Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Супрессия НК-активности клеток крови у ликвидаторов последствии Чернобыльской катастрофы

РГБ 0й

1 В №

На правах рукописи

Лыков Александр Петрович

СУЯРЕСС-Я ВЛ-АЯТКВНОСТИ ЮЕТОК НРОВИ У ЛИКВИДАТОРОВ ПОСЛЕДСТВИИ ЧЕРНОШШЖОЙ КАТАСТРОФУ.

14.00.36. Аллергология и иммунология.

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук.

Новосибирск - 1996

Работа выполнена в Институте клинической иммунологии СО РАМН и Сибирском центре радиационной патологии.

Научный руководитель член-корреспондент РАМН, профессор, д.ы.н. В.А.Козлов

Научный консультант к.м.н., ст. н. с. Т.В.Михеенко Официальные оппоненты:

д.ы.н., профессор А.И.Аутеншаос д.м.н. В.В.Абрамов

Ведущее учреждение Институт фармакологии ТНЦ СО РАМН

Защита диссертации состоится "_" _ 1996 г. в

"_" часов на заседании диссертационного совета Д. 001.01.01

Института клинической иммунологии СО РАМН по адресу: 630091, г.Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института клинической иммунологии СО РАМН.

Автореферат разослан "_"_ 1996 г.

Учёный секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук

ОЩЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА P/SOÏÛ. AKryajaкость теми, в последнее время неуклонно возрастает значимость исследований механизмов воздействия комплекса факторов радиационных катастроф (КФРК), вкпочавзих в себя малые дозы ионизирующей радиации, стресс, ксенобиотики и др., на гемопоэа и иммунную систему человека. Это обусловлено следующими обстоятельствами. Во-первых, возросло число самих катастроф на АЭС и предприятиях по хранению и переработке ядерного топлива. Во-вторых. в связи с этим, увеличилось число лиц, подвергшихся воздействию КФРК. К одной из наиболее интересных сеточки зрения науки и практики относится группа лиц, принимавших участие в ликвидации последствий аварии на ЧАЭС в 1986 - 87 г.г. (ликвидаторы).

По существующему мнению, одним из отдалённых последствий воз-. действия КФРК на организм человека может быть, развитие онкоге-матологических заболеваний ЮакК.П.. 1995; Ярилин A.A., 1985; Katata Т., 1993]. У лиц, подвергшихся радиационному воздействию в результате Чернобыльской катастрофы через 2,5 - 3,0 года выявлена тенденция к увеличение частоты лейкозов, а у лиц, проживающих в Чернобыльском регионе лимфом ассоциированных . с вирусом Эбштейн - Барр, рака щитовидной железы, а также других солидных опухолей [Бутенко З.А., 1992; Глузман Д.Ф.. 1992; Дударев A.A., 1993]. У ликвидаторов на первый план среди патологических состояний организма выходят заболевания нейроэндокринной системы и органов пищеварения, а также персистенция хронической инфекции, различные неопухолевые формы соматической патологии (Артамонова И.О., 1993; Фролов В.М., 1993). Известно, что в патогенезе этих заболеваний важная роль отводится иммунной системе [Кетлинский С.А., 1992; Корнева А.Т., 1991 и др.]. При воздействии EŒPK на организм человека возникают существенные изменения в функционировании клеток иммунной системы, что способствует развитию недостаточности иммунитета, аллергических болезней, увеличению частоты рецидивов имеющихся хронических заболеваний организма и нарушению нервно-психического состояния [Артамонова Н.О., 1993; Вельтищев Ю.Е., 1991].

согласно данным литературы [Ломакин U.C., 1990; Robertson M.J., 1990], важнейшим звеном противоопухолевой защиты организЧв

является спонтанная клеточная цитотоксйчность. В реализации данного феномена, помимо моноцитов/макрофагов (М/Мф), Т-лимфоцитов важная роль отводится натуральный киллерным (НК) клеткам. Помимо этого, данные клетки и, в частности НК, принимают участие в процессах цитолива вирусинфицированных клеток организма, а также внутриклеточных паразитов, бактерий, в регуляции гемопоэза и регуляции силы иммунного ответа организма [Ломакин Ы.С., 1990; Се-ьгененя И.Н., 1991]. С другой стороны, при воздействии на орга-нивм КЕРК изменяется функциональная активность клеток иммунной системы. Так ряд авторов выявили у ликвидаторов нарушения функций НК-клеток, №Щ, Т-лимфоцитов, а также дефицит цитокинов. Крою этого, черев 5-6 лет у 50Z обследованных ликвидаторов выявлены аберрантные формы лимфоцитов (фенотипически это либо НК-клетки, либо Т-лим&оцкты) [Аклеев A.B., 1991; Зак К.П., 1995; Мирошниченко Л.В., 1994 и др.]

Проведенные нами ранее исследования иммунного статуса у ликвидаторов выявили снижение НК-активности клеток крови, сочетающееся с другими изменениями в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета. Подученные данные согласуются с результатами исследований других авторов [Аклеев A.B., 1991; Артамонова Н.О., 1993; Беляков И.М., 1993 и др.], однако механизмы лежащие в основе супрессии НК-активности не изучены.

Таким образом, представлялось актуальным исследовать механизмы супрессии НК-активности клеток крови у ликвидаторов. Да» работы. Исследовать механизмы супрессии НК-активности клеток крови у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС. Задачи нссяадавашю.

1.Оценить изменения в популяции основных эффекторов противоопухолевой резистентности организма (CD3+, CD8+, CD16+, БГЛ, U/ДО) у ликвидаторов.

2.Исследовать НК-активность клеток крови у ликвидаторов и доноров.

3.Изучить роль М/Мф, Т-супрессоров в изменении НК-активности. Исследовать продукцию интерлейкина (ИЛ)lß, 2 и фактора некроза опухолей (MO)ot мононуклеарами крови и их роль в модуляции НК-активности.

5.Изучить возможность коррекции НК-активности иммунотропными ве-

- 3 -

цествами в тест-системе in vitro. Ейучко-пргяпкосквл гвач^гоеть работа. Изучены механизмы леивдаэ в основе супрессии НК-активности клеток крови у ликвидаторов аварии на ЧАЭС. Выявлено, что ведущая роль в процессах подавления НК-активности принадлежит М/Щ>, Т-супрессорам, реализузхзЕ! своё влияние через простагландшш и цитокины на НК-клетки. У ликвидаторов отмечено снижение продукции ИЛ10, 2, являющихся ростовьпш факторами клеток иммунной системы, в том числе и НИ. что способствует развитию клеточного дефицита. При изучении суб-популяционного состава МНК крови у ликвидаторов определено уменьшение количества Т-лимфоцитов с преобладанием Т-супрессоров (Тс) крови, увеличение количества 11/Щ», что также подтверждено исследованием кроветворения in vitro комштированных клеток крови, где выявлено повышение функционально зрелых предшественников гранулоцитарномакрофагального ряда в очагах роста и увеличение роста клеток эритроидного ряда. Хотя необходимо сказать, что нами выявлено снижение общего количества кластеров и колоний клеток гранулоцитарномакрофагального ряда, в сравнении с донораки. При морфологической окраске клеток из очагов роста колоний выявлено преобладание М/Мф. Помимо этого, у ликвидаторов установлено повышение цитолитической активности клеток крови в отношении НК-резистентной опухолевой линии Raji, что изменило наше представление о роли М/Мф и Т-лимфоцитов в процессах противоопухолевой резистентности организма у ликвидаторов.

Таким образом, выявленные изменения в иммунной системе у ликвидаторов дают новое понимание причин способствующих развитию супрессии НК-активности у данного контингета. Основные положения, выносимые на зациту.

1.М/Мф, Т-супрессоры играют основную роль в супрессии НК-активности, через простатландиновый и цитокиновый механизмы.

2.Изменения в иммунной системе у ликвидаторов аварии на ЧАХ сохраняются в течение длительного времени с момента воздействия на организм КФРК.

3.Одним из методов коррекции НК-активности у ликвидаторов является цитокинотерапия. Объём и структура диссертации. Работа состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, реауль-

- -ft -

татов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Диссертация содержит_страниц печатного текста,

_рисунков и_таблиц. Список литературы включает 272 источника. Н8 них 99 отечественных и 173 иностранных авторов. Anpoöaigm psSoru а вуйяшцж. Полученные данные наложены и обсуждены на 1-ом Международном конгрессе по иммунореабилитации (г.Сочи, 5-9 коля,1994); на отчётной сессии Интститута клинической иммунологии СО РАМН (г. Новосибирск, 1994). Апробация диссертации состоялась на семинаре отдела клинической иммунологии Интститута клинической иммунологии' СО РАМН 29 ноября 1995 г. По теме работы опубликовано 7 печатных работ, в том числе 5 sa рубежом.

£s38£S3aEi и катода кссавдовжиня.

В работе проведено обследование 150 человек, в том числе 100 ликвидаторов последствий Чернобыльской катастрофы ("ликвидаторы") и 60 здоровых'доноров. К группе ликвидаторов отнесены лица, работавшие на ликвидации последствий аварии на ЧАЭС в 1986 -1987 г.г. В группу обследованных ликвидаторов вошли мужчины в возрасте от 25 до 50 лет с клиническими проявлениями вегето-со-судистой дистонии, астено-невротического синдрома, энцефалопатии смешанного генеза, остеохондроза ыежпозвонковых дисков позвоночника и наличием: хронической патологии органов бронхолёгочной системы (неспецифические заболевания лёгких, бронхиты) и желу-дочнокишечного тракта (гастродуодениты, эррозивные гастриты, язвенная болезнь, холециститы и холецистопанкреатиты), а также диффузного увеличения щитовидной железы без нарушения функции, доза радиационного облучения (согласно официальных документов) составила от 0,15 до 60 сГр. Клинический подбор пациентов проводили врачи Сибирского центра радиационной патологии.

Мснонуклеарные клетки (UHR) крови получали традиционным методом на градиенте плотности фиколл-верографин в модификации В.С.Кожевникова из венозной гепаринизированной крови. МНК куль-тивироавли в среде RFMI 1640 ("Вектор") с добавлением 5 мЫ Hepes-буфера, 0,3 мг/мл L-глютамина, 100 мкг/мл гентамицина (Flow) и 102'фетальной телячьей сыворотки ("Вектор"), в стеклянных флаконах объёмом до 10 мл или планшетах для иммунологических исследований (завод полимеров, г.Санкт-Петербург) при 37° С в

увлажненой углекисло-воздушной атмосфере (5% СОг).

Удаление И/Щ крови иэ культуры МКК проводили адгезией на стекле по методике Т.В.Михеенко.

Для получения лимфокгашктивироваиных киллеров (ЛАК) лимфоциты инкубировали с рекомбинантныы 11Л2 в дозе 100 ЕД/ыл (Takeda Pharmaceutical Со.) в течение 5 дней.

Содержание в популяции МНК НК-клеток, Т-лимфощггов и ш: субпопуляций проводили с использованием моноклональных антител фирмы "Сорбент ТМ" ЛНК16; ЛТЗ, 4, 8 (соответственно CD16, CD3, CD4, CD8 - позитивные клетки) ¡методом иммунофшоресценщщ. Количество БГЛ (больших гранулярных лимфоцитов) исследовали морфологически по методике предложенной Л.П.Киндеельским в своей модификации (в нативном мазке из ЫНК крови). При этом одновременно определялось содержание Ы/Цф в популяции UHR.

Мембраноцнтотоксическлй тест проводили по методу Неяаока в модификации Ы.Т.Рыкова. Соотношение клеток-эффекторов (КЭ) и клеток-мишеней (КМ) 50:1. В отдельной серии экспериментов исследовали влияние на уровень НК-активности: аспирина, индометацина (10 и 1 мкг/мл, соответственно, Merck), Т-активина (10 мкг/мл, "Биомед"), димедрола (10 мкг/мл, Химфармзавод, г.Новосиб1фск), ИЛ2 (50 ЕД/мл, Takeda Pharmaceutical Co.), г-интерферона (ИВ®) (100 ЕД/мл, Otsuka Pharmaceutical Co.), а также влияние удаления из культуры ЫНК U/Щ, и длительного совместного культивирования КМ и КЭ в течение 72 часов. Процент цитотоксичности рассчитывался по следующей формуле: ПЦ- (1 - опыт/контроль) х 100Z, где в опыте - количество имп/мин в смеси КМ и КЭ, а в контроле - количество имп/мин одних КМ.

В качестве эффекторов цитотоксической реакции были использованы свежевыделенные ЫНК крови. В качестве клеток-мишеней в работе использованы клетки из перевиваемых линий: эритромиело-лейкоза - К 562 и лимфомы Беркитта человека - Raji.

КЭ (104) смешивали с равным количеством КМ , инкубировали в полной культуральной среде в течение 5 минут при 2Г?° С и осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течении 5 минут. Надосадочную жидкость частично убирали, осадок осторожно ресуспендиро-вали и подсчитывали в нативных препаратах число образовавшихся коньюгатов на 100 лимфоцитов.

- б -

Изучение супрессорной активности спонтанных и митогенинду-цкрогаяных (Кон А 25 мкг/ил, Sigma, в течение 48 часов) Т-лимфоците оценивали.по способности клеток-эффекторов ингибировать интенсивность пролнферативного ответа на митоген в культурах ЫНК крови по методике Щубннского Г.З. Индекс супрессии рассчитывали по следующей формуле: ИО-(1 - опыт/контроль) х 1002.

Определение количества ИЛ18, ®Юк в супернатантах от ин-тактиых и стимулированных ЛПС (дериват из Е. coll 026:В6 в дозе 10 икг/мл) ЫНК проводили юл!укоферь5ентным анализом с использованием тест-систем (Институт особо чистых препаратов, г.С - Петербург):

Источником активности ИЛ2 служили супернатанты от мито-ген-шщуцнрованных (Кон А, 10 мкг/мл . Sigma) и не индуцированных ЫНК крови, инкубированных в течение 48 часов. Тестирование ИЛ2 активности проводили в культуре лимфобластов доноров (ФГА 10 uxr/цл, Sigma, в течение 6 дней).

Стандартная обработка вариационных рядов включала подсчёт гначений средних арифметических величин (X) и ошибок средних (Р.). В таблицах и рисунка данные представлены в виде XfcSx.

Статистическая значимость отличий вариационных рядов оценивалась с немощью U - критерия Вилкоксона-Ыанна-Уитни, корреляционной взаимосвязи по методу Спирмена.

Результаты ксслодозатгй н их обсу/гдещ».

0^5Жа ЯК-оззнггосга кяетоя прав:! у лзиядатороз и дзноров.

В результате изучения НК-активности клеток крови у ликвидаторов, выявлено её достоверное снижение , в сравнении с донорами (21,67 + 1,742 и 47,53+ 1,782, р < 0,05; соответственно). При более глубоком анализе значений НК-активности у ликвидаторов, общая группа состояла из двух подгрупп: 1). с сохраненной НК-активностью, на уровне близком к значениям НК-активности у доноров ,(332 обследованных пациентов) и 2) со сниженной (672 обследованных) (Рис. 1). Следует отметить, что среди доноров в 202 случаев (р < 0,01) выявлено снижение НК-активности (менее 242, на основании нормативных значений X ±-26).

Выявленное снижение НК-активности клеток крови у ликвидато-

ров носит стойкий характер более чем у 65Х обследованных пецкэп-тов при наблюдении в течении 3-х лет. Однако, у части пацггэнтоз с низкой НК-активностью (в 20Х) при повторных исагедовапкяг: явлено повыпение цитотоксической активности НК-клеток, в то хе время у части ликвидаторов (в 15Х) с сохранённой активностью НК-клеток, определялась депрессия лизиса клеток-мкгеней. Поы:аю этого, нами выявлена корреляционная взаимозависимость уровня НК-активности клеток и наличия патологии щитовидной яелееы у данных пациентов (г- - 0,33; р < 0,05; п-49). Необходимо такте отметить тот факт, что неяду подгруппами ликвидаторов ¡агеется различие и по времени пребывания на ЧАЭС.

Ржунсет 1. ПС-аяткзксса гсготея грс=а у г^сгдатс^гз и псетют.

Следующим этапом работы явилось исследование цитотоксической активности ШЩ, Т-лимфоцитов. Полученные данные, оценки цитолиза клетками крови клеток линии Йа31 (8,8 ± 1,52, р < 0,05 с донорами; 17,2 ±5,9£, р < 0,01 с донорами и 6,0 ± 1,01, соответственно: ликвидаторы с сохранённой, сниженной НК-активностью и доноры), указывают на достоверно повышенную цитолитическую активность М/Мф, и, по-видимому, Т-лимфоцитов у ликвидаторов, в сравнении с донорами, что можно расценивать, как проявление компенсаторных реакций организма.

Следовательно, воздействие КФРК на организм в целом и, особенно, на иммунную систему, привело к развитию более чем у 2/3

- а -

обследованных ликвидаторов иммунодефицита по НК-клеткам и к активации других клеток эффекторов иммунного ответа (Ы/Щ>, Т-лимфоциты).

АВрвдаст» твгазсхва вхзтоа крот, об,вгууад^» сгхгсй шпшяшспв.

Известно, что при дефиците НК-клеток в организме наблюдается увеличение частоты онкологических, бактериальных, вирусных заболеваний [Лоиакин Ы.С., 1990], обусловленное снижением резистентности организма. Установлено, что подгруппы ликвидаторов су-Еественно отличаются по суОпопуляционному составу. Так нами выявлено повышение С016+ -клеток крови у ликвидаторов с низкой НК-активностью, в сравнении с донорами (12,76 ±-1,2521 и 9,25-+ 0,75%; р < 0,01, 'соответственно). В токе время, по количеству БГЛ данная группа ликвидаторов не отличалась от доноров. Но интересен тот факт, что в группе ликвидаторов с сохранённой НК-ак-тивностью определено снижение количества БГЛ, в сравнении с донорами (7.72 ± 0,75% и 10,6+ 0,9%; р < 0,01, соответственно). Не исключена возможность того, что повышение количества СБ16+ -клеток у ликвидаторов с низкой НК-активностью, обусловлено другими югеткаш! ищунной системы, также экспрессирующими данный антиген (Т-лимфоциты, Ы/Ыф).

Следует указать на то, что увеличение количества С016+-клеток крови в группе ликвидаторов с низкой НК-активностью сочетается с уменьшением количества Т-лимфоцитов, дисбалансом субпо-пуляционного состава Т-лимфоцитов, увеличением количесвта Ы/Щ>. Такие иемененкя в составе шнонуклеаров крови могут быть обусловлены иммунорегуляторным влиянием НК-клеток крови, способных влиять на процесс дифференцировки и созревания СКК, на созревание тимоцитов, а также на пролиферации Т-лимфоцитов.

¿¿совадовша» щзхяш дгшрсесгги ИК-аяпшюстн кхэтоя крона у хивадзтороз.

При оценке коныогатобразующей способности мононуклеаров крови у ликвидаторов обнаружено её статистически достоверное снижение (30,5 + 2,8%; 24,47 ± 1,2% и 37,0 ± 3,0%, сооветственно ликвидаторы с сохранённой и сниженной НК-активностью, и доноры),

- а- -

в сравнении с донорами. Причиной сниженной способности к образованию коньюгатов НК могут быть нарушения в структуре рецепторов клеток Сйербин Е.А., 1989], результат воздействия на НК-клетки продуктов, продуцируемых другими клетками иммунной системы и, в частности, Ы/Мф и Тс, например ПГЕг-

Известно, что М/Щ способны подавлять литическую активность НК [Ломакин Ы.С., 1990]. При удалении из культуры МНК М/Мф, обнаружено: достоверное повышение НК-активпости (In vitro) в 2 раза з группе ликвидаторов с низкой шстивностью НК-клеток, а в группе ликвидаторов с сохранённой НК-активностью и у доноров на 28Х, и 17% от исходного уровня, соответственно (Рис. 2).

Ржулея 2. Зггнпк» гл ургпзпэ ПЗ-сжзеессти £3£С крсЕЯ yzar.c.zzi гз иугьнура агатса претя У/ПЗ н добазггкка з ггупгу-ру геэтоя ПГОг.

Эти данные подтверждаются исследованиями НК-активности клеток крови у ликвидаторов в присутствии ингибиторов циклооксиге-назного пути метаболизма арахидоновой кислоты: иидоыетацина и аспирина (Рис.2).

Следовательно, одной из причин снижения НК-активности клеток крови у ликвидаторов является ПГЕг, продуцируемый, в основном, Ы/Мф.

Из факторов гуморальной природы, способных модулировать НК -активность, особою внимание следует обратить на ИЛ1В, ФНОа и ИЛ2 (повышают: НК-активность клеток крови и генерацию ИЛ2 - зависимого пула ЕКК, экспрессию рецепторов к ИЛ2) [Кетлинский

С.A.-, 19S23. При оценке количества MIß и ФНОа (Рис. 3) в супер-натантах ИНК крови у ликвидаторов выявлено достоверное подавление продукции ИЛ10, в сравнении с донорами. В отношение же продукции ФНОа у ликвидаторов выявлена противоположная картина: повышение продукции нестимулированными ЫНК крови и незначительное снижение его продукции при активации клеток крови антигеном, в сравнении с донорами.

Рксукоп 3. Dpagcrss^si 1Ш.В к с::Оа t^Ht ироги у л^шадатароз и до-

ЕфОЗ.

Таким образом, у ликвидаторов выявлен дисбаланс в продукции клетками крови основных монокинов. что может также способствовать процессам снижения активности НК-клеток.

Помимо и/Мф супрессивным действием на уровень цитолиза КМ в организме человека и животных, обладают Тс [Ломакин М.С., 1990]. Поэтому следующим пунктом работы явилась оценка функциональной активности Т-лимфоцитов у ликвидаторов. Полученные данные исследований указывают на высокую супрессорную активность Т-лимфоцитов. Так, выявлено снижение пролиферативного ответа ЫНК крови доноров в присутствии нестимулированных ЫНК ликвидаторов на 60% и 502 (р < 0,01), а в1 присутствии стимулированных ЫНК на 752 и 622 (соответственно для ликвидаторов с сохранённой и сниженной НК-активностью), в то время, как у доноров не определялась спонтанная супрессорная активность, а митоген-индуцированная была на уровне 782.' Следует отметить тот факт, что для ликвидаторов характерам признаком является высокая функциональная активность

- а -

неспецифических спонтанных супрессорных клеток крови выявленных по методике Шубинского Г.З., и незначительный прирост её в мито-гениндуцырованных клетках, обусловленный формированием КонА индуцированных Тс клеток.

Таким образом, у ликвидаторов выявлена повышенная активность Тс клеток крови в отношении развития иммунного отгзта другими иммунокомпетентными клетками организма, в том числе и НК.

Другой субпопуляцией Т-лиуфоцитов, такие обладающей рогуля-торным влиянием на активность НК являются Т-хелперныэ клетки крови через продукщяз ИЛ2. При определении активности ИЛЗ в су-пернатантах МНК гфови у ликвидаторов отмечено ей статистически достоверное снижение в митоген-индуцированном тесте, в сравнении с донорами (Рис. 4).

Рисуйся 4. Анткзиоста ШЗ в супзряахапгах КЗ врсзи у роз я допсрсз.

Падение продукции ИЛ2 у ликвидаторов может Сыть результатом: нарушения соотношения Тх I и II классов, снижения количества CD4+ -клеток крови у данного контингента лиц, а также вероятно в результате негативного влияния ПГЕг на продукцию Txi ряда цитокинов, в том числе и ИЛ2 [Betz М., 1994].

Учитывая наличие дисбаланса в составе иммунокомпетентных клеток у ликвидаторов, особенно увеличение пула М/Мф, нами проведено исследование колониеобразования In vitro комммитированны-ми предшественниками гранулоцитарномакрофагального (ГМ) и зрит-роидного (Э) ростков. Выявлено увеличение количества колиниеоб-разующих единиц эритроцитов и снижение колониеобразования FM, в

- ß-

сравнении с донорами (р < 0,01), сочетающееся с увеличением численности кластеров в очагах роста. Таким образом, у ликвидаторов выявлены нарушения геиопоээа на уровне кошитированных предсест-венкиков Г1! и Э ростков, что тагасе мсекет играть важную роль в процессах снижения НК-активности клеток крови.

Сггяздавашю 1Ш2, гШ? и хзхареявзтяпг срсд^лгог

Ел уровень ПХ-авшБЗОСЗя у лхяшдээгороа и ppzopos.

ИЛ2, тИНФ отводится важная„роль в осуществлении цитолити-ческого действия киллерных клеток крови на клетки-шшени [Кетлинский С.А., 1992]. Поэтому нами проведены исследования по изучению влияния данных цитокинов на НК-активность клеток крови. В результате чего в экспериментах с инкубацией в течение 16 часов культуры клеток (ШК крови и К 562) с ИЛ2 и гИНФ у доноров и ликвидаторов с сохранённой НК-активностью обнаругсено падение ци-тотогезкческого потенциала ШК крови, а для ликвидаторов со сниженной НК-активность её повышение (Рис. 5). Причиной этого может быть, с одной стороны, низкая чувствительность ЫНК крови, либо недостаточность срока инкубации, а с другой стороны - известно, что ИНФ способны защищать КМ от лизиса НК-клетками [Ломакин Ы.С., 1990].

Рксуиок 5. Ехияякэ Ш2, тЕЕЗ п удасегесгкя срслси сазмсстаоЯ nyxi-ташгцкл 12S с К 5S2 ка КК-акткЕНОСть у лгяоэдагсраз и доноров.

Поэтому в следующей серии экспериментов вами был удлинён срок совместной инкубации КЫ и КЭ (до 72 часов) в отсутствие и при добавлении в культуру клеток цнтокиноэ (ИЛ2, у№5>) (Рис. 5). Вероятнее всего, под влиянием антигенов КЫ генерируется клон НК-клеток, способных эффективно дотировать данные КМ [Ломакин М.С., 1990], а добавление к ним ИЛ2, гШ® повышало уровень цитолиза КЭ КМ, особенно в группе ликвидаторов с нивкой НК-актив-ностыо.

Учитывая тот факт, что у ликвидаторов выявлено снижение продукции ИЛ2 мононуклеарами крови, а такие различная чувствительность ЫНК к экзогенному ИЛ2, нами исследована ЛАК-активность клеток крови у данной группы пациентов. \ В результате установлено, что ЛАК-активность у ликвидаторов достоверно превышает значения её у доноров на 28,52 и 502 (соответственно, ликвидаторы с низкой и с сохранённой НК-активностью) (Рис. 5).

Помимо этого, нами исследовалось влияние на НК-активности in vitro Т-активина и димедрола. Выявлено, что Т-активин усиливал НК-активность клеток крови у ликвидаторов в группе со сниженным уровнем цитолиза КЫ (в 2 раза, р < 0,01), а в группе ликвидаторов с сохраненной НК-активностью и у доноров, наоборот, выявлено незначительное снижение уровня цитолитического потенциала ЫНК крови (на 132 и 162, соответственно). Причиной данного иммуномодулирующего эффекта Т-активина может служить тот факт, что Т-активин эффективен лишь при низких соотношениях КЭ и КЫ, поэтому его влияние на уровень цитолиза у доноров и у ликвидаторов, с сохранённой НК-активностью не определялось, а повызение цитолиза в группе ликвидаторов с низкой активностью НК - клеток можно объяснить повышением продукции ИЛ2 Тх, способного усиливать цитотоксический потенциал НК.

В отношение же эффекта димедрола на уровень НК-активность выявлено следующее: повышение цитолитического потенциала у ликвидаторов с сохранённой НК-активностью и у доноров на 512 и 17Z (соответственно) , и падение её у ликвидаторов с низкой НК-активностью на 322. Вероятнее всего, это обусловлено разной чувствительностью ЫНК к действию димедрола, а также наличием равных механизмов влияния аитигистаминных препаратов на фукциональную активность клеток-эффекторов организма.

Таким образом, у ликвидаторов через 8-9 лет с момента участия в ликвидации последствий аварии на ЧАЭС, сохраняются нарушения в функционировании клеток иммунной системы, в том числе и НК. Выявлено неоднозначное влияние КФРК на уровень НК-активности 12SC крови у ликвидаторов, приводящее к стойкому снижения её у 65% обследованных пациентов. В тоже время, у ликвидаторов выявлено развитие компенсаторно повышенной активности М/Мф и, по-ви-димоьу, Т-лимфоцитов крови. Главная роль в супрессии НК-активности ЫНК крови отводится Ы/Мф и Тс, реализующих своё влияние через цитокиновый и простагландиновый механизмы. Выявленные причины супрессии НК-активности ЫНК у ликвидаторов способствуют по-НЕыгякю развития патологии у данных пациентов, выработке тактики лечения имеющихся заболеваний, а также вероятности прогнозирования развития патологических процессов в организме данных пациентов.

оышщз

1.У ликвидаторов в 67% случаев выявлено снижение НК-активности ЫНК крови,. носящее стойкий харктер на протяжении 3-х летнего периода наблюдений, сочетающееся с повышением цитолитического потенциала Ы/Ыф, Т-лимфоцитов.

2.Ц/Кф, Т-супрессоры играют ведущую роль в супрессии НК-активности клеток крови у ликвидаторов, так как удаление Ы/Ыф из культуры мононуклеаров, добавление ингибиторов простагландин-синтетазы (аспирина, индометацина) в тест-систему, приводит к увеличению цитолитической активности НК-клеток.

3.В патогенезе клеточного иммунодефицита у ликвидаторов основная роль отводится снижению продукции ИЛ10 и ИЛ2, приводящее к депрессии функций , опосредуемых НК-клетками.

4.У ликвидаторов in vitro выявлено преобладание эритромиелопоэза , на что указывает активация роста эритрона и изменения в росте коымитированных клеток предшественников гранулоцитарномак-рофагального ряда.

5.Имыуномодулирующее действие ИЛ2, гИНФ, Т-'активина, а также длительного совместного культевирования клеток-эффекторов с клетками-мишенями, приводит к повышению НК-активности клеток крови.

6.Данные исследования супрессии НК-активности клеток крови у„ ликвидаторов указывают на стойкие нарушения в иммунной системе с вовлечением гуморальных и клеточных механизмов.

Список опубликованных работ:

1.Нихеенко Т.В., Набиуллин P.P., Лыков А.П. Изменение иммунного статуса как следствие воздействия факторов Чернобыльской аварии //Тезисы 1 съезда иммунологов России, Новосибирск, 1992. -С. 807.

2.Лыков А.П., Ыихеенко Т.В. Депрессия киллерной активности клеток крови у ликвидаторов последствий Чернобыльской ютпстрс?ы //Сборник трудов молодых ученых СО РАМН, Новосибирск, 1994 -С.34-37.

3.Lykov А.Р., Mikheenko T.V. Prostaglandin E-depsndont mechanisms of blood NK coll activity decrease in persons nho abolished Chernobyl accident consequences //9th Int. Congress of Prostag. Florence (Italy), June 6-10, - 1994. - p.56.

4.Mikheenko T.V., Lykov A.P., Ysrnaja V.S. Late radiation effects aid lmmunopathological syndrome //Int. J- of Inrnunorehabi111tation. - 1994. - N1. Supp. - p.238.

5.Mikheenko T.V., Lykov A.P. Health in humans who abolished Chernobyl accident consequences //8th Int. Congress of Muo. Immunol., San Diego, California, Jully 16-20, 1995.

6.Lykov A.P., Mikheenko T.V. The factors of blood NK cell activity depression in liquidators of Chernobyl accident //9th Int. Congress of Innunol., San Francisco, Californla.Julv 23-29, 1995. - p.488-2891.

7.Lykov A.P., Mikheenko T.V.Liquidators of Chernobyl accident are characterized by changes both in CD8+ cell quantities and functions //9ty Int. Congress of Immunol., San Francisco, July 23-29, 1995. - p.411-2436.

Зак.19. Тир.80. Формат 60x84Vl6- Печ. Бумага офсетная №0 Подписано в печать

Типография СО РАМН, Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 9, 1995.