Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Структурные преобразования в системе лимфоидных органов при действии на организм экстремально низких температур и в условиях коррекции адаптивной реакции полифенольными соединениями растительного происхождения

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НОВОСИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

^ М ца правах рукописи

ОБУХОВА Лидия Александровна

СТРУКТУРНЫЕ ПРЕОБРАЗОВАНИЯ В СИСТЕМЕ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ ПРИ ДЕЙСТВИИ НА ОРГАНИЗМ ЭКСТРЕМАЛЬНО НИЗКИХ ТЕМПЕРАТУР И В УСЛОВИЯХ КОРРЕКЦИИ АДАПТИВНОЙ РЕАКЦИИ ПОЛИФЕНОЛЬНЫМИ СОЕДИНЕНИЯМИ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

14.00.02 - анатомия человека

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Новосибирск -1998

Работа выполнена в Институте клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения РАМН (Новосибирск)

Научный консультант: Академик РАМН доктор медицинских наук, профессор Ю.И.Бородин

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор П.В.Дунаев

член-корреспондент АН ВШ доктор медицинских наук, профессор В.Д.Новиков

доктор медицинских наук, профессор В.С.Овченков

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт общей патологии и экологии человека СО РАМН

Защита диссертации состоится " " _1998 г.

в_часов на заседании диссертационного совета Д 084.52.02

Новосибирского медицинского института (630091, Новосибирск, Красны проспект, 52)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирског медицинского института

Автореферат разослан "_"_1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

А.Н.Машак

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Изучение особенностей процесса адаптации животного организма постоянно изменяющимся условиям окружающей среды является туальной проблемой современной медико-биологической науки, смотря на значительный прогресс, достигнутый в области адаптологии азначеев В.П., 1980; Меерсон Ф.З., 1981, 1993; Горизонтов П.Д. и др. 83; Панин Л.Е., 1983; Авцын А.П., и др. 1985; Фурдуй Ф.И., 1986; 1ексеев В.П., 1993; Агаджанян Н.А., 1994). Это обусловлено все зрастающей и усложняющейся зависимостью между процессами внедеятелыюсти человека и животных и влиянием на них югочисленных средовых факторов (Бородин Ю.И., 1994-1998).

Актуальность проблемы адаптации к холоду определяется той жной ролью, которую температура играет в жизни любого живого ганизма. Зависимость от температуры окружающей среды большинства оцессов жизнедеятельности делает ее важнейшим экологическим втором, приспособление к которому может иметь решающее значение я выживания организма (Слоним А.Д., 1979,1986; Иванов К.П., 1984; 1ернюк Н.Д., 1992). Изучение биологических эффектов действия холода в сперименте позволяет получить информацию о структурно-'нкциональных основах адаптации, дезадаптации, и восстановления ганов и систем. В последние годы значительное количество следований посвящено выяснению причин и механизмов нарушения нкций иммунной системы при холодовых воздействиях на организм ржакова Л.И., 1996; Мартынова Н.А., Рыбакина и др., 1998; Chancelloreeland С. et al„ 1995; Jain S. et al., 1996; Jansky L. et al„ 1996; Kizaki Т., et , 1995-1997). Морфологический аспект данной проблемы изучен достаточно.

Тимус, являясь центральным органом иммунной системы и цокринной железой одновременно, представляет собой общее звено жду двумя важнейшими регуляторными системами, осуществляющими нтроль за постоянством внутренней среды организма и ответственными процессы адаптации к изменяющимся условиям внешней среды орнева Е.А., 1989; Гаркави Л.Х. и др., 1994; Besedovsky Н., Del Ray А., 97). Важная роль тимуса в общем адаптационном синдроме была ервые продемонстрирована в работах Г. Селье (1936), подтверждена гем в многочисленных исследованиях отечественных и зарубежных горов и не утратила своего значения в настоящее время. Несмотря на льшое количество работ, посвященных данной проблеме, тимус до стоящего времени остается органом с недостаточно полно изученной эуктурой и функцией. Актуальными проблемами в функциональной

морфологии тимуса являются поиск морфологических эквивалентов е нормальной функции и выяснение того, какие сдвиги в структуре тиму являются морфологическим субстратом его патологии (Серов В.В., \% Ивановская Т.А. и др., 1996). Анализ'литературы показывает, что мен изученным тканевым компонентом тимуса является его эпител^ Гетерогенность эпителиальных клеток в тимусе представляет соб бесспорный факт (Haynes B.F. et al., 1984; Wijngaert F.P., Kendall M.I 1984), однако нет еще их общепринятой классификации, посколь появляются сообщения об идентификации новых типов эпителиальш клеток (Milicevic Z., Milicevic N.M., 1997). Особенно немногочислен! данные об изменениях тонкой структуры тимусного эпителия п воздействии внешних неблагоприятных факторов. По-прежне "загадочными" остаются тельца Гассаля. Дискуссионным является вопр о роли так называемых железистых образований тимуса. По этому пово в современной литературе существуют прямо противоположные точ зрения (Волошин H.A. и др., 1991; Ивановская Т.А. и др., 199 Следовательно, любые новые факты об изменениях этих структур п различных воздействиях на организм могут внести свой вклад в бо: полное понимание эндокринной функции тимуса.

Мало изученным остается вопрос об участии в адаптивн реакциях микроциркуляторного русла тимуса, важной структур! функциональной особенностью которого является нали1 гематотимического барьера.

•Тимус редко рассматривался в качестве объекта i лимфатического дренажа. Данные литературы по этому вопр< немногочисленны и противоречивы (Hwang W.S. et al., 1974; Ushiki 1986; Kato S., 1988,1990). Наличие лимфатических сосудов соединительнотканной строме тимуса сомнений не вызывает, спорн] является вопрос о существовании лимфатических капилляров внут тимусных долек. Свидетельства, хотя и немногочисленные, о налич внутридольковых лимфатических капилляров, скопление лимфатичес! узлов вокруг тимуса, позволяют предположить, что лимфатичеа структуры играют существенную роль как в нормальной физиолог тимуса, так и в его реакциях на внешние воздействия. Ю.И.Бородин (1994) была сформулирована концепция лимфатического регио согласно которой состояние органа и его лимфатического аппар; находятся не только в прямой, но и в обратной связи. Важнейи функцией регионарного лимфатического аппарата является поддержан!-дренируемом органе жидкостного гомеостаза, поэтому осуществле] нормальных функций, адекватные реакции на внешние воздействия, условиях патологии - эффективная реабилитация органа возможны тол! при функциональной достаточности всех звеньев лимфатичесю

:гиона. Анализ литературы показывает, что исследования тимуса' при :стремальных воздействиях на организм с позиций данной концепции не юводились.

Наряду с изучением фундаментальных основ адаптации, одной из окнейших проблем современной медицинской науки является разработка юсобов коррекции стрессовых состояний, учитывая широту 1спространения и тяжесть такой патологии и стрессового компонента 1болеваний (Барабой В.А. и др., 1992; Меерсон Ф.З., 1993; Chrousos G.P.

а!., 1992; Sapolsky R.M., 1994). В связи с этим, целью экологически риентированных медико-биологических изысканий должно быть не злько получение новой научной информации, но и попытка спользования этой информации для разработки методов предупреждения овреждений или восстановления поврежденных структур (Бородин Ю.И., ?89).

Эффективная профилактика и терапия стрессовых состояний, в эм числе и холодового стресса, возможна с помощью растительных репаратов из группы адаптогенов (Яременко К.В., 1990; Гречко А.Т., 994; Amri Н. et а!., 1996; Fujikawa Т. et al., 1996; Padma P. et al., 1997). В [нституте клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН в ечение многих лет проводятся исследования биологической активности олифенольных соединений из лекарственных растений Сибири и Алтая липовника, кровохлебки лекарственной, манжетки обыкновенной), (оказана эффективность данных препаратов в коррекции циркуляторных арущений (Григорьев В.Н., 1988; Головнев В.А., 1993). Адаптогенные войства полифенольных соединений из этих растений не изучались.

С целью наиболее рационального использования растительного ырья выделяются биологически активные соединения из разных частей ^астений. В частности, в лаборатории фитохимии Центрального Сибирского ботанического сада СО РАН выделены полифенольные оединения не только из корней, но и из надземной части манжетки (быкновенной. Нам представляется актуальным изучить биологические ффекты нового препарата, полученного оригинальным способом и шервые используемого для коррекции адаптивной реакции организма к 1кстремальным Холодовым воздействиям.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Выявить морфологические закономерности. сочетанного реагирования тимуса, регионарных и отдаленных (подколенных) шмфатических узлов в условиях экстремальных охлаждений организма, реадаптации и фармакологической коррекции.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Провести морфологическое исследование тимуса ь светооптическом и электронномикроскопическом уровнях использованием морфометрии в норме, при экстремальных охлажденш организма и реадаптации.

2. Провести количественное исследование микроанатомическс организации и клеточного состава паратимических и подколеннь лимфатических узлов в норме, при экстремальных охлаждениях организм и реадаптации.

3. Изучить влияние полифенольных соединений из манжета обыкновенной и препарата сравнения (токоферола) на структуру тимус паратимических и подколенных лимфатических узлов в условие физиологической нормы.

4. Провести морфологическое исследование тимуса у светооптическом и электронномикроскопическом уровнях использованием морфометрии при экстремальных охлаждениях организм и реадаптации на фоне профилактической и ранней патогенетическо коррекции с помощью полифенольных соединений из манжета обыкновенной или токоферола.

5. Провести количественное исследование микроанатомическо организации и клеточного состава паратимических и подколенны лимфатических узлов при экстремальных охлаждениях и реадаптации н фоне профилактической и ранней патогенетической коррекции с помощь] полифенольных соединений из манжетки обыкновенной или токоферола.

6. Провести сравнительный анализ влияния полифенольны соединений из манжетки обыкновенной и токоферола на структурнь преобразования в тимусе и лимфатических узлах при экстремальны охлаждениях и реадаптации.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Получены новые данные по некоторым малоизученным вопроса нормальной морфологии тимуса:

-показано наличие внутридольковых лимфатических капилляро] расположенных в перваскулярных пространствах; описан ультраструктура стенки внутридольковых лимфатических капилляров тимусе крысы;

- впервые проведено детальное количественное морфометрическс исследование железистых образований в тимусе у интактных животных.

Впервые проведено морфологическое исследование всех тканевы компонентов, клеточного состава и элементов микроциркуляторног русла тимуса при экстремальных охлаждениях и реадаптации н светооптическом и электронномикроскопическом уровнях

пользованием морфометрии; показана роль каждого из этих шпонентов в развитии инволюции тимуса, индуцированной Холодовым рессом. Установлено, что выраженность изменений того или иного )мпонента в разные периоды инволюции тимуса была неодинакова. В ;риод экстремальных охлаждений доминировали деструктивные ¡менения в лимфоидной популяции органа и нарушения икроциркуляции; в период реадаптации, на первый план выходят ¡менения эпителиального компонента в мозговом веществе тимуса, I идет ел ь ств у го щ и е об истощении его компенсаторно-приспособительных »можностей. Эти данные позволили сделать заключение о том, что здокринный эпителий тимуса является наиболее уязвимым тканевым эмпонентом при экстремальных воздействиях.

Впервые проведено систематическое ультраструктурное :следование разных типов эпителиальных клеток тимуса при ;стремальных охлажденях организма, реадаптации и фармакологической эррекции.

Впервые проведены параллельные исследования структурных реобразований тимуса и регионарных лимфатических узлов при сстремальных охлаждениях организма, реадаптации и армакологической коррекции; обсуждаются возможные механизмы их ¡аимного влияния при экстремальных воздействиях на организм.

Впервые исследованы биологические эффекты нового, элученного оригинальным способом комплекса полифенольиых >единений из надземной части манжетки обыкновенной. Установлено, го данный препарат обладает адаптогенными и лимфотропными юйствами.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Получены новые научные знания о закономерностях структурных реобразований в тимусе и лимфатических узлах, лежащих в основе риспособительных реакций лимфоидных органов в ответ на внешние ^благоприятные воздействия. Оценены адаптивные возможности всех <аневых компонентов тимуса, выявлены наиболее информативные груктурные проявления биологических эффектов холода на уровне *муса, позволяющие прогнозировать направленность и исход заптационного процесса. Показана целесообразность применения, нового репарата растительного происхождения для предупреждения и эррекции структурных повреждений в лимфоидных органах при гйствии на организм экстремально низких температур.

Полученные результаты могут быть использованы для разработки овых лекарственных препаратов и реализованы в медицинской практике.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Морфологические изменения в тимусе и лимфатических узл адекватно отражают тяжесть стрессорных повреждений в организме, условиях продолжительного экстремального охлажден V сопровождающегося потерей массы тела и гибелью части животных, тимусе регистрируется морфологическая картина выражение акцидентальной инволюции, приводящей к гипотрофии opгa^ Структурные преобразования лимфатических узлов свидетельствуют I активации В-клеточных иммунологических реакций в услови холодового стресса; идентичность сдвигов в паратимических подколенных лимфатических узлах указывает на системный характ изменений.

2. Сохраняющийся дефицит массы тела, продолжающаяся гибе животных, отсутствие полного восстановления структуры тимуса лимфатических узлов в период реадаптации, несмотря на отме экстремальных охлаждений, свидетельствуют об истощении структур! функциональных резервов организма, срыве адаптивной реакции являются основанием для поиска способов коррекции стрессово состояния при такого рода воздействиях.

3. Полифенольные соединения из надземной части манжет обыкновенной исходно увеличивают резервные возможности организм: целом и лимфоидных органов, в частности, существенно снижая поте массы тела, летальность животных и выраженность деструктивн; изменений в тимусе в период экстремальных охлаждений, созда] предпосылки для избыточного восстановления поврежденных структур период реадаптации.

4. Препарат сравнения - токоферол, оказывающий анаболическ эффект на уровне целого организма, не оказывает существенного влиян на уровень летальности животных при экстремальных охлаждени. исходно инициирует в тимусе инволютивные процессы, усиливает их период экстремальных охлаждений и не способствует полноценно восстановлению поврежденных структур, делая таким образом це адаптации для лимфоидных органов более высокой.

АПРОБАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы диссертации доложены на: 2-м съезде физиолог Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995); 2-м международн симпозиуме "Проблемы саногенного и патогенного эффект экологического воздействия на внутреннюю среду организма" (Чолп< Ата, 1995); заседании Ученого совета Института клинической экспериментальной лимфологии СО РАМН (Новосибирск, 1996); К международном конгрессе по приполярной медицине (Анхоридж, Аляс

ЗША, 1996); заседании Проблемной комиссии "Морфология" Новосибирск, 1996); Международной конференции "Проблемы слинической и экспериментальной лимфологии (Новосибирск, 1996); 3-м международном симпозиуме "Проблемы саногенного и патогенного »ффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма" 'Чолпон-Ата, 1997); на международной конференции "Эндокринные механизмы регуляции функций", посвященной 75-летию со дня рождения лрофессора М.Г.Колпакова (Новосибирск, 1997); Всероссийской конференции "Закономерности морфогенеза и регуляции тканенвых лроцессов в нормальных, экспериментальных и патологических /словиях", посвященной 70-летию Заслуженного деятеля науки РФ профессора П.В.Дунаева (Тюмень, 1998); заседании Ученого совета Института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН [Новосибирск, 1998).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ Содержание диссертации изложено на страницах

машинописного текста, Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы "Материал и методы исследования", глав собственных исследований, выводов, списка литературы, включающего-г^ЙЙзсточника, из них ^отечественных и ¿¡^зарубежных. Диссертация иллюстрирована 63 таблицами и 90 рисунками (микрофотографии, графики).

Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

Данная работа является самостоятельной частью темы:"Комплексное морфо-функциональное изучение лимфатической системы (орган-регионарный лимфатический аппарат) в условиях эндо- и экзоэкологических дестабилизирующих воздействий и их коррекции" (номер государственной регистрации 01.9.60 001182). Руководитель темы -академик РАМН Ю.И.Бородин.

Автор выражает искреннюю благодарность своему учителю и научному консультанту академику РАМН Юрию Ивановичу Бородину за помощь и поддержку на всех этапах выполнения работы.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Исследования проводили на 157 белых лабораторных крысах-самцах популяции Вистар, в возрасте 2,5-3 месяцев, полученных из питомника НПО "Вектор". Животных использовали в эксперименте после периода адаптации (2 недели) к новым условиям содержания. Крыс содержали в виварии при температуре 20-22°С с регулируемым световым режимом (12 часов - "день", 12 часов - "ночь"), в индивидуальных клетках.

Животные получали стандартный сбалансированный пищевой рацио! (Лоскутова З.Ф., 1980) 1 раз в сутки, доступ к воде был свободным.

Животных первой экспериментальной группы подвергал! Холодовым воздействиям в течение 7 суток (по 22 часа ежедневно) пр1 температуре минус 8-10°С в камере глубокого охлаждения с активно! вентиляцией воздуха и ругулируемым освещением (12 часов -"день", V. часов -"ночь"). Крысы находились в индивидуальных пластиковы: клетках. Ежедневно животных вынимали из камеры на 2 часа да кормления и приема воды. Количество корма увеличивали в 1,5 раза. П< истечении 2 часов животных вновь помещали в камеру, воду убирали, ; корм оставляли в клетках.

Вторую группу экспериментальных животных подвергал! Холодовым воздействиям на фоне введения полифенольных соединений и: манжетки обыкновенной. Полифенольные соединения, выделенны оригинальным способом из надземной части манжетки обыкновенной получены в лаборатории фитохимии Центрального Сибирскоп ботанического сада СО РАН. Водный раствор полифенольных соединени] вводили крысам через зонд в желудок в дозе 1 мг на 100 г массы тела, за 31 минут до приема пищи, в течение 7 суток до начала холодовы: воздействий и на протяжении всего периода охлаждений.

Третью экспериментальную группу составляли животные которых подвергали Холодовым воздействиям на фоне введени токоферола (препарат сравнения). Масляный раствор токоферола вводил] в дозе 2 мг на 100 г массы тела по той же схеме.

Контрольным животным вводили дистиллированную воду : эквивалентном объеме по той же схеме.

Часть животных из всех трех экспериментальных групп ц окончании курса охлаждений переносили в виварий и выдерживали суток при температуре +20-22°С для прохождения процедур! реадаптации. В период реадаптации введение препаратов прекращали.

Животных ежедневно взвешивали, оценивали внешний вид 1 общее состояние. В соответствии с изменениями массы тела животны проводили коррекцию дозы вводимых препаратов.

Забой животных проводили декапитацией под этаминаловьн наркозом в одно и то же время суток - с 10 до 11 часов утра.

Методы светооптического и электронно-микроскопического исследований,.

Объектами исследования служили тимус, паратимические подколенные лимфатические узлы. Тимус очищали от окружающе жировой ткани и взвешивали на торсионных весах. Лимфатические узл] для сохранности капсулы и афферентных лимфатических сосудо забирали с окружающей жировой тканью. Для светооптическог

«следования органы фиксировали в жидкости Теллесницкого, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заливали в ;месь гомогенизированного парафина с воском. С помощью нотационного микротома изготавливали серийные или полусерийные :резы толщиной 10 мкм и окрашивали их гематоксилином Майера и юзином. Часть срезов толщиной 5 мкм окрашивали азуром (В) и эозином ^Y) (Serva). Срезы заключали в канадский бальзам.

Для просвечивающей электронной микроскопии материал (по 5 кусочков тимуса от каждого животного, по 5 животных из каждой экспериментальной группы) фиксировали в 1% растворе четырехокиси эсмия на фосфатном буфере (рН 7,3) при температуре 4°С, в течение 2 часов. Обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации, на заключительном этапе обезвоживания проводили контрастирование спиртовым раствором уранилацетата и фосфорнофольфрамовой кислоты, заключали в эпон. На ультратоме LKB Nova изготавливали полутонкие срезы толщиной 1 мкм, которые окрашивали толуидиновым синим при повышенной температуре. На этом же ультратоме изготавливали ультратонкие срезы, которые контрастировали насыщенным водным раствором уранилацетата (при температуре +42°С) и цитратом свинца (при комнатной температуре). Ультратонкие срезы изучали в электронном микроскопе JEM-1010.

Тимус контрольных животных исследовали также в сканирующем электронном микроскопе. Для сканирующей электронной микроскопии кусочки сначала помещали на 10 минут в гепаринизированный физиологический раствор, промывали в физиологическом растворе без гепарина, фиксировали в 3% растворе глютаральдегида на фосфатном буфере (рН 7,3) в течение 5 суток при температуре 4°С. Затем проводили постфиксацию в 1% забуференном растворе четырехокиси осмия в течение 6 часов, дегидратировали в серии спиртов и помещали в диэтиловый эфир на 12 часов, замораживали в жидком азоте, высушивали в вакуумной установке, напыляли исследуемую поверхность углеродом и химически чистым золотом. Готовые образцы изучали в сканирующем режиме электронного микроскопа JEM-100S/ASID/SEGZ.

Морфометрический метод.

Для определения абсолютных объемов тимуса и лимфатических узлов и их отдельных структурно-функциональных зон использовали морфометрический метод, предложенный Ю.И.Бородиным, А.Ю.Летягиным, В.Н.Григорьевым (1991). Морфометрию проводили на срезах толщиной 10 мкм, окрашенных гематоксилином и эозином. Для исследования брали каждый 15 срез из полной серии срезов с целого органа. Срезы тимуса морфометрировали при увеличении в 16 раз, выделяли следующие структурно-функциональные зоны: корковое

вещество, мозговое вещество, капсулу и междольковые прегородки Железистые образования морфометрировали на тех же срезах npj увеличении в 200 раз. Подсчитывали все тельца Гассаля на срезах с целоп органа, а затем рассчитывали их количество на стандартную площадь К мм2. Морфометрию элементов микроциркуляторного русла в тимус проводили с, использованием стереометрического метода. Определял! объемную плотность кровеносных капилляров во внутренней зон коркового вещества тимуса, посткапиллярных венул и внутридольковы: периваскулярных пространств в зоне кортикомедуллярного соединения.

Срезы паратимических и подколенных лимфатических узло] морфометрировали при увеличении в 32 раза. Выделяли следующи' структурно-функциональные зоны: капсулу, краевой синус, в корковол веществе - первичные и вторичные лимфоидные узелки с выделением j последних герминативного центра и короны, межузелковую зону глубокую кору (паракортикальную зону), в мозговом веществе - мозговы тяжи и мозговые синусы. Проводили дифференцированный подсче' количества вторичных лимфоидных узелков с герминативными центрами находящимися на разных стадиях развития (I - IV). Стадии развита герминативных центров определяли по Конвей с учетом современны: литературных данных (Nieuwenhuis Р., Opstelten D.,1984; Szakal A.K. Kosco M.H., Tew J.G.,1988; DeBakker J.M.,Kamuller M.E. et al., 199C Hikida M., Mori M., 1997).

Клеточный состав тимуса и лимфатических узлов изучали н; срезах толщиной 5 мкм, окрашенных азуром В и эозином У. Пр] увеличении в 1000 раз (объектив 100 - масляная иммерсия, окуляр 10 подсчитывали абсолютное количество разных видов клеток н; стандартной площади 9000 мкм2. Дифференцировали бласты, средние i малые лимфоциты, незрелые и зрелые плазматические клетки, клетк: Мотта, клетки с фигурами митозов, клетки с пикнотическим ядром ретикулярные клетки (в тимусе - эпителиальные клетки), макрофаги моноциты, эозинофильные гранулоциты, тучные клетки. Подсчет клето: проводили: в тимусе - в субкапсулярной и внутренней зонах корковол вещества и в мозговом веществе, в лимфатических узлах -герминативных центрах вторичных лимфоидных узелков, глубокой коре мозговых тяжах и мозговых синусах. В связи с тем, что в тимусе тучны клетки располагаются преимущественно в соединительнотканной строме подсчет их проводили в 10 полях зрения, площадью 22500 мкм : дифференцировали тучные клетки с разной степенью дегрануляции (0 III).

Для всех морфометрических данных вычисляли абсолютные : относительные показатели.

Проводили ультраструктурный стереометрический анализ ндотелиальных клеток кровеносных капилляров в тимусе с [спользованием общих принципов стереологии (Непомнящих JI.M. и др., 984; Автандилов Г.Г., 1990; Вейбель Е., 1970; Ташкэ К., 1980). В (итоплазме эндотелиальных клеток определяли объемную плотность митохондрий, гранулярного эндоплазматического ретикулума, свободных жбосом и полирибосом, миропиноцитозных везикул и ¿ультивезикулярных телец, комплекса Гольджи, цитоплазматического латрикса. Подсчитывали количество свободных (цитоплазматических) и :вязанных с цитоплазматической мембраной (базальных и люминальных) ликропиноцитозных везикул и вычисляли их доли в %. Исследовали негативные изображения на фотопластинках в бинокулярном ггереоскопическом микроскопе МБС-9 при конечном увеличении в 50000-эООООраз.

В таблицах приведены значения М±ш, указана достоверность различий между исследованными показателями по t - критерию (Стъюдента).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Структурная организация тимуса крыс в физиологических условиях.

Результаты исследования топографии, макро- и микроанатомического строения и клеточного состава тимуса у контрольных животных, полученные в нашей работе, в целом согласуются с данными литературы (Аминова Г.Г., Ерофеева Л.М., 1983; Вихрук Т.И., 1995, 1996; Волкова Л.В. и др., 1994; Sainte-Marie G., 1974, 1986; Milicevic Z., Milizevic N.M., 1997) и находятся в соответствии с современными представлениями о гистофизиологии нормального тимуса. Количественные показатели, полученные в ходе морфометрического исследования, такие как масса, абсолютный объем тимуса, абсолютные объемы всех структурно-функциональных зон, плотность клеточных элементов на стандартной площади, абсолютное количество и процентное содержание отдельных видов клеток в разных зонах тимуса являются функционально значимыми параметрами, позволяющими оценить процессы пролиферации, созревания и миграции клеток в тимусе (Линднер Д.П.идр., 1986).

В результате исследования тимуса на светооптическом и электронномикроскопическом уровнях были получены дополнительные наблюдения по некоторым малоизученным вопросам нормальной морфологии тимуса.

Вопрос о возможности лимфатического дренажа лимфозпителиальной паренхимы тимуса является дискуссионным.

Литературные данные по этому поводу немногочисленны i противоречивы. О существовании лимфатических сосудов в капсуле i междольковой соединительной ткани тимуса млекопитающих былс известно давно (Hammar J, 1936), и этот факт признан большинство(к исследователей. О наличии внутридольковых лимфатических сосудо! сообщалось лишь несколько раз (Smith С., 1955; Sainte-Marie G., Leblonc С.Р., 1964; Hwang W.S. et al., 1974; Kato S., 1988). T.Ushiki (1986) ( помощью сканирующей электронной микроскопии показа! лимфатические сосуды в больших периваскулярных пространствах окружающих артерии, в тимусе крыс. S.Kato (1988) выявил лимфатические капилляры в периваскулярных пространствах тимуса у мышей и описал тонкое строение их стенки. Детальное строение стенки лимфатических капилляров в тимусе у крыс в литературе практически не было описано. Мы наблюдали лимфатические капилляры в перивакулярных пространствах, окружающих артериолы и посткапиллярные венулы тимуса в зоне кортико-медуллярного соединения. На светооптическом уровне лимфатические капилляры выглядели как слепо начинающиеся, неравномерно расширенные пространства, выстланные эндотелием и заполненные лимфоцитами. Ультраструктурное исследование показало, что стенка лимфатических капилляров в тимусе у крыс состоит из одного слоя эндотелиальных клеток, которые соединяются между собой посредством плотных контактов. Стыкующиеся поверхности эндотелиальных клеток образуют различные формы контактов: сложные -по типу интердигитаций, полусложные - по типу чешуйчатого наслоения и простые контакты. Иногда в стенке лимфатических капилляров наблюдали полуоткрытые межклеточные контакты. Цитоплазма эндотелиальных клеток в лимфатических капиллярах имеет тот же набор органелл, что и в кровеносных капиллярах, но в меньшем количестве. Базальная мембрана на большем протяжении периметра капилляра отсутствует, лишь в ядерной зоне эндотелиальной клетки иногда обнаруживается прерывистая базальная мембрана. От эндотелиальных клеток отходят пучки коллагеновых волокон (стропные филаменты). Таким образом, строение стенки лимфатических капилляров в тимусе крысы, имеет типичное строение, не отличается существенно от описанного в литературе у других видов лабораторных животных (мышей).

Исследование серийных срезов тимуса на светооптическом уровне позволило выявить особенности микроанатомической организации так называемых железистых образований. Мы обнаружили в тимусе у 62 % контрольных животных эпителиальные тяжи, эпителиальные канальцы, паращитовидноподобные структуры и морфометрически определили их суммарный абсолютный объем, который был равен 0,0103+0,002 мм3, что

оставило одну сотую долю процента от общего объема тимуса. Наше писание строения железистых образований сходно с таковым в работах ругих авторов (Юсфина Э.З., 1964; Эстевес Х.Д.К., 1984; Волошин Н.А. и р., 1991; Cherry С.Р. et al., 1967; Meihuisen S.P., Burek J.D., 1978). Большая астота обнаружения железистых образований в тимусе у контрольных ивотных и особенности их гистологического строения, позволяют делать вывод о том, что они свойственны нормальному тимусу, являются ункциональными структурами и могут быть одним из морфологических квивалентов эндокринной функции данного органа.

В ходе злектронномикроскопического исследования мы бнаружили в тимусе контрольных крыс 7 типов эпителиальных клеток ю классификации, предложенной Z.Milicevic, N.M.Milicevic в 1997 г. и снованной на особенностях ультраструктуры данных клеток: 1) /бкапсулярные/парасептальные/периваскулярные клетки, образующие пителиальный покров тимуса и стенку периваскулярных пространств. >ти клетки имеют базальную мембрану и формируют пограничные пителиальные структуры, изолирующие собственно

имфоэпителиальную паренхиму тимуса от производных мезенхимы -оединительнотканной стромы, кровеносных и лимфатических сосудов; 2) ветлые; 3) промежуточные; 4) темные эпителиальные клетки, образующие еть в корковом веществе; названия данных клеток отражают степень лектронной плотности их цитоплазмы; 5) недифференцированные пителиальные клетки, распоженные в зоне кортикомедуллярного оединения и мозговом веществе тимуса; 6) большие медуллярные клетки; ) веретеновидные клетки.

Субклеточное строение 5 типов (1,2,3,4,6) эпителиальных клеток видетельствует о наличии у них высокой синтетической и секреторной ктивности. Эти клетки имеют ряд общих ультраструктурных признаков: рупное ядро, содержащее преимущественно эухроматин, с хорошо азвитым ядрышком. Картина организации гетерохроматина несколько сличается. Цитоплазма эпителиальных клеток богата клеточными рганеллами, содержит многочисленные цистерны гранулярного ндоплазматического ретикулума, секреторные вакуоли, гладкие и жаймленные везикулы, несколько хорошо развитых комплексов Гольджи, шогочисленные свободные рибосомы и полирибосомы, несколько штохондрий. Эпителиальные клетки тимуса имеют хорошо развитый [итоскелет, представленный многочисленными тонкими пучками ¡ромежуточных филаментов. Цитоплазматические отростки соседних пителиальных клеток соединяются посредством десмосом, образуя сеть.

Известно (Savino W. et al., 1982, 1983, 1984; Haynes B.F. et al., 1983; ^uger C. et al., 1987; Moil U.M. et al., 1988; Vollmar A.M. et al., 1990, 1995; facchio M. et al., 1994), что эпителиальные клетки в тимусе продуцируют и

секретируют целый ряд тимусных гормонов, глюкокортикоиднь гормоны, нейропептиды, цитокины. Согласно современны представлениям продукты, секретируемые светлыми, промежуточными темными эпителиальными клетками, являются местнодействующими оказывают свои нутритивные и регуляторные воздействия по тип паракринных влияний. Таким образом, основная функция данных клетс состоит в создании специфической внутренней среды тимуса, в которо пролиферируют и созревают лимфоциты. Гормоны, синтезируемые мозговом веществе, оказывают системное действие и инкретируются кровь (Kendall M.D., Stebbings R.J., 1994). Исключение составляю недифференцированные и веретеновидные клетки. Первые представляй: собой резерв эпителиальных клеток в тимусе, вторые выполняк поддерживающую функцию (Gaudecker von В., 1991; Milicevic Z., Milicev N.M., 1997).

Исследование нормального тимуса в сканирующем электронно микроскопе дало дополнительные наблюдения относительно морфологи эпителиального покрова тимуса и внутридольковых периваскулярнь: пространств. На электронограммах, демонстрирующих поверхност тимуса, видно, что слой эпителиальных клеток не является абсолюта монолитным, между телами эпителиальных клеток есть неболыш промежутки. Стенка периваскулярных пространств, окружакнвд посткапиллярные венулы, также не является сплошной, между телам эпителиальных клеток есть небольшие щели. Отсутствие так} промежутков мы наблюдали в стенке периваскулярных пространст окружающих кортикальные капилляры. Возможно эти структурнь особенности представляют собой морфологические предпосылки до большей проницаемости эпителиального капсулярно-тимического 6apbej по сравнению с гематотимическим барьером в корковом веществе, одни из компонентов которого является стенка периваскулярно1 пространства. Особенности строения стенки периваскулярнь пространств, окружающих посткапиллярные венулы, связаны с i функцией, обеспечивающей выход зрелых тимоцитов из паренхимы периваскулярное пространство и далее - в кровеносное и лимфатическс русло.

Одним из невыясненных до конца является вопрос морфологическом эквиваленте in vivo тимусных клеток-нянь, имеющ! большое значение для созревания тимоцитов. На эту роль претендуй светлые и промежуточные эпителиальные клетки в корковом вещесп тимуса. Результаты наших исследований нормального тимуса, с помощь сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопи подтверждают точку зрения, согласно которой наиболее вероятны кандидатом в тимусные клетки-няни in vivo являются промежуточш

эпителиальные клетки, имеющие большой объем цитоплазмы, широкие, массивные цитоплазматические отростки. Они более всего соответствуют внешнему виду клеток, образующих лимфоэпителиальные комплексы (тимусные клетки-няни), которые мы ' наблюдали в сканирующем электронном микроскопе.

У контрольных животных были исследованы паратимические (передние медиастинальные) лимфатические узлы, являющиеся регионарными для тимуса (Tylney N.. 1971) и подколенные лимфатические узлы. Микроанатомическая организация паратимических и подколенных лимфатических узлов соответствовала таковой, описанной в серии работ G. Sainte-Marie et al. (1981, 1982). Ряд морфологических критериев, таких как количество вторичных лимфоидных узелков с герминативными центрами, степень развития мозговых тяжей и количество плазматических клеток в них, количество единиц глубокой коры, концентрация лимфоцитов в синусах отражают степень иммунобиологической активности данного лимфатического узла. Судя по этим признакам, среди исследованных нами лимфатических узлов фоновая иммунобиологическая активность была наиболее высокой в левых каудальных паратимических узлах, наиболее низкой - в подколенных лимфатических узлах, правые каудальные паратимические лимфатические узлы занимали промежуточное положение.

Структурные преобразования в тимусе и лимфатических узлах при экстремальных охлаждениях организма и реадаптации

При экстремальных холодовых воздействиях отмечена гибель части животных - летальность составила 20 %. У выживших животных масса тела снизилась на 12 %.

Морфологическое исследование тимуса показало, что при экстремальных охлаждениях организма в нем происходят выраженные изменения на органном, тканевом, клеточном и субклеточном уровнях организации. Изменения микроанатомического строения заключались в уменьшении общего объема органа и объема коркового вещества (табл.1). Достоверно снижался массовый индекс тимуса. Снижение объемов мозгового вещества и соединительнотканной стромы было менее выраженными. Изменения микроанатомической организации тимуса сопровождались выраженными преобразованиями клеточного состава всех его структурно-функциональных зон.

В субкапсулярной зоне снизилась митотическая активность и появилась тенденция к ее снижению во внутренней зоне коркового вещества. В корковом веществе уменьшилась общая численность лимфоидных клеток, в частности отмечено достоверное снижение количества бластов в субкапсулярной и внутренней зонах коры,

уменьшение числа средних лимфоцитов в субкапсулярной зоне и сниженш численности малых лимфоцитов во внутренней зоне коркового вещества Эти данные свидетельствуют о снижении лимфоцитопоэтической функцш коркового вещества тимуса при экстремальных охлаждениях организма, г изменение пропорции между лимфоцитами разной степени зрелосп указывает на возможное нарушение процессов их дифференцировки.

В мозговом веществе тимуса изменение численности лимфоидны? клеток было менее выраженным, чем в коре. Отмечена тенденция * снижению общего количества лимфоидных клеток на стандартной площади среза, и, в частности, бластов, средних и малых лимфоцитов.

Во всех структурно-функциональных зонах тимуса наблюдали усиление процесса гибели лимфоцитов. На светооптическом уровне это проявлялось увеличением числа лимфоидных клеток с пикнотически измененными ядрами. Кроме этого, увеличилось количество макрофагов, содержащих в цитоплазме фагоцитированные остатки погибших лимфоцитов. При электронномикроскопическом исследовании наблюдали лимфоциты с морфологическими изменениями, характерными для апоптоза (Kerr J.F.R. et al., 1972; Бережков Н.В., 1990; Цыпленкова В.Г., Бескровнова Н.В., 1996). Отмечено усиление конденсации хроматина по периферии ядра, сопровождающееся уменьшением его объема; в области наружного контура ядра появлялись глубокие ' инвагинации. Цитоплазматические оргзнеллы на данном этапе еще имели строение, близкое к нормальному, хотя в некоторых митохондриях отмечались признаки структурных повреждений. На более поздних этапах гибели клетки ядро распадалось на отдельные фрагменты, разрушались цитоплазматические органеллы. Как правило, лимфоциты, находящиеся на этой стадии апоптоза, уже находились внутри фагоцитировавших их макрофагов. Причины, приводящие к апоптозу лимфоцитов в тимусе, многообразны. Но в условиях стресса главная роль в усилении гибели лимфоидных клеток отводится глюкокортикоидным гормонам надпочечников (Selye Н, 1936; Dougherty T.F., 1952; Wyllie А.Н., 1980; Cohen J.J., 1993; Bernard G. et al., 1997). "Стрессовые" концентрации глкжокортикоидных гормонов вызывают гибель кортизончувствительных лимфоцитов, к которым относятся большинство лимфоцитов коркового вещества тимуса и часть медуллярных тимоцитов (Vliet van Е. et al., 1986).

Характерным морфологическим изменением во всех структурно-функциональных зонах тимуса после холодовых воздействий было увеличение количества плазматических клеток и эозинофильных гранулоцитов. Эти клетки располагались в капсуле и междольковых перегородках, под эпителиальным покровом в субкапсулярной зоне, перикапиллярно - во внутренней зоне коры, во внутридольковых периваскулярных пространствах и граничащих с ними участках коркового

мозгового вещества. Увеличение количества плазматических клеток видетельствует о наличии антигена в паренхиме и строме тимуса (Sainte-darie G. et al., 1986).

При экстремальных охлаждениях в строме тимуса увеличилось уммарное количество тучных клеток и возросла доля клеток с ;егрануляцией III степени. Подобные изменения тучноклеточной :опуляции представляют по существу стереотипную реакцию, арактерную для данного вида клеток - тучные клетки практически на юбое воздействие реагируют усилением дегрануляции (Линднер Д.П., и р.,1980; Серов В.В., Шехтер А.Б., 1981; Романовский А.Е.,1982; Горчаков 1.Н. 1990; Дыгай A.M., Клименко H.A., 1992). В нашем исследовании 'бращало на себя внимание наличие тучных клеток с разным типом .егрануляции. Возможна истинная дегрануляция, осуществляемая путем кзоцитоза гранул, и секреторная, характеризующаяся выделением только 1астворимых компонентов с последующим вторичным запустеванием ранул (Befus D. et al., 1987). Оба типа дегрануляции могут наблюдаться в >азных клетках той же популяции при одном и том же воздействии Клименко H.A., Татарко C.B., 1997). В последние годы стало известно, ¡то тучные клетки могут быть источником некоторых цитокинов, таких :ак интерлейкины - 4,5,6,8, фактор некроза опухоли-альфа, гамма-[нтерферон (Bradding Р. 1995), причем установлено, что эти цитокины пособны продуцировать тучные клетки тимуса (Murphy M. et al., 1992). Е>актор некроза опухоли и гамма-интерферон могут вызывать гибель [имфоцитов по типу апоптоза (Voelkel-Jonson С. et al., 1995). 1роводниками биологически активных веществ, высвобождающихся из ■учных клеток, в паренхиму тимуса могут служить ретикулярные волокна Sainte-Marie G. et al., 1986). Таким образом, медиаторы тучных клеток, ¡ыделяющиеся при стрессовых воздействиях, могут вносить свой вклад в ■силение процесса гибели лимфоцитов в корковом веществе тимуса, »собенно в его субкапсулярной зоне.

При экстремальных охлаждениях в тимусе, мы обнаружили 1ыраженные изменения эпителиального компонента. У 100 % кспериментальных животных в тимусе были обнаружены железистые »бразования. Частота обнаружения паращитовидноподобных структур 'величилась от 12 % в контроле до 70 % на холоде. В литературе мы 1стретили сообщение C.P.Cherry et al. (1967) о том, что при введении ;ортизона крысам в первые дни постнатальной жизни в тимусе 'величивается количество паращитовидноподобных образований, при том основные паращитовидные железы также увеличиваются в размерах. Физиологическое значение этого феномена неясно.

У 100 % животных на холоде были обнаружены эпителиальные яжи и мелкие эпителиальные канальцы (в контроле - у 62 %). Частота

обнаружения больших эпителиальных канальцев также увеличилась о' 19% у контрольных животных до 55% . По данным Н.А.Волошина и др (1991), С.Н.СЬеггу е1 а1. (1967), и нашим собственным наблюдениям эпителиальные тяжи являются базовыми структурами для формировани; эпителиальных канальцев. Мелкие эпителиальные канальцы представляю' собой начальный этап формирования этих структур, а большие - боле поздний. Обнаружение митотически делящихся клеток в эпителиальны: тяжах и увеличение частоты обнаружения больших эпителиальны: канальцев свидетельствуют о стимуляции пролиферации эндокринноп эпителия и прогрессивном развитии железистых структур. О наличии ; эпителиальных канальцев секреторной активности, по нашим данным свидетельствует появление в их просвете секрета и наличие расширенны: капилляров на периферии этих структур. В пользу активнол функционирования данных железистых образований свидетельствуй также присутствие вокруг эпителиальных канальцев дегранулирующи: тучных клеток, так как известно, что серотонин тучных клеток може стимулировать процессы выделения гормонов » кровь в други: эндокринных железах (Тагшг Н. е1 а!., 1996). Обобщая, следует сказать, чп в современной литературе существуют две точки зрения на железисты образования в тимусе. Т.Е.Ивановская и др. (1996) расцениваю-образование этих структур в тимусе как признак нарушения регенераци] эпителия, который может быть отнесен к метаплазии. По мнении Э.З.Юсфиной (1964), Ю.А.Гриневича, В.Ф.Чеботарева (1989] Н.А.Волошина и др. (1991), С.Р.СЬегту е1 а1. (1967), и мы придерживаемо, этой точки зрения, железистые эпителиальные образования являютс: функциональными структурами, присущими нормальному тимусу. И: значение заключается в усилении секреции тимических гормонов пр] экстремальных воздействиях на организм. По-видимому, в условия: стресса роль тимических гормонов сводится не только к обеспечении напряженного функционирования лимфоидных органов. В литератур есть сообщения о неиммунных эффектах гормонов тимуса. По данныг Т.И.Невидимовой, Н.И.Суслова (1995) в эффектах тимогена ест психвтропный компонент. Препарат оказывает положительное влияние н интегративные процессы в мозге, обладает антидепрессивным ] психостимулирующим действием. В условиях стресса и конфликт препарат улучшает поведенческие, соматические и гемато иммунологические показатели. По данным Ю.В.Бурова и др. (1996 тимоптин влияет на нервную систему, увеличивая двигательну* активность и болевую чувствительность, стимулируя выработк; условного рефлекса и поведение крыс в "открытом поле", влияет н; систему терморегуляции, повышая температуру тела у животных.

В нашем исследовании были выявлены существенные изменения льтраструктуры эпителиальных клеток тимуса.

Наиболее характерным изменением в эпителиальных клетках 1 ипа было увеличение содержания промежуточных филаментов, белки :оторых относятся к кератинам (Карелина Т.В., Калинина И.И., 1991). Этот процесс был более выражен в субкапсулярных/парасептальных слетках, по сравнению с периваскулярными клетками. Учитывая известное ;ходство тимусного субкапсулярного эпителия с эпидермисом, увеличение удержания кератинов в клетках можно рассматривать как шаг в управлении их конечной дифференцировки. Обнаружение в ;убкапсулярной зоне тимуса структур,'напоминающих тельца Гассаля, :лужит подтверждением этому. Однако при изучении срезов тимуса на лзетооптическом уровне складывалось впечатление, что эпителиальные гяжи образуются в результате пролиферации именно 1 типа эпителиальных клеток. По-видимому, стволовые или полустволовые клетки этого гистогенетического ряда находятся в тимусе. Стрессорное воздействие стимулирует их к пролиферации, а в более зрелых клетках -усиливает процессы дифференцировки. Поскольку мы изучали структуру данных клеток на 7 сутки экстремального воздействия, возможно, завершению жизненного цикла некоторых клеток предшествовал период их гиперфункции.

В светлых, промежуточных и темных эпителиальных клетках коркового вещества тимуса наблюдали сходные по своей направленности изменения. Отмечена редукция гранулярного эндоплазматического ретикулума, уменьшение количества прикрепленных рибосом. Во всех клетках наблюдали полиморфные изменения в структуре митохондрий. Некоторые митохондрии выглядели набухшими, имели просветленный матрикс и укороченные кристы, другие митохондрии имели более электронноплотный матрикс. Небольшая часть митохондрий имела нормальное строение. Эти данные могут указывать на нарушение энергетического обеспечения эпителиальных клеток и торможение в них процесса синтеза секреторных протеинов. Однако происходили качественные изменения в структуре эпителиальных клеток, направленные на реализацию их секреторной функции, за счет выделения продуктов, депонированных в вакуолях. Эти качественные изменения заключаются в перегруппировке клеточных органелл, участвующих в этом процессе -происходит сближение секреторных вакуолей, комплексов Гольджи и митохондрий. Подтвержением усиленной реализации депонированных секреторных продуктов служит уменьшение размеров секреторных вакуолей в эпителиальных клетках. По мнению Д.С.Саркисова (1992) перегруппировочный механизм не требует образования новых структур и позволяет клетке осуществлять широкий диапазон компенсаторных и

адаптационных реакций еще до включения процессов внутриклеточной регенерации.

В больших медуллярных эпителиальных клетках выявлены мозаичные изменения структуры. Наличие в некоторых участках цитоплазмы клеток расширенных цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума с большим количеством рибосом на мембранах, набухших митохондрий с просветленным матриксом, образование новых секреторных вакуолей свидетельствуют об усиленном синтезе секреторных протеинов. Однако часто в пределах этих же клеток выявляются участки цитоплазмы, содержащие деструктивно измененные субклеточные структуры. Это свидетельствует о том что большие медуллярные эпителиальные клетки находятся в состоянии гиперфункции, сопровождающейся частичной деструкцией гиперфункционирующих органелл.

При экстремальных охлаждениях в тимусе происходят выраженные изменения со стороны микроциркуляторного русла. В корковом веществе тимуса увеличивается относительный объем кровеносных капилляров, при этом число профилей срезов капилляров на стандартной площади существенно не изменяется. Это свидетельствует о том, что объем капиллярного русла увеличивается за счет расширения кровеносных капилляров и включения в циркуляцию резервных микрососудов. Подобные изменения в системе гемомикроциркуляции относятся к неспецифическим морфологическим перестройкам, возникающим в тканях и органах при экстремальных воздействиях (Фурдуй Ф.И., 1986; Горчаков В.Н., 1990; Янушевский В.И. и др., 1992).

Морфометрическое исследование эндотелиальных клеток выявило увеличение объемной плотности микропиноцитозных везикул, тенденцию к увеличению объемной плотности митохондрий и свободных рибосом. Эти данные указывают на активацию микровезикулярного транспорта через эндотелий кровеносных капиллляров в корковом веществе тимуса. Однако следует отметить, что некоторые митохондрии имели нарушения структуры, заключающиеся в набухании, просветлении матрикса, редукции крист. Подобные изменения митохондрий являются неспецифическими, поскольку наблюдаются во всех органах и тканях при воздействии разных факторов, и, по мнению А.А.Пузырева и др. (1997), представляют собой универсальный, общебиологический феномен.

Усиление микропиноцитозной активности в эндотелии кровеносных капилляров, не свойственное нормальному тимусу, свидетельствует о повышении проницаемости гематотимического барьера. Косвенным подтверждением этого служат изменения клеточного состава паренхимы тимуса вблизи кровеносных капилляров. Появление макрофагов, плазматических клеток, эозинофильных гранулоцитов в

1ерикапиллярных зонах коркового вещества свидетельствует о феодолении гематотимического барьера циркулирующими в крови штигенами. Увеличение количества макрофагов, плазматических клеток и юзинофильных гранулоцитов в субкапсулярной зоне тимуса, шблгодавшееся при холодовых воздействиях, указывает на имевшее место увеличение проницаемости другого специализированного барьера -сапсулярно-тимического. Учитывая это, ультраструктурные изменения в :убкапсулярных и периваскулярных эпителиальных клетках, включающиеся в увеличении содержания в них цитокератинов, можно рассматривать как компенсаторно-приспособительные, увеличивающие Зарьерные функции пограничных эпителиальных структур.

При экстремальных охлаждениях организма мы обнаружили структурные изменения как в регионарных для тимуса паратимических шмфатических узлах, так и в подколенных. Анализ изменений чикроанатомической организации лимфатических узлов разной локализации показал, что, судя по числу достоверных отличий адличественных морфометрических показателей, изменения в лодколенных лимфатических узлах были наиболее выраженными. Далее :ледуют правые каудальные лимфатические узлы. Меньше всего изменялась общая структура левых каудальных паратимических гимфатических узлов. Изменения на уровне клеточного состава имели в делом сходную направленность во всех исследованных лимфатических /злах. Как в подколенных, так и в паратимических лимфатических узлах, эсновные преобразования происходили в структурно-функциональных юнах поверхностной коры и мозгового вещества. Капсула лимфатических узлов была инфильтрирована тучными и плазматическими клетками, иногда эозинофильными гранулоцитами, краевой синус содержал эольшое соличество клеточных элементов, включающих лимфоциты, моноциты, макрофаги, вуалевидные клетки. Реакция со стороны вторичных лимфоидных узелков заключалась в увеличении количества эластов и митотически делящихся клеток в темной зоне герминативных центров, находящихся на III стадии развития, кроме этого отмечалась тенденция к увеличению доли узелков с герминативными центрами на I и [I - начальных стадиях развития. С учетом литературных данных о сроках развития герминативных центров и продолжительности отдельных стадий (Nieuwenhuis Р., Opstelten D.,1984; Szakal A.K. et ah, 1988; DeBakker J.M. et al., 1990; Hikida M., Mori M.,1997), можно предположить, что узелки, с герминативными центрами на I и II стадиях развития появились в период холодовых воздействий. Узелки с герминативными центрами на III стадии развития были предсуществующими. Усиление в них митотической активности под влиянием экстремальных охлаждений, по-видимому, следует рассматривать как результат неспецифической активации.

Комплекс изменений клеточного состава мозговых тяжей, мозговы: синусов и глубокой коры свидетельствует об активации гуморальной звена иммунной системы.

Более выраженная ответная реакция со стороны подколенны: лимфатических узлов возможно отражает большую степень повреждена тканей в регионе их лимфосбора, который испытывает непосредственно действие холода.

Перестройки в паратимических лимфатических узлах пр! экстремальных охлаждениях также могут быть обусловлень структурными повреждениями в тканях дренируемых ими органов Наблюдаемое в нашем исследовании усиление апоптоза лимфоцитов сопровождающееся разрушением клеток, может приводить к изменении антигенного состава интерстициальной жидкостной среды органа активации антигенпредставляющих клеток, которые представлены ] тимусе макрофагами и интердигитирующими клетками и находятся ] мозговом веществе и внутридольковых периваскулярных пространствах Активированные антигенпредставляющие клетки могут проникать и: периваскулярных пространств в лимфатические капилляры и достигав регионарных лимфатических узлов. Идентичность клеточного состав; периваскулярных пространств тимуса и краевого синуса паратимически: лимфатических узлов служит этому подтверждением.

Паратимические лимфатические узлы являются полиорганными I дренируют не только тимус, но и сердце, перитонеальную полость капсулу и верхнюю поверхность печени, плевральную полость (Путалов; И.Н. й др., 1988; ТПпеу N.. 1971). Поэтому в структурно-функциональньи преобразования этих лимфатических узлов при холодовом стрессе могу-вность вклад все дренируемые ими органы.

Согласно концепции о лимфатическом регионе сформулированной Ю.И.Бородиным, дренируемый орган и регионарньп лимфатический узел находятся не только в прямой, но и в обратной связи Каким образом регионарные лимфатические узлы могут влиять н: состояние тимуса? Паратимические лимфатические узлы расположены ] непосредственной близости от тимуса, в некоторых участках капсулы и) сливаются. Афферентные лимфатические сосуды, следующие I паратимическим узлам, проходят между капсулами тимуса I лимфатического узла. Условия гемо- и лимфодинамики в грудной полосп таковы, что на высоте вдоха создаются благоприятные условия да экстравазации части лимфы из афферентных лимфатических сосудов Особенно часто это случается вблизи от мест впадения афферентны; лимфатических сосудов в краевой синус лимфатического узла, посколью лимфа встречает здесь препятствие в виде лимфоидной ткани, в результат! возможен рефлюкс лимфы и выход ее за пределы лимфатического сосуда

Косвенным свидетельством появления экстравазатов служит клеточная реакция периваскулярной соединительной ткани в виде инфильтратов в <апсуле, наблюдавшихся в нашем исследовании. В состав инфильтратов зходят макрофаги, тучные и плазматические клетки, лимфоциты, нейтрофильные и эозинофильные гранулоциты. Биологически активные вещества, выделяемые этими клетками, особенно медиаторы тучных клеток, могут проникать в лимфоэпителиальную паренхиму тимуса и поддерживать в нем инволютивные изменения, замыкая таким образом, порочный круг.

Таким образом, комплекс структурных преобразований в тимусе, выявленных в нашем исследовании, в целом можно характеризовать как выраженную акцидентальную инволюцию, вызванную Холодовым стрессом. Развитие стресс-реакции в организме крыс при экстремальных охлаждениях подтверждено нашими собственными исследованиями, проведенными совместно с сотрудниками лаборатории эндокринологии ИОПиЭЧ СО РАМН (зав. - д.б.н. В.Г.Селятицкая). Было показано, что использованный режим холодовых воздействий приводит к гипертрофии пучковой зоны коры надпочечников и вызывает более чем двухкратный подъем уровня кортикостерона в них (Обухова Л.А., Селятицкая В.Г., 1996; Селятицкая В.Г., Обухова Л.А., Кузьминова О.И., 1997).

В период реадаптации масса тела экспериментальных животных не восстанавливалась, этот показатель был на 8 % ниже такового перед началом холодовых воздействий. Несмотря на отмену экстремальных охлаждений, продолжалась гибель животных, летальность составила 13 %.

Структура тимуса также полностью не восстанавливалась. Массовый индекс, общий объем органа, объемы коркового вещества и соединительнотканной стромы обнаруживали тенденцию с снижению по сравнению с исходным уровнем. Обращало на себя внимание достоверное уменьшение объема мозгового вещества тимуса. Это приводило к значительным изменениям в соотношении структурно-функциональных зон органа, о чем свидетельствовало достоверное увеличение индекса К/М по сравнению с контролем.

При анализе изменений клеточного состава тимуса в период реадаптации выявлены тенденции к увеличению ряда показателей, сниженных под влиянием экстремальных охлаждений. К таким показателям относятся: общая численность лимфоидных клеток, количество бластов, средних и малых лимфоцитов в корковом веществе тимуса. Однако ни один из этих показателей не достигал исходного уровня. В субкапсулярной зоне достоверно увеличилась митотическая активность и снизилась интенсивность процесса гибели клеток по сравнению с соответствующими показателями в период холодовых воздействий, однако контрольных значений они также не достигали.

На фоне тенденции к восстановлению лимфоидной популяции тимуса некоторые изменения клеточного состава, выявленные в период экстремальных охлаждений, сохранялись. Количество макрофагов и плазматических клеток в субкапсулярной зоне коркового вещества и в мозговом веществе достоверно превышало контрольные значения. Кроме этого отмечено появление единичных тучных клеток в паренхиме тимуса, не наблюдавшееся в норме. Количество тучных клеток в соединительнотканной строме органа достоверно превышало таковое в контроле и имело тенденцию к увеличению по сравнению с соответствующим показателем в период экстремальных охлаждений. Обращало на себя внимание преобладание тучных клеток с дегрануляцией III степени. В период реадаптации усилилась инфильтрация соединительнотканной стромы и внутридольковых периваскулярных пространств плазматическими клетками.

Однако наиболее драматические события в период реадаптации наблюдали в мозговом веществе тимуса. На фоне снижения абсолютного объема данной зоны выявлено достоверное уменьшение численности эпителиальных клеток.

В больших медуллярных эпителиальных клетках были обнаружены выраженные изменения ультраструктуры. В ядрах этих клеток усиливалась конденсация хроматина. В цитоплазме наблюдали много расширенных цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, лишенных рибосом. Содержимое некоторых секреторных вакуолей было гомогенным, часть из них содержала миелиноподобные структуры. Другим характерным изменением было значительное развитие элементов цитоскелета. Промежуточные филаменты образовывали массивные извитые пучки, которые в некоторых клетках занимали большую часть цитоплазмы. Число свободных рибосом заметно уменьшалось, хотя часто между пучками промежуточных филаментов находились скопления полирибосом. В некоторых клетках периферические участки цитоплазмы были почти лишены клеточных органелл и имели матрикс, более элекгронноплотный, чем обычно. В результате клетки выглядели более темными. В структуре митохондрий наблюдали полиморфные изменения - часть митохондрий имела просветленный матрикс и укороченные кристы, другие митохондрии имели более плотный, чем обычно, матрикс.

Морфометрическое исследование кровеносных капилляров в корковом веществе тимуса на светооптическом уровне показало, что число профилей срезов капилляров на стандартной площади и их объемная плотность не имели достоверных отличий от соответствующих показателей у контрольных животных.

Ультраструктурное исследование эндотелиальных клеток доказало, что в период реадаптации объемная плотность иикропиноцитозных везикул приближалась к контрольному значению. Эбъемная плотность свободных рибосом и полирибосом была достоверно :нижена по сравнению с контролем, а соответствующий показатель гранулярного эндоплазматического ретикулума имел тенденцию к ;нижению. Объемная плотность митохондрий была близка к контрольному значению, однако в этих органеллах наблюдали заметные этклонения от нормальной структуры. Если в период холодовых зоздействий чаще наблюдали набухание митохондрий, просветление чатрикса, редукцию крист, то в период реадаптации преобладали митохондрии с гомогенным матриксом умеренной электронной плотности, лишенные крист. Часть митохондрий имела нормальное строение. Деструктивные изменения в субклеточных структурах, этветственных за процессы синтеза и энергообеспечения, наблюдаемые в разных типах клеток, могут указывать на системный характер данных изменений и свидетельствовать об истощении компенсаторно-приспособительных процессов в тканях.

На основании этих данных можно сделать вывод о том, что в период реадаптации инволюция тимуса, начавшаяся при экстремальных эхлаждениях, прогрессирует, несмотря на отмеченные тенденции к нормализации численности лимфоидной популяции и некоторых микроциркуляторных нарушений. Инволюция тимуса - это динамичный процесс, развивающийся во времени, поэтому ее морфологическая картина, естественно, претерпела некоторые изменения по сравнению с периодом экстремальных охлаждений. На первый план выши структурные изменения эпителиальных клеток и усиление инфильтрации тимуса гучными и плазматическими клетками. Хотя структура тимуса непрерывно изменяется с возрастом, в каждый данный момент существует некая возрастная норма, к которой возвращается выведенный из равновесия орган (Ярилин A.A. и др., 1991). Эта норма включает в себя численность и состав клеточных популяций, а также уровень гормональной активности его эпителиальной стромы. Литературные чанные о возрастной инволюции (Nakahama М., Mohri N. et al., 1990) свидетельствуют о ведущей роли в этом процессе угасания функциональной активности эпителиального компонента тимуса и в первую очередь, эпителиальных клеток мозгового вещества. Поэтому выявленные в нашем исследовании изменения в структуре тимуса при экстремальных охлаждениях могут быть равносильны его преждевременному старению.

В левых каудальных паратимических лимфатических узлах Большинство морфометрических показателей было близко к контрольным

цифрам. В правых каудальных паратимических и подколенных лимфатических узлах изменения микроанатомической организации, выявленные в период холодовых воздействий, прогрессировали. Анализ распределения вторичных лимфоидных узелков по стадиям развития герминативного центра показал увеличение доли герминативных центров на III и IV - заключительных стадиях развития. В мозговых тяжах отмечен сдвиг в сторону более зрелых форм плазматических клеток, снижение митотической активности плазмобластов, увеличение доли плазматических клеток с пикнотическими ядрами, увеличение количества макрофагов, фагоцитирующих разрушенные клетки. По-видимому, новые герминативные центры, сформировавшиеся в период холодовых воздействий, завершают свое развитие, а изменения клеточного состава мозговых тяжей указывают на угасание плазмоцитарной реакции. В период реадаптации усиливается инфильтрация лимфатических узлов тучными клетками, число которых возрастает не только в мозговых синусах, но и в лимфоидной паренхиме коркового вещества. Активация тучных клеток в лимфатических узлах является одним из признаков начинающейся инволюции периферических лимфоидных органов (Sainte-Marie G., Peng F.S., 1990).

Дефицит массы тела в период реадаптации свидетельствует об истощении пластичесих ресурсов в организме, а продолжающаяся гибель животных - о срыве адаптивной реакции к холоду.

Структурные преобразования в тимусе и лимфатических узлах при экстремальных охлаждениях организма и реадаптации на фоне фармакологической коррекции

У животных, получавших полифенольные соединения (ПФС) из манжетки обыкновенной в течение 7 дней, масса тела составляла 112,0±1,34 % от исходной, а у животных, получавших дистиллированную воду (в эквивалентном объеме) - 107,4±1,76% от исходной (Р<0,05). Это свидетельствует о наличии анаболического эффекта у данного препарата.

Массовый индекс, общий объем тимуса, объемы коркового и мозгового вещества у животных, получавших ПФС из манжетки обыкновенной, обнаруживали тенденцию к увеличению (табл.2).

Изучение клеточного состава показало, что во всех структурно-функциональных зонах тимуса появилась тенденция к увеличению общего количества клеток на стандартной площади. Во внутренней зоне коркового вещества достоверно увеличилось количество бластов и средних лимфоцитов, отмечена тенденция к параллельному усилению митотической активности и процесса гибели клеток во всех структурно-функциональных зонах коркового вещества и в мозговом веществе

тимуса, при этом соотношение между митотически делящимися и гибнущими клетками существенно не изменилось.

Изменения клеточного состава указывают на то, что ПФС из манжетки обыкновенной оказывают стимулирующее влияние на пролиферативные процессы в тимусе. В этом контексте объяснима и тенденция к усилению процесса гибели лимфоидных клеток. Для поддержания гомеостаза в любой ткани необходимо равновесие между процессами пролиферации и гибели клеток, более того, в нормальном тимусе процессы пролиферации и дифференцировки лимфоцитов сопряжены с процессами их селекции и элиминации аутореактивных клонов посредством включения программы клеточной гибели, морфологическим проявлением которой является апоптоз.

У животных, получавших препарат манжетки, были отмечены изменения в тучноклеточной популяции тимуса. Общее количество тучных клеток на стандартной площади среза практически не изменилось. Однако, произошли изменения в соотношении форм тучных клеток. У животных опытной группы достоверно увеличилась по сравнению с контролем доля клеток с дегрануляцией II степени. При этом доля и абсолютное количество 0 форм и клеток с дегрануляцией I степени имели тенденцию к уменьшению. Доля клеток с дегрануляцией III степени практически не изменилась. Следует отметить, что среди дегранулирующих тучных клеток преобладали клетки с секреторным типом дехрануляции. По-виДимому, эта реакция является закономерной, поскольку любое повышение функциональной активности тимуса требует адекватных изменений фона биогенных аминов, играющих существенную роль в нормальной гистофизиологии данного органа (Сергеева В.Е., 1994).

Введение полифенольных соединений из манжетки обыкновенной приводило к существенным изменениям эпителиального компонента тимуса. Железистые образования были обнаружены у всех животных данной экспериментальной группы. При этом отмечено достоверное увеличение их суммарного объема и количества телец Гассаля в мозговом веществе.

Электронномикроскопическое исследование выявило следующие изменения в эпителиальных клетках тимуса.

Субкапсулярные/парасептальные/периваскулярные эпителиальные клетки выглядели гипертрофированными. Их ядра, как правило, были треугольной формы, с менее выраженной, чем в контроле, конденсацией хроматина, содержали крупное ядрышко. Цитоплазма клеток выглядела более насыщенной клеточными органеллами. В перинуклеарной зоне располагались расширенные цистерны гранулярного

эндоплазматического ретикулума с большим количеством прикрепленных рибосом на мембранах, секреторные вакуоли небольших размеров,

хорошо развитый комплекс Гольджи. Митохондрии в основном имели матрикс умеренной электронной плотности и много удлиненных, параллельно расположенных крист. В цитоплазме отростков было повышено содержание промежуточных филаментов, между пучками которых располагались свободные полирибосомы и митохондрии.

В светлых, промежуточных и темных эпителиальных клетках коры тимуса наблюдали сходные по своей направленности изменения. Все эти клетки выглядели гипертрофированными. Ядра клеток были увеличены в размерах, имели менее конденсирований хроматин по сравнению с контролем, крупное ядрышко. В цитоплазме клеток содержалось большое количество цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, многочисленные везикулы, секреторные вакуоли разных размеров, содержащие гранулярный электронноплотный материал, несколько хорошо развитых комплексов Гольджи, полирибосомы. В перинуклеариой цитоплазме и, главным образом, в цитоплазме отростков содержалось большое количество тонких пучков тонофиламентов. В зоне кортикомедуллярного соединения и в мозговом веществе часто встречались малодифференцированные эпителиальные клетки. Большие медуллярные эпителиальные клетки также выглядели гипертрофированными, часто образовывали симпластические островки, состоящие из нескольких клеток. Ядра их были увеличены в размерах, имели 1-2 хорошо развитых ядрышка. В цитоплазме увеличено содержание практически всех компонентов вакуолярного аппарата этих клеток: цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума, гладких и окаймленных везикул, комплексов Гольджи и секреторных вакуолей, образующих скопление в перинуклеариой области. Митохондрии в больших медуллярных клетках имели те же структурные особенности, что и в клетках 1 типа, описанных выше.

Исследование микроциркуляторного русла тимуса у животных, получавших препарат из манжетки показало, что во внутренней зоне коркового вещества увеличились число кровеносных капилляров на стандартной площади и появилась тенденция к увеличению их объемной плотности. При электронномикроскопическом исследовании коркового вещества тимуса наблюдали как правило, мелкие кровеносные капилляры, имеющие узкий просвет. Эти данные позволили предположить, что в ответ на введение ПФС из манжетки обыкновенной в тимусе активируется процесс ангиогенеза. Влияние полифенольных соединений на процессы новообразования кровеносных капилляров показано и другими авторами. Увеличение плотности капиллярного русла в брыжейке тонкой кишки под влиянием биофлавоноида катергена описано в работе В.Н.Горчакова (1990). Усиление капилляризации миокарда под влиянием полифенольных соединений из корня манжетки обыкновенной описано В.А.Головневым

4992). Ангиогенез является реактивным процессом и может быть 1Ндуцироваи многими причинами. Процессу новообразования сосудов способствует повышение метаболической активности клеточного состава органа, в качестве индукторов роста капилляров могут выступать эиологически активные вещества, выделяемые тучными клетками, такие <ак серотонин и брадикинин (Козлов В.И. и др., 1994).

При электронномикроскопическом исследовании стенки сровеносных капилляров наблюдали увеличение насыщенности дитоплазмы эндотелиальных клеток кровеносных капилляров органеллами. Цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума эыли расширенными, с большим количеством рибосом на мембранах, увеличилось число свободных рибосом и полирибосом. Обращало на себя шимание наличие хорошо развитого комплекса Гольджи. Митохондрии Зыли, как правило, крупными, удлиненной формы, с большим <оличеством параллельных крист и матриксом умеренной электронной шотности. При этом объемная плотность микропиноцитозных везикул шела тенденцию к снижению. Эти изменения ультраструктуры шдотелиальных клеток свидетельствуют об усилении их синтетической и секреторной функции и тенденции к снижению транспортной функции. В ттературе мы встретили несколько сообщений о способности юлифенольных соединений снижать проницаемость кровеносных сапилляров для макромолекул (декстрана, меченого флуоресцеин-«отиоцианатом), транспорт которых, как известно, опосредован «шкропиноцитозными везикулами (Valiez М.О. et al., 1996; Verbeuren T.J., I996).

В зоне кортикомедуллярного соединения под влиянием юлифенольных соединений из манжетки обыкновенной отмечена тенденция к увеличению относительного объема посткапиллярных венул и шутридольковых периваскулярных пространств. По-видимому состояие умеренной дилятации микроциркуляторного русла адекватно уровню товышенной функциональной активности органа. В периваскулярных тространствах содержалось большое количество клеточных элементов, лреимущественно малых лимфоцитов. Кроме этого, у животных данной жспериментальной группы в периваскулярных пространствах чаще обнаруживались расширенные лимфатические капилляры, заполненные тмфоцитами. Эти структурные изменения могут отражать усиление процесса выхода лимфоцитов из паренхимы тимуса в общую циркуляцию i свидетельствовать о лимфотропном эффекте полифенольных соединенй « манжетки обыкновенной.

В лимфатических узлах под влиянием полифенольных соединений 13 манжетки отмечена тенденция к увеличению объема большинства

структурно-функциональных зон и усилению пролиферации клето) разной специализации,

Обобщая, можно сказать, что в реакции лимфоидных органов н! введение ПФС из манжетки обыкновенной отчетливо просматриваете: тенденция к увеличению их функциональной активности. Ключевым! моментами являются стимуляция пролиферации лимфоцитов 1 эпителиальных клеток (образование эпителиальных тяжей и канальцев) образование дополнительных элементов микроциркуляторного русла приводящие в совокупности к увеличению числа структурных элементов ] органе и расширяющие тем самым его резервные возможности.

Полученные данные согласуются с представлением о состоянш неспецифически повышенной сопротивляемости, возникающем ] организме при использовании адаптогенов и открытом В.Н.Лазаревы« (1963). Суть этого состояния заключается в подготовке организма 1 встрече с будущими экстремальными воздействиями и создании условш для ускоренной и качественно более совершенной ответной реакции на эт) воздействия.

Полифенольные соединения из надземной части манжета] обыкновенной существенно изменяли реакцию организма в целом ] системы лимфоидных органов на последующие экстремальны охлаждения.

Летальность животных при экстремальных холодовы: воздействиях, проводимых на фоне коррекции, снизилась от 20 % ] контроле до 6,5 %, потеря массы тела составила 5,3% (в контроле -12 %).

Масса тимуса в ответ на последующее экстремальное охлаждени практически не изменилась, общий объем органа и объемы его корковоп и мозгового вещества имели тенденцию к снижению. Сравнива: цитологический профиль тимуса после холодовых воздействий ; контрольных животных и животных, принимавших препарат манжетки можно сказать, что изменения клеточного состава по ряду показателе! имели прямо противоположную направленность. Особенно обращало н; себя внимание изменение соотношения между процессами пролиферации ] гибели клеток в лимфоидной паренхиме тимуса. У контрольных животны: преобладали деструктивные процессы, а у животных, принимавши: препарат манжетки, усиливалась пролиферация при значительно мене выраженной деструкции лимфоцитов в корковом веществе тимуса Существенным отличием реакции на холодовые воздействия у животных получавших препарат манжетки, было отсутствие нарушенш микроциркуляции в тимусе и связаннных с ними изменений в окружающе] лимфоэпителиальной паренхиме. Обращала на себя внимание меньша: выраженность плазмоцитарной, эозинофильной и тучноклеточно1 реакции в тимусе в ответ на холодовые воздействия. Объяснение этом;

[)акту отчасти могут дать результаты исследований O.Stucker et al. (1996), соторые показали, что экстракт из Ginkgo biloba уменьшает адгезию тейкоцитов крови к эндотелию посткапиллярных венул, препятствуя тем :амым проникновению этих клеток в ткани. Реакция лимфатических узлов на холодовые воздействия у животных, принимавших ПФС из манжетки, гакже была существенно иной. Объемы структурно-функциональных зон коркового вещества - вторичных лимфоидных узелков, межузелковой зоны, глубокой коры - были достоверно снижены по сравнению с таковыми у контрольных животных, подвергавшихся действию холода. У животных данной экспериментальной группы не наблюдали инфильтрацию капсулы плазматическими клетками и эозинофильными гранулоцитами. Изучение клеточного состава лимфатических узлов не выявило существенных отклонений большинства количественных показателей от исходных значений. Следует отметить, что плазмоцитарная реакция во всех исследованных лимфатических узлах, как и в тимусе, не была ярко выраженной, что указывает на значительно меньшую активацию B-зависимых иммунологических реакций в организме и, следовательно, на снижение степени тканевых повреждениий при экстремальных охлаждениях, проводимых на фоне коррекции ПФС из манжетки обыкновенной.

В период реадаптации все животные данной экспериментальной группы выжили, а масса тела увеличилась по сравнению с таковой перед началом холодовых воздействий на 4 %.

Общий объем органа и объем коркового вещества тимуса обнаруживали тенденцию к увеличению. Клеточный состав по многим показателям был близок к исходному состоянию. Следует особо отметить отсутствие деструктивных изменений в эпителиальных клетках тимуса, особенно в больших медуллярных, которые мы наблюдали у контрольных животных в период реадаптации. Объем мозгового вещества практически не отличался от контрольного значения.

На основании этих данных можно сделать заключение об эффективности использования ПФС из манжетки обыкновенной для коррекциии адаптивной реакции к действию экстремально низких температур. Положительные эффекты данного препарата выявлены как на уровне целого организма, так и на уровне лимфоидных органов, принимающих непосредственное участие в процессах адаптации организма. Применение данного препарата существенно снижает летальность животных, уменьшает потери массы тела, защищает тимус от стрессорного повреждения и стимулирует в нем процессы восстановления.

У животных, получавших токоферол в течение 7 дней, масса тела составляла 108,63±1,74 % от исходной и не отличалась существенно от соответствующего показателя в контроле (107,4+1,76 %). Общий объем

тимуса и объемы всех его структурно функциональных зон имели тенденцию к снижению (табл.3). Со стороны клеточного состава тимуса отмечены изменения, отчасти сходные с таковыми при введении ПФС из манжетки обыкновенной. В субкапсулярной и внутренней зонах коркового вещества выявлена тенденция к увеличению бластов и средних лимфоцитов, клеток с фигурами митозов и эпителиальных клеток. Количество клеток с пикнотически измененными ядрами мало отличалось от контрольного значения, при этом обращало на себя внимание достоверное увеличение количества макрофагов на стандартной площади среза, а также тенденция к увеличению числа плазматических клеток и эозинофильных .гранулоцитов в ткани данной зоны.

Во внутренней зоне коркового вещества достоверно увеличилось количество бластов и средних лимфоцитов, имела место тенденция к увеличению общего количества лимоидных клеток на стандартной площади в данной зоне. Митотическая активность клеток практическй не изменилась, а число лимфоцитов с пикнотически измененными ядрами имело тенденцию к увелйчению. В этой зоне также обращало на себя внимание увеличение количества макрофагов и плазматических клеток и появление единичных эозинофильных гранулоцитов.

Изменения клеточного состава мозгового вещества тимуса имели аналогичную направленность.

При введении токоферола изменилось состояние тучноклеточной популяции тимуса. Общее количество тучных клеток на стандартной площади имело тенденцию к увеличению. Среди тучных клеток достоверно увеличилась доля с дегрануляцией II степени и уменьшилась доля 0 форм.

У животных, принимавших токоферол, увеличилась частота обнаружения паращитовидноподобных структур, эпителиальных тяжей и мелких эпителиальных канальцев. Суммарный объем железистых образований имел тенденцию к увеличению. Количество телец Гассаля достоверно увеличилось по сравнению с контролем.

В структуре эпителиальных клеток наблюдали менее выраженные изменения, по сравнению с таковыми после введения полифенольных соединений из манжетаи обыкновенной. В субкапсулярных и периваскулярных клетках наблюдали небольшое увеличение содержания промежуточных филаментов. В светлых, промежуточных и темных эпителиальных клетках состояние субклеточных структур, ответственных за процессы синтеза мало отличалось от картины, наблюдаемой у контрольных животных. Обращало на себя внимание изменение состояния митохондрий. Эти органеллы несколько увеличивались в размерах, имели матрикс умеренной электронной плотности и много удлиненных, параллельно расположенных крист.

У животных, получавших токоферол, были отмечены изменения со ггороны микроциркуляторного русла тимуса. Количество кровеносных сапилляров в корковом веществе не изменилось, но была отмечена тенденция к увеличению их объемной плотности. При шектронномикроскопическом исследовании коркового вещества тимуса 1екоторые капилляры выглядели умеренно расширенными. Ислледование шьтраструктуры эндотелиоцитов кровеносных капилляров выявило тенденцию к увеличению объемной плотности митохондрий и свободных >ибосом. Структура митохондрий была аналогична таковой в шителиальных клетках. Обращала на себя внимание тенденция к увеличению объемной плотности микропиноцитозных везикул. Эти щнные могут указывать на повышение проницаемости кровеносных сапилляров в корковом веществе тимуса. В пользу этого ;видетельствовали некоторые изменения перикапиллярной лимфоидной тренхимы тимуса. Здесь часто обнаруживались лимфоциты в состоянии топтоза, макрофаги, фагоцитирующие погибщие клетки, и шазматические клетки.

В зоне кортикомедуллярного соединения вывлена тенденция к увеличению объемной плотности периваскулярных пространств, в составе соторых увеличилось содержание плазматических клеток.

Таким образом, несмотря на имеющуюся тенденцию к активации фолиферативных процессов в корковом веществе тимуса, некоторые изменения клеточного состава при введении токоферола :видетельствовали о появлении инволютивных изменений феимущественно в периваскулярных зонах лимфоидной паренхимы и ¡ыли связаны, по-видимому, с увеличением проницаемости кортикальных сапилляров. Поскольку гибнущие лимофоциты локализовались главным >бразом рядом с кровеносными капиллярами, а не были рассеяны щффузно, можно предположить, что апоптоз этих клеток индуцирован :убстанциями, проникающими в паренхиму тимуса из кровеносного русла.

Структура лимфатических узлов, как паратимических, так и юдколенных под влиянием токоферола существенно не изменялась.

Реакция на последующие холодовые воздействия отличалась от аковой в контроле и при использовании ПФС из манжетки »быкновенной.

Масса тела у животных, получавших токоферол, в ответ на олодовые воздействия не снизилась, а имела тенденцию к увеличению. )днако на летальность экспериментальных животных токоферол фактически не повлиял. Этот показатель составил 19 % (в контроле -10%).

В тимусе при последующих экстремальных охлаждениях были :ыявлены более выраженные изменения, чем у контрольных животных.

Общий объем органа и объемы всех его структурно функциональных зон имели тенденцию к снижению, по сравнению с таковыми у контрольных животных, подвергавшихся Холодовым воздействиям.

При анализе изменений клеточного состава была выявлена тенденция к уменьшению численности лимфоидных клеток в корковом веществе тимуса, и митотической активности. Количество гибнущих лимфоцитов, наоборот, достоверно увеличивалось. Прогрессировала макрофагальная, плазмоцитарная и эозинофильная реакции в паренхиме тимуса.

Со стороны микроциркуляторного русла отмечали дилятацик капиллярного и венулярного звеньев, расширение периваскулярных пространств в кортикомедуллярном соединении. При ультраструктурном исследовании эндотелиоцитов кровеносных капилляров в корковом веществе тимуса выявлено достоверное увеличение объемной плотности микропиноцитозных везикул. Коллагеновые волокна в перикапиллярных пространствах были утолщенными. Цитоплазма периваскулярных эпителиальных клеток выглядела просветленной, пучки промежуточных филаментов в них были дезорганизованы. Эти данные указывают нг развитие явлений отека перикапиллярного пространства у. периваскулярных эпителиальных клеток.

В структуре многих больших медуллярных клеток также наблюдали признаки умеренного отека. Это проявлялось в просветлен^ цитоплазмы, дезорганизации элементов цитоскелета и удалении друг от друга функционально сопряженных клеточных органелл. Эти изменение могут приводить к существеннному нарушению белоксинтезирующе! функции и ограничению компенсаторно-приспособительны} возможностей у части эпителиальных клеток.

В лимфатических узлах в ответ на холодовые воздействш отмечено снижение объемов ряда структурно-функциональных зон мозговых тяжей в паратимических лимфатических узлах, глубокой коры первичных лимфоидных узелков и мозговых тяжей в подколенны? лимфатических узлах.

В период реадаптации все животные данной экспериментально! группы выжили,, и прибавили массу тела. Однако восстановленш структуры лимфоидных органов у них не произошло. Отмечены лини тенденции к нормализации количественных морфометрическиз показателей.

Таким образом, токоферол существенно уступает по своил адаптогенным свойствам полифенольным соединениям из манжепа обыкновенной. Профилактическое применение этого препарата по нашм данным не защищает лимфоидные органы от стрессорных повреждений I делает структурную цену адаптации для них более высокой.

В современной классификации адаптогенов (Гречко А.Т., 1994) фепараты анитиоксидантного ' действия типа токоферола отнесены к функциональным (симптоматическим) корректорам стресса и защитно-юсстановительных реакций, которые по сравнению со сложными юмплексами экстрактивных веществ из растений, относящихся к классическим адаптогенам, обладают более узким диапазоном ¡иологического действия на организм. Следовательно, такие вещества как токоферол целесообразно использовать в комплексе с другими фармакологическими препаратами.

ВЫВОДЫ

1. В результате морфологического исследования тимуса в физиологических условиях получены дополнительные сведения по ряду малоизученных и дискуссионных вопросов его нормальной морфологии:

- на светооптическом и электронномикроскопическом уровнях в гимусе выявлены внутридольковые лимфатические капилляры, расположенные в периваскулярных пространствах, преимущественно в юне кортикомедуллярного соединения; стенка лимфатических капилляров гимуса имеет классическое строение, аналогичное таковому в других частях тела;

- большая частота обнаружения в тимусе у интактных животных железистых образований, к которым относятся паращитовидноподобные лруктуры, эпителиальные тяжи и эпителиальные канальцы :видетельствует о том, что они присущи нормальному тимусу, а особенности гистологического строения железистых образований позволяют рассматривать их в качестве одного из морфологических эквивалентов эндокринной функции тимуса.

2. Совокупность структурных преобразований в тимусе, выявленных при экстремальных охлаждениях, можно характеризовать как выраженную акцидентальную инволюцию тимуса в стадии гипотрофии, основными проявлениями которой являются уменьшение массы и объема органа, уменьшение размеров коркового вещества; угнетение лимфоцитопоэтической функции и усиление гибели лимфоцитов по типу апоптоза, приводящие в конечном итоге к снижению численности лимфоидной популяции в тимусе.

3. Важным патогенетическим звеном в развитии акцидентальной инволюции тимуса при холодовом стрессе является увеличение проницаемости гематотимического барьера, что морфологически проявляется увеличением объемной плотности микропиноцитозных везикул в эндотелии кортикальных капилляров и плазмоцитарно-макрофагальной инфильтрацией перикапиллярных зон коркового

вещества, косвенно указывающей на проникновение антигенны: субстанций из кровеносного русла в паренхиму тимуса.

4. Пролиферация эпителиальных клеток с формирование» эпителиальных тяжей, сопровождающаяся прогрессивным развитиен эпителиальных канальцев, у 100% экспериментальных животных 1 увеличение частоты обнаружения паращитовидноподобных структу] свидетельствуют об участии железистых образований в адаптивны: реакциях тимуса на экстремальные охлаждения.

5. Особенности ультраструктуры разных типов эпителиальны: клеток, выявленные при экстремальных охлаждениях, свидетельствуют < развитии в них изменений компенсаторно-приспособительного характера направленность которых определялась функциональным назначение* каждого вида клеток:

а) увеличение содержания промежуточных филаменто: (цитокератинов) в субкапсулярных и периваскулярных эпителиальны; клетках, направлено на усиление изолирующей функции этих клеток и следовательно, снижение проницаемости капсулярно-тимического барьер; и эпителиальной составляющей гематотимического барьера;

б) в светлых, промежуточных и темных эпителиальных клетках н; фоне уменьшения содержания субклеточных структур, ответственных з; синтез секреторных белков, происходили качественны' перегруппировочные изменения субклеточной организации, направленны' на реализацию их секреторной функции;

в) в больших медуллярных клетках выявлены морфологически! признаки гиперфункции, сопровождающейся деструкцией част! субклеточных структур.

6. При экстремальных охлаждениях во всех исследованны; лимфатических узлах происходят аналогичные по своей направленност! изменения, характеризующиеся активацией В-зависимых зон формированием новых и стимуляцией предсуществующих герминативны: центров, гипертрофией мозговых тяжей, развитием плазмоцитарной макрофагальной, эозинофильной и тучноклеточной реакций; различи) заключаются в степени выраженности структурных преобразований: суд) по приросту количественных морфометрических показателей реактивность лимфатических узлов в ответ на холодовые воздействш возрастала в ряду: левые каудальные паратимические лимфатически! узлы, правые каудальные паратимические лимфатические узлы подколеннные лимфатические узлы, отражая степень тканевыз повреждений в регионе лимфосбора; при этом прослеживалась обратная зависимость выраженности ответной реакции лимфатических узлов о: исходного уровня их иммунобиологической активности.

7. Структурные преобразования в тимусе и регионарных эмфатических узлах взаимосвязаны. Деструктивные процессы в тимусе опровождаются морфологическими перестройками В-зависимых зон югионарных лимфатических узлов. Обратное влияние внеорганных [имфатических структур на тимус опосредовано соединительнотканным •кружением, которое является общим для тимуса и лимфатических узлов, вменения, возникающие в строме тимуса, могут поддерживать щволютивные процессы в его лимфоэпителиальной паренхиме, замыкая аким образом порочный круг.

8. В период реадаптации признаки акцидентальной инволюции имуса сохраняются, несмотря на отмену экстремального воздействия. В (тот период на первый план выходят изменения эпителиального :омпонента тимуса, тогда как лимфоидная популяция обнаруживает тенденцию к восстановлению. Наиболее выраженные изменения )егистрируются в мозговом веществе: абсолютный объем этой зоны :нижается, уменьшается численность эпителиальных клеток; шьтраструктурные изменения больших медуллярных клеток :видетельствуют о развитии в них деструктивных изменений, что в сочетании с уменьшением количества телец Гассаля и снижением суммарного объема железистых образований указывает на угасание •ндокринной функции тимуса и делает прогноз на полноценное юсстановление органа неблагоприятным.

9. Реадаптация не вносит качественно новых изменений в структурные преобразования исследованных лимфатических узлов, «против, прослеживается определенная преемственность по отношению к гаковым в период экстремальных охлаждений. Увеличение доли герминативных центров на заключительных стадиях развития и сдвиг в сторону зрелых форм в плазмоцитарном ряду, свидетельствуют о том, что гуморальные иммунологические реакции, индуцированные Холодовым стрессом, в период реадаптации завершают свое развитие.

10. При введении полифенольных соединений из надземной части манжетки обыкновенной в условиях физиологической нормы в лруктурных преобразованиях лимфоидных органов выявлены тенденции, указывающие на повышение их функциональной активности и увеличение лруктурных резервов:

- в тимусе - усиление пролиферации лимфоидных и эпителиальных клеток, сопровождающееся увеличением количества лимфоцитов в органе и формированием дополнительных эндокринных структур (железистых образований); образование дополнительных элементов

микроциркуляторного русла; активация тучноклеточной популяции, осуществляющей местные регуляторные функции; обогащение

эпителиальных клеток субклеточными структурами, ответственными з: синтез белка и энергообеспечение;

- в лимфатических узлах - увеличение размеров В-зависимых зон 1 усиление пролиферации клеток разной специализации.

11. Профилактическая и ранняя патогенетическая коррекци] полифенольными соединениями из надземной части манжете! обыкновенной приводит к снижению потери массы тела и летальносп животных в период экстремальных охлаждений, уменьшении выраженности инволютивных изменений в тимусе, снижении реактивности лимфатических узлов, не связанному с развитием в ни: деструктивных процессов, и полноценному восстановлению лимфоидны: органов в период реадаптации.

12. Препарат сравнения - токоферол, оказывает анаболическш эффект, снижая потери массы тела, существенно не влияет на летальност] животных, не оказывает выраженного защитного эффекта на систем; лимфоидных органов от стрессорных повреждений и не ускоряет процессь восстановления поврежденных структур в период реадаптации.

ВНЕДРЕНИЕ

Новые данные о морфологии тимуса в нормальных условия; жизнедеятельности и при экстремальных экологических воздействиях н; организм внедрены в практику научных исследований лабораторш экспериментальной патологии лимфатический системы Институт; клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН и лабораторш функциональной нейроморфологии Института физиологии СО РАМН, ; также в практику преподавания кафедры нормальной анатомш Новосибирского медицинского института.

Получено положительное решение на выдачу патента н; изобретение по заявке № 96106626/14 "Способ получения Р-витаминноп средства" от 10.07.1998 г., приоритет установлен 04.04.1996 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шорин Ю.П., Седова (Обухова) Л.А., Селятицкая В.Г. Гринберг П.М. Эндокринно-иммунные взаимодействия в процесс холодовой адаптации и сенсибилизации // Бюл. Сиб. отд. АМН СССР. 1988.-№ 1.-С. 39-42.

2. Бородин Ю.И., Седова (Обухова) Л.А., Селятицкая В.Г., Шори] Ю.П. Сочетанная реакция лимфоидных органов и надпочечников н; стресс у взрослых животных, испытавших воздействие холодом в раннеи периоде постнатального онтогенезе // Архив анатомии, гистологии 1 эмбриологии. - 1989. - Т.96, № 1. - С. 73-78.

3. Путалова И.Н., Седова (Обухова) JI.A., Мелешко Л.И. Динамика показателей адаптивных процессов органного лимфатического русла при экстремальных воздействиях II Структурное обеспечение и стимуляция компенсаторно-приспособительных реакций: Сб.науч. тр. -Омск, 1989.-С. 79-91.

4. Шорин Ю.П., Седова (Обухова) Л.А., Селятицкая В.Г., Маркель А.Л. Эндокринно-лимфоидные взаимоотношения у крыс с наследственно обусловленной артериальной гипертензией II Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1990. - Т.98, № 4. - С. 57-61.

5. Седова (Обухова) Л.А., Селятицкая В.Г., Шорин Ю.П. Лимфоэндокринные взаимоотношения у крыс при адаптации к холоду и реадаптации II Бюл. Сиб. отд. АМН СССР. - 1990. - № 1. - С. 14-17.

6. Бородин Ю.И., Седова (Обухова)Л.А. Морфофункциональные изменения лимфатических узлов в условиях низких температур // Концепция сохранения здоровья человека на Крайнем Севере. - Норильск,

1995.-С. 10-11.

7. Обухова Л.А. Структурные преобразования в тимусе при экстремальном охлаждении организма и использовании адаптогена растительного происхождения II Тез. докл. 2-го съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1995. - С. 322-323.

8. Обухова Л.А., Селятицкая В.Г., Пальчикова Н.А., Одинцов С.В. Морфофункциональное состояние щитовидной железы крыс при действии экстремально низких температур и полифенольных соединений из манжетки обыкновенной // Тез. докл. 2-го съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1995. - С. 323-324.

9. Обухова Л.А., Селятицкая В.Г. Лимфо-эндокринные отношения как показатель адаптивных резервов организма при действии низких температур // Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на организм: Материалы 2-го международного симпозиума. - Чолпон-Ата, 1995. - Ч. 2. - С. 129-130.

10. Обухова Л.А.Селятицкая В.Г. Влияние адаптогенов различной природы на структуру тимуса и морфофункциональное состояние надпочечников И Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии: Материалы международной конференции. - Новосибирск,

1996.-С. 185-188.

11. Borodin Y.I., Gorchakov V.N., Obuhova L.A. Morphological and functional changes of lymphoid organs in the presence of low temperature II Abstracts of X International Congress on Circumpolar Health. - Anchorage, Alaska, U.S.A., 1996. - P.40.

12. Обухова, Селятицкая В.Г., Пальчикова H.A., Одинцов С.В., Жанаева Т.А. Изменения морфофункционального состояния щитовидной железы крыс под влиянием экстремально низких температур и

лекарственных растений // Проблемы саногснного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма: Материалы 3-го международного симпозиума. - Чолпон-Ата, 1997. - С. 113-117.

13. Селятицкая В.Г., Обухова JI.A., Кузьминова О.И. Глюкокортикоидные гормоны и функциональная активность органов лимфатической системы при действии на организм низких температур // Эндокринные механизмы регуляции функций: Тез. докл. международной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения проф.

' М.Г.Колпакова. - Новосибирск, 1997. - С. 42-43.

14. Обухова JI.A. Влияние полифенольных соединений из манжетки обыкновенной на структурные преобразования тимуса и лимфатических узлов при экстремальных холодовых воздействиях // Закономерности морфогенеза и регуляции тканевых процессов в нормальных, экспериментальных и патологических условиях: Материалы Всероссийской конференции, посвященной 70-летию проф. П.В.Дунаева. -Тюмень, 1998. - С. 116.

15. Селятицкая В.Г., Одинцов C.B., Обухова JI.A., Пальчикова H.A. Морфофункциональные изменения щитовидной железы у лабораторных животных при действии холода II Проблемы эндокринологии. - 1998. - Т. 44, № 4. - С. 40-42.

Таблица 1

Приложение

Результаты морфометрического исследования тимуса у крыс при экстремальных охлаждениях и реадаптации (абсолютные объемы - мм3, тельца Гассаля - N на 10 мм1, М±ш)

Показатели Контроль 1 Холод 2 Реадаптация 3 Р

Общий объем 103,90±8,07 72,72±5,34 87,34±8,73 !-2<0,01

Корковое вещество 66,95±5,52 41,05±3,22 60,19±б,28 1-2<0,001 • 2-3<0,05

Мозговое вещество 22,60 ±2,11 18,6111,96 16,2±1,88 1-3<0,05

Индекс К/М 2,9610,26 2,32±0,12 3,71±0,13 1-2,3<0,05

Объем капсулы 14,3411,06 13,00±0,72 10,9110,85 -

Объем железистых образований 0,0103±0,002 0,057±0,009 0,035б±0,01 1-2,3<0,05

Количество телец Гассаля 2,35±0,59 5,02+0,89 2,6710,54 1,3-2<0,05

Таблица 2

Результаты морфометрического исследования тимуса у крыс при

экстремальных охлаждениях на фоне введения полифенольных соединений (ПФС) из манжетки

обыкновенной

(М±ш, абсолютные объемы - мм3, тельца Гассаля - N на 10 мм2)

Показатели ПФСМ 1 ПФСМ +ХОЛОД 2 ПФСТ+ ХОЛОД+ реадаптация ' 3 Р

Общий объем 104,35±9,91 92,15±9,09 115,11+11,5

Корковое вещество 67,39±6,97 57,99±6,28 77,63±8,08 -

Мозговое вещество 24,14±2,53 22,1+2,13 22,58±2,72 . -

Капсула 12,79±1,08 12,03+0,94 14,87±1,5 -

Индекс К/М 2,7±0,2 2,62+0,13 3,44±0,28 1,2-3<0,05

Железистые образования 0,02610,006 0,0239±0,018 0,0341 ±0,009 •

Тельца Гассаля 4,29±0,52 4,25±0,46 2,65±0,7 -

Таблица 3

Результаты морфометрического исследования тимуса у крыс при экстремальных охлаждениях на фоне введения токоферола (М±т, абсолютные объемы - мм3, тельца Гассаля - N на 10 мм2)

Показатели Токоферол 1 Токоферол +ХОЛОД 2 Токоферол+ ХОЛОД+ реадаптация 3 Р

Общий объем 89,14±7,391 66,82+7,09 80,17+7,66 -

Корковое вещество 60,22±5,49 42,74+4,67 55,31±5,74 2-3<0,01

Мозговое вещество 17,34+1,593 14,03±1,78 14,9± 1,56 -

Капсула 11,58+0,82 10,05±0,96 9,97±0,87 -

Индекс К/М 3,53±0,19 3,13+0,15 3,79±0,24 -

Железистые образования 0,0210+0,009 0,0110±0,004 0,0323+0,01 -

Тельца Гассаля 3,94+0,36 3,44±1,05 2,75±0,6 -