Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Ультраструктурныё особенности гломерулярногофильтрационного барьера у плодов и новорождённыхв норме и в условиях массивной протеинурии

РГ6 од

3 о СЕН 1ЯЯЯ

На правах рукописи

СКПОРЦОВА Марина Юрьевна

Ультраструктурныё особенности гломерулярного фильтрационного барьера у плодов и новорождённых в норме и в условиях массивной протеинурий.

14.00.23-гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Сапке- Петербург

I 9')9

Работа нмнолненя в Сяк»-II* 1е|»0>|)»ск(м'| Г(к\дяра шиной педиацшчсскоГ! медицинской

якядсшж

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

докюр медицииских наук профессор

иллмссншчг )М

оф т тллы ¡ьт 01 и кнш »1Ы:

Член-корреепондеш Академии медицинских на>к, заслуженный дон ель наук-и РосснИекоИ федерации докюр медицинских наук профессор

О и .1.1 И Н В.Л..

Докчор медицински\ наук профессор ДЛИШ1011 Р. 1С. Ведмпая оршнн мцня:

Лросляискпм I огудпрс г паша« мсдшишгадк академия.

З.'шшп) соснчпся •¿¿/^¿р&С- I . „ ч;,счж у/ ^

на часеданлн днссер» зииоипо« о сшима Д 106.03,07 п Поеино-медниинскои академии иоа.фссу 191011, Самкч-! 1е 1С|>Г»%)ч, уд. ЛеГк-дспн, д 6.

С днссерпшией можно (мнакомнп.ся в фтч.ччсшлдыюн ПиОлтиеке Н<>-онно-чедннинской академии.

Лнп>ргфер;н р;! юс чаи

Ученый сскрстр! дисссрмтирн мин» оипл

ДО!С!Ор Ме,111!1НИСМ1\ Н,1)К С'идчрнч У (.'

ВВЕДЕНИЕ.

Л КТУА.Л МЮСТЬ Г1 ГО Б Л КМ Ы.

П настоящее иремя заменю возрос шперес к дальнейшему углублённому изучению особенностей эмбриональною шетогенста органон выдели гельмой сиоемы, обьясняюшннси прежде всего ростом уровня болезней почек у дегей и взрослых (Salcedo S., Tliabet М., 1995).

Вместе с тем, но данным Маки не и кои Г.Л., Романовой Т.Л., 1988, Stol! С. 1990, растет вес пренатпльных иричип в структуре детской смертности. Часто встречаются болезни ночек, протекающие под маской преоб-ретёниой паюлогмм, которые в действительное)и обусловлены врождённой аномалией строения почек.

Но данным ведущих нефрологов частота врождённых пороков развития органов выделительной системы постоянно расгёт и составляет 29:1000 (Игнатова М.С., Велыищев Ю.Е., 1989).

Общеизвестно, что в 99, 5% случаев нарушения морфологического строения нефронов не обусловлены генетическими факторами, а возникают в результате воздействия на формирующуюся почку эмбриона через плацентарный барьер самых различных неблагоприятных факторов (Во-лощенко А.А., 1977; Аверкина Р.Ф., 1985).

Для практической медицины представляется очень важным изучение гистогенетических процессов в условиях нарушенного морфогенеза, позволяющее выяснить некоторые механизмы образования аномальных тканевых структур как в рамках отдельной структурно-функциональной единицы органа, так и пороков развития тканевого уровня.

Вопросы эмбрионального шетогенеяа были предметом изучения ведущих отечественных морфологов, таких как Н.Г.Хлоиин, А.А. Заварят, А.Г.Кнорре, В.П.Михаилов, А.А.Клишов и.другие. Их познание основывалось не только на сравнительном изучении закономерностей гистотенетн-ческих процессов п >;оде нормального раэипгия по тахже и при воздействии различных патогенных факторов. С иомидмо современных гистологических методов установлены неизвестные ранее закономерности эмбриогенеза, меяп каневых таимодейсишГг, морфология особенностей ра'шишя компенсаторно-приспособтс-гым-^ реакции. I'("см'.чр! на аю цег.пюрне

вопросы збрноиолыкн о incioiciieui почек нуждакмея н дальнейшем разра-6oikc в с»я$и с iie;iociaioM»i(iii изученное!ыо компенсаюрно-нрисносо-(миельны-х реакций, но шикающих в почках плоди при naioiсипом возлей-егшш на магь, а гак же и связи с псдостшочион изученностью роли дизэм-бриотсисза в гмнолопш некоторых заболенашш почек.

И иясюяшсс кремя одном из раснроаранСнных точек зрения, касающихся патогенез;» периичиого нефритическою синдрома, диагностируемою чате нсет у ueicii 2 - 4 jtet, икляаси jnnnifipitoieHci эшпелилль* ншо компонента iломерул^римо фплмраииониою барьера (Sancevsich-Pacli. 1990; Ua!lick N.P., 1491, |W).

1! хтя морфшenet почечных кл>бочков мiuiск иредмсюм изучения Miioiiix oic4eci пенных н зарубежных авюров, особенносш ею шею-¡снстчсских иропсссо», взаимная после, иг.а т ел ьн оси, и пзанмоот ношения но иремя формнропдния i ломерулярнаю фмлмраиионною барьера, ocia-кмея и по сей день не it полис («ыяснетшми Более нио, ociae'icH иракти-мескн неизученным вопрос о механизмам «ошнкнопенмя струмурных нарушений гломерулярного фильтрационного барьера в ходе »мГфиоил.п,nolo разшмня при некоюрыч наиболее чаешх накчсиних тлдеГшннях на ра питающиеся злча|кн ночек через снс1сму ма1Ь-илаие1иа-плод Таким частым паюгеннмм флкто|>ом, нередко осложняющим течение бе^меино-С1Н, являеки массивная проютурня.нгчинклюшя«, например, при токсикозах беременност и при мши их Полстях кичек.

r")iH аснеюы проблемы ооаичеи сонершеино неисследонаимими, раиио как и мехаии imi.i лечебною деиепшн неммормх i лнжокпрк'коид-ных юрмоноп надпочечников, широко применяющихся при лечении пер-НМЧ1ИИ о 1И'фро1ичееко1 о сиидрома

Лля н |учения упомяну lux выше проблем нредпола) aetew иес.имопа-иие холл м<1рфо1снеп1ческих ироисссоп па п.сперичешальтч! моле hi нефротческот тилромп с минимальными и<мсиснпими ИКЛЬ ИСС.'ЮКМАНИИ.

ВынтиI, особенноеiи и сеоикчпеии'; i испи енеч мческих нрои'.чсон и холе мор||".ч енем почечных i;.>ivf><<'ii,c Л: норме.» ори плоченном еоздей-• мч!п чере» сис|ем\ м.пь-п.кшены-п.пч, л также ныусмшь ме*4нтм

влиянии нредннзолона на компоненты iломерулчрнси о филырациинною барьера при нефритическом спнлроме с минимальным» н шенениями.

^лдлми исследования:

!. Пронести сравшиелмшй ашиин на свегоошнчесь м и электрои-комикросконпческоч уровнях с применением морфометрического исследования основных эг.ню» эмбриональною и раннею носз нагольного i ис-тигенеза гломеру ярного фильтрационного барьера почек у крыс.

2. Охарактеризовать соотношение npoiiccoR пролиферации, днффс-ренцировки и innei ранни компонентов ГФП т> ходе нормального гискяе-неза.

3. Установить особенности основных ланов морфогенеза комно-ненюв ГФБ после воздействия через систему мап>-плаиенга-плод па эмбрионов крыс протамин сульфатом.

■1. Изучить особенносп! nicioreneiическич процессов, участвующих в формировании клеточных компонентов ГФБ п условиях нарушенного гистогенеза гючек у крыс.

5. Провеет морфологический и морфометрнческий анализ компонентов ГФБ животных с экспериментально вызванной ирозеннуриеи под влиянием преднизолона.

НАУЧНАЯ НОВИША.

1. Разработана экспериментальная модель массивной нротеинурии у потомства с помощью использования протамин сульфата вводимого беременной крысе, соответствующая морфологической картине первичного нефротического синдрома.

2. Подучены новые морфологические н морфометрические данные, касающиеся удыраструктуры формирующеюся в ходе эмбрионального и раннего постназального пюнменечн ГФГ> почечных гонец у 18-21 суточных эмбрионов и у новорождённых жипоптх.

3. Установлены морфоло! ическис осоСемкоон основных гисгогене-тическнх процессов при формировании комнуненюв ГФБ в эмбриональном н раннем постна цельном периоде и условиях мпсеивнои иротелиурни. вызванной ;ieitciввеч прошчин суяьфап через си<. <cmv чпи,-пламен п»-п.чод.

■Г 11|)о«'-дс'|| сравни 1елышн морфологический и морфометричеекий анализ иаиов гиссогеноа компонентов ГФБ у подопытных животных.

5. Разрабонша схема введения иреднизолона, вызывакмцая лечебный эффект, сопровождающийся регрессивными морфологическими изменениями структур ГФБ у нодоиытых жннотых.

6. Изучено плияниц иреднизолона на процессы пролиферации и днфференцнронкн компонентов ГФБ у животных с экспериментально вызванной прогеинурнен.

ОСНОИНЫ!. ПОЛОЙ! К НИИ ВЫНОСИМ!,1С НА ЗАЩИТУ:

1. 13 ходе норчалыиио эмбриональною текиенсза степень зрелости почечных 1елеи корковою вещеепш почек обусловлена различной интенсивностью процессов клеточной пролиферации, дифференцнровкн и нше! рации комиинен юн IФБ, зависящей ог сроков беременное т.

2. Процессы лоснспифнческой и специфической ди<|и|>сренцироики компонентов ГФБ н почечных зельцах околомозгопоП зоны идут параллельно и прямо пропорциональны ьотрас ту змбриона.

3. Ирогамни сульфат, выбранный в качестве индуктора, вышваю-шсго морфологические и клинические изменения клубочков почек идентичные первичному нефрошческому синдрому у человека, понуждает процессы дскненифической н специфической дж|>фереиннровкн ком.по-иенюв ГФБ и Н1>)юму молем быть причиной функциональных нарушении в посшагачьном периоде.

4. Гдмкокорк-кондные юрмоны стчулируки процессы внутриклеточной регенерации «ннслнальных клепж ГФБ и способствует и\ восстановлению.

НАУЧНО-ПРАКТИЧМ КЛЯ ЧНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

Подученные в рабок данные имеют большое значение для рлсшнро-ннч предаавлечнй о нормальном и нткраии.'нном эмбриональном ыиние-нос почек и поному чотут бить исно.чыоиами в качссше рекомендаций в педиатрической. нефродошчесной н аклшерсьон пр,1к1пке. >ак же дли дальнейшею ушублечпки о шучепич морф нет: шчео.нх нрпнечеов выделительной системы к норме и плпики и'А Рсудьтати нс?.че.крвчмиЦ ногу I

быть использованы в учебных программах курсов лекций и практических занятий по гистологии, эмбриологии, акушерст ву и педиатрии.

АПРОБАЦИЯ МАТЕРИАЛОН ДИССЕРТАЦИИ.

Материалы диссертации изложены и обсуждены на конференции студентов и молодых учёных (СМбПМА, 1995), 37, 38 и 39 межвузовских научных конференциях студентов, аспирантов к молодых нренодашиелси (ВМА 1994, 1995, 1996), на III конгрессе международной ассоциации морфологов (Тверь, 1996), на конференции "Растущий организм" (Казань, 1994, 1996), на Международном симпозиуме по проблемам ишероцсииин (СПб, 1997). Основные положения диссертации опубликованы в 10 научных работах.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОЛЫ.

Материалом для исследования служили эмбрионы белых лабораторных крыс 18-21 суток развития по 4 эмбриона от 3 крыс на каждые сутки, 12 новорождённых животных от 3 крыс, 10 подопытных и 10 контрольных животных 14-15 и 18 суток жизни. Возраст эмбрионов определяли по получению датированной беременности у крыс. Объектом исследования служили почки. Электронно-микроскопическое изучение проводили 1ра-дициоиным методом, используя фиксацию погружением в 2, 5% раствор глютарапьдегида на фосфат ном буфере (рН 7, 3) в течении I часа. После промывки фосфатным буфером (3 смены но 40 минут), проводили дофнк-сацию 2 % раствором четырёхокиси осмия на какодилатиом буфере в течении 1 часа на холоду. Для обезвоживания кусочки постепенно проводили через спирты возрастающей концентрации (30% - 50%). Компоненты смолы перемешивали в следующих пропорциях: Ероп- 812 - 9, I мл, ООБА -6,2 мл, ММА - 4, 7 мл, ОМР -0,4 мл. Перед заливкой производили пропитку материала в смеси эпоксидных смол с ою'ыо пропилена в соотношении 1:1 в течении 1 часа и в соотношении 3:1 - в течении 12 часов. Для полного замещения органических растворителей кусочки помещали в чистую заливочную смесь на 1 час при комнатной температуре; Материал заливали в смолу, полимеризация которой проходила и термостате при 86 С в течении 2 суток. Поиск почечных телец юкстамедулл.ярной зоны проводили на полутонких срезах, окрашенных метилсиовым синим; после их

обнаружения в прицельной за точки пирамидки делали ультрагонкне срезы на ультрамикротоме LKB с помощью стеклянных ножен.Ультрагонкне срезы (60-90 им) контрастировали на сеточках нитратом свинца и уранил-ацоагим но 40 минут.. Препараты просмафивали и фокирафнровали в электронном микроскопе JEM-100 В при ускоряющем напряжении 75 кВ.

Для свеюошического изучения проводили фиксацию в растворе Ву-эна в течении 24-48 часои Обезвоживание проводили и спиртах возрастающей концентрации (R0%-10()%), в смеси абсолютного спирта и хлороформа - в течении 1 часа и в чистом хлороформе - 2 раза но 30 минут.Кусочки ткани пе|ют>сили в смесь хлор - парафин и оставляли в тер-Mociaic при 37 С на 1 час, а далее последовательно в 3 порции чистого парафина но 0, 5 часа при 56 С. Кусочки тканей заливали и чистый парафин Из парафиновых бликов на микротоме Rcicheit изготовляли срезы толщиной 7 мкм и окрашивали атур - эозином.

Объемную нлогиоаь ф'ШС, к Гол'.джи и мшохондрнн определяли на электроно1раммах с использованием упаноики МОИ - 30.

Мо1н|юметрическая обработка элеттронограмм щюводилась методом цифровой обработки июбражепий с использованием аппарата , содержащею I'M-drawer, вмошнрованиою в IIK ЭИМ-1'С на базе вычисли ¡ельною цеигра инстюута Фитологии им Павлова.

Подсчёт мтотичсскою индекса (МИ » %) производили на 3000 -5000 эинзелноцнгов наружною и iHiyipcnneio листка почечных телец око-ломозговон зоны на парафиновых срезах толщиной 7 мкм , окрашенных тур - эозином. Г1|Ю1еннурия у «1 беременных крыс вызывалась nyiv'M внуг-рнмышечного введения про тмин сульфагл крысе на 20 и 21 сучки беременности в дозе 6мг/100г массы тела в cyiKH. Кошрслсм служили 4 беременные крысы коюрым вводили изотонический pací вор хлорида натрия на 20 и 21 сутки беременности.

Суючный сбор мочи проводили у беременных крыс ta I сутки-до введения им иротлмин-сульфша н та I сутки до введения и «.ионическою раствора хлорида нлфия конфольпым беременным kji».ic;im, а гак ,ке на <\ 14 сутки после введения щммамни сульфат у нодопьмных крыс и их потомства и нзоюпнческого рас тора хлорида щпрня у кот рольных крыс

н их потомства. Содержание белка к суточной моче определяли биурето-вым методом с использованием спектрофотометра (Золоти tuca я Р.П., Меньшикова В В. 1<W) (Табл. 1).

Таблица 1. Сут очное содержание белка в моче у кош рольни* н подопытных животных и их потомства. (X ± Sx, мт/ мл/ сут.).

Группа Сроки сбора мочи

ЖИВОТНЫХ 6 сутки. 9 сутки. 14 сутки.

Контрольные 0,28 ±0,062 0,33 ±0,084 0,37 ±0,091

Подопытные 0,29 ±0,064 0,30 ±0,066 2,20 ±0,038*

* - Различия по сравнению с контролем значимы при Р< 0,05.

Суточное содержание белка в моче за 1 сутки до введения прогамин сульфата и изотонического раствора хлорида натрия у интактных беременных крыс - 0, 29 ± 0,05 мг/мл/сут.

Введение иреднизолоиа 8 подопытным животным с протеинурией проводилось с 13 по 17 день жизни (в течении 5 дней) по 3 мг/кг/сут. внутримышечно. Контролем служили 8 интактных животных, которым с 13 по 17 день жизни вводили преднизолон внутримышечно по 3 мг/кг/сут.

Обработку количественных данных проводили на ПК используя стандартные статистические методы (Глогов 1982). Результаты сравнений считались достоверными при уроьне значимости Р<0, 05. В каждом случае проводился суммарный анализ результатов исследуемого параметра ор-пределёиного образца, который включал в себя подсчёт среднего, дисперсии и ошибки. После этого проводился анализ нормальности распределения (критерий Пирсона). При объединении выборок в единую генеральную совокупность эти параметры вычислялись уже с учётом индивидуальных и (рунповых средних и дисперсий. Результат ы анализа выборки на нормальное!!, определяли дальнейшие методы обработки данных. Сравнение нормальных распределений обязательно включало: 1) Сравнение их дисперсии

(критерий Фишера) 2) Сравнение средних (критерий Сгмодеига).

8

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

При световой микроскопии гистологических ерезои ночек, окрашенных юмагоксилин-эознном обнаруживайся неодинаковое строение почечных зелен нефронов в различных 'зонах коркового вещества. Этт фякг объясняем последовательным развитием и различной степенью диффе-ренцнровки генерации нефроиов (Подкопа 0.13. 1976, Кнорре А.Г. 1967, Мсльман 1988,Пзттеи КМ. 1959, Фалин Л.И. 1976).

Почечные тельца субкаисулярнси зоны коркового вещества ночек эмбрионов всех изученных сроков и новорожденных животных наименее сформированы: они представлены зачатками капсул ложкообразного вида. Обнаружена тенденция к днф^еренциронкс однослойного плоского эпителия ларужного лнегка капсулы и однослойно/о высокоирнзмагического внутреннего листка без ||юрми|нтания полости капсулы.

Почечные тельца среднекорткальнон зоны выглядели более зрелыми: в них ирисутхптзовали пег ли капиллярно! о клубочка, появился узкий просвет капсулы почечного тельца. Ошечена генленция к снижению высоты клеюк внутренне! о листка капсулы почечкою 1 ельца.

Почечные тельца околомозговоб зоны у эмбрионов и новорожден-имх выглядели с»|юрмиро»:ишимн Огмечено увеличение количества ка-11нлля|ю», их просвета и кровенаполнения.

И наименее дифференцированных почечных тельцах субкапсуляржш зоны коры ночек как змбриончи всех щученных с|>оков, так и ново|юж-дённых живо!пых были установлены наиболее высоьие поьакнели мню-тического индекса. В то же время самые ни »кие никакие.тн мничичесьои лктивностл ока (олнсь и чмии'лии почечных и'лен околпмозговой зоны.

о

Таблица 2. Митотичсскмй индекс в эпителии наружного и внутреннего листков капсулы капиллярного клубочка в различных зонах коркового вещества почки (X ±S4, %).

Группа жниот-ных Су б кя псул я р на я зона Среднекортнкаль-нан зона Околомозговал зона

III ВЛ IUI ВЛ IUI BJI

18-сут. эмбрион. 2,0 ±0,31* 1,8 ±0,21* 1.4 ± 0,20* 0,5 ± 0,08* 0,1 ±0,03 0,1 ±0,02

19-сут. эмбрион 2,3 ±0,43* 1,8 ±0,21* 1,6 ± 0,22* 0,6 ± 0,09* 0,08 ±0,010 0,2 ±0,02

20-сут. эмбрион 2,2 ±0,30* 2,2 ±0,42* 1,3 ±0,15* 0,3 ±0,04 0,08 ± 0,009 0,2 ±0,0?

21-сут. эмбрион 2,1 ±0,23* 2,3 ±0,24* и ±0,11*' 0,3 ±0,03* 0,09 ±0,012 0,1 ±0,0!

Новорождён ые 2,4 ±0,35* 2,2 ±0,20* 1,7 ±0,24* 0,4 ±0,05* 0,08 ±0,009 0,07 ±0,008

НЛ - наружный листок капсулы; ВЛ - внутренний листок капсулы * - Различия значимы по сравнению с аналогичным листком капсулы капиллярного клубочка околомозговой зоны ттри Р < 0,05

В связи с тем, что во время митоза клетки в значительной степени теряют признаки предшествующей дифференцировки (ЕСпишов A.A. 1968), ультраструктурная оценка компонентов ГФБ проводилась па г точечных тельцах околомозговон зоны.

При изучений ультраструктурных особенностей нодоцитов и эндоте-лноцитов у эмбрионов и новорождённых жиаотнмх было установлено, что по мере увеличения срока эмбриогенеза веб более отчётливыми становились признаки дифференцировки эгппелнальных клеток. Они выражались в изменении строения ядер (преобладании деснирализованного хроматина, увеличении количества ядрышек и пор), параллельно которому в цитоплазме появлялось и прогрессивно увеличивалось количество структур аппарата синтеза (рибосом, полисом, i р')ПС) а также мчточонлрнн (mG;i. 3); затем появлялся комплекс Гошджи. Темпы развития последнего уступали темпам разнимы белок-сичк'шрмошп о м)*чг":кгч и совпадали с ноякле-

10

ннсм ccKjxnopHbix н транспортных пузырьков, а так же с развитием глико-

каликса.

Таблица 3. ООьсмиан iuiotiiость, органслл в цитоплазме нодо-ц11т011 и эндотслиоцитов (X ±Sj, ни).

Ор- 1Я- нелли Мн-то-хон-дрии Место локализации Эмбрионы Новорожденные крысята

18-сут. 19-сут, 20-сут. 21-сут.

Под (ШИТ 0,05 ±0,003* 0,04 ±0,003* 0,06 ±0,008 0,05 ±0,006 0,07 ±0,008

Энлоте- ЛИ0Ц1ГГ 0,06 ±0,009* 0,05 ±0,006* 0,07 ±0,009 0,07 ±0,007 0,09 ±0,010

Гр ЭПС Подоцит 0,06 ±0,005 0,09 ±0,011 0.06 ± 0,006 0,04 ±0,006 0,07 ±0,009 0,07 ±0,008

Эндо гели о m гт 0,0» ±0,005 0,03 ±0,003 0,04 ±0,003 0,03 ±0,004 I

*1'а мичкя значимы по сравнению с новорожденными при 1'<0,05.

Формирование 1>М включало в себя появление Lamina.densa, которая вначале состояла и» oí дельных разобщенных участков и имела вид расщепленной, частично ферментированной иластннки; зазем она прноб|>етала ipCxaiofinoc строение. Вместе с тем и у новорожденных она выг лядела не вполне сформированной, т.к. llantina гага interna чаек» шире, чем üim-ina.rara externa, что, возможно, связано с неустоявшимся сщй процессом фильтрации и с незавершенной диф^хгренцнровкой эндотелия, не имеющего достаточного колнчсст ва нор и фенол ji.

Параллельно щаднсходило <|»ормн|>ог.анис ЦП, коюрое включало и себя их ра (деление, появление ФЩ и диаф|кн м.

Ошечеиа тенденция к мщзнченим толщины 1>М, уменьшению ширины 1(11 и Ф1Ц с увеличением срокаэмбрншелста (ыбл 4).

Таблица 4. Характеристика гломерулнрного фильтрационного барьера (X ± 8|, ни).

Исследование показатели 1 руппы ЖНВОГНЫХ

Эмбрноны(суткн) Новорождённые

18 19 20 21

Гол ниша ЫЧ 127,2 ±5,12 149,4 ±2,06 147,6 ±6,25 141,2 ±8,28 148 ±10,41

Ширина ЦП 278,8 ±27,53 274,7 ±15,6 287,5 ±17,81 263,7 ±22,26 248,3 ±20,53

Ширина ФЩ 30,8 ±2,45 31,3 ±3,36 29,2 ±2,76 27,9 ±2,45 28,2 ±2,23

Капвмктво Ф1Ц т 1 мкм Б,И 2 ±0,21 1,6 ±0,26 2,2 ±0,24 1,6 ±0.32 2 ±0,3

Не выявлено статистически достоверного отличия между характеристиками ГФБ у 18- суточных эмбрионов и новорожденных животных.

Таким образом, было установлено, 'гго в почечных тельцах околомозговой зоны коркового естества ночек ведущим являлся процесс днф-ференнироякн. Несмотря на то, что на свстооишчсском уровне почечные тельца этой зоны уже выглядели сторнированными, при ультраструктурном анализе выявлялась незрелость компоиешов ГФБ. Степень диффереи-цировки ирямо пропорциональна сроку эмбриогенеза.

Для изучения воздействия протамин сульфата на эмбриогенез ГФБ оценивалось его влияние ил мнтстмчсскую активность и дчфференциров-ку.

Иротимнн-сульфаг ие окатал существенною воздействия на мнтотя-чсскук» петншюсть эпнтелноцинт капсул почечных телец окодомозговой зоны у поючетлл (табл. 5), но оказал влияние на дифференцирояку компо-нентв ГФБ, чю ирочннлось в особенное! ях улырасгрукгуры цитоплазмы иодошпоп: нешлчительном количестве полисом, дезориентированном и слаГю ¡пораженном комплексе Гольдки, нелоетшочной стенеин пыражен-

(

постн элементов цитоскелета, которые чаше обнаруживались в сформированных цнтопедикулах.

Таблица 5, М»п отческий индекс в эниюиоцитах почечных клубочков околомозгопон зоны коркового вещества почек (X ± им).

Контрольные животные Подопытные животные

Наружный листок 0,001 ±0,0001 0,001 ±0,0001

внутренний листок 0,001 ±0,0002 0,001 ±0,0002

Не выявлено статистически значимого отличия в показателях митотиче-ской активности у коигролышх и подопытных животных.

Многочисленные трансцитоплазма! ические и окаймлённые пузырьки, обнаруженные в цитоплазме подопытных животных, возможно, свиде-тсльсвуют о поглощении клеткой белка из окружающей среды и являются компенсаторно-приспособительной реакцией на утечку белка.

Таблица 6. Обьёмиая плотность органелл в цитоплазме эндотелноцнтов и нодоцнтов у контрольных II подопытных животных (X ± , им).

Органеллы Место локализации органелл. Контрольные животные Подопытные животные

Митохондрии Подоцит 0,03 ±0,004 0,025 ±0,0031

Эодотелиоцнт 0,014 ±0,0020 0,0 И ±0,0022

трЭНС Подоцит 0,031 ±0,0033 0,018± 0,0025

Эидогелиопит 0,02 ±р,002 0,015 ±0,0020

Комплекс Г'ольджи Подоинт 0,004 ±0,0015 0,002 ±0,0011.

Элдотелиоцит 0,006 ±0,0012 0,003 ±0,0010

Не установлено достоверного различия по сравнению с контролем.

. Цитоплазма подошла образовывала на БМ пласт, ЦП немногочисленны.

ФЩ также были немног очисленные и узкие, только часть из них была затянут диафрагмами. Плотные кошаклы, встречавшиеся между ЦП,

можно расценивать как проявление комненсашрно-нриспособшельных реакций в огвег на утечку белка через ГФБ.

БМ имела неодинаковую толщину, Lamina densa на отдельных участках была расщеплена и фрагмент ирована. Lamina rara externa и Lamina raía interna имели неодинаковую ширину.

Цитоплазма энлотелноцнга образовывала складки; (¡«пестры были немногочисленны.

Были обнаружены статистически достоверные отличия в показателях толшины БМ, ширины ЦП, ФЩ и количестве ФЩ у контрольных и подопытных животных (Табл. 7).

Таблица 7. Характеристики гломсрулирною фильтрационного барьера ( X ± S,, ни.).

Исследованные показа гелн Группы животных

Контрольные Подопытные

Толщина БМ 132,1 ±4,31 227,4 ±17,14*

Ширина шнонедикул 168,3 ¿ 10,12 265,2 ±12,33*

Ширима Ф!Ц 22,6 ±2,3 i 16,6± 1,93*

КангкгапюФЩна 1 мкмКМ. 3,1 ±0,24 2±0,17»

* Различия но сравнению с KcirrjKuieM значимы при Р<0,05.

Описанные ocouchhocih можно расшлжвшь как запаздывание процессов дифереицировки, а значит, сшрсвакия н полноценного функннонн-рованнн ГФБ у »iihoi пых с зкснеримешпльпо вызванной нротеннурией.

Для ипченич но {действия нредпнюлона на ГФБ ночек животных с окенркмеигально вызванной нротсинуриен оценивалось его влияние на ми ют имескую акт и вноси, и дифференцировку эмитслиошпов почечных тедеп.

Было обнаружено, что нреднизолон не влияет на митотическую ак тнвиость зпнтелноцитов наружного и внутреннего листков капсул почечных телец околомозговой зоны коркового вещества почек (Табл. 8).

Таблица 8. Мцтотический индекс в эпителии капсул капиллярных клубочков и околомоз! овон зоне корконою истсстпа почек (X ± 84, %)

Группа животных Клубочки околомозговон зоны

Наружный листок Внутренний листок

Подопытные животные 0,001-10,0001 0,001 ±0,0001

Группа сравнения 0,001 ±0,0002 . 0,001 ±0,0002

Не выявлено статистически значимого отличия в показателях миуличссксй активное™ у контрольных: и подопытных животных.

При сравнении ультраструктурных особенностей эпителиоцитов обеих 1рупн животных были установлены некоторые отличия в структуре . их ядер: у животных с протеинурией после введения преднизолона ядра выглядели светлее, что связано с преобладанием деснирализованного хро-магина и свидетельствует об их повышенной синтетической активности, связанной с активирующим воздействием преднизолона (Севергина Э.С., Пальцев М.Я. 1981).

В цитоплазме подоцитов животных, получавших нреднизолон, были обнаружены многочисленные митохондрии, многие из которых имели большие размеры и плотный магрикс, хорошо развитая ЭПС и комплекс Годьджи, многочисленные свободные рибосомы и пописомы, транспортные, секреторные и окаймлённые пузырьки.

Перечисленные особенности свидетельствуют об активных синтетических процессах, а"также указывают на возможность поглощения клеткой бедка из окружающей среды, в данном случае из полости почечного тельца, евч пиную с чрезмерной его псисрей через ГФС.

15

Ультраструктура подоцигов у животных с протеннурней без воздействия иреднизоиона отличалась слабым развитием комплекса Гольджн, а также присутствием многочисленных формирующихся пузырьков.

Ультрасфуктура эндотс.чиощпоп у животных с протеннурней после воздействия предннзолона не отличалась от таковой в фуние сравнения (Табл.10).

Таблица 9. Объемная шин иость шцм янелл в цнюшиимс зндо-ТеЛНОЦНТОВ II ППДОЦИТОПу КОНТРОЛЬНЫХ И нодоньп пых живошмх ( X ± , им).

Органеллы Место локализации орпонелл Группа сравнения Подопытные животные

Мнтожондрнн I (одоцит 0,02 ±0,003 0,03 ±0,005

Эпдотелноцнт 0,01 ±0,002 0,01 ±0,002

грЭКС Полонит 0,01 ±0,002 0,02 ±0,002

"Эпдотелноциг 0,011 ± 0,001 0,002 + 0,0006*

Комплекс Голь лжи ПодОцнт 0,002 ±0,0007 0,005 ±0,001

Эпдотелноцнт 0,001 ±0,0004 0,001 ±0,0003

Различия между подопытными животными и группой сравнения значимы при !'<(),05.

Структура Г<М> у жпвошых обеих фупн не имела существенных

ращнчии: ЬМ имела неодинаковую толщину, Ганпп.1 «Лспнп на некоюрых участках была растеплена и фрагмеитирована. Многочисленные цигоне-днкулы не ращелены и обрашог на эпителиальной поверхности ЬМ выстилку ни мила !ча! ичеекш о чаюрнала неравномерной толтннм. 1>оль-шннство (МП иыли »^сформированы. Некоторые ЦП выглядели набухшн-

мн м сливались друг с другом, образуя плотные контакты и облитерируя ФЩ. На поверхности подошпов были видны цитоплазмагические выросты, покры тые мембраной, которые являлись, вероя тнее всего, проявлением адаптивной реакции, направленной на повышение всасывающей поверхности эпителноцнта.

Цитоплазма эндотелиоцита выстилала ЕМ слоем неравномерной толщины. На некоторых участках она выглядела смятой, образовывала складки и аркадные выросты, покрытые мембраной, периферические участки цитоплазмы местами отслаивались от БМ или были смещены но отношению к ней. Фенесзры сформированы.

Таблица 10. Характеристика гломерулнрпого фильтрационного барьера у контрольных н подопытных животных (X ± в!, им.).

Исследованные показатели Группы животных

Группа сравнения Подопытные

Ширина ЦП 299,8122,34 269,9119,45

Ширина ФЩ 17,1 ±1,93 18,212,36

Толщина БМ 235,5± 14,10 190,9114,78

Количество ФЩ на 1 мкм БМ 1,910,22 2,610,24

Не выявлено статистически достоверных различий.

Проведённые исследования позволяют прийти к выводу, что иредни-золон обеспечивает внутриклеточную регенерацию, стимулируя диффе-ренцировку эпителиальных клеток почечных телец, о чём свидетельствует обогащение цитоштазмы оргапеллами, наблюдаемое визуально и фиксируемое морфометрическими методами.

И

выводы.

1. У беспородных белых крыс изучен нормальный и нарушенный морфогенез гломерулярного фильтрационного барьера при массивной селективной протеинурии (модель первичного нефритическою синдрома, вызванного прогамин сульфатом).

2. Днфференннровка компонентов ГФБ ночек происходит на протяжении всего периода эмбрионального ратш ия и продолжается после рождения. На 13-сутки после рождения ГФБ вьплядит сформированным.

3. Отмечено сочетанное последовательное развитие структур всех трСх компонентов ГФБ, хотя степень нх зрелости различна, что можег бы1ь причиной функциональной несостоятельности ночек после рождения.

4. Доспецифическая, а затем и специфическая дн<|*(>еренцнровка клеточных компонентов ГФБ (нодоцинт и зндотелиошпов капилляров клубочка) частично совпадает с фазой пролиферации. По мере снижения миготической активности эпителия висцерального листка почечного тельца все более отчетливыми становятся процессы дифферепциропки, выражающиеся в изменении строении ядер, а также появлении и прогрессивном увеличении струкпр аппарата сите та, комплекса Гольджн, уступающее темпам рашиптя белок- синтезирующей системы. О степени лифферетши-ровкн свидетельствует также надич1те секреторных и транспортных пузырьков, количество которых расчёт с увеличением срока эмбри01снсза.

5. Мшорлция структурных компонентов почечных телец происходит параллельно процессам специфической дн<|м|>ереицировкн эпителиаль-ны\ клеток и включает и себя разделение ЦП, <|юрмнрование ФЩ и диафрагм, приобретение 1>М трехслойною строения.

(>. 11л модели нефротнческот о синдрома, нолучентюю с помощью гнндеПсгвин иротамин-сульфата черо систему магь-плацеп га-плод на эч-бриокнет ночек во втцюй половине беременности установлено, чт в сс-нове наруитеннч I ттсия енета н формирования компонентов ГФБ лежит т:л-чествениое и количественное нарушение дифферетшнровки подопнгоп, проявляющееся в нарушении их улырларуктурнои организации.

1л'

СТ111С0К РАБОТ, ОГ 1У1хЛИКОВА1 «11ЫХ ПО ТЕМЕ Д11ССЕГТА1МIII.

1. О мор^юлогнческнх особенностях строения КМ клубочковых капилляров почек // 37 конференция студентов, аспирантов вузов и НИИ: Тс:», докл.- СПб, 1994. - С.22.

2. Морфологические особенности эмбрионального- гистогенеза фильтрационного барьера почечных клубочков и норме и на модели ами-тюнуклеозидного нефроза // Конференции "Растущий.организм'': Тез. докл. -Казань, 1994 -С.98.

3. О морфологических особенностях ст роения ГФБ у плодов и новорожденных в норме и в условиях массивной протеинурии // Конференция студенток и молодых ученых СПбПМЛ: Те», докл. - СП б, 1995. - С.З I.

4. Улы растру кгурная хараюериетика регенерации эшпелнев почек // 38 межвузовская научная конференция студентов, аспирантов, молодых преподавателей: Тех докл. - СПб, 1995 - С. 60.

<•> 5. Особенности удмрасгрукгурного строения ГФБ у плодов и новорождённых в норме и на модели аминонуклеозидного нефроза // 39 конференция аспирантов, студентов, молодых преподавателей: Тез. докл. - СПб, 1996-С. 15.

6. Морфологические особенности эмбрионального гистогенеза фильтрационного барьера почечных клубочков в норме и на модели ами-нонуклеозидной нефронатии /7 Конференция "Растущий ортнизм": Тез. докл. - Казань, 1996 - С. 89.

7. Улыраструктурпые особенности эмбрионального гистогенеза фильтрационного барьера почечных клубочков // Морфология. - 1996. - № 2. - С. 40. ( соавтор Э И.Валькович)

8. Особенности пролиферации и дифференцнровки эиигелиев капсул капиллярных почечных клубочков в ходе нормального онгшенеза и на модели первичного нефротического синдрома // Международный симпозиум "Проблемы энгероцсиции''": Тез. докл. - СПб, 1997 - С. 28-29. (соавтор ').И.Валькович).

Дифференцирипка ошпелиев капсулы капиллярных клубочков почек у крыс в онтогенезе // Морфология. 1997. - Т. 112. - № 4. - С. 67-72 ( еоаШ'.-ф Э.11 Натыспчнч)

К).Влияние нреднизолона на компоненты гдомерулярншо филы рационного барьера живошых с экспериментально вызванной нрозеииурнеП // Научное совещание, посвященное 125-летию со дня рождении Л.А.Макснмона: Тез. докл. - СПб, 1999 - С.38. (соавтор Э.М.Налькович).

ИМ --батальная мембрана

ГФБ - гломерулярпый филмряинонныП барьер

Ф1Ц - фильтрационные щели

ЦП - пиюнсднкулы

ЭПС - зндонлазмашческая сеть

т р')11С - г ранулярнля зндонла 1ч;и нческая ссг ь

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ: