Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние антиоксидантов на некоторые показатели функционального состояния эритроцитов при эндотоксикозе



На правах рукописи

ФАТЕЕВА Наталья Викторовна

ВЛИЯНИЕ АНТИОКСИДАНТОВ НА НЕКОТОРЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ЭНДОТОКСИКОЗЕ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

САРАНСК-2002

Работа выполнена на кафедрах факультетской хирургии и биохимии Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева

Научный руководитель: доктор медицинских наук

профессор А.П. Власов; Научный консультант: доктор биологических наук профессор В.А. Трофимов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор Л.А. Балыкова; доктор медицинских наук профессор А.Л. Ураков

Ведущая организация: Российский государственный медицинский университет

Защита состоится «_2Ь_» __2002 года в_часов

На заседании диссертационного совета К 212.117.02 при Мордовском государственном университете им. Н.П. Огарева (430000, г. Саранск, ул. Ульянова, 21 «А»),

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

Автореферат разослан « » ФЕЬРРАа_2002 года

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат медицинских наук доцент С.А. Козлов

/^^г $2 О

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В настоящее время эндогенной интоксикации отводится важная роль в патогенезе различных заболеваний. Это один из важнейших факторов, определяющих течение и тяжесть многих заболеваний (Васильев И.Т., 1995; Кузнецов H.H. и др., 1996; Уткин М.М., 1996). Доказано, что мембранодест-руктивные процессы являются одними из существенных в развитии эндотоксемии (Михайлович В.А. и др., 1993). Эритроцитам отводится одна из главных ролей в патогенезе указанных расстройств. В молекулярной структуре плазматической мембраны этих клеток возникают структурные нарушения, приводящие к угнетению их функциональной активности (Эстрин В.В. и др., 1993; Царапкин И.М., Бес-смельцев С.С., 1997). В работах многих авторов установлена корреляционная зависимость между изменениями свойств мембран эритроцитов и клеточных мембран различных органных структур, что позволяет использовать их в качестве естест-. венной модели для исследования общих характеристик всех биомембран (Михайлович В.А. и др., 1993; Заводник И.Б. и др., 1995; Бессмельцев С.С. и др. 1997).

Одними из универсальных механизмов повреждения клеточных мембран, в том числе и при остром воспалении, являются свободно-радикальные процессы липопереокисления (Алмазов В.А. и др., 1992; Конюхова С.Г. и др., 1993, Петросян Э.А. и др., 1998, Tokyay R. et а!., 1999). Поэтому фармакологическая коррекция метаболических и функциональных нарушений клеток может быть осуществлена через управление интенсивности перекисного окисления липидов (Трофимов В.А. и др., 1999). Это явилось основанием для изучения влияния препаратов, обладающих антиоксидантным действием на некоторые показатели, характеризующие метаболические и функциональные особенности эритроцитов при эндотоксикозе. В качестве модельного заболевания выбран острый перитонит, в патогенезе которого, как известно, эндогенная интоксикация выступает ведущим звеном (Гостищев В.К. и др., 1992). Повреждение эритроцитов при этой патологии рассматривается как интегральный показатель, отражающий тяжесть эндотоксикоза (Котлов И.С. и др., 1996). Однако до настоящего времени роль этих клеток в реализации фармакологических эффектов антиоксидантов изучена недостаточно.

Цель работы. Изучить влияние препаратов, обладающих антиоксидантной активностью, с различными механизмами действия (альфа-токоферола ацетата, димефосфона, мексидола, аплегина) на некоторые показатели функционального состояния эритроцитов при эндотоксикозе.

Основные задачи работы. 1. Изучить некоторые показатели, характеризующие метаболические и функциональные особенности эритроцитов, в норме и при остром перитоните. Определить зависимость функционального состояния эритроцитов от выраженности эндогенной интоксикации, активности свободно-радикальных реакций ПОЛ, фосфолипазы А2.

2. Исследовать влияние альфа-токоферола ацетата, димефосфона, мексидола и аплегина на некоторые показатели функционального состояния эритроцитов при различных этапах течения экспериментального перитонита (выраженности эндогенной интоксикации).

3. Изучить влияние тестируемых препаратов на некоторые показатели свободно-радикальных реакций перекисного окисления липидов и активность фосфо-липазы А2 эритроцитов при остром перитоните.

4. Провести сравнительный анализ фармакологических эффектов препаратов на функциональное состояние эритроцитов и расстройства гомеостаза на орга-низменном уровне. Определить некоторые механизмы стабилизирующего действия исследованных лекарственных средств на биомембрану эритроцитов.

Научная новизна. 1. Показано, что при эндогенной интоксикации, развившейся при экспериментальном перитоните, увеличивается неспецифическая проницаемость, ухудшается деформабельность эритроцитов. Выявлено, что выраженность этих изменений находится в прямой корреляционной зависимости от интенсивности свободно-радикальных реакций ПОЛ и активности фосфолипазы А2 как плазмы крови, так и самих эритроцитов.

2. Установлено, что альфа-токоферола ацетат, димефосфон, мексидол, апле-гин способствуют стабилизации мембраны эритроцитов, выражающейся в снижении их неспецифической проницаемости иувеличении.деформабельности.

3. Показано, что одним из Механизмов коррекции функционального состояния эритроцитов тестируемыми лекарственными препаратами выступает их способность снижать интенсивность процессов ПОЛ и активность фосфолипазы А2. Выявлено, что немаловажное значение в мембраностабилизирущем эффекте препаратов определено их свойством уменьшать выраженность эндогенной интоксикации.

4. При сравнительном исследовании эффективности препаратов из различных фармакологических групп установлена высокая активность мексидола и ди-мефосфона. При их включении в комплексную терапию острого перитонита восстановление функционального и метаболического состояния эритроцитов наблюдается на протяжении всего периода наблюдения.

Практическая ценность работы. Экспериментальными исследованиями установлено, что о тяжести патологического процесса при остром перитоните можно судить по деформабельности и сорбционной способности эритроцитов, выраженности процессов перекисного окисления липидов и активности фосфолипазы а2 в них.

С целью коррекции нарушений функционального состояния эритроцитов при эндотоксикозе в патогененическую терапию следует включать лекарственные средства, обладающие антиоксидантным и мембраностабилизирующим эффектом.

Внедрение в практику. Результаты исследований внедрены в практическую деятельность городской клинической больницы скорой медицинской помощи г. Саранска, включены в программу обучения студентов на кафедрах фармакологии и факультетской хирургии медицинского факультета Мордовского госуниверситета имени Н.П. Огарева.

Положения, выносимые на защиту

1. При эндогенной интоксикации, развившейся на фоне экспериментального перитонита, функциональная активность эритроцитов ухудшается, что проявляется в снижении их деформабельности и увеличении неспецифической проницаемости. Выраженность этих изменений находится в прямой корреляционной зависимости

г

со степенью эндогенной интоксикации, интенсивностью свободно-радикальных реакций ПОЛ и активностью фосфолипазы Л2 плазмы крови и эритроцитов.

2. При перитоните лекарственные препараты, обладающие антиоксидантным действием (альфа-токоферола ацетат, димефосфон, мексидол, аплегин), приводят к стабилизации мембраны эритроцитов, выражающейся в уменьшении неспецифической проницаемости и увеличении деформабелыюсти.

3. Из тестированных препаратов наибольшей активностью обладают мексидол и димефосфон: существенный фармакологический эффект в коррекции функционального и метаболического состояния эритроцитов наблюдается на протяжении всего периода наблюдения за животными.

4. Один из механизмов восстановления функционального состояния кровяных телец при остром перитоните обусловлен способностью препаратов регулировать интенсивность ПОЛ и активность фосфолипазы А2. Немаловажное значение в мембраностабилизирущем эффекте определено свойством лекарственных средств уменьшать выраженность эндогенной интоксикации.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на Огаревских чтениях - научно-практической конференции Мордовского университета (Саранск, 1999-2001), Российской научно-практической конференции "Рациональное использование лекарств" (Пермь, 2000), научной конференции молодых ученых Мордовского университета (Саранск, 1999-2001), Всероссийской научно-практической конференции "Новые технологии в медицине" (Ульяновск, 2000).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 научных работ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 185 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы (1-я глава), материала и методов исследования (2-я глава), результатов собственных исследований (3-я, 4-я, 5-я, 6-я, 7-я главы), обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, который включает 122 отечественных и 63 иностранных источников. Работа содержит 55-рисунков и 50 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы н методы исследования. В основу работы положены экспериментальные исследования на 55 взрослых беспородных половозрелых собаках обоего пола массой от 5,3 до 11,9 кг

Перитонит моделировали по способу А.П. Власова (1991) следующим образом. Под тиопентал-натриевым наркозом (0,04 г/кг массы) животным в брюшную полость шприцем вводили 20 % каловую взвесь из расчета 0,5 мл/кг массы тела животного. Через сутки выполняли лапаротомию, санацию брюшной полости и забор венозной крови. В контрольные сроки (1, 3, 5 суток) выполняли повторный забор венозной крови. В послеоперационном периоде животным проводили антибактериальную (внутримышечные инъекции 2 раза в сутки раствора канамицина из расчета 15 мг/кг массы животного), инфузионную терапию (внутривенные пне-дения 5% раствора глюкозы и 0,89% раствора хлорида натрия из расчета 50 мл/кг массы животного).

з

В зависимости от задач исследования экспериментальные животные были разделены на следующие группы.

Первая группа (12 животных): собакам моделировали перитонит и в динамике заболевания исследовали показатели эндогенной интоксикации, ПОЛ, активность фосфолилазы А2 и некоторые показатели функционального состояния биомембран эритроцитов.

В следующих сериях в комплексную терапию включали лекарственные средства, обладающие антиоксидантным эффектом.

Вторая группа (10 животных): исследовали фармакологические эффекты витамина Е. С этой целью собакам в раннем послеоперационном периоде ежедневно производились внутримышечные инъекции 10% раствора альфа-токоферола ацетата в масле из расчета 5 мг/кг массы тела.

Третья группа (11 животных): исследовали действие димефосфона. Животным ежедневно выполнялись внутривенные введения 15% раствора димефосфона из расчета 50 мг/кт массы тела.

Четвертая группа (10 животных): исследовали влияние мексидола. Животным ежедневно выполнялись внутривенные введения 5% раствора мексидола из расчета 10 мг/кг массы тела.

Пятая группа (12 животных): исследовали действие аплегина. Собакам ежедневно производились внутривенные введения 10% раствора аплегина из расчета 10 мг/кг массы тела животного.

Методы исследования, использованные в работе

Для характеристики физико-химических свойств альбумина определяли эффективную (ЭКА) и общую (ОКА) концентрацию альбумина в сыворотке крови флуоресцентным методом на специализированном анализаторе AKJ1-01 "Зонд". Затем рассчитывали резерв связывания ачьбумина и индекс токсичности плазмы (Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е., 1994).

Функциональное состояние биомембран эритроцитов оценивали путем определения их деформабельности (Федорова З.Д.. 1986) и сорбционной способности (Тогайбаев A.A. и др., 1988).

Содержание в плазме молек>л средней массы определяем спектрофотометрическим методом по наличию максимума поглощения при длине волны 250 нм (Пикуза О.И., Шакирова Л.З., 1994).

Интенсивность ПОЛ определяли по накоплению малонового диальдегида в реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) (Егоров Д.Ю., Козлов A.B., 1988).

Активность фосфолипазы Аг оценивали в среде, содержащей 10 ммоль трис-НСЬ-буфер (pH 8.0). 150 ммоль тритон Х-100. 10 ммоль СаСЬ и субстрат (1,2 ммоль). В качестве субстрата использовали фосфатидилхолины яичного желтка. Регистрацию каталитической деятельности фермента проводили по образованию свободных жирных кислот, определяемых потенциомет-рическим методом.

Антиокислительную активность липидов оценивали в модельных условиях с использованием в качестве прооксиданта с\льфата железа в концентрации 5 мкмоль (Трофимов В.А., 1995).

Активность каталазы определяли фотометрическим методом, основанным на способности перекисей образовывать стойкий окрашенный комплекс с молибдатом аммония (Королюк М.А., 1988).

Содержание белка устанавливали по методу Бредфорд (Гаспаров B.C., Дегтярь В.Г.,

1994).

Полученные цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики, с использованием критерия, t Стьюдента. Вычисления производили на CRU 199 MHz "Pentium-ММХ" с помощью программы МЕДСТАТ (автор B.J1. Акимов). Использован текстовый процессор Microsoft Word 97. Динамика показателей отражена на графиках, построенных с использованием программы электронных таблиц Microsoft Excel 97.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования, проведенные на фоне традиционной фармакотерапии, показали развитие выраженной интоксикации при остром перитоните уже с первых моментов появления патологического очага в организме, которая продолжала нарастать через сутки после оперативного вмешательства. Об этом свидетельствовало резкое (в 5,48 раз) увеличение индекса токсичности плазмы, повышение содержания молекул средней массы на 114,2 % (р<0,001), а также снижение эффективной концентрации и резерва связывания альбумина, отражающие степень заполненности активных центров этих молекул гидрофобными метаболитами (табл. 2).

Кроме того, немаловажную роль в развитии эндотоксикоза играет накопление высокотоксичных вторичных продуктов перекисного окисления липидов, активизирующегося при остром воспалении (Петухов Е.Б. и др., 1989, Дубикайтис АЛО. и др., 1994). В этот срок исследования содержание малонового диальдегида возрастало как в плазме крови (в 4,06 раза (р<0,01) по сравнению с исходом), так и в эритроцитах (в 2,53 раза (р<0,001) больше первоначального).

К 3 - 5-м суткам наметилась тенденция к уменьшению уровня эндогенной интоксикации, о чем говорило изменение показателей, отражающих ее гидрофильный и гидрофобный компоненты, которые к окончанию наблюдения за животными к первоначальным значениям не возвращались (табл. 1).

Интенсивность процессов липопереокисления в эти контрольные сроки также уменьшалась: содержание МДА в эритроцитах и плазме постепенно снижалось, но исходного уровня также не достигало, что косвенно позволило судить о стихании воспалительного процесса.

Важное место в инициации ПОЛ занимают ионы металлов с переменной валентностью, особенно ионы Ре2+ (Кузьменко Д.И., Лаптев Б.И., 1999) При Ре2+-индуцированном ПОЛ наблюдается подобная динамика содержания ТБК-активных продуктов. Однако количество МДА во все контрольные сроки исследования оказалось значительно выше аналогичных цифр, полученных при спонтанном ПОЛ, причем нарастание содержания МДА в эритроцитах происходило в меньшей степени, чем в плазме. Это свидетельствовало о наличии в плазме и эритроцитах в высокой концентрации промежуточных продуктов ПОЛ, превращение которых во вторичные инициируют ионы Ре2+.

Интенсификация перекисного окисления липидов сопровождалась ростом активности каталазы, пик которой наблюдался через сутки после лапаротомии. Затем активность этого фермента начинала уменьшаться и к 5-м суткам в плазме крови опускалась ниже исходного уровня. В эритроцитах же на третьи и пятые сутки лечения активность этого фермента хотя и была меньше, чем в первые, но оставалась выше первоначального значения.

Чрезмерная интенсивность ПОЛ на фоне снижения антиоксидантной активности может приводить к повреждению структуры фосфолипидного бислоя мембран (Микаелян Н.П. и др., 1997). Образование окисленных липидов и повышение концентрации внутриклеточного Са2+ за счет увеличения неспецифической проницаемости мембран при окислении ее компонентов вызывает активацию кальцийзависимой фосфолипазы А2. Этот фермент реализует свою функциональ-

ную активность несколькими способами: во-первых, способствует высвобождению арахидоновой кислоты, при метаболизме которой образуются биологически активные вещества, выступающие в качестве медиаторов воспаления (Гавриленко Г.А., Демин В.В. 1998; и Вагщиап е[ а1., 1994), во-вторых, образующиеся под ее влиянием свободные жирные кислоты и лизофосфолипиды, накапливающиеся в мембране, могут усиливать мембранодеструкгивное действие эндотоксинов.

Нами определено, что развитие острого перитонита сопровождается резким всплеском активности фосфолипазы А2 в эритроцитах и плазме крови, особенно через сутки после оперативного вмешательства. В эритроцитах она увеличивалась в 5,8 раза (р<0,001), а в плазме - в 13,4 раза (р<0,001). К окончанию периода наблюдения за животными активность этого фермента снижалась, но оставалась гораздо выше исходного значения.

Полученные данные подтверждают, что при интенсификации процессов ПОЛ при остром перитоните повышается активность фосфолипазы А2, что в свою очередь вызывает еще большее повреждение клеточных' мембран и липопротеиновых комплексов.

При остром перитоните наблюдалось увеличение сорбционной способности эритроцитов и ухудшение их деформабелыюсти, которое было, максимальным через сутки после оперативного вмешательства. Затем эти показатели постепенно восстанавливались, но исходного уровня к 5-м суткам лечения не достигали. Нами было показано, что выраженность этих изменений находится в корреляционной зависимости со степенью эндогенной интоксикации по гидрофильному и гидрофобному компонентам, интенсивностью свободнорадикальных реакций ПОЛ и активностью фосфолипазы А2 как плазмы крови, так и самих эритроцитов. Поэтому становится очевидной связь изменения показателей, отражающих функциональное состояние биомембран эритроцитов, с усилением в них ПОЛ, действие токсических продуктов которого вызывают изменения их жирнокислотного состава (увеличивается количество насыщенных и мононенасыщенных жирных кислот и снижается содержание полиненасыщенных), что приводит к увеличению "жесткости" мембраны и уменьшению деформабельности эритроцитов (Соболева М.К., Шарапов В.И., 1994). Кроме того, интенсификация перекисного окисления липидов вызывает деструкцию клеточных мембран, которая усугубляется действием фосфолипазы Аз, активизирующейся при остром воспалении, что приводит к повышению их неспецифической проницаемости (ТотПа Т. е1 а1., 1992, Васильев И.Т., 1995), что отражает повышение сорбционной способности эритроцитов.

В следующей серии опытов в комплекс лечебных средств был включен альфа-токоферола ацетат. Так же как и в контрольной группе, течение острого перитонита сопровождалось развитием эндогенной интоксикации, наиболее выраженной через сутки после начала лечения. Об этом свидетельствовали увеличение индекса токсичности плазмы в 4,05 раза (р<0,001), повышенное содержание молекул средней массы, а также уменьшение резерва связывания и эффективной концентрации альбумина. Однако индекс токсичности плазмы и содержание молекул средней массы на. фоне применения витамина Е было ниже, чем в серии исследований без использования этого препарата. В меньшей степени снижался резерв

связывания ,и эффективной концентрации альбумина. Подобная картина отмеча-

*

лась на протяжении всего срока наблюдения за животными. В дальнейшем уровень эндогенной интоксикации снижался, но исходного значения не достигал, что отражает динамика показателей гидрофильного и гидрофобного ее компонентов (табл. 2).

При исследовании влияния витамина Е на процесс ПОЛ было выявлено следующее: уровень ТБК-активных продуктов в первые сутки лечения в эритроцитах, как и в серии исследований без использования этого препарата, был максимальным (табл. 1).

Таблица 1

В.пшние витамина Е на некоторые показатели функционального состояния эритроцитов при остром перитоните (М±т)

Пока>атель я о. U Исход Перитонит (операции) Этапы наблюдения

1 сутки 3 суток 5 суток

МДА, нмоль/г белка I 2,80 ±0,12 6,08 ±0,34" 7,09±0,19' 5,63±0,07* 5,01±0,06*

II 6,21 ±0,02' р<0,05 4,97±0,30* р>0,05 4,90±0,58 р>0,05

Ге'*-МДА, и моль/г белка I 5,66 ±0,40 7,39 ±0,52' 9,19±0,17* 7,86±0,25* 7,20±0,22*

II 7, И ±0,13* р<0,001 6,47±0,37* р<0,05 6,4410,39* р>0,05

Активность каталазы, мгН.О^мин/г белка I 0,0144 ±0,000 7 0,0164 ±0,0014 0,0187 ±0,0003" 0,0162 ±0,0001 0,0164 ±0,0011

II 0,0191 ±0,0002* р>0,05 0,0166 ±0,0015 р>0,05 0,0138 ±0,0007 р>0,05

А|стивн0сть фосфолипазы А1ф мкмоль/с/г белка I 0,44 ±0,03 1,96 ±0,16* 2,57±0,11* 2,13±0,17* 1,71±0,П*

11 2,26±0,06* р<0.05 1,92±0,03* р>0,05 1,63±0,05* р>0,05

Сорбиионная способность эритроцитов, % I 39,54 ±0,29 48,84 ±0,54' 58,78±0,42' 52,27±0,28* 45,42±0,22*

II 52,58±0,28* р<0,001 46,10±0,08* р<0,001 40,1 б'±0.27 • р<0,001

Инлекс дефор-мабельности эритроцитов, усл. ед. I 0,76 ±0,03 0,58 ±0,03' 0,33±0,03* 0,54±0,04' 0,65±0,07*

II 0,44±0,03* р<0,001 0,55±0,04" р>0,05 0,69±0,05 р>0,05

Примечание: I - контрольная группа; II - опытная группа; * -достоверность по отношению к исходным данным; р - достоверность по отношен ню к данным контрольной группы.

и

В плазме крови, данные показатель хотя и превышал исходное значение, но оказался ниже, чем во время оперативного вмешательства. К 3-м суткам наблюдалось снижение содержания МДА в этих средах, а к 5-м суткам послеоперационного периода уменьшение основного вторичного продукта ПОЛ продолжалось, но оставалось выше первоначального значения.

Таким образом, витамины Е, являясь природным антиоксидантом, способствовал снижению интенсивности ПОЛ в эритроцитах и плазме крови во все контрольные этапы наблюдения.

Подобные изменения содержания ТБК-активных продуктов в эритроцитах и плазме наблюдались и приТе2+-индуцированном ПОЛ.

Таблица 2

Влияние тестированных препаратом на некоторые гидрофильные и гидрофобные показатели эндогенной интоксикации при остром перитоните (М±т)

Показатель Группа Исход Пернтонит , (операция) Этапы наблюдения

1 сутки 3 суток S суток

МСМ, усл.ед. I 0,37 ±0,02 0,77 ±0,01' 0,79±0,02* 0,72±0,03* 0,59±0,02*

11 0,69±0,02* 0,58±0,03* 0,39±0,02

III 0,67±0,02* 0,54±0,02* 0,35±0,02

IV . 0,63±0,02* 0!50±0,()Г 0,32±0,02

V 0,70±0,02* 0,53±0,03* 0,52±0,02*

ЭКА, г/л I 26,50 ±1,45 16,67 ±0,54' 11,33±0,41 * 13,33±0,41* 14,67±0,82*

II 13,0±0,71* 16,0±0,71" 20,0±0,71*

III 18,33±0^i" 22,33±0,41* 21,33±0,41*

IV 15,67±0,82* 16,33±0,41* 18,33±0,4l"

V 13,33±0,4l' 16,33±0,41* 16,67±0,82*

РСА, усл.сд. I 0,70 ±0,03 0,44 ±0,03' 0,30±0,05* 0.37±0,02* 0,42±0,02*

II 0,37±0,02* 0,45±0,02* 0,56±0,02*

III 0150±0,01* 0,С>1±0,02 0,58±0,02*

IV 0,43±0,03* 0,45±0.02* 0,50±0,02*

V 0,36±(!,02* 0,45±0,02* 0,46±0,01'

ИТ, усл.ед. I 0,42 ±0,09 1,25 ±0,18' 2,30±0,02* 1,70±0.03" 1,40±0,04*

II 1,70±0,02* 1,20±0,03" 0,80±0,0-Г

III 1,0±0,02* ' 0,73±0,06* 0,73±0,04"

IV 1,30±0,04* 1,20±0,()4" 1,0±0,04*

V 1,81±0,02° 1,22±0,01* 1,20±0,01*

ТБК-актикиые продукт ы, нмо.ть/г белка '1 0,54 ±0.12 1.78 ±0,07' 2,19±0,24* • 1,27±0.15* 1,03±0,07*

II 1,10±0,19* 0,77±0,08 0,61±0,06

III 0,62±0,<)7 0,56±0,03 0,41±0,05

IV 0,84±0,04 0.63±0,04 0,47±0,08

V 0,75±0,()5 0,55±0,04 | 0,50±0,01

Примечание: I - контрольная группа; II - V - опытные грипп,:, ' - достоперность по отношению к исходным данным; жирный шрифт - достоверность по отношению к данным контрольной группы.

Интенсификация реакций ПОЛ сопровождалась изменением активности ката-лазы, которая на фоне применения в лечении острого перитонита витамина Е была неоднозначной. В эритроцитах в первые и третьи сутки лечения активность этого фермента увеличивалась по сравнению с исходным показателем, но почти не отличалась от данных, полученных в серии исследований без использования этого препарата. К 5-м суткам активность катапазы резко падала, оказываясь ниже первоначального значения, чего не наблюдалось в контрольной серии исследований. В

плазме же активность этого фермента была максимальной в первые сутки лечения, а уже к третьим суткам послеоперационного периода она значительно уменьшилась и была ниже исходного уровня, продолжая падать к 5-м суткам применения этого препарата.

Полученные данные говорят о том, что альфа-токоферола ацетат уменьшает не только интенсивность, реакций липопереокисления, но и активность антнокси-дантного фермента каталазы.

Проведенные исследования показали способность витамина Е уменьшать активность фосфолипазы Аг- Как и в группе опытов без использования этого препарата активность фосфолипазы Аг была максимальной через сутки после начала лечения (в плазме крови она увеличивалась в 10,44 раза (р<0,001), а в эритроцитах -в 5,14 раза (р<0,001)) постепенно снижаясь в последующие сроки исследования, оставаясь значительно выше первоначального уровня к окончанию наблюдения за животными (табл. 1). Однако все полученные значения в данной экспериментальной серии были ниже в аналогичной группе опытов без использования в лечении альфа-токоферола ацетата. Следует отметить, что в плазме крови разница между показателями, полученными в одни и те же сроки в контрольной и опытной сериях, была более существенной, чем в эритроцитах, где данные, определяемые на фоне применения витамина Е, мало отличались от подобных, полученных без использования в этого препарата.

При активизации ПОЛ изменяются проницаемость и жирнокислотный состав мембраны, следствием чего является изменение свойств мембраны эритроцитов: снижается их деформабельность и увеличивается неспецифическая проницаемость. Витамин Е способствует нормализации этих процессов за счет взаимодействия с фосфолипидами биомембран, упорядочивая структуру мембраны эритроцитов (Бурлакова Е.Б. и др., 1998). Это подтверждают показатели деформабельности и сорбционной способности эритроцитов, изменения которых в группе опытов с применением витамина Е оказались менее выраженными, особенно к 5-м суткам лечения.

Таким образом, при использовании альфа-токоферола ацетата функциональные расстройства эритроцитов становятся менее выраженными.

При статистической обработке, получепных данных установлено, что между 'эффектами витамина Е по коррекции ПОЛ, фосфолипазной активности, эндогенной интоксикации и показателем!! функционального состояния биомембран эритроцитов существуют достоверные корреляционные связи.

Проведенные исследования по использованию в лечении острого перитонита дпмсфосфона показали следующее.

Опытами установлено снижение эндотоксемии. Так, на фоне применения ди-мефосфона содержание в плазме крови молекул средней массы во все контрольные сроки исследования было ниже, чем в серии опытов без использования этого препарата (табл. 2), меньше снижались эффективная концентрация и резерв связывания альбумина, индекс токсичности плазмы и уровень ТБК-активных продуктов возрастали не столь резко.

Димефосфон способствовал снижению реакций липопереокисления, о чем свидетельствует изменение содержания МДА в плазме крови и эритроцитах. На

фоне применения этого препарата отмечалось значительное снижение количества основного вторичного продукта ПОЛ во все контрольные сроки исследования (табл. 3).

Таблица 3

Влияние днмсфосфоиа на некоторые показатели функционального состояния эритроцитов при остром перитоните (М±П1)

Показатель Группа Исход Перитонит (операция) Этапы наблюдения

1 сутки 3 суток 5 суток

МДА, нмоль/г белка I 2,80 ±0,12 6,08 ±0,34' 7,09±0,19* 5,63±0,07" 5,01 ±0,06'

111 6,02±0,36* р<0,05 4,56±0,П' р<0,01 3,81 ±0,21' р<0,01

Ре1+-МДА, нмоль/г белка I 5,66 ±0,40 7,39 ±0,52' 9,19±0,17* ' 7,86±0,25* 7,20±0.22*

111 7,09±0,39* р<0,01 5,58±0,47 р<0,05 4,49±0,56 р<0,05

Активность каталазы, мгН202/мин/г белка I 0,0144 ±0,000 7 0,0164 ±0,0014 0,0187 ±0,0003" 0,0162 ±0,0001 . 0,0164 ±0,0011

111 0,0168 ±0,0010 р>0,05 0,0147 ±0,0008 р>0,05 0,0140 ±0,0007 р>0,05

Активность фосфолипазы А:. мкмоль/с/г белка I 0,44 ±0,03 1,96 ±0,16' 2,57±0,1Г 2,13±0,17* 1,71±0,11*

Ш 1,08±0,17* р<0,001 0,61±0,08 р<0,01 0,45±0,05 р<0,00!

Сорбиионная способность эритроцитов, % 1 39,54 ±0,29 48,84 ±0,54' 58,78±0,42* 52,27±0,28* 45,42±0,22*

III 54,14±0,37* р<0,001 45,30±0,24* р<0,001 39,63±0,39 р<0,001

Индекс де-формабсльно-сти эритроцитов, усл. ед. I 0,76 ±0,03 0,58 ±0,03' о,зз±о,оз' 0,54±0,04' 0,65±0,07*

III 0,48±0,06* р<0.001 0,64±0,05' р<0,05 0,72±0,05 р>0,05

Примечание: 1 - контрольная группа; Ш - опытная гр\ ппа,' - достоверность по отношению к исходным данным; р - достоверность по отношению к данным контрольной группы.

Интересно отметить, что в группе опытов с применением димефосфона в плазме количество МДА резко уменьшалось уже через сутки после начала лечения, к 3-м суткам снижалось почти до нормального значения, а на 5-е сутки послеоперационного периода было ниже первоначального уровня. В эритроцитах максимальная степень накопления этого токсического продукта отмечалась в первые сутки лечения, в последующие же сроки содержание МДА постепенно снижалось, но исходного уровня к окончанию наблюдения за животными не наблюдалось.

При Ре2+-индуцированном ПОЛ в эритроцитах наблюдалась следующая картина: содержание ТБК-активных продуктов на фоне применения димефосфона достигало нормы уже на 3-й сутки лечения, а к 5-м суткам после операции было ниже исходного уровня. В плазме крови уменьшение содержания МДА началось с

№

первых суток лечения и х 5-м суткам послеоперационного периода также было ниже первоначального значения.

Кроме того, димефосфон способствовал снижению активности каталазы, которая уже к 3-м суткам лечения в плазме крови и в эритроцитах опускалась почти до исходного уровня, а к пятым было даже меньше его, чего не наблюдалось в группе опытов без использования этого препарата.

При использовании димефосфона активность фосфолипазы А2 липолитиче-ского фермента оставалась высокой. Так, в первые стуки лечения в плазме крови активность ее была выше в 7,25 раза (р<0,001), а в эритроцитах - в 2,45 (р<0,05). Затем активность энзима постепенно падала, но к окончанию срока наблюдения за животными оставалась выше исходного значения. Следует отметить, что по сравнению с данными контрольных исследований активность фермента была существенно ниже на всех этапах периода наблюдения. Причем это относилось как к плазме крови, так и к эритроцитам.

Использование димефосфона в лечении острого перитонита оказало положительное влияние на деформабельность и сорбционную способность эритроцитов, которые к концу наблюдения восстанавливались почти до нормального уровня (табл. 3).

Таким образом, проведенные исследования убедительно доказали способность димефосфона уменьшать интенсивность ПОЛ, выраженность эндогенной интоксикации, снижать активность фосфолипазы А2. Возможно, эти эффекты свя-' заны с тем, что димефосфон обладает мембраностабилизирующим эффектом и частично блокирует трансмембранный транспорт ионов Са2+ (Цибулькина В.П., 1993), что вызывает уменьшение каталитической деятельности Са2*-зависимого фермента фосфолипазы А2.

Нами выявлены достоверные корреляционные связи между эффектами димефосфона корригировать ПОЛ и фосфолипазную активность, снижать уровень эн-дотоксемии, с одной стороны, и изменять показатели функционального состояния биомембран эритроцитов - с другой.

Применение мексидола в комплексном лечении острого перитонита также способствовало снижению выраженности эндогенной интоксикации. Об этом свидетельствовали увеличение резерва связывания и эффективной концентрации альбумина, а также менее выраженный подъем индекса токсичности плазмы на протяжении всего периода наблюдения за животными. Также снижался уровень молекул средней массы, который на 5-е сутки вплотную приближался к исходному значению (табл. 2). '

На фоне применения мексидола интенсивность реакций ПОЛ уменьшалась: в начальные сроки содержание ТБК-активных продуктов в эритроцитах и плазме крови достоверно снижалось, а к пятым - опускалось ниже первоначального значения, чего не наблюдалось в контрольной группе исследований.

При Ре2+-индуцированном ПОЛ количество МДА в эритроцитах и в плазме крови уменьшилось до первоначального уровня уже через 3-е суток после операции, а через 5 суток была значительно ниже его. Следует подчеркнуть, что результаты, полученные в данной экспериментальной серии, были существенно меньше аналогичных контрольной группы (табл. 4).

Использование в лечении острого перитонита мексидола способствовало снижению активности каталазы до нормального уровня в эритроцитах уже через трое суток после начала лечения, чего не наблюдалось на фоне традиционной фармакотерапии. В плазме крови падение активности этого антиоксидантного фермента по сравнению с контрольными данными наблюдалось в первые и третьи сутки лечения.

Таблица 4

Влииннс мексидола па некоторые показатели функционального состоянии эритроцитов мри остром перитоните (М±т)

Показатель я £ и Исход Перитонит (операция) 1 уны наблюдении

1 сутки 3 суток 5 суток

МДА, нчоль/г белка I IV 2,80 ±0,12 6,08 ±0,34' 7,09±0Д9" 5,63±0,07" 5,01±0,0б"

5,43±0,39" р<0,05 4,56±0,22* р<0,01 1,74±0,08' р<0,001

Ке!<-МДА, нмоль/г белка I 5,66 ±0,40 7,39 ±0,52' 9,19±0,17* 7,86±0,25' 7,20±0,22*

IV 7,06±0,15* р<0,001 5,34±0,14 р<0,001 3,80±0,15" р<0,001

Активность каталазы, мгНаОг/мнн/г белка I 0,0144 ±0,000 7 0,0164 ±0,0014 • 0,0187 ±0,0003' 0,0162' ±0,0001 0,0164 ±0,0011

IV 0,0160 ±0.0007 р<0,05 0,0143 ±0,0005 р<0,05 0,0101 ±0,0003' р<0,001

Активность фос- фолииаты А!, мкмоль/с/г белка I 0,44 ±0,03 1,96 ±0,16' 2,57±0,11* 2,13±0,!7* 1,71±0,1 Г

IV 1,26±0.17* р<0,01 0,74±0,08* р<0,01 0,53±0,11 р<0,01

Сорбцнонная способность эритроцитов, % I 39,54 ±0,29 48,824 ±0,54' 58,78±0.42' 52,27±0,28* 45,42±0,22*

IV 51,25±0,28* р<0,001 47,23±0.31* р<0,001 39,71±0,29 р<0,001

Индекс деформа-бельности эритроцитов, усл. ел. I 0,76 ±0,03 0,58 ±0,03' 0,33±0.03* 0,54±0,04* 0,65±0,07*

IV 0,60±0,02* р<0,001 0,66±0,03* р<0,001 0,72±0,03 р>0,05

Примечание: 1 - контрольная группа; IV - опытная группа; - достоверность по отношению к исходным данным; р - достоверность по отношению к данным контрольной группы.

Активность фосфолипазы Аг на фоне использования мексидола также снижалась. Об этом свидетельствовал меньший ее уровень во все контрольные сроки исследования. Однако к окончанию наблюдения за животными активность этого фермента исходного уровня не достигала.

При использовании в лечении острого перитонита мексидола сохранялась повышенная неспецифическая проницаемость эритроцитов и пониженная их дефор-мабельность. Тем не менее, на фоне применения препарата эти показатели изменя-

лись значительно меньше, чем при традиционной фармакотерапии, а к 5-м суткам лечения почти приближались к нормальным значениям (табл. 4).

Полученные экспериментальные данные позволяют сделать заключение о том, что мексидол оказывает положительное влияние на течение острого перитонита. Этот препарат, обладая антиоксидантными свойствами, способствует снижению интенсивности реакций ПОЛ. Кроме того, он уменьшает выраженность эндогенной интоксикации, на его фоне падает активность фосфолипазы Л2. Все это благоприятно влияет на функциональное состояние эритроцитов, способствуя улучшению их деформабельности и уменьшению сорбционной способности.

Математический анализ показал, что между эффектами мексидола по коррекции ПОЛ, фосфолипазной активности, эндогенной интоксикации и показателей функционального состояния биомембран эритроцитов существуют достоверные корреляционные связи.

При использовании в лечении острого перитонита аплегнна уже с первых суток после операции отмечалось значительное снижение уровня эндогенной интоксикации. Содержание молекул средней массы, индекс токсичности плазмы были ниже, а резерв связывания и эффективная концентрация альбумина — выше аналогичных данных, полученных во все контрольные сроки исследований в группе опытов без применения в лечении этого препарата (табл. 2).

Аплегин оказывал модулирующее влияние и на свободнорадикальные реакции ПОЛ. Это проявилось уже с первых суток применения препарата. Уровень МДА в эритроцитах в этот срок значительно снижался и продолжал уменьшаться к 5-м суткам лечения. В плазме крови содержание основного вторичного продукта ПОЛ уменьшилось до первоначального значения уже на третьи сутки и осталось примерно на том же уровне, незначительно снизившись через 5 суток после операции (табл. 5).

При Ре2+-ипланированном ПОЛ динамика содержания МДА в эритроцитах соответствовала спонтанной. В плазме же происходило резкое снижение (почти до нормального уровня) количества ТБК-активных продуктов уже через сутки после начала лечения, которое продолжилось в последующие сроки исследования. Следует заметить, что все данные, полученные в серии опытов, где в лечении острого перитонита использовался аплегин, были ниже подобного, определенного в группе экспериментов без применения этого препарата.

Интенсификация реакций ПОЛ на фоне использования в лечении острого перитонита аплегина сопровождалась резким повышением активности каталазы, особенно в эритроцитах, где она увеличивалась через сутки после начала лечения в 5,98 раза (р<0,001), к 3 и 5 суткам - уменьшалась, но оставалась значительно выше исходного уровня. В плазме крови активность этого фермента также возрастала, но в меньшей степени, чем в эритроцитах (табл. 5).

Исследованиями установлено, что аплегин способствовует падению активности фосфолипазы А2, которая в данной серии опытов возрастала в меньшей степени, чем в контрольной. Это подтверждают показатели, полученные в первые, третьи и пятые сутки лечения и в эритроцитах, и в плазме крови. На фоне применения аплегина отмечалось улучшение деформабельности и снижение сорбционной способности эритроцитов. Показатели функционального состояния эритроци-

тов во все сроки исследования отклонялись от нормальных значений в меньшей степени, чем в серии опытов без использования препарата. Причем к 5-м суткам их значения почти соответствовали исходному уровню, чего не наблюдалось в контрольной группе (табл. 5).

Таблица 5

Влшшпе аплегина па некоторые показатели функционального состояния эритроцитов при

остром перитоните (\1±т)

Показатель Группа Исход Перитонит' (операция) Этапы наблюдения

1 сутки 3 суток 5 суток

МДЛ, нмоль/г белка 1 2,80 ¿0,12 6,08 ±0,34' 7,09±0,19* 5,63±0,07* 5,01 ±0,06*

V 5,48±0,08* р<0,01 5,85±0,2б' р>0,05 4,24±0,24* р<0,05

Ре'*-МДА, нмоль/г белка I 5,66 ±0,40 7,39 ±0,52' 9,19±0,17* 7,86±0,25* 7,20±0,22*

V 6,70±0,08 р<0,001 7,18±0,16* р>0,05 5,87±0,08 р<0,01

Активность катала-зы, мгН2Ог/мин/г белка I 0,0144 ±0,000 7 0,0164 ±0,0014 0,0187 ±0,0003* 0,0162' ±0,0001 0,0164 ±0,0011

V 0,0863 ±0,0047 р<0,001 0,0651 ±0,0038' р<0,001 0,0547 ±0,0035' р<0,001

Активность фосфолипазы а2, мкмоль/с/г белка I 0,44 ±0,03 1,96 ±0,16' 2,57±0,1 Г 2,13±0,17* 1,71±0,1 Г

V 0,90±0,03* р<0,001 0,69±0,02* р<0,01 0,58±0,0l' р<0,001

Сорбцнонная способность эритроцитов, % I 39,54 ±0,29 48,84 ±0,54' 58,78±0,42' 52,27±0,28* 45,42±0,22*

V 49,99±0,3l' . р<0,001 45,45±0,24* р<0,001 42,40±0,47' р<0,01

Индекс деформа-бельностн эритроцитов, усл. ед. . I 0,76 ±0,03 0,58 ±0,03' 0,33±0,03* 0,54±0,04' 0,65±0,07*

V 0,62±0.02' р<0,001 0,60±0,06' р>0,05 0,70±0,06 р>0,05

Примечание: 1 - контрольная группа; V - опытная группа;' - достоверность по отношению к исходным данным, р - достоверность по отношению к данным контрольной группы.

При анализе выявлены достоверные корреляционные связи между эффектами аплегина корригировать ПОЛ, фосфолипазную активность, снижать уровень эндо-токсемии, с одной стороны, и модифицировать функциональное состояние биомембран кровяных телец - с другой.

Проведенные исследования доказали способность аплегина снижать интенсивность свободно-радикальных реакций при остром воспалении. На фоне применения этого препарата снижается выраженность эндогенной интоксикации, активность фосфолипазы А2, что уменьшает повреждение мембран, итогом чего и явились увеличение деформабельности и снижение сорбционной способности эритроцитов.

Таким образом, проведенные исследования показывают, что при остром перитоните тестированные препараты независимо от особенностей фармакологического действия оказывают ингибирующее влияние на процесс перекисного окисления липидов, снижают активность фосфолипазы Л2 эритроцитов. Таким образом блокируются одни из основных механизмов повреждения биомембраны кровяных телец, что обусловливает восстановление их функционального состояния. С другой стороны, применение препаратов уменьшает выраженность эндогенной интоксикации. Безусловно, при таком состоянии расстройств гомеостаза функциональное состояние эритроцитов само по себе страдает меньше. Результирующим эффектом указанного со всей очевидностью выступит восстановление трофики тканей, что в свою очередь определяет стихание воспалительного процесса в брюшной полости.

ВЫВОДЫ

1. При остром экспериментальном перитоните увеличивается неспецифическая проницаемость и ухудшается деформабельность эритроцитов. Выраженность этих изменений находится в корреляционной зависимости со степенью эндогенной интоксикации по гидрофильному и гидрофобному компонентам, интенсивностью свободно-радикальных реакций ПОЛ и активностью фосфолипазы А2 как плазмы крови, так и самих эритроцитов.

2. Включение в комплексную терапию острого перитонита препаратов, обладающих антиоксидантным действием (альфа-токоферола ацетата, димефосфона, мексидола, аплегина), способствует стабилизации мембраны эритроцитов, выражающейся в снижении их неспецифической проницаемости и увеличении дефор-мабельиости.

3. Одним из механизмов коррекции функционального нарушения эритроцитов тестированными лекарственными средствами выступает их способность снижать интенсивность процессов ПОЛ и активность фосфолипазы А2. Немаловажное значение в мембраностабилизирущем эффекте препаратов определено их свойством уменьшать выраженность эндогенной интоксикации. Указанные эффекты подтверждены достоверными корреляционными связями.

4. При сравнительном исследовании эффективности препаратов из различных фармакологических групп выявлена высокая активность мексидола и димефосфона. При их применении восстановление функционального и метаболического состояния эритроцитов определяется на протяжении всего периода наблюдения, а к конечному этапу - ряд показателей нормализуется.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕДАЦИИ

1. С целью коррекции расстройств функционального состояния эритроцитов при остром перитоните в комплексную терапию следует включать лекарственные средства, обладающие антиоксидантным действием. Из тестированных лекарственных средств предпочтение следует отдать мексидолу или димефосфону.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние аэроионотерапни на биоэнергетическое состояние тканей органов брюшной полости при остром перитоните //Тез. докл. первой конф. молодых ученых Мордовского государственного университета нм.Н.П.Огарсва. Саранск, 1997. 4.2. С.88-88. (Соавт. А.А.Федасв, В.В.Калыганов, А.И.Алешкин, В.А.Гусев).

2. Качественный н количественный состав липидов печени при перитоните под влиянием антноксндантов//Науч. тр. III коиф. молодых ученых Мордовского государственного университета им.Н.П.Огарева. Саранск, 1998. 4.2. С.188-188. (Соавт. Н.С.Ермошкин, В.В.Калыганов,

A.А.Тюрин. В.А.Карасев). i

3. Функциональное состояние тромбоцитов и обмен липидов крови при перитоните// Тез. науч. конф., посвященной 90-летию академика Б.В.Петровского. М.,1998. С.48-49. (Соавт. О.В.Ельчева, Н.А.Лелюхина, В.В.Рункова).

4. Система гемостаза и псрекисное окисление липидов при эндотоксикозе//Сб. науч. тр. ученых Мордовского государственного университета им.Н.П.Огарева. Саранск, 1998. Ч.З. С. 72-73. (Соавт. Рункова В.В., Тюрин A.A., Шалин В.А. и др.),

5. Коррекция расстройств гемостаза при перитоните// Материалы науч. конф. Мордов. ун-та (XXY1I Огаревские чтения). Саранск, 1998. С.148-149. (Соавт. А.А.Федаев,

B.В.Рункова, Л.В.Кудрявцева, Н.В.Шамалина).

6. Коагуляционный гемостаз при эфферентной терапии// Материалы IY науч. конф. молодых ученых Мордов. ун-та.. Саранск, 1999. Ч. 2. С.102-103. (Соавт.Р.З.Аширов, Е.А.Лямина, Ю.В.Мельникова).

7. Морфофункциональное состояние эритроцитов при патологии// XXVIII Огарев, чтения. Материалы науч. конф. "Клинико-эксперименталыше аспекты современной медицины". Саранск, 1999. Ч. И. С.26-27. (Соавт. Т.В.Тарасова, Г.Ю.Судакова, И.М.Дьячкова и др.).

8. Рациональная фармакокоррекция расстройств гомеостаза при эндотоксикозе II Тез. Рос. науч.-практ. конф. "Рациональное использование лекарств". Пермь, 2000. Т. 2. С. 59-60. (Соавт. Т.В.Тарасова, Т.Н.Дубовская, О.А.Лазарева и др.)

9. Липидньш обмен при перитоните и его коррекция антиоксидантами// Межвуз. сб. науч. тр. "Современные методы диагностики и лечения в медицине". Саранск, 2000. С. 25-26. (Соавт.

C.В.Аксенова, И.В.Саушев, В.А.Гусев и др.).

10. Способ коррекции эндогенной интоксикации//Тез. Всерос. науч.-практ. конф. "Новые технологии в медицине". Ульяновск, 2000. С. 186-188. (Соавт. Т.В.Тарасова, Т.Н.Дубовская, Н.В.Шмелькова, Л.В.Лазерь)

11. Влияние токоферола ацетата на систему гемостаза при остром воспалительном процессе// Материалы V Всерос. конф. "Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения".

■ М., 2000. С. 55-56. (Соавт. А.П.Власов, Т.В.Тарасова, Т.Н.Дубовская и др.).

12. Перекисное окисление липидов эритроцитов при остром воспалении на фоне антиок-сидантной терапии// Межвуз. сб. науч. тр. Саранск, 2001. Вып. II. С. 163-164. (Соавт. И.Н.Кокарева, О.Н.Лазырева, Т.А.Бородина, А.И.Краснов).

13. Влияние антиоксидантов на морфофункциональное состояние эритроцитов при эндо-токсикозе// Межвуз. сб. науч. тр.. Саранск, 2001. Вып. II. С. 164-165. (Соавт. О.В.Конышева, Г.Ю.Судакова, М.Г.Рябков).

Подписано в печать 12.02.02. Объем 1,0 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 243.

Типография Издательства Мордовского университета 430000 Саранск, ул. Советская, 24

Актуальность работы. В настоящее время эндогенной интоксикации отводится важная роль в патогенезе различных заболеваний. Это один из важнейших факторов, определяющих течение и тяжесть многих заболеваний (Васильев И.Т., 1995; Кузнецов Н.Н. и др., 1996; Уткин М.М., 1996). Доказано, что мембранодеструктивные процессы являются одними из существенных в развитии эндотоксемии (Михайлович В.А. и др., 1993). Эритроцитам отводится одна из главных ролей в патогенезе указанных расстройств. В молекулярной структуре плазматической мембраны этих клеток возникают структурные нарушения, приводящие к угнетению их функциональной активности (Эстрин В.В и др, 1993; Царапкин И.М., Бессмельцев С.С., 1997). В работах многих авторов установлена корреляционная зависимость между изменениями свойств мембран эритроцитов и клеточных мембран различных органных структур, что позволяет использовать их в качестве естественной модели для исследования общих характеристик всех биомембран (Михайлови« В.А. и др., 1993; Заводник И.Б. и др., 1995; Бессмельцев С.С. и др. 1997).

Одними из универсальных механизмов повреждения клеточных мембран, в том числе и при остром воспалении, являются свободно-радикальные процессы липопереокисления (Алмазов В.А. и др., 1992; Конюхова С.Г. и др., 1993; Петросян Э.А. и др., 1998; Токуау Я. а1., 1999) Поэтому фармакологическая коррекция метаболических и функциональных нарушений клеток может быть осуществлена через управление интенсивности перекисного окисления липидов (Евстигнеева Р.П. и др.,1998; Цибулькина В.Н.,1999). Это явилось основанием для изучения влияния препаратов, обладающих антиоксидантным действием на некоторые показатели, характеризующие метаболические и функциональные особенности эритроцитов при эндотоксикозе. В качестве модельного заболевания выбран острый перитонит, в патогенезе которого, как известно, эндогенная интоксикация выступает ведущим звеном (Гостищев В.К. и др., 1992). Повреждение эритроцитов при этой патологии рассматривается как интегральный показатель, отражающий тяжесть эндотоксикоза Однако до настоящего времени роль этих клеток в реализации фармакологических эффектов антиоксидантов изучена недостаточно

Цель работы. Изучить влияние препаратов, обладающих антиоксидант-ной активностью, с различными механизмами действия (альфа-токоферола ацетата, димефосфона, мексидола, аплегина) на некоторые показатели функционального состояния эритроцитов при эндотоксикозе

Основные задачи работы. 1. Изучить некоторые показатели, характеризующие метаболические и функциональные особенности эритроцитов, в норме и при остром перитоните. Определить зависимость функционального состояния эритроцитов от выраженности эндогенной интоксикации, активности свободно-радикальных реакций ПОЛ, фосфолипазы А2.

2. Исследовать влияние альфа-токоферола ацетата, димефосфона, мексидола и аплегина на некоторые показатели функционального состояния эритроцитов при различных этапах течения экспериментального перитонита (выраженности эндогенной интоксикации).

3. Изучить влияние тестируемых препаратов на некоторые показатели свободно-радикальных реакций перекисного окисления липидов и активность фосфолипазы А2 эритроцитов при остром перитоните.

4. Провести сравнительный анализ фармакологических эффектов препаратов на функциональное состояние эритроцитов и расстройства гомеостаза на организменном уровне. Определить некоторые механизмы стабилизирующего действия исследованных лекарственных средств на биомембрану эритроцитов.

Научная новизна. 1. Показано, что при эндогенной интоксикации, развившейся при экспериментальном перитоните, увеличивается неспецифическая проницаемость, ухудшается деформабельностъ эритроцитов. Выявлено, что выраженность этих изменений находится в прямой корреляционной зависимости от интенсивности свободно-радикальных реакций ПОЛ и активности фосфолипазы А2 как плазмы крови, так и самих эритроцитов.

2. Установлено, что альфа-токоферола ацетат, димефосфон, мексидол, аплегин способствуют стабилизации мембраны эритроцитов, выражающейся в снижении их неспецифической проницаемости и увеличении деформабельно-сти.

3 Показано, что одним из механизмов коррекции функционального состояния эритроцитов тестируемыми лекарственными препаратами выступает их способность снижать интенсивность процессов ПОЛ и активность фосфо-липазы А2. Выявлено, что немаловажное значение в мембраностабилизиру-щем эффекте препаратов определено их свойством уменьшать выраженность эндогенной интоксикации

4 Пр I сравнительном исследовании эффективности препаратов из различных фармакологических групп установлена высокая активность мексидола и димефосфона При их включении в комплексную терапию острого перитонита восстановление функционального и метаболического состояния эритроцитов наблюдается на протяжении всего периода наблюдения.

Практическая ценность работы. Экспериментальными исследованиями установлено, что о тяжести патологического процесса при остром перитоните можно судить по деформабельности и сорбционной способности эритроцитов, выраженности процессов перекисного окисления липидов и активности фос-фолипазы Аг в них.

С целью коррекции нарушений функционального состояния эритроцитов при эндотоксикозе в патогененическую терапию следует включать лекарственные средства, обладающие антиоксидантным и мембраностабилизирующим эффектом.

Внедрение в практику Результаты исследований внедрены в практическую деятельность городской клинической больницы скорой медицинской помощи г Саранска, включены в программу обучения студентов на кафедрах фармакологии и факультетской хирургии медицинского факультета Мордовского госуниверситета имени Н П.Огарева.

Положения, выносимые на защиту

1. При эндогенной интоксикации, развившейся на фоне экспериментального перитонита, функциональная активность эритроцитов ухудшается, что проявляется в снижении их деформабельности и увеличении неспецифической проницаемости. Выраженность этих изменений находится в прямой корреляционной зависимости со степенью эндогенной интоксикации, интенсивностью свободно-радикальных реакций ПОЛ и активностью фосфолипазы А2 плазмы крови и эритроцитов.

2. При перитоните лекарственные препараты, обладающие антиокси-дантным действием (альфа-токоферола ацетат, димефосфон, мексидол, апле-гин), приводят к стабилизации мембраны эритроцитов, выражающейся в уменьшении неспецифической проницаемости и увеличении деформабельности.

3. Из тестированных препаратов наибольшей активностью обладают мек-сидол и димефосфон: существенный фармакологический эффект в коррекции функционального и метаболического состояния эритроцитов наблюдается на протяжении всего периода наблюдения за животными.

4. Один из механизмов восстановления функционального состояния кровяных телец при остром перитоните обусловлен способностью препаратов регулировать интенсивность ПОЛ и активность фосфолипазы Аг. Немаловажное значение в мембраностабилизирущем эффекте определено свойством лекарственных средств уменьшать выраженность эндогенной интоксикации.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на Огаревских чтениях - научно-практической конференции Мордовского университета (Саранск, 1999-2001), Российской научно-практической конференции "Рациональное использование лекарств" (Пермь, 2000), научной конференции молодых ученых Мордовского университета (Саранск, 19992001), Всероссийской научно-практической конференции "Новые технологии в медицине" (Ульяновск, 2000).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 научных работ.

ВЫВОДЫ

1. При остром экспериментальном перитоните увеличивается неспецифическая проницаемость и ухудшается деформабельность эритроцитов. Выраженность этих изменений находится в прямой корреляционной зависимости со степенью эндогенной интоксикации по гидрофильному и гидрофобному компонентам, интенсивностью свободно-радикальных реакций ПОЛ и активностью фосфолипазы Кг как плазмы крови, так и самих эритроцитов.

2. Включение в комплексную терапию острого перитонита препаратов, обладающих антиоксидантным действием (альфа-токоферола ацетата, диме-фосфона, мексидола, аплегина), способствует стабилизации мембраны эритроцитов, выражающейся в снижении их неспецифической проницаемости и увеличении деформабельности.

3. Одним из механизмов коррекции функционального нарушения эритроцитов тестированными лекарственными средствами выступает их способность снижать интенсивность процессов ПОЛ и активность фосфолипазы А2. Немаловажное значение в мембраностабилизирущем эффекте препаратов определено их свойством уменьшать выраженность эндогенной интоксикации. Указанные эффекты подтверждены достоверными корреляционными связями.

4 При сравнительном исследовании эффективности препаратов из раз-л» чных фармакологических групп выявлена высокая активность мексидола и ддмефосфона. При их применении восстановление функционального и метаболического состояния эритроцитов определяется на протяжении всего периода наблюдения, а к конечному этапу - ряд показателей нормализуется.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕДАЦИИ

С целью коррекции расстройств функционального состояния эритроцитов при остром перитоните в комплексную терапию следует включать лекарственные средства, обладающие антиоксидантным действием Из тестированных лекарственных средств предпочтение следует отдать мексидолу или димефос-фону