Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Церебропротекторные и ноотропные свойства экстрактов альфредии поникшей

На правах рукописи

МУСТ АФИН РУСТАМ НИЯЗОВИЧ

ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОРНЫЕ И НООТРОПНЫЕ СВОЙСТВА ЭКСТРАКТОВ АЛЬФРЕДИИ ПОНИКШЕЙ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

4 2014

Томск-2014

005556135

005556135

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга» и Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего образования «Национальный исследовательский Томский политехнический университет»

Научный руководитель:

Суслов Николай Иннокентьевич, доктор медицинских наук, профессор Научный консультант:

Бакибаев Абдигали Абдиманаповнч, доктор химических наук, профессор Официальные оппоненты:

Ветлугина Тамара Парфеновна, доктор биологических наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт Психического здоровья» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Отдел биологической психиатрии и наркологии, руководитель

Сорокина Ирина Васильевна, доктор биологических наук, Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Новосибирский институт органической химии имени H.H. Ворожцова» Сибирского отделения Российской академии наук, лаборатория фармакологических исследований Отдела природных и биологически активных соединений, ведущий научный сотрудник

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится «_» _ 2015 года в _ часов на

заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины им. Е.Д. Гольдберга» по адресу: 634028, г. Томск, пр. Ленина, 3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины им. Е.Д. Гольдберга» и на сайте pharmso.ru

Автореферат разослан «_»

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

2014 г.

Амосова Евдокия Наумовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования

Проблема адекватной фармакологической коррекции заболеваний нервной системы является одной из актуальных задач современной фармакологии. Рост загрязненности окружающей среды, нездоровый образ жизни, стрессогенная социальная обстановка - все это увеличивает ксенобиотическую нагрузку, предъявляет повышенные требования к нервной системе и ведет к увеличению числа заболеваний центральной нервной системы, в первую очередь неврозов. По данным ВОЗ в мире ими страдает около 1 миллиарда людей.

В терапии заболеваний нервной системы используют широкий спектр лекарственных препаратов с различными механизмами - нейролептики, антидепрессанты, транквилизаторы, седативные, снотворные и психостимулирующие средства, адаптогены, ноотропы, витамины, аминокислоты и гидролизаты белков [Бенькович Б.И., 1999].

Независимо от этиологического фактора в механизме поражения нервных клеток большую роль играет активация процессов перекисного окисления липидов. Роль повреждений, вызываемых свободными радикалами, доказана сегодня в патогенезе более ста заболеваний, перекисное окисление липидов считается универсальной основой патологии клеточных мембран [Kisic В. et al., 2009; Shaban M.I., 2011; Биленко М.В., 1989]. Уровень организации прооксидантного и антиоксидантного статуса является одним из факторов, корригирующих степень повреждения и гибель нервных клеток головного мозга [Раевский К.С., 1996]. Этому предшествует нарушение биохимических и физиологических функций нейрональных мембран [Surapaneni К., 2007], в результате чего нарушается деятельность нервной системы - важного регулятора взаимоотношений между различными структурами организма.

Учитывая широкую распространенность заболеваний ЦНС и ограниченный спектр препаратов, не имеющих побочных и токсических эффектов, создание новых церебропротекторных препаратов в настоящее время является актуальной проблемой. Следует заметить, что средства этой группы на российском рынке в значительной мере представлены продукцией иностранных фирм, и большая часть данных препаратов относятся к разряду дорогих [Дорофеева В. и др., 2003].

Несмотря на имеющуюся тенденцию мировой медицины к разработке препаратов растительного происхождения [Sutar et al., 2009], в большинстве своем средства, корригирующие работу головного мозга, представлены на рынке России синтетическими препаратами; список лекарственных препаратов растительного происхождения ограничивается несколькими наименованиями (танакан, гинсана). Существующие синтетические препараты наряду с терапевтическим действием могут проявлять и побочные эффекты [Dawson W., 2005; Tambekar D.H., Dahikar S.B., 2011]. Так, прием пирацетама может приводить к возникновению головокружения, нервозности, раздражимости, нарушению сна; к нежелательным эффектам аминалона относятся бессонница, диспепсические расстройства, колебания артериального давления; циннаризин, винпоцетин и

пикамилон могут вызвать головную боль, диспепсию, аллергические реакции [Энциклопедия..., 2013].

Все вышеизложенное служит основанием к поиску, разработке и внедрению в медицинскую практику новых растительных средств с антиоксидантной, ноотропной и церебропротекторной активностью.

Среди других вариантов скрининга лекарственных растений наиболее часто используемая стратегия целенаправленного поиска источников лекарственных средств — это этноботанический подход, подразумевающий работу исследователя с общинами коренных народов в тех районах, где растительные средства составляют основу терапевтического вмешательства [Walsh G, 2003]. Томскими учеными был проведен сбор образцов растений, используемых коренными народами Алтая для лечения нервных заболеваний. Среди прочих образцов интерес для изучения в качестве потенциального растительного средства, обладающего церебропротекторными и ноотропными свойствами, представила альфредия поникшая (Alfredia cernua (L.) Cass.), используемая в народной медицине в качестве противотревожного, болеутоляющего, противосудорожного, тонизирующего средства. Цель исследования

Целью настоящей работы явилось изучение церебропротекторных и ноотропных свойств экстрактов из надземной части альфредии поникшей, фракций и соединений, полученных из наиболее активного экстракта, а также исследование спектра фармакологических свойств наиболее активного экстракта. Для достижения указанной цели были определены следующие задачи:

1. Провести скрининговые исследования фармакологической активности по тестам на наличие антигипоксического, анальгетического, ноотропного действия и определить оптимальную дозу экстракта альфредии на 40% этаноле, обладающую церебропротекторными свойствами.

2. Провести сравнительное исследование церебропротекторной и ноотропной активности экстрактов на воде, 40%, 70%, 95% этаноле и выявить наиболее активный экстракт.

3. Исследовать спектр фармакологической активности наиболее активного экстракта по базисным тестам на наличие анксиолитического, антидепрессантного, стресспротекторного и противосудорожного действия.

4. Провести сравнительное исследование церебропротекторной и ноотропной активности экстрактов дикорастущей и культивируемой альфредии.

5. Исследовать церебропротекторную и ноотропную активность фракций и индивидуальных соединений активного экстракта с целью выявления групп веществ, обусловливающих его активность.

Научная значимость и новизна результатов

Впервые экспериментально установлено, что экстракты надземной части альфредии поникшей обладают церебропротекторной, антидепрессантной, антиневротической, стресспротекторной, анальгетической, противосудорожной активностью. Показано, что наиболее выраженной активностью обладает экстракт на 95% этаноле. Сделан вывод, что церебропротекторные свойства

экстракта на 95% этаноле обусловлены влиянием разных по химической природе веществ экстракта, при этом суммарный экстракт на 95% этаноле проявляет более выраженное и разнонаправленное действие в сравнении с изученными веществами, вводимыми индивидуально. Научно-практическая ценность работы

Результаты экспериментальных исследований могут служить основанием для разработки из надземной части альфредии поникшей лекарственных препаратов для коррекции нарушений когнитивных функций. Данные, полученные при изучении фармакологической активности альфредии поникшей, оформлены заявками на изобретение, по которым получены:

Патент РФ на изобретение № 2347580 «Средство, обладающее ноотропным действием»;

Патент РФ на изобретение № 2354397 «Средство, обладающее анксиолитическим действием»;

Патент РФ на изобретение № 2416421 «Средство, обладающее нормотимическим действием». Основные положения, выносимые на защиту

1. Экстракты надземной части альфредии поникшей на воде, 40%, 70%, 95% этаноле проявляют церебропротекторные свойства. Наиболее выраженное действие проявляет экстракт альфредии на 95% этаноле.

2. Экстракт альфредии на 40% этаноле обладает антигипоксическим и анальгетическим действием.

3. Экстракт альфредии на 95% этаноле обладает антидепрессантным, стресспротекторным, умеренным адаптогенным и противосудорожным действием, при этом у него отсутствует седативный эффект.

4. Суммарный экстракт на 95% этаноле оказывает более выраженный церебропротекторный и ноотропный эффект, чем его фракции и соединения, выделенные из экстракта.

5. Экстракт альфредии на 95% этаноле и его фракции обладают анксиолитической активностью, уступая по силе действия феназепаму, однако не оказывая таких побочных эффектов как нарушение внимания, сонливость, атаксия. Наиболее выраженное анксиолитическое действие выявлено при использовании хлороформной фракции экстракта.

6. По влиянию на когнитивные функции экстракт культивируемой альфредии не уступает экстракту дикорастущего растения.

Апробация и публикации

Материалы, вошедшие в диссертационную работу, представлены на Республиканской конференции «Создание новых лекарственных препаратов» (Томск, 2007), конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2007), V Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2008), XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), I Российском фитотерапевтическом съезде (Москва, 2008), 64-й региональной конференция по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой

фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2009), V Всероссийской Конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2012), II-й Международной Казахстанско-Российской конференции по химии и химической технологии, (Караганда, 2012), XIV Всероссийской научно-практической конференции «Химия и химическая технология в XXI веке» (Томск, 2013). По материалам проведенных исследований опубликовано 17 работ, из них 6 статей в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, получено 3 патента на изобретение. Объём и структура диссертации

Работа изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, дизайна исследования, описания материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 225 источников, из них 138 отечественных, 87 иностранных. Диссертация иллюстрирована 26 таблицами и 11 рисунками.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность темы диссертации, сформулированы цель и задачи исследования, научная новизна, теоретическое и практическое значение работы.

Первая глава диссертации представляет собой обзор отечественной и зарубежной литературы по теме исследования. В первом разделе представлены сведения о расстройствах когнитивных функций и их этиологии. Во втором разделе дана характеристика ноотропных средств (усилителей когнитивных функций) и их свойств, приведена классификация ноотропных средств, а также сведения о наиболее распространенных препаратах этой терапевтической группы. В третьем разделе представлена информация об объекте исследования -альфредии поникшей: морфология, распространение, ресурсы, химический состав, фармакологические свойства и использование в народной медицине.

Вторая глава посвящена описанию материалов и методов исследования. Эксперименты проведены на 676 аутбредных мышах самках CD 1 и 188 аутбредных крысах-самках CD. Животные 1 категории разводки ФГБНУ «НИИ фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга» содержались в соответствии с правилами Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей [European convention, 1986].

В работе использовали экстракты альфредии поникшей, полученные трехкратной экстракцией надземной части растения, собранной в период цветения. В качестве экстрагентов использовали воду и этанол различной концентрации (40%, 70%, 95%). Фракции активного экстракта получали его фракционированием рядом растворителей с увеличивающейся полярностью (хлороформ, этилацетат, бутанол-1). Индивидуальные соединения, полученные из экстракта, любезно предоставлены д.ф.н. Инессой Владимировной Шиловой:

вещество № 1 - сумма тритерпеновых спиртов - а-амирина, Р-амирина, моретенола, лупеола (СТС); вещество № 2 - тритерпеновое соединение (ОВ-2); вещество № 3 - флавоноид изокверцитрин; вещество № 4 - флавоноид рутин; вещество № 5 - лигнан арктиин.

В скрининговых исследованиях и при определении максимально эффективной дозировки экстракт на 40% этаноле вводили в дозах 10 мг/кг, 50 мг/кг, 100 мг/кг, 200 мг/кг. Экстракты на воде, 70%, 95% этаноле вводили в дозе 100 мг/кг. Фракции и индивидуальные соединения, выделенные из экстракта, вводили в дозах, эквивалентных их содержанию в дозировке экстракта 100 мг/кг. Хлороформную фракцию (ХЛФФ) вводили в дозе 31,4 мг/кг; этилацетатную фракцию (ЭАФ) - в дозе 11,5 мг/кг; бутанольную фракцию (БФ) - в дозе 10,3 мг/кг; водный остаток после фракционирования экстракта (ВО) вводили в дозе 46,8 мг/кг. Индивидуальные соединения вводили в следующих дозах: СТС - 7,0 мг/кг; ОВ-2 - 0,3 мг/кг; изокверцитрин, рутин и арктиин вводили в дозе 1 мг/кг.

В качестве препаратов сравнения использовали токоферола ацетат (Россия, 100 мг/кг), анальгин (метамизол натрия, Россия, 300 мг/кг), пирацетам (Бельгия, 400 мг/кг), феназепам (Россия, 1 мг/кг), амитриптилин (Россия, 10 мг/кг).

Гемическую гипоксию вызывали внутрибрюшинным введением 2% раствора натрия нитрита в дозе 180 мг/кг [Руководство..., 2005].

Острую тканевую гипоксию моделировали введением нитропруссида натрия внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг после курсового применения экстракта, в последний раз за 1 ч до введения натрия нитропруссида [Караев А.Я. и др., 1991].

Хроническую тканевую гипоксию создавали введением в брюшину натрия нитропруссида в течение 4 дней в дозе 1 мг/кг, на 5-е сутки в дозе 25 мг/кг [Зеленская K.J1. и др., 2004].

Острую гиперкапническую гипоксию проводили на модели гипоксии гермообъема [Бобков Ю.Г., 1986; Методические..., 1989].

Антиноцицептивное действие изучали на моделях «корчи, вызванные введением уксусной кислоты» [Бауман В.Т., 2008] и «горячая пластина» [Машковский М.Д. и др., 1990; Heidari M.R. et al„ 2009].

Противосудорожное действие изучали на моделях «судороги, вызываемые введением стрихнина» (2 мг/кг подкожно в область шейного отдела спины) и «судороги, вызываемые введением тиосемикарбазида» (в дозе 28 мг/кг внутрибрюшинно) [Rasilingam D. et al„ 2009; Orloff М., 1949].

Влияние на физическую работоспособность изучалась в условиях методики «принудительное плавание» с утяжеляющим грузом, равным по массе 10% от массы тела [Бобков Ю.Г. и др., 1984].

Ориентировочно-исследовательское поведение изучалось в условиях методики «открытое поле» [Walsh R.N., Cummins R.A., 1976; Буреш Я. и др., 1991].

Влияние на обучаемость и память оценивали по показателям выработки и воспроизведения условного питьевого рефлекса в трехзвенном Т-образном лабиринте на фоне водной депривации [Азарашвили А.А., 1981] и условного

рефлекса пассивного избегания после гипоксической травмы [Буреш Я. и др., 1991].

Анксиолитическую активность изучали в условиях методик «конфликтная ситуация» [Vogel J.R. et al, 1971; Вихляев Ю.И. и др., 1982; Клыгуль Т.А., Кривопалов В.А., 1966] и «приподнятый крестообразный лабиринт» [Cole J.C. et al., 1994; Lister R.G., 1987].

Исследование стресспротекторного действия проводили на модели «острый иммобилизационный стресс» [Добряков Ю.И., 1978].

Влияние на зоосоциальное поведение изучалось на модели «.резидент-интрудер» [Войтенко H.H., 2007; Михеев В.В., Шабанов П.Д., 2007].

Антидепрессантную активность оценивали по выраженности реакции поведенческого отчаяния, регистрируемой в методике «вынужденное плавание со свободно вращающимися колесами» [Nomura S. et al., 1982].

При изучении острой токсичности мышам вводили суспензию экстракта в дозе 5000 мг/кг [Гуськова Т.А., 2003; Шилина Т.С. и др., 2004].

По окончании экспериментов животных умерщвляли, соблюдая «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных».

Полученные данные обрабатывали методами вариационной статистики с использованием пакетов программ Microsoft Excel ХР, Statistica 6.0. Определяли среднее арифметическое (X), ошибку среднего арифметического (т), значение вероятности (Р). Для статистической оценки применяли параметрический t-критерий Стьюдента и непараметрический критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, статистически значимыми считали различия при р<0,05 [Зайцев Г.Н., 1984; Трухачева Н.В., 2013].

Третья глава диссертации посвящена описанию результатов исследования фармакологических свойств экстрактов надземной части альфредии поникшей, фракций и соединений, выделенных из активного экстракта. Полученные данные представлены в виде таблиц и рисунков.

Четвертая глава диссертационной работы посвящена обсуждению полученных результатов исследования с привлечением данных литературы.

Выбор оптимальной дозы экстракта на 40% этаноле

В тесте «гемическая гипоксия» при использовании экстракта альфредии поникшей (ЭАП) в дозе 10 мг/кг отмечали тенденцию к увеличению продолжительности жизни; доля выживших мышей составила 42,9 %. В группах, получавших ЭАП в дозах 100 и 200 мг/кг, доля выживших мышей составляла

28.6 %. Однако различия не были статистически значимыми.

Использование экстракта на 40% этаноле не влияло на продолжительность жизни животных при введении летальной дозы натрия нитропруссида. Хроническая тканевая гипоксия существенно снижала общую клеточность селезенки, тимуса и белого ростка кроветворения соответственно на 33,4 %,

32.7 % и 23,4 %. Применение экстракта альфредии в дозе 100 мг/кг снижало

количество геморрагий в 3,5 раза, отмечали нормализацию показателей клеточности органов и крови до уровня интактных животных (р<0,05).

Введение экстракта альфредии на 40% этаноле (ЭАП-40%) во всех дозах достоверно увеличивало латентный период болевой реакции у животных в тесте «горячая пластина». Максимальный эффект наблюдали при введении экстракта в дозе 50 мг/кг при использовании экстракта в дозах 10, 100 и 200 мг/кг эффект был менее выражен, но сопоставим с препаратом сравнения.

В тесте «корчи, вызванные введением уксусной кислоты» применение ЭАП-40% уменьшало число корчей в дозах 10 мг/кг и 50 мг/кг на 36,4 % и 50 % соответственно. Экстракт в дозах 100 и 200 мг/кг увеличивал время наступления корчей в 1,7-2,2 раза, число корчей уменьшалось на 68,5 % и 44,8 % соответственно (р<0,05).

При моделировании гипоксии гермообъёма, во всех использованных дозах экстракт альфредии не влиял на продолжительность жизни мышей. При этом отмечали улучшение показателей ориентировочно-исследовательского поведения в открытом поле с нарастанием эффекта от дозы 10 мг/кг к дозе 100 мг/кг с некоторым снижением в дозе 200 мг/кг. Экстракт, введенный в дозе 100 мг/кг, максимально нормализовал поведение, значения показателей были сопоставимы с данными интактной группы.

Перенесенная гипоксическая травма вызывала у мышей ухудшение воспроизведения условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ'). В группе мышей, перенесших гипоксическую травму и получавших экстракт в дозе 10 мг/кг, при проверке через 48 ч после выработки рефлекса латентное время воспроизведения рефлекса (ЛВР) увеличилось на 48 % в сравнении с гипоксическим контролем. Различия сохранялись также при проверках на 7 и 14 дни. Использование экстрактов в дозах 50 и 200 мг/кг оказывали более выраженный эффект, сохраняя УРПИ и на 21 сутки, в дозе 100 мг/кг максимально способствовало сохранности УРПИ.

При изучении влияния на физическую работоспособность и адаптацию к физическим нагрузкам было установлено, что увеличение времени второго плавания наблюдалось при использовании экстракта альфредии во всех дозах. Однако в большинстве случаев эти различия не были статистически значимы. В группе, получавшей экстракт в дозе 100 мг/кг, отмечали достоверное (р<0,05) увеличение продолжительности плавания на четвертые сутки эксперимента. На шестой день увеличением температуры воды была произведена сшибка адаптации. В контрольной группе продолжительность плавания упала в 2,3 раза (р<0,05) по сравнению с предыдущим днём плавания. Наименьшее снижение времени плавания зафиксировано в случае использования ЭАП-40% в дозах 10 и 100 мг/кг.

На основании того, что в большинстве экспериментов экстракт на 40% этаноле проявил наиболее выраженную активность в дозе 100 мг/кг, оказывая анальгетическое и адаптогенное действие, улучшая показатели клеточности тимуса и селезенки на фоне хронической тканевой гипоксии, а также поведение

животных и воспроизводимость УРПИ после перенесенной гипоксической травмы, дальнейшие исследования проводили, используя эту дозу экстрактов.

Выбор наиболее активного экстракта

Исследовали экстракты на воде, 40%, 70%, 95 % этаноле. В открытом поле после гипоксии ориентировочно-исследовательское поведение мышей, получавших экстракты на 40% и 70% этаноле, незначительно отличалось от такового у интактных животных. Введение экстракта на 95% этаноле (ЭАП-95%) наиболее эффективно восстанавливало поведение животных, перенесших гипоксическую травму.

Гипоксическая травма вызывала нарушение ориентировочного рефлекса при выработке УРПИ. Экстракты на 40% и 95% этаноле достоверно увеличивали сохранность рефлекса, снижая латентное время захода в темный отсек камеры (ЛВЗ) (Таблица 1).

При воспроизведении УРПИ через 48 ч после выработки у животных гипоксического контроля ЛВР было в 3,1 раза меньше, время пребывания в темном отсеке в 4 раза больше, количество заходов в него - в 2,2 раза больше, чем у животных интактного контроля.

Таблица 1 - Влияние экстрактов альфредии на продолжительность жизни и ЛВЗ при выработке УРПИ на фоне гипоксической травмы у аутбредных мышей-самок СР 1 (Х±т, п=8)_

Группа наблюдения Продолжительность жизни в термокамере, мин ЛВЗ, с

Интактный контроль — _ 36,8 ± 9,4

Гипоксический контроль 50,2 ±3,2 101,0 ±20,1 и

Водный экстракт, 100 мг/кг 60,0 ±3,8 104,0 ± 17,2"

ЭАП-40 %, 100 мг/кг 47,7 ±7,1 47,7 ± 16,7 *

ЭАП-70 %, 100 мг/кг 50,0 ±3,7 60,2 ± 18,9

ЭАП-95 %, 100 мг/кг 48,6 ±4,1 36,6 ± 6,5 *

Пирацетам, 400 мг/кг 50,2 ± 2,3 55,5 ± 16,1

Примечание - Различия достоверны в сравнении: с интактным контролем - #, с гипоксическим контролем - * (р<0,05).

При введении экстрактов на воде, 40% и 70% этаноле отмечали тенденцию к повышению воспроизведения УРПИ. Введение экстракта на 95% этаноле достоверно улучшало воспроизведение рефлекса во все сроки проверки. Сохранность рефлекса превосходила таковую в прочих группах.

При исследовании влияния на физическую работоспособность и адаптацию к физическим нагрузкам у животных, получавших экстракты,

работоспособность была более высокой, чем в контроле. Однако увеличение времени плавания было максимальным только на второй день плавания. В последующие дни значения прироста работоспособности сократились. У животных, получавших экстракт альфредии на 40% этаноле, значимый прирост работоспособности был отмечен только на первые сутки, на 70% этаноле - на 4 и 5 сутки, введение ЭАП-95% обеспечивало значимый прирост работоспособности во все дни исследования. Водный экстракт в условиях данной методики был неактивен.

Таким образом, было определено, что наиболее выраженной активностью обладает экстракт надземной части альфредии на 95% этаноле.

Исследование фармакологических свойств экстракта альфредии на 95%

этаноле

При выработке питьевого рефлекса со сложной пространственной ориентировкой значимые отличия между группами, получавшими препараты, и группой контроля отмечались на втором этапе эксперимента (Рисунок 1). Особенностью этого этапа является то, что крыса начинает искать поилку, зная, что последняя есть в лабиринте, но не имея представления о её реальном положении. Это создает значительную нагрузку на когнитивные функции. Именно в это время эффект препаратов проявляется в достаточной мере.

число ошибок

20 10 о

обучение 2 этап 3 этап 4 этап

ЛВП 600 400 200 0

Рисунок 1 — Влияние экстракта альфредии и пирацетама на число ошибок и латентное время питья при выработке питьевого рефлекса у аутбредных крыс-самок СБ (Х±т; п=6).

Различия достоверны в сравнении с интактным контролем - * (р<0,05).

Скорость выработки рефлекса у крыс, получавших экстракт альфредии и пирацетам, была выше, чем у контрольных животных: латентное время выполнения рефлекса (ЛВП) снижалось на 38,9-39,5 % (р<0,05). Количество перемещений до поилки и число ошибок снижалось у получавших препараты животных в 2 раза в сравнении с контролем.

■ Контроль---Пирацетам, 400 мг/кг

■ ЭАП 95%, 100 мг/кг

В приподнятом крестообразном лабиринте (ПКЛ) животные контрольной группы проводили в открытых рукавах лабиринта около 7 % времени регистрации (Таблица 2). Время первого захода в темный рукав также было наименьшим среди сравниваемых групп.

Таблица 2 - Влияние экстракта альфредии поникшей на 95% этаноле и феназепама на поведение аутбредных 1фыс-самок СР в ПКЛ (Х±т; п=6)

Группа наблюдения Время в открытых рукавах, с Время в закрытых рукавах, с Вертикальная активность (число стоек) Количество болюсов

Интактный контроль 21,4+7,2 278,6±7,2 0,3+0,2 0,33±0,3

Феназепам, 1 мг/кг 104,0+14,1* 196,0+14,1* 1,6+0,3* 0+0

ЭАП-95%, 100 мг/кг 64,1±6,8* 235,9±6,8* 1,6+0,3* 0±0

Примечание - Различия достоверны в сравнении с интактным контролем - * (Р<0,05).

У крыс, получавших ЭАП-95% и феназепам, время нахождения в открытых рукавах составило 21,3 % и 34,6 % соответственно. Под влиянием препаратов животные позже переходили в темные рукава лабиринта; отмечалась более высокая вертикальная активность.

При исследовании поведения в условиях конфликтной ситуации число наказуемых током взятий воды у крыс, получавших экстракт альфредии на 95% этаноле и феназепам, увеличивалось в 2,8 раза. Время нахождения возле поилки (после первого взятия) увеличивалось в 7,5-7,9 раза, число актов груминга, в данной модели являющегося маркером психоэмоциального напряжения, снижалось в 1,7-2 раза (Таблица 3).

Таблица 3 - Влияние экстракта альфредии поникшей на 95% этаноле и его фракций на поведение аутбредных крыс-самок СО в тесте «конфликтная ситуация» (Х±ш; п=8)_

Группа наблюдения Груминг Время первого подхода к поилке, с Число наказуемых взятий воды Суммарное время нахождения возле поилки, с Продолжительность фризинговых реакций

Интактный контроль 11,0+1,5 183,5±44,9 1,3+0,2 5,7±2,7 26,3±3,4

Феназепам, 1 мг/кг 5,5±0,7* 214,2±40,1 3,5±0,3* 45,3±14,1* 44,0+10,4*

ЭАП 95%, 100 мг/кг 6,2+0,4* 79,7+22,4* 3,5±0,2* 43,0±11,0* 0±0*

Таким образом, на моделях ПКЛ и конфликтной ситуации установлено, что экстракт на 95% этаноле обладает анксиолитическим действием, при этом у него отсутствуют побочные эффекты, характерные для большинства традиционных анксиолитиков - седативное действие, сонливость, заторможенность, отрицательное влияние на восприятие и память.

При исследовании зоосоциалъного поведения установлено, что у получавших экстракт животных отсутствовало агрессивное поведение - не было зарегистрировано ни одной драки, в то время как в контроле их среднее значение составило 0,75, а доля агрессивных мышей - 38 %. Таким образом, ЭАП-95% подавляет агрессивное поведение в условиях социального взаимодействия, что может быть связано с анксиолитическими свойствами экстракта [Шабанов П.Д. и др., 2006].

В тесте плавание по Porsolt в модификации Nomura курсовое введение экстракта альфредии увеличивало число оборотов колес в первом периоде эксперимента на 34 %, а время иммобилизации — на 53 % (р<0,05); введение амитриптилина достоверно увеличивало время иммобилизации, но снижало число оборотов колес во втором периоде (Таблица 4). Анализ данных показал, что экстракт альфредии обладает антидепрессантным действием, и не уступает по силе действия амитриптилину, при этом не проявляя характерных для последнего побочных эффектов (седативное действие, сонливость, вялость).

Таблица 4 - Исследование антидепрессантной активности экстракта альфредии на 95 % этаноле в тесте плавание по Nomura (X±m, n=10)

Группа наблюдения Латентное время замирания, с Число оборотов в 1-м периоде (с 1 по 5 минуты) Число оборотов во 2-м периоде (с 6 по 10 минуты) Общее число оборотов

Интактный контроль 101,2 ±7,4 39,7 ±5,7 39,4 ± 8,8* 79,1 ± 13,9

ЭАП 95%, 100 мг/кг 155,1 ±11,1* 64,6 ±7,5* 41,9 ±8,6» 106,5 ± 15,6

Амитриптилин, 10 мг/кг 153,7 ±9,4* 54,1 ±5,9 16,2 ±3,7* 70,4 ± 9,4

Примечание — Различия достоверны в сравнении: с интактным контролем - *, с амитриптилином - # (р<0,05).

При исследовании стресспротекторного действия ЭАП-95% на модели острого имлюбилизационного стресса в группе стресс-контроля наблюдали потерю в массе в сравнении с интактными животными (р<0,01). Масса селезенки уменьшалась на 42 %, тимуса - на 25 %, надпочечники увеличивались в 1,5 раза, отмечались массовые геморрагии в слизистой оболочке желудка (Таблица 5). Введение экстракта более чем в 5 раз снижало количество геморрагии в желудке (противоязвенная активность рассчитываемая как отношение индекса Паулса в стресс-контроле к индексу Паулса в группе, получавшей экстракт, равна 11,3) и препятствовало гипертрофии надпочечников (р<0,05).

Таблица 5 — Влияние экстракта альфредии на 95% этаноле на состояние внутренних органов аутбредных мышей-самок СО 1 после перенесенного острого иммобилизационного стресса (Х±ш; п=6)

Группа наблюдения Язвы Селезенка, мг Тимус, мг Надпочечники, мг Индекс Паулса

Интактный контроль 0±0 134,7±12,9 35,2±2,3 2,71±0,2 0

Стресс-контроль 8,5±1,9* 76,9±6,7# 26,3±2,7# 4,04±0,13# 8,5

ЭАП 95%, 100 мг/кг 1,5±0,9* 91,0±5,1# 22,4±3,0* 3,02±0,15* 0,75

Примечания

1. Показатели массы органов приведены в пересчете на 20-граммовую мышь.

2. Различия достоверны в сравнении: с интактным контролем - #, со стресс-контролем - * (р<0,05).

Иммобилизационный стресс не вызывал существенных изменений поведения в открытом поле, за исключением показателя груминга, величина которого возросла в 5,7 раза. ЭАП-95% нормализовал показатель до уровня, близкого к значениям интактного контроля. Таким образом, ЭАП-95% проявляет стресспротекторное действие, препятствуя язвообразованию и гипертрофии надпочечников и нормализуя поведение на фоне перенесенного стресса.

Изучение противосудорожной активности показало, что введение экстракта альфредии за 1 ч до введения стрихнина не влияло на латентное время наступления судорог. Продолжительность жизни после введения стрихнина и количество судорог оставались на уровне интактных животных, однако наблюдалось сокращение продолжительности судорог на 36,7 % (Таблица 6).

Таблица 6 - Влияние экстракта альфредии поникшей на 95% этаноле на судороги, вызванные у аутбредных мышей-самок СБ 1 введением стрихнина и тиосемикарбазида (Х±т, п-12)__

Группа наблюдения Интактный контроль ЭАП-95%, 100 мг/кг

Судороги, вызываемые введением стрихнина

Латентное время наступления судорог, мин 5,7±0,4 6,2±0,3

Количество судорог 2,0±0,6 3,0±1,4

Продолжительность судорог, с 77,3±4,2 48,9±5,0*

Продолжительность жизни, мин 8,7±1,0 7,9+0,9

Судороги, вызываемые введением тиосемикарбазида

Латентное время до наступления судорог, мин 48,2±2,2 49,1±1,6

Количество судорог 7,1±0,8 4,8±0,5*

Продолжительность жизни, мин 83,4±3,8 82,0+3,8

Введение экстракта не влияло на время наступления судорог и продолжительность жизни мышей при введении тиосемикарбазида, однако снижало количество судорог в 1,5 раза в сравнении с контрольной группой. Таким образом, экстракт альфредии на 95% этаноле проявляет умеренную противосудорожную активность.

В течение 14 дней после введения суспензии экстракта при исследовании острой токсичности гибель животных не отмечалась. Внешний вид и поведение животных, получавших экстракт в дозе 5000 мг/кг, соответствовали таковым в интактной группе. Данные свидетельствуют, что экстракт альфредии обладает низкой токсичностью.

Сравнение экстрактов дикорастущего и культивированного растений

На модели выработки и воспроизведения УРПИ на фоне гипоксической травмы было показано, что по церебропротекторной и ноотропной активности культивируемая альфредия сравнима с дикорастущей (Рисунок 2).

Рисунок 2 - Влияние экстрактов на 95% этаноле из дикорастущей и культивируемой альфредии на ЛВР у аутбредных мышей-самок СО 1 при проверке воспроизводимости УРПИ (Х±ш, п=10).

1 - интактный контроль, 2 - гипоксический контроль, 3 - ЭАП дикорастущей, 100 мг/кг, 4 - ЭАП культивируемой, 100 мг/кг, 5 - пирацетам, 400 мг/кг. Различия достоверны в сравнении: с интактным контролем - #, с гипоксическим контролем — * (р<0,05).

Экстракты в равной степени восстанавливали ориентировочно-исследовательскую активность в открытом поле после перенесенной гипоксии и способствовали сохранности УРПИ.

Исследование активности фракций активного экстракта

Экстракт альфредии на 95% этаноле фракционировали хлороформом, этилацетатом, бутанолом-1. Полученные фракции (хлороформная - ХЛФФ, этилацетатная - ЭАФ, бутанольная - БФ и водный остаток - ВО) исследовали на наличие ноотропной и анксиолитической активности.

В открытом поле гипоксическая травма уменьшала спонтанную двигательную активность в 1,75 раз (р<0,05). Норковый рефлекс снижался в 3

раза. Введение экстракта на 95% этаноле увеличивало число перемещений в открытом поле и число заглядываний в норки. При использовании фракций наблюдали тенденцию к нормализации двигательной активности и норкового рефлекса у мышей, перенесших гипоксию и получавших ХЛФФ и ВО.

Использование фракций экстракта положительно влияло на сохранность УРПИ. На 21 сутки эксперимента сохранность рефлекса у животных, получавших БФ, составила 71,1 %, у животных, получавших ЭАП, ЭАФ и ВО - 63 %, тогда как в гипоксическом контроле значение показателя составило 25 %.

В приподнятом крестообразном лабиринте время в открытых рукавах у крыс, получавших экстракт альфредии, превышало таковое у контрольных животных вдвое (р<0,05), время захода в темный рукав лабиринта также было выше. ХЛФФ также достоверно влияла на поведение животных. Вертикальная активность у крыс, получавших ХЛФФ, было в 5,5 раз выше, чем у контрольных животных. В конфликтной ситуации показатели, характеризующие противотревожную активность, у мышей, которым вводили фракции экстракта на 95% этаноле, достоверно разнились с данными группы контроля. Число наказуемых взятий воды у мышей, получавших БФ, увеличивалось в 4,8 раза, у животных, получавших ХЛФФ в 5,25 раза. Введение ЭАФ и ВО увеличивали этот показатель в 4 и 2,8 раз соответственно. Введение экстракта увеличивало число наказуемых актов питья в 3,25 раза. Вместе с тем, фризинговые реакции у животных, получавших экстракт, отсутствовали, равно как и в группах, получавших фракции. Время нахождения около поилки у животных, получавших экстракт и БФ, было выше чем в группе контроля (р<0,05). В остальных группах отмечали тенденцию к увеличению этого показателя. У животных, которым вводили ЭАП, ВО и феназепам, отмечали достоверное снижение груминга. Принято считать груминг проявлением смещенной активности, представляющим собой амбивалентное поведение, отражающее когнитивный диссонанс и связанное с ним психоэмоциональное напряжение [Суслов Н.И. и др., 2009]. Конфликт в данном случае носит характер непреодолимого путем активных действий, поэтому снижение его свидетельствует о противотревожном эффекте.

Таким образом, в ПКЛ наиболее выраженное анксиолитическое действие оказывало введение ЭАП и ХЛФФ, в конфликтной ситуации оптимальное действие наблюдали при использовании ХЛФФ и БФ.

Анализ данных показывает, что ноотропная активность выражена у фракций в меньшей степени чем у суммарного извлечения, что не позволяет выделить одну фракцию как ответственную за эффект. Сделан вывод, что полноценный ноотропный эффект оказывает сумма биологически активных веществ экстракта растения.

Изучение активности индивидуальных соединений альфредии поникшей

Фармакологическую активность соединений оценивали по влиянию на ориентировочно-исследовательское поведение в открытом поле и последствия перенесенной гипоксической травмы.

Введение СТС, рутина и арктиина не влияло на ориентировочно-исследовательскую активность у нормальных мышей в открытом поле. У животных, получавших соединение ОВ-2, достоверно снижалась локомоторная активность - количество перемещений было в 2,05 раза меньше в сравнении с данными в контрольной группе. У животных, которым вводили изокверцитрин, достоверно возрастало число обследований норок, что свидетельствует о влиянии этого вещества на ориентировочно-исследовательское поведение мышей.

При выработке гипоксической травмы и УРПИ на фоне гипоксической травмы применение исследуемых соединений не влияло на продолжительность жизни мышей в термокамере (Таблица 7). При этом у животных, получавших рутин и изокверцитрин, наблюдалось снижение показателя ЛВЗ.

Таблица 7 - Влияние индивидуальных соединений альфредии поникшей на продолжительность жизни в термокамере и ЛВЗ при выработке УРПИ у аутбредных мышей-самок СР 1 (Х±т; п-8)__

Группа наблюдения Продолжительность жизни в термокамере, мин ЛВЗ, с

Интактный контроль — 23,7± 11,3

Гипоксический контроль 43,9±1,8 38,9±6,4

СТС, 7,0 мг/кг 38,1±4,4 26,0±5,1

ОВ-2, 0,3 мг/кг 42,1±2,3 27,3±6,8

Изокверцитрин, 1 мг/кг 38,9±2,3 17,9±1,9 *

Рутин, 1 мг/кг 42,4±3,6 15,6±3,7 *

Арктиин, 1 мг/кг 43,1±1,9 31,3±7,7

Примечание - Различия достоверны в сравнении с гипоксическим контролем - # (р<0,05).

Перенесенная гипоксическая травма привела к снижению ориентировочно-исследовательского поведения в открытом поле (Таблица 8). Горизонтальная активность снижалась в 1,9 раза, а число обследованных норок - в 2 раза по сравнению с данными группы интактного контроля. Число вертикальных стоек уменьшалось в 1,9 раза. При введении соединений альфредии нормализации показателей до значений интактных животных не отмечали. Введение СТС снижало величину показателя груминга до уровня интактного контроля.

Введение индивидуальных соединений способствовало сохранению УРПИ на фоне гипоксической травмы. Так, на 21 сутки ЛВР в группе гипоксического контроля уменьшалось в 2,7 раза в сравнении с интактным контролем (Таблица 9). Применение индивидуальных соединений увеличивало этот показатель более чем в два раза.

Таблица 8 - Влияние индивидуальных соединений альфредии поникшей на ориентировочно-исследовательское поведение аутбредных мышей-самок СБ 1 в открытом поле после перенесенной гипоксической травмы (Х±т; п=8)_

Группа наблюдения Горизонтальная активность Вертикальная активность Норковый рефлекс Груминг

Интактный контроль 54,4±4,1 8,0±1,9 21,4±1,8 0,4±0,15

Гипоксический контроль 29,0±5,2# 4,29±1,2 10,9±1,6# 1,6±0,3#

СТС, 7,0 мг/кг 22,5±7,1 1,67±1,1# 8,8±2,2 0,5±0,2*

ОВ-2, 0,3 мг/кг 18,7±8,1 2,94±1,9# 11,7±5,4 1,5±0,4

Изокверцитрин, 1 мг/кг 22,2±6,6 2,51±1,2# 12,7±5,2 1,0±0,0

Рутин, 1 мг/кг 23,1±4,4 2,29±1,0" 7,9±1,4 1,9±0,5

Арктиин, 1 мг/кг 16,2±4,6 1,37±0,5" 7,8±3,7 1,3±0,2

Примечание - Различия достоверны в сравнении: с интактным контролем - #, с гипоксическим контролем - * (р<0,05).

Таблица 9 - Влияние индивидуальных соединений альфредии поникшей на поведение аутбредных мышей-самок СО 1 в модели УРПИ на 21 сутки (Х±т; п=8)

Группа наблюдения Горизонтальная активность Груминг Латентное время до входа в темный отсек, с Число заходов в темный отсек Время в темной камере, с Количество обследований входа в темный отсек

Интактный контроль 29,3+3,9 0,9+0,5 124,4+27,6 1,6±0,6 53,2±24,5 2,9±0,9

Гипоксический контроль 48,2±5,7" 1,8+0,4 46,4+17,6* 2,7+0,3 45,5+27,0 0,5 ±0,16"

СТС, 7,0 мг/кг 39,7+9,8 1,0+0,5 91,7+30,4 1,7±0,7 50,8+28,8 2,7±0,9*

ОВ-2, 0,3 мг/кг 27,6+5,8* 0,7±0,3 122,0+28,4* 0,9±0,5 52,7+27,6 2,1 ±0,6*

Изокверцитрин, 1 мг/кг 24,8±5,0* 0,6+0,2* 106,0±27,4 1,4±0,7 43,3+19,5 1,7±0,6

Рутин, 1 мг/кг 33,7±6,8 1,0+0,5 80,5±26,2 1,7±0,4 38,1+19,2 1,3±0,2*

Арктиин, 1 мг/кг 34,0±7,5 0,6±0,4* 133,6±19,0* 0,6±0,2* 5,6±2,5* 3,8±1,1*

Примечание - Различия достоверны в сравнении: с интактным контролем - #, с гипоксическим контролем - * (р<0,05).

Достоверное увеличение JIBP отмечено при введении ОВ-2 и арктиина, в остальных случаях статистически значимые различия отсутствовали, хотя при использовании изокверцитрина наблюдали выраженную тенденцию к увеличению этого показателя. Введение соединений снижало количество заходов в темный отсек камеры и число подходов к нему. Под влиянием соединений нормализовалась горизонтальная активность животных, которая увеличивалась у животных гипоксического контроля. Арктиин, кроме того, уменьшал время нахождения в темном отсеке камеры УРПИ в 8 раз; при использовании других соединений данный показатель оставался на уровне контрольных животных. Изокверцитрин и арктиин уменьшали величину груминга в 3 раза в сравнении с гипоксическим контролем.

Анализируя полученные данные, можно сделать заключение о диссоциации радикалов нейропротекторного действия экстракта альфредии между разными по химической природе группами соединений. Так, церебропротекторное и антигипоксическое действие, проявившееся в сохранности ориентировочного рефлекса после гипоксической травмы, по всей видимости, обусловлено флавоноидами растения, в эксперименте представленными рутином и изокверцитрином. Изокверцитрин, кроме того, снижал проявления тревожности, что проявилось в увеличении ориентировочно-исследовательского поведения в открытом поле в нормальных условиях и снижении величины показателя груминга при проверке сохранности УРПИ и может свидетельствовать о вкладе его действия в анксиолитический эффект экстракта. В литературе имеются указания, что нейротропные эффекты ряда фитопрепаратов во многих случаях обусловлены наличием в них соединений класса флавоноидов [Кадацкая Д.В., 2005], и подклассу флавонолов, к которому относятся изокверцитрин и рутин, соответствует наиболее широкий спектр психотропных свойств.

Введение СТС значимо снижало показатель груминга в открытом поле после гипоксической травмы, что следует рассматривать как проявление противотревожного действия. В условиях методики УРПИ этот показатель также снижался под влиянием арктиина. Это не позволяет конкретизировать ответственное за эффект соединение, однако примечательно, что как сумма тритерпеновых спиртов, так и арктиин входят в состав хлороформной фракции экстракта, которая проявила наиболее выраженное анксиолитическое действие.

Анализ данных не позволяет соотнести ноотропное действие, в нашем эксперименте определяемое, в первую очередь, по влиянию на JIBP, с какой-то одной группой веществ. JIBP достоверно увеличивалось при введении как тритерпенового соединения ОВ-2, так и лигнана арктиина, а число заходов в темный отсек камеры УРПИ под влиянием этих веществ достоверно снижалось. Кроме того выраженная тенденция к нормализации этих показателей наблюдалась при использовании изокверцитрина. Однако при исследовании фармакологических свойств фракций экстракта показана более выраженная церебропротекторная и ноотропная активность фракций, содержащих флавоноиды - БФ и ЭАФ. Поэтому можно сделать предположение, что анксиолитическая активность экстракта альфредии в большей степени

обусловлена липофильными компонентами, входящими в ХЛФФ -тритерпеновыми соединениями растения, а также арктиином, в то время как вклад в ноотропные и церебропротекторные свойства экстракта вносят соединения как тритерпеновой, так и полифенольной природы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенное экспериментальное исследование продемонстрировало наличие у экстрактов надземной части альфредии поникшей церебропротекторной и ноотропной активности. Изучение экстракта на 40% этаноле показало наличие антигипоксической и анальгетической (антиноцицептивной) активности. Доза экстракта, обладающая в скрининговом исследовании наиболее выраженным действием, составила 100 мг/кг. Установлено, что экстракты на 40%, 70%, 95% этаноле, а также водный экстракт альфредии поникшей в разной степени обладают церебропротекторными, ноотропными и адаптогенными свойствами, при этом не оказывая значимого влияния на поведенческие характеристики в отсутствии патологии, что в принципе, характерно для ноотропных средств. Наиболее выраженное действие проявил экстракт альфредии поникшей на 95% этаноле, что, вероятнее всего, связано с липофильной природой входящих в него компонентов, обладающих максимальным сродством к нервным клеткам и способностью проникать через гематоэнцефалический барьер.

Исследование спектра фармакологических свойств показало, что экстракт на 95% этаноле обладает анксиолитическими, антидепрессантными, противоневротическими, стресспротекторными, противосудорожными и антиагрессивными свойствами. Переносимость высоких доз экстракта альфредии на 95% этаноле, установленная при изучении токсичности, позволяет отнести его к IV классу опасности (малоопасные), при этом при исследовании анксиолитических и антидепрессантных свойств экстракт влиял на определяющие показатели тестов на уровне препаратов сравнения феназепама и амитриптилина, однако выгодно отличался от них по отсутствию седативного эффекта. Последнее обстоятельство позволяет сочетать прием препаратов на основе экстракта альфредии с полноценной трудовой деятельностью.

Результаты сравнительного изучения свойств экстрактов, полученных из дикорастущего и культивированного растений, показывают равноценность эффектов при их использовании, что позволяет решить вопросы, связанные с промышленным ресурсом сырья.

Исследование активности фракций и соединений, полученных из экстракта на 95% этаноле, показало, что суммарный экстракт проявляет более выраженное и разнонаправленное действие, однако на основании полученных результатов может быть сделано предположение об ответственности тритерпеновых соединений за противотревожное действие, тогда как за церебропротекторное действие экстракта отвечают разные по природе группы веществ, такие как

полифенолы (флавоноиды и лигнаны) и более гидрофильные тритерпеновые соединения (вещество ОВ-2).

Таким образом, на основании проведенного экспериментального исследования может быть сделан вывод, что экстракты надземной части альфредии поникшей являются перспективными для создания на их основе малотоксичных ноотропных лекарственных препаратов с высоким терапевтическим индексом и широким спектром нейротропного действия.

ВЫВОДЫ

1. Экстракт альфредии поникшей на 40% этаноле обладает церебропротекторной, антигипоксической, анальгетической активностью. Максимально эффективная доза экстракта составляет 100 мг/кг.

2. Экстракты альфредии поникшей на воде и этаноле различной концентрации обладают церебропротекторной и ноотропной активностью, проявляя свое действие на фоне гипоксической травмы и демонстрируя незначительную активность у нормальных животных. Наиболее выраженным действием обладает экстракт альфредии поникшей на 95% этаноле.

3. Экстракт альфредии поникшей на 95% этаноле обладает выраженным анксиолитическим, антидепрессантным, стресспротекторным, умеренным адаптогенным и противосудорожным действием, улучшает социальное поведение, снижая уровень агрессии.

4. Фракции экстракта альфредии поникшей на 95% этаноле обладают анксиолитической активностью. Наиболее выраженное анксиолитическое действие проявляет хлороформная фракция экстракта.

5. Фракции экстракта альфредии на 95% этаноле и соединения, полученные из растения, обладают ноотропной и церебропротекторной активностью, но уступают по выраженности и спектру действия суммарному экстракту. Анксиолитическая активность экстракта альфредии на 95% этаноле в большей степени обусловлена липофильными компонентами хлороформной фракции экстракта, в то время как вклад в ноотропные и церебропротекторные свойства экстракта вносят вещества как тритерпеновой, так и полифенольной природы.

6. Экстракт культивируемой альфредии не отличается по выраженности ноотропного действия от экстракта дикорастущего растения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Суслов, Н.И. Изучение ноотропных и анксиолитических свойств экстракта Alfredia Cernua (L.) Cass / Н.И. Суслов, Р.Н. Мустафин, И.В. Шилова, Н.В. Кувачева // Материалы конференции «Создание новых лекарственных препаратов». - Томск, 2007. - С. 90-92.

2. Мустафин, Р.Н. Влияние экстракта надземной части альфредии поникшей на выработку условного рефлекса / Р.Н. Мустафин // Материалы конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии». -Томск, 2007.-С. 61-62.

3. Кувачева, Н.В. Антиоксидантные и церебропротекторные свойства дикорастущей и культивируемой альфредии поникшей / Н.В. Кувачева, И.В. Шилова, Н.И. Суслов, Р.Н. Мустафин, Е.И. Короткова, А.Н. Вторушина, В.П. Амельченко // Тезисы V Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность». - Москва, 2008. - С. 61-62.

4. Шилова, И.В. Исследование антиоксидантных и ноотропных свойств растений рода альфредия / И.В. Шилова, Н.И. Суслов, Н.В. Кувачева, Р.Н. Мустафин, Е.И. Короткова, А.Н. Вторушина // Сборник материалов XV Российского Национального Конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2008. - С. 732.

5. Суслов, Н.И. Исследование церебропротективных свойств дикорастущей и интродуцированной форм альфредии поникшей / Н.И. Суслов, Р.Н. Мустафин, И.В. Шилова, Н.В. Кувачева, В.П. Амельченко // Сборник научных трудов I Российского фитотерапевтического съезда. - Москва, 2008. - С. 223224.

6. Мустафин, Р.Н. Влияние экстрактов альфредии поникшей на когнитивные функции мозга / Р.Н. Мустафин, Н.И. Суслов, И.В. Шилова, Н.В. Кувачева // Сборник научных трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». - Пятигорск, 2009. - Вып. 64. - С. 473-474.

7. Мустафин, Р.Н. Влияние экстрактов альфредии поникшей на поведение, память и работоспособность в эксперименте / Р.Н. Мустафин, Н.И. Суслов, И.В. Шилова, Н.В. Кувачева // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2010. - Т. 73, № 1. - С. 16-19.

8. Мустафин, Р.Н. Ноотропная активность экстрактов из дикорастущей и культивируемой альфредии поникшей / Р.Н. Мустафин, И.В. Шилова, Н.И. Суслов, Н.В. Кувачева, В.П. Амельченко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010. - Т. 150, № 9. - С. 302-304.

9. Mustafin, R.N. Nootropic activity of extracts from wild and cultivated alfredia cernua / R.N. Mustafin, I.V. Shilova, N.I. Suslov, N.V. Kuvacheva, V.P. Amelchenko // Bulletin of experimental biology and medicine. - 2011. - Vol. 150 (3).-P. 333-335.

10.Мустафин, Р.Н. Антидепрессантные и анксиолитические свойства экстракта Alfredia cernua (Asteraceae) / Р.Н. Мустафин, И.В. Шилова, Н.И. Суслов // Растительные ресурсы. - 2011. - Т. 47, вып. 3. - С. 130-136.

П.Мустафин, Р.Н. Стресспротекторное действие экстракта альфредии поникшей / Р.Н. Мустафин, И.В. Шилова, A.A. Бакибаев // Материалы П-й Международной Казахстанско-Российской конференции по химии и химической технологии. - Караганда, 2012. - Том II, С. 371-373.

12.Мустафин, Р.Н. Антигипоксическое и стресспротекторное действие экстракта альфредии поникшей / Р.Н. Мустафин, K.JI. Зеленская, И.В. Шилова, Н.И. Суслов, A.A. Бакибаев // Химия растительного сырья. - 2012. - № 1. - С. 211214.

П.Мустафин, Р.Н. Фармакологические эффекты экстрактов альфредии / Р.Н. Мустафин // Материалы V Всероссийской Конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». - Барнаул, 2012. -С.319-320.

14.Шилова, И.В. Выделение, идентификация и ноотропная активность веществ хлороформной фракции экстракта альфредии поникшей / И.В. Шилова, A.A. Семёнов, Н.В. Кувачева, Н.И. Суслов, Р.Н. Мустафин // Химико-фармацевтический журнал. - 2012. - Т. 46, № 6. - С. 60-66.

15.Мустафин, Р.Н. Исследование антигипоксических свойств альфредии поникшей / Р.Н. Мустафин, И.В. Шилова, Н.И. Суслов, A.A. Бакибаев II Вестник карагандинского университета. - 2012. - № 4 (68). - 19-23.

16.Mustafin, R.N. Analgesic and anticonvulsant activity of Alfredia cernua extract / R.N. Mustafin // Материалы Всероссийской научно-практической конференции имени Л.П. Кулева «Химия и химическая технология в XXI веке». - Томск, 2013. - Том И. - С. 276-278.

17.Бакибаев, A.A. Фитохимический анализ травы альфредии поникшей методом ВЭЖХ / A.A. Бакибаев, Р.Н. Мустафин, A.B. Пустовойтов, Е.В. Дорожко, А.Ю. Тамурко, Е.В. Петрова, В.П. Амельченко // Химия растительного сырья. - 2014. — № 1.-С. 229-233.

Патенты на изобретение

1. Пат. 2347580 Российская Федерация. Средство, обладающее ноотропным действием / Шилова И.В., Суслов Н.И., Мустафин Р.Н. и др.; заявители и патентообладатели ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН. - Опубл. 27.02.2009, Бюл. №6.-7 с.

2. Пат. 2354397 Российская Федерация. Средство, обладающее анксиолитическим действием / Шилова И.В., Суслов Н.И., Мустафин Р.Н. и др.; заявители и патентообладатели ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН. -Опубл. 10.05.2009, Бюл. № 13. -7 с.

3. Пат. 2416421 Российская Федерация. Средство, обладающее нормотимическим действием / Мустафин Р.Н., Шилова И.В., Суслов Н.И.; заявители и патентообладатели НИИ фармакологии СО РАМН. - Опубл. 20.04.2011, Бюл. № 11.-6 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БФ - бутанольная фракция экстракта альфредии поникшей ВО - водный остаток экстракта альфредии поникшей ОВ-2 - индивидуальное тритерпеновое соединение

JIB3 - латентное время захода в темный отсек камеры при выработке УРПИ

JIBP — латентное времени рефлекса; латентное время захода в темный отсек

воспроизведении УРПИ

СТС - сумма тритерпеновых спиртов

УРПИ - условный рефлекс пассивного избегания

ХЛФФ — хлороформная фракция экстракта альфредии поникшей

ЦНС — центральная нервная система

ЭАП - экстракт надземной части альфредии поникшей

ЭАП-40%; -70%; -95% - экстракт альфредии поникшей на 40%, 70%, 95% эта!

ЭАФ - этилацетатная фракция экстракта альфредии поникшей

Подписано к печати 21.11.2014. Формат 60x84/16. Бумага «Снегурочка».

Печать XEROX. Усл. печ. л. 1,40. Уч.-изд. л. 1,26. _Заказ 1025-14. Тираж 110 экз._

Национальный исследовательский Томский политехнический университет Система менеджмента качества Издательства Томского политехнического университета Сертифицирована в соответствии с требованиями ISO 9001:2008

кзДАШьавожтпг.634050,г.Томск, пр. Ленина, 30 Тел./факс: 8(3822)56-35-35, www.tpu.ru