Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Цереброваскулярные эффекты нимодипина, афобазола и конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином при экспериментальной сосудистой патологии мозга и сердца

На правах рукописи

ХАЙЛОВ НИКИТА АНАТОЛЬЕВИЧ

ЦЕРЕБРОВАСКУЛЯРНЫЕ ЭФФЕКТЫ НИМОДИПИНА, АФОБАЗОЛА И КОНЪЮГАТА ГАМК С ДОКОЗАГЕКСАЕНОИЛДОФАМИНОМ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СОСУДИСТОЙ ПАТОЛОГИИ МОЗГА И СЕРДЦА

14.03,06 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва — 2012

1 2 мд р 2012

005014901

Работа выполнена в Федеральном Государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В.Закусова» Российской академии медицинских наук

Научный руководитель: доктор биологических наук

Ганынина Тамара Сергеевна

Научный консультант: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Мирзоян Рубен Симонович

Официальные оппоненты: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Островская Рита Ушеровна

доктор медицинских наук,

профессор Яснецов Владимир Викторович

Ведущая организация: ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Минздравсоцразвития России

Защита состоится «-г Ь» марта 2012 года в « » часов на заседании диссертационного совета Д 001.024.01 при ФГБУ «НИИ фармакологии имени ВЛЗ.Закусова» РАМН по адресу: 125315, г. Москва, ул. Балтийская,

Д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в Ученой части ФГБУ «НИИ фармакологии имени В.В.Закусова» РАМН по адресу: 125315, г. Москва, ул. Балтийская, д.8.

Автореферат разослан « » февраля 2012 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор Е.А.Валь дман

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Сосудистые заболевания мозга и, в особенности, ишемические поражения мозга относятся к социально-медицинским проблемам, так как занимают ведущее место среди основных причин смертности и инвалидности населения. Показатели заболеваемости и летальности от инсульта среди лиц трудоспособного возраста в России увеличились за последние 10 лет более чем на 30% [Суслина З.А. и соавт., 2006; Суслина З.А., Варакин Ю.Я., 2007]. Сочетанная сосудистая патология мозга и сердца, которая рассматривается как осложнение инсульта или инфаркта миокарда, отличается наиболее высокой степенью смертности по сравнению с раздельными видами сосудистой патологии указанных органов [Witt B.J. et al. 2005; Mehdiratta M. et al. 2007; Gillies M. et al. 2008; Liao J. et al. 2009; Feng W. et al. 2010]. Так, смертность больных с сочетанной сосудистой патологией в 2-4 раза превышает летальный исход при цереброваскулярных расстройствах [Tanne D. et al. 1998; Saczynski J.S. et al. 2008]. Ишемическое поражение мозга характеризуется сложным каскадом биохимических процессов, где ключевую роль играют глутаматная нейротоксичность и нарушение обмена ионов кальция в нервной ткани [Woodruff Т. М. et al., 2011]. Поэтому фармакологическая коррекция этих состояний может быть направлена на устранение или ослабление глутаматергических воздействий или стимуляцию тормозных ГАМК-ергических механизмов с целью восстановления баланса между возбуждающими и тормозными процессами.

Следует отметить, что ГАМК-ергические механизмы, наряду с

тормозным воздействием на центральную нервную систему, участвуют и в

регуляции тонуса мозговых сосудов [Мирзоян С.А. и соавт., 1970; 1974;

Krause D.N. et al., 1980]. Кроме того, в неврологической практике широко

применяется ГАМК-ергический препарат пикамилон, который, наряду с

непосредственным воздействием на сосуды мозга, оказывает тормозное

з

влияние на центральные механизмы регуляции сосудистого тонуса [Закусов В.В. и соавт. 1977; Мирзоян P.C., Гапьшина Т.С., 1989; Мирзоян P.C., 2003].

К основным патогенетическим факторам развития ишемической патологии мозга наряду с нарушениями гемодинамики, следует отнести и повышение агрегационной активности тромбоцитов. Поэтому поиск новых соединений с цереброваскулярной и антиагрегационной активностью является продолжением совместных исследований лаборатории фармакологии цереброваскулярных расстройств с сотрудниками лабораторий оксилипинов (зав. - проф. В. В. Безуглов) Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН и патологии и фармакологии гемостаза (зав. - проф. В.А. Макаров) Центра гематологии Минздравсоцразвигия.

Настоящее исследование посвящено изучению влияния ГАМК-миметиков на церебральную гемодинамику в условиях сосудистой патологии мозга и сердца. В качестве препарата сравнения выбран нимодипин, который является блокатором кальциевых каналов и широко применяется в неврологической практике.

Цель исследования.

Сравнительное изучение влияния нимодипина, афобазола и конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином, на мозговое кровообращение в условиях раздельной и сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца.

Задачи исследования.

1. Провести сравнительное изучение влияния нимодипина на локальный мозговой кровоток интактных крыс, животных, перенесших глобальную преходящую ишемию головного мозга, инфаркт миокарда и сочетавшую сосудистую патологию мозга и сердца.

2. Исследовать влияние афобазола на локальный мозговой кровоток у крыс интактных, с глобальной преходящей ишемией головного мозга, с

экспериментальным инфарктом миокарда и в условиях сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца.

3. Изучить роль ГАМКд - рецепторов сосудов мозга в реализации цереброваскулярного эффекта афобазола у крыс, перенесших сочетанную сосудистую патологию мозга и сердца.

4. Изучить влияние конъгогата ГАМК с докозагексаеноилдофамином на кровоснабжение мозга крыс интактных, с глобальной преходящей ишемией головного мозга, с экспериментальным инфарктом миокарда и в условиях сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца.

5. Исследовать влияние фрагментов конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином - дофамина и докозагексаеноиддофамина на мозговое кровообращение.

6. Провести изучение влияния докозагексаеноилдофамина на агрегацию тромбоцитов.

Научная новизна работы.

Впервые установлено различие в эффектах нимодипипа, афобазола и конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином на кровоснабжение мозга интактных крыс, животных, перенесших глобальную преходящую ишемию мозга, инфаркт миокарда и сочетанную сосудистую патологию мозга и сердца. Нимодипин, который в одинаковой степени усиливает кровоток в теменной области коры головного мозга крыс интактных и перенесших глобальную преходящую ишемию головного мозга, в меньшей степени увеличивает мозговой кровоток после экспериментального инфаркта миокарда и пе проявляет цереброваскулярной активности при сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца.

Афобазол, напротив, в значительно большей степени усиливает

кровоток в теменной области коры головного мозга у крыс, перенесших

глобальную преходящую ишемию головного мозга на фоне

экспериментального инфаркта миокарда по сравнению с животными после

5

раздельной сосудистой патологии мозга и сердца. Специфические блокаторы ГАМКа - рецепторов бикукуллин и пикротоксин угнетают этот максимальный цереброваскулярный эффект афобазола.

Конъюгат ГАМК с докозагексаеноилдофамином, который не увеличивает кровоснабжение мозга интактных животных, вызывает существенное увеличение локального мозгового кровотока как в условиях раздельной сосудистой патологии мозга и сердца, так и при сочетанной сосудистой патологии этих важнейших органов. Выявлена способность докозагексаеноилдофамина проявлять антиагрегационное действие.

Научно-практическое значение работы.

Полученные в работе данные, свидетельствующие о различиях в цереброваскулярной активности нимодипина, афобазола и конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином в условиях раздельной и сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца, указывают на необходимость дальнейшей разработки этого направления исследований и изучения в этом аспекте известных препаратов и новых химических соединений.

Различие в изменениях мозгового кровообращения под влиянием нимодипина и афобазола в условиях сосудистой патологии мозга и сердца, необходимо учитывать при назначении и применении препаратов в клинической практике.

Обнаруженная в работе характерная особенность конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином улучшать мозговое кровообращение в условиях экспериментального инфаркта миокарда и сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца, создает экспериментальную базу для дальнейшего направленного поиска новых потенциальных цереброваскулярных препаратов.

Личный вклад автора: автором самостоятельно выполнены все

эксперименты по изучению влияния исследуемых веществ на мозговое

кровообращение с использованием допплеровского лазерного флоуметра как

б

у интактных животных, так и в условиях патологических моделей, проведена обработка и описание результатов, сформулированы выводы. При непосредственном участии автора подготовлены публикации по результатам работы.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на: Всероссийской конф., посвящ. 110-летию акад АМН СССР С.В.Аничкова, Санкт-Петербург, 2002; 2-ом Съезде Росс. науч. общества фармакологов. Москва, 2003; 5-ой междунар.конф. «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам», Москва, 2010г.; 16th World Congress on Basic and Clinical Pharmacology, 17-23 July, 2010, Copenhagen, Denmark; межлабораторной конференции ФГБУ "НИИ фармакологии имени В .В .Заку сова" РАМН 26 декабря 2011.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из них: 4 статьи опубликованы в ведущих рецензируемых научных журналах, определенных Высшей аттестационной комиссией, 3 статьи - в научных сборниках, 5 тезисов - в материалах Всероссийских и Международных конгрессов и конференций.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 146 страницах компьютерного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, 4 глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключение, выводы, список литературы, включающий 24 отечественных и 229 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 33 таблицами и 25 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 240 белых нелинейных крысах-самцах массой 250-400г, наркотизированных уретаном (1200 мг/кг) или хлоралгидратом (400 мг/кг) внутрибрюшинно и на 10 кроликах обоего пола массой 3,0-4,0 кг. Регистрацию локального мозгового кровотока в теменной области коры головного мозга крыс проводили с помощью лазерного допплеровского флоуметра ALF-21 фирмы "Transonic System Inc." (США). Для этой цели игольчатый датчик флоуметра диаметром 0,8мм устанавливали на теменной области коры головного мозга с помощью микроманипулятора и коромысла. Одновременно регистрировали изменения уровня артериального давления в бедренной артерии. Для регистрации артериального давления в бедренную артерию вводили силиконовый катетер до уровня наружной подвздошной артерии. На основании данных датчиков кровотока и давления в реальном времени рассчитывал сопротивление сосудов. Запись показателей кровотока, артериального давления и сопротивления сосудов производили на полиграфе фирмы «ВЮРАК» (США), соединенным с персональным компьютером. Исследуемые вещества вводили через полиэтиленовый катетер в бедренную вену животных.

Глобальную преходящую ишемию у крыс вызывали окклюзией с помощью зажимов обеих общих сонных артерий в течение 10 минут. Одновременно методом кровопускания снижали уровень артериального давления до 40-50 мм рт.ст. Спустя 10 минут удаляли зажимы и кровь реинфузировали. Вещества вводили через 40-45 минут после глобальной преходящей ишемии мозга.

Экспериментальный инфаркт миокарда вызывали у крыс перевязкой

нисходящей ветви левой коронарной артерии [Seropian I.M., Gonzales G.E.,

2009]. Через 3-е суток после операции животных наркотизировали (уретан

1200 мг/кг внутрибрюшинно) и с помощью компьютерного

электрокардиографа «Полиспектр-8/B» регистрировали ЭКГ. В

8

эксперименты по изучению влияния препарата на мозговое кровообращение брали только тех крыс, у которых во II стандартном отведении ЭКГ наблюдался глубокий зубец Q или комплекс QS. После проведения экспериментов у животных проводили вскрытие и констатировали структурные изменения сердечной мышцы, характерные для инфаркта миокарда.

Опыты по изучению влияния докозагексаеноидцофамина на агрегационную активность тромбоцитов были выполнены совместно со с.н.с. лаборатории патологии и фармакологии гемостаза Т.М.Васильевой. Образцы плазмы для исследования получали из крови кроликов до введения вещества (контрольный опыт), сразу после инъекции и через 30 мин. Агрегацию тромбоцитов изучали методом светорассеяния, предложенным G.V.R. Born (1962), на агрегометре фирмы "CHRONO-LOG CORPORATION" (США).

Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета программ Stastistika 8.0 (Statistika Inc., США). Нормальность распределения определяли с помощью критерия Шапиро-Уилка. В основном нормальное распределение отсутствовало, поэтому для дальнейшей обработки данных использовали непараметрический метод двухвыборочный знаково-ранговый критерий Вилкоксона. Для статистической обработки данных по изучению влияния конъюгата ГАМК с арахидоновой кислотой на агрегационную активность использовали параметрический t-критерий парных сравнений Стьюдента. Результаты рассматривали как значимые при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние нимодипина на кровоснабжение мозга интактных крыс и у

животных в условиях сосудистой патологии мозга и сердца

Проведенные опыты позволили установить, что нимодипин в дозе 0,03

мг/кг при внутривенном введении оказывает существенное влияние на

локальный мозговой кровоток в коре головного мозга интактных крыс.

Препарат в большинстве опытов вызывает усиление кровотока в коре в

среднем на 36,6%. Цереброваскулярный эффект нимодипина развивается

сразу же после введения, достигает максимальных значений на первых

минутах, затем с 10 минуты постепенно снижается и к концу эксперимента

достигает контрольной величины. Во всех опытах нимодипин понижает

уровень артериального давления в среднем на 39,9%. Гипотензивный эффект

нимодипина развивается сразу же после введения препарата и остается

пониженным на протяжении всего эксперимента (рис.1). Разнонаправленные

изменения мозгового кровотока и артериального давления свидетельствуют о

том, что нимодипин оказывает непосредственное влияние на тонус сосудов

мозга. Полученные данные согласуются с многочисленными литературными

сведениями [Kazda S. et al., 1982; Haws G.W. et al., 1983; Elstner M. et al.,

2009]. В следующей серии опытов нимодипин в той же дозе вводили крысам

после глобальной преходящей ишемии. Оказалось, что и в этих условиях

препарат также усиливает мозговое кровообращение (44,3%), обусловленное

понижением тонуса сосудов мозга, т.е. ишемия мозга не оказывает

существенного влияния на чувствительность сосудов мозга к нимодипину

(рис.1). Далее изучали влияние нимодипина на мозговое кровообращение

крыс в условиях нарушений коронарного кровообращения, т.е. через трое

суток после окклюзии коронарной артерии. В этих условиях нимодипин

вызывает увеличение локального мозгового кровотока в среднем на 21,6%,

т.е. его цереброваскулярный эффект ослабляется (рис.2.). В заключительной

серии опытов нимодипин исследовали в условиях сочетанных нарушений

ю

коронарного и мозгового кровообращения. Для этой цели животных через трое суток после перевязки левой коронарной артерии, подвергали глобальной преходящей ишемии и после этих процедур вводили нимодипин. Эксперименты показали, что нимодипин (0,03 мг/кг) в этих условиях не только не увеличивает локальный мозговой кровоток, но даже уменьшает его в среднем на 14,1%. Таким образом, при двойной сосудистой патологии мозга и сердца нимодипин не оказывает сосудорасширяющего эффекта на церебральные сосуды (рис.2). Следует отметить, что снижение уровня артериального давления во всех сериях опытов имело сходный характер.

Изучение цереброваскулярпого эффекта афобазола и механизма его действия у крыс в условиях сосудистой патологии мозга и сердца Иная картина наблюдалась при изучении афобазола в условиях раздельной и сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца. Эксперименты показали, что афобазол в дозе 5 мг/кг при внутривенном введении вызывает небольшое (13,2%) увеличение мозгового кровотока у интактных животных. Более выраженное влияние на церебральную гемодинамику афобазол оказывает у крыс, перенесших глобальную преходящую ишемию головного мозга, увеличивая мозговой кровоток в среднем на 31,5%. Эти данные согласуются с данными И.В. Силкиной и соавт. (2005).

В серии опытов по изучению влияния афобазола на кровоснабясение мозга крыс в условиях ишемического поражения сердца было показано, что препарат увеличивает локальный мозговой кровоток в среднем на 30,7% (интактные -13,2%, р<0,05).

ннмоднпин 0,03 рлг/«г в/в

5 мин

Рис. I. Влияние нимоднпина (0,03 мг/кг) на локальный мозговой кровоток (ЛМК) и артериальное давление (АД) у интактной крысы (верхняя часть) и у животного в условиях глобальной преходящей ишемии мозга (нижняя часть).

Сверху вниз: отметка времени - 5 мин., локальный мозговой кровоток (ЛМК) в усл.ед., артериальное давление (АД) в мм рт.ст., отметки введении веществ.

сосудистой Щ пожноопсрироаанные ложиоопорироианные

ишемия мозга

инфаркт миокарда

сочетаиная сосудистая патология

Рис.2. Влияние нимодипина (0,03 мг/кг) на локальный мозговой кровоток у крыс интактных, в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга [ишемия мозга], окклюзии левой коронарной артерии [инфаркт миокарда] и сочетанных нарушений кровоснабжения сердца н мозга [сочстанная сосудистая патология]

По оси ординат изменения в % к исходному уровню.

* - р < 0,05 относительно ложнооперированных крыс.

** - р < 0,05 относительно ложноонерированных животных с ишемией мозга.

Далее афобазол исследовали в условиях сочетанных нарушений коронарного и мозгового кровообращения. Для этой цели животных через трое суток после перевязки левой коронарной артерии, подвергали глобальной преходящей ишемии мозга и затем изучали цереброваскулярную активность афобазола. Проведенные эксперименты позволили установить, что афобазол в этих условиях в большей степени увеличивает локальный мозговой кровоток (в среднем на 95,5%, р<0,05%), что превосходит его цереброваскулярный эффект, как у крыс в условиях ишемии мозга, так и у животных после инфаркта миокарда (рис.3 и 4).

Таким образом, проведенное исследование позволило установить, что наиболее выраженное воздействие препарата на мозговое кровообращение

13

проявляется в условиях патологического состояния мозга на фоне инфаркта миокарда. Механизм этого действия афобазола предстояло выяснить. Можно было допустить, что этот эффект афобазола реализуется через систему ГАМК. В соответствии с этим последующие серии опытов проводились с использованием специфических блокаторов ГАМКд- рецепторов -бикукуллина и пикротоксина. Эксперименты, которые проводились в условиях сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца показали, что на фоне действия блокаторов ГАМК-рецепторов - бикукуллина и пикротоксина - афобазол не вызывает увеличения мозгового кровотока (рис.5). Следовательно, и в этих условиях цереброваскулярный эффект афобазола реализуется через ГАМКд- рецепторы сосудов мозга.

ЛМК и 11, ' 1 ГЧ (1 / \ [ риг-

| ( шр '41

0 30 во 90 "Ремя

ишемия ртерфузпя $ 9 «»"*""

афобазол 5 мг/кг в/а

Рис. 3. Влияние афобазола (5 мг/кг) на локальный мозговой кровоток (ЛМК) и артериальное давление (АД) у крысы в условиях экспериментального инфаркта миокарда и последующей глобальной преходящей ишемии мозга.

Сверху вниз: отметка времени - 5 мин., локальный мозговой кровоток (ЛМК) в усл.ед., артериальное давление в бедренной артерии (АД) в мм рт.ст., отметки введений веществ.

лмк

[ [ животные с сосудистой патологией

ложнооперированные животные с ишемией головного мозга

ишемия мозга инфаркт миокарда сочетанная сосудистая

патология

Рис.4. Влияние афобазола (5 иг/кг) на локальный мозговой кровоток у крыс интактных, в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга [ишемия мозга), окклюзии левой коронарной артерии [инфаркт миокарда] и сочетанных нарушений кровоснабжения сердца и мозга [сочетанная сосудистая патология) * - р < 0,05 относительно ложнооперированных крыс. ** - р < 0,05 относительно ложнооперированных животных с ишемией мозга.

Полученные нами данные согласуются с результатами исследований И.В. Силкиной и И.Н. Курдюмова, согласно которым блокаторы ГАМК-рецепторов устраняют или ослабляют цереброваскулярный эффект афобазола как у интактных животных [Силкина И.В., 2005], так и в условиях модели геморрагического инсульта [Курдюмов И.Н., 2009].

Исследование влияния кокъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином на кровоснабжение мозга крыс в норме и патологии

Проведенное исследование на крысах интактных и в условиях глобальной преходящей ишемии позволило установить, что конъюгат ГАМК с докозагексаеноилдофамином вызывает усиление локального мозгового кровотока в коре головного мозга крыс с ишемией мозга (32,7%), в отличие от интактных животных, у которых кровоток под влиянием соединения снижается (рис.7), что согласуется с данными И.Н. Курдюмова (2009).

В опытах на крысах с экспериментальным инфарктом миокарда конъюгат ГАМК с докозагексаеноилдофамином вызывает выраженное увеличение локального мозгового кровотока (51,4%, рис. 6 и 7). При исследовании влияния соединения на локальный мозговой кровоток крыс в условиях сочетанных нарушений коронарного и мозгового кровообращения оказалось, что конъюгат ГАМК с докозагексаеноилдофамином увеличивает кровоснабжение мозга на 30,7%. При сочетанных нарушениях коронарного и мозгового кровообращения соединение оказывало неодинаковое влияние на уровень артериального давления (рис.7).

Далее было изучено влияние фрагментов молекулы конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином, а именно, дофамина и докозагексаеноилдофамина, синтезированного в лаборатории оксилипинов Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН.

В опытах, проведенных на интактных крысах, оказалось, что дофамин (2 мг/кг при внутривенном введении) вызывает кратковременное увеличение кровотока в коре головного мозга крыс в среднем на 66,7%, которое сопровождается выраженным повышением уровня артериального давления в среднем на 63%. Через 5 минут мозговой кровоток и артериальное давление снижаются до контрольного уровня, а к концу

эксперимента значения этих показателей даже понижаются.

16

Цереброваскулярную активность докозагсксаеноилдофамина (2мг/кг, внутривенно) изучагти на крысах как интактных, так и после глобальной преходящей ишемии головного мозга.

5мин

шк 40.000 а 20.000 0.000

90.000 60.000 е 30.000 0.000

40 зо ба во ®Ремя

в Б (минутах

коныогат 1 мг/иг в/в

Рнс.6. Влияние конъюгата ГАМК с докозагексаеноидлофамином (1 мг/кг) на локальный мозговой кровоток (ЛМК) и артериальное давление (АД) крысы в условиях экспериментального инфаркта миокарда.

Сверху вниз: отметка времени - 5 мин., локальный мозговой кровоток (ЛМК) в усл.ед., артериальное давление в бедренной артерии (АД) в мм рт.ст., отметки введения веществ.

гп животные с сосудистой Щ ложнооперированныа [2] ленснооперированные

ЛМК патологией животные с ишемией животные

%

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 о

Рис.7. Влияние коньюгата ГАМК с докозагексаешгалдофамнном (1 иг/кг) на локальный мозговой кровоток у крыс интактных, в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга [ишемии мозга), окклюзии левой коронарной артерии [инфаркт миокарда) и сочетаниых нарушений кровоснабжения сердца и мозга [сочетанная сосудистая патология].

* - р < 0,05 относительно ложнооперированных крыс.

В указанных сериях опытов докозагексеноилдофамии вызывает также кратковременное увеличение локального кровотока в коре головного мозга крыс на 62,2%, и 42,9% соответственно, которое сопровождается повышением уровня артериального давления в среднем на 62% и 54,3%, соответственно. Статистически значимая разница в эффектах отсутствует. В этих опытах под влиянием докозагексаеноилдофамина также через 5 минут показатели гемодинамики приходят к норме, а далее снижаются. Таким образом, влияние докозагексеноилдофамина на мозговой кровоток и уровень артериального давления имеет сходный характер с эффектом дофамина.

у

ишемия мозга инфаркт миокарда сочетанная сосудистая

патология

Далее были исследованы антиагрегационные свойства докозагексеноилдофамина ex vivo. Внутривенное введение кроликам докозагексаеноилдофамиаа приводило к практически полному ингибированию агрегации тромбоцитов, индуцированной арахидоновой кислотой (АК), сразу же после введения вещества. В случае агрегации тромбоцитов, индуцированной аденозиндифосфатом (АДФ), наблюдалось ослабление межтромбоцитарного взаимодействия (рис.8). Полученные данные указывают на выраженные антиагрегационные свойства докозагексеноилдофамина. Необходимо отмстить, что согласно данным И.II. Курдюмова (2009) коныогат ГАМК с докозагексаеноилдофамином также обладает антиагрегационными свойствами, однако они выражены в меньшей степени, чем у докозагексеноилдофамина.

45 -------------------------------------------------------------------------------------

а в

до введения DHA-DA

О сразу после введения DHA-DA fil через 30 мин после введения DHA-DA

Рис. 8. Влияние докозагексаеноилдофамина (DHA-DA) на АК-индуцированную (а) и АДФ-индуцированную (в) агрегацию тромбоцитов кролика ex vivo.

По оси абсцисс - используемый проагрегант: (а) - арахидоиовая кислота в конечной концентрации IxlO"3 M; (в) - АДФ в конечной концентрации lxlO"5 M. По оси ординат - степень агрегации тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме до введения DIIA-DA (контроль), сразу после введения DHA-DA и через 30 мин после введения DHA-DA, %. * - достоверно но отношению к контролю (р < 0,05).

Заключение

Таким образом, проведенное исследование позволило выявить неодинаковое влияние нимодипина, афобазола и конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином на кровоснабжение мозга крыс интактных, перенесших глобальную преходящую ишемию мозга, экспериментальный инфаркт миокарда и сочетанную сосудистую патологию мозга и сердца (рис.9). Показано, что в наибольшей степени увеличение мозгового кровотока под влиянием афобазола наблюдается в условиях сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца и этот эффект обусловлен его воздействием на ГАМКд- рецепторы сосудов мозга. Следует отметить, что нимодипин в этих условиях не проявляет свои сосудорасширяющие свойства. Конъюгат ГАМК с докозагексаеноилдофамином, напротив, в улучшает кровоснабжение мозга в условиях ишемии мозга, инфаркта миокарда и при сочетанной патологии мозга и сердцаж. Важно подчеркнуть, что исследованные ГАМК-миметики - афобазол и конъюгат ГАМК с докозагексаеноилдофамином оказывают характерное для соединений этой группы действие на кровоснабжение ишемизированного мозга, т.е. их цереброваскулярная активность проявляется в условиях экспериментальной сосудистой патологии в отличие от интактного мозга. Полученные данные согласуются с ранее высказанной гипотезой об особой чувствительности сосудов ишемизированного мозга к ГАМК-миметикам [Мирзоян P.C., 2003]. В результате проведенного исследования на примере конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином и его фрагментов - дофамина и докозагексаеноилдофамина выявлена зависимость структуры и цереброваскулярной активности изученных соединений. Если дофамин и докозагексаеноилдофамин увеличивают кровоснабжение интактного и ишемизированного мозга, которое сопровождается выраженной гипертензивной реакцией, то введение в структуру ГАМК существенно

меняет реакцию как сосудов мозга, так и артериального давления.

20

■ нимодипин Н афобазол И коньюгат ГАМК с

докозагексаеноилдофамином

лмк%

мозга

Рис. 9. Изменения локального мозгового кровотока (ЛМК в %) под влиянием иимодипина, афобазола и коныогага ГАМК с докозагексаеноилдофамином при сосудистой патологии мозга и сердца.

Полученные в работе данные указывают на необходимость развития исследований, посвященных изучению особенностей действия фармакологических препаратов на кровоснабжение мозга при раздельной и сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца.

выводы

1. Нимодипин в одинаковой степени усиливает кровоток в теменной области коры головного мозга крыс интактных и перенесших глобальную преходящую ишемию головного мозга, тогда как в меньшей степени увеличивает мозговой кровоток после экспериментального инфаркта миокарда и не проявляет цереброваскулярной активности при сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца.

2. Афобазол, напротив, в значительно большей степени усиливает мозговой кровоток у крыс с сочетанной сосудистой патологией мозга и сердца по сравнению с животными после глобальной преходящей ишемии головного мозга или экспериментального инфаркта миокарда.

3. Цереброваекулярный эффект афобазола у крыс с сочетанной сосудистой патологией мозга и сердца реализуется через ГАМКа - рецепторы сосудов мозга, так как бикукуллин и пикротоксин устраняют этот эффект.

4. Конъюгат ГАМК с докозагексаеноилдофамином вызывает существенное увеличение локального мозгового кровотока как в условиях раздельной сосудистой патологии мозга и сердца, так и при сочетанной сосудистой патологии этих важнейших органов и не увеличивает кровоснабжение мозга интактных животных.

5. Фрагменты конъюгата ГАМК с докозагексаеноилдофамином -дофамин и докозагексаеноилдофамин увеличивают мозговое кровообращение и повышают уровень артериального давления.

6. Установлено, что докозагексаеноилдофамин обладает выраженной антиагрегационной активностью.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ханлов, Н.А. Влияние дилцсрена на кровоснабжение интактного и ишемизированного мозга [Текст] / Н.А. Хайлов., В.В.Александрин, Т.С.Ганьшина, P.C. Мирзоян // Методология флоуметрии. - М., 2001.-С. 153-160.

2. Александрии, В.В. Сравнительное изучение дилцерена (нимодипина) на мозговое кровообращение интактных животных и после глобального ишемического поражения мозга [Текст] /

B.В.Александрин, Н.А.Хайлов, Т.С.Ганьшина, P.C. Мирзоян. // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2002.- Т.65, №2,-

C.17-19.

3. Мирзоян, P.C. Влияние противоишемической композиции и нимодипина на кровоснабжение интактного и ишемизированного мозга [Текст] / P.C. Мирзоян., Т.С.Ганьшина, В.В.Александрин, НА.Ханлов, Е.ВЛуньшина, Г.Р.Мирзоян // Нейрофармакология в XXI пеке. Материалы Всероссийской конференции, посвященной 110-летию академика АМН СССР С.В.Аничкова. С-Петербург, 18-20 сентября, 2002,- Психофармакология и биологическая наркология. - 2002.- Т.2, № 3-4. - С.424.

4. Васильева, Т.М. Влияние дофаминамидов полиненасыщенных жирных кислот на свертывающую систему крови и мозговое кровообращение [Текст] / Т.М.Васильева, Г.Н.Петрухина, В.А.Макаров, Н.Т.Мифтахова, Н.А.Хайлов, Т.СГанынина, Р.С.Мирзоян, Н.М.Грецкая, М.Ю.Бобров,

B.В.Безуглов // Экспериментальная и клиническая фармакология.-2002. - Т.65, № 6,-С.41-45.

5. Ханлов, Н.А. Влияние докозагексаеноилдофамина и дофамина на кровоснабжение мозга [Текст] / Хайлов Н.А., Т.С.Ганьшина, Р.С.Мирзоян. // Методология флоуметрии. - М., 2002.- Выпуск 6,-

C.151-155.

6. Хайлов, Н.А. Влияние докозагексаеноилдофамина на кровоснабжение мозга в условиях ишемического поражения мозга [Текст] / Н.А. Хайлов // Методология флоуметрии. - М., 2003.- Выпуск 7.- С. 107-114.

7. Хайлов, Н.А. Сравнительное изучение докозагексаеноилдофамина, дофамина и пентоксифиллина на мозговое кровообращение [Текст] / Н.А, Хайлов // Фундаментальные проблемы фармакологии. Сборник тезисов 2-ого Съезда Российского научного общества фармакологов. Москва, 2003.- часть II.- С.260.

8. Khaylov, N.A. Еffect of docosahexaenoildopamine on cérébral circulation in the rat after global réversible brain ischemia [Текст] / N.A. Khaylov, V.V.Bezuglov, N.M.Gretskaia // 8th European College of Neurupsychopharmacol., April 14-16, 2005, Moscow, Russia.- Journal of

the European College of Neuropsychopharmacol. -2005. - V.15, suppl.2. - P. S244.

9. Мирзоян P.C. Нимодипин и сочетанные нарушения мозгового и коронарного кровотока [Текст] / Мирзоян P.C., Ганьшина Т.С., Хайлов Н.А., Цорин И.Б. // Экспериментальная и клиническая фармакология.-2009.-Т.72, № 2.- С.24-28.

Ю.Мирзоян, P.C. Цереброваскулярные эффекты афобазола при сочетанной сосудистой патологии мозга и сердца [Текст] / Р.С.Мирзоян., Т.С.Ганьшина, Н.А.Хайлов // Экспериментальная и клиническая фармакология,- 2010,- Т.73, № 5,- С.2-7.

11.Хайлов, Н.А., Афобазол и сочетанная сосудистая патология мозга и сердца [Текст] / II.A. Хайлов, Р.С.Мирзоян, Т.С.Ганьшина. // Экспериментальная и клиническая фармакология. Приложение. 5-ая Международная конференция «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам», Москва, 1-4 июня 2010г. - М.: изд-во Фолиум, 2010,- С.91.

12.Ganshina, T.S. The difference in cerebrovascular effects of Afobazol and Nimodipin under the conditions of combined cardiac and cerebral vascular pathology [Текст] / Ganshina T.S., Mirzoyan R.S., Khaylov N.A., Seredenin S.B. //16th World Congress on Basic and Clinical Pharmacology, 17-23 July, Copenhagen, Denmark 2010. Basic & Clinical Pharmacology & Toxicology.- 2010,- V.107, suppl.l.- P.292.

Подписано в печать:

07.02.2012

Заказ №6613 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferal.ru