Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Церебропротекторные эффекты цереброкраста и этомерэола при ишемии мозга

гз о;]

- 11!. (ТРССИИСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

научно-исследовательский институт фармакологии томского научного центра

На правах рукописи

ваизова ольга евгеньевна

церебропротекторные эотекты цереброкраста и эт0мер30ла при ишемии мозга

14.00.23 - Фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидате медицински» наук (

Тоиск-1994

РаЕЬотв выполнена в Научно-исследовательском институте Фармакологии Томского научного центра РАИН

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор М.Б. Плотников

Научный консультант I кандидат медицинских наук

Н.И. Суслов

Официальные оппоненты! доктор медицинских наук В.Г. Нашинский

кандидат биологических наук Т.А. Замолина

Ведущее учреждение: Научно-исследовательский институт Кардиологии ТНЦ РАМН -

Эацита состоится ■«."¿/^-¿^¿»^ 1994 г. в_час

II

на заседании специализированного совета К 001. 33. 01 при НИИ Фармакологии Томского научного центра РАМН С634020, Томск, пр. Ленина > 3 3•

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-иссладешательокого института фармакологии Томского научного ' цантра РАНИ.

Автореферат разослан 1ЭЭ4 г.

Ученый секретарь специализированного

совета, кандидат биод. наук в.К. Горакова

- Э -

Актуальное^?, проблемы. Непрерывный рост заболеваемости, относительна низкая Эффективность профилактики и лечения цереб-роваскулярных расстройств определяет социальную и медицинскую эначинооть гроблены нарушения мозгового кровообращения (Карлов В.А., 19B7J. Патогенетическим направлением в лечении острых и хронически« нарушений мозгового кровообрааения является борьба с ишемией и одним из ее грозных осложнений - отеком мозга С Meyer • 19В7| Harper,1990). Эта обосновывает поиск препаратов, обладающих комплексным влиянием на кровоснабжение, и способных в конечная итоге предупреждать или ослаблять развитие отеха-нзбухания ткани мозга и расстройств функций мозга.

Препаратами, представляющими интерес а качестве корректоров ияенических повреждений иозга. являются Слокаторы кальциевых каналов из .группы производных X■4-дигидропиридина, спектр фармакологической активности которых включает сосудорасяиряюаее, ацтигипоксическое, антиагрегантное действие (Витолиня P.O., 1987, Godfraind, J.9B6), Эффективные корректоры нврувений церебральной гемодинамики ивимцческого типа обнаружены а группе антигипоксамтов - производных меркапто&енэимидазола <Лосев A.C., 1987). Исследования, проведенные сагрудниками лаборатории фармакологии кровообращения НИИ фармакологии ТНЦ РАКН и кафедры фармакологии Сибирского медицинского университета, позволили выделить среди производных зтик групп наиболее активные соединения.. Производное 1,4-дигидрйпйридина - цероброкраст и производное неркаптобензимидазола - зтомерзол, проявляя свойства избирательных церебральных вазодилататоров, оказывали выраженное защитное действие- я условиях острога ивемического повреждения мозга и внутримозгового кровоизлияния (Черныаеаа Г.А,, 1990, Кулакова З.В., 1992, Баженова Т.Г.. 1993). Эти данные явились основанием для изучения эффективности курсового введения этих препаратов в условиях длительной иаемии мозга и дальнвйвего изучения механизмов их церебропратекторного действия.

Цель работы. Изучение эффективности курсового применения этомерэола и цереброкраста а качестве корректоров нарушений функциональной активности.локального мозгового кровотока, отека-набухания мозговой ткани у- ненаркотизированнык животных при иаеяиц. и оценка некоторых механизмов иеребролротекторного действия препаратов.

Задачи исследования.

1. Разработать адекватную модель церебральной икании для экспериментов на бодрствующих крысах, сопровождавшуюся выраженными и стойкими нарушениями кровоснабжения мозга о явлениями межполушарной асимметрии.

2. Исследовать влияние курсового введений цвреброкраота и этомерзола на динамику локального мозгового кровотока ■ условиях ишемии С в сравнении с кявинтонон).

3. Изумить влияние курсового введения иереброкраста и этомер-зола на биоэлектрическую активность мозга при ишемии.

4« Исследовать влияние препаратов на динамику развития и инволюцию отека нозга в условиях ишемии.

9. Изучить влияние иереброкраста и этомерзола на структуру михроциркуляторного русла коры головного мозга при ишемии и микровязкость эритроцитарных мембран. Научная новизна.

1. На адекватной модели ишемии мозга показана эффективность курсового пероральнога применения иереброкраста и этокерзола как корректоров ишемических нарушений кровоснабжения. Функциональной активности мозга при курсовом применении.

2. Продемонстрирована способность препарвтоз существенна ограничивать развитие отека-набухания мозговой ткани в условиях ишемии.

3. Выяснены нехоторые механизмы противоивемического дейотвия препаратов, реализующиеся на уровне микроциркуляиии.

Научно-поактическая значимость■ Результаты экспериментальных исследований обосновывают целесообразность Применения иереброкраста и этомерзола а качеот»» корректоров нарушений кровоснабжения и функциональной активности мозга при курсовом пэрор»льном введении а условиях ишемии. Материалы по изучению специфической активности иереброкраста направлены в Фармакологический Комитет МЭ РФ и Латвии для решения вопроса о проведении клинических испытаний препарата в качества средства профилактики и терапии цвреброваскулярных расстройств. Полученные данные по специфической активности этомерзола вошли в материалы, представленные в Фармакологический Комитет Украины о целью разрешения клинических испытаний препарата в качестве протиаоишемического средства.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всесоюзной конференции "Фармакологическая коррекция

гипоксических состояний" (Гродно, 1991), Российской конференции ■Антигипоксанты и актопротекторы: итоги и перспективы* (Санкт-Петербург, 19945, заседании Общества фармакологов Томского отде- " ления Общества фармакологов России*

ПуОлиуаииц. По теме диссертационной работы в центральный журналах, сборниках научных трудов и материалах конференций опубликовано 4 статьи. '

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 141 странице машинописного текста и состоит иэ введения, обзора литературы, описания материалов и методов, четырех глав, посвяшенних изложению и обсуждению экспериментальных данных, заключения, выводов и списка литературы. Рабата иллюстрирована 16 рисунками и 23 таблицами. Библиографический указатель аклочает 210 источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 84 крысах-самцах линии Вистар массой 250-300 гиб кошках.

В опытах на бодрствующих крысах исследовали динамику локального мозгового кровотока СЛНЮ, элактраэнцефалографическин показателей и составляющих импеданса мозговой ткани » теменной коре полушарий головного мозга.

Для количественного измерения ЛМ1С был использован метод регистрации водородного клиренса о электрохимической генерацией водорода непосредственна в зона измерения (Lubbers* 1970). Кривую клиренса регистрировали сначала в нормально перфузируемом мозге« а затем, о того же электрода, в первую минуту остановки кровотока. Мозговой кровоток рассчитывали по формула!

ЛМК » 69,3 / С1/Тп- 1/ТИГ1) мл-100 г-'мин1, где Тп и Ткп- время, за которое концентрация водород» уменьшается в 2 раза соответственно в перфузируемом и непер-фузирувмом мозге. Генерацию водорода и регистрацию кривых клиренса проводили с помощью ФБ-01 "Пульс* и графопостроителя Н306.

Для оценки отека-набухания мозговой ткани и изучения проти-воотечной активности препаратов в опытах на бодрствующих крысах нами использован метод регистрации полного сопротивления (импеданса) мозговой ткани и его составляющих. Измерения активного сопротивления и емкости проводили с помощью измерителя икгиьданса

И-2. Полное сопротивление рассчитывали по формуле!

Z = Ra-Rc / CRB + Re?. где fc - импеданс, Ra - активное сопротивление в Ом» Rc - емкостное сопротивление CRc s 1 /2У» C f} f-частста в Гц, С-емкость в Фарадах?. ^

Для объективной оценки ЭЭГ применяли метод компрессированного спектрального анализа. Перед началом регистрации животные в течении 1,3 часа привыкали к обстановке экспериментальной камеры, где производилась регистрация» после этого с помощью элекгроэнцефалографа "Эра-9" и магнитографа ■1296" итальянской фирмы "О.Т.Е. BJ.omed4.ca" записывали электрограммы« анализ кото-* рых производили по Фурье на спектроанализдторе той же фирмы о определением общей мощности спектра и амплитуды отдельных диапазонов. Эпоха анализа составляла 248 с. При количественном анализе спектр колебаний ЭЭГ разбивали на S частотным диапазонов!

дельта <0,3-4,0 кол/сек), 9- тета (4-ВЭ, ct.- альфв СВ-13), бета-1 С13-20) и бета-2 (20-32). Предметом окончательного

количественного - анализа служили средние' значения отклонений обпей мощности и мощностей отдельным диапазонов от соответствую-ющих фоновым величин.

Для регистрации ЛИК, ЭЭГ и показателей импеданса мозговой ткани животным под нембуталовым наркозом С50 мг/кг внутрибрю-еинно) в область зрительной коры головного мо?*га вживляли электроды а точку с координатами АР + 6, С-1,3, H-J. »3. (Фифкова Б.« Маршалл Дж., 1962). Для регистрации ЭЭГ использовали торцевые никромсвые электроды в заводской изоляции, для полярографии по водороду и для регистрации импеданса мозговой ткани - двойные платиновые электроды в изоляции из стекла. Индифферентный электрод (никромовый - при регистрации ЭЭГ и хлорсеребрянный -при регистрации ЛМК и показателей импеданса)имплантировали я носовые кости черепа. Через 7 дней животным брали в опыт*

Ишемию головного мозга воспроизводили под эфирным наркозом путем полной перевязки левой сснной артерии и ограничения кровотока по правой сснной артерии до 30% от исходного уровня* Контроль кровотока по сонным артериям проводили с помощью электромагнитного флоуметра MFV-1100, Nihon Kohden» Все исследуемые показатели регистрировали до» через 1 час, на 1-е, 2-е, 3-е» 4-3-е, 7-е и 10-е сутки после оперативного вмешательства. В течение в с»? к 10 суток за 1 час до регистрации изучаемым покпза гелей крысам перорально вводились препараты! этомерзол

СИнстит/т органической химии Ail Украины) в диэе 50 кг/кг и цереброкраст (Институт органического синтеза АН Латвии) а дозе 500 мкг/кг. Препараты растворяли в воде для иньекций, при растворении цереброкраота использовали твин-60. В качестве препарата сравнения при изучении влияния этомерэола и цереб-рокраста на ЛИК был использован кавинтон в дозе 5 мг/кг.

Исследование влияния этомерэола и цереброкраста на структуру микроииркуляторного русла коры головного моэга проводили на

4-5-е сутки ишемии. Сосуды на толстых срезах головного мозга з«

визуализировали по Са-аденоэинтрифосфатному методу СЧилингорян A.M., 1977).

Для оценки in vit.ro микровязкости зритроцитарных мембран у кошек под местной анестезией из бедренной вены забирали 6 мл - крови, тени эритроцитов получали по методу Dodge, Микровязкость мембран изучали с помощью флуоресцентного эонда пирена (Добре-цов Г.В., 19В9).

Статистическую обработку результатов отдельных ctjpjü экспериментов проводили с помощью t-критерия Стьюдента, Достоверность различий между сериями определяли непараметрическим критерием Вилкоксона•

ДИНАМИКА ЛОКАЛЬНОГО МОЗГОВОГО КРОВОТОКА, ПОКАЗАТЕЛЕЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ И ОТЕКА-НАБУХАНИЯ В КОРВ МОЭГА ПРИ ИШЕМИИ

При доклинической оценка новых иеребропротекторов, исследуемых в качестве перспективных корректоров нарушений кровоснабжения моэга при цереброваскулярных расстройствах, вопрос а выборе адекватной модели ишемии моэга на животных принципиально важен. Для воспроизведения основных постишемических феноменов ¿диффузного снижения мозгового кровотока, межпалуварной асимметрии кровоснабжения моэга) и оценки влияния на них исследуемых препаратов в условиях хронического эксперимента нами разработана модель ишемии мозга у крью, заключавшаяся в полной окклюзии левой сонной артерии и ограничении кровотока по правой сонной артерии до S0X от исходного уровня.

До создания ишемии у крыс ЛМК в теменной коре правого и левого полушарий составлял 2ВВ±.Ю и 2£В+.19 мл-100 г» мин*соответственно. Уже к первому часу ишемии било зарегистрировано резкое падение уровня ЛМК как на стороне полной перевязки сонной

-4 - |

артерии (левое полушарие)'до S4+.15 мл »100 г * мин (35Х от исходного уровня), так и на стороне с частичним ограничениях кроастс-

ка (правое полушарие?Э до 113+,10 мл-]00 г- ! мин (40Х от исходного уровня). Снижение уровня У1МК сохранялась в левом полушарии на протяжении 5 суток и было достоверно более выраженным по сравнению с правым полушарием. В последующие 7-10-е сутки после создания ишемии восстановление ЛМК а правом полушарии происходило достаточна полна, а в левом полушарии знамения ЛМК оставались достоверно сниженными по сравнению с исходными (рис. 1).

Таким образом, воспроизведение ишемии мозга у крыс путем полной перевязки левой сонной артерии и ограничения кровотока па правой сонной артерии до 50% от исходного уровня, сопровождалось выраженной и длительной депрессией уровня ЛПК в обоих полушариям головного мозга. Причем, несомненным достоинствам модели является возможность получать участки мозга с различной степенью ишемизации ткани, что является особенна важным при оценке действия на кровоснабжение мозга новых вазоактианых препаратов, применение которых может приводить к проявлению синдрома "внут-римозгового обкрадывания'.

Мощное снижение ЛМК и длительное сохранение его на редуцированном уровне в обоих полушриях приводило в условиях данной модели к выраженным нарушениям функциональной активности мозга по данным ЭЭГ.

flo ишемии у крыс экспериментальной группы распределение мощности отдельных диапазонов в спектрах ЭЭГ теменной коры было следующим * преимущественное распределение мощности отмечалось в диапазоне ^-активности С43-43,5Х), меньше была мощность ¿^«диапазона (76,3-26,ВХ) , о£-диапаэона( 1Э-14Х) и /jf,/^"Диапазонов (11,6-14,ВХ) (рио. 2). Ишемия мозга уже к первому часу сопровождалась выраженным падением суммарной мощности и мощностей отдельных диапазонов спектра ЭЭГ по сравнению с исходным фоном. Достоверное сниженив суммарной мощности спектра ЭЭГ было большим в левом полушарии - на 6ЭХ от исходного уровня; В правом полушарии суммарная мощность уменьшалась на 60Х от исходного уровня. Мощность диапазона в левом полушарии так же была снижена в большей степени, чем я правом. Происходило асимметричное угнетения доминирующей активности. Наблюдаемое в обоих полушариях снижение мощности ¿^-диапазона и возрастание процентной выраженности других диапазонов, сопровождаемое снижением суммарной мощности спектра ЭЭГ, иожет являтся отражением десинхрониэации ЭЭГ. А неравномерная выраженность этих явлений свидетельствует о лате-ралиээции процесса активации. К 1-м суткам ишемии к наблюдаемым

лмк. гее -

д. *

П» »У«>.Ф

Л...........;

1ЧЯС 12 3 4.-В ?

ФОН ИШЕМИЯ

й

В

10 СЧТКИ

Рис. 1. Влияние цереСрокраота (А), зтомерзола (В) и кавинтона (В) на изменения локального мозгового кровотока в твмвнной кора головного мозга крыо при ивамии. Здесь и дала« значками обозначены?

• - достоверные изкенения (Р<0,03) па сравнение о исходным фоном;

к - Р<0,03 по сравнение о группой нелеченных крыс С.......> - правое полушария

<-) - левое полуаарие )

<....,.) - правое полуаарие 1

(-

-) - левое полушарие I

нелеченные крысы

крысы, получаваие препараты

изменениям мощности в спектрах левого полушария присоединялось увеличение мелленноволновой активности ¿^-диапазона, которая согласно многочисленным данным литературы может являться маркером гипоксии (В.И.Г/сев, 1992. О.М.Гриндель, 198В). Такое состояние сохранялось на 2-е сутки ишемии и к 3-м суткам сменялось выраженной реакцией торможения, которая выявлялась наиболее четко в левом полушарии Срис. 2). В этот срок суммарная мощность

Рус. 2. Изменения мощности диапазонов спектра ЭЭГ в теменной коре правого (А? и .?«?вого (Б) полушарий головного мозга крыс при ишемии.

•оставалась сниженной на 29,7 и 44,ЗХ в правом и левом полушариям . При этом, мощность &-диапазона доминировала в обоих полушариям и по абсолютным значениям практически не отличалась от исходных, я то время как мощность в диапазоне (^-активности оставалась достоверно сниженной. На 4-3-е сутки наблюдалась максимальная выраженность асимметричности изменений е спектрограммах ЭЭГ*. Угнетение ведущего ритма и активности в области

^-диапазона левого полушария, а также увеличенный вклад ■

о

процентном отношении ¿^-активности в мощность спектрограмм обоих

полушарий были выражены и на 7-е сутки прсле ишемии. Асимметричный характер носили изменения суммарной мощности. К 10-м ,суткам ишемии суммарная мощность спектра ЭЭГ, мощность 0-, ¿-диапазонов оставалась достоверно сниженной в обоих полушариях. Вместе с тем, снижался вклад медленноволновой активности сГ-диапазона в суммарную мощность спектра ЭЭГ. Иежлолушарная асимметрия к 10-м суткам сглаживалась.

Грубые билатеральные функциональные нарушения, обнаруженные в наших экспериментах на протяжении всех 10 суток наблюдения за крысами. свидетельствуют о значительном повреждении мозговой ткани, так как, несмотря на некоторую тенденцию к восстановлению ЛНК к 7-10 суткам в правок полушарии и начавшееся увеличение ara в левом полушарии, восстановления суммарной мощности ЭЭГ не зарегистрирована ни в одном из полушарий.

Наблюдаемая в наших экспериментах в начальный период посла создания ишемии картина корковой активации соответствует, по-видимому, стадии на которой гипоксия еще не доотигаат значи-' тельной глубины и мозг а состоянии реагировать усилением возбуждения. Кроне этого, выраженная фаза десинхрониэации в начальный период гипоксии является отличительной особенностью ЗЗГ животным СГинзбург C.B., 1974). Дальнейшее снижение ЛНК в Э-Э сутки, выявленное в наших экспериментах, обусловило генерализованные изменения ЭЭГ, характеризующиеся асимметричным снижением суммарной мощности, мощности ведучего ^-диапазона, увеличением мощности (^-диапазона. Однако, проведенный нами корреляционный анализ показал отсутствие корреляции между изменениями ЛНК и изкв-нениямц выраженности мощности -, ^-диапазонов спектра ЭЭГ, что может быть связано с развитием отека мозга.

Исходные значения Z ткани мозга составляли 5,76*0,19 и ■3,77¿0,16 кОм а коре правого и левого полушарий соответственно, К первым суткам происходило формирование отека-набухания мозговой ткани. Достоверно« увеличение а левам полушарии Rа до 6,40+0,66 кОх наблюдалось параллельна а тенденцией к увеличению R^ в левам и Rc в правом полушариях. Дальнейшее углубление отека-набухания мозговой ткани зарегистрировано ко 2 суткам ишемии. Процесс был наиболее выражен а левом полушарии; Ra увеличивалось я 1,6 раза и составляло В,28^0,БЯ кОм, происходило дальнейшее падение мембранной емкости, Rcnpu этом увеличивалось да 6,3^0,53 кОм. Эти изменения закономерно вызывали рост Z а левом полу«арии Ао 9,2+0,99 кОм. Значения Ra и Rc в правом полушарии были

достоверно меньшими и составляли 6,10+0,07 и 4,70+0,27 кОн соответственно. Изменения импеданса к 3-м суткам были максимальными и проявлялись в обоих полушариях» оставаясь при этом асимметрично выраженными. Так, активное сопротивление в правом и левом полушариях составило В»9+1,7 и 10,34+0,42 кОм, емкостное -В,24+1,12 и 9,28+0,11 кОм соответственно. Общее сопротивление составляло в правом полушарии 11,87+1,30 кОм и в левом полушарии 13,45+0,20 кОм. К 3-7-м суткам наблюдалась постепенная инволюция отека, 1С 10-м суткам показатели импеданса мозговой ткани практически полностью восстанавливались, исключая Rcb правом полушарии.

Проведенный нами корреляционный анализ показал наличие тесной связи между выраженностью отека-набухания мозговой ткани и сдвигами моаности ¿'-диапазона спектра ЗЭГ. Так, в левом полушарии коэффициент корреляции между изменениями активного сопротивления и изменениями мощности ^-диапазона спектра ЗЭГ, выраженной в процентам по отношению к мошности своего полушария, был равен +0,81 СР<0,03>. Это позволяет предполагать первичный характер отека, как фактора углубляющего нарушения функций мозга при его ишемическом повреждении, во всяком случае в коре левого, наиболее страдающего в условиях используемой модели полушария.

Таким образом, модель ишемии мозга, воспроизводимая полной окклюзией левой сонной артерией и ограничением кровотока по правой сонной артерии до 30Х от исходного уровня, позволяет проследить у крыс в условиях хрониЧеркого эксперимента динамику расстройатв кровоснабжения и других физиологических показателей в острый и восстановительный период ишемии.

Разработанная нами модель имеет следующие преимущества: 1) позволяет достигнуть диффузного снижения ЛПК и асимметричного кровоснабжения правого и левого полушарий головного мозга! эта особенность модели дает возможность при анализе эффектов препаратов оценивать проявление феномена "внутри-мозгового обкрадывания"! 2? наблюдаемые нарушения со стороны показателей ЗЗГ нооят отчетливые и стойкие патологические черты и характеризуются выраженной асимметрией! 33 ишемия головного мозга сопровождается формированием отека-набухания мозга с явлениями межполуаарной асимметрии исследованных показателей импеданса мозговой ткани и постепенной и полной инволюцией к 10 суткам этого патологического процесса!

4) судя по ряду исследованных показателей» создаваемая ишемия носит глубокий и длительный характер, что позволяет проводить углубленные исследования патогенеза ишемии мозга и изучать эффективность терапевтического воздействия противоишемических средств.

ВЛИЯНИЕ ЦЕРЕБРОКРАСТА НА ЛОКАЛЬНЫЙ МОЗГОВОЙ

КРОВОТОК, ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ И ОТЕК-НАБУХАНИЕ

МОЗГОВОЙ ТКАНИ ПРИ ИШЕМИИ

Эффективность цереброкраста в качестве противоишемического

Средства оценивали при курсовом пероральном применении (300

цкг/кг>» которое начинали в первые сутки ишемии/ Оценку влияния

цереброкраста на ЛМК проводили в сравнении с широко используемым

в клинической практике препаратам - кавинтоном (3 мг/кг).

В группе животных леченных цереброкрастом исходные значения

ЛМК е правой и левой теменкой коре составляли 244+Д0 и 24б+.17

ил'ЮОг'Мин соответственно. Через час после ишемии ЛМК падал до

109 + 11 мл*Х00г - мин4 в левом полушарии и 120+30 мл*100г*мин в

правом полушарии Срис. 1А). Под влиянием иереброкраста уже в

первые сутки происходило увеличение ЛМК а правом полушарии до

210+.28 мл-ЮОг • мин,* что достоверно превосходило значение ЛМК я

контрольной группе* В левом полушарии ЛМК возрастал до 131+.2В

мл*100г • минНачиная со 2-х суток наблюдалось постепенное

восстановление ЛМК в левом полушарии. Уровень кровотока в правом

полушарии достигал исходных значений. Так, ко 2-м суткам ишемии

-1 -I

ЛМК в левом полушарии возрастал до 143+.11 мл*100г*мин, к 3-м суткам до 166+20. мл '100г - мин1, а, начиная о 4-3-х суток и до окончания эксперимента, уровень ЛМК а левом полушарии не отличался от исходных значений и был достоверно большим, чем ЛМК у полеченных животных.

В группе животных, получавших в дальнейшем кввинтон, исходные значения ЛМК составляли 267+21 и 233+29 мл«100 г «мин в правом и левом полушарии соответственно (рис. 1В). Через чво после окклюзии сонных артерий ЛМК составил в теменной коре правого и левого полушарий 121+36 и 103*20 млв100г .мин соответственно. К первым суткам после создания ишемии кавинтон увеличивал уровниь ЛМХ до 1В4+21 мл»100г»мин а левом и до 219+27 мл«100г~* мин1 в правом полушариях. При этом уровень ЛМК в левом полушарии доотоверно превышал значения ЛМК в контрольной группе

животных* Однако( ко 2-м суткам ишемии происходило повторное

-1 -I

падание ЛМК > левом полушарии до 10в+19 кл-ЮОг - мин, а в правом

полушарии ЛНК был достоверно Больший и составлял 201430

мл*100г*мин! К 3-м суткам у животных, получавших кавинтон, ЛНК в

правом полушарии еще более снижался и составлял 157+*6

мл'ЮОг • мин \ а в левом полушарии стабилизировался на уровне

117+29 мл-ЮОГ'мин . На 4-5 сутки значения кровотока в правом и

-1 -1

лаком полушариях были равны 10В+23 и 116+26 мл-100г- мин соответственно. При этом уровень ЛНК у крыс леченных кааинтоном а правом полушарии был снижен больше, чем у животных контрольной группы. К 7-м суткам наблюдалось увеличение уровня ЛИС в правом полушарии да 194.+37 мл•100г • мин и в левам полушарии до 128+23 ил'ЮОг'Мин • К 10-м суткам у крыс,- леченных кавинтоном, уровень ЛМК возрастал до 222+16 мл-ЮОг- мин в правом полушарии и до 170+.2СЗ нл-100г> мин, что совпадала о соатветствуюцими значениями ЛМК у нелеченных крыа.

Таким образам, кавинтон способствовал увеличению ЛМК в лавам полушарии только в первые сутки после создания ишемии, на ■лши> при этом на ЛИК в правом полушарии. В дальнейшем динамика изменений уровня ЛМК в группе животных, получавших кавинтон, на отличалась от изменений уровня ЛМК а группе контрольных животных.

Следовательно, по эффективности влияния .на динамику восстановления уровня ЛМК в условиях данной модели цереброкраот Превосходил препарат сравнения - кавинтон.

Изменения а спектрах мощности ЭЗГ через чао после создания иаамии головного мозга а группе крыо, получавших в дальнейшем цереброкраот, были аналогичны изменениям, наблюдавшимся у животных контрольной' группы.- Резкое падение; суммарной мощности опектрор ЗЗГ сопровождалось снижением мощности $-, в-диапазонов ■ обоих полушариях (рис. 3).

Уже после однократного применения в первые сутки ишемии иаробракраст достоверна по сравнение о контролем увеличивал мощность ¿¿^-диапазона в левом полушарии. Однако мощности этих диапазонов также, как и суммарная мочность спектров ЗЭГ в обоих полушариях оставались сниженными па отношении к исходным значениях. Ко 2-3-м суткам ишемии на фоне действия церейрокраста сохранялось доминирование ¿?-ритма, равномерна выраженное ■ обоих пслушарикк. . В эти сраки суммарная мояность спектра в левом полушарии оставалась сниженной по отношению к исходному урояню.

Рис. Э. Влияние цереброкраста на изменение мощности диапаи эонов спектра ЭЗГ в теменной коре правого <А) и левого (В> полушарий головного мозга крыс при ишемии.

однако я обоим полушариях знамения суммарной мощности Сы^ти достоверно 'большими, чем в контрольной группе. К 4-Э-м суткам вновь несколько снижалась суммарная мощность и мощность

6-диапазона в обоих полушариях, однако, 9 левом полушарии эти. показатели оставались достоверно большими , чем в контроле. 1С

7-м и последующим 10-м суткам наблюдалось практически полное восстановление суммарной мощности в обоим полушариях. Начиная а 4-3-м суток изменения показателей ЗЭГ не носили асимметричного характера, что свидетельствует о равномерном восстановлении под влиянием иереброкраота биоэлектрической активности в обоих полушариях.

Проведенный нами корреляционный анализ показал, что восстановление мощности О-диапазона спектра (по отношению к его падение в первый час ишемии), наблюдаемое в течение первых з-к суток ишемии под действием цереброкраста тесно коррелирует с восстановлением /розня ЛНК как в левом Сг*+0.94, Р<0,05>, так и в правом (г»+0,97, Р<0,05) полушариях. По-видимому, нормализация биоэлектрической активности мозга на фона цереброкраста в начальный период ишемии С1-3 сутки) связана с постепенным восстановлением кровоснабжения мозговой ткани. . Однако в дальнейшем происходило разобщение корреляции Сг<0,5) между этими показателями в обоих полушариях, что. возможно, связано с проявлением других механизмов благоприятного дайатвия препарата на функциональную активность мозга.

Высокая степень корреляции между манифестацией ^-ритма и выраженностью отека-набухания ткани мозга. полученная в контрольной серии экспериментов, позволяет предполагать, что нормализация биоэлектрической активности на фоне церебракраата в отсроченном периоде ишемии (Э-7-е сутки) может быть связана со способностью препарата препятствовать развитию отека мезга.

Действительно, проведенные нами исследования показали наличие у цереброкраста мощного протиаоатечного действия. Введение цереброкраста препятствовало росту импеданса и его составляющих на протяжении 10 суток наблюдения за животными. Достоверно значимыми были только изменения' 2 и (?з в левом полушарии ко вторым суткам ишемии^ 2. превышала исходные значения на 29X, в на 36*. В та время как в контрольной группа

животньск полное сопротивление и активное сопротивление в левом полушарии возрастали в эти сроки на Э8Х и 72Х соответственна. ,

Таким образом, курсовое введение цереброкраста (500 мкг/кг перорально ежедневна) способствует более быстрому и полному, па сравнению с кавинтоном, восстановлению уровня локального мозгового кровотока в теменной коре как левого, так и правого полушарий, нормализует биоэлектрическую активность моага, оказывая выраженный протиаоотечный эффект.

- 17 -

ВЛИЯНИЕ ЭТОМЕРЭОЛА НА ЛОКАЛЬНЫЙ МОЗГОВОЙ КРОВОТОК, ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ И ОТЕК-НАБУХАНИЕ МОЗГА ПРИ ИШЕМИИ

Исходные знамения ЛМК в теменной коре правого и левого полушарий в группе животных, получавших в последующем этомер-зол С50 мг/кг), составляли 290+В и 303+.12 мл»100г* мин 1 соответственно. К первому часу с момента создания ишемии ЛМК падал -t -1 .« -1 до llBj+17 мл-ЮОг» мин в правам и 103+21 мл*100г «мин в левом

полушариях. Применение этомерэола уже в 1-е сутки ишемии приводила к увеличению уровня ЛМК я правом полушарии до 236+12

-I -1 -1 -1

мл*100г* мин , а в левом полушарии до 232+.16 мл*100г« мин . Несмотря на то, что уровень ЛМК а обоих полушариях продолжал оставаться сниженным по сравнению с исходными значениями в этой группе животных, в левом полушарии его значения были достоверно большими, чем в контрольной группе крыс Срис. 1Б>.

На 2-е сутки после ишемии ЛМК в правом полушарии не изменялся С250+14 мЛ'ЮОг • мин Э, а в левом - увеличивался до 293+19 мл • 100г - мин при этом не было достоверных различий между значениями ЛМК в обоих полушариях. При последующем наблюдении за животными асимметрия кровоснабжения правого и левого полушарий также не наблюдались. К 3-м суткам ЛМК я левом полушарии составил 27В+ДЭ мл-ЮОг- мин , а в правом - 304+21 мл»100г*мин , что достоверно превосходит значения ЛМК в группе нелеченных животных. Начиная с 4-3-х суток и до конца эксперимента значения ЛМК как в правом, так и в левом полушариях превышали соответствующие значения в группе нелеченных крыс.

По сравнению с кавинтоном этомерзол более эффективно способствовал восстановлению уровня ЛМК. Так, ЛМК у крыс, получавших этомерзол, достоверно превосходил значения ЛМК в группе животных, леченных кавинтоном, к 3-м, 4-3-м суткам в правом полушарии и ко 2-м, 3-м, 4-3-м и 7-м оуткам ишемии а левом полушарии Срио. 1В,В). Таким образом, по эффективности влияния на кровоснабжение тквни мозга в условиях данной модели ишемии этомерзол значительно превосходил препарат сравнения - кввинтон.

В отличие от выраженного действия этомерэола на кровоснабжение мозга, влияние его на шосстановление биоэлектрической активности мозга при ишемии проявлялось а меньшей степени. В группе животных, леченных этомерэолом, исходные значения мощности отдельных диапазонов спектра ЗЭГ не отличались от тпкояых в

С

группе контрольных животных. Мощность (/-диапазона соетяви/ш

- 1а -

23.1-27.ЭХ, ¿'-диапазона - 39,6-40,ВХ, ¿-диапазона - 17.5-14Х и Рьг , ^Йд-диапазонов - 15,6-14,ЗХ в левом и правам полушариях соответственно Срио. 4). К 1-му часу ишемии также развивалось резкое снижение суммарной мощности спектра ЭЗГ, которое не .отличалось по выраженности в правам и левом полуиврияк. При этом

Рис. 4. Влияние этамерзола на изменение мощности диапазонов спектра ЗЗГ а тененной коря правого (А) и левого СБ) полушарий головного мозга крыа при ишемии.

наблюдалось падение мощности веек диапазонов спектра, исключая ^¿-диапазон а левом полушарии и «с-, /»,-, ^-диапазоны а правам полушарии. К первым суткам на фоне применения этамерэола суммарная мощность спектра ЭЭГ а обоих полушариях оставалась сниженной, причем это снижение было достоверным не только по отношению к »а*>:ости ЗЗГ каждого из полушарий, но и па отношение

¡х с/г*лг(3>-:ой иогности спектров соответствующих полушарий контра-(-T.tt.iu группы жчыотних в эти же сраки (рис. 4,2). Сниженными оставались мощности ¿)-, -диапазонов спектра как в левом, так и

в правом полушариях. Ко 2-м суткам ишемии у крыс» леченных этомерзолом, сохранялось снижение суммарной мощности спектров ЭЭГ. К 3-м суткам уменьшение суммарной мощности спектра в левом полушарии было достоверно меньшим, чем наблюдаемое падение этого показателя в контрольной группе крыс, К 4-3-м суткам в левом полушарии вновь несколько снижалась суммарная мощность спектра, мощность ^-диапазона. К 7-10-м суткам значения суммарной мощности спектра в обоим полушариях оставались сниженными по сравнению с исходным уровнем, но к10-м суткам достоверно превышали соответствующие значения в контрольной группе животных. Начиная с 3-х суток и до окончания эксперимента у крыс этой группы не было отмечено существенных изменений показателей межполушврной асимметрии.

Проведенный корреляционный анализ показал отсутствие тесной связи Сг<0,3) между степенью восстановления ЛНК и суммарного энергетического уровня спектрограмм по отношению к их первоначальному падению в первый час ишемии. По-видимому, более сильное, чем в контрольной группе падение суммарной мощности спектра ЭЭГ в первые сутки ишемии у животных, получавших этомерэол, а текже неполное восстановление этого показателя как а левом, так и в правом полушариях, наблюдаемые на фоне выраженного влияния этСмерзола на уровень ЛМ1С в обоих полушариях могут быть вызваны имеющимся у препарата депримирующим действием на ЦНС (А,С.Лосев, 1997?. Несмотря на это, этомерэол благоприятно влиял на распределение мощности спектра по отдельным диапазонам. Кроме того, у животных, леченных этгамер»олом, не няблю-далась фаза доминирования ¿'-активности в спектрам мощности ЭЭГ, что дало основание полагать наличие у препарата противоотечного действия.

Изменения показателей импеданса к 1-м суткам ишемии в этой группе животных не достигали уровня статистической значимости. Действие препарата проявлялось уже ко 2-м суткам после начал« применения. Этомерзол достоверно по сравнению с контролем предупреждал возрастание полного сопротивления в левом полушарии и препятствовал резкому росту активного сопротивления в левом полушарии. Значения Яд в этой группе животных составили 3»13*0,40 кОм по сравнению с В,20+р,ВВ кОм в группе нелеченных животных. К 3-м суткам ишемии эффект препарата проявился наиболее ярко. Полное сопротивление мозговой ткани, Ра, Г? с в левом полушарии увеличивались на 42Х» 32* и 20Х соответственно. В то вр*»мя как в

группе нелинейных животных эти показатели увеличивались на 133Х, 124Х и 137Х . Начиная с 7-х суток Сила отчетлива выражена тенденция к нормализации составляющих импеданса под действием препарата. К 10-м суткам величины составляющих импеданса в этой группе крыс в обоих полушариях не отличались от исходных значений.

Таким образам, курсовое введение этокерзада (50 мг/кг перо-ральна ежедневна) в условиям ишемии мозга, вызванной полной окклюзией левой сонной артерии и ограничением кровотока по правой санной артерии ad SOX от исходного уровня, вызывает быстрое восстановление кровоснабжения мозга, превосходя по Эффективности препарат сравнения кавинтон. Применение этомарзола способствует постепенному восстановлению биоэлектрической активности, а также тормозит развитие отека-набухания мозга.

влияние цереброкраста и зтомерзола на показатели микроциркуляцод

Одним из звеньев патогенеза различных цереброваскулярнык заболеваний являются расстройства микроциркуляции (Г.И. Мчедлиш-вили, 1989). Ведущими факторами, определяющими интенсивность микроциркуляции являются просвет капиллярного русла и деформируемость эритроцитов.

Оценку влияния этомерзола и цереброхраста на структуру микроциркуляторного русла проводили на пике реализации цвребро-протекторнага дей^вия препарата* (4-9-е сутки ишемии).

Проведенные нами исследования состояния микроциркуляторного русла в контрольной группе нелеченных животных показали значительно« уменьшение доли функционирующих капилляров в коре головного мозга при ишемии. Так, если у интактных крыо капилляры диаматром 6 мкн составляли 33,9+2,0 X, то к 4-3-м суткам ииемии их число снижалось до 17,Б+1,6 X. Сниженной была доля капилляров диаметрам 8 мкм (рис. S). Относительно неизменным оставалось количество капилляров диаметром 4 мкм, а чиоло резкосуженным капилляров диаметрам 2 мкм значительно возрастало. у интактных крыс доля капилляров такого диаметра составляла 3,9+0,9 X, а при ишемии - увеличивалась почти а 10 раз да 37,0+1,3 X. Средний диаметр капилляров при этом закономерна уменьшался - до 4,0+0,8 мкм по сравнению с 3,6+0,9 мкм у интактных крыс.

1С этану периоду ишемии у крыс, получавших цереброкрвст, доля микрососудов диаметром 2 мкм составила 11,4+1,ВХ, что в Э раза меньше, чем у нелеченных животных. Достоверно большим выло содержание сосудов диаметром б и В мкм. Средний диаметр капилляров составлял 3,1.40,1 мкм и был достоверно выша, чвм у нелеченных крыс.

В эти же сроки этомерэол также уменьшал долю резко-суженным капилляров диаметром 2 мкя до 1В,3£1,3%. Достоверно по сравнению с нелеченными животными увеличивалось содержание микрососудов диаметром 4 мкм. Это приводило к увеличению среднего диаметра капилляров до 4,6Н>,2 мкм (рис. 33.

Рис. 3. Доля капилляров различного диаметра СаХ) а структуре микрососудиотой сети у интактнык криаО), в группа животных с ишемией мозга (23 и в группам, получавшим цереброкраст (3) и этомерзол (4] на 3 сутки иаемии.

Значком • . обозначена достоверность различий СР<0,03) по сравнению о интактныни животными, * - Р<0,03 по сравнению о группой нелаченных крыс.

Благоприятное влияние иоследуемых препаратов на структуру микроциркуляторного русла может быть связано с проявляемой ими противоотечмой активностью.

При нарушении геометрии микроциркуляторного русла большое значение для восстановления кровотока в ишемизироаанной области приобретают механические оаойотва эритроцитов, прежде всего им способность К деформации, которая, а свою очередь определяется

яааткостыо эритроцитарнай «ее^ржны. Активна протекающие в ишвми-эироввнном мозга процявоы п^эяяшснаго окисления липидав привадят к нарушению структуры и повышению вязкости липиднаго Ьиолая мембран. Для изучения епаягшного влияния исследуемых препаратов - иа физико-химические свойства -эритраццтарных маябран, нами была проведена серия эксперимент?» an vitro по изучению изменений ыикроаяэкости тенай эритроцитов при активации а них процессов ПОЯ.

' Для одномоментного инициирования процессов липидной перо-

■ г*

, ксидации к суспензии таывй эритроцитов добавляли Ре в конечной -5

концентрации 10 И, что ттгпмгшиап * снижение величины с

0,4110,04 да 0,3310,07. Учитищдя, что величина 1>/1м обратно пропорциональна микрошяакосги. наблюдаемое снижения Ij/Ii* свидетельствует об увеличении ««ижроежзкости зон сорбции пирена. Предварительная инкубация теей зарстроцитов с церебракрастох СЮ И) вызывала достоверно ibmii hi в в снижения Ij/1ц лишь до 0,3710,01. Инкубация теней эритроцитов в зтонерзолом С10 при последующем индуцировании липидной парокпидации также приводила к достоверна меньшему снижению 1«/1м до ©,3910,02. По-видимому, проявляя антиокислитяльные свойства СГ.Я.Дубур, 19В7, А.Д.Дурнее, 1991), препараты препятствует умяяяи» вязкости мембран эритроцитов! что способствует ограничат ibi расстройств деформируемости.

Таким образом, применение чареброкраста и этомврзада нажат способствовать норма низа mm «ровоснабжанин ткани мозга при ивемии как аа .. счет Сдагижушятного влияния фэепаратоя на структуру микросоСудистаго рун да. так и за счет снижения вязкости эритроцитарных мембран.

вчтди

1. Разработана мгшепь швамии мозга у бодрствующих крыс, воспроизводимая о помояьа полной окклюзии лавой сонной артерии \4 ограничения кровотока па газовой санной артерии до 30* от исходного уровня. Достигаема* на этой модели снижение локального мозгового кровотока и маруюения ЗЗГ носят стойкий характер о явлениями межполу «арной вппямятрией. Ишемия . головного мозга сопровождается формирование« атака-набухания мозговой ткани a последующей его инволюцией. 8 коре головкаго мозга уменьшается количества функционирующих гяпчл дяров и снижается средний диаметр капилляров.

2. Курсовое введения «вря&рокраота (S00 нкг/кг) и это-

мерзола С50 мг/кг) вызывает раннее восстановление локального кровотока в коре обоих полушарий, сглаживание явлений меж-полушарной асимметрии кровоснабжения мозга. По выраженности и * стойкости влияния на кровоснабжение мозга препараты превосходили кавинтон.

3. Курсовое введение цереброкраста и этомерэола приводит к нормализации биоэлектрической активности моэга! восстанавливает суммарную мощность ЭЭГ, мощность доминирующей Р-активности, подавляет мощность медленноволновой ^-активности, ослабляет меж-полушарную асимметрию ЭЭГ. иереброкраст проявляет более раннее и выраженное влияние на биоэлектрическую активность мезга по сравнению с этомерэолсм.

4. Курсовое введение цереброкраста и этомерзола существенно ограничивает скорость нарастания и выраженность отека-набухания мозговой ткани и ускоряет его инволюцию.

3, Церебракраст и этокерзал улучшают состояние микро-циркуляторного русла коры головного мозга при ишемии! увеличивают средний диаметр капилляров, уменьшают число резкосуженных и увеличивают количество функционирующих капилляров.

6. Цереброкраст и этомерзол ограничивают возрастание микровязкости мембран эритроцитов в условиях активации липидной лероксидации.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Механизм предупреждения этомерзолом нарушения деформируемости эритроцитов // Фармакология и токсикология.- 1992.- К4.-

с.21-33. / Совят.! Т.М. Плотникова, H.H. Фирсов.

2. Ослабление этомерзолом нарушений мозгового кровотока и выраженности отека-набухания мозговой ткани при хронической ишемии // 5юлл. Томского научного центра АМН СССР.- 1991, вып. 4.- о.68-74. / Соавт»: М.В.Плотников, В.И.Лаптев.'

3. Цэреброкреет как корректор нарушений мозгового кровотока и отека мозга при хронической ишемии // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов.- Томск, 1993.- т. б.- с. 16-19.

4. Церебропротекторная активность этомерзола и цереброкраста при хронической ишемии головного мозга / Материалы Российской конференции ■Антигипаксамты и вктапратекторы! итоги, и перспективы".- Санкт-Петербург, 1994.