Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Фенотипические особенности лейкоцитарных клеток больных ВИЧ-инфекцией

Решетников Игорь Владимирович

ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЛЕЙКОЦИТАРНЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫХ ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ

14.03.09 - Клинически иммунология, аллергология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Челябинск - 2015

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «ЮжноУральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор

Цейликман Вадим Эдуардович

Официальные оппоненты:

Симбирцев Андрей Семенович - доктор медицинских наук, профессор, ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России, директор

Мусгафнн Илыпат Ганиевич - доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Минздрава России, кафедра биологической химии, заведующий

Ведущая организация:

ФГБУН «Институт экологии и генетики микроорганизмов» УрО РАН, г. Пермь

.С-о

Защита диссертации состоится ¿1 »ьЦДЛУа.2015 года Bj(0_ _часов на заседании Диссертационного совета Д 208Л 17.43 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «ЮжноУральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «ЮжноУральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации и на сайте www.chelsma.ru.

Автореферат диссертации разослан № »

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор медицинских наук

Ю.С. Шишкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования и степень ее разработанности

ВИЧ является одной из самых важных проблем современного человечества. Пандемия ВИЧ-инфекции далеко вышла за рамки проблемы одной страны, одной специальности, одной медицины. По данным UN AIDS, в 2011 году в мире было зарегистрировано примерно 2,5 миллионов новых случаев инфицирования ВИЧ, а число людей, живущих с ВИЧ, составило 34,2 миллионов человек. В 2011 г. примерно 1,7 миллионов человек умерли от заболеваний, обусловленных СПИДом.

Ежедневно в России диагностируется более 100 новых случаев заражения ВИЧ. По данным Федерального научно-методического Центра по профилактике и борьбе со СПИДом, на IS сентября 2012 г. число граждан Российской Федерации, инфицированных ВИЧ, составило 682726 человек. Пораженность ВИЧ-инфекцией населения Российской Федерации (число людей с ВИЧ на 100 тысяч населения) составляет 476,1. Фактическая распространенность ВИЧ инфекции среди взрослого населения в России составляет в среднем 1,1 процента (Говорун В.В. ВИЧ-инфекция. М. 2009). Ведущим путем передачи ВИЧ-инфекции продолжает оставаться парентеральное употребление наркотиков (в среднем 62% по Российской Федерации).

Эпидемия ВИЧ-инфекции продолжает распространяться на фоне эпидемии наркомании. Растет число пациентов, находящихся на поздних стадиях ВИЧ-инфекции и нуждающихся в антиретровирусной терапии. С введением в схемы антиретровирусной терапии в 199S г. ингибиторов протеазы и ненукпеозидных ингибиторов обратной транскриптазы началась эра высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ). Она ознаменовалась значительным снижением смертности и числа осложнений у ВИЧ-инфицированных, включая оппортунистические инфекции и злокачественные новообразования. Однако, несмотря на все успехи антиретровирусной терапии последних десяти лет, искоренение вируса у ВИЧ-инфицированных по-прежнему остается недостижимым. Лечение ВИЧ-инфекции столкнулось и с новыми проблемами — ранней и отдаленной токсичностью препаратов и устойчивостью вируса как у отдельных больных, так и в целом (Cowadia H. Antiretroviral agents - how best to protect infants from HIV and save their mothers from AIDS // N. Eng.l J. Med. 2004. Vol. 351, № 3. P. 289-292; Barbara G., Scozzafava A., Mastrolorenzo A. et al. Highly active antiretroviral therapy: current state of the art, new agents and their pharmacological interactions useful for improving therapeutic outcome // Curr. Pharm. Des. 2005. Vol. 11. P. 805-843). Дальнейший ход пандемии ВИЧ-инфекции во многом зависит от того, появится ли в ближайшем будущем вакцина для профилактики этой инфекции.

Необходимое условие для решения данной задачи - понимание иммунопатогенеза ВИЧ-инфекции. Хорошо известно, что главной мишенью ВИЧ являются Т-хелперы. Изучены разнообразные механизмы поражения клеток CD4+ при ВИЧ-инфекции. Однако в патогенез ВИЧ-инфекции вовлечены и другие клетки иммунной системы. В частности, B-лимфоциты, гранулоциты, моноциты.

Проблеме ВИЧ посвящено внушительное количество научных исследований, но некоторые вопросы до сих пор остаются слабо изученными или спорными. В частности, изменение субпопуляционного состава лейкоцитов с учетом незрелых клеток по мере прогрессирования ВИЧ-инфекции при естественном течении заболевания, а также на фоне ВААРТ. Недостаточно изучены особенности иммунного статуса ПИН с коинфекцией ВИЧ/ВГС.

Цель исследования

Изучение влияния тяжести ВИЧ-инфекции, антиретровирусной терапии и сопутствующих патологий на субпопопуляционный состав лейкоцитов периферической крови ВИЧ-инфицированных лиц.

Задачи исследования

1. Выполнить сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц и условно здоровых доноров.

2. Выявить особенности иммунного статуса ВИЧ-инфицированных лиц с учетом стадии ВИЧ-инфекции согласно клинической классификации Покровского В.И.

3. Оценить зависимость между увеличением вирусной нагрузки и изменением субпопуляционного состава лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц.

4. Выявить субпопуляции лейкоцитов, концентрации которых меняются на фоне проведения высокоактивной антиретровирусной терапии.

5. Оценить влияние сопутствующих патологий в виде хронического вирусного гепатита С и внутривенного употребления опиоидных наркотиков на иммунный статус ВИЧ-инфицированных лиц.

Методология и методы исследования

В экспериментальной части исследования проводилась лабораторная оценка иммунного статуса 166 ВИЧ-инфицированных лиц, разделенных на группы по тяжести заболевания, получению ВААРТ и сопутствующим патологиям. Определение содержания субпопуляций лейкоцитов осуществлялось методом проточной цитометрии. Концентрации РНК ВИЧ в плазме крови ВИЧ-инфицированных пациентов определялась методом полимеразной цепной реакции. В аналитической части исследования проводилось сравнение полученных данных между группами с использованием непараметрических методов статистического анализа.

Исследование проведено в соответствии с принципами доказательной медицины и одобрено Этическим комитетом ГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава России (протокол №6 от 20.05.2011 г.)

Степень достоверности, апробация результатов, личный вклад автора

В первичной документации представлены протоколы лабораторных исследований, журналы регистрации результатов лабораторных исследований, результаты статистической обработки. Результаты исследований получены на сертифицированном оборудовании, включающем проточный цитометр «С^огшсб РС

500» компании Beckman Coulter и автоматизированную систему для анализа нуклеиновых кислот «m2000rt» компании Abbott. Полученные результаты не противоречат литературным данным, представленным в независимых источниках. Статистическая обработка результатов проводилась с использованием пакета прикладных компьютерных программ «Statistics for Windows 6.0».

Результаты работы доложены и обсуждены на IV Международном молодежном медицинском конгрессе (Санкт-Петербург, 2011), IV Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2012), XXV Международном Конгрессе по иммунологии (Милан, Италия, 2013).

Личный вклад автора заключается в непосредственном участии во всех этапах научной работы. Автор принимал непосредственное участие в анализе медицинских карт ВИЧ-инфицированных пациентов, в пробоподготовке и проведении лабораторных исследований, в создании компьютерной базы данных, статистической обработке материала с использованием прикладных программ «Excel 2000» компании Microsoft и пакета программ «Statistica for Windows 6.0» компании StatSoft.

Основная идея, планирование научной работы, включая формулировку рабочей гипотезы, определение методологии и общей концепции диссертационного исследования проводились совместно с научным руководителем Цейликманом В.Э., заведующим кафедрой биологической химии ГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава России, доктором биологических наук, профессором. Получение и интерпретация клинико-анамнестических данных осуществлялись при участии врачей-инфекционистов Миркиной Т. В. и Смирновой Н.В. (инфекционное отделение для лечения больных ВИЧ/СПИДом Клиники ГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава России). Лабораторные исследования методом проточной цитометрии проводились при участии заведующей иммунологической лабораторией Клиники ГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава России Квятковской C.B. Лабораторные исследования по определению вирусной нагрузки проводились при участии заведующей клинико-диагностической лабораторией ГУЗ «Челябинский областной центр по профилактике и борьбе со СПИДом и другими инфекционными заболеваниями» Долговой Н.В.

Доля участия автора в накоплении, обобщении и анализе материала составляет более 90%.

Положения, выносимые на защиту:

1. У ВИЧ-инфицированных лиц с ростом вирусной нагрузки и падением уровня Т-хелперов ассоциируется повышение числа моноцитов CD 16+, а также снижение количества зрелых B-лимфоцитов и повышение концентрации незрелых В-клеток в периферической крови.

2. На фоне получения высокоактивной антиретровирусной терапии у ВИЧ-инфицированных лиц наблюдается снижение количества моноцитов CD 16+ и незрелых гранулоцитов, а также увеличение числа зрелых B-лимфоцитов с одновременным падением уровня незрелых В-клеток.

3. Сопутствующие патологии в виде хронического вирусного гепатита С и

внутривенного употребления опиоидных наркотиков ассоциированы с более

выраженным дефицитом Т-хелперов у ВИЧ-инфицированных лиц.

Научная новизна

Впервые исследован расширенный субпопуляционный состав лейкоцитов периферической крови ВИЧ-инфицированных лиц с учетом как зрелых, так и незрелых клеток. Впервые было показано повышение количества предшественников В-клеток в периферической крови ВИЧ-инфицированных лиц относительно здоровых лиц. По мере прогрессирования заболевания число незрелых В-лимфоцитов растет при одновременном снижении концентрации зрелых В-клеток.

Выявлены корреляционные связи между концентрацией вируса в крови и числом зрелых и ранних В-лимфоцитов, «воспалительных» моноцитов CD16+. По мере роста вирусной нагрузки падает число зрелых В-клеток, количество незрелых В-клеток и «воспалительных» моноцитов повышается.

Доказаны дополнительные - помимо снижения вирусной нагрузки и увеличения количества Т-хелперов — позитивные эффекты ВААРТ. Это - повышение концентрации зрелых В-лимфоцитов, снижение количества незрелых гранулоцитов, «воспалительных» моноцитов CD 16+ и незрелых В-клеток в крови.

Выявлено негативное влияние хронического вирусного гепатита С и внутривенного употребления опиоидных наркотиков на уровень Т-хелперов у ВИЧ-инфицированных лиц. Литературные данные по этим вопросам противоречивы.

Теоретическая и практическая значимость работы

Результаты исследования содержат данные о влиянии комплекса факторов на субпопуляционный состав лейкоцитов периферической крови ВИЧ-инфицированных лиц. Получены данные в малоизученных отраслях, касающихся иммунопатогенеза ВИЧ. В частности, изменение концентрации ранних и зрелых В-лимфоцитов, «воспалительных» моноцитов CD 16+ при ВИЧ-инфекции.

Изучено влияние ВААРТ на различные популяции лейкоцитов ВИЧ-инфицированных лиц. Выявлены популяции клеток, которые могут служить критериями иммунологической эффективности ВААРТ. Применение системы CytoDiff в дополнение к стандартным методикам определения числа Т-хелперов и уровня вирусной нагрузки позволяет врачам-клиницистам оценить иммунный статус ВИЧ-инфицированных лиц, а также эффективность антиретровирусной терапии.

Данная диссертационная работа может послужить основой для дальнейших научных исследований. Перспективным представляется исследование по выявлению самых ранних маркеров иммунологической эффективности ВААРТ, среди которых могут оказаться «воспалительные» моноциты CD 16+.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследования внедрены в практику инфекционного отделения для лечения больных ВИЧ/СПИДом Клиники ГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава России с

5 сентября 2012 г. Протокол CytoDiff позволяет врачу-клиницисту оценить степень иммунологических нарушений у ВИЧ-инфицированных пациентов. Уровень моноцитов CD 16+ в дополнении к стандартным показателям (число лимфоцитов CD4+) используется в качестве критерия иммунологической эффективности антиретровирусной терапии.

Результаты диссертационной работы внедрены в педагогическую практику кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава России с «11» сентября 2014 г. (Протокол № 3 от 11.09.2014 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 научных работ общим объемом 1,02 печатных листа, в том числе 4 публикации в изданиях, включенных в перечень российских рецензируемых научных журналов, рекомендованных Высшей Аттестационной Комиссией для публикаций основных научных результатов диссертаций, а также 2 работы в зарубежных научных изданиях, 3 работы опубликованы в материалах всероссийских и международных конференций и симпозиумов.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, результатов и обсуждения, заключения и выводов. Библиографический указатель включает 150 источник: 31 - на русском языке и 119 - иностранных. Работа содержит 22 таблицы и 6 рисунков.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Проводилась оценка иммунного статуса 166 ВИЧ-инфицированных лиц с III и IVA стадией заболевания. Диагноз ВИЧ-инфекция был поставлен врачом-инфекционистом в инфекционном отделение для лечения больных ВИЧ/СПИДом Клиники ГБОУ ВПО «ЮУГМУ» Минздрава России.

В исходную контрольную группу вошли 32 условно здоровых донора. Средний возраст - 27,9±7,9 лет.

Изучение субпопуляционного состава лейкоцитов периферической крови проводилось с помощью проточного цитометра «FC500 Cytomics» и реагентов CytoDiff компании Beckman Coulter. Реагенты CytoDiff представляют собой пятицветную комбинацию из 6 моноклональных антител: CD36-FITC/CD2-PE/CD294(CRTH2)-PE/ CD19-ECD/CD16-PC5/CD45-PC7. В таблице 1 приведены популяции лейкоцитов, доступные для определения с помощью системы CytoDiff.

Таблица 1 - Популяции лейкоцитов и соответствующие им фенотипы, доступные для определения с помощью системы Су1оО|(Т

Популяция клеток Фенотип

В-лимфоциты SSC1'™, CD45h'8\ CD 16", CD2" и CRTH2", CD19+

Т- и ЫК-клетки СО 16" SSC1<W, CD45h'E\ CD 16", CD2+ или CRTH2+

Т- и ЫК-клетки СШ6+ SSClow, CD45l"Eh, CD16+, CD2+ или CRTH2+

Моноциты СО 16" SSCCD 16", CD2" и CRTH2", CD 19", CD36+

Моноциты СЕ>16+ SSCirt, CD16\ CD2" и CRTH2", CD19", CD36+

Незрелые гранулоциты SSCh'E\ CD45'"1, CD 16", CD2" и CRTH2"

Зрелые нейтрофилы SSCh'B>1, CD45h'£b, CD161

Эозииофилы sschigh CD45bi8h CD16", CD2+ или CRTH2+

Базофилы SSC"", CD45'nl, CD 16", CD2' или CRTH2+

Незрелые В-клетки SSClm\ CD45lm\ CD 16", CD2" ii CRTH2", CD19+

Незрелые Т-клетки SSClow, CD45'°", CD 16", CD2+ или CRTH2+

Относительное и абсолютное содержание Т-хелперов определялось с помощью дополнительной панели моноклональных антител CD45-FITC/CD4-RD1/CD3-PC5 (Beckman Coulter). Процентное содержание всех определяемых популяций рассчитывалось от общего числа лейкоцитов (WBC).

Определение вирусной нагрузки проводилось методом полимеразной цепной реакции на автоматизированной системе для анализа нуклеиновых кислот «m2000rt» компании Abbott Laboratories.

Результаты исследований обрабатывались с применением пакета прикладных программ «Statistica for Windows 6.0» компании StatSoft. Статистическую обработку результатов исследований проводили стандартными методами, с определением средней арифметической вариационного ряда (М) и ошибки средней арифметической (т). Результаты исследования количественных параметров в группах сравнения представлены в виде М±т, где М - средняя арифметическая, ш - стандартная ошибка средней. Объем выборок был недостаточен для применения параметрических способов анализа, поэтому для оценки достоверности использовался непараметрический U-критерий Mann-Whitney, статистически значимыми считались изменения при р < 0,05.

Результаты и обсуждение

1. Сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц и условно здоровых лиц

В группу 1 вошли 32 условно здоровых донора. В группу 2 вошли 90 ВИЧ-инфицированных лиц, среди которых 68 человек были в стадии Ш ВИЧ-инфекции по Покровскому, 22 человека - в стадии IVA. Никто из пациентов не получал ВААРТ. Результаты сравнения представлены в таблице 2.

По сравнению с контрольной группой в исследованной когорте пациентов снижено относительное и абсолютное содержание Т-хелперов при одновременном увеличении процентного содержания Т-лимфоцитов.

Установлено, что для больных ВИЧ-инфекцией характерно снижение содержания В-лимфоцитов. Одновременно увеличилось содержание предшественников В-клеток в крови. Вероятно, низкий уровень В-клеток обусловлен усилением апоптоза, что может быть сопряжено с усилением иммунопоэза этого звена лимфоидных клеток (Fauci A.S., Lane Н.С. The acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) // Harrison's principles of internal medicine. 1991. P. 1402-1410).

В группе ВИЧ-инфицированных лиц наблюдалось увеличение содержания «воспалительных» моноцитов CD 16+. Известно, что количество таких клеток увеличивается при некоторых системных заболеваниях (бактериальный сепсис, ВИЧ). Некоторые ученые полагают, что моноциты CD 16+ являются «удобными» клетками для репликации вируса (Ancuta P., Autissier Р., Wurcel A. et al. CD16+ Monocyte-Derived Macrophages Activate Resting T Cells for HIV Infection by Producing CCR3 and CCR4 Ligands H Journal of Immunology. 2006. Vol. 176. P. 5760-5771). Предполагается, что данная субпопуляция моноцитов играет важную роль в распространении вируса по организму и поддержании вирусной персистенции (Ellery P.J., Tippett Е., Chiu Y.-L. et

Таблица 2 - Сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц и условно здоровых доноров, (М±ш)

Показатели Группа 1 (условно здоровые доноры) Группа 2 (ВИЧ-иыфицированные лица)

п=32 п=90

В-лимфоциты, % 4,86±0,32 2,98+0,20

В-лимфоциты, клеток/мкл 293,64+27,15 154,35+10,37

Т- и МС-клетки СБ 16+, % 5,11+0,34 3,67+0,22

Т- и МК-клетки СО!6+, клеток/мкл 305,29+23,48 197,98+13,55

Т- и №С.-клетки С016-, клеток/мкл 1688,32+94,67 1548,90+96,64

Т-лимфоциты, % 75,06+0,85 81,64±0,93

Т-хеллеры, % 43,07+1,10 23,42+1,12

Т-хелперы, клеток/мкл 917,03+57,74 473,81+31,37

Т- и ЫК-клегки, клеток/мкл 1993,60+111,26 1746,88+101,62

Общее количество лимфоцитов, клеток/мкл 2287,24+133,25 1901,23+106,18

Моноциты СО 16+, % 0,73+0,08 1,10+0,08

Моноциты СЭ16+, клеток/мкл 45,71+6,80 56,84+4,01

Незрелые гранулоциты, % 0,20+0,04 0,61+0,11

Незрелые гранулоциты, клеток/мкл 12,05+2,57 33,10+5,23

Эозинофилы, клеток/мкл 241,92+41,77 168,21+16,78

Незрелые В-лимфоциты, % 0,07+0,01 0,13+0,02

Примечание: здесь и далее указаны только статистически значимые различия, р<0,05

al. The CD 16+ Monocyte Subset Is More Permissive to Infection and Preferentially Harbors HIV-1 In Vivo // Journal of Immunology. 2007. Vol. 178, № 10. P. 6581-6589).

Повышение уровня незрелых гранулоцитов может быть связано с различными грибковыми и бактериальными заболеваниями, которые встречаются в группе ВИЧ-инфицированных лиц (кандидоз, туберкулез, бактериальный эндокардит и др.).

Таким образом, можно говорить о том, что при ВИЧ-инфекции количественным изменениям подвержены практически все популяции лейкоцитов: Т- и В-клетки, моноциты и гранулоциты. Изменение числа клеток может бьггь связано как с прямым воздействием вируса на зрелые клетки крови, так и с вирусным поражением стромы костного мозга и тимуса, что ведет к нарушению гемопоэза и иммунопоэза.

2. Анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом стадии заболевания

Было проведено сравнение показателей пациентов, не получающих ВААРТ, с Ш (латентная инфекция) и IVA (появление вторичных заболеваний) стадиями ВИЧ-инфекции. Результаты сравнения представлены в таблице 3.

Был зафиксирован рост вирусной нагрузки у пациентов в стадии IVA, что может объясняться увеличением репликации вируса на фоне снижения иммунного контроля и нарушением барьерной функции лимфатических узлов на последних стадиях заболевания.

Таблица 3 — Сравнительный анализ показателей иммунной системы и вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом стадии заболевания, (М±т)

Показатели Группа 1 (стадия 1П) Группа 2 (стадия IVA)

п=68 п=22

Т-хелперы, % 25,83±1,22 15,91±1,67

Т-хелперы, клеток/мкл 527,88±34,83 305,61±54,48

Вирусная нагрузка, копий/мл 132333,30±30640,86 445060,94±248870,14

Наблюдалось снижение относительного и абсолютного содержания Т-хелперов у пациентов в стадии IVA относительно стадии III, что можно объяснить истощением популяции CD4+ лимфоцитов на фоне роста вирусной нагрузки.

Классификация стадий ВИЧ-инфекции по Покровскому основывается лишь на клинических критериях. Однако, клинические проявления связаны с состоянием иммунной системы (главным образом, уровнем Т-хелперов), которое в свою очередь зависит от уровня вирусной репликации. Поэтому мы можем констатировать, что переход ВИЧ-инфекции из субклинической стадии П1 в стадию вторичных заболеваний IVA сопряжен с усилением виремии и снижением числа клеток CD4. В то же время, достоверных количественных изменений со стороны В-клеток, NK-клеток,

моноцитов и гранулоцитов не зафиксировано, что подтверждает первостепенную роль числа лимфоцитов CD4+ в развитии иммунодефицита и появления вторичных заболеваний (Pantaleo G., Graziosi С., Fauci A.S. The immunopathogenesis of human immunodeficiency virus infection//N. Engl. J. Med. 1993. Vol. 328. P. 327-335).

3. Анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом уровня вирусной нагрузки

В данном разделе научной работы изучалась связь субпопуляционного состава лейкоцитов с уровнем вирусной нагрузки. Пациенты были поделены на 3 группы - ВН <500 копий/мл (группа 1), 500-100000 копий/мл (группа 2); >100000 копий/мл (группа 3). Для исключения влияния стадии заболевания на результаты сравнения был проведен анализ отдельно для пациентов с III и отдельно для пациентов с IVA стадией заболевания. Никто из пациентов не получал ВААРТ. Результаты сравнения представлены в таблицах 4-6.

Таблица 4 — Сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с Ш стадией заболевания в зависимости от вирусной нагрузки, (М±ш)

Показатели Группа I (ВН < 500 копий/мл) Группа 2 (ВН 500-100000 копий/мл) Группа 3 (ВН> 100000 копий/мл)

11=5 п=44 о=19

В-лимфоциты, % 4,09±1,66 3,24±0,26 2,10+0,29**

Н-лимфоциты, клсток/мкл 246,57+61,84 163,52+13,12 117,41+16,03*

'Г-хелперы, % 13,52±4,69 10,18+0,57 8,02+1,09**

'Г-хелперы, клеток/мкл 822,25+149,46 526,83+39,61* 456,63+66,57*

Моноциты CD 16-, % 6,57+0,48 8,31+0,32* 8,32+0,60

Моноциты CD 16+, % 0,45+0,09 1,01+0,08* 1,08+0,15*

Моноциты CD 16+, клеток/мкл 28,73±4,26 51,50+4,49* 65,37+9,96

Вирусная нагрузка, копий/мл 229,0±90,6 23252,0+4305,6* 410792,2+68603,5* **

Примечание: * • достоверность различий показателей в группах 2 и 3 по сравнению с группой 1 по и-критерию Маниа-Уитни: р<0,05 ** - достоверность различий показателей больных группы 3 по сравнению с [руппой 2 по и-критерию Манна-Унтни: р<0,05

Пациенты с III стадией ВИЧ-инфекции. По мере роста ВН снижается относительное и абсолютное число Т-хелперов и зрелых B-лимфоцитов. Общее число Т-лимфоцитов при этом достоверно не снижается, что можно объяснить компенсаторным увеличением числа лимфоцитов CD8+, которое часто наблюдается при ВИЧ-инфекции.

По мере роста ВН наблюдается увеличение числа моноцитов CD 16+. По утверждению Kim и коллег, репликация вируса - это движущая сила для экспансии CD16+ моноцитов (Kim W.K., Sun Y., Do H. et al. Monocyte heterogeneity underlying phenotypic changes in monocytes according to SIV disease stage H Journal of Leukocyte Biology. 2010. Vol. 87. P. 557-567).

Дополнительно был проведен анализ корреляционных связей вирусной нагрузки и субпопуляционным составом лейкоцитов в группе ВИЧ-инфицированных лиц с Ш стадией, не получающих ВААРТ.

В результате выявлены отрицательные связи уровня вирусной нагрузки с относительным и абсолютным количеством Т-хелперов и В-лимфоцитов. Выявлены положительные связи с относительным и абсолютным количеством незрелых В-клеток и моноцитов CD16+. Корреляционная связь ВН с незрелыми В-клетками слабая; с лимфоцитами CD4+, моноцитами CD16+ и зрелыми В-лимфоцитами - умеренная.

Таблица 5 — Корреляционные связи между уровнем вирусной нагрузки и субпопуляционным составом лейкоцитов у пациентов с 1П стадией ВИЧ-инфекции

Сравниваемые показатели Коэффициент корреляции, г

Вирусная нагрузка Т-хелперы (%) -0,30

(копий/мл) Г-хелперы (абс) -0,36

В-лимфоциты (%) -0,36

B-лимфоциты (абс) -0,45

Незрелые В-лимфоциты (%) 0,21

Незрелые В'лимфоциты (абс) 0,23

Моноциты CD 16+ (%) 0,30

Моноциты CD16+ (абс) 0,28

Пациенты с IVA стадией ВИЧ-инфекции. По мере роста ВН снижается абсолютное число лимфоцитов, Т-клеток, относительное и абсолютное число Т-хелперов, относительное число зрелых B-лимфоцитов и повышается относительное и абсолютное число незрелых B-клеток. Вероятно, на поздних стадиях ВИЧ-инфекции с высоким уровнем ВН общее число Т-клеток не поддерживается компенсаторным увеличением абсолютного числа лимфоцитов CD8+, что свидетельствует об истощении иммунологической реактивности организма при значительной антигенной нагрузке. Среди пациентов с IVA стадией не было найдено статистически достоверных корреляционных связей между вирусной нагрузкой и субпопуляционным составом лейкоцитов.

Таким образом, показано, что иммунологические нарушения, характерные для ВИЧ-инфицированных в сравнении со здоровыми людьми, усугубляются по мере роста вирусной нагрузки. Это проявляется в снижении относительного и абсолютного числа

лимфоцитов С04+ и В-клеток, общего числа лимфоцитов и Т-клеток. При этом повышается количество моноцитов СО 16+ и незрелых В-клеток.

Таблица б - Сравнительный анализ относительных показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с IVA стадией заболевания с учетом вирусной нагрузки, (М±ш)

Показатели Группа 1 (ВН < 500 копий/мл) Группа 2 (ВН 500-100000 копий/мл) Группа 3 (ВН> 100000 КОПИЙ/мл)

п=2 п=н п=9

Общее количество лимфоцитов, клеток/мкл 1846,58±198,91 1836,04±468,56 1486,70±87,29*

В-лимфоциты, % 4,14±1,66 3,24±0,66 2,49±0,32*

Т-лимфоциты, клеток/мкл 1674.00±199,00 1541,10±396,74 1290,00±75,43*

Т-хелперы, % 12,68±4,69 5,63±1,33 4,82±0,86*

Т-хелперы, клеток/мкл 528,00±149,46 334,50±93,57 232,57±24,40*

Незрелые В-лимфоциты, % 0,03±0,01 одьмиз* одз±о,п*

Незрелые В-лимфоциты, клеток/мкл 1,22±0,55 6,06±1,83* 10,26±4,09*

Вирусная нагрузка, копий/мл 378,00±90,69 20444,3±3939,9* 1115182,2± 573355,8 * **

Примечание: * - достоверность различий показателей в группах 2 и 3 по сравнению с группой 1 по и-критсрию Манна-Уитни: р<0,05 ** - достоверность различий показателей больных группы 3 по сравнению с группой 2 по и-критерию Мшша-Уитни: р<0,05

4. Анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом уровня Т-хелперов

Было изучено изменение субпопуляционного состава лейкоцитов, сопровождающее падение уровня Т-хелперов. Анализ проводился отдельно для пациентов с III и IVA стадиями заболевания, не получающих ВААРТ. Пациенты были разделены на 3 группы: с числом лимфоцитов CD4+ более 500 клеток/мкл (группа 1), 200-500 клеток/мкл (группа 2), менее 200 клеток/мкл (группа 3). Результаты сравнения представлены в таблицах 7-10.

Пациенты с 1П стадией ВИЧ-инфекции. По мере снижения числа Т-хелперов наблюдается снижение абсолютного числа лейкоцитов (группа 2 относительно группы 1), лимфоцитов, Т- и NK-клеток. Это происходит главным образом за счет снижения числа лимфоцитов CD4 - основной мишени вируса. При этом происходит снижение доли лимфоцитов, Т- и NK-клеток - в основном, вследствие падения уровня Т-хелперов.

Снижение числа Т-хелперов сопровождается падением абсолютного числа В-клеток (группы 2 и 3 относительно группы 1) при одновременном увеличении относительного числа ранних В-клеток (группа 3 относительно группы 1).

Таблица 7 — Сравнительный анализ показателей иммунной системы и вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных лиц с III стадией заболевания с учетом уровня Т-хелперов, (М±т)

Показатели Группа 1 (CD4 > 500 клеток/мкл) Группа 2 (CD4 200-500 клеток/мкл) Группа 3 (CD4 < 200 клеток/мкл)

п=29 п=35 п=4

Общее количество лейкоцитов, ьлеток/мкл 6220,74+320,91 5128,46+314,05* 4635,07+975,32

В-лммфоциты, клеток/шел 182,77+19,83 139,72+12,78* 104,42+9,48*

Т- и ЫК-клетки С016-, % 30,24+2,19 29,06+1,61 15,14+4,08* **

Т- и ЫК-клетки С016-, клеток/мкл 1852,89+172,70 1480,39+128,83* 656,56+133,91* **

Т-лимфоциты, клеток/мкл 1980,33+147,61 1566,66+118,30* 760,33+154,62* **

Т-хелперы, % 32,36+1,71 21,56+1,12* 14,87+2,47*

Т-хелперы, клеток/мкл 753,83+47,82 381,93+13,92* 131,00*10,97* **

Т- и №С-клетки, % 33,98±2,22 33,30+1,61 17,08+4,38* **

Т- и ЫК-клстки, клеток/мкл 2074,23+173,69 1700,07+138,25* 747,30+150,30* **

Общее количество лимфоцитов, % 37,13+2,35 36.19+1,67 19,43+4,53* **

Общее количество лимфоцитов, клеток/мкл 2256,99+174,52 1839,79+141,12* 851,72+154,05* **

Моноциты СШ6+, % 0,81+0,08 1,08+0,09* 1,43+0,57*

Незрелые гранулоциты, клеток/мкл 36,69+7,76 22,87+6,16* 29,62+7,76

Зрелые нейтрофилы, % 50,39+2,56 49,68+1,68 65,50+6,23**

Незрелые В-лимфоциты, % 0,08+0,01 0,11+0,03 0,14+0,06*

Вирусная нагрузка, копий/мл 62708+25437 182832+53043* 201166+86944

* - достоверность различий показателей в группах 2 и 3 по сравнению с труппой 1 ** - достоверность различий показателей больных группы 3 по сравнению с группой 2

Также было выявлено увеличение относительного количества моноцитов СБ16+ в группах 2 и 3 относительно группы 1. Возможно, изменение концентраций Т-хелперов и моноцитов СО 16+ не связано друг с другом напрямую, а является

следствием увеличения вирусной нагрузки. Однако, существуют доказательства того, что повышение количества моноцитов CD16+ при ВИЧ-инфекции происходит до снижения числа Т-хелперов (Fischer-Smith Т., Tedaldi Е.М., Rappaport J. CD163/CD16 coexpression by circulating monocytes/macrophages in HIV: potential biomarkers for HIV infection and AIDS progression // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 2008. Vol. 24. P. 417421.). По информации Ancuta P. et al., «воспалительные» моноциты CD 16+ способны придать покоящимся (поэтому резистентным к вирусу) Т-клеткам восприимчивость к ВИЧ-инфекции за счет продукции ряда хемокинов (Ancuta P., Autissier P., Wurcel А. et al. CD 16+ Monocyte-Derived Macrophages Activate Resting T Cells for HTV Infection by Producing CCR3 and CCR4 Ligands // Journal of Immunology. 2006. Vol. 176. P. 57605771).

Выявленное увеличение вирусной нагрузки в группе 2 относительно группы 1 позволяет предположить, что первичным изменением является усиление вирусной репликации, которое ведет к снижению уровня Т-хелперов и B-лимфоцитов, а также является движущей силой для экспансии моноцитов CD 16+.

Дополнительно был проведен анализ корреляционных связей числа Т-хелперов с вирусной нагрузкой и субпопуляционным составом лейкоцитов в той же группе ВИЧ-инфицированных лиц с П1 стадией, не получающих ВААРТ (таблица 8).

Таблица 8 - Корреляционные связи между уровнем лимфоцитов CD4+ и субпопуляционным составом лейкоцитов и вирусной нагрузкой у пациентов с III стадией ВИЧ-инфекции

Сравниваемые показатели Коэффициент корреляции, г

Лимфоциты Общее количество лейкоцитов (абс) 0,37

CD4+ Общее количество лимфоцитов (%) 0,35

(клеток/мкл) Общее количество лимфоцитов (абс) 0,53

Т-лимфоциты (%) 0,32

Т-лимфоциты (абс) 0,59

Т-хелперы (%) 0,73

В-лимфоциты (абс) 0,39

Предшественники В-лимфоцитов (%) -0,30

Общее количество моноцитов (%) -0,25

Моноциты СО 16+ (%) -0,27

Общее количество нейтрофилов (%) -0,26

Вирусная нагрузка (копий/мл) -0,39

В результате выявлены отрицательные корреляционные связи уровня Т-хелперов с вирусной нагрузкой, относительным числом незрелых В-клеток, процентным содержанием моноцитов (в том числе, СО 16+) и нейтрофилов. Выявлены положительные связи с общим числом лейкоцитов, относительным и абсолютным количеством лимфоцитов (в том числе Т-лимфоцитов), относительным числом Т-

хелперов, абсолютным числом B-лимфоцитов. Сила корреляционной связи во всех случаях оценивается как средняя.

Пациенты с IVA стадией ВИЧ-инфекции. В данной группе пациентов были вьшвлены тенденции, схожие с таковыми у пациентов с Ш стадией. Так, снижение числа Т-хелперов сопровождается снижением относительного и абсолютного числа лимфоцитов, B-лимфоцитов, Т- и NK-клеток (в том числе CD16-), увеличением доли нейтрофилов.

Таблица 9 - Сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с IVA стадией с учетом уровня Т-хелперов, (М+т)

Показатели Группа 1 (CD4 > 500 клеток/мкл) Группа 2 (CD4 200-500 клеток/мкл) Группа 3 (CD4 < 200 клеток/мкл)

ъ=4 п=10 п=8

Общее количество лимфоцитов, клеток/мкл 3299,31±1162,79 1659,94±84,47* 1062,35+192,70* **

В-лимфоциты, клеток/мкл 302,23+114,24 129,11+17Д7* 104^34+18,23*

Т-лимфоциты, клеток/мкл 2820,00±914,73 1456,88+78,94* 857,14+172,99* **

Т- и МС-клетки СБ 16-, % 41,92±3,50 29,19+3,23* 17,54+3,13* **

Т- и ЫК-клстки СО 16-, клеток/мкл 2774,47±981,36 1390,02+81,22* 829,23+167,80* **

Т-хелиеры, % 23,50+2,90 18,21 ±0,91 10,01+2,64* **

Т-хслперы, клеток/мкл 717,33+133,08 308,13420,83* 126,29+32,31* **

Т- и >ЛС-клстки, % 45,42±3,29 31.8fcL3.144 20,57+3,57* **

Т- и ЫК-клетки, клеток/мкл 2997,07±1048,86 1530,83±78,26* 958,01+187,69* **

Общее количество лимфоцитов, % 49,94±3,68 34,40+3 ДО* 23,44+3,55* **

Общее количество нейтрофилов, % 37,53+4,74 52,48+4,09 58,82+5,40*

* - достоверность различий показателей в группах 2 и 3 по сравнению с группой 1 по и-критерию Манна-Унтни: р<0,05 ** - достоверность различий показателей больных группы 3 по сравнению с группой 2 по II-критерию Манла-Уитни: р<0,05

Для ВИЧ-инфицированных лиц с IV А стадией также был проведен анализ корреляционных связей числа Т-хелперов с вирусной нагрузкой и субпопуляционным составом лейкоцитов (таблица 10). В результате были выявлены отрицательные связи средней силы между количеством Т-хелперов и незрелых В-клеток и положительные связи средней силы с числом зрелых В-лимфоцитов. Выявлены сильные положительные связи между числом Т-хелперов и общим числом лимфоцитов, Т-лимфоцитов, Т- и >ЛС-клеток, относительным числом Т-хелперов. Отметим, что связь уровня Т-хелперов с количеством Т-лимфоцитов и общим числом лимфоцитов среди

пациентов с Ш стадией ВИЧ-инфекции была средней силы, что можно объяснить частичной компенсацией числа Т-клеток увеличением концентрации лимфоцитов CD8. Вероятно, концентрации лимфоцитов CD4, зрелых и незрелых В-клеток имеют косвенную взаимосвязь через вирусную нагрузку.

Таблица 10 - Корреляционные связи между уровнем лимфоцитов CD4+ и субпопуляционным составом лейкоцитов у пациентов с IVA стадией ВИЧ-инфекции

Сравниваемые показатели Коэффициент корреляции, г

Лимфоциты CD4+ (клеток/мкл) Общее количество лимфоцитов (%) 0,71

Общее количество лимфоцитов (абс) 0,91

Т-лимфоциты (%) 0,76

Т-лимфоциты (абс) 0,89

Т-хелперы (%) 0,91

В-лимфоциты (абс) 0,58

Предшественники В-лимфоцитов (%) -0,53

Таким образом, показано, что иммунологические нарушения, характерные для ВИЧ-инфицированных в сравнении со здоровыми людьми, усугубляются по мере истощения популяции лимфоцитов CD4+. Это проявляется в увеличении числа моноцитов CD16+ и незрелых B-клеток и в снижении концентрации зрелых В-лимфоцитов. Можно предположить, что причиной наблюдаемых изменений является нарастание вирусной нагрузки, что приводит к пропорциональному усугублению иммунологических нарушений у ВИЧ-инфицированных лиц.

S. Анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с IVA стадией заболевания с учетом проводимой ВААРТ

Было изучено влияние ВААРТ на состав лейкоцитов крови ВИЧ-инфицированных лиц с IVA стадией заболевания. В группу 1 включены 22 пациента, не получающих ВААРТ, в группу 2-62 пациента, регулярно получающих терапию. Результаты сравнения представлены в таблице 11.

Зафиксировано снижение ВН в крови пациентов, получающих ВААРТ, что и является первичной целью терапии. Отмечено повышение относительного и абсолютного количества Т-хелперов, происходящее вследствие снижения вирусной нагрузки, в чем проявляется иммунологический ответ на терапию.

В группе лиц, получающих ВААРТ, наблюдается повышение относительного и абсолютного числа B-клеток при одновременном снижении уровня незрелых В-лимфоцитов. Вероятно, улучшение состояния B-клеточного звена связано со снижением количества вируса в крови, что сопряжено со снижением хронической стимуляции лимфоцитов - фактора апоптоза.

Таблица 11 - Сравнительный анализ показателей иммунной системы и вирусной нагрузки у ВИЧ-ннфицированных лиц с ГУЛ стадией заболевания с учетом проводимой ВААРТ, (М±т)

Показатели Группа 1 (стадия IVA ВААРТ -) Группа 2 (стадия IVA ВААРТ +)

п=22 п=62

В-лимфоциты, % 3,00+0,39 3,90+0,31

В-ли мфоциты, клеток/мкл 148,33+25,34 192,50±17,45

Т-лимфоциты, % 82,06±2,14 77,25+1,40

Т-хелперы, % 15,91±1,67 21,97±1,19

Т-хелпсры, клеток/мкл 305,61±54,48 391,73+24,85

Моноциты СО 16+, % 1,44+0,26 0,93+0,11

Моноциты СО 16+, клеток/мкл 66,16+9,98 43,37+4,58

Незрелые гранулоциты, % 0.92+0,37 0,31±0,06

Незрелые В-лимфоциты, % 0,21±0,08 0,07+0,01

Незрелые В-лимфоциты, клеток/мкл 7,42+1,91 3,47+0,33

Вирусцая нагрузка, кошш/мл 445060^248870 2306+14399

Отмечено уменьшение относительного и абсолютного количества «воспалительных» моноцитов в группе 2. Вероятно, это связано с подавлением репликации вируса и уменьшением вирусной нагрузки на фоне ВААРТ. В группе 2 зафиксировано снижение относительного количества незрелых гранулоцитов. Вероятно, это связано с подавлением вторичных заболеваний у пациентов, у которых на фоне антиретровирусной терапии снизилась вирусная нагрузка, повысился уровень Т-хелперов и, следовательно, улучшился иммунный статус.

Применение ВААРТ в первую очередь направлено на снижение количества вируса в крови, что в дальнейшем приводит к повышению уровня Т-хелперов. Данные изменения зафиксированы в группе пациентов, регулярно получающих ВААРТ (снижение вирусной нагрузки, увеличение уровня клеток CD4+). Однако, выявлены и другие позитивные эффекты ВААРТ: увеличение количества зрелых В-лимфоцитов при одновременном снижении числа ранних B-клеток в периферической крови, снижение количества «воспалительных» моноцитов и незрелых гранулоцитов. Полученные данные позволяют говорить о том, что ВААРТ позитивно сказывается практически на всех субпопуляциях лейкоцитов, вовлеченных в патогенез ВИЧ-инфекции.

6. Анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с учетом сопутствующих патологий в виде хронического вирусного гепатита С и внутривенного употребления опиоидных наркотиков

Для исключения влияния стадии заболевания на результаты нами было проведено исследование отдельно для III и отдельно для IVA стадии заболевания. Для

исключения влияния приема ВАРРТ в исследование включены пациенты, не получающие терапию. Результаты сравнения представлены в таблицах 12-13.

Среди пациентов с П1 стадией ВИЧ-инфекции было 25 человек без сопутствующих патологий в виде ХВГС и наркомании (ПИН-, ХВГС-) и 17 человек с таковыми патологиями (ПИН+, ХВГС+). Среди пациентов с IV А стадией ВИЧ-инфекции было 5 человек с сопутствующими патологиями в виде ХВГС и наркомании и 15 человек без таковых патологий.

Таблица 12 - Сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с П1 стадией заболевания с учетом сопутствующих патологий, (М±ш)

Показатели Группа 1 (ПИН-, ХВГС-) Группа 2 (ПИН+, ХВГС+)

п=25 п=17

Т-хелперы, % 27,75+1.63 20,37+1,77

Т-хелперы, клеток/мкл 536,45+31,39 405,43+47,84

Среди пациентов как с III, так и с IVA стадией ВИЧ-инфекции, основными отличиями группы 2 относительно группы 1 стали более низкие концентрации Т-хелперов. Таким образом, можно отметить негативное влияние коморбидной патологии в виде ХВГС и наркотической зависимости на течение ВИЧ-инфекции, что выражается в более выраженном дефиците лимфоцитов CD4+.

Таблица 13 - Сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с IVA стадией заболевания с учетом сопутствующих патологий, (М±ш)

Показатели

Т- и NK-клетки CD 16-, %

Т- и NK-клетки CD 16-, клеток/мкл

Т- и NK-клетки, %

Общее количество лимфоцитов

Т-хелперы, клеток/мкл

Группа 1 (ПИН-, ХВГС-) п=5

39,60±4,09

2327,21±793,33

42,56+4,31 45,89+4,87

543,00±150,71

Группа 2 (ПИН+, ХВГС+) п=15

22,29+3,12*

1146,21+158,68*

25,15±3,23*

28,13+3,33*

246,50+50,67*

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей научной работе были изучены особенности субпопуляционного состава лейкоцитов крови ВИЧ-инфицированных лиц, как при естественном течении заболевания, так и на фоне ВААРТ. Зафиксировано изменение количества лимфоцитов

CD4+, «воспалительных» моноцитов CD16+, зрелых и незрелых B-лимфоцитов по мере прогрессирования ВИЧ-инфекции, а также при проведении ВААРТ.

У потребителей инъекционных наркотиков с коинфекцией ВИЧ/ВГС наблюдается более выраженный дефицит лимфоцитов CD4+ по сравнению с лицами с моноинфекцией ВИЧ, не принимающими наркотики.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что субпопопуляционные сдвиги лейкоцитарных клеток при ВИЧ-инфекции не ограничиваются снижением уровня Т-хелперов. Помимо этого наблюдается нарастание уровня моноцитов CD 16+ и незрелых гранулоцитов, а также увеличение содержания незрелых В-клеток при одновременном снижении числа зрелых В-лимфоцитов.

2. Переход ВИЧ-инфекции из субклинической стадии 1П в стадию вторичных заболеваний IVA сопряжен с повышением вирусной нагрузки и снижением числа лимфоцитов CD4+. Достоверного изменения концентраций В-клеток, моноцитов и гранулоцитов не наблюдаются.

3. У ВИЧ-инфицированных лиц при естественном течении ВИЧ-инфекции с ростом вирусной нагрузки и снижением концентрации Т-хелперов ассоциируется увеличение уровня моноцитов CD 16+, а также снижение числа зрелых B-лимфоцитов и повышение количества незрелых В-клеток.

4. При использовании высокоактивной антиретровирусной терапии помимо снижения вирусной нагрузки и увеличения количества Т-хелперов отмечается падение уровня моноцитов CD 16+ и незрелых гранулоцитов, а также повышение содержания зрелых B-лимфоцитов при одновременном снижении числа незрелых В-клеток в периферической крови.

5. Сопутствующие патологии в виде хронического вирусного гепатита С и внутривенного употребления опиоидных наркотиков приводят к более выраженному дефициту Т-хелперов у ВИЧ-инфицированных лиц.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Протокол CytoDiff может быть использован для мониторинга иммунологических нарушений при ВИЧ-инфекции. В дополнение к стандартной методике определения количества клеток CD4+ и вирусной нагрузки система CytoDiff помогает оценивать иммунный статус ВИЧ-инфицированных пациентов, а также иммунологическую эффективность ВААРТ.

2. Число «воспалительных» моноцитов CD 16+ является критерием оценки эффективности ВААРТ: помимо увеличения количества Т-хелперов эффективная антиретровирусная терапия вызывает снижение уровня моноцитов CD16+. Оценка количества «воспалительных» моноцитов может являться более

ранним маркером иммунологической эффективности ВААРТ по сравнению с количеством лимфоцитов CD4+.

3. Потребители инъекционных наркотиков с коинфекцией ВИЧ/ВГС требуют более регулярного обследования на уровень лимфоцитов CD4+, так как у них отмечается более интенсивное истощение популяции Т-хелперов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Решетников, И.В. Определение посредством проточной цитометрии и системы CytoDiff уровней субпопуляций лейкоцитов у больных ВИЧ-инфекцией с 1П стадией заболевания / И.В. Решетников Н Сборник IV Международного молодежного медицинского конгресса. -СПб., 2011, —С. 117.

2. Решетников, И.В. Изучение влияния высокоактивной антиретровирусной терапии на иммунный статус больных ВИЧ-инфекцией с использованием проточной цитометрии и системы CytoDiff / И.В. Решетников, В.Э. Цейликман, C.B. Квятковская, Т.В. Миркина // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2012. - №4. - С. 213.

3. Решетников, И.В. Определение посредством проточной цитометрии и системы CytoDiff уровней субпопуляций лейкоцитов у больных ВИЧ-инфекцией / И.В. Решетников, В.Э. Цейликман, Н.В. Смирнова // Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - М., 2012. - С. 317.

4. Решетников, И.В. Соотношение между субпопуляциями лейкоцитов у больных ВИЧ-инфекцией / И.В. Решетников, C.B. Квятковская, Т.В. Миркина, Н.В. Смирнова, В.Э. Цейликман // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2012. - №2. - С. 27-28.

5. Решетников, И.В. Сравнительный анализ гематологических показателей ВИЧ-инфицированных лиц с III и IV стадией заболевания / И.В. Решетников, В.Э. Цейликман // Известия высших учебных заведений. Уральский регион. — 2012. -№4.-С. 170-174.

6. Решетников, И.В. Влияние хронического вирусного гепатита С на иммунный статус ВИЧ-инфицированных потребителей инъекционных наркотиков / И.В. Решетников // Современные проблемы науки и образования.-2014. — № 4.-С. 5-11.

7. Квятковская, C.B. Использование панели CytoDiffTM для мониторинга эффективности антивирусной терапии у ВИЧ-инфицированных лиц / C.B. Квятковская, Е.А. Сухачева, И.В. Решетников, Н.В. Долгова, О.Б. Цейликман, В.Э. Цейликман // Клиническая лабораторная диагностика. -2014.- №7. -С. 58-61.

8. Bouvier, G. Evaluation of CytoDiff extended white blood cells differential on HIV patients / G. Bouvier, I. Reshetnikov, S. Kvyatkovskaya, D. Faye, T. Mirkina, V.

Tseilikman, Б. Sukhacheva II International Journal of Laboratory Hematology. -2012.-Vol. 34.-P. 44-45. 9. Tseylikman, V.E. CytoDiff™ panel allowing monitoring effectiveness of the highly active antiretroviral therapy on HIV infected patients / V.E. Tseylikman, I. Reshetnikov, G. Bouvier, S. Kvyatkovskaya, D. Faye, T. Mirkina, E. Gautherot, E. Shatirko, E. Sukhacheva // Book of abstracts of 15th International Congress of Immunology. - Milan, 2013. - P. 559-560.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

BAAPT — высокоактивная антиретровирусная терапия

ВИЧ - вирус иммунодефицита человека ВН- вирусная нагрузка

ПИН - потребители инъекционных наркотиков ХВГС - хронический вирусный гепатит С ECD - фикоэритрин -Техасский красный FITC - флуоресцеина изотиоцианат РС5 - фикоэритрин-цианин 5 РС7 - фикоэритрин-цианин 7 РЕ - фикоэритрин RDI - R-фикоэритрин

На правах рукописи

Решетников Игорь Владимирович

ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЛЕЙКОЦИТАРНЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫХ ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ

14.03.09 - Клиническая иммунолога!, аллергологи*

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Челябинск - 2015

Поплясано в печпъ 17.02.201 S Формиг бОхМ 1/16. Ven. ют. л 1,4 Тираж 100 мо. Заказ № 122

Ora отгаяо ■ типографии «Скги-Пршгг»,

г. Челлбинос, ул. Энгельса. 61 А

2014270231