Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Церебропротекторные эффекты нооглютила при ишемии мозга

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ТОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАКОЛОГИИ

л *>

V 1 л

о тлп 1007

- М|У/| иа» На правах рукописи

АЛИЕВ ОЛЕГ ИБРАГИМОВИЧ ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОРНЫЕ ЭФФЕКТЫ НООГЛЮТИЛА ПРИ ИШЕМИЙ МОЗГА

14.00.25 - Фармакология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Томск - 1997

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте фармакологии

ТНЦ РАМН

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор М.Б. Плотников

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

А.И. Венгеровский кандидат биологических наук Т.А. Замощина

Ведущее учреждение: Научно-исследовательский институт кардиологии ТНЦ РАМН

Защита состоится "_"_1997 года в _ часов на заседании

специализированного совета К 001.33.01 при НИИ фармакологии ТНЦ РАМН по адресу: 634028, г. Томск, пр. Ленина, 3. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ фармакологии ТНЦ РАМН.

Автореферат разослан "_''_1997 года

Учёный секретарь специализированного совета,

кандидат медицинских наук Е.Н. Амосова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Лечение цереброваскулярных расстройств является одной из наиболее актуальных задач медицины в настоящее время. Повышенное внимание к нарушениям церебральной гемодинамики объясняется их широкой распространённостью, тяжестью течения, частой инвалпдшаццей н высокой легальностью, что и определяет большую социальную н медицинскую значимость проблемы нарушений мозгового кровообращения.

Особое место в этом ряду занимает ишемический инсульт -частое и очень тяжёлое по своим последствиям заболевание. Во всём мире частота инсультов составляет в среднем 170 случаев на 100000 человек. В развитых странах острый ишемический инсульт является третьей по значимости причиной в структуре общей смертности населения (О, Везяоп, 1991). Однако в настоящее время не существует специфической лекарственной терапии, способствующей сннженшо смертности: и эффективному восстановлению больных после случаев ишемического инсульта, эффективность которой доказана в

контролируемых клинических исследованиях (Р. 8ап<1егсоск, 1992).

В связи с этим важным направлением современной фармакологии является поиск новых соединений для патогенетически обоснованной терапии нарушений мозгового кровообращения. Значительный интерес в этом отношении представляют препараты из группы антигнпоксантов, обладающие широким спектром фармакологической активности. Антипгпоксанты способны увеличивать мозговой кровоток, улучшать отдачу гемоглобином кислорода, влиять на процессы перекисного окисления липидов. Соединения из данной группы применяются при гипоксических состояниях головного мозга различной этиологии.

Веществами, представляющими интерес в качестве корректоров при ишемпческом повреждении мозговой ткани являются производные из группы З-оксипиридинов. Работы, проведённые в НИИ фармакологии РАМН (Москва), выявили в ряду соединений, сочетающих структуру оксипиридина и нейроактивных аминокислот, вещество с выраженной ноотропной и противогипоксической активностью - нооглютил и могут служить основанием для исследования эффективности действия препарата в условиях длительной ишемии мозга и изучения механизмов его церебропротекторного действия (Т.А. Воронина, 1990).

Цель работы. Изучение эффективности нооглютила в качестве корректора функциональной активности головного мозга, локального мозгового кровотока и отёка-набухания ткани мозга при длительной ишемии и исследование механизмов церебропротекторного действия препарата.

Задачи исследования. 1. Изучить влияние нооглютила на мозговое кровообращение:

а) изучить действие курсового введения нооглютила на локальный мозговой кровоток теменной коры головного мозга крыс в условиях ишемии;

б) исследовать влияние препарата на структуру мшсроциркуля-торного русла коры головного мозга при ишемии;

в) оценить влияние нооглютила на системное артериальное давление и объёмную скорость общего мозгового кровотока.

2. Изучить действие препарата на динамику развития отёка мозга в условиях ишемии и влияние на процессы перекисного окисления липидов.

3. Исследовать влияние нооглютила на биоэлектрическую активность головного мозга при ишемии.

4. Изучить влияние препарата на агрегацию эритроцитов и тромбоцитов, антиагрегантную активность сосудистой стенки, кисло-родтранспортную функцию и показатели кислотно-щелочного равновесия крови.

Научная новизна.

1. Показана эффективность курсового введения нооглютила как корректора ишемических нарушений кровоснабжения головного мозга.

2. Выявлена способность препарата ограничивать развитие отёка-набухания мозговой ткани и препятствовать чрезмерной активации процессов перекисного окисления липидов при ишемии.

3. Показана способность препарата сохранять биоэлектрическую активность головного мозга в условиях его длительной ишемии.

4. Показано улучшение под действием нооглютила кислород-транспортной функции крови за счёт ослабления сродства гемоглобина к кислороду.

Научно-практическая значимость. Результаты экспериментальных исследований обосновывают целесообразность использования нооглютила в качестве корректора нарушений кровоснабжения мозга и функциональной активности при курсовом введении в условиях ишемии.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены на юбилейной конференции, посвященной 10-летию НИИ фармакологии ТНЦ РАМН (Томск,1994), I Съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград, 1995), И-м Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1995 ), научной итоговой конференции НИИФ ТНЦ РАМН (Томск, 1996).

Объём и структура работы. Материалы диссертации изложены на 98 страницах и содержат 18 таблиц и 4 рисунка. Диссертация состоит из следующих разделов: общей характеристики работы, обзора литературы, главы материалы и методы, 4-х глав экспериментальных исследований, заключения, выводов, списка цитируемой литературы, включаю-

щего 92 отечественных источника и 57 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Работа выполнена на 160 крысах самцах линии Вистар массой 200-300 граммов.

Эксперименты по оценке динамики локального мозгового кровотока, измерению составляющих импеданса ткани мозга и электроэнцефалографических показателей в теменной коре полушарий головного мозга проводились на бодрствующих животных.

Для количественного измерения локального мозгового кровотока использовали методику водородного клиренса с электрохимической генерацией водорода непосредственно в зоне измерения (D. Lubbers, 1970). Кривую клиренса регистрировали в нормально перфузируемом мозге, а затем, с того же электрода, в первую минуту после остановки кровотока. Мозговой кровоток рассчитывали по формуле:

м о

ЛМК= 69,3

\.Тп Тн ш

где Тп и Тнп - время, за которое концентрация водорода уменьшается в 2 раза соответственно в перфузируемом и неперфузируемом мозге. Генерацию водорода и регистрацию кривых клиренса проводили с помощью физноблока ФБ-01 ''Пульс" и графопостроителя Н306.

Для оценки динамики отёка-набухания ткани мозга и изучения противоотёчной активности препарата на бодрствующих крысах использовали метод регистрации полного сопротивления (импеданса) мозговой ткани и его составляющих. Измерение активного сопротивления и ёмкости проводили с помощью измерителя импеданса И-2. Полное сопротивление рассчитывали по формуле:

ъ _ 11а ■ Б-с

(Да+Кс)

где Ъ- импеданс, Ла - активное сопротивление в Ом, Кс - ёмкостное сопротивление, рассчитываемое по формуле: 11с= —-—, Г - частота в гер-

2пГС

цах, С - ёмкость в фарадах.

Для оценки ЭЭГ применяли метод компрессированного спектрального анализа. Регистрацию ЭЭГ проводили монополярным способом. Электрограммы записывали с помощью электроэнцефалографа "Эра-9" и магнитографа "1296" фирмы "ОТЕ-ВютесИса". Фурье-анализ проводили на спектроанализаторе той же фирмы. Определяли общую мощность спектра и амплитуды отдельных диапазонов, эпоха анализа составляла 248 с. При количественном анализе спектр колебаний ЭЭГ

разбивали на 5 исходных диапазонов: 6 - дельта (0,5 - 4,0 колебаний в секунду), в - тета (4,0 - 8,0), а - альфа (8 -13), ßi - бета-1 (13 - 20) и ßi -бета-2 (20 - 32). Предметом окончательного анализа служили средние значения отклонения общей мощности и мощностей отдельных диапазонов от соответствующих исходных величин.

Для регистрации ЛМК, ЭЭГ и показателей импеданса мозговой ткани животным под этаминаловым наркозом (50 мг/кг внутрибрюшин-но) в область зрительной коры головного мозга вживляли электроды в точки с координатами АР - +6, D и S - 1,5 , Н - 1,5 (Е. Фифкова, Дж. Маршалл, 1962). Для регистрации ЭЭГ использовали нихромовые электроды в заводской изоляции, для полярографии по водороду и для регистрации показателей импеданса ткани мозга - двойные платиновые электроды в стеклянной изоляции. Электрод сравнения (хлорсеребряный - при регистрации ЛМК и импеданса, нихромовый - при регистрации ЭЭГ) имплантировали в носовые кости. Через 5 суток животных брали в эксперимент.

Хроническую ишемию воспроизводили под эфирным наркозом путём полной перевязки левой сонной артерии и ограничения кровотока по правой сонной артерии до 50 % от исходного уровня. Контроль кровотока по сонным артериям проводили с помощью электромагнитного расходомера крови MFV-1100 (Nihon Kohden, Japan). Все исследуемые показатели регистрировали до, на 1-е, 2-е, 4-5-е, 7-е и 10-е сутки после создания ишемии. Препарат вводили в течение 10 суток внутрижелудоч-но в дозе 25 мг/кг за 1 час до регистрации показателей.

Действие нооглютила на системное артериальное давление (САД) и общий мозговой кровоток изучали в серии экспериментов с одновременной регистрацией давления крови в правой общей сонной артерии и кровотока через левую общую сонную артерию. Давление регистрировали с помощью датчика ДДА полиграфа "Салют". Кровоток через сонную артерию измеряли электромагнитным расходомером MFV-1100 (Nihon Kohden). Графическую регистрацию показателей осуществляли на самописцах КСП-4.

Эксперименты по оценке влияния нооглютила на микроцирку-ляторное русло проводили на 4-5-е сутки ишемии. Сосуды на толстых срезах головного мозга визуализировали по Са2+ - аденозинтрифосфат-ному методу (A.M. Чилингорян, 1977).

Исследование влияния нооглютила на обратимую агрегацию эритроцитов проводили с использованием вибрационного фотометрического метода.

Действие нооглютила на агрегацию тромбоцитов изучали по методу Born. В качестве индуктора агрегации использовали АДФ в концентрации 10'4 М и 10"5 М.

Для исследования действие нооглютнла на антнагрегантную активность сосудистой стенки шжубировали фрагмент брюшной аорты массой 2-3 мг в богатой тромбоцитами плазме с оценкой степени ннги-бирсвания агрегации тромбоцитов по сравнению с исходным фоном.

Антиокислительную активность нооглютнла исследовали на модели острой транзпторной ишемии мозга. Лиинды выделил по методу J. Folch. Содержание диеновых конъюгатов определяли по характерно:*!)' для сопряжённых двойных связей типу поглощения при 232 нм. Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре 'Hitachi-557" при 232 нм против смеси гептан-изопропранолол. Показатель диеновых конъюгатов рассчитывали в единицах оптической плотности на 1 мг липидов (ОШзг/мг липидов). Основания Шиффа определяли по методу A. Tappel. Флюоресценцию хлороформного экстракта липидов замеряли на спектрофотометре "Hitachi-850" ирг: возбуждении на длине волны 420 нм и эмиссии 360 нм с фильтром 390 нм. Содержание оснований Шиффа рассчитывали в относительных единицах на 1 мг липидов (ОЕ/мг липидов).

Для оценки влияния препарата на связывание гемоглобина (НЪ) с кислородом использовали метод, который заключается в оценке с помощью окснгемометра OS'S 1-1 (Radiometer, Copenhagen) величины НЬОг в пробах крови после насыщения их газовой смесью, содержащей 4% Ог. 5% СО: и 91% N2. Psc получали рассчётаым путём с использованием значений НЮг. Содержание в пробах крови гемоглобина, Р02, Рсог. рИ. уровень бикарбоната (НСО;), общую углекислоту (Тсог), показатели избытка оснований (ABE и SBE) определяли с помощью кислотно-щелочной лаборатории ABL-4 (Radiometer, Copenhagen).

Транзиторную ишемию головного мозга создавали окклюзией общих сонных артерий. Через 1 час кровоток восстанавливали снятием лигатур. Животных брали .в эксперимент на 30 мин рециркуляции.

Статистическую обработку результатов отдельных серий экспериментов проводили с помощью t-критерия Стьюдекта, Достоверность различий между сериями определяли по непараметрическому критерию Внлкоксона-Манна-Уигни,

ВЛИЯНИЕ НООГЛЮТНЛА НА ЛОКАЛЬНЫЙ МОЗГОВОЙ КРОВ ОТОК И СТРУКТУРУ МИКРОЦИРКУЛЯТОРНОГО РУСЛА ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ ИШЕМИИ ГОЛОВНОГО .МОЗГА В работе использовали модель острой длительной ишемии головного мозга, разработанную в лаборатории фармакологии кровообращения НИИ фармакологии ТНЦ РАМН. Эта модель, заключается в полной окклюзии одной сонной артерии и ограничении на 50% кровотока по другой сонной артерии и позволяет воспроизвести основные характерные для реальных клинических условий посгишемические феномены:

диффузное снижение кровотока и межполушарную асимметрию кровоснабжения головного мозга.

В контрольной группе животных исходные значения ЛМК составили 288±10 мл-ЮОг^-мин"1 и 268+19 мл-ШОг ^мнн1 соответственно в теменной коре правого и левого полушарий. На первые сутки после создания ишемии происходило резкое падение локального кровотока в обоих полушариях. Справа уровень ЛМК снизился на 39% и составил 175+15 мл-ЮОг-Ишн1, Слева, со стороны полной перевязки сонной артерии, снижение кровотока было более выраженным. Уровень ЛМК понизился на 65% и составил 94±21 млТООг-'-мин-1, что достоверно меньше, чем в правом полушарии. Сниженный уровень ЛМК сохранялся на протяжении 5-и суток, причём уровень кровотока в левом полушарии был достоверно меньшим, чем в правом полушарии головного мозга. К 7-м суткам ишемии начиналось восстановление локального мозгового кровотока. Уровень ЛМК возрастал как в правом, так и в левом полушариях, но оставался достоверно меньшим, чем до создания ишемии. На 10-е сутки продолжался процесс нормализации ЛМК: в теменной коре правого полушария кровоток составил 241120 мл-ЮОг-'-мшг1 и достоверно не отличался от исходной величины. В левом полушарии уровень ЛМК увеличился до 203±16 мл-ЮОг'-мин-!, однако оставался достоверно меньшим, чем до ишемии (рис. 1).

Таким образом, окклюзия левой сонной артерии и ограничение на 50% кровотока по правой сонной артерии у крыс линии Вистар приводит к резкому падению ЛМК и развитию асимметрии кровоснабжения полушарий головного мозга. Максимальные изменения наступают на 3-5 сутки после создания ишемии. Начиная с 7-х суток, идёт восстановление локального мозгового кровотока и исчезает межполушарная разница кровоснабжения мозга, однако и к 10-м суткам локальный кровоток не достигает исходных значений со стороны наиболее страдающего полушария.

Исходные значения кровотока в теменной коре правого и левого полушарий в опытной группе крыс составляли 270±12 и 262±10 мл - ЮОг-1 ■ мин1 соответственно. Курсовое введение нооглютила (25 мг/кг ежедневно за 1 час до измерения ЛМК) предупреждало резкое падение локального кровотока, В первые сутки ишемии кровоток составил 221117 и 209112 мл-ЮОг1 -мни1 в правом и левом полушариях соответственно, причём уровень кровотока в левом полушарии был достоверно выше, чем в контрольной группе животных. На вторые сутки ишемии происходило дальнейшее снижение кровотока, как в правом, так и в левом полушариях, В последующий период наблюдения снижения уровня кровоснабжения мозга не наблюдалось. Так, на 3-й сутки ишемии ЛМК составил 196+17 и 158119 мл-ЮОг1 -мин-1 соответственно в правом и левом полушариях головного мозга. На 4-7-е сутки ишемии проявлялась тенденция к нормализации кровоснабжения мозга, в большей степени выраженная со стороны левого, наиболее страдающего при данной мо-

мл-ШОг-кмшг1

ишемии

Рис. 1. Динамика локального мозгового кровотока в теменной коре головного мозга крыс в контроле и под воздействием нооглюти-ла при ишемии

----------------------контроль

-О-

п

-о-

нооглютил правое полушарие левое полушарие

Р<0,05 по сравнению с исходными значениями

Р<0.05 по сравнению с контролем

дели ишемии, полушария, Так, на 4-5 сутки ЛЫК был равен 183+12 и 150+15 мл-ЮОг-1-мин-1, а к 7-м суткам увеличивался уже до 236±19 и 218±13 мл-ЮОг4-мин-1 в правом и левом полушариях соответственно. На 10-е сутки после создания ишемии головного мозга локальный кровоток в этой группе животных восстанавливался полностью и составлял в правом полушарии 263±1б мл- ЮОг1-мин-1, а в левом 269+10 мл - ЮОг1 •мин-1 (рис. 1). У крыс, получавших нооглютил, на протяжении всех 10 суток наблюдения за животными не развивалось асимметрии в кровоснабжении правого и левого полушарий головного мозга.

Важным звеном патогенеза различных цереброваекулярных заболеваний является расстройство микроциркуляцин. Учитывая, что просвет капиллярного русла является одним из ведущих факторов, определяющих интенсивность локального кровотока, нами проведено исследование микроциркуляторного русла коры головного мозга у крыс на 4-е сутки ишемии.

У интактных крыс максимальным было число капилляров диаметром 4 мкм, их доля в структуре микроциркуляторного русла составила 42,5±5,4%. Несколько меньшим было количество капилляров диаметром 6 мкм (33,9+2,0%). Число мнкрососудов диаметром 8 мкм составило 15,2±2,3%. Минимальным было количество капилляров размером 10 мкм (5,8±1,8%) и 2 мкм (3,9±0,9%). Средний диаметр капилляров в этой группе животных составил 5,6±0,9 мкм (рис. 2).

Проведенные нами исследования состояния микроциркуляторного русла в контрольной группе нелеченных животных показали значительное изменение соотношения капилляров различных диаметров в коре головного мозга на 4-е сутки в условиях выбранной модели ишемии. Значительно, почти в 10 раз, возрастала доля нефункционирующих капилляров. Относительно неизменным осталось число капилляров диаметром 4 мкм (38,3±1,5%). Количество капилляров диаметром 6 мкм снизилось до 17,6±1,6%. а число капилляров размером 8 мкм до 4,7+1,1%. Доля капилляров диаметром 10 мкм, хотя и уменьшилась до 2,3+0,5%, но достоверно не отличалась от величины данного показателя у интактных животных. Средний диаметр капилляров при этом закономерно уменьшался до 4,0+0,2 мкм (рис. 2).

При изучении сосудов микроциркуляторного русла на фоне применения нооглютила было показано, что препарат при курсовом введении приводил к менее выраженным изменениям в соотношении капилляров различного диаметра на 4-5-е сутки ишемии. У крыс, получавших нооглютил, доля капилляров диаметром 2 мкм составила 20,9+1,9%, что в 1,7 раза меньше, чем у нелеченных животных. Наблюдалось увеличение до 24,5+2,1% числа капилляров диаметром 6 мкм, однако изменения показателя не достигали необходимого уровня значимости (0,05<Р<0,1), Достоверно большим, чем при ишемии, была доля микро-

%

45 у йО 35 -30-25 20 15 -10 -5 -0

Ингакшьв живогнье

а=4,8#

Пиемия

□ 2мкм ЕМмкм ЕЗбмкм 18мкм

□ 10 мш

Ностлюпш

Рис. 2. Влияние нооглютила на средний диаметр капилляров в коре головного мозга крыс и их распределение при ишемии

И:

- достоверное различие по сравнению с интактными животными # - достоверное различие по сравнению с ишемией

сосудов диаметром 8 мкм (10,9±1,9%). Доля капилляров диаметром 4 мкм (40,0+2,2%) и 10 мкм (4,1 ±0,8%) не изменилась, как по сравнению с группой ишемизированных животных, так и по отношению к группе крыс без ишемии. Средний диаметр капилляров при этом увеличивался до 4,8+0,2 мкм, что достоверно выше, чем у ишемизированных животных (рис. 2). По-видимому, увеличение под действием нооглютила количества микрососудов диаметром 6 и 8 мкм, вносящих основной вклад в общий просвет капилляров мозга и значимое снижение числа резкосуженных капилляров обеспечивает более высокий уровень локального мозгового кровотока на 4-5-е сутки ишемии.

Таким образом, нооппотил при курсовом введении способствует более быстрому и полному восстановлению уровня локального мозгового кровотока в теменной коре как правого, так и левого полушарий, а так же предупреждает развитие грубых нарушений структуры микроцпр-куляторного русла коры головного мозга при длительной ишемии.

Одним из наиболее вероятных механизмов увеличения кровотока и расширения капилляров нооглютилом в условиях ишемии мозга, может являться снижение препаратом тонуса сосудов головного мозга. Для анализа возможного избирательного вазодилятаторного действия нооглютила на церебральный кровоток проведена отдельная серия экспериментов по регистрации кровотока через общую сонную артерию с одновременной регистрацией системного артериального давления у наркотизированных крыс.

Исходное значение кровотока через общую сонную артерию составило 5,9+0,6 мл/мин, а величина системного артериального давления 110±7 мм рт.ст. Внутрибрюшинное введение нооглютила в дозе 50 мг/кг не оказало влияния на уровень САД и кровоток через сонную артерию. В течение первого часа наблюдения показатели практически не изменялись и к 60 минуте кровоток составил 5,7±0,7 мл/мин, а артериальное давление - 112+8 мм рт. ст. К окончанию периода наблюдения (120 минут после введения препарата) величина кровотока через сонную артерию достигала 6,3+1,1 мл/мин, уровень САД составил 107±7 мм рт.ст.

Полученные данные дают возможность предполагать отсутствие прямого влияния препарата на тонус сосудов головного мозга и вклада этих эффектов в противоишемическую активность нооглютила.

ПРОТИВООТЕЧНОЕ И АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЕ ДЕЙСТВИЕ НООГЛЮТИЛА

Способность нооглютила, в условиях ишемии, предотвращать грубые нарушения структуры микроциркуляторного русла и отсутствие выраженного воздействия на тонус сосудов головного мозга, позволяют предположить наличие в спектре фармакологической активности препарата противоотёчного эффекта.

Для изучения противоотёчного действия иооглютила нами проведена серия экспериментов по регистрации импеданса и его составляющих в коре головного мозга на ранее описанной модели ишемии.

В группе животных, которым создавали ишемию головного мозга, исходные значения общего сопротивления Ъ ткани мозга составляли 2,76+0,35 и 2,92±0,3б кОм в правом и левом полушариях соответственно. К первым суткам ишемии начиналось формирование отёка-набухания мозговой ткани: 11а достоверно возросло до 6,38±0,84 кОм в левом полушарии, одновременно наблюдалось увеличение и однако эти изменения не достигали необходимого уровня статистической значимости. На 3-й сутки ишемии наблюдалось дальнейшее прогрессирование отёка мозга. Изменения импеданса в эти сроки были максимальными и проявлялись в обоих полушариях. Более, чем в два раза возрастало активное сопротивление. Выраженные изменения наблюдались и со стороны Ис. Емкостная составляющая импеданса увеличивалась на 189% в правом полушарии и 206% в левом полушарии головного мозга. В течении 4-5-х суток после создания ишемии показатели импеданса и его составляющих практически не изменялись. К 7-м суткам ишемии происходило снижение как активного, так и ёмкостного сопротивлений. Иа уменьшалось до 6,63+1.74 кОм в правом полушарии и до 6,42±1,48 кОм в левом полушарии. Значение Ис составило 13,87±1,69 и 14,38±2,05 кОм в правом и левом полушариях соответственно. Эти изменения свидетельствуют о начале процесса инволюции отёка-набухания ткани мозга. На 10-е сутки ишемии показатели импеданса мозговой ткани и его составляющих оставались повышенными, однако достоверно не отличались от исходных значений, за исключением 11с в левом полушарии (рис. 3).

Нооглютил при курсовом введении в дозе 25 мг/кг оказывал выраженное протнвоотёчное действие в условиях ишемии головного мозга. Так, на первые сутки после создания ишемии показатели импеданса ткани мозга и его составляющих не изменились по отношению к исходным значениям, причём 11а в левом полушарии было достоверно меньшим, чем в контрольной группе животных. К 3-м суткам ишемии эффект препарата проявлялся наиболее ярко. Наблюдаемые в этот период изменения Кс К а и Ъ не достигали уровня статистической значимости и исследуемые параметры достоверно не отличались от исходных значений. На 4-5-е сутки ишемии в группе крыс, получавших нооглютил, активное сопротивление составило 5,51±0,49 и 5,01+0,31 кОм в правом и левом полушариях соответственно, что достоверно ниже, чем у контрольных животных и статистически значимо не отличается от исходных значений. Яо возрастало на 48% в правом и на 45% в левом полуша-

Ъ, кОм

До

ишемии

3 5

Ишемия

Яа, кОм

До 1 ишемии

Кс, кОм

3 5

Ишемия

До 1

ишемии

3 5

Ишемнп

сутки

сутки

Рис.3 Динамика импеданса, активного и ёмкостного сопротивлений в теменной коре головного мозга крыс в контроле и под воздействием нооглютила при ишемии

----------- контроль

- нооглютнл

правое полушарие левое полушарие

Р<0,05 по сравнению с исходными значениями

Р<0,05 по сравнению с контролем

-О-

риях, однако оставалось меньшим, чем у нелеченных животных. Достоверное по отношению к исходным значениям повышение Ъ в эти сроки до 3,88+0,37 и 3,59±0,31 кОм в правом и левом полушариях соответственно. наблюдалось за счёт увеличенного ёмкостного сопротивления. К 7-10-м суткам происходило дальнейшее восстановление всех исследуемых показателей и не наблюдалось статистически значимых различий с исходными значениями (рис. 3).

Таким образом, нооглютил в условиях выбранной модели ишемии мозга препятствовал формированию отёка-набухания мозговой ткани. В течении всего периода наблюдения не выявлено достоверного изменения объёма внеклеточных пространств. Препарат проявлял выраженное цитопрогективное действие, что проявлялось в сохранении ёмкостных свойств мембран, которые были лишь незначительно изменены на 4-5-е сутки ишемии.

В образовании отёка мозга при ишемии значительное участие играют процессы липидной пероксидации, которые являются важным повреждающим фактором для клеточных мембран при ишемии-гипоксии мозговой ткани. В связи с этим нами исследована антиокислительная активность нооглютнла на модели острой транзиторной ишемии головного мозга, вызванной 30-и минутной перевязкой обеих сонных артерий. Содержание в мозговой ткани диеновых конъюгатов и оснований Шиф-фа определяли на 30-й минуте рециркуляции.

В наших экспериментах ишемия и последующая реперфузия приводили к активации процессов липидной пероксидации в головном мозге. В контрольной группе животных к 30-й минуте рециркуляции выявлено резкое и достоверное повышение содержания в мозговой ткани продуктов перекисного окисления липидов. Так, уровень диеновых конъюгатов увеличивался с 0,052+0,014 до 0,136±0,011 ОШзг/мг липидов, оснований Шиффа с 0,037+0,006 до 0,082+0,014 ОЕ/мг липидов. В то же время у животных, предварительно получавших нооглютил, активность процессов перекисного окисления была ниже, чем у контрольных животных. Наблюдаюсь снижение концентрации диеновых конъюгатов до 0,112+0,015 ОШзг/мг, которое однако не достигало уровня необходимой статистической значимости (0,05<Р<0,1). Более выраженным было действие нооглютнла на образование конечных продуктов ПОЛ: содержание основании Шиффа в этот период было достоверно ниже, чем в контроле и составляло 0,045±0,005 ОЕ/мг липидов, что статистически достоверно не отличается от исходных значений.

ВЛИЯНИЕ НООГЛЮТИЛА НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ГОЛОВНОГО МОЗГА

Значительное снижение локального мозгового кровотока, длительное сохранение его на редуцированном уровне, развитие отёка-набу-

хания в обоих полушариях приводило в условиях данной модели к выраженным нарушениям функциональной активности головного мозга по данным электроэнцефалографии.

В контрольной группе животных исходные значения мощности отдельных диапазонов спектра ЭЭГ были следующими: 5-диапазон - 26,3 и 26,8%, ©-диапазон - 43,0 и 43,5%, а-диапазон - 13,3 и 14,3%, Р1- и Рг-диапазоны -11,6% и 14,8% в левой и правой теменной коре соответственно.

К 1-м суткам ишемии наблюд&тось достоверное асимметрично выраженное угнетение основного ритма и увеличение относительного вклада З-диапазона в суммарную мощность спектров как левого, так и правого полушарий, что, согласно многочисленным данным литературы, может являться маркёром гипоксии. Такое состояние сохранялось на вторые сутки ишемии и к третьим суткам развивалась выраженная реакция торможения, которая выявлялась наиболее чётко в левом полушарии. В этот срок суммарная мощность была сниженной на 29,7% и 44,5% соответственно в теменной коре правого и левого полушарий. При этом, мощность б-диапазона доминировала в обоих полушариях и по абсолютным значениям практически не отличалась от исходных величин. На 4-5-е сутки ишемии наблюдалась максимальная выраженность асимметричности изменений в спектрограммах ЭЭГ. Угнетение ведущего ритма и активности в области а-дпапазона левого полушария, а также увеличенный вклад в процентном отношении 5-активностн в мощность спектрограмм обоих полушарий были выражены и на 7-е сутки после создания ишемии. К 10 суткам наблюдения суммарная мощность спектра ЭЭГ, §-, ©- и Дв-диапазонов оставалась достоверно сниженной в обоих полушариях. Вместе с тем, снижался вклад медленноволновой активности 5-диапазона в суммарную мощность спектра ЭЭГ. Межполушарная асимметрия к 10 суткам сглаживалась (рис. 4).

Грубые билатеральные функциональные нарушения, обнаруженные в наших экспериментах на протяжении всех 10 суток наблюдения за крысами, свидетельствуют о значительном и стойком нарушении функциональной активности головного мозга, так как, несмотря на некоторую тенденцию к восстановлению ЛМК к 7-10 суткам в правом полушарии и начавшееся его увеличение в левом полушарии, восстановление суммарной мощности ЭЭГ не зарегистрировано ни в одном из полушарий.

В группе животных, получавших нооглютил, исходные значения мощности отдельных диапазонов спектра ЭЭГ значимо не отличались от исходных показателей в контрольной группе крыс и составили: 5-диапазон - 26,3% и 26,5%, ©-диапазон - 43,5% и 41,1%, а-диапазон - 13,8% и 13,3%, Р-диапазон - 16,0% и 13,5% в теменной коре правого и левого полушарий соответственно (рнс. 4).

Левое полушарие Правое полушарие

Левое полушарие Правое полушарие

Рис, 4. Изменение мощности диапазонов спектра ЭЭГ в теменной коре головного мозга у крыс в контроле и под воздействием нооглю-тила при ишемии

Уже после однократного применения нооглютил в первые сутки ишемии достоверно по сравнению с контролем увеличивал мощность ©-, Дв-диапазонов частот и суммарную мощность ЭЭГ в левом полушарии, причём мощность узкополосной части ведущего диапазона статистически значимо не отличалась от исходной величины. Ко 2-м суткам ишемии на фоне действия нооглютила не наблюдалось статистически значимого снижения мощностей отдельных диапазонов спектра, в теменной коре правого и левого полушарий, однако падение суммарной мощности ЭЭГ (на 36% в левом и 27% в правом полушариях) достигало уровня статистической значимости. У леченных животных отсутствовали явления меж-полушарной асимметрии суммарной мощности и мощностей различных диапазонов. На 3 сутки под влиянием препарата полностью нормализовалась функциональная активность головного мозга: ни мощности отдельных диапазонов, ни суммарная мощность не отличались от исходных значений. Достоверно большими, чем в контроле, были величины мощностей доминирующего ритма и узкополосной его части как со стороны левого, так и со стороны правого полушарий. 3 теменной коре левого полушария также достоверно возросли по сравнению с контрольной группой величина а-актавноети и суммарная мощность ЭЭГ. У леченных животных отсутствовали тления межполушарной асимметрии и не наблюдалось изменений в распределении мощностей спектральных диапазонов. Начиная с 4-5-х суток, в группе крыс, получавших нооглютил, наблюдался рост мощности ЭЭГ-спектров. На 7 сутки ишемии нормализующее влияние нооглютила на биоэлектрическую активность мозга выразилось в достоверном увеличении по сравнению с контролем практически всех показателей в теменной коре левого полушария, а также увеличением 0, Л®, 6, £ и в правом полушарии, причём суммарная мощность ЭЭГ была выше исходных значений, как в левом, так и в правом полушариях. К 10-м суткам после создания ишемии картина спектральной активности в группе крыс, получавших нооглютил, значительно отличалась не только от наблюдаемой в контроле, ко и от полученной до создания ишемии. Выявлено достоверное увеличение мощности ведущего ритма в обоих полушариях, особенно узкополосной его части (на 17,5% и 32,6% соответственно в теменной коре правого и левого полушарий) (рис, 4),

Полученные данные демонстрируют способность нооглютила сохранять функциональную активность головного мозга при ишемии. Уже на первые сутки эффект препарата проявляется в устранении межполушарной асимметрии спектрограмм за счет более выраженного действия на левое полушарие. Начиная с 2-х суток, нооглютил полностью восстанавливает функциональную активность головного мозг а. Вероятно, это связано, с одной стороны, со способностью! нооглютила ограничивать отёк-набуханке головного мозга и выраженным мембраноста-

билизиругощнм эффектом, а с другой - с ноотропными свойствами препарата. Действие иоотропных средств на ЭЭГ проявляется в увеличении амплитуды доминирующего спектра мощности ЭЭГ при возрастании абсолютной а (или) относительной мощности доминирующего диапазона частот, сглаживании уровня межполушарных различий.

ВЛИЯНИЕ НООГЛЮТИЛА НА ПОКАЗАТЕЛИ ГЕМОРЕОЛОГИИ И ГЕМОСТАЗА

Изменения реологических свойств крови и тромбоцитарно-сосудистого звена системы гемостаза являются одним из существенных механизмов в формировании недостаточности кровоснабжения мозга при нарушениях мозгового кровообращения. Усиление агрегации эритроцитов и тромбоцитов, снижение антиагрегантной активности сосудистой стенки на фоне падения перфузионного давления и нарушения геометрии микроциркуляторного русла, развивающимся отёком-набуханием мозговой ткани, значительно ослабляют уровень микроциркуляции.

Для исследования возможного влияния ноог.лютила на агрега-ционную активность клеток крови нами были проведены отдельные серии экспериментов по изучению действия препарата на обратимую агрегацию эритроцитов, АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов и антиагрегантную активность сосудистой стенки.

В группе контрольных животных были получены следующие значения показателей, характеризующих агрегацию эритроцитов: минимальная прочность эритроцитарных агрегатов (Щ) - 12,5+1,5 В, максимальная прочность эритроцитарных агрегатов (Ид) - 168,7+11,0 В, величина амплитуды фотометрического сигнала (А) составила 32,3±1,9 мм, полупериод агрегации (т) - 13,2±2,7 с.

У крыс получавших в течение 7 дней нооглютил в дозе 25 мг/кг, достоверно снижалась прочность эритроцитарных агрегатов, что выражалось как в уменьшении По (на 18%), так и Ид (на 24%). Полупериод агрегации возрастал по сравнению с контролем в 2 раза и достигал величины 26,5±4,7 с. Вместе с тем, не изменилось число эритроцитов, участвующих в процессе агрегации (амплитуда фотометрического сигнала составила 32,0±1,4 мм, что достоверно не отличается от контрольных значений). Наблюдаемые под действием нооглютила изменения показателей эригроцитарной агрегации указывают на выраженное снижение агрегационной активности эритроцитов и усиление процессов дезагрегации.

Курсовое введение нооглютила крысам достоверно не влияло на показатели обратимой АДФ-индуцируемой агрегации. Так, если в контрольной группе ватичина агрегации составила 80±4%, дезагрегации -64+6%, то в группе животных, получавших препарат, степень агрегации достигала величины 76±2%, а дезагрегации - 69±4%. При необратимой

агрегации тромбоцитов под действием нооглютила наблюдалось снижение степени агрегации тромбоцитов с 87+3% (контроль) до 76±5% (опыт), однако наблюдаемые изменения не достигали уровня статистической значимости (Р=0,07). В этих условиях препарат оказал достоверное влияние на процесс дезагрегации тромбоцитов. Так, если в богатой тромбоцитами плазме контрольной группы крыс дезагрегации практически не наблюдалось (6+3%), то у животных опытной группы она составила 30+10%. Вероятно, значительное усиление под действием нооглютила процессов дезагрегации привело к некоторому снижению степени агрегации тромбоцитов.

Влияние нооглютила на эндогенную антиагрегантную систему подтверждено в опытах по изучению антиагрегантной активности сосудистой стенки. Величина АДФ-индуцированной агрегации в богатой тромбоцитами плазме после инкубации в ней фрагмента брюшной аорты крыс, получавших нооглютил, составила 32±4% и достоверно не отличалась от значений в контрольной группе животных (29±5%). Однако величина дезагрегации в опытной группе была 21+2%, что значительно выше, чем у контрольных животных (13±3%).

Таким образом, нооглютил при курсовом применении снижает скорость агрегации эритроцитов и уменьшает прочность эритроцитар-ных агрегатов, значительно усиливает процессы тромбоцитарнон дезагрегации. как непосредственным действием на тромбоциты, так и опосредованно, через модификацию антиагрегантной активности сосудистой стенки.

ВЛИЯНИЕ НООГЛЮТИЛА НА КИСЛОРОДТРАН-СПОРТНУЮ ФУНКЦИЮ И ПОКАЗАТЕЛИ КИСЛОТНО-ЩЕЛОЧНОГО РАВНОВЕСИЯ КРОВИ Одним из механизмов действия антигипоксантов может являться усиление функции массопереноса кислорода кровью. В связи с этим нами выполнена серия экспериментов по изучению влияния нооглютила на аффинитет гемоглобина к кислороду. Опыты проведены на крысах самцах. Кровь для исследования брали до, через 1 и 2 часа после внутри-брюшинного введения нооглютила (50 мг/кг).

Установлено, что через час после введения нооглютила на фоне неизменного газового состава и рН крови наблюдалась тенденция к понижению уровня НЬОг и повышению Р50, которая ко второму часу проявлялась достоверным увеличением Р50 на 4,7 мм рт.ст. Повышение Р50 свидетельствует о сдвиге кривой диссоциации гемоглобина вправо, т.е. об ослаблении сродства гемоглобина к кислороду под действием нооглютила. Это действие не опосредованно эффектом Бора, так как препарат не изменял рН в пробах крови, Выявленное свойство можно оценить как благоприятное в условиях цнркуляторной ишемии, поскольку для ослабления гипоксии мозга достаточно повышение Р50 более, чем на 2,2 мм рт.ст. (Т.М. Плотникова, 1991). В условиях насыщения крови

газовой смесью с фиксированными значениями Pso отмечена тенденция к росту показателей избытка оснований, что отражает снижение в крови концентрации нелетучих кислот и может быть следствием антиацидоти-ческой активности нооглютила.

ВЫВОДЫ

1. Курсовое введение нооглютила уменьшает редукцию уровня локального мозгового кровотока, вызывает его более раннее восстановление и устраняет явления межполушарной асимметрии кровоснабжения мозга в условиях длительной ишемии.

2. Нооглютил улучшает состояние микроциркуляторного русла коры головного мозга при ишемии: увеличивает средний диаметр капилляров, уменьшает число резкосуженных н увеличивает количество функционирующих капилляров.

3. Курсовое введение нооглютила значительно ограничтаает скорость развития и выраженность отёка-набухания мозговой ткани и ускоряет его инволюцию в условиях длительной ишемии мозга.

4. Курсовое введение нооглютила приводит к нормализации биоэлектрической активности головного мозга при ишемии: восстанавливается суммарная мощность ЭЭГ, значительно увеличивается мощность ведушего ритма н узковолновой его части, подавляется медленноволновая 5-активность, устраняется межполушарная асимметрия ЭЭГ.

5. Нооглютил обладает выраженной антиокислительной активностью. Препарат предотвращает активацию процессов перекисного окисления липидов при транзиторной ишемии с последующей реперфу-зией.

6. Курсовое введение нооглютила снижает агрегацию эритроцитов, увеличивает дезагрегацию тромбоцитов и усиливает антиагрегант-ную активность сосудистой стенки,

7. Нооглютил улучшает кислородное снабжение мозговой ткани за счёт ослабления сродства гемоглобина к кислороду.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Механизмы церебропротекторного действия нооглютила при ишемии мозга // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов.- Томск, 1993. - Т.6. - с. 9-10. (соавторы: Т.М. Плотникова, Л.К. Новикова)

2. Итоги поиска новых препаратов для лечения цереброваску-лярных расстройств // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов,- Томск, 1994. - Т.7. - с. 58. (соавторы: М.Б. Плотников, Т.М. Плотникова, O.E. Ваизова)

3. Церебропротекторные эффекты нооглютнла при ишемии мозга // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов.- Томск, 1995. - Т.8. - с. 24-29. {соавт. М.Б. Плотников, Т.М. Плотникова, Т.А. Воронина, Л.К. Новикова)

4. Влияние этомерзола и нооглютила на ЭЭГ при ишемии мозга // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии. - Смоленск, 1994. - с. 107-108. (соавторы: М.Б. Плотников, O.E. Ваизова, Н.И. Суслов)

5. Противоогёчные и антиокислительные эффекты нооглютила при ишемии мозга // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии. - Смоленск, 1994. - с. 108-109. (соавторы: М.Б. Плотников, Т.М. Плотникова)

6. Коррекция антигипоксантами нарушений кровоснабжения мозга и отека мозговой ткани при хронической ишемии // Матер, к докл. объедин. пленума проблемных комиссий "Экстрем, и термин, состояния" и "Научные основы реаниматологии".- Кемерово, 1994. - С.81-82. (соавторы: М.Б. Плотников, O.E. Ваизова)

7. Церебропротекторные эффекты нооглютнла при ишемии мозга // Фундаментальные исследования как основа создания новых лекарственных средств. Тезисы 1 Съезда Российского научного общества фармакологов. - М., 1995. - с. 16.

8. Антигипоксанты в терапии ишемии мозга: гемодинамнческий, мнкроциркуляторный и гемореологический аспекты. - II Росс, национ. конгресс "Человек и лекарство". - Тез. докл. - Москва, 1995. - С.225. (соавторы: М.Б. Плотников, Т.М. Плотникова, O.E. Ваизова, В.Х. Ваизов)