Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние аммония сукцината на основные фармакологические свойства кислоты ацетилсалициловой

Р Г Б ОД

о ь нэя ьэ:

* На правах рукописи

БУЛАТНИКОВ АЛЕКСАНДР ПЕТРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ АММОНИЯ СУКЦИНАТА НА ОСНОВНЫЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА КИСЛОТЫ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ

14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск - 1999

Работа выполнена на кафедре фармакологии Сибирского государственного медицинского университета.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, заслуженный деятель науки РФ, профессор Саратиков A.C.

Научный консультант:

доктор биологических наук, профессор Прищеп Т.П.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, заслуженный деятель науки РФ, профессор Пашинский В.Г. доктор биологических наук Новожеева Т.П.

Ведущая организация - Кемеровская медицинская академия

Защита состоится "_"_ 1999 г. в_часов на заседании диссертационного совета К 001.33.01 при НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН по адресу: 634028, г. Томск, пр. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН.

Автореферат разослан " " CßrtvßcßfL1999 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, ^

кандидат биологических наук Е.Н.Амосова

РШ- Wbfic^fs*

/

Актуальность проблемы. Кислота ацетилсалициловая является одним из наиболее популярных представителей группы нестероидных противовоспалительных средств, она известна более века в качестве эффективного флоголити-ка, анальгетика и жаропонижающего средства; как антиагрегант и антикоагулянт, кислота ацетилсалициловая нашла применение в комплексной терапии и профилактике тромботических осложнений при различных заболеваниях (Машковский М.Д., 1994; Белоусов Ю.Б. и соавт., 1997). Однако, назначение кислоты ацетилсалициловой ограничивается побочными эффектами, среди которых важнейшее место принадлежит ее раздражающему, вплоть до ульцеро-генного, влиянию на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта ( Гринько А.В. и соавт., 1998; Lanza F.L., 1984; Griffin M.R. et al., 1998). Одним из путей смягчения побочного эффекта кислоты ацетилсалициловой является создание комплексных препаратов с менее выраженным общетоксическим и ульцерогенным действием (Яковлева JI.B. и соавт., 1990; Рапп О.А., 1992; Shephero Н.А. et al., 1989).

Кислота янтарная и ее производные известны как средства, ослабляющие негативные воздействия на организм ряда токсических веществ, рентгеновского облучения, стрессорных состояний (Высочина И.В. и соавт., 1996; Косенко Е.А. и соавт., 1996; Бобков Ю.Г. и соавт., 1984). В экспериментах показано, что кислота янтарная и ее соли оказывают выраженное стимулирующее влияние на моторную, секреторную и ферментативную функции желудка, действуя непосредственно на его слизистую оболочку (Ноздрачева JI.B. и соавт., 1986; Ма-люк В.И. и соавт., 1979). На кафедре фармакологии Сибирского государственного медицинского университета показана высокая эффективность аммония сукцината в качестве антиацидотического и антиоксидантного средства (Ваи-зов В.Х., 1994; Плотникова Т.М. и соавт., 1994).

Цель работы. Экспериментальное изучение влияния аммония сукцината на фармакодинамику кислоты ацетилсалициловой в плане выявления возможного потенцирования ее основных фармакологических свойств (флоголитиче-ского, обезболивающего, жаропонижающего, антиагрегантного) и снижения побочных эффектов - общетоксического и ульцерогенного; создание комплексного препарата на основе кислоты ацетилсалициловой и аммония сукци-ната.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние аммония сукцината на антифлогистические свойства кислоты ацетилсалициловой при острых воспалительных реакциях, адъю-вантном артрите, изадриновом миокардите.

2. Исследовать влияние аммония сукцината на болеутоляющие и жаропонижающие эффекты кислоты ацетилсалициловой.

3. Изучить влияние аммония сукцината на антиагрегантное действие кислоты ацетилсалициловой.

4. Оценить антиульцерогенный эффект аммония сукцината на модели язвы желудка, вызванной кислотой ацетилсалициловой.

Научная новизна. Впервые выявлена способность аммония сукцината потенцировать некоторые фармакотерапевтические свойства кислоты ацетилсалициловой и снижать ее общетоксические и ульцерогенные эффекты.

Практическая значимость:

1. Предложен комплексный препарат Астам, состоящий из кислоты ацетилсалициловой и аммония сукцината, обладающий выраженными фармакоте-рапевтическими свойствами кислоты ацетилсалициловой в меньших, дозах и меньшей токсичностью.

2. В Фармакологический комитет МЗ РФ представлены материалы, характеризующие специфическую активность препарата Астам и его безвредность на предмет разрешения клинических испытаний в качестве нестероидного противовоспалительного средства.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Аммония сукцинат потенцирует некоторые фармакотерапевтические свойства кислоты ацетилсалициловой и снижает ее токсические эффекты (общетоксическое и ульцерогенное действия).

2. Предложен комплексный препарат кислоты ацетилсалициловой и аммония сукцината (2:1) под названием Астам.

3. Астам обладает антиэкссудативными, аптипролиферативными, обезболивающими, жаропонижающими, антиагрегантными и антиоксидантными свойствами.

4. Астам оказывает нормализующее действие на строение и метаболизм соединительной ткани и паренхиматозных органов, отек суставов при генерализованном артрите.

Апробация и публикации. Материалы настоящего исследования доложены и обсуждены на научно-практических конференциях Военно-медицинского факультета при Сибирском государственном медицинском университете (г.Томск, 1995, 1999). По теме диссертации опубликованы три работы, подана заявка на патент.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, характеристики объектов и методов исследования, 10 разделов собственных результатов экспериментальных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 298 источников, в том числе 114 иностранных. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 2 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объект исследования - комплексный препарат Астам, содержащий кислоту ацетилсалициловую (КАС) и аммония сукцинат (АС) в соотношении 2:1. В качестве прототипа использована КАС.

Эксперименты проведены на беспородных мышах обоего пола массой 18-24 г, крысах линии Wistar обоего пола массой 130-260 г (питомник "Рассвет", г.Томск) и взрослых беспородных собаках обоего пола. Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (г.Страсбург, 1986). Для исключения сезонных колебаний изучаемых показателей все эксперименты проведены в осенне-зимний период.

Распределение животных по видам эксперимента представлено в табл. 1.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Острую токсичность исследуемых препаратов определяли при однократном оральном введении в виде суспензии на 1% слизи картофельного крахмала. Учитывали клиническую картину отравления и гибель животных. LD50 рассчитывали методом графического пробит-анализа по Litchfield и Wilcoxon (Беленький M.JL, 1963), по результатам наблюдения за животными в течение 15 дней.

Спектр флоголитической активности исследован согласно "Методическим рекомендациям по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармакологических веществ" (Москва, 1983).

Острую воспалительную реакцию вызывали введением под плантарный апоневроз правой задней лапки 1% раствора каррагенина на изотоническом растворе натрия хлорида мышам - 0,05 мл, крысам - 0,1 мл. Исследуемые препараты вводили за 1 ч до инъекции флогогена, орально, однократно (Winter С.А. et al., 1962). Через 3,5 ч, на пике воспаления, мышей забивали путем дислокации шейного отдела позвоночника. Сравнивали массу отечной и здоровой

лап и определяли в процентах степень подавления отека в опытных группах по сравнению с группой контрольных животных.

Величину отечной лапки крыс измеряли онкометрически, в каждом наблюдении из трех замеров брали среднее значение. Объем отечной конечности выражали в процентах по отношению к первоначальному, принятому за 100. На фоне каррагенинового воспаления объем отечной конечности измеряли через 1, 2, 3, 4, 8 и 24 ч. Процент угнетения отека рассчитывали по Green V. et al., (1971).

Модель экссудативного перитонита создавали внутрибрюшинным введением 1 мл 0,2% раствора серебра нитрата (Либерман С.С., Яхонтов J1.H., 1973). Исследуемые препараты вводили за 30 мин до инъекции флогогена.

Проницаемость капилляров брюшной полости оценивали по методу Whittle В. (1964). Исследуемые препараты вводили однократно, орально.

Антипролиферативное действие оценивали по массе грануляционно-фиброзной ткани на модели хлопковой гранулемы (Meier R. et al., 1950). Исследуемые препараты вводили ежедневно в течение 7 сут внутрижелудочно. На восьмые сутки животных забивали, ватные тампоны с грануляционной тканью извлекали, высушивали до постоянной массы при 55°С.

Обезболивающее действие оценивали по возникновению корчей, вызванных внутрибрюшинным введением 0,25 мл 0,75% раствора кислоты уксусной (Caschin С. et al., 1977). Исследуемые препараты вводили однократно, орально, за 1 ч до инъекции химического раздражителя.

На моделях экспериментального воспаления и болевого синдрома определены оптимальные дозы для препарата сравнения - КАС и комплексных препаратов, состоящих из КАС и АС в соотношении 1:1,2:1,3:1.

Жаропонижающие свойства Астама и КАС оценивали по их способности оказывать гипотермический эффект у крыс на фоне лихорадки, вызванной внутривенным введением пирогенала из расчета 500 мпд/кг. До введения пиро-

s

генала у крыс в течение недели измеряли массу тела, ректальную температуру медицинским электротермометром ТПЭМ-1, следили за общим состоянием.

Исследуемые препараты вводили орально, однократно, на фоне максимального повышения температуры (через 1,5 ч).

Углубленная оценка антифлогистического эффекта Астама выполнена на фоне адыовантной болезни крыс, вызванной субплантарным введением 0,1 мл адъюванта Фрейнда, содержащего убитые нагреванием микобактерии вакцины БЦЖ в вазелиновом масле (Pearse А., 1974). Астам и КАС в оптимальных дозах вводили ежедневно на протяжении 20 сут. Для оценки антиэкссудативного действия исследуемых препаратов в разные сроки после начала эксперимента онкометрически измеряли отечную конечность. На 21 сут крыс декапитировали и проводили морфогистохимическое исследование ткани голеностопных суставов, сердца, почек.

Кусочки органов фиксировали жидкостью Карнуа, проводили через спирт-целлоидин-хлороформ, заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизон, РНК выявляли галлоцианом по Эйнарсону (Пирс Э., 1962), ГАГ - алциановым синим по Стидмену (Луппа X., 1980). Оценку относительной величины гистохимических показателей проводили полуколичественным методом (Радионова В.Г., 1978).

На модели изадринового миокардита крыс изучено влияние Астама и КАС на состояние метаболизма сердца (Тринус Ф.П. и соавт., 1974). Изадрин (72 мг/кг) вводили внутримышечно, в область спины, исследуемые препараты - орально за сутки до инъекции изадрина и в течение последующих 2-х дней. До и через 2 ч и 4 ч после введения изадрина у животных регистрировали ЭКГ по Н-м стандартном отведении. Для морфогистохимических исследований миокарда животных забивали, полученный материал фиксировали и обрабатывали по вышеописанной методике.

Антиокислительнуто активность Астама и КАС на фоне адъювантной болезни крыс исследовали в опьггах in vitro по накоплению конечного продукта

перекисного окисления липидов (ПОЛ) - малонового диальдегида (МДА) по общепринятой методике. Образование МДА определяли при стимуляции ПОЛ в гомогенатах печени крыс. Исследовали фоновое содержание МДА, концентрацию его при спонтанном, неферментативном и ферментативном перекисном окислении; рассчитывали скорость его образования. Оптическую плотность окрашенного комплекса - раствора кислоты 2-тиобарбитуровой, взаимодействующего с МДА измеряли при 532 нм па СФ-46. При расчете скорости образования вторичного продукта ПОЛ использовали молярный коэффициент экс-тинции 1,56 х 105см''М"' (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972).

Содержание в пробе белка определяли биуретовым методом (Тодоров И., 1968). Интенсивность фиолетовой окраски раствора измеряли на ФЭК KF-77 с максимумом пропускания 540 -560 нм, против контроля. Расчет вели по калибровочной кривой.

Влияние препаратов Астам и КАС на параметры функционального состояния системы кровь - сосудистая стенка определяли по методикам, описанным Э.С.Габриеляном и С.Э. Акоповым (1985). Астам и КАС вводили ежедневно, орально в течение 7 сут. Контрольные животные получали эквиобъем-ное количество крахмальной слизи. Кровь для исследования брали под эфирным наркозом из сонной артерии. Для исследования агрегации эритроцитов использовали модифицированный микроколориметр МКМФ-1 (Плотников М.Б. и соавт., 1995). Графическую регистрацию осуществляли на графопостроителе Н-306.

Агрегацию тромбоцитов изучали по методу G.V.Born (1962). Для оценки антиагрегантной активности сосудистой стенки у крыс, получавших исследуемые препараты, выделяли фрагмент брюшной аорты (массой 4-5 мг) и инкубировали его 3 мин в богатой тромбоцитами плазме (БТП) интактных животных.

Влияние АС на ульцерогенное действие КАС изучено в лечебном и профилактическом вариантах. КАС в дозе 200 мг/кг вводили per оз дважды с интервалом в 4 ч. В лечебном варианте через 1 ч после последнего введения КАС

крысы получали АС в дозе 100 т/кг, контрольной группе вводили эквиобъем-ное количество крахмальной слизи. АС вводили однократно в течение 3-х сут. Через 24 ч после последнего введения крыс забивали. Желудки извлекали, вскрывали по малой кривизне, промывали 0,9% раствором натрия хлорида, проводили макроскопическую оценку слизистой и подслизистой желудка, рассчитывали индекс изъязвления и противоязвенную активность (Pauls F. et al., 1947).

Для оценки профилактического эффекта АС последний вводили крысам ежедневно в течение 7 дней в дозе 100 мг/кг. Контрольные животные получали эквиобъемное количество крахмальной слизи по аналогичной схеме. На 7-е сут эксперимента, через 1 ч после последнего введения АС, крысам вводили КАС в дозе 200 мг/кг, через 4 ч КАС вводили повторно в аналогичной дозе, забой животных проводили через 18 ч после последнего введения КАС. Желудки извлекали и исследовали по методике, описанной в лечебном варианте.

Исследуя хроническую токсичность. КАС и Астам вводили: крысам -ежедневно, внутрижелудочно через зонд в виде взвеси на 1% крахмальной слизи; собакам - скармливали с пищей в течение 5 мес. О степени токсичности судили по общему состоянию животных, динамике массы тела, показателям периферической крови, функциональному состоянию печени, почек, сердечнососудистой системы, ЦНС. Исследуемые показатели регистрировали до введения препаратов, через 1,5 и 5 мес. По окончании эксперимента внутренние органы и ткани подвергали гистологическому исследованию.

Обработка результатов экспериментов проведена с помощью параметрического критерия t Стыодента с вычислением средней арифметической (х) и ее стандартной ошибки (Sx), в части экспериментов - доверительного интервала при Р<0,05 (Беленький М.Л., 1963; ГФ XI, 1987).

Таблица 1

Распределение животных по видам эксперимента

№ п/п Модель исследования Вид животных Число животных Вид активности

1 2 3 4 5

1. Острая токсичность Крысы Мыши 49 60 Общетоксическая

2. Хроническая токсичность Крысы Собаки 60 4 Общее состояние, показатели периферической крови, гистологическое исследование внутренних органов

3. Острое каррагениновое воспаление с определением ЭД50 ' Мыши Крысы 110 98 Антиэкссудативная

4. Экссудативный перитонит Крысы 32 Антиэкссудативная

5. Проницаемость капилляров Мыши 40 Антиэкссудативная

6. Хлопковая гранулема Крысы 48 Антипролиферативная

7. Тест "уксусные корчи" Мыши 91 Анальгетическая

8. Пирогеналовая лихорадка Крысы 36 Жаропонижающая

9. Адъювантный артрит Крысы 27 Противовоспалительная

10. Изадриновый миокардит Крысы 24 Противовоспалительная

1 2 3 4 5

11. ПОЛ в гомогенатах печени на фоне адъювантной болезни Крысы 27* Антиоксидантная

12. АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов Крысы 18 Антиагрегантная

13. Спонтанная агрегация эритроцитов Крысы 18 Антиагрегантная

14. Антиагрегантная активность сосудистой стенки Крысы 18 Антиагрегантная

15. Влияние АС на СОЖ профилактический и лечебный варианты Крысы 30 20 Антиульцерогенная

Итого: Крысы Мыши Собаки 478 301 4

Примечание: * - в общей сумме не учтены ввиду использования после модели адъювантной болезни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Острая токсичность. На основании предварительных опытов исследовано влияние АС на острую токсичность КАС в соотношении 1:4; комплексный препарат, содержащий АС и КАС при внутрижелудочном введении по параметрам острой токсичности существенно отличается от препарата сравнения КАС. 1^50 КАС для мышей составил 2340 мг/кг, комплексного препарата (в

пересчете на содержание КАС) - 3280 мг/кг; для крыс соответственно 1820 мг/кг и 3072 мг/кг.

Ранее показано, что АС является малотоксичным соединением: при оральном введении LD50 для крыс составляет 10000 мг/кг, для мышей 7400 мг/кг.

Судя по величине LD50, АС снижает острую токсичность КАС - коэффициент защиты для мышей и крыс составил 1,40 и 1,69 соответственно.

2. Флоголитические свойства комплексного препарата КАС и АС.

Влияние АС на антиэкссудативное действие КАС.

Результаты исследования на мышах развития воспалительного отека лапки после введения каррагенина свидетельствуют, что оптимальная эффективная доза КАС составляет 300 мг/кг; в этой дозе КАС подавляет развитие отека на 49,5%, повышение дозы до 400 - 500 мг/кг существенно не влияет на активность препарата.

Для выявления потенцирующего эффекта и выбора оптимальной дозы АС, последний вводили н количестве 50 - 150 мг/кг в сочетании с 200 или 300 мг/кг КАС. Опыты показали, что АС, не обладая существенным антиэкссуда-тивным действием, повышает флоголитический эффект КАС; лучшие результаты ингибиции отека получены при совместном введении КАС с АС в дозе 100 мг/кг. Следовательно, выявлено взаимодействие КАС и АС в плане потенцирования одного из основных фармакотерапевтических свойств КАС - флого-литического.

В опытах на крысах в условиях острого воспаления, вызванного карраге-нином, у контрольных животных отек лапки интенсивно развивался в течение 3-4 ч после инъекции флогогена, достигая к этому времени 201,2% исходной величины. Интенсивность каррагенинового отека коррелирует с возрастанием продукции гистамина, серотонина, компонентов кининовой системы, ПГ (Ferreira S.H. et al.,1978), активацией липоксигеназы (Holsapple М.Р. et al.,1984),

резким повышением активности кислой фосфатазы (\Veisher С.Н. еХ а1., 1975, 1976).

У крыс на фоне воспаления, обусловленного воздействием каррагенина, установлена дозо-зависимость антиэкссудативного эффекта комплексных препаратов КАС и АС (в соотношении 1:1,2:1,3:1), КАС и АС. Выбор оптимальных доз и состава комплексного препарата, проведенный на каррагенино-вой модели воспаления при оральном однократном введении крысам за 1 ч до инъекции флогогена определил (табл.2) наиболее эффективные дозы для: КАС - 300 мг/кг, АС - 150 мг/кг, комплексного препарата, состоящего из КАС и АС 3 : 1 (300 мг/кг + 100 мг/кг).

Таблица 2

Влияние АС на антиэкссудативное действие КАС при каррагениновом

воспалении (пик экссудации) (х ± 8х; п = 8)

№ п/п Препарат Доза мг/кг Прирост объема отечной конечности крыс по отношению к первоначальному, принятому за 100 Угнетение каррагенино-вого отека, %

1 Контроль 101,213,76 —

2 КАС 100 51,3 ±2,33 48,7

3 КАС 200 33,3+4,24 66,7

4 КАС 300 26,5 + 3,96 73,5

5 АС 50 96,4 ± 5,43 3,6

б АС 100 87,3+3,21 12,7

7 АС 150 77,5+3,60 22,5

8 КАС + АС 100+ 100 46,6 ±1,03 53,4

9 КАС + АС 200+ 100 29,1 ±2,59 70,9

10 КАС + АС Р9-10 300+ 100 19,4 + 6,37 0,183 80,6

На пике каррагенинового воспаления (3 ч после введения провоспали-тельного агента) КАС в дозе 300 мг/кг ограничивала экссудацию на 73,5% ; АС в дозе 150 мг/кг угнетал отек на 22,5%. Каррагениновое воспаление при введении комплексного препарата КАС и АС (3:1) было наименее выраженным (его ингибиция на пике составила 80,6%), достоверно не отличаясь (Р=0,183) от эффекта комплексного препарата КАС н АС (2 : 1) и КАС в соответствующей дозе.

Результаты, полученные в опытах на мышах и крысах при каррагенино-вом отеке, показывают, что АС, не обладая существенным антиэкссудативным действием, повышает антиэкссудативный эффект КАС. Для выявления потенцирующего эффекта АС на фармакотерапевтическую активность КАС во всех дальнейших исследованиях применяли препарат, получивший название Астам, состоящий из КАС и АС в соотношении 2 : 1 в дозах 200 мг/кг + 100 мг/кг соответственно.

Антиэкссудативное действие Астама и КАС (200 мг/кг), изученное в динамике на фоне каррагенинового воспаления (табл.3) показывает, что оба препарата достоверно и в равной степени (Р> 0,1) тормозили развитие каррагенинового отека через 1, 2,3, 4,8 и 24 ч.

Таблица 3

Влияние Астама и КАС на острое воспаление у крыс, вызванное каррагенином (x+Sx; п=6)

Прирост объема отечной конечности крыс по

№ Пре- Доза отношению к первоначальному

п/п парат мг/кг Время после введения флогогена, ч

1 2 3 4 8 24

1 Контроль — 51,6+3,97 77,8±1,98 102,5 +4,64 86,4+5,96 51,9+2,56 30,2±9,26

2 Астам 200+ 22,6+2,78 27,9±2,08 24,4±3,64 25,0+0,01 14,1+2,60 3,8+1,04

Р,-2 100 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,001

3 КАС 200 17,8+1,57 23,1±1,59 21,2±1,05 24,6+4,71 18,6±4,17 4,9±1,06

Р.-з 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,001

Р2-з 0,163 0,102 0,442 0,922 0,389 0,500

Астам оказывает отчетливое нормализующее влияние на проницаемость капилляров (измененную внутрибрюшинной инъекцией кислоты уксусной), снижая их реактивность на 61,5% (рис.1). Торможение сосудистой проницаемости под влиянием КАС в аналогичной дозе и условиях эксперимента оказалось достоверно слабее, составив 44,2%. Нормализующее влияние Астама на изменение микроциркуляторного звена, возможно, обусловлено антагонизмом к ведущему компоненту воспалительного процесса - метаболизму кислоты ара-хидоновой на уровне ее циклоохсигеназного превращения, усиленному анти-оксидантаым действием АС (Плотникова Т.М., 1992). По-видимому, отчетливый протективный эффект Астама на проницаемость капилляров способствует ослаблению острой воспалительной реакции, индуцированной каррагенином.

Показателем ингибиции проницаемости сосудисто-тканевых барьеров под влиянием Астама и КАС явилась способность последних уменьшать накопление экссудата на 52,5% и 61,5% соответственно при экспериментальном перитоните. Следует отметить, что в контрольной группе (нелеченные животные) после введения флогогена экссудат содержал кровь; в группах животных получавших Астам и КАС, экссудат имел светло-желтую окраску.

Таким образом, препараты Астам и КАС, практически в равной степени достоверно угнетали сосудистый компонент воспалительной реакции на фоне острого отека и экспериментального перитонита. Отчетливое ограничение экс-судативных проявлений воспалительного процесса под влиянием Астама и КАС, вероятно, связано с торможением синтеза всей гаммы медиаторов воспаления.

Астам и КАС эффективно уменьшали массу грануляционно-фиброзной ткани (в среднем на 56,1% и 51,4% соответственно) в ранний период пролифе-ративной фазы воспаления, когда метаболизм сульфатированных гликозами-ногликанов (ГАГ) играет ведущую роль в формировании гранулемы (Клебанов Б.М., 1981).

Рис. 1. Влияние препаратов Астам и КАС на проницаемость капилляров (п = 8).

Обозначения: 1 - КАС - 200 мг/кг; 2 - КАС 300 мг/кг; 3 - Астам;

4 - комплексный препарат КАС и АС (3:1) * - различия статистически достоверны с КАС - 200 мг/кг при Р<0,05

3. Анальгетическая активность Астама и КАС. В табл. 4 приведены результаты определения эффективных доз исследуемых препаратов на модели уксусных корчей. Ингибиция корчей КАС в дозе 300 мг/кг составила в среднем 40,5%, под влиянием комплексного препарата КАС и АС (3 : 1) происходило максимальное угнетение корчей - на 64,2% без достоверных различий с угнетением болевого синдрома Астамом.

Таблица 4

Обезболивающий эффект Астама и КАС (х±Вх;п= 13)

№ Препарат Доза мг/кг Количество корчей Процент угнетения

п/п корчей

1 Контроль 55,0 + 1,91

2 КАС 100 42,3 +2,12 23,1

Рь2 <0,001

3 КАС 200 33,7±3,14 38,7

Рь5 <0,001

4 КАС 300 32,7114,23 40,5

Р.-4 <0,001

5 КАС + АС 100 + 100 32,92+1,64 40,1

Р1-5 <0,001

Р2-5 0,004

6 Астам 200 + 100 23,6911,91 56,9

Р1-6 <0,001

Рз-6 < 0,001

7 КАС + АС 300 + 100 19,5712,72 64,2

Р1-7 <0,001

Р4-7 0,023

Р., 0,230

Анальгетический эффект Астама соответствует результатам, полученным на моделях экссудативной и пролиферативной фаз воспалительного процесса. Астам имел достоверное преимущество (Р<0,05) перед препаратом сравнения -КАС, что свидетельствует о потенцирующем эффекте АС на анальгетические свойства КАС.

Уменьшение чувствительности болевых рецепторов исследуемыми препаратами связано, по-видимому, с ингибицией альгогенных соединений про-стагландинов (ПГ) группы Е, гистамина, серотонина, ацетилхолина (Сигидин Я.А. и соавт., 1988). Усиление анальгезии Астамом, возможно, связано со стресспротективным действием кислоты янтарной и ее производных, реализующемся на уровне клетки и целого организма за счет их антиоксидантных свойств (Рачков А.К., 1988; Плотникова Т.М., 1992).

4. Жаропонижающие свойства Астама и КАС. На фоне лихорадки, вызванной пирогеналом, максимальное повышение ректальной температуры, в среднем на 1,4°С, наблюдалось через 1,5 ч. Астам, введенный на пике лихорадочной реакции, снижал повышенную температуру тела крыс в среднем на 0,87°С, КАС - на 0,42°С. Нормализация температуры у животных, получавших Астам, в период наблюдения проходила более интенсивно.

Выраженный жаропонижающий эффект Астама на фоне экспериментальной пирогеналовой лихорадки позволяет предположить, что его антипире-тическое действие связано с ингибицией гипоталамических нейронов центров терморегуляции и специфических медиаторов этих центров - серотонина и ПГЕ! (БресЮг V/., 1974).

5. Влияние Астама и КАС на структурно-метаболические изменения при адъювантной болезни и токсическом миокардите'. Первичная воспалительная реакция на инокуляцию адъюванта проявлялась через 3 ч покраснением и значительным отеком конечности; позже, к 6 - 8 ч появлялись отеки коленного,

' Эта часть работы выполнена совместно с профессором кафедры фармакологии СГМУ А.И.Венгеровским.

голеностопного, пяточного, фалангового суставов лапки, ушей, гениталий, хвоста. На 3-й сут суставы становились синюшными и болезненными, крысы -весьма агрессивными.

Астам и КАС в равной степени препятствовали развитию отека суставов в период острого артрита; так, на 12-е сут оба препарата угнетали экссудацию в среднем на 23%. В период генерализованного заболевания, когда у животных развивался полиартрит, и до конца эксперимента, развитию отека более эффективно препятствовал Астам, угнетение экссудации под его влиянием (15 сут) составило в среднем 32,4%, при назначении КАС - 21,6%, на 21-е сут -34,8% и 23,9% соответственно.

Морфогистохимические исследования органов и тканей, наиболее часто поражаемых при ревматизме - голеностопных суставов, сердца и почек, проведены на 21-е сут после инокуляции полного адъюванта Фрейнда.

В голеностопных суставах крыс возникали: пролиферация синовиоцитов с возрастанием активности кислой фосфатазы, лактатдегидрогеназы и глюко-зо-6-фосфатдегидрогеназы, мукоидное набухание соединительной ткани, повышение проницаемости капилляров, нарушение коллагеногенеза в фибробла-стах. Поражение сердца характеризовалось очаговым эндомиокардитом. В почках диагностировали очаговый экстраинтракапиллярный гломерулонефрит в сочетании с нефрозом. Метаболические отклонения в паренхиме сердца и почек соответствовали хронической гипоксии, причиной этого патологического состояния является затруднение транспорта кислорода через жидкость, окружающую капилляры.

Астам и КАС практически в одинаковой степени нормализовали строение и метаболизм тканей голеностопных суставов, сердца и почек на фоне адъювантной болезни. У животных, леченных Астамом, синовиальная оболочка голеностопного сустава построена из 3 - 4 рядов клеток, основное межуточное вещество содержало нормальное количество ГАГ, коллагеновые волокна умеренно набухшие, с хорошо заметным фибриллярным строением, ярко фук-

синофильны, очаги их деструкции отсутствовали. Сохранялась пролиферация макрофагов и фибробластов. У крыс, получавших КАС, дополнительно к указанным выше изменениям наблюдались единичные лимфоцитарные инфильтраты. При введении Астама эндотелий эндокарда формировал непрерывный пласт, в эндокарде и миокарде нормализовалось количество кислых ГАГ, сосуды были не расширены, сохранялись единичные периваскулярные лимфоидно-макрофагальные инфильтраты. Строение кардиомиоцитов было аналогично интактным животным - они содержали нормальное количество РНК. Под влиянием терапии КАС строение сердца было соответственно таковому у животных, леченных Астамом, хотя отмечалось развитие периваскулярного отека вокруг единичных расширенных капилляров. У крыс, получавших Астам и КАС на фоне адъювантной болезни, почечные тельца были одинаковой величины, округлые, капилляры клубочка не расширены, имели слегка утолщенную ба-зальную мембрану. В капсуле клубочка сохранялся непрерывный эпителиальный слой. Нефроциты извитых канальцев и кортикального сегмента петли нефрона представляли собой высокие клетки со светлыми, округлыми, расположенными центрально ядрами, содержавшими нежный хроматин. Количество РНК в цитоплазме нефроцитов было нормальным; лишь единичные нефроциты находились в состоянии гидропической дистрофии.

Астам на фоне генерализованного артрита более активно устранял отек суставов, нормализовал строение и метаболизм соединительной ткани и паренхиматозных органов.

Нормализующее действие Астама и КАС на структурно-метаболические показатели сердца было подтверждено на модели экспериментальной патологии, идентичной миокардиту. У животных, получавших Астам и КАС, через 2 и 4 ч после введения изадрина, по данным ЭКГ, не выявлено существенных изменений частоты сердечных сокращений и величины систолического показателя.

Флоголихический эффект Астама при адъювантной болезни обусловлен, по-видимому, преимущественно ингибицией экссудации и альтерации. В арти-кулярной соединительной ткани, строме внутренних органов препарат угнетал свободнорадикальное окисление липидов в биологических мембранах, где локализованы протеолитические ферменты, блокировал выброс лизосомных ферментов в окружающую среду, препятствовал распаду ГАГ. Уменьшение отека облегчало диффузию кислорода и устраняло гипоксию паренхимы. Интенсивный гликогенолиз в кардиомиоцитах и гепатоцитах служил дополнительным источником для внутриклеточных репаративных процессов (Сарати-ковА.С. и соавт., 1983).

6. Влияние Астама и КАС на ПОЛ в печени крыс на фоне адъювантной болезни. Известно, что ПОЛ играет существенную роль в нормальной жизнедеятельности клеток и в патологических процессах, в частности, при различного типа поражениях печени. Паренхима печени имеет достаточно высокий уровень субстратов перекисного окисления; около 40% структурных липидов, определяющих пространственную стабилизацию клеточных мембран гепатоци-тов, содержит полиненасыщенные жирные кислоты (Владимиров Ю.А., Арча-ков А.И., 1972). Первичными продуктами ПОЛ являются диеновые конъюгаты, дальнейшее превращение гидроперекисей приводит к образованию вторичных токсичных продуктов, в частности, МДА.

Результаты экспериментов показали, что на фоне развивающегося адъю-вантного артрита, у крыс возрастает скорость образования МДА: при спонтанном, неферментативном и ферментативном перекисном окислении - на 41,0 % и 24,4% соответственно. Введение Астама "артритным" крысам препятствовало накоплению продуктов ПОЛ на 12,7% при спонтанном окислении; скорость образования МДА при ферментативном окислении снижалась на 33,5%. Аналогичным был эффект и от применения КАС: скорость образования МДА при неферментативном перекисном окислении снижалась на 27,8%, при ферментативном - на 28,4 %.

Таким образом, оба препарата снижали содержание МДА - вторичного продукта липопероксидации в печени "артритных" животных, нейтрализуя свободные радикалы в реакциях ПОЛ, по-видимому, за счет повышения антиокислительной способности тканей.

7. Влияние Астама и КАС на агрегацию эритроцитов, тромбоцитов и антиагрегантную активность сосудистой стенки. Результаты наших экспериментов показали, что исследуемые препараты достоверно ослабляли показатели спонтанной агрегации эритроцитов, в частности, Астам и КАС увеличивали полупериод агрегации на 76,4% и 88,3% соответственно по сравнению с контрольной группой животных. Степень агрегации тромбоцитов у крыс, получавших Астам и КАС составила 62,2% и 66,5% соответственно, что выше аналогичных показателей контрольных животных (83,1%), достоверных различий по степени агрегации тромбоцитов между исследуемыми препаратами не обнаружено.

Астам и КАС препятствуют проявлению проадгезивных свойств АДФ, не оказывая влияния на антиагрегантную активность сосудистой стенки.

Следовательно-, Астам обладает выраженной антиагрегантной активностью, проявляющейся в способности подавлять АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов, ослаблять спонтанную агрегацию эритроцитов, не оказывая влияния на антиагрегантную активность сосудистой стенки.

8. Влияние АС на ульцерогенное действие КАС.

Повреждающее действие КАС на слизистую оболочку желудка (СОЖ) обусловлено рядом причин, доминирующей из которых является угнетение синтеза ПГЕ, приводящее к уменьшению внутриклеточного цАМФ и энергообразования, что нарушает микроциркуляцию в СОЖ и регенерацию ее клеток (Илинич В.К., 1974; Сигидин Я.А. и соавт., 1988; Цодиков Г.В., 1994). Поражение СОЖ под воздействием КАС связывают с ее влиянием на обкладочные клетки желудка (НашзРогс! К.О. е1 а1., 1976). КАС, диссоциируясь в клетке, об-

разует протоны, способствующие высвобождению лизосомных ферментов i аутолизу клеток.

Мы констатировали высокую антиульцерогенную активность АС в условиях совместного введения с КАС: при профилактическом введении этого препарата крысам в течение 7 дней показатель противоязвенной активности составил 34,2, кроме того, АС достоверно препятствовал снижению лейкоцитов в периферической крови по отношению к контрольной группе животных.

Лечебное действие АС проявилось в снижении числа животных с язвами до 40%, в группе контроля - 100%. АС весьма существенно угнетал образование точечных деструкции на слизистой желудка крыс, что давало, в конечном итоге, высокий гастропротективный эффект, антиульцерогенная активность составила 33,3.

Четко выраженные гастропротективные свойства АС в отношении КАС связаны, по-видимому, с регуляцией секреторного процесса в слизистой желудка за счет восстановления функции митохондрий, активности СДГ, играющей ведущую роль в обеспечении энергией клеток желудочных желез (Конд-рашоваМ.Н., 1976; Ноздрачева JI.B. исоавт., 1986).

9. Хроническая токсичность1. В хроническом эксперименте (5 мес), выполненном на пяти группах крыс (интактные, три группы, получавшие Астам в дозах 50, 150 и 300 мг/кг, пятой группе вводили КАС - 240 мг/кг) и четырех собаках, установлено, что Астам не оказывал токсического влияния на общее состояние, динамику массы тела, гемограмму, сердечно-сосудистую систему и ЦНС, функциональное состояние печени и почек. На основании этих данных и результатов патоморфологического исследования внутренних органов подопытных животных установлено, что Астам при 5 мес курсе введения в дозе 50 мг/кг (соответствует терапевтической дозе для человека 500 мг в пересчете на единицу поверхности тела) не оказывает заметного токсического действия.

1 Этот раздел работы выполнен совместно с сотрудниками кафедры фармакологии СГМУ Н.С. Лившиц, Ф.И. Бурченковой,Н.Г. Кадычаговой, P.P. Ахмеджановым, Л.В. Башировой

В больших дозах (150 и 300 мг/кг), как и КАС а дозе 240 мг/кг, Астам вызывает в желудке крыс явления острого эрозивного гастрита. Этот эффект дозозави-сим: при отмене препарата в течение 2-х нед происходит восстановление нормального строения СОЖ.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что АС потенцирует некоторые фармакотерапевтические свойства КАС и снижает ее токсические эффекты (общетоксическое и ульцерогенное действия). При определении оптимальных эффективных доз потенцирующего эффекта АС лучшие результаты получены в группах животных, получавших препарат в дозе 100 мг/кг; это послужило основанием количественного содержания АС в препарате Астам. Оригинальный препарат Астам, представляющий сочетание КАС и АС (2:1), обладает кадилляроукрепляющим, антиагрегантным, антиок-сидантным, антиэкссудативным, антипролиферативным, обезболивающим и жаропонижающим действием. Астам тормозит развитие структурно-метаболических нарушений при хроническом иммунном воспалении суставов и внутренних органов.

ВЫВОДЫ

1. Аммония сукцинат снижает общетоксические и ульцерогенные свойства кислоты ацетилсалициловой.

2. Аммония сукцинат усиливает основные фармакотерапевтические эффекты кислоты ацетилсалициловой (противовоспалительные, обезболивающие, жаропонижающие).

3. Получен комплексный препарат Астам, содержащий кислоту ацетилсалициловую и аммония сукцинат в соотношении 2:1.

4. Астам обладает более выраженным в сравнении с кислотой ацетилсалициловой: нормализующим влиянием на проницаемость капилляров, угне-

тающим действием на размножение грануляционно-фиброзной ткани, восприятие болевых раздражений, лихорадочную реакцию.

5. Астам на фоне генерализованного артрита более эффективно, чем кислота ацетилсалициловая устраняет отек суставов, нормализует строение и метаболизм соединительной ткани и паренхиматозных органов.

6. В равной степени с кислотой ацетилсалициловой Астам ослабляет развитие каррагенинового отека и экссудативного перитонита, проявляет антиок-сидантные и антиагрегантные свойства.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изучение влияния производного дикарбоновой кислоты на противовоспалительную и анальгетическую активность кислоты ацетилсалициловой // Актуальные вопросы медицинского обеспечения войск, подготовки и усовершенствования военно-медицинских кадров. - Томск, 1995. - Вып. 6. - С. 125.

2. Противоязвенная активность аммония сукцината на модели аспирино-вой язвы / В соавт. с Л.А.Сибилевой // Актуальные вопросы военной медицины.-Томск, 1999.-С. 351.

3. Влияние препарата Астам на структурно-метаболические изменения при адъювантной болезни / В соав. с А.И.Венгеровским., Л.А.Сибилевой // Там же. - С. 50-52.

Актуальность проблемы. Кислота ацетилсалициловая является одним из наиболее популярных представителей группы нестероидных противовоспалительных средств, она известна более века в качестве эффективного флоголитика, анальгетика и жаропонижающего средства; как антиагре-гант и антикоагулянт, кислота ацетилсалициловая нашла применение в комплексной терапии и профилактике тромботических осложнений при различных заболеваниях. Однако, назначение кислоты ацетилсалициловой ограничивается побочными эффектами, среди которых важнейшее место принадлежит ее раздражающему, вплоть до ульцерогенного, влиянию на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта. Одним из путей смягчения побочного эффекта кислоты ацетилсалициловой является создание комплексных препаратов с менее выраженным общетоксическим и ульце-рогенным действием.

Кислота янтарная и ее производные, в последнее время, известны как средства, ослабляющие негативные воздействия на организм ряда токсических веществ, рентгеновского облучения, стрессорных состояний. В экспериментах показано, что кислота янтарная и ее соли оказывают выраженное стимулирующее влияние на моторную, секреторную и ферментативную функции желудка, действуя непосредственно на его слизистую оболочку [103]. На кафедре фармакологии Сибирского государственного медицинского университета показана высокая эффективность аммония сукцината в качестве антиацидотического и антиоксидантного средства [121, 122].

Цель работы. Экспериментальное изучение влияния аммония сукцината на фармакодинамику кислоты ацетилсалициловой в плане выявления возможного потенцирования ее основных фармакологических свойств (флоголитического, обезболивающего, жаропонижающего, антиагрегант-ного) и снижения побочных эффектов - общетоксического и ульцерогенно6 го; создание комплексного препарата на основе кислоты ацетилсалициловой и аммония сукцината.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние аммония сукцината на антифлогистические свойства кислоты ацетилсалициловой при острых воспалительных реакциях, адъювантном артрите, изадриновом миокардите.

2. Исследовать влияние аммония сукцината на болеутоляющие и жаропонижающие эффекты кислоты ацетилсалициловой.

3. Изучить влияние аммония сукцината на антиагрегантное действие кислоты ацетилсалициловой.

4. Оценить антиульцерогенный эффект аммония сукцината на модели язвы желудка, вызванной кислотой ацетилсалициловой.

Научная новизна. Впервые выявлена способность аммония сукцината потенцировать некоторые фармакотерапевтические свойства кислоты ацетилсалициловой и снижать ее общетоксические и ульцерогенные эффекты.

Практическая значимость:

1. Предложен комплексный препарат Астам, состоящий из кислоты ацетилсалициловой и аммония сукцината, обладающий выраженными фармакотерапевтическими свойствами кислоты ацетилсалициловой в меньших дозах и меньшей токсичностью.

2. В Фармакологический комитет МЗ РФ представлены материалы, характеризующие специфическую активность препарата Астам и его безвредность на предмет разрешения клинических испытаний в качестве нестероидного противовоспалительного средства.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Аммония сукцинат потенцирует некоторые фармакотерапевтические свойства кислоты ацетилсалициловой и снижает ее токсические эффекты (общетоксическое и ульцерогенное действия).

2. Предложен комплексный препарат кислоты ацетилсалициловой и аммония сукцината (2:1) под названием Астам.

3. Астам обладает более выраженным в сравнении с кислотой ацетилсалициловой нормализующим влиянием на проницаемость капилляров, угнетающим действием на - размножение грануляционно-фиброзной ткани, восприятие болевых раздражений, лихорадочную реакцию; на фоне генерализованного артрита более активно устраняет отек суставов, нормализует строение и метаболизм соединительной ткани и паренхиматозных органов.

4. В равной степени с кислотой ацетилсалициловой Астам ослабляет развитие каррагенинового отека и экссудативного перитонита, проявляет антиоксидантные и антиагрегантные свойства.

Апробация работы. Основные результаты исследования доложены и обсуждены на научно-практических конференциях Военно-медицинского факультета при Сибирском государственном медицинском университете "Актуальные вопросы медицинского обеспечения войск, подготовки и усовершенствования военно-медицинских кадров" (г.Томск, 1995, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 3 работы, подана заявка на патент.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, характеристики объектов и методов исследования, 10 разделов собственных результатов экспериментальных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 298 источников, в т.ч. 114 иностранных. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 2 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. Аммония сукцинат снижает общетоксические и ульцерогенные свойства кислоты ацетилсалициловой.

2. Аммония сукцинат усиливает основные фармакотерапевтические эффекты кислоты ацетилсалициловой (противовоспалительные, обезболивающие, жаропонижающие).

3. Получен комплексный препарат Астам, содержащий кислоту ацетилсалициловую и аммония сукцинат в соотношении 2:1.

4. Астам обладает более выраженным в сравнении с кислотой ацетилсалициловой: нормализующим влиянием на проницаемость капилляров, угнетающим действием на размножение грануляционно-фиброзной ткани, восприятие болевых раздражений, лихорадочную реакцию.

5. Астам на фоне генерализованного артрита более эффективно, чем кислота ацетилсалициловая устраняет отек суставов, нормализует строение и метаболизм соединительной ткани и паренхиматозных органов.

6. В равной степени с кислотой ацетилсалициловой Астам ослабляет развитие каррагенинового отека и экссудативного перитонита, проявляет антиоксидантные и антиагрегантные свойства.

89