессии CD8 лимфоцитами CD38 может быть рекомендовано в качестве маркера для оценки эффективности антиретровирусной терапии, в случае, если по какой-либо причине исследование вирусной нагрузки невозможно. Диагностическую ценность представляет и процент CD8, экспрессирующих CD38, и процент CD8+CD38+ в популяции лимфоцитов. Для получения достоверных результатов необходимо использовать моноклональные антитела одного производителя на протяжении всего периода наблюдения. I J
4. Исследование динамики содержания «наивных» CD4 клеток и клеток памяти, их соотношения, процентного содержания CD4 и CD8 лимфоцитов, экспрессирующих CD28, процентного содержания CD4, экспрессирующих CD95, а также исследование экспрессии CD38 CD8 лимфоцитами под влиянием антиретровирусной терапии может быть рекомендовано для дополнительной оценки эффективности лечения.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2006 года, Ситдыкова, Юлия Равильевна
1. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика, лечение /В.В. Покровский, Т.Н. Ермак, В.В. Беляева, О.Г. Юрин / под редакцией В.В. Покровского, 2 изд., 2003
2. ВИЧ-инфекция и СПИД. Клинические рекомендации / под редакцией В.В. Покровского, 2006.
3. ВИЧ-инфекция. Информационный бюллетень №27. Покровский В.В., Ладная Н.Н., Соколова Е.В., Буравцова Е.В./ Москва, 2005.
4. Калинина Н.М., С.А. Кетлинский./ Иммунология ВИЧ-инфекции // Иммунодефицитные состояния. / Под ред. B.C. Смирнова и И.С. Фрейдлин. Санкт- Петербург, 2000.-С. 411-445.
5. Кравченко.А.В. Сочетанное лечение ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов. // Медицинская кафедра. 2003. - № 1 (5). - стр. 30-40.
6. Мустафин И.Г. Роль апоптоза лимфоцитов в патогенезе ВИЧ-инфекции. // Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук. 2005.
7. Рахманова А.Г. Токсоплазменный менингоэнцефалит при ВИЧ-инфекции на фоне высокоактивной антиретровирусной терапии // Эпидемиология и инфекционные болезни № 6, 2002. С.49-50
8. Тишкевич О.А., Шахгильдян В.И., Пархоменко Ю.Г. Структура летальных исходов и патологическая анатомия у больных ВИЧинфекцией г. Москвы // «Эпидемиология и инфекционные болезни», 2004.- №4.- С.42 -46
9. Фаучи Э., Лэйн К. ВИЧ инфекция и СПИД // Внутренние болезни в 10 книгах. Книга 7. Пер. с англ./ Под ред. Браунвальда Е.,Иссельбахера К.Дж Петерсдорфа Р.Г. // М.: Медицина, 1994.- С.354-360.
10. Ю.Хаитов Р.М, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. / Иммунология. /. Учебник. М.: Медицина, 2000. - 432 с.
11. П.Шахгильдян В.И, О.А. Тишкевич, О.Ю. Шипулина // Клинико-лабораторная характеристика, патоморфологические особенности, диагностика и лечение цитомегаловирусной пневмонии / «Инфекционные болезни», 2004, Т. 2, №1.- С.73-80
12. ЮНЭЙДС/В03-2005. Развитие эпидемии СПИДа. Специальный доклад, посвященный профилактике ВИЧ.
13. A low level of CD4+CD28+ Т cells is an independent predictor of high mortality in human immunodeficiency virus type 1-infected patients. / Ostrowski S.R., Gerstoft J., Pedersen B.K. et al. // J. Infect. Dis. 2003. -Vol. 187.-p. 1726-1734.
14. Bartlett John G., Joel E. Gallant. Medical management о HIV infection. // 2003 MMHIV infection, p. 52-53.
15. Benito Jose M., M friola Lopez, Vincent Soriano. The role of CD8+ T-cell response in HIV infection. // AIDS Reviews. 2004. - № 6. - p. 79 -88.
16. Borkov G., Qibin L., Bentwich Z. / Immune activation correlates better than HIV plasma viral load with CD4 T-cell decline during HIV infection // Abstract, 8th European conference on clinical aspects and treatment of HIV-infection.- Athens, 2001.
17. Both memory and CD45RA+/CD62L+ naive CD4(+) T cells are infected in human immunodeficiency virus type 1-infected individuals. / Ostrowski MA, Chun TW, Justement SJ et al. // J. Virol. 1999. - Vol. 73. - p. 64306435.
18. Canadian Guidelines for Flow Cytometric Immunophenotyping. 2001 Edition.
19. Carcelain C., Li T. Immune reconstitution under Highly Active Antiretroviral Therapy (HAART) // AIDS reviews 1999.-№ l.-P. 51-56.
20. CD28 costimulation and CD28 expression in T lymphocyte subsets in HIV-1 infection with and without progression to AIDS. / Choremi-Papadopoulou H, Panagiotou N, Samouilidou E et al. // Clin. Exp. Immunol. 2000. - Vol. 119.-p. 499-506.
21. CD28 costimulation increases CD8+ cell suppression of HIV replication. / Barker E, Bossart KN, Fujimura SH et al. // J Immunol. 1997. -Vol. 159. -p. 5123-5131.
22. CD38 expression on CD8+ T cells in Human immunodeficiency virus 1-positive adults treated with HAART. / Beran O., Holub M., Spala J. et al. // Acta. Virol. 2003. Vol. 4. - p. 121-124.
23. CD4+ T-cell depletion in HIV infection: are we closer to understanding the cause? / Grossman Z., Meier-Schellersheim M., Sousa A.E. // Nat Med. -2002.-Vol. 8.-p. 319-323.
24. CD40 ligand dysregulation in HIV infection: HIV glycoprotein 120 inhibits signaling cascades upstream of CD40 ligand transcription. / Zhang R, Fichtenbaum CJ, Hildeman DA et al. // J Immunol. 2004. - Vol. 172. -p. 2678-2686.
25. CD45-Assisted Panleukogating for Accurate, Cost-Effective Dual-Platform CD4+ T-Cell Enumeration. /Deborah Glencross, Lesley E. Scott, Ilesh V. Jani et al // Cytometry 2002. -Vol.50. p.69-77
26. CD8+ cells and not CD4+ T cells are hyporesponsive to CD28- and CD40L-mediated activation in HIV-infected subjects. / Vingerhoets J,
27. Kestens L, Penne G. et al // Clin Exp Immunol. 1997. -Vol.107. - p. 440-447.
28. CDC Guidelines for perofrming single-platform CD4+ T-cell determinations with CD45 gating for persons infected with HIV/ MMWR, January 31, 2003 /52 (RR02):1-13
29. CDC. 1997 Revised Guidelines for Performing CD4+ N-Cell Determinations in Person Infected with Human Immunodeficiency Virus (HIV)./ MMWR 1997, V.46, PR-2.
30. Characterization of the phenotypic and lymphokine profile associated with strong CD8+ anti-HIV-l suppressor activity (CASA) /Wilkinson J., Zaunders J.J., Carr A. et al. //Clin. Exp. Immunol. 2002.-Vol. 121.-p. 145150.
31. Chougnet C. Role of CD40 ligand dysregulation in HIV-associated dysfunction of antigen-presenting cells. // J. Leukoc. Biol. — 2003.- Vol. 74.-p. 702-709.
32. Cohen Daniel E. and Bruce D. Walker. Human Immunodeficiency. Virus pathogenesis and prospects for immune control in patients with established infection.//Clin Infect Diseases.-2001.-Vol. 32.-p. 1756- 1768.
33. Decreased CD40 ligand induction in CD4 T cells and dysregulated IL-12 production during HIV infection. / Vanham G., Penne L., Devalck J. et al. // Clin Exp Immunol. 1999. - Vol. 117. - p. 335-342.
34. Deeks Steven G and Bruce D. Walker. The immune response to AIDS virus infection: good, bad or both? // J Clin Invest. 2004. - Vol. 113. - p. 808-811.
35. DHHS Guidelines, May 4, 2006, http/:AIDSinfo. nih.gov
36. Early reduction of immune activation in lymphoid tissue following highly active HIV therapy. / Andersson J., Fehniger Т.Е., Patterson B.K. et al. // AIDS.-Vol. 12.-p. 123-129.
37. Effect of Baseline- and Treatment-Related Factors on Immunologic Recovery After Initiation of Antiretroviral Therapy in HIV-1-Positive
38. Subjects: Results From ACTG 384. / Gandhi R.T., Spritzler J., Chan E. et al. // J. Acquir. Immune. Defic. Syndr. 2006. - Vol. 42. - p. 426-434.
39. Effect of hepatitis С infection on progression of HIV disease and early response to initial antiretroviral therapy./ Sullivan P.S., Hanson D.L., Teshale E.H. et al. // AIDS. 2006. -Vol.20, -p. 1171-1179.
40. Effects of interleukin-2 therapy combined with highly active antiretroviral therapy on immune restoration in HIV-1 infection: a randomized controlled trial. / Levy Y., Durier C., Krzysiek R. et al. // AIDS. 2003. -Vol.17.-p. 343-351.
41. Evaluation of the impact of highly active antiretroviral therapy on immune recovery in antiretroviral naive patients. / Al-Harthi L., Voris J., Patterson B.K. et al. // HIV Med. 2004. - Vol. 5. - p. 55-65.
42. Evidence for rapid disappearance of initially expanded HIV-specific CD8+ T cell clones during primary HIV infection / Pantaleo G., Soudeyns H., Demarest James F. et al // Proc. Natl. Acad. Sci. 1997.-Vol. 94.-p. 98489853.
43. Expansion of CD57 and CD62L-CD45RA+ CD8 T lymphocytes correlates with reduced viral plasma RNA after primary HIV infection. / Lieberman J., Trimble L.A., Friedman R.S. et al. // AIDS. 1999. - Vol.13. - p. 891899.
44. Expression of CD57 defines replicative senescence and antigen-induced apoptotic death of CD8+ T cells. / Brenchley J.M., Karandikar N J., Betts M.R. et al. // Blood. 2003. - Vol. 101.- p. 2711-2720.
45. Grundstrom S., Andersson J. Studies of HIV-associated immune responses in lymphoid compartments.// Curr. HIV/AIDS Rep. 2006. - Vol. 3. -p.32-38.
46. Harari A., Pantaleo G. New insights in Immune control of HIV-1 Infection / AIDS reviews, 2001.-№ 3, P. 201-207.
47. Hematologic aspects of HIV/AIDS. / Alexandra M. Levine, David T. Scadden, John A. Zaia et al. // Hematology, 2001.- №2.- p. 463-478.
48. HIV-specific cytotoxic T lymphocyte precursors exist in a CD28-CD8+ T cell subset and increase with loss of CD4 T cells. / Lewis D.E., Yang L., Luo W. etal.//AIDS.-1999.-Vol. 13.-p. 1029-1033.
49. Human CD28-CD8+ T cells contain greatly expanded functional virus-specific memory CTL clones. / Weekes M.P., Carmichael A .J., Wills M.R. et al. // J Immunol. 1999. - Vol. 162. - p. 7569-7577.
50. IAS-USAGuidelines, Jama, July 14, 2004. Vol. 292. № 2.
51. Immunobiology. 5th edition. / Editors: Charles A. Janeway, Paul Travers, Mark Walport et al. New-York: Garland Publishing, 2001
52. Immunologic response to antiretroviral therapy in hepatitis С virus-coinfected adults in a population-based HIV/AIDS treatment program. / Braitstein P., Zala C., Yip В., Brinkhof M.W. et al.// J. Infect. Dis. 2006 . - Vol.193, -p.259-268.
53. Immunological and virological responses in HIV-1 infected adults at early stage of established infection treated with highly active antiretroviral therapy / Bart P.A., Rizzardi G.P., Tambussi G. et al // AIDS, 2000.-Vol. 14.-p. 1887-97.
54. Immunopathogenic mechanisms of HIV infection. / Fauci A.S., Pantaleo G., Stanley S. et al. // Ann Intern Med. 1996. - Vol. 124.- p. 654-663.
55. Impact of hepatitis С virus coinfection on response to highly active antiretroviral therapy and outcome in HIV-infected individuals: a nationwide cohort study. / Weis N., Lindhardt B.O., Kronborg G. // Clin. Infect. Dis. 2006. - Vol.42 -p.1481-1487.
56. Involvement of Bel 2 an IL - 2R in HIV-positive patients whose CD4 cell counts fail to increase rapidly with highly active antiretroviral therapy. / Denis David, Helene Keller, Leila Nait-Ighil et al. // AIDS. - 2002. - Vol. 16.-p. 1093- 1101.
57. Koka P.S., Reddy S.T. Cytopenias in HIV infection: mechanisms and alleviation of hematopoietic inhibition. // Curr. HIV Res. 2004. - Vol. 2. -p.275-282.
58. Kornbluth R.S. An expanding role for CD40L and other tumor necrosis factor superfamily ligands in HIV infection. // J. Hematother. Stem Cell Res. 2002. - Vol. 11. - p. 787-801.
59. Lack of CD28 expression on HIV-specific cytotoxic T lymphocytes is associated with disease progression. / Gamberg J., Pardoe I., Bowmer M.I. et al. // Immunol. Cell Biol.- 2004. -Vol. 82. p.38-46.
60. Large clonal expansions of human virus-specific memory cytotoxic T lymphocytes within the CD57+ CD28- CD8+ T-cell population. / Weekes M.P., Wills MR, Mynard К et al. // Immunology. 1999. - Vol. 98.- p. 443-449.
61. Levy Jay A. Effects of HIV on various tissues and organ systems. // HIV and the pathogenesis of AIDS. Washington, 1998.
62. Lieberman Judy. Tracking the killers: how should we measure CD8 T-cells in HIV infection? // AIDS. 2004. Vol. 18. - p. 1489 - 1493
63. Long-term kinetics of T cell production in HIV-infected subjects treated with highly active antiretroviral therapy. / Fleury S., Rizzardi G.P., Chapuis A. // Proc. Nat.l Acad. Sci. USA.- 2000. Vol. 97. - p.5393-5398.
64. Loss of IL-7Ralfa. is associated with CD4 T-cell depletion, high interleukin-7 levels and CD28 down-regulation in HIV infected patients.// Rethi Bence, Fluur Caroline, Atlas Ann et al.// AIDS.-2005.-Vol. 19.- p. 2077- 2086.
65. Mandy F.F., Bergeron M., Minkus T. Principles of flow cytometry./ Transfus Sci. 1995. - Vol. 16. - p 303-314
66. Mandy Francis, Jan Nicholson, Brigitte Autran, George Janossy. T-Cell Subset Counting and Fight against AIDS: Reflection Over a 20-Years Struggle. / Cytometry.- 2002.-Vol.50.-p.39-45.
67. McCune Joseph M. The dynamycs of CD4+ T-cell depletion in HIV disease. // Nature. 2001. - Vol. 410. - p.974 - 979.
68. Moses A., Nelson J., Bagby G.C. The influence of human immunodeficiency virus-1 on hematopoiesis. // Blood. 1998. - Vol. 91. -p. 1479-95.
69. Nadir CD4+ T-cell count and numbers of CD28+ CD4+ T-cells predict functional responses to immunizations in chronic HIV-l infection. / Lange C.G., Lederman M.M., Medvik K. et all. // AIDS. 200. - Vol. 17. - p. 2015-2023.
70. Nicholson J.K., Hubbard M., Jones B.M. Use of CD45 fluorescence and side scatter characteristics for gating lymphocytes when using the whole blood lysis procedure and flow cytometry./ Cytometry.- 1996.- Vol.26.- p 16-21.
71. Pathogen-specific induction of CD 154 is impaired in CD4+ T cells from human immunodeficiency virus-infected patients./ Subauste C.S., Wessendarp M., Portilllo J.A. // J. Infect. Dis. 2004. -Vol. - 189. - p. 6170.
72. Persistent immune activation in HIV-l infection is associated with progression to AIDS. / Hazenberg M.D., Otto S.A., van Benthem B.H. et al.//AIDS.-2003.-Vol. 17.-p. 1881-1888.
73. Regulation of CD28 costimulation in human CD8+ T cells./ Lloyd Т.Е., Yang L., Tang D.N. et al. // J Immunol. 1997. - Vol. 158. - p. 15511558.
74. Role of CD38 and its ligand in the regulation of MHC-nonrestricted cytotoxic T cells. / Cesano A., Visonneau S., Deaglio S. // J Immunol. 1998.-Vol. 160.-p.l 106-1115.
75. Selection of Lymphocyte Gating Protocol Has an Impact on Level of Reliability of T-Cell Subsets in Aging Speciments. / Bergeron M., Nicholson J.K.A., Phaneut S. et al // Cytometry.- 2002.-Vol.50.- p. 53-61.
76. Shortened telomeres in the expanded CD28-CD8+ cell subset in HIV disease implicate implicative senescence in HIV pathogenesis. / Effros R.B., Allsopp R., Chiu C.P. et al. // AIDS. 1996. - Vol. 10. - p. 17-22.
77. Skewed maturation of memory HIV-specific CD8 T lymphocytes / Champagne P., Ogg G.S., King A.S. et al // Nature, 2001.-Vol.1.-p. 10611.
78. Spina C.A., Prince H.E., Richman D.D. Preferential replication of HIV-l in the CD45RO memory cell subset of primary CD4 lymphocytes in vitro. //J. Clin. Invest. -1997.-Vol. 99.-p. 1774- 1785.
79. Swigut Т., Shohdy N., Skowronski J. Mechanism for down-regulation of CD28 by Nef. // EMBO J. 2001. - Vol. 20. - p. 1593-1604.
80. T cell changes after combined nucleoside analogue therapy in HIV primary infection. / Carcelain G., Blanc C., Leibowitch J. et al. // AIDS. -1999. - Vol. 13. - p.1077-1081.
81. T cell depletion in HIV-1 infection: how CD4+ T cells go out of stock. / Hazenberg Mette D., Hamann Dorte, Schuitemaker Hanneke et al. // Nature America inc. 2000. - Vol. 1. - p.285 - 289.
82. T cell receptor excision circle (TREC) content following maximum HIV suppression is equivalent in HIV-infected and HIV-uninfected individuals / Steffens C.M., Smith K.Y., Landay A et al. // AIDS.- 2001.- Vol.28.p.l881-1882.
83. The dominant source of CD4+ and CD8+ T- cell activation in HIV infection is antigenic stimulation / Cohen Stuart J.W., Hazebergh M.D., Hamann D. et al. // AIDS. 2000. - Vol.14.- p. 203-211.
84. Thymopoiesis in HIV-infected adults after highly active antiretroviral therapy / Market M.L., Alvares-McLeod A.P., Sempowski G.D. et al //AIDS Res. Hum. Retroviruses.- 2001.-Vol.20.-p. 1635-1643.
85. Treatment of primary HIV-infection with cyclosporin A coupled with highly active antiretroviral therapy / Rizzardi G.P., Harari A., Capiluppi B. et al // Clin. Invest.- 2002.-.Vol.-109.- p.681-688.
86. Valdez Herman Immune restoration after treatment of HIV-l infection with Highly Active Antiretroviral Therapy (HAART). // AIDS Rev.-2002.-№4. p. 157- 164.
87. Valenzuela H.F., Effros R.B. Divergent telomerase and CD28 expression patterns in human CD4 and CD8 T cells following repeated encounters with the same antigenic stimulus. // Clin Immunol. 2002. -Vol. 105.-p. 117-25.