Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Сывороточные иммуномодулирующие факторы у онкологических больных - функция, состав и возможности клинического применения

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОНКОЛОГИИ им. проф. Н. Н. ПЕТРОВА

На правах рукописи

КОРОСТЕЛЕВ Александр Алексеевич

СЫВОРОТОЧНЫЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ ФАКТОРЫ У ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ — ФУНКЦИЯ, СОСТАВ И ВОЗМОЖНОСТИ КЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ

Специальность — 14.00.14 — онкология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Санкт-Петербург 1991

Работа выполнена в Кемеровском государственном медицинском институте.

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Б. М. Клячкин, доктор медицинских наук, профессор А. А. Агеенко.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук В. Б. Окулов,

академик 'АМН СССР, доктор медицинских наук, профессор Н. В. Васильев,

доктор медицинских наук, профессор В. Н. Демин.

Ведущее научное учреждение:

Всесоюзный Онкологический Научный Центр АМН СССР.

Защита состоится «_»___1991 г. на

заседании специализированного совета ордена Трудового Красного Знамени НИИ онкологии им. проф. Н. Н. Петрова Минздрава СССР, Д-074.38.01. (189646, Санкт-Петербург, Песочный-2, ул. Ленинградская, д. 68).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « »_ __1991 г.

Ученый секретарь специализированного Совета член-корреспондент Академии Естественных Наук,

доктор медицинских наук В. В. ХУДОЛЕЙ

(! ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

тдоп

1£1^!^Дугуальность работы.

Иммунологический контроль у онкологических больных является одной из центральных проблем онкоиммунологии. Без систематизации основных типов нарушения иммунитета при злокачественных новообразованиях человека невозможно разработать практическую схему и тактику иммунокоррегирующей терапии,делать прогноз проводимого лечения.

Вместе с тем,у онкологических больных наблюдается сложная и неоднозначная перестройка иммунного гомеостаза. Некоторые весьма существенные зЕенья оказываются не подавленными, а напротив, активированными и поэтому важно не стимулировать зффек-торное звено, а воздействовать на регуляторный блок иммунной системы (Васильев ЕВ. ,1988).

Анализ литературы показывает,что многие фундаментальные вопросы механизма реализации противоопухолевого иммунитета остаются невыясненными. Существенные трудности имеются в оценке состояния иммунной системы при уже клинически выраженном опу-■солевом процессе. Отсутствие объективных критериев оценки иммунологического статуса онкологических больных можно очевидно объяснить как существованием альтернативных путей регуляции шмунного ответа,так и неадекватностью ин витро методических юдходов оценки ситуации ин виво. Так.Би^агЬакег еЪ а1,(1987), федставили альтернативные гипотезы,показывающие,что в зависи-юсти от микроокружения одни и те же лимфоциты могут быть либо >ффекгорами, либо супрессорами специфической реакции.

Таким образом,изучение иммуномодулирующих свойств факторов < :ыворотки крови онкологических больных принимает особое прак-

тическое значение. Сывороточные иммуномодулирукще факторы известны достаточно давно под общим названием "блокирующие фак-торы"(Ь!оопап F. et al. ,1977,Miyazaki Met al. ,1979,Tanaka F. et al. ,1979, и др. )■ Однако, до сих пор неизвестен их точный качественный и количественный состав,а тем более механизм имму-номодулирующего действия. Данные,имеющиеся в литературе, свидетельствуют о несомненном иммунодепрессивном влиянии сыворотки крови онкологических больных(ОЫа Т. ,1980,Kurosu J. е al. ,1981,Gupta S. С. et al. ,1984, и др.). Более того, иммунодепрессия, сопутствующая росту опухоли,может быть связана с печеночным синтезом неспецифических иммунодепрессивных и противовоспалительных факторов »продукцией опухолевых блокирующих факторов,снижением иммуностимулирующих субстанций(Israel L. et al. ,1978).

В связи с этим,возникает потребность в информативных и доступных тестах по изучению иммуномодулирующих свойств сыворотки крови,что необходимо для расширения иммунологического мониторинга у онкологических больных,индивидуализации подходов к их лечению как традиционными методами,так и такими,как элиминаци-онная иммунотерапия- обмен плазмы,плазмаферез,гемо-и лимфо-сорбция. Существующие тест-системы здорового донора для определения иммуномодулирующих свойств сыворотки крови в реакции бластной трансформации лимфоцитов на различные митоге-ны(Hadj ipetrou К. L". et al. ,1980, Wohlrab W. et al. ,1983) .образования po3eTOK(Gough I.R. et al. ,1983,Bashford J. et al. ,1983) .антитело-зависимой цитотоксичности(Gergely P. et al. , 1980).естественной клеточной цитотоксичности(Benezun M. et al. ,1981.01inescu A. et al. .1985) .угнетения прилипания лейкоци-

N

тов (McLeod D. К. et al. ,1987,Bhatti R. et al,1987).фагоцито-3a(Klostergaard J. et al. ,1980) .обладают недостаточной инфор-

мативностью и точностью,так как дают только результат общего воздействия сыворотки на функцию иммунокомпетентных клеток,не раскрывая механизма этого действия.

Цель и задачи работы.

Целью проведенной работы является разработка и внедрение комплекса методических подходов для определения иммуномодули-рующих свойств сыворотки крови онкологических больных, расширения возможностей иммунологического мониторинга и прогнозирования, а также индивидуализации лечения больных злокачественными новообразованиями.

Для достижения поставленной цели решались следующие конкретные задачи:

1. Разработать и внедрить модификации функциональных тест-систем для определения иммуномодулирующих свойств сыворотки крови.

2. Исследовать влияние сыворотки крови онкологических больных на реакцию бластной трансформации лимфоцитов,активацию клеток супрессоров, функцию натуральных киллеров и синтез лимфоцитами интерлейкина-2.

3. Изучить влияние сыворотки крови онкологических больных на биохимические процессы,протекающие в иммунокомпетентных клет-ках(синтез ДНК, белка,циклических нуклеотидов).

4. Исследовать иммуномодулируюшие свойства сыворотки крови в зависимости от стадии заболевания, степени дифференцировки злокачественного новообразования, а также в процессе хирургического лечения.

5. Провести корреляционный -анализ мезкду иммунохимическим составом и иммуномодулирующими свойствами сыворотки крови онкологических больных.

Научная новизна.

Работа открывает новое направление научных исследований, которое заключается в изучении in vitro опухолеиндуциро-ванных нарушений функционирования конкретных звеньев'иммунной системы с учетом баланса иммуномодулирующих факторов в сыворотке крови онкологических больных.

Выявлен механизм действия блокирующих факторов сыворотки крови,которые обладают как прямым иммуносупрессивным действием, так и влияют на активацию клеток супрессоров.а также выработку вторичных иммуномодулирующих факторов.

Практическая значимость.

В результате проведенного исследования предложен комплекс принципиально новых практических подходов к изучению иммунного гомеостаза, что позволяет более индивидуально подходить к диагностике, прогнозу и лечению онкологических больных,проводить целенаправленную коррекцию иммунопатологических состояний при злокачественных новообразованиях.

Разработан и внедрен на уровне изобретения более информативный и точный способ оценки иммуномодулирующих свойств сыворотки крови онкологических больных в тест-сИстеме реакции бластной трансформации лимфоцитов здорового донора.

Предложен новый метод дополнительной диагностики и прогноза при злокачественных новообразованиях путем оценки влияния сыворотки крови на синтез циклических нуклеотидов в лимфоцитах.

Разработаны и внедрены новые методы,позволяющие оценить влияние сыворотки крови онкологических больных на индукцию клеток супрессоров и вторичных иммуномодулирующих факторов.

Предложенный комплекс методов исследования иммуномодулирующих свойств сыворотки *крови выявляет не только общий эффект

сыворотки.но и раскрьшает конкретный механизм этого действия на клеточном и биохимическом уровнях,что позволяет более индивидуально подходить к вопросам диагностики,прогноза и коррекции иммунопатологических состояний при злокачественных новоб-разованиях.

Внедрение в практику.

Результаты исследований внедрены в практику лаборатории клинической радиоиммунологии ВОНЦ АМН СССР,в Институте микробиологии АН Латвийской республики, в Тюменском медицинском институте, в НИИ онкологии Томского научного центра, в Кемеровском областном онкологическом диспансере, в Кемеровском медицинском диагностическом центре. Имеется 6 актов о внедрении в практику результатов диссертационной работы. По теме диссертации разработаны и внедрены 6 изобретений,из них 4 - способы диагностики и прогноза иммунопатолгических состояний при злокачественных новообразованиях: "Способ определения активности сыворотки крови, блокирующей реакцию бластной трансформации лимфоцитов", "Способ определения функциональной активности индуцированных клеток супрессоров у онкологических больных","Способ определения иммуномодулирующих свойств сыворотки крови при злокачественных новообразованиях","Способ определения активности сыворотки крови модулирующей функцию лимфоцитов". Кроме этого,по теме диссертации разработаны и внедрены 32 рационализаторских предложения.

Апробация работы.

Апробация работы была проведена на совместной научной конференции Центральной научно-исследовательской лаборато-

рии,кафедры онкологии Кемеровского государственного медицинского института и Кемеровского отделения Всесоюзного общества иммунологов 6 июня 1991г.

Основные положения и результаты проведенного исследования были представлены:

1.На Межреспубликанском симпозиуме"Неспецифические стимуляторы противоопухолевого иммунитета",Рига,1983 г.

2. На Всесоюзном совешднии"Новые подходы к вопросам иммунологии рака",г. Кемерово, 1986 г.

3. На IV Всесоюзном съезде онкологов, г. Ленинград-, 1986 г.

4. На Всесоюзном симпозиуме"Актуальные вопросы иммунотерапии опухолей",г.Рига, 1988 г.

5. На научной конференцшГИммунология Сибири и Дальнего Востока", г. Красноярск, 1988 г.

6. На I Всесоюзном иммунологическом съезде,г. Сочи,1989 г.

7. На Всесоюзном симпозиуме "Биохимия опухолевой клетки", г. Минск 1990 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 14 научных работ. Сделано 6 изобретений и 32 рационализаторских предложения.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 216 стр. машинописного текста,состоит из введения,обзора литературы,описания материалов и методов исследованиям глав результатов собственных исследований,заключения, выводов, указателя литературы. Работа иллюстрирована 56 рисунками и 1 таблицей. Указатель литературы включает 266 источников, из них 32-отечественных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Исследование выполнено на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории Кемеровского государственного медицинского института и отделения общей хирургии Кемеровского областного онкологического диспансера в период с 1982 по 1990 г. г.

Материалы и методы исследования Для выполнения поставленных задач была исследована сыворотка крови от 178 больных при различной степени распространенности рака желудка,толстой и прямой кишки(рак желудка 95 больных: И человек I — 11 стадия,41 -III стадия,43-IV стадия-.рак толстой и прямой кишки 83 больных: 8 человек I-II стадия,38-III стадия, 37- IV стадия),до и после хирургического лечения, 24 больных хронической язвой желудка,а также контрольная группа из 122 здоровых людей. Всего исследовано более 1500 образцов сыворотки крови.

По гистологической характеристике злокачественных новообразований больные распределились следующим образом: дифференцированная аденокарцинома у 37 больных,умереннодифференцированная аденокарцинома -64,низкодифференцированная аденокарцинома -21, диффузный рак -40 больных.

Все перечисленные больные поступали в отделение общей хирургии Кемеровского областного онкологического диспансера,где проводилось полное клиническое и лабораторное обследование,устанавливался гистологический и клинический диагноз,проводилось хирургическое лечение.

Определение иммуномодулируюцщх свойств сыворотки крови проводилось. в тест-системах здорового донора: реакции властной трансформации лимфоцитов на ФГА и митоген фитолакки (тест-сис-

-ГО-

тема ставилась в собственной модификации, а. с. N 1400279 ), функции активированных клеток супрессоров ( собственная модификация. Положительное решение о выдаче авторского свидетельства по заявке N 4377129 ),синтеза интерлейкина-2 ( собственная модификация. Заявка на изобретение N 4853311 ), синтеза • внутриклеточных циклических нуклеотидов ( собственная модификация. Положительное решение о выдаче авторского свидетельства по заявке N 4677945 ), функции естественных клеток киллеров, синтеза белка и нуклеиновых кислот, угнетения прилипания лейкоцитов на РРБ.

Получение лимфоцитов для тест-систем из крови здоровых доноров проводилось с использованием предложенной нами иглы для отсасывания плазмы (ас. N 1223918 ). Для постановки тест-систем функции индуцированных клеток супрессоров и синтеза интерлейкина-2 применялся предложенный наш наконечник для удаления супернатанта из планшетов для иммунологических реакций и культур клеток ( заявка на изобретение N 4901472 ).

Изучался качественный и количественный состав сыворотки крови. Определялось содержание иммуноглобулинов А, М, Б, циркулирующих иммунных комплексов, гаптоглобина, церулоплазмина и ревматоидного фактора.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 1. Влияние сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта на реакцию■блзстной трансформации лимфоцито; здорового донора и индукцию вторичных посредников.

В результате изучения влияния сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта на реакцию бластной трансформации лимфоцитов здорового донора и индукцию вторичных посредников

было выявлено, что добавление исследуемой сыворотки в РВТЛ здорового донора на митоген фитолакки достоверно (Р< 0,05) подавляет ее у больных, имеющих Пи III стадии заболевания : индекс подавления соответственно 43,8 + 1,7 % и 25,3 + 2,6 Z (контрольная сыворотка 2,1 + 1,7 %). Сыворотка крови больных, имеющих IV стадию заболевания, обладала в равной степени как блокирующим, так и стимулирующим действием - индекс подавления 1,3 + 7 Z (рис.1 ).

При сравнении тест-системы РБТЛ здорового донора на митоген фитолакки и ФГА . оказалось, что реакция с ФГА менее чувствительна к блокирующему действию сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта, чем с митогеном фитолакки.

Иммуномодулируюшие свойства сыворотки крови находились в зависимости от уровня дифференцировки и гистологического типа опухоли. Проведенное исследование показало, что сыворотка крови больных дифференцированной аденокарциномой достоверно (Р< 0,05) подавляет РБТЛ здорового донора на митоген фитолакки, при умереннодифференцированной аденокарциноме иммунодепрессив-ные свойства сыворотки крови еЩе более выражены (рис. 2). Сыворотка крови больных,имеющх диффузный рак,подобным действием не обладала. При исследовании сыворотки крови больных с различным гистологическим типом опухоли в тест-системе РБТЛ на ФГА картина выглядела несколько иначе - иммунодепрессивные свойства сыворотки крови увеличивались по мере снижения уровня дифференцировки злокачественного новообразования.

При изучении влияния хирургического лечения рака желудка, толстой и прямой кишки на кинетику тест-системы РБТЛ здорового донора выявлено, что после проведения радикальной операции блокирующая активность сыворотки достоверно (Р<0,05) снижается.

Ивдекс подавления

т/%/

45 40 35 30

25 20 15 10

J±L

1

2

3 4

Рис. 1. Влияние сыворотки крови больных ракой желудка, толстой и прямой кишки на реакща: Сластной трансформации лимфоцитов здорового донора на штоген фитолакки.

1 - здоровые люди

2 - рак аздудка, толстой и прямой кишки 11 стадия

3 - рак желудка, толстой и прямой киши Ш стадая

4 - рак желудка, толстой и прямой киаки IV стадия

Индекс подавления ИЛ /%/ 70 60 50 40 30 20 10 О

-10 _

1

гЬ

Jtzfa.

W

г

з

Рис. 2. Влияние сыворотки крови на реакцию Ыастной трансформации лимфоцитов здорового донора на штоген лаконоса и уровень даф$ерен18фовки злокачественного ловооСразова-шш.

1 - адоровые лвди

2 - диМеревцированказ аденокарцшкш

3 - умерекнодаМеренцированная аденОкардаош

4 - диффузный рак

Проведение радикальной операции у больных с нормальным исходным уровнем блокирующей активности сыворотки крови практически не меняло данный показатель. Паллиативная операция и пробная лапаротомия также не влияли на блокирующие свойства сыворотки крови в тест-системе РБТЛ (рис.3 ).

Сыворотка крови больных раком желудочно-кишечного тракта может влиять на реакцию бластной трансформации лимфоцитов через функцию индуцированных клеток супрессоров. Проведенное нами исследование показало, что индукция клеток супрессоров происходит в 35-40% (относительно уровня здоровых людей) при культивировании с сывороткой крови от больных с III-IV стадией заболевания. При этом, наибольшей, индуцирующей функцию клеток супрессоров, активностью обладала сыворотка крови от больных, , имеющих диффузный рак (50%) и умереннодифференцированную аде-нокарциному (41%). Проведение радикальной операции достоверно (Р<0,05) снижало способность сыворотки индуцировать функцию клеток супрессоров (рис. 4 ).

Изучение в тест-системе синтеза интерлейкина-2 лимфоцитами здорового донора иммуномодулируюших свойств сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта показало, что сыворотка больных, имеющих 2 стадию заболевания , достоверно (Р<0,05) угнетает синтез интерлейкина-2 до 50 + 14 % ,с чувствительностью реакции относительно уровня здоровых людей до 80 %. При III и IV стадиях заболевания угнетения синтеза интер-лейкина не выявлено. Проведение корреляционного анализа показало, что между синтезом интерлейкина-2 и индексом подавления РБТЛ с митогеном фитолакки существует обратная зависимость ( г - (-0,74)). Таким образом, чем больше вырабатывалось ин-терлейкина-2 , тем меньше сыворотка крови больных подавляла

Индекс подавления Ш/%/ 60 50 40 30 20

10 О -10 ' -20 -30

Л

ь

Я

а б

Рис.а Влияние хирургического лечения на способность сыворотки крови больше ракой желудочно-кишечного тракта блокировать реакцию бластноа трансформации лимфоцитов здорового донора на СГА. а - до операции б - после операции

1 - радикальная операция

2 - радикальная операция у больных с нормальный ис-

ходных показателем блокирущей активности сыворотки

/%/ 40 30 20 10

0 -10 -20 -30

6

а

Рис. 4. Влияние хирургического лечения на способность сыворотки крови Сольных раком желудочно-кишечного тракта индуцировать функцию клеток сулресссров. а - до операции

б - через 2 недели после операции

1 - радикальная операция

2 - радикальная операция у больных, сыворотка кото-

рых не индуцировала функцию клеток супрессоров

РВТЛ здорового донора (рис. 5., рис. 6 ).

При исследовании влияния сыворотки крови от больных с различными гистологическими формами рака на синтез лимфоцитами здорового донора интерлейкина-2 оказалось, что наибольшим угнетающим эффектом обладает сыворотка от больных с низкодиффе-ренцированным раком. Проведение радикальной операции у больных раком желудочно-кишечного тракта достоверно (Р< 0,05) снижает способность сыворотки крови этих больных подавлять синтез ин-терлейкина-2 (рис. 7. ,рис. 8 ).

Таким образом, диагностическая ценность тест-системы реакции бластной трансформации лимфоцитов здорового донора для определения иммуномодулирующих свойств сыворотки крови в системе иммунологического мониторинга у онкологических больных значительно возрастает при одновременном определении влияния исследуемой сыворотки на индукцию клеток супрессоров и синтез ин-терлейкина-2 , как одних из основных регуляторных'факторов данной реакции.

2. Изучение сывороточных иммуномодулирующих факторов в реакциях клеточного иммунитета.

Особый интерес представляет результат влияния сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта на функцию естественных клеток киллеров , как основной реакции в противоопухолевом иммунитете. Блокирующая активность сыворотки достоверно (Р <0,01) увеличивалась по мере прогрессирования заболевания с 15,3 + 4,3 % при II стадии до 33 + 4,6 % при IV стадии заболевания. При этом выявлена обратная зависимость ( г = -0,7) между подавлением активности естественных клеток киллеров и супрессией РБТЛ на ФГА и прямая зависимость (г=0,63)

Рис. 5. Влияние сыворотки крови больных ракой «гдудочно-кшяеч-ного тракта на синтез интердейкина-2 лимфоцитами здорового донора.

а - индекс аодамеииа (Z) б - чувствительность реакции (Z)

1 - здоровые ади

2 - рак «лудка, толстой и прямой юшки I! стадо

3 - рак желудка, толстой и прямой юшки III стадия Л - рак желудка, толстой и пряной кияки IV стадия

Рис. 6. Корреляция изхду реакцией Властной трансформации шш4о-цитов вдорового донора на фитогемаагглюгинш к синтеаои интерлейкина-2 сод миявчеи сыворотки крови Сольных ракой желудочно-кишечного тракта (умеренводифференциро-ванная аденокарцивоиа).

Ш оси X - синтез шиердейкина-2 (оти. ед.)

Ш оси У - индекс подавления РИЛ на ФГА (2)

т 80 70 60 50 40

30 20 10 0

1

:2э

Рис.7. Синтез интерлейкина-2 лимфоцитами здорового донора под влиянием сыворотки крови больных ракой желудочно-кишечного тракта с различным уровнем.даМеренцкровки злокачественного новообразования.

1 - здоровые двди

2 - дифференцированная аденокарвдноиа

3 - уыереннодаМеренцированвая аденокарцинома

4 - диффузный рак

а - индекс подавления (X)

б - чувствительность реакции (2)

Индекс подавления

60 50 40 30 20 10 О

-10

-20

пЬ

I

а б

тЖ

Рис. 8. Влияние хирургического лечения на способность сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта подавлять синтез интерлейгаша-2 лимфоцитами здорового донора, а - до операции б - после операции

1 - радикальная операция

2 - радикальная операция у больных с нормальным ис-

ходным показателей влияния сыворотка на синтез интерлейкина-2

1

а

с синтезом интерлейкина-2 лимфоцитами здорового донора под влиянием сыворотки крови больных (рис. 9,11,12).

В зависимости от гистологического типа и уровня дифференцировки опухоли выявлено достоверное ( от Р< 0,05 до Р < 0,01) снижение блокирующих свойств сыворотки крови по мере снижения уровня дифференцировки опухоли (рис.10.). Через 1-2 недели после операции блокирующие свойства сыворотки достоверно (Р< 0,05) снижаются с 56,9 + 11,3 % до 22,1 +5,6 X .

Изучение иммуномодулирующих свойств сыворотки крови больных раком желудка, толстой и прямой кишки в тест системе угнетения прилипания лейкоцитов (УПЛ) здорового донора на РРД показало, что сыворотка достоверно(Р< 0,01) подавляет реакцию УПЛ на III и IV стадиях процесса, тогда как сыворотка больных хронической язвой желудка и больных раком I -II стадии таким действием не обладала В зависимости от гистологического типа, блокирующие свойства сыворотки увеличивались по мере снижения дифференцировки опухоли. Радикальная операция устраняла блокирующее действие сыворотки крови в тест-системе УПЛ

3. Изменения в метаболизме иммунокомпетентных клеток под влиянием сывйротки крови больных раком желудка,толстой и прямой кишки.

Под влиянием сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта в метаболизме иммунокомпетентных клеток происходят значительные изменения. Культивирование лимфоцитов здорового донора с сывороткой больных приводит к достоверному (Р< 0,001) подавлению в них синтеза ДНК, тогда как синтез белка существенно не меняется. Сыворотка крови больных хронической язвой желудка достоверно ( Р< 0,01) стимулирует синтез ДНК и белка в

Индехо подавления т/%/

45 40 35 30 25 20 15 10

XI

Рис.9. Влияние сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта на функцию НК-клеток здорового донора (мишень - К 562).

1 - здоровые люди

2 - рак желудка, толстой и прямой киши II стадия

3 - рак желудка, толстой и пряной киши 111 стадия .

4 - рак лелудка, толстой и прямой киши IV стадия

Индекс подавления т /%/

90 80 70 60

50 40 30 20 10

_

¿1

1 2 3 4 5

Рис.1а Влияние сыворотки крови Сольных с различным уровней диффзрекцвровки злокачественного, новообразования ва Йувкцию Нй-клеток здорового донора

1 - здоровые люди

2 - дифференцированная аденокарциноыа

3 - умереннодифференцированная аденокарцинома

4 - низкодифференцироваикая аденокарцшкдй

5 - дайузный рак

Рис.И. Корреляция между индексами подавления активности естественны!! клеток киллеров и реакция властной трансформации люфзцитов здорового донора на вРА сывороткой кроак больных ракой желудочно-кишечного тракта (III стадия).

Ш оси X - индекс подавления РВТЛ на СТА (г) Ш оси V - индекс подавления клеток киллеров (I)

лимфоцитами здорового донора сод влиянием сыворотки крови сольных раком желудочно-кишечного тракта (IV стадия).

Ш оси X - синтез интерлейкина-2 (отн. ед.) Ео оси У - индекс подавления функции клеток киллеров (I)

лимфоцитак здорового донора Выявлена . прямая зависимость (г= 0,83) между синтезом белка и индексом подавления РБТЛ на ФГА ( рис. 13. ,рис. 14).

Реализация функции иммунокомпетентных клеток во многом зависит от синтеза универсальных внутриклеточных посредников цАМФ и цГМФ. Сыворотка больных раком желудочно-кишечного тракта достоверно (Р< 0,001) угнетает синтез внутриклеточного цГМФ, независимо от уровня дифференцировки опухоли. Выявлена прямая зависимость (г= 0,6) между подавлением внутриклеточного синтеза цГМФ и способностью сыворотки больных угнетать РБТЛ здорового донора и функцию естественных клеток киллеров.

Иммунодепрессивное действие таких факторов, как простатдан-дин Е , реализуется через стимуляцию синтеза внутриклеточного цАМФ. Проведенное исследование не выявило стимуляции синтеза цАМФ сывороткой крови больных раком желудочно-кишечного тракта Очевидно, иммуномодулирующее действие сыворотки крови в предложенной тест-системе здорового донора реализуется иными путями ( рис. 15,16,17,18).

Проведенное исследование выявило высокую чувствительность тест-системы синтеза внутриклеточного цГМФ лимфоцитами здорового донора, что позволило создать новый метод иммунологического мониторинга у онкологических больных.

4. Иммунохимический состав сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта и корреляционный анализ с ее иммуномодулируюшими свойствами.

Изучение иммунохимического состава сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта и проведение корреляционного анализа с ее иммуномодулируюшими свойствами показало, что дос-

Индекс спекуляции ИС /%/ 70 60 50 40

30 20 10 О

i4i

А

Рис.13. Влияние сыворотки крови больных раком «елудочно-кшоеч-ного тракта на синтез белка в лимфоцитах здорового донора

1 - здоровые люди

2 - хроническая язва желудка

3 - рак желудка, толстой и прямой кишки П стадия

4 - рак желудкз, толстой и прямой кишки III стадия

5 - рак желудка, толстой и прямой иски IV стадия

тыс./шп. мин

9 8 7 6 5 4 3

гЬ

2

1

0

Рис. 14. Влияние сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта на синтез в дайоцитах здорового донора.

1 - здоровые дпди

2 - хроническая язва желудка

3 - рак желудка III стадия

Кндекс подавления

кп М

90 80 70 60 50 40 30 20 10 О

гЬ

J±L

nh

Рис. 15. Влияние сызоротки крови больных раком гвлудочно-кквеч-ного тракта на синтез внутриклеточного Ц-ГМ5 в лимфоцитах здорового донора.

1 - здоровыз дяди

2 - хроническая язва желудка

3 - рак »элудка, толстой и прямой киши II стадия

4 - рак жэлудка, толстой и пряюй киши 111 стадия

5 - рак желудка, толстой и прямой киши IV стадия

Индекс стимуляции ИС Д/ 30 20

10 0 -10 -20 -30 -40 -50 -60 -70 1.

¥

Рис. 16. Влияние сыворотки крови больных рзком желудочно-кишечного тракта на синтез внутриклеточного ц-АМФ в лимфоцитах здорового донора.

1 - здоровые люди

2 - рак желудка, толстой и прямой ккеки II стадия

3 - рак желудка, толстой и пряной кишки III стадия

4 - рак жеду^а. тпдстой и прямой кишки IV стадия

г

iU fít «

•76.2 t - 0,51

-38.4 > ♦ * * * ♦ 0 4. • * * * ♦ . « « V Í . . •

■«лаюсь- *

Р i f. « « 1 р>| .1 , , m. , i i Hi JV 1. L 1*1

Yua. 17. Корреляция иехду индексами подавления бункции естественных клеток киллеров и синтезом вкутрк'-лгтсчксго ц-ГЮ лимфоцитами здорового донора вод влиянием сыворотки крови бальных раком желудочно-кишечного тракта (III стадия).

Ш оси X - индекс подавления синтеза ц-1Ш (Z) Па оси У - индекс подавления функции клеток киллеров (Z)

Рис. 18. Корреляция между индексами подавления реакции бластноа трансформации лимфоцитов на 115 и синтезом внутриклеточного ц-ГШ лимфоцитами здорового донора под влиянием сыворотки крова Сольных раком желудочно-кивечного тракта (IV стада).

Ш оси X - индекс подавления синтеза к-ГЫФ (2) а> оси У - индекс подавления РЕГЛ на Ш гя

товерное(Р< 0,001) снижение IgG наблюдается только при III стадии , тогда как при остальных стадиях уровень IgG не отличается от контроля. Определение IgM выявило его достоверное (Р<0,05) снижение при III и IV стадиях заболевания. Содержание IgA достоверно увеличивалось у больных раком на II стадии заболевания. Корреляционный анализ выявил прямую зависимость (г - 0,6) между увеличением содержания IgM в сыворотке крови и индексом подавления синтеза цГМФ в лимфоцитах здорового донора Кроме этого, выявлена прямая зависимость между увеличением концентрации IgG ( г - 0,59) и IgM (г - 0,85) и подавлением РБТЛ здорового донора.на ФГА. Повышение уровня IgA приводило к снижению способности сыворотки крови индуцировать функцию клеток супрессоров (г - - 0,65) (рис.19. ,рис.20).

Исследование концентрации циркулирующих иммунных комплексов выявило достоверное (Р< 0,05) увеличение ЦИК , наиболее выраженное при 11 стадии заболевания. Корреляционный анализ показал прямую зависимость (г =0,61) между содержанием ЦИК и IgA и обратную (г - - 0,52) между уровнем ЦИК и способностью сыворотки подавлять функцию естественных клеток киллеров. Увеличение ЦИК приводило к подавлению синтеза интерлейкина-2 ( г -- 0,69) и снижению способности сыворотки крови индуцировать клетки супрессоры (г - - 0,7) (рис. 21.,рис. 22) Проведение радикальной операции у больных раком желудочно-кишечного тракта достоверно (Р< 0,05) приводило к снижению уровня ЦИК в сыворотке крови.

Белки острой фазы - гаптоглобин и церулоплазмин, обладают общепризнанным иммуномодулирующим действием на иммунокомпе-тентные клетки. Проведенное нами исследование показало достоверное (Р< 0,05) увеличение содержания гаптоглобина в сыворот-

-26-

105. в

ТУ/ 0

•62.76

> Ь 0 » « «

♦ 1

.. * * г - о,б

» > уо

, 0

М , | , р.зя , , , *.Я , п 1 1 1

Рис. 19. Корреляция нежду подавление« синтеза внутриклеточного ц-ГИ> в лимфоцитах здорового донора и содержанием ИГ-М в сыворотке крови Сольных раком желудочно-кишечного тракта (IV стада).

Го оси X - концентрация ИГ-Ц (мг/мд)

По оси У - индекс подавления синтеза ц-ГИЬ (X)

u.i.....

п/ • ,

-34.52 0 * » « ♦

6.М t • * / • « г - 0,85

-им ♦

. «

в.» , , . 11.07 , , 11.8. . , , е.я

Рис.20, Корреляция меаду подавлением реаэди бластной трансформации лимфоцитов здорового донора на 5ГА сшороткой крсеи больных раком желудочно-кишечного тракта и содержанием в кей ИГ-М.

По реи X - концентрация ИГ-Ц (мг/мл) По оси У - индекс подавления РЕГЛ на STA (I)

4.К- "

д/ 0 «

-6.933 Ь ** у/

•4.ЗМ ♦ ♦ . ' г - о.б1

Л&ЪГ ♦ Ф» о а о

> /

♦

Я.Г, г ■ г р. 1 1 1 1 'Л/

Рис. 21. Корреляция между ¡рицрнтраиией циркудируиих иммунных комплексов и иммуноглобулина А в сыворотке крови Сольных раком желудочно-кишечного тракта (IV стадия). По оси X - концентрации ИГ-А (иг/мл) По оси У - концентрация ЦИК (иг/ил)

Р/

*» ««

ф \ ,

. 0

•

■0.028 « ♦ \ ♦ ч с

■0.433

1. -0,69

1 12.53 1 1 . ЯД 1 1 , |б . га /V .».»

РИ4.22. Корреляция между концентрацией циркулнруащих ¡¿¡лр/щш комплексов и подавлением синтеза интерлейюша-г лимфоцитами здорового донора под влиянием сыворотка дави больных раком желудочно-кишечного тракта (дифференцированная аденокарцинома).

Ш оси X - концентрация ДИК (мг/шй По оси У - синтез интерлейкива-2 (отн.ед.)

ке крови больных раком желудка, толстой и прямой кишки. Выявлена обратная зависимость (г - - 0,73) между содержанием гаптоглобина и блокирующими свойствами сыворотки крови в РБТЛ здорового донора на ФГА. Вместе с тем, увеличение гаптоглобина приводило к активации функции клеток супрессоров ( г - 0,59). Содержание гаптоглобина прямо коррелировало (г - 0,7) с уровнем циркулирующих иммунных комплексов.

Содержание церулоплаэмина увеличивалось по мере распространения опухоли и снижения уровня ее дифференцировки. Увеличение концентрации церулоплаэмина прямо коррелировало (г - 0,88) с уровнем гаптоглобина и циркулирующих иммунных комплексов (г -0,87). С увеличением уровня церулоплаэмина снижалась блокирующая активность сыворотки на функцию естественных клеток киллеров (г — 0,74).

. Определение ревматоидного фактора у больных раком желудка, толстой и прямой кишки показало, что процент его выявления не зависит от стадии заболевания ; вмесуе с тем, титр ревматоидного фактора увеличивается по мере прогрессирования заболевания. Проведение радикальной операции у больных раком желудочно -кишечного тракта приводит через 2-3 недели к нормализации уровня гаптоглобина, церулоплазмина и ревматоидного фактора, тогда как паллиативная операция или пробная лапаратомия не оказывают существенного влияния на данные показатели.

Таким образом, изучение факторов сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта в тест-системах иммунологических реакций здорового донора выявило конкретный механизм их иммуномодулирукяцего действия , что позволяет повысить качество иммунологического мониторинга и прогнозирования, разработать индивидуальные схемы иммунокоррегирующей терапии у онкологических больных.

ВЫВОДЫ.

1. Сыворотка крови больных раком желудочно-кишечного тракта обладает выраженным иммуномодулирующим (в основном иммунодеп-рессивным)действием на функцию лимфоцитов здорового донора.

2. Полученные данные по специфичности,чувствительности и кинетике разработанных нами иммунологических тест-систем (реакция бластной трансформации лимфоцитов,индукция функции клеток супрессоров,синтез интерлейкина-2,синтез внутриклеточных циклических нуклеотидов) здорового донора,указывают на широкие возможности их применения в экспериментальных и клинических исследованиях для выявления иммуномодулирующих свойств сыворотки крови.

3. Иммунодепрессивное действие сыворотки крови больных раком желудка,толстой и прямой кишки,наиболее выражено в тест системе РБТЛ с митогеном фитолакки. Причем,иммунодепрессивные свойства сыворотки снижаются по мере' прогрессирования: заболевания и при распространенном процессе происходит значительное колебание эффекта сыворотки - от выраженной супрессии до значитель-ж^активации РБТЛ как на митоген фитолакки, так и на ФГА.

Иммуномодулируклцие свойства сыворотки крови больных зависят от степени дифференцировки опухоли. Иммунодепрессивные свойства сыворотки в тест-системе РБТЛ с ФГА,увеличиваются по мере снижения уровня дифференцировки опухоли.

4. Сьторотка крови больных раком желудочно-кишечного тракта (особенно при диффузном раке).индуцирует функцию клеток супрессоров и подавляет синтез интерлейкина-2 лимфоцитами здорового донора. Особенно данный эффект выражен при II стадии заболевания, а в зависимости от гистологического типа опухоли - при диффузном раке. ,

Выявлена обратная зависимость между подавлением реакцга властной трансформации лимфоцитов на митоген фитолакки.ФГА I синтезом лимфоцитами интерлейкина-2.

5. Тест-система естественных клеток киллеров здорового донора для определения блокирующих свойств сыворотки крови обладает наибольшей чувствительностью в ряду общепринятых реакци{ клеточного иммунитета. Блокирующее действие сыворотки кров1 больных раком желудочно-кишечного тракта на функцию естественных клеток киллеров увеличивается по мере прогрессирования заболевания и уменьшается у больных с низкодифференцированныш опухолями.

Выявлена обратная зависимость между подавлением клеточно{ цитотоксичности и супрессией реакции властной трансформации лимфоцитов на ФГА и прямая зависимость с синтезом лимфоцитами интерлейкина-2.

6. Сыворотка крови больных раком желудка,толстой и прямо! кишки подавляет синтез ДНК,не влияя на синтез белка в лимфоцитах здорового донора. Сыворотка крови больных хронической язвоЯ желудка стимулирует синтез ДНК и белка в лимфоцитах здоровогс донора.

7. Сыворотка крови больных раком желудочно-кишечного тракта подавляет синтез внутриклеточного цГМФ, независимо от уровня дифференцировки опухоли. Выявлена прямая зависимость между подавлением внутриклеточного синтеза цГМФ и способность« сыворотки крови больных угнетать реакцию бластной трансформации лимфоцитов на митоген фитолакки и функцию естественных клеток киллеров.

8. Выявлена прямая зависимость между увеличением уровня

и в сыворотке- крови и ее способностью подавлять реакцию

бластной трансформации лимфоцитов на ФГА. Увеличение уровня 1еМ в сыворотке крови больных раком желудка,толстой и прямой кишки коррелирует с подавлением синтеза внутриклеточного цГМФ в лимфоцитах здорового донора.

Увеличение содержания циркулирующих иммунных комплексов имеет обратную зависимость со способностью сыворотки крови больных раком желудочно-кишечного тракта подавлять функцию естественных клеток киллеров,.снижать синтез интерлейкина-2,индуцировать функцию клеток супрессоров.

9. Установлено, что у больных раком желудка,толстой и прямой кишки повышено содержание гаптоглобина и церулоплазмина. При этом,увеличение уровня гаптоглобина находится в прямой зависимости со способностью сыворотки индуцировать функцию клеток супрессоров и обратную зависимость с подавлением РБТЛ на ФГА. Увеличение концентрации церулоплазмина приводит к снижению способности сыворотки крови больных подавлять функцию естественных клеток киллеров.

10. Процент выявления ревматоидного фактора в сыворотке крови больных раком желудочно-кишечного тракта не зависит от стадии заболевания.тогда как титр ревматоидного фактора увеличивается по мере прогрессирования заболевания.

11. Проведение радикальной операции у больных раком желудка, толстой и прямой кишки,приводит к нормализации содержания иммуноглобулинов, циркулирующих иммунных комплексов,гаптоглобина и церулоплазмина, ревматоидного фактора. В результате чего,сыворотка крови теряет свои иммунодепрессивные или иммуностимулирующее (относительно контроля здоровых людей) свойства. Паллиативная операция или пробная лапаротомия существенно не изменяют иммуномодулирующие свойства сыворотки крови.

СПИСОК ИЗОБРЕТЕНИЙ, СОЗДАННЫХ В ПРОЦЕССЕ РАБОТЫ НАД ДИССЕРТАЦИЕЙ

1."Способ определения активности сыворотки крови,блокирующей реакцию властной трансформации лимфоцитов". А. с. N 1400279 "ДСП".

2. "Игла для отсасывания плазмы". А. с. N 1223918.

3. "Способ определения функциональной активности индуцированных клеток супрессоров у онкологических больных". (Положительное решение о выдаче а. с. от 27.12.90 г. по заявке

N 4377129). "ДСП".

4. "Способ определения иммунодепрессивных свойств сыворотки крови при злокачественных новообразованиях". (Положительное решение о выдаче а. с. от 25. 07.90 г. по заявке N 4677945) "ДСП", (соавт.: Юаалина И. В., Гольдшмидт Н. А.).

5. "Способ определения активности сыворотки крови модулирующей функцию лимфоцитов". (Приоритетная справка по заявке

N 4853311)(соавт.: Южанина И. К ,Гольдшмидт Е А.). ' '

6. "Наконечник для удаления супернатанта из планшетов для иммунологических реакций и культур клеток". (Приоритетная справка по заявке N 4901472).

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изучение роли ревматоидного фактора в блокаде противоопухолевого иммунитета.-В кн. "Теоретические и'экспериментальные основы антиблокирующей иммунотерапии рака". ( Под ред. Н. В. Васильева) , Томск, 1982, с. 77-83.

2. Результаты промежуточных этапов экспериментальных и клинических исследований антиблокирующей иммунотерапии при раке.-В кн. "Неспецифические стимуляторы противоопухолевого иммуните-

?а", Рига, 1983,с. 145-146. (соавт.: Клячкин Б. М. .Басаргин С. Т. , "лутков А. Н. , Климов И. А., Паутова Л. Е , Дорофеев С. А., Зль-Зерт И. А.).

3. Значение блокирующих факторов в канцерогенезе и подходы с клиническому применению антиблокирующей иммунотерапии.-В кн. 'Новые подходы к вопросам иммунологии рака"(Под ред. Е В. Василь-гва). Томск, 1984,с. 47-102. (соавт.: Клячкин Б. М. .Басаргин С. Т. ,

I

плушков А. Е , Климов И. А. , Дорофеев С. А. , Паутова И. В. , Быков Ю. Е , Эльберт И. А.).

4.0 механизме образования сывороточных блокирующих факторов л методе антиблокирующей иммунотерапии злокачественных опухолей. - "Вопросы онкологии", 1985,т. 31, N 2,с. 78-84. (соавт.: Кляч,-<ин Б. М., Басаргин С. Т., Глушков А. Е , Климов И. А., Дорофеев С. А. , []аутова Л. Е ,Быков КХ Е).

5. Теоретические и экспериментальные подходы к иммуносорбции сывороточных блокирующих факторов. -В кн. "Новые подходы к вопросам иммунологии рака", (Под ред. Е Е Городиловой),Кемерово, 1986, с. 80-81.

6. Тест-система здоровых доноров для изучения иммуномодули-рующей активности сыворотки.- "IV Всесоюзный съезд онкологов", Гезисы докладов. Ленинград, 1986,с. 527. (соавт.: Железнова Л. Я.).

7. Применение реакции властной трансформации лимфоцитов здоровых доноров для изучения блокирующей активности сыворотки крови онкологических больных. -В кн. "Актуальные вопросы онкологии", Выпуск У.Кемерово, 1986, с. 58-59.

8. Иммуномодулирующие свойства сыворотки крови онкологических больных.-В кн. "Актуальные вопросы иммунотерапии опухолей", Рига, 1988,сЛ45-146. (соавт.: Южалина И. Е .Гольдшмидт Е А. .Полу-эктова С. Б.).

9. Влияние сыворотки крови, онкологических больных на синтез белка в лимфоцитах. -Экспериментальная и клиническая иммунология на Востоке страны. ( Тезисы докладов) .Красноярск, 1988, т. 2,с 43. ( соавт. Зинчук С. Ф. ,Шейбак Т. В. , Зинчук В. Г.).

10. Факторы сыворотки крови онкологических больных модулирующие функцию иммунокомцетентных клеток. -Экспериментальная и клиническая иммунология на Востоке страны. (Тезисы докладов), Красноярск, 1988,т. 2,с 57. (соавт.: Южалина И. К .Гольдшмидт Е А.)

.11. Иммуномодулирующее свойства и ммунохимический состав сыворотки крови онкологических больных. -Экспериментальная и клиническая иммунология на Востоке страны. (Тезисы докладов), Красноярск, 1988,т. 2,с 62-63. (соавт.: Гольдшмидт Е А. .Южалина И. В.

12.Сывороточные факторы и иммунный гомеостаз у онкологических больных.-Первый Всесоюзный иммунологический съезд. (Тезисы докладов) ,Сочи,1989,с. 67. (соавт.: Южалина И. В. .Гольдшмидт Е А. , Полуэктова С. Б.).

13. Влияние сыворотки крови онкологических больных на содержание циклических нуклеотидов в лимфоцитах. -Всесоюзный симпозиум "Биохимия опухолевой клетки", Минск, 1990, с. 35. (соавт.: Гольдшмидт Е А., Южалина И. В.).

14. Сывороточные факторы в сыворотке крови онкологических больных и функция лимфоцитов. -Всесоюзный симпозиум "Биохимия опухолевой клетки", Минск, 1990, с. 52-53. (соавт.: Южалина И. В. , Гольдшмидт' Е А.).

Список рационализаторских предложений,созданных в процессе работы над диссертацией 1..Устройство для хранения замороженных сывороток. Принято к

внедрению в КГМИ N 1302 16 мая 1984 г.

2. Устройство для разливания сывороток в микропробирки. Принято к внедрению в КГМИ N 1303 16 мая 1984 г.

3. Способ определения блокирующей активности сыворотки онкологических больных. Принято к внедрению в КГМИ N 1313 23 мая 1984 г. ( с соавт.)

4. Игла для удаления супернатанта из микропробирок и микроячеек планшетов. Принято к внедрению в КГМИ N 1305 16 мая 1984 г.

5. Способ определения степени блокады рецепторов лимфоцитов. Принято к внедрению в КГМИ N 1310 23 мая 1984 г.

6. Способ выявления Т-супрессоров и Т-хелперов. Принято к вне дрению в КГМИ N 1311 23 мая 1984 г.

7.Способ дополнительной иммунодиагностики злокачественного новообразования. Принято к внедрению в КГМИ N 1312 23 мая 1984 г.

8.Способ приготовления донорских лейкоцитов,меченных радиоактивным хромом, для серийных иммунологических исследований. Принято к внедрению в КГМИ N 1330 27 сентября 1984 г.

9. Способ забора супернатанта из микропланшетов при радиоиммунологических исследованиях. Принято к внедрению в КГМИ N 1331 27 сентября 1984 г.

10. Способ выявления иммуномодулирующей активности сыворотки. Принято-к внедрению в КГМИ N 1332 27 сентября 1984 г.

11. Способ выявления лимфокинов неиммуноглобулиновой природы. Принято к внедрению в КГМИ N 1339 27 сентября 1984 г.

12. Способ постановки теста угнетения прилипания лейкоцитов с радиоактивным хромом. Принято к внедрению в КГМИ N 1334 27 сентября 1984 г.

13. Применение мембранных фильтров ФМ - 02 для реакции властной трансформации лимфоцитов. Принято к внедрению в КГМИ

N 1409 2 марта 1985 г. (с соавт.)

14. Устройство для удаления клеток из микропланшетов на фильтр.

• Принято к внедрению в КГМИ N 1410 3 марта 1985 г. ( с соавт.)

15. Применение мембранных фильтров ФМ-02 для серийного определения реакции бластной трансформации лимфоцитов. Принято

к внедрению в КГМИ N 1424 29 марта 1985 г. (с соавт.)

16. Устройство для создания давления воздуха в мембранных филь трах. Принято к внедрению в КГМИ N 1426 29 марта 1985 г.

17. Способ профилактики и терапии трансфузионных реакций и осложнений. Принято к внедрению в КГМИ N 1446 5 июля 1985 г. (с соавт.)

18. Способ определения блокирующей активности сыворотки крови. Принято к внедрению в КГМИ N 1492 10 марта 1986 г.

19. Способ определения сывороточно-индуцированной супрессорной клеточной активности. Принято к внедрению в КГМИ N 1493

10 марта 1986 г.

20. Устройство для контроля режима работы термостата. Принято к внедрению в КГМИ N 1563 13 июня 1986 г. (с соавт.)

21. Устройство для дозирования остаточного объема жидких реагентов в лабораторной посуде. Принято к внедрению в КГМИ N 1690 25 июня 1987 г. (с соавт.)

22. Устройство для хранения биологических препаратов. Принято к ? внедрению в КГМИ N 1692 16 июля 1987 г. (с соавт.)

23. Способ определения циркулирующих' иммуных комплексов. Принято к внедрению в КГМИ N 1693 25 июня 1987 г. (с соавт.)

24. Способ определения подклассов иммуноглобулина 6. Принято к внедрению в КГМИ N 1694 25 июня 1987 г. (с соавт.)

25. Способ определения циркулирующих иммуных комплексов, содержащих различные подклассы иммуноглобулина Б . Принято к

внедрению в КГМИ N 1695 25 июня 1987 г. (с соавт.)

26.Способ определения клеточной супреесорной активности в сме шанной культуре лимфоцитов. Принято к внедрению в КГМИ N 1723 9 октября 1987 г.

27. Способ определения клеточных рецепторов к иммуноглобулинам. Принято к внедрению в КГМИ N 1724 23 октября 1987 г. (с соавт. )

28. Способ проведения реакции властной трансформации лимфоцитов. Принято к внедрению в КГМИ N 1725 25 октября 1987 г. (с соавт.)

29. Способ определения факторов,вызывающих властную трансформацию лимфоцитов. Принято к внедрению в КГМИ N 1827 28 декабря 1988 г. (с соавт.)

30.Способ дополнительной иммунодиагностики злокачественных новообразований. Принято к внедрению в КГМИ N 1828 28 декабря 1988 г. (с соавт.)

31. Способ диагностики иммунопатологических состояний. Принято к внедрению в КГМИ N 1831 4 января 1989 г. (с соавт.)

32.Способ определения активности сыворотки крови модулирующей функцию лимфоцитов. Принято к внедрению в КГМИ. N 1892 29 ок тября 1990 г. (с соавт.)