Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние антагонистов на функцию почек и водно-солевой обмен

^ О о .<ч

• и ^

АКАДЕМИЯ ВДЩШСКИХ НАУК НАУЧИО-ИССЩОВАТЕШИЩ ИНСТИТУТ ФАРМАКОЛОГИИ ТОМСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМ!

На праЕпх

ГОССЕН ИВАН ЕГОРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ АНТАГОНИСТОВ КАЛЬЦИЯ НА ФУННШГО ПОЧЕК И ВОДНО-СОЛЕВОЙ ОБМЕН

14,0),20 - ^зргчко.тм'«*

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на сонскгигае ученой сгепеми Кандидата медицинских наук

Томск - 1992

Ры.кгН1 ышг-икона па кафедре (¿арлакслогни Алтайского 1Ч|;.у.1«.[лП1^ткдч) модшцшского института

' и у ь н ь Г: р у к о ь о Д н т а л ь: ¡¡.п. р пошнуитих наук,

»¡оц.ыгсор В.м. Брюханов

О ([. и и и н л I. и н о о п и о н а к т н;

/и.игор г.-.шитских ноу к, 1,р<Лиссар

Г.анцидач бнсшогичишпс наук, а..цент

В,Г, Пыяинский Р.С, Домшшова

Ььлуциб учредишь; 2-1! Московски!! ордена Ленина государст-ышшй мид];ч}шс1ш1'. институт 1Ш. И,И. Пирогоиа,

йш^та диссортащш состоится "_" _________ 1992 г.

и___часов на заседании спощюотшировщшого ученого сова-

■1-и К 001. Зи. 01. при НИМ Зармакодогии ТИЦ РАШ (634028, г. Тонок, пр, Лонш.тц 3),

С дассоршяой мокио о&иакештьоя р библиотеке института ■хариакодепт 'Г1Ш, РАМИ.

Ам-арсй О;** разослан "__"_______ 1992 г,

Учышй секретарь сиышаливирогтшого сонота шидмпа*; биологических наук

В.К, Горшо^а

'.iwtft.'iSi'

' i -3-

\ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЕ0Й1

утдции j,

,'f

Актуальность Темы. Антагонисты ионов кпль-Ция широко применяются в клинической практике в качестве антиан-гинальных, антиаритмических, гипотензивных средств и спектр их применения постоянно расширяется (П.Ф.ЛитвицкиЙ, 1982; Singh R.B., 1987), В последнее время появились сведеь ¡я о топ, что эти препараты, помимо специфического влияния на сердечно-сосудистую систему, вызывают в организме ряд дополнительных эффектов, среди которых отмечается диуретический, натрий- и „алыпйуретичеекиз C,vllf5 ef el. »1977; Odar_Cecterlof I.» , 1906; Wetrels J.F.M. et al., 1908). Эффективность этой группы веществ основана на способности блокировать кальциевые каналы мембран возбудимых клеток, что приводит к нарушении кальций-эавнсимих процессов.

В то же время, вопрос о влиянии антагонистов кальция на невозбудимые мембраны остается открытым, хотя это представляет большой интерес в связи с тем, что некоторые из них, в частности почечные мембраны, выполняет большую работу п переносу ионов через .летку. В мембранах клеток почечных канальцев, осуществляющих процессы реабсорбции и секреции, тап».в имеется функционально активный кальциевые каналы, Мавду тем, многие вопросы, касающиеся влияния этих препаратов на функциональное состояние почек, изучены достаточно поверхностно.

Обширное клиническое применение антагонистов кальция наряду с ограниченным кругом сведений об их влиянии на почки и водно-солевой обмен явились предпосылкой для данной работы.

Цель исследования. Цельга работы является изучение влияния антагонистов кальция на основные функции почек в эксперименте и вскрытие механизмов возникающих эффектов.

Осноъные задачи исследования.

1. Изучить влияние верапамла и нифедипина на мочеотделение и транспорт электролитов в печках.

2. Научить влияние антагонистов ионов кальция на транспорт органических веществ в почках.

3. Отдифференцировать прямые эффекты от опосредованных путем введения исследуемых препаратов непосредственно в почечный кровоток,

4. Изучить влияние антикальциевых препаратов на основные водные раздели организма.

5. Иыявчть механизмы возник ллцих эффектов путем исследования действия на проницаемость клеток в модельных опытах.

6. Выявить воэмолшив изменения гормонального профиля корти-зола, ренина, кортикостерона крови при действии верапамила.

?■ Оценить профилактическую эффективность препаратов при ОШ по показателя выживаемости животных.

8. Изучить влияние антикальциевых препаратов на процессы компенсаторной гипертрофии почки после односторонней нефрэктоыии.

Научная н о в и в н а р и б о т и . При достаточно широкой клиническом применении антагонистов кальция постоянно выявляется новые стороны их фармакологической активности. Отмечено, в частности, что яри назначении этих препаратов о той или иной 11илью нередко вовникамт сопутствующие изменения мочеотделительной функции почек, однако целенаправленных исследований в этом направлении не проводилось. В данной работе впервые проведено многостороннее исследование влияния вераламила и нифадигшна на функцию рочек.

Найдено, что антагонисты кальция и зависимости от дозы увеличивает суточный диурез и выделение электролитор у крце, связанное нреинуцоственио с уменьшением канальцэвой реабсорбции.

Выявлено, что верапшлил обладает прямым влиянием но ночку наряду с опосредованным действием.

Установлено, что антагонисты кальция усиливают компенсаторную гипертрофию почки.

Сделаны подходы к определении механизма ренального деПсггил блокаторов транспорта кальция.

Научно-практическая з н и и мост ь работы. Проведенное целенаправленное исследование действия наиболее широко применяющихся антагонистов кальция вклеило особенности действия вёранамила и нифедишша на зушшиэ почек и водно-солевой обмен, что позволяет лучше подбирать лекарственное средство в каждом конкретном случае.

Расширена фармакологическая характеристика олтагоипстсв кальция и установлена их способность прямо воздействовать на почки, что должно учитываться при применении этой группы препаратов.

Способность повышать регенераторные процессы в почках нажег найти практическое применение в области нефрологии.

Результаты работы имеют определенное значение для дальнейшей науг-ю-исследовательской работы.

Основные п о л о я е н и я , в ы н о с и н и е на защиту.

1. Веранамил и нефидипин обладают диуретическим действием, вызывая увеличение экскреции электролитов.

2. Повышенное мо«етоделенио обусловлено прямым действием нч почки и сопровождается уменьшением кан-чьцэвой реабссрбции жидкости.

3. Изменения транспорта ионов происходят без нарушения процессов канальцевой экскреции чужеродных в деств и роабсорбции глюкозы,

4. Сдвиги мочетодеяеяия не сопророэдаптся сзпчвстпеинтг

мененпжы распределения води в различных секторах в организме.

Ь. Антагонисты кальция усиливают компенсаторную гипертрофии ночки, оставшейся после односторонней нсфрьктомип.

Апробация материалов д и с с е р т а -ц н и . Результаты работы обсуадались и докладывались на заседании Алтайского отделения фармакологов (г,Барнаул, 1990), на УШ Всесоюзной конференции по физиологии почек л водно-солевого обмена в Харькова (1909), на Ш Всероссийской научной конференции "1>арм&кология почек" в Барнауле (1990).

По материалам диссертации опубликована I статья в местной печати и 3 - в центральной.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, трех глав собственных носледеваний, обсуждения результатов, выводов и указателя литератури, в котором приведены 149 источников, из них 51 отечественных и 98 зарубежных авторог. Диссертация иллюстрирована 22 рисунками и Г/ таблицами,

МАТЕРИАЛ И МЕТОДО ИССДЕДОВАШИ

1 Исследования проведены в условиях острого и хронического ыс;:аерш,,ънта на крысах и соба;сах, а ташке в модельных опытах на ко.«е лягуаки. У крыс,помеченных в индивидуальные клетки, ежесуточна регистрировали обшм вшитой води и выделенной мочи. В су™ точных порциях мочи определяли натрий, калий, кальций, магщф, краатшшн и ураты.

Влияние антагонистов кальция на мочеотделение изучалось , тника $ опытах на крыске с водной нагрузкой, После водной нагрузки »иоитньгх помещали в индивидуальные клетки и собирали мочу ег*й~ ^илно в течение трех часов.

Секреторную способность почек исследовали а хронических отитах на крысах по методике, разработанной в малой лаборатории (В.М.Брюханов, 1987).

Острые Опыты на крысах проводились под этаминалешм нпрчг..»гм (50 мг/кг массы внутрибрюшинно). Для быстрого иоенцонпя трянстрг-' них систем б зэку одномоментно вводили 2,5 »г/кг рпотпэра, содержащего 15-20^ глюкозы и затаи продолжали инфузии со скорог.тьл 0,1 мл/мин. Кроме реабсорбцкя глюкозы, в этих мэ рксчеритнтах определяли секреторную способность канальцев по величине мфинальной секреции кардиотраста.

Для исследования зднкциональиоЯ способности попек в хронического эксперимента у собак га 2-3 недели до »тала зкегмрп-у.ектои производит! операцию соггастногс выведения коч<угэгчгии';й т передняя брашну» стенку по катоду И.П.Павл08а~Н,С.Цптоп»т. Ир**/« регистрации диуреза, определяли экскрецип натрия, калия, К'иьцгл, магния и скорость клубочковой фильтрации, которую раесчаткпплг/ г; • ввделешго эндогенного креагинина.

Вераппмил вводили ирисам подкожно в дозах 2, 5 и 10 мг/кг, нифвдипкн давали рег ов в дозах V и 20,мг/кг; собз.там - перт?-мид в дозах: 0,2-0,0; 1« 2 мг/кг в/в в объеме 0,4 мл/мин 30 кип, нифедипин - 5 иг/кг.

В сериях острых опытов на собаках с цзль» изучения прочего 1 действия верапашма вводили в одну из почэчнкх артерий и рь"д?л'<-но собирали мочу из каждой почки путем катетеризации мочеточников. Регистрировали диурез, п¡.каление натрия, калия, кальция, магния, клубочковуя фильтрацию, опредэляеыуп по инулину. Япп поддержания диуреза на достаточном уровне осуществляли внутрцвонную инфузтз раствора, содержащего 0,8$ хлорида натрия, 0,03,1 хлорида калия, 0,5$ инулина, 0,2% кардиотраста, со скорость» 2-0 мя/пги. В части опытов определяли по клиренсу почечный кровоток кардчо-

траста. В атих случаях снорость клубочковой фильтрации определяли но клиренсу инулина. Общий почечный кровоток определяли с цо-

расхсдометра ироьи Р1СЗ-2.

при исследовании механизмов действия препаратов на транспорт полой натрия, калия, кальция, магния изучали также их влияние на ¡шреное ионов через колу лягушки, которая в этом отношении весьма тшсмииавд- конечные отдели почечных канальцев (Ю.В.Наточин, К,Чапек, 197с). Наь. л был использован один иэ вариантов опытов с измерением абсолютного количества транспортируемых ионов. Методик; ¡эксперимента заключается в образовании иэ кожи бедра мешочка,внутри которого находилась наружная поверхность кожи. От одной лягушки получалось два мешочка: один служил контролем и заполнялся раствором Рингера-Локка, второй содержал раствор Рингера-Локка и исследуемый препарат. Плотно завязанные мешочки взвешивали и погружали в сосуд с аэрируемым раствором Рингера-Локка, В конце опыта (через 6 часов) мешочки снова взвешивали, определяли концентрате натрия, калия, кальция, магния в исходном растворе и в растворе, ¡заключенном шютри каждого мешочка. Транспорт ионов через кожу рассчитывали, используя специальные формулы (Ю.В.Наточим , К.Чапек, 1976).

Определение водных разделов организма крыс производили по методу, в основе которого лежит принцип разведения веществ равномерно распределяющихся или во всей жидкости организма или в каком-либо одном секторе. В использованной наш методике (Ю.И.Иванов, Б.А.Пахмурный, 19615) общую воду определяли по антипирину, внеклеточную - по инулину, внутрисосудистую - по синему Званса.

В отдельных сериях опытов при изучении механизмов влияния 'препаратов на мочеотделение определяли в плазме крови у крыо уро. инь ренина и кортикостерона, а у собак - кортизола. Содержание Г!.рмопов до и череь час после введения препаратов определили с

помощью радиоиммупологичоских наборов.

Кроме тоге, были поставлены опыты на ирисах, где исследив 'ли влияние антагонистов кальция на мочетоделекич на ^юиз здпенал-эктомии.

Выживаемость животных при ОПН, вследствие токсической не1ро-патии изучали на модели уранил-глицеринового небита (Л.М,Ромен-дик, 1964). Уранил-ацетат вступает в соединение с белками клеток канальцевого эпителия, вызывая их некроз, соли урана гирахялт также клубочка и i4t аппарат. Глицерин при парзнтергпьнсм введении позывает нефроз.

Компенсаторная гипертрофия почки при действии знтикальцновнх препаратов изучалась следующим образом: под эфнрньм наркозом крисе удаляли одну ил почек. Dee животные бьтш разбиты па три груннч. Первая служила контролен, второй в течении трех дней один раз в сутки вводили эерапампл, третьей - н^одипин. Через три дня крыс забивали и извлекали Оставшуюся почку. Для оценки компенсаттрнтг. роста почки использовала! следующие показатели: вес почки, ее объём, cyxoit вес ткани, гистологическое исследование.

Определение креатинлна в моче и плазме производи ли методом йолииа (Е.Б.Берхин, Ю.И.Иванов, 1972). Концентрацию натрия и ка-■ лия в моче определяли методом фотометрии в пламзки газовой горелки. Для определения кальция и магния ныли был использован метод комплексонометрического титрования при помощи трилона Б (динат- . риевая соль этнлендиаминтетрауксусной кислоты). Вэрографин определяли по методу, описанному для диотраста { Dak et al. . 1943). Инулин определяли резорциновым методом, в основе которого лежит гидролиз инулина до фруктозы, дающей с резорцином в кислой среде ¡фасное окрашивание (реакция Селиванова). Для определения концентрации антипирина в плазме крови применена методика, основанная -на способности антипирина давать окраску с хлорным желеяем, Опрэ-

деление хмшьози в крови и моче проводили ортолуидиновш методом. Урй-ти в моче определяли по методу Брауна в модификации К.М.Сулло (19'/4). Количественное определение белка проводили с помощью су ль фо^ьлицилогоП кислоты (В.В.Меньшиков, 1987).

Результат экспериментальных исследований обработаны методом вариационной статистики с использованием параметрического критерии Стьпдента на ЗШ "Электроника ДЗ-20".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

Влияние антагонистов кальция на мочеотделение у крыс. Прове-дешне опыты показали, что верапамил и нифедипин, в зависимости от доим, оказшач'т выршкенное влияние на мочеобразовательцую фун кци.а пачек. Так, однократное введение вере(памшга в дозе 5 кг/кг я/к сопровождалось увеличением экскреции натрия в 3,5 раза, каль ция в 1,5 раза. Увеличение дозы верапамила до 10 мг/кг п/к сопро еождалось более выракеншдш изменениями функции почек, Нифедипин ь дозе 7 иг/кг 00 оказывал влияние, сходное с верапамалом 1 (5 мг/кг н/к). Применение препарата в более высокой дозе (20 иг/

рог оч ) вызывало увеличение экскреции натрия значительно сильнее ул;е на следующий день, достигая уровня в 19 раз" выше исходи« го (табл. I), Вероятно причиной повышения диуреза и салуреза яв: ;ысь снижение канальцевой реабсорбции, так как показатель экскр< ции креатинина, отражающий величину клубочковей фильтрации, не, изменялся.

Также нами была проведена серия экспериментов с длительным введением препаратов. Результаты проведенного исследования пока зал», что варапашл и нифедипин при длительном введении оказыва ьт такой направленности действие на мочеотделение, как при с мокротном. Укскрерия олектролитов била выше при введении нифед} иина.

Влияние антагонп^тсз кальция на мочеотделение у ярке

Таб.;лца I

Показатели |Взрапаиил 5 ь-ц'/кг ,-Верааамил ■—- ■ ■ '] 10 мг/кг | ........ :Нифедияин 7 иг. хг | Нифэдипнн 20 кг/кг

!контроль 1 опыт I ¡контроль |опыт | 1 контроль > .. . . . \ опыт 1 ;контроль 1 ) опыт

Диурез 6,9*0,5 - /..2*0,7 4,1-0,4 5,7£С,4* 3,Ь*0,9 ТТ + Т Г} 10,3*1,0 15,1*0,9*

(мл/сут)

Взделекиз

аОНОВ

'.ьмоль/сут): * * * *

Натрия 11,0*1,1 33,£¿0,1 13,7*1,6 оо п 8,440,9 39,4*6,9 10,4*0,3 193,0*46,4

Калия 605=50,3 ¿99*53,6 ¿32^9,0 541*44,9 668*4С,4 760-535,6 ^•54*69,4 690*69,е

Кальция 7,3*0,6 10,3*1,0 4,3*0,4 7,4-0,6 * 14,7*0,9 22,7-1,Ь* 12,5*1,4 30,4*2,0*

Уагккя 4,1*0,Ь 4,8*0,3 3,и*0,3 4,4*0,45* 8,1*0,5 13,0*0,8 * 7,9*0,6 20,1*2,0*

Выделение 20,8*2,5 23.7*2,5 -.7-0,4 4,8*0,4 21,6*2,9 20,9*3,5 35,5*3,о 31,9*3,6

жреатииина

(мтаюль/ сут)

Примечание: 1 Здесь и в последующ х т.тЗж да звездо^-сой отмечена дистсзе^ност ■ь отлич:;; , :? <о,оо).

Ьнимше антагонистов кальция на выделительную функцив поцэк иаучьлось такай в условиях водной нагрузки. Антагонисты кальции угначоли чидьлание жидкости в течении первого часа после нагрузки. Так, ьорапашл (5 мг/кг п/к) в течение первого часа угнетал водниН диурез с 2.9Í0.I9 мл/час до 0,9*0,17 мл/час, суммарно® чвотдзлеииа аа 2 часа также било сашено (на £1Í). 'Г^кие же результаты бшш получены при введении нифвдилина (7 цг/кг Рег оа ), Шшотри иа ту или иную степень изменения диуреза, во всех сериям опытов ü'iua íuiio увеличений екснреции натрия, кальция и магния, зависящее от снижения ра&бссрбции данных электролитов, так как экскреция иреатшшна при отом существенно на изменялась (табл, Í.),

Влиянии варанамила и шфедипииа на функцию почэк у собак. Поскольку суточные опыты иа крысах иа позволяют изучать динамику изменения функции почек в течение ближайших часов посла введения препаратор., вили проведена хронические эксперименты на собаках, где имеется возможность проследить эа изменениями мочеотделения ь сравнительно короткие промежутки времени. Сопоставляя результат ты опытов на собаккс, мы также набл.одали дозозависимое действие антагонистов кальция. Так, в дозе 3-4 мг/кг в/в ьераламил в пер« вые 30 минут после введения снижал фильтрацию, диурез и акскра-электролитов, В ряде акспериментов с введением меньшей дозы верапамила (2 мг/кг) в течение первого часа также наблюдалось . сиикеиие диуреза, фильтрации и екскрации электролитов, Затем мочеотделение стало повышаться и к концу первого часа достигло исходного уровня. Выделение натрия к атому времени увеличилось в 5,¿¡ раза, кальция » в 4 раза. Зто могло объясняться геыодинами-ческими сдвигами, возникающими в ответ на достаточно большую дозу препарата.

При дальнейшем саижении дозы верапамила и нифедипина до величин, существенно не изменяющих гемодинамику (верапамил I мг/кг

Таблица 2

Влияний антагонистов ионов кальция на выделение электролитов у крыс

после водной нагрузки

Показатель {Взрапамлл 2 мг/кг п/к ¡Верапаиил о мг/кг л/'к |Кяфэдипин 7 мг/кг экскрации ! ------ «':_______Г

контроль

; опыт

контооль

опыт

1-1-

контроль | опыт

1й+, ммоль/ 4,6*0,5 за 3 часа.

К1"» толь/ 47,7*9,8 за 3 часа

Са++,ммоль/ 4,9*0,50 за 3 часа.

Ы£*,шоль/ 3,2*0,4 за 3 часа.

Оэ, шэдоль/ 2,6*0,23 за 3 часа.

57,9*9,"/ 55,4*6,2 11,5*0,73* 5,5*0,45* 3,4*0,72

8,5*0,8 52,3*3,8 5,1*0,25 2,6*0,84 3,0*0,21

27,0*3,9* 43,1*4,2

7,8*0,67*

5,5*0,27* 3,8*0,52

12,3=0,8 34,7*1,8 8,1*0,35

5,1*0,22

5,6*0,56

52,4*7,4* 35,3*6,6 14,9*0,92* 9,3*0,35* 7,4*0,77

и I

а/в и нижа; кифвдкнин & мг/кг рег ов ), ааматних изменений в мо-ч«с^д«лсчнии не иабльдадось.

Влияние антагонистов кальция на процессы канальцевого трая-сш,р1'ь органических вяцаетв. В хронических опытах на крысах иссле-доьаяи действие верапашло ни иаиальцевую секреции взрогрьфина. Поело однократного введения препарата в дозе 10 мг/кг п/к не обнаружено сущэстнаншл изменений этого показателя. В контрольных опытах &Кч .срнц><я норе гранка составила 37,е.% от введенной дозы, вццалвьие инулина - 29Д'', при среднем диуреза около 4 мл в час.

При гиэдвнии верапшшг- аа 30 иинут до сбора мочи диурез сии-« сплел до трех мл/час, Укскреция верографипа уменьшилась на Такую же динамику претерпевало выделение инулина, которое снизилось на 20;'.

Сориодоние наделения ьерзгряфина и инулина позволяет полагать, что прямого эсМ-екта на кональцавую секреции вераяашл не окаоииаот, Эти данные иодтверздалЛ'ея результатами острых опытов на крьедх, в которых определили максимальный транспорт кардиотрае-. »а, являющегося тесг-вгацеством для определения секреторной способности почек (Ё.В.Ьерхин, ¿.И.Иванов, 1972). Также нами было изучено влияние вералЕшла на процессы реабсорбщш глюкозы. В исходном периоде величина максимальной реабсорбции глюкозы составила 1»3 иг/ш; фильтрата. Поело введения вералашла рецбеорбщш глюкозы диц;ь немного обличалась от исходной и составляла 1,0 мг/мл, Скорость клубочковой фильтрации в этих опытах не изменялась.

В другой серии опытов наш было изучено влияние антагонистов кальцин на зкск[ чцию ураюв, В исходном состояний экскреция ура-тов составляла 0,9 ш</сутки. После вводения иерапамиль выделение уратов увеличилось на 4,5'а, а после введения нифедипина - на 11%. Но в том и другом случае наблддалось увеличение диуреза (на 12$ и

Таким образом, имеются основания считать, что антагонисты кальция, не обладают действием на транспортные системы органических вещ-эств в ночках.

К механизму действия варапамила и нифедппина на мочеотделение. Чтобы выяснить, оказывают ли изученные препараты прямое влияние на процессы мочеобразования в почках и соответствует ли оно тем эффектам, которые наблюдается ¡три введении цх в обций кровоток, были поставлены острые опыты на собаках в условиях раздельного сбора мочи из обеих почек при введении испытуемого препарата в одну из почечных артерий. Доза вводимого вещества подбиралась таким образом, чтобы выявить одностороннее действие. Инфу-зии изучаемого препарата осуществляли в течении 30 минут.

Введение варапамила (0,03-0,05 мг/мин) в артерию левой почки уко в первые 10 минут сопровождалось повышением диуреза на тогда как в противоположной почка диурез оставался на исходном уровне и даже незначительно снижался. В последующем мочеотделение еще повышалось, вдвое превшая исходную величину, причем только из той почки, в артерии которой вводили вераиамил. указывает на наличие арямого ренального влияния ьерапашпа. Скорость клубом-» . новой фильтрации во время введения препарата несколько повышалась. Судя по снижения концентрационного индекса инулина с 32,0*6,2 до 19,3*3,4, увеличение диуреза в большей степени явилось следствием уменьшения канальцеаой реабсорбции жидкости. Одновременное повышений клиренса кардиотраста (на 25%) свидетельствует об увеличении почечного плазмотока, при атом показатель фильтрационной фра.ч-т ции (отношение скорости клубочковой фильтрации к величине плазмотока) остается неизменным. Вероятно, увеличение скорости клубоч-ковой фильтрации является следствием поьыпения почечного г.лаоме-тона,

' Параллельно повышению иочартдзлаиия, •зтив'шлци парыалм

»атрий- и кальцийуреза (табл. 3).

В другой серии опытов действие верапамила изучали на фоне пшеркальпиемии. Дня создания такого фона собакам внутривенно с постоянной скоростью 100 мм/мин вводили раствор хлорида кальция. Введение на этом фоне верапамила сопровождалось также односторонним усилением диуреза, однако более выражекно. Если в обычных условиях сведение верапамила вызывало повышение почечного плазмото-ка на 28,3$, то на фоне гиперкальциевого раствора он возрастал на 56,8%. Также значительно выше, чем в обычных условиях увеличивалась экскреция кальция и магния.

Таким образом, на основании полученных данных нами был сделан вир од о том, что верапемил обладает прямым диуретическим действием на почку. Вероятно, повышение мочеотделения обусловлено как сосудистыми эффектами, так и непосредственна.! влиянием препарата на канальцевый аппарат почки.

В экспериментах с введением верапамила в почечную артерию представлялась возможность оценить их влияние на канальцевнй транспорт ионов. Как видно из результатов, параллельно увеличению мочеотделения отмечалось и уменьшение реабсорбции натрия, а особенно кальция и магния. Это позволяет думать, что верапамил наряду с кальциевыми каналами частично блокирует и натриевые каналы и изменяет перенос ионов через почечные яанальцевыэ мембраны.

Данное предположение подтверждается модельными опытами на коже лягушки, где мк также наблюдали снижение транспорта натрия и кальция через апикальную мембрану. Из таблицы 4 видно, что при действии верапамила со стороны наружной поверхности кожи транспорт воды снизился более чем в два раза. Вместе с этим значительно снизился изоосмотическиЯ транспорт натрия, а в итоге и суммарный '-.рднепорт нэтр:ш (соответственно но 44,3 и 31,2;?). Такав сущест-г>;|!1!о .-кианлея транспорт кальция и магния (на 24,0 и 42,<#). Обрат-

Таблица 3

Влияние верапемила ка почечную экскрецию ионов у собак

Время { На+, ммоль/мик ¡1Г", имоль/'ыин Са"^, мколь/кик ¡М ¿~г, ыиоль/'ыин

! ¡левая ¡правая -г ----- " ¡лезая | правая I ........ (левая ч- - ¡правая \ ¡левая 1 ¡правая

0-10 150*33,6 154*24,8 20,1*1,9 24,4*1,6 5,1*0,9 4,8*0,6 4,1*0,38 3,6*0,51

10-20 145*31,5 151*25,9 20,8*2,5 26,3=2,2 5,3*1,0 5,1*0,6 3,6*0,54 3,2±0,43

20 ИШУВИЯ ВЕРАПШШ. В ЛЕВУЮ ПОЧЕЧНУЮ АРТЕРИЮ

20-30 211*37,6 138*20,2 26,6*3,4 24,5*3,5 7,1*0,6* 3,8*0,2 5,6*1,12* 2,5*0,01

30-40 252*39,3* 136*24,9 29,8*3,3 23,5*2,1 8,5*0,6* 3,7*0,5 6,4*0,72* 2,7*0,22

40-50 £,0*32,0* 130*22,7 30,5*4,2 25,7*3,7 9,2*0,6* 3,5*0,9 5,.0*0,55* 2,4*0,34

50 ОКОНЧАНИЕ В5ЕДЕНИЯ ПРЕПАРАТА

70-80 150*33,8 152*29,8 21,0*3,0 27,3*2,9 4,8=0,2 4,2*0,2 3,8*0,56 3,2*0,20

Примечание: Показатель достоверности (Р) рассчитывался в почке на стороне икфгузик по сравнению с контрольной правой почкой.

ный транспорт натрия не изменился. В литературе также имеются данные о способности антагонистов кальция ослаблять транспорт кальция через кожу лягушки и мочевого пузыря (Ю.В.Наточин,Е.И.Шахматова, 1985; ИвН Р., 0Ъег1е«ег Н., , 1987).

Таблица 4.

Влияние верапамила, омывающего наружную поверхность кожи лягушки, на транспорт электролитов через нее

Показатели (Контроль ¡Опыт

Транспорт воды, мл. 0,171*0,05 0,08*0,01

Иэоосмотический транспорт натрия, ммоль/г кожи за 6 часов. 31,6*5,5 17,6*3,0*

Противоградиентный транспорт натрия, ммоль/г кош» за 6 часов. 66,7*9,0 50,1*6,7

Суммарный транспорт натрия, ммоль/г кожи за 6 часов. 98,7*9,6 68,3*7,5*

Транспорт калия, ммоль/г кожи за 6 часов. 7,5*1,0 8,0*1,0

Транспорт кальция, ммоль/г кожи за 6 часов. 5,2*0,31 4,0*0,32*

Транспорт магния, ммоль/г кожи за 6 часов. 6,2*0,65 3,6*0,80*

В опытах с исследованием влияния верапамила и нифедишша на распределение воды в организме не отмечено существенных изменений в водных разделах организма крыс. Так, объем общей воды в контроле и опыте составлял 56-5'/% от веса тела животн .'о. Верапамил незначительно увеличивал внеклеточный объем, а нифедипин наоборот -уменьшал внеклеточный объем жидкости и увеличивал внутрисссудис-тый объем. Это указывает на то, что данный фактор не играет роль в диуретическом действии верапамила и нифедипина.

Большую роль в функции почки играют гормоны коры надпочечников. Изменения мочеотделения при введении верапамила и нифедипи-ия могли быть опосредованы через изменение секреции гормонов под . лияшим ;>тих препаратов. С этой целью были проведены фонические

опыты на крысах с удаленными надпочечниками.

Длительное введение вераламила (5 ыг/кг п/к) оказывает на мочеотделение, на фоне адреналэктсм1Ш, практически такое же влияние как и в обычных условиях (табл. 5). Ужо после первого введения диурез повысился в среднем в 1,9 раза. Максимум экскреции натрия, кальции п магния наблюдался после третьего введения верапаиила (увеличение соответственно на 96,4%, 122,1% и 145,1%). Также в первые дни мы наблюдали повышенное вццеление ионов калия. Скорость клубочковой фильтрации также повышалась.

Похожие данные били получены и при введении нифедипина (7 иг/кг per оэ ) (табл. б). Максимум диуреза наблюдался после третьего введения, при это« натрпйуретическая реакция бша слабее. Так, если в обычных условиях при введении нифедипина экскреция натрия увеличивалась в 8,S3 раз, то на фоне адреналэктоыии экскреция натрия повысилась лнь в 2,4 раза.

Таким образом, опиты на адреналэктомнрованних лшвотных пока-аали, что гормоны надпочечников не оказывают существенного влияния на реализацию действия антагонистов кальция на функцию ночек.

Кроне этого нами было изучено изменение активности ренин-ангиотензиновой системы при введении верапаыила. D исходной состоянии уровень ренина плазыы составлял 3,8 нг/мл-г. Через два часа после внутривенного введения верапамила уровень ренина значительно повысился ~ в средней в 2,8 раза (рис. I).

Повышение активности ренин-ангиотензиноЕОЙ системы могло обуславливать снижение диуреза в хронических опытах на собаках в течение первого часа после введения вералашла.

Наши результаты подтверждают данные ( Vander А..т., 19сV), что при уменьшении нагрузки натриец дисталышх канальц-ь концентрация его внутри клеток macula denaa t а ?акае а сладких к ах пкетагяомерулярного аппарата снижается н sto являете? г.тш\'~

Таблица 5

Влияние верапамила (5 иг/кг п/к) на функцию почек у адреналэктомировагаых крыс

Показатели Контроль ¡На фоне действия препарата 1 т I о |I день ;3 день ¡5 день ¡3-4 день, Iпосле отмены !

Диурез (мл/сут) 3,5±0,58 6,7*0,9б* 6,9*1,0* 5,1*0,85 2,9*0,60

Ввделение ионов (ммоль/сут): 2007*287*

натрия 1022*255 2637*308* 2255*525 1221*246

ка-тая 541*83,8 927*54,7* 975*62,0* 1085*85,4* 611*103-

кальция 7,7*1,36 17,1^2,3* 19,2*3,1* 14,1*2,6* 5,4*0,55

магния 5,1*0,95 12,5*1,^ 13,7*2,2* 8,6*1,7 3,8*0,36

Выделение креатинина (икыоль/сут) 26,5*4,1 28,0*4,6 37,5*3,5 35,9*3,5 25,8*3,3

Таблица 6

Влияние кифедипика (7 мг/кг per os ) на функцию почек у адреналэктомированных крыс

Показатели ч ¡Контроль ■ {На фоне действия препарата j3-4 день

jl день ¡3 день }5 день iпосле отмены !

Диурез (ад/сут) 4,7±0,54 6,7i0,80 7,4±0,3* б,С±0,44 4,8±0,33

Выделение ионое (ммсль/ сут) :

натрия 961^153 238(>¿480* 2129-122 IS33±I7Q* I00e±I43

калия 700*111 Г206±352 940*121 677±100 72S±90,8

кальция 9,2£0,9 13,8^1,б* 15,3±0,43* I2,3±Q,78* 8,7±D,6

магния 7,0^0,83 I0,6±I,cf Ю,3±0,23* 8,6^0,84 6,0-0,71

Выделение креатикина (мкмоль/сут) 29,7±2,7 40,3±5,8 28,1±3,9 29,4±2,S 29,2-2,5

Рис. I Влияние вершюмила (0,25 мг/кг в/в) на активность рошш-ангкотензяновой системы анаши крови у собак.

Светлые столбики Темные столбшси •

; - контрольные опыты - через 30 минут после введения ве-рапамяла.

- Ü3 -

лоц для усиления секреции ренина.

Churchill P.C. (1561) считает, что верапашл препятствует тормозящему действии калиевой деполяризации на секрецию ренина.

Неакскреториые Фуикщш псчак при пейсгвии антикальциеьых препаратов. Учитывая широкое биологическое значение ионов кальция, решено било изучить влияние антагонистов кальцин на неэнснреторные функпии почек.

!

Выживаемость крыс при иШ изучали на модели уранил-глицерн-нового нефрита. Суточная потребность в жидкости у интактних животных составляла в среднем 21 мл/сут. После введения уранил-глпцерн--цовой смеси потребность в воде увеличилась до 23 нл/сут. Ü то ¿о время суточный диурез возрос почти в 7 раз '.с 2,1 мл/сут до 13,6 мл/сут). Параллельно диурез в первые дни лссле введения ура-нил-г-лицеривоьой смеси наблюдалось повышение экскреции креатини-на - в среднем в 3 раза.

Тшсае с первых дней после шлвкцяя нефрогоиснчаснсй саьсл наблюдалось значительное .говшемив ьццеления белка с мочой - ь среднем в 14 раз. Максимум вцделения белка наблюдался на третьи сутки.

Наряду с определением содержания креатинина и белка и моче, определяли концентрации креатинина и мочевинн в пл-хлле крови. Уь..~ _;еиь креатинина и мочевины в плазме после введения урании-г\лицери~ новой смеси повысился (креатинина в 6 раз, мочевины в 14 раз). Начиная с 10-14 дня наблюдаемые показатели начали снижаться и к концу четвертой недели достигли исходных величин.

■ На фоне введения верапашла- (5 иг/к г и/к 10 дней) и нифпдц-пина (7 иг/кг per ю дней) течение острого нефрите прцкчк-чески не отличалось от протекания нефрита у контрольной группы животных, таким образен, антагонисты кальция ие o«a3Ubt>..v иуцесл-венного влияния на течение острой фасы ураннл-гдицеринй^огп wjj'i- .

рига у крыс.

Интересный данные были получены при изучении антагонистов

I

кальция на компенсаторную гипертрофию почки. В контрольной группе крыс объем остави'ейся почки на третьи сутки увеличился на 10,5%, а сухая масса органа стала на 0% больше, ранее удаленной интактноП почки (рис. 2). Более глубокие изменения наблюдались в группе животных, которым с первого дня вводили верапамил (50 мг/кг рчг ся ). Так объем почки на третьи сутки был на 39$ гыше, чем в контроле, а сухая масса гипертрофированной почки увеличилась на 3'о%.

После введения нифедипина показатели гипертрофии были немного ниже, чем при введении верапаилла, но достоверно выше, чем в контроле.

I

Для установления характера гипертрофических изменений нами были проведены морфометрические измерения стромы и паренхимы мозгового и коркового вещества почки. 1Сак видно из таблицы 7 наибольшие изменения наблюдались в корковом веществе почки. Таким образом, трехдневное введение вераламила и нифедипина вызывает истин» пул гипертрофию оставшейся почки, преимущественно коркового отдела.

ВЫВОДЫ

1. Верапамил и нифедипин усиливают суточное мочеотделение и ввделениа натрия, кальция и магния у крыс. Этот эффект проявляется спустя несколько часов после назначения препаратов, поскольку в хронических опытах на собаках в ближайшие часы верапамил и нифедипин такого ¡эффекта не оказали.

2. Водный диурез ант»! онистачи кальция угнетается в течение первого часа после 'годной нагрузки, а экскреция электролитов

при это).. уп1ш1№йтся.

Таблица 7

Морфоыэтрия мозгового и коркового вещества почки прк действии антагонистов кальция (б %)

¡лорковое вещество ¡Мозговое вещество

|паренхима г 1 1 1строка } паренхима 1 ¡" строма

йятактиая почка 85,1*0,73 14,5-1,01 76,4*1,2 22,410,56

НС"ГЕНСАТ0РНА£ П'ШЗРТРСЕШ

Ьез введения препаратов После введения верапаыила После введения нифздипинз 83,710,98 93,5-1,67* 91,311,0* 11.1-0,98 6,5*0,75* 5,4*Х,4В* 75,0*2.61 81,1*1,76 78,5*1,74 24,9*2,65 20,3*1,49 21 ^ 7о

жю

ш

№

ОЛ

0,2

О.!

1.2 !.П П.П

о,« о* пг

(2

П.?

0.«

03

" I г з I г з о

Рис, 2 Влияние антагонистов кальция на компенсаторный рост' почки.

А - вео крысн (г) В - вес почки (г) I - контрольная серия; 2 - опыты с введением вераламила (50 мг/кг риг с)3 - опыты с введением нифедипина (50 мг/кг Рсг

Сготлгэ столбики - показателя до ОНЭ

Темные столбики - показатели чорээ 3 дня посла ОИЭ

Б - сухая масса почки (г) Г - объем почки (см3)

3. Изученные антагонисты кальция не влияют на канальцеву« секрецию органических веществ и реабсорбцню глюкозы в почках.

4. Верапш.шл обладает прямым диуретическим действием на почку. При этом увеличение мочеотделения связано не только с канальцевым действием препарата, но и зависит от повышения плазмотока.

5. Антагонисты кальция на оказывают влияния на распределение воды в организме.

6. Верапамнл при внутривенном введении повышает активность ренина плазмы у собак. Содержание кортизола и кортикостерона а плазме при введении верапамила уменьшается,

7. Верапамил и нифедигаш не оказывают существенного влияния на течение острой фазы уранил-глицеринового нефрита у крыс.

8. Антагонисты кальция усиливают компенсаторную гипертрофии почки после односторонней нефрэктошш,

СПИСОЦ РАБОТ, ОПУБЯИ^ВАИНЫХ Ш МАТЕРИАЛАМ ДЩЕРТАЦШ

1. Госсен И.Е. Функция почек при действии блокаторов кальциевых каналов. Тезисы к УШ Всесоюзной конференции по физиологии почек и водно-солевого обмена. - Харьков, 1989. - С. 55,

2, Госсен И.Е. Транспорт органических веществ в почках при вьедв-НИ11 верапамила. В сб. трудов молодых ученых ЛГШ. - Барнаул, 1989. - С. 77-7У.

3, Госсен И.Е., Усольцева С,А. Влияние антагонистов кальция на водный диурез. Тезисы докладов Ш Всероссийской научной конференции "Фармакология ночек", - Барнаул, 1990, - С. 31-32.

4. Брюханов B.U., 1оссен И.Е, Непосредственное действие веранд-пила ца функцию почек. $армакология и токсикология, лв.ь ВЛ.Шь. 6.09,90, реф. & 49IC-B.