Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Структурно-метаболический статус эритроцитов у больных острым сальпингоофоритом в динамике проведения лазеротерапии

\ 2

№

1 . V' 1

На правах рукописи

Давьщова Юлия Геннадьевна

СГРУ1СГУРНО.МЕТАБОЛИЧЕСКИЙ СТАТУС ЭРИТРОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ САЛЬПИНГООФОРИТОМ В ДИНАМИКЕ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАЗЕРОТЕРАПИИ

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ТОМСК-19%

Работа выполнена на кафедрах патологической физиологии, акушерства и гинекологии №2, в лаборатории гематологии ЦНИЛ Сибирского государственного медицинского университета и в лаборатории иммунофармакологии НИИ фармакологии ТНЦ РАМН

Научные руководители: Академик МАИ ВШ,

профессор В.В. Новицкий,

доктор медицинских наук, профессор В.Д. Михайлов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор В.В. Удут

доктор медицинских наук, профессор Т.С. Федорова

Ведущая организация: НИИ курортологии и физиотерапии ' МЗ и МП РФ (г. Томск)

Защита диссертации состоится _" ¿^££¿£^61996 г. в "_" чг

на заседании диссертационного совета К 001.33.01

при НИИ фармакологии ТНЦ РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссстрацисй можно ознакомиться в научной библиотеке НИИ фармакологии ПЩ РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3

Автореферат разослан

.У/. , 1996 г

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Амосова Е.Н,

Актуальность проблемы. Воспалительные заболевания женской половой сферы по своей частоте, продолжительности и тяжести вызываемых нарушений специфических функций женского организма занимают ведущее место в структуре гинекологических заболеваний. Это обусловлено современными особенностями их клинического течения, значительными трудностями в ранней диагностике воспалительного процесса, а также недостаточной эффективностью традиционных методов лечения [Заплавнова Л.Д. и соавт., 1990; Савельева Г.А., Антонова JI.B., 1990; Радионченко A.A., Тихоновская O.A., 1991; Altchek A., Deligdisch L., 1991; BhattaN. et al., 1993; Шутова JI.C. н соавт., 1994 и др.]. Успех лечения воспалительных заболеваний женских половых органов во многом зависит от совершенства традиционных и^поика новых методов эффективной терапии, а также насколько своевременным и адекватным было назначенное лечение. Вместе с тем, именно вопросы терапии острого сальпингоофорита остаются до конца нерешенными [Савельева Г.А., Антонова JI.B., 1987,1990; Франчук А.Е. и соавт., 1990; Bhatta N. et al., 1993].

За последние годы накоплены факты, свидетельствующие о том, что при воспалительных заболеваниях различной этиологии воздействие лазерным излучением приводит к более благоприятному течению ' патологического процесса и ускорению сроков выздоровления пациентов. При этом указывается на снижение воспалительной реакции, выраженный анальгез крута гдий эффект и активное восстановление поврежденной ткани [Гамалея Н.Ф., 1989; Удут В.В. и соавт., 1991; Козлов В.И. и соавт., 1993; Скобелкин O.K., Цыганова Г.И., 1993; Дамиров М., Слюсарь Н., Загорулько П., 1994; Тютрин И.И., Удут В.А., Наумов С.А., 1994; Izzo S., Ardovino I., 1994; Garri R. et al., 1995 и др.]..

В гинекологии возможно использование практически всех видов лазерного излучения [Шахматова М.П. и соавт., 1989; Bistert G., Wailwiener D., 1992; Ярославский В.К., Беднарский A.C., 1993; Bernhard L.A., 1994 и др.]. В то же время опыт использования в гинекологической практике низкоэнергетического гелий-неонового лазера (ГНЛ) с внутривенным введением световодов, несмотря на широкое применение его для лечения воспалительных процессов самых различных локализаций, можно считать, практически отсутствует.

Несмотря на огромное количество публикаций, посвященных ' различный аспектам биологического взаимодействия низкоинтенсивного лазерного излучения с живым организмом, в литературе явно недостаточно освещен вопрос об особенностях влияния лучей ГНЛ на эритроцитарные клетки крови, являющиеся, как известно [Соколов В.В., Грибова И.А., 1972], весьма информативным тест-объектом для оценки состояния эритрона в цепом. Данные же о характере влияния интравазалыюго облучения крови светом ГНЛ на периферическое звено эритрона у больных с острыми воспалительными заболеваниями женской половой сферы в литературе отсутствуют. Между тем известно, что воспалительные заболевания матки и ее придатков, как и любые другие воспалительные процессы, приводят к существенным сдвигам в системе крови и, в частности, в эритроне [Альперн Д.Е., 1959; Антонова JI.E., 1970; Емельянова Е.А. и соавт., 1978; Чернух A.M., 1979; Назаров В.Г., 1991; ДыгаЙ A.M., Клименко H.A., 1992 и др.]. С.этих позиций представляется актуальным исследование особенностей и механизмов нарушения структуры, функции и метаболизма зрелых эритроцитарных клеток у больных острым сальпингоофоритом и в динамике проведения комплексной терапии с использованием эндоваскулярного лазерного облучения крови (ЭЛОК). Результаты такого рода исследования могут представлять, на наш взгляд, не только теоретический , но и практический интерес, поскольку позволят получить новые знания о механизмах структурных, метаболических и функциональных изменений клеток красной крови у больных с острым сальпингоофоритом в динамике проведения ЭЛОК и получить дополнительную информацию для клинико-патогенетического обоснования целесообразности проведения низкоинтснсивной лазерной терапии при данной патологии.

Цель исследования . изучить особенности структурно-метаболического статуса эритроцитов и механизмы изменения периферического звена эритрона у больных острым сальпингоофоритом в динамике проведения комплексной терапии с использованием эндоваскулярного лазерного облучения крови.

Задачи исследования.

I. Дать характеристику структурных, метаболических и функциональных нарушений зрелых эритроцитарных клеток крови у больных острым сальпингоофоритом.

2. Выявить особенности и механизмы изменения периферического звена эритрона у больных острым сальпингоофоритом в динамике проведения традиционной терапии.

3. Установить особенности структурно-метаболического статуса и функционального состояния эритроцитов периферической крови у больных острым сальпингоофоритом в процессе проведения сочетанной терапии с использованием эндоваскулярного лазерного облучения крови.

4. На основании изученных показателей периферического звена эритрона дать анализ эффективности включения эндоваскулярного лазерного облучения крови з традиционные схемы лечения больных острым сальпингоофоритом.

5. На основании анализа результатов собственных исследований и данных литературы описать механизмы биологического действия света гелий-неонового лазера на эритроциты периферической крови и красный росток кроветворения в целом.

Наутпая потопа п практическая значимость работы. С использованием широкого комплекса современных методов изучения структурно-метаболического статуса эритроцитов периферической крови впервые дана развернутая характеристика качественного состояния периферического звена эритрона у больных острым сальпингоофоритом в динамике проведения традиционной терапии п с использованием эндоваскулярного лазерного облучения крови. Установлено, что развитие воспалительного процесса у больных острым сальпингоофоритом сопровождается выраженными нарушениями структурно-метаболического статуса и функционального состояния »ритроцитов периферической крови и приводит к возникновению регенераторной анемии легкой и средней степени тяжести. Показано, тго к наиболее характерным нарушениям структурно-метаболического ггатуса и функционального состояния эритроцитов периферической крови в острый период заболевания относятся снижение показателей сухой массы и осмотической резистентности эритроцитов, низкие показатели концентрации сульфгидрильных групп и липопротеинового комплекса, увеличение числа переходных, предгемолитипеских и цегенератавно измененных форм клеток. Впервые обосновано, что механизмы анемии, развивающейся у больных острым сальпингоофоритом, связаны с ускоренным старением и повышенной гибелью зрелых эритроцитов и нарушением синтетических процессов в

эритронормобластах костного мозга. Проведение традиционной терапии не приводило к полной нормализации изученных количественных ( концентрация гемоглобина, интенсивность гемолиза) и качественных показателей периферического звена эритрона (концентрация сульфгидрильных групп и липопротеинового комплекса, процентное распределение эритроцитов по особенностям их поверхностной ультраструктуры). В результате сравнительной оценки изученных показателей периферического звена эритрона у больных острым сальпингоофоритом установлено, что включение в традиционную схему противовоспалительной терапии эндоваскулярного лазерного облучения "рови приводит к более раннему восстановлению количественных и качественных характеристик эритроцитов вследствие более выраженной и продолжительной во времени активации эритропоэза в костном мозге, чем при традиционном лечении, на что указывали более выраженные и продолжительные явления ретикулоцитоза в периферической крови, а также нормализация показателей сухой массы эритроцитов (процессов гемоглобинизации в эритронормобласгах костного мозга). О мембранорепарационном действии лазерного излучения свидетельствовали установленные по итогам проведенного исследования факты ускорения нормализации структуры популяции зрелых эритроцитарных клеток крови по особенностям их поверхностной архитектоники и снижения показателей интенсивности их гемолиза в условиях сочетанной терапии.

На основании результатов собственных исследований и данных литературы высказано суждение, что механизмы корригирующего эффекта эндоваскулярного лазерного облучения крови светом гелий-неонового лазера при остром сальпингоофорите на выявляемые при этом. заболевании нарушения структуры, метаболизма и функции "»ритроцитов связаны со стимулирующим влиянием лазерного излучения на пролиферативную активность эритроидных клеток костного мозга, ингибированием процессов гиперлипопероксидации, повышением антиоксидантной активности эритроцитов, свидетельствующих в целом о возможности структурно-функционального обновления эритроцитарных мембран. Полученные в указанном аспекте данные, в свою очередь, могут быть положены в основу разработки способов предупреждения и г.оррекции нарушений со стороны клеток красной крови, возникающих у больных острым сальпингоофоритом, и служить еще одним подтверждением целесообразности применения

шугрисосудистой лазерной терапии при острых воспалительных «аболеваниях женской половой сферы.

Реалгоания и апробация работы. Материалы диссертации гокладывались и обсуждались на заседаниях кафедры патофизиологии и сафедры акушерства и гинекологии №2 СГМУ (Томск, 1994-1996), на ггоговых конференциях ЦНИЛ СГМУ (Томск, 1994-1996), на заседании троблемной комиссии по апробации кандидатских диссертаций НИИ фармакологии Томского научного цетра РАМН (Томск, 1996).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 3 работы.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 134 ^границах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, шлодов и списка литературы, включающего 271 источников, из соторых 212 отечественных и 59 иностранных. Диссертация отпострирована 7 таблицами и 16 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Обследовано 52 больных острым двусторонним :альпингоофоритом, находившихся на лечешга в гинекологическом >тделении 4-го родильного дома в период с 1993-го по 1995-й гг. Диагноз острого сальпингоофорита устанавливался на основании слинико-лабораторных данных, включающих в себя рутинные и юполнительные (УЗИ, кульдоцентез) методы исследования. Всем кежпинам проводилось бактериологическое исследование содержимого 1ервикального канала и материала, полученного при кульдоцентезе. 48т обследованным больным был поставлен диагноз неосложненного »строго сальпингоофорита, у 33-х из них воспалительный процесс ipотекал с вовлечением тазовой брюшины, у 15-ти - без вовлечения. Осложненное течение сальпингоофоритл с воспалительным »бразованием в малом тазу бьшо установлено у 4-х пациенток. До гачала лечения было обследовано 52 больных, из них 26 женщин в (альнейшем обследовались в динамике проведения традиционной ерапии (I группа наблюдения). 26 пациенток наряду с лекарственной ■ералией прошли курс эндоваскулярного лазерного облучения крови ЭЛОК) спетом гелий-неонового лазера (ГНЛ) (И группа наблюдения). 1 комплекс лечебных мероприятий входили:

Тротивопоспдлительная, ашибакгериалъная (антибиотики, препараты штрофурала и уоронндозолп), инфузиопная. гипосепсибилизируюшая

терапия и курс интравазалшой лазерной терапии (для женщин 2-ой группы наблюдения).

Для облучения 1фови использовалась лазерная установка типа "Лазтер-04" (ЛГ-111) с длиной волны 638 нм и выходной мощностью на конце рабочего световода 5 мВт. Процедура проводилась с 1-го дня пребывания больной в стационаре и включала в себя 5 сеансов, ежедневно, в утренние часы, с экспозицией в 20 мин. Гематологическое обследование больных проводилось на 1, 4, 7 и 14-е сут с момента поступления их в клинику. Контрольную группу составили 20 здоровых женщин аналогичного возраста.

У всех обследуеиых проводилось комплексное изучение иорфофункционального состояния периферического звена эритрона, включавшее исследование количественных показателей красной крови рСост Е.А., 1975], определение осмотической резистентности и концентрации свободного гемоглобина в крови методом изучения гипертонической устойчивости эритроцитов [Голованов М.В., 1991 в нашей модификации], концентрации в эритроцитах сульфгидрильных групп и липопротеинового комплекса методом цитоспектрофотоыетрии fChevremont, Frederick, 1943; Barenbaum, 1956], величины сухой массы эритроцитов методом однородного интерференционного поля с большим раздвоением изображения [Козинец Г.И. и со авт., 1980; Гольдберг Е.Д., Степанова Е.И., Костарева И.В., 1983], изучение ■ поверхностной архитектоники клеток красной крови [Козинец Г. И., Ряполова И .В., Шишкшшва З.Г., 1977; Ионов Б.В., Чернух A.M.. 1981]. Распрсделенеие больных в соответствии с использованными методами исследования представлено в табл.. 1.

Результаты исследования обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стыодента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Морфофункцшшальвое состояние периферического звена эрепгрояа

у больных острым сальпилгоофоритом в процессе проведения традиционной тердшиг

Работами ряда авторив показано, что у женщин с острым» воспалительными заболеваниями внутренних половых органов обнаруживаются изменения количественных показателей

Таблица 1

Распределение обследованных больных по группам наблюдения н з соответствии с использованными методами исследования показателей периферического звена эритрояа

№ пп Методы исследования Группы наблюдения

Здоровые женщины Больные острым салышнгоофоритом в динамике традиционной терапии Больные острым салышнгоофоритом в динамике комплексной лазеротерапии

1-« сут 4-е сут 7-е сут 14-е сут 1-е сут 4-е сут 7-е сут 14-е сут

1. Определение количественных показателей периферического звена эритрона стандартными гематологическими методами 20 26 21 20 22 26 26 22 21

2. Определение осмотической резистентности эритроцитов н концентрации свободного гемоглобина в крови методом изучения гипертонической устойчивости эритроцитов 20 26 21 20 22 26 26 22 21

3. Определение величины сухой массы и диаметра эритроцитов методом интерферометрии 20 26 23 23 ">3 26 26 26 26

4. Определение концентрации сульфгадрильных групп методом цитоспектрофотометрии "¡0 26 23 23 23 26 26 26 26

5. Определение концентрации липопротеидов методом цитоспектрофотометрии 20 26 23 23 23 26 26 26 26

б. Изучение поверхностной архитектоники эритроцитов методом сканирующей электронной микроскопии 7 6 б 6 6 7 7 6 б

периферического звена эритрона, проявляющиеся в снижении концентрации гемоглобина, числа эритроцитов, увеличении содержания ретикулоцитов [Галкина З.Е., Ельцов-Стрелков В.И., Титов A.A., 1973 Савельева Г.М., Антонова JI.B., 1987; Aktchek A., Deligdisch L., 1991].

Наши исследования в целом подтвердили эти данные. Так, j больных острым сальпингоофоритом в 1-е суг набшодения отмечало« выраженное снижение концентрации гемоглобина (до 110,9611,94 r/i при 133,30±3,28 г/л у здоровых женщин, р<0,001), выявлялась заметная тенденция к депрессии количества эритроцитов, общее число которых н< превышало 3,65±0,06 т/л при норме 3,92±0,16 т/л (р>0,05). Содержали» же репосулоцитов было достоверно (р<0,001) увеличено i соответствовало 7,86±0,58%о при 2,25±0,38%о у здоровых женщин (рис 1). Таким образом, выявленная анемия носила явно регенераторны! характер, что не оказалось неожиданным, и лишь еще раз подтвердил« хорошо известный факт адекватного компенсаторно приспособительного ответа костномозгового звена эритрона н; воздействие флогогенов [Маяиский А.Н., Маянский Д.Н., 1983; Дыга A.M., Клименко H.A., 1992].

Механизм анемии, развивающейся у обследованных больных с острьн сальпингоофоритом, был связан, как показали результаты наши исследований, с ускоренным старением и повышенной гибелью зрелы циркулирующих эритроцитов. Так, с использованием метод определения гипертонической устойчивости эритроцито! позволяющего изучать возрастную характеристику популяци эритроцитов, а также их способность к нормальном функционированию в условиях воспалительного процесса (пр воздействии значительных осмотических нагрузок) [Голованов М.В 1991], было показано, что концентрация свободного гемоглобина плазме крови у больных, обследованных в 1-е сут наблюдения (8,23±0,6 усл.ед.), резко (р<0,001) превышала его уровень у здоровых женщи (2,70±0,23 усл.ед.) (рис. 1). Известно [Терсков И.А., Гительзон И.И 1967; Петрова М.П. и со авт., 1987], что стойкость эритроцито) определяющаяся по выходу в плазму свободного гемоглобин; представляет собой результирующую трех процессов: времен] необходимого для преодоления гемолитиком барьера оболочечно проницаемости, ckoj ierra распада внутриклеточных структур и времен! в течение которого механическая прочность оболочки противостш нарастающему смотическому давлению. Известно также, что

наибольшей стойкостью обладают cauue молодые циркулирующие в крови формы эритроцитов. По современным представлениям [Филеев JLB. и со авт., 1991], усиление образования свободного гемоглобина является универсальным механизмом неспецифического ответа периферического эвена эршрона на гипоксию и обусловленную сю активацию перекисного окисления липидов (ПОЛ) мембран эритроцитов.

Ишсрферомстрическое изучение клеток красной крови у больных острым салыишгоофоритом в 1-е сут поступления их в стационар выявило резкое (р<0,001) снижение средних показателей сухой массы эритроцитов (цо 29,33±0,30 пг) по сравнению с аналогичными показателями у здоровых женщин (36,58±0,69 пг) (рис. 2). Снижение показателейплотного остатка зрелых эритроцитов сопровождалось, как показали результаты наших исследований, увеличением процентного содержания "легких" форм клеток при параллельном снижении числа , эритроцитов с высоким содержанием плотных веществ. Известно, что основу сухой массы эритроцитов у здорового человека составляет гемоглобин [Рябов С.И., 1971], а величина сухой массы является интегральным показателем, отражающим процессы гемоглобтшзацин эритроидных элементов и характеризующим их по степени насыщения гемоглобином. Так как синтез гемоглобина заканчивается на ранних стадиях созревания рстикулоцитов и не изменяется до конца жизни кдетеи [Козин ец Г.И. и со авт., 1980], то результаты проведенного интерферометрического изучошя эритроцитов периферической крови у обследованных больных свидетельствовали об имевших место нарушениях гемоглобин образовательных процессах в эритронормобдастах костного мозга.

Результаты приведенного цитофотометрического исследования эритроцитов в периферической крови у больных острым саль: дшгоофоритом ь 1-е сут проведения традиционной терашш выявили выражшное снижение концентрации сульфгидрильных групп (цо 0,224±0,011 усл.ед. при 3,Э60±0,060 усл.ед. у здоровых жешщш; р<0,001) в пипопротеинового комплекса (до 0,319±0,012 усл.ед. при 0,430±0,007 усл.ед. в норме) (рис. 2). Анализ распределения эритроцитов ло содержанию в них тиолоаых соединений и липопротеидов у болышх, обследованных в этот период наблюдешь, позволил обнаружить признаки выраженной пеоестройки в структуре клеточной популяции с увеличением процента клеток с пониженным и низким содержанием

К 1 4 7 14

Дни исследования, сут

Рис.2. Динзмиха показателей сухой мзссы (1), сульфгядрильттых групп (2) и лило протеина в о го комплекса (3) в эритроцитах периферической крови ш - у здоровых женщин

н у больных острым салъпинхоофорнтом в процессе лечения ШИШ1 - традшпюннымп методам!! и

! - с использованием ?ндоваскулярного лазерного облучешст крови.

изучаемых субстратов.

Следует отметить, что снижение содержания БН-групп и липопротеидов в эритроцитах периферической крови у больных острым сальпингоофоритом сопровождалось, как уже указывалось, развитием ретикулоцитоза, связанного, очевидно, с компенсаторной реакцией красного ростка костного мозга на повышенное разрушение зрелых эритроцитарных клеток крови. В то же время известно, что каждому возрастному периоду жизни эритроцита свойственен определенный химический состав. При этой наибольшее содержание сульфгидрильных групп и липопротеинового комплекса в эритроцитах приходится на ранние стадии их существования в русле крови, с возрастом же уровень данных субстратов в эритроцитах постепенно уменьшается [Хомич Е.Н., Левин В.И., 1972; Гомзякова Н.В., Холостова З.Г., 1979]. В связи с этим можно предположить, что поступавшие в кровоток эритроциты у больных острым сальпингоофоритом имели пониженный уровень изучаемых компонентов вследствие нарушения синтетических процессов в зритроидных клетках костного мозга.

Липопротеиновый комплекс является составной частью мембраны эритроцита и во многом определяет его форму, деформабепьностъ, функцию и физиологическую сохранность. Изменение липопротеидиого состава эритроцитарной мембраны при остром воспалительном процессе является одной из важных составляющих снижения текучих свойств эритроцитов. Разрушение липопротеидных структур оболочек эритроцитов начинается с процессов, вызывающих разрушение липидного бнелоя клеток. Это происходит в начальном периоде ответной реакции организма на действие токсинов воспаления. Процессы разрушения липидного матрикса эритроцитарных мембран, по-видимому, возникают в результате активации ПОЛ и снижения антиоксидантной защиты эритроцитов, повышения активное™ фофолипаз и эстерификации холестерина. Они становятся причиной изменения структурной организации липидного бислоя оболочки и повреждения белкового скелета мембраны. Его разрушение затрагивает все белки, формирующие мембранные домены, от основных интегральных протеинов до спектрин-актиновой сети, и становится причиной снижения эластичности эритроцитов. Этот процесс лежит в основе потери деформируемости эритроцитов, превращения их в ригидные формы, блокирующие микрососудистое русло [Захарова Н.Б., Хвостова НЛЗ., Шведова Р.Ф., 1991].

I4

Резюмируя сказанное, возможно предположить, что отмеченное в результате проведенного исследования снижение средних значений концентрации липопротеидов в зрелых эритроцитарных клетках крови у больных острым сальпингоофоритом относится к неспецифическим реакциям периферического звена эритрона на воздействие образующихся при воспалении токсинов и обусловлена разрушением липопротеидных структур эритроцитарных оболочек. Ригидность мембран клеток красной крови становится, как известно, одной из причин появления в периферической крови патологических форм эритроцитов (сфероцитов, акантоцитов, эхиноцитов) с одновременным изменением их объема [Карабанов Г.Н., Инченко К.С., 1986]. Проведенное н.ши исследование эритроцитов периферической крови с применением метода сканирующей электронной микроскопии у больных острым сальпингоофоритом в 1-е сут поступления их в стационар показало, что развитие воспалительного процесса приводило к снижению в популяции циркулирующих эритроцитов доли клеток в форме двояковогнутого диска (до 82,85±0,7б% при 88,47±0,14% у здоровых женщин; р<0,001) при увеличении процента переходных (эллипсы, плоские диски, дискощпы с одним выростом, с гребнем, с множественными выростами, эритроциты в виде тутовой ягоды), предгемолитических (сферические, куполообразные эритроциты и эритроциты в виде спущенного мяча) и дегенеративно измененных форм клеток (рис. 3). Увеличение процента переходных форм клеток у пациенток в острую фазу воспалительного процесса было обусловлено, в основном, возрастанием числа дискоцитов с гребнем и эритроцитов в виде тутовой ягоды, которые, как известно, представляют собой более старые формы циркулирующих в крови зрелых эритроцитарных клеток. Повышение процента предгемолитических форм осуществлялось, главным образом, за счет увеличения содержания куполообразных форм эритроцитов. Изучение ультраструктуры эритроцитов периферической крови у данных больных выявило также увеличение размера центральной впадины, их некоторое уплощение, что указывало на развитие планоцитоза эритроцитов.

По имеющимся в литературе данным [Одинокова В.А. и со авт., 1985], увеличение числа деформированных форм эритроцитов при остром воспалении может быть обусловлено сдвигом в ферментативном равновесии в мембранах этих клеток. В частности, существует определенная корреляция между активностью ппокозо-6-

90 - %

88 41 86 84 82 80

1 13 т %

12 11 -10 -9 -н 8

1

1

5 т % 4

3 -2 -• 1

1

0,8 0,6-• 0.4 0,2 -Н 0

И

К 14 7 14

%

¿1

К 1 4 7 14

46 у 40 -34 -• 28 -22 --

%

а.

К 1 4 7 14

Дни исследования, сут

1

Рис.3. Динамика показателей процентного содержания нормальных дисконтов (1), переходных (2), предгсмолш-ычсских (3), дегенеративных (4) форм глеток н соотношения внутреннего и внешнего диаметра эритроцитов в периферической крови (5) Щ • у -здоровых женщин

и у больных острым салышнгоофоригом в процессе лечения |||!!{|||Ц - традиционными методами и

- с использованием эндоваскулярного лазерного облучения крови.

осфатдегидрогеназы в эритроцитах и их формой. Установлено также, то низкая активность фермента обусловливает трансформацию ритроцитов из диска в сферу и появление акантоцитов, кератоцитов и ругих отростчатых форм эритроцитов. По мнению I.H. Jandl, R.H. ister [1967], независимо от причины, вызвавшей сфероцитоз, ритроциты уграчивают пластичность, теряют способность к изменению юрмы, необходимую при прохождении их по микрососудам. В вмененных эритроцитах наступает быстрое истощение энергозапасов, го приводит к укорочению продолжительности жизни клетки.

Выявленная у больных острым сальпингоофоритом регенераторная анемия легкой и средней степени тяжести с явлениями снлениого гемолиза эритроцитов сохранялась вплоть до 14-х сут гроведения традиционной терапии, несмотря на очевидную тенденцшо : нормализации средних значений концентрации гемоглобина, числа »еппсулоцитов н уровня свободного гемоглобина в г плазме крови в ршамике наблюдения. Уровень гемоглобина, например, к окончанию гернода наблюдения (14-е сут) соответствовал лишь 123,32±2,14 г/л прц 33,30±3,28 г/л у здоровых женщин (р<0,05), а содержание свободчого емопюбина в плазме крови - 4,89+1,09 усл.ед. (2,70±0,23 усл.ед..' ><0,05). Количество же ретккулоцитов, прогрессивно снижавшееся ¡роцессе проводимой традиционной терапии, достигало к 14-м <\«т юрмальных значений - 2,36+0,49%» (р>0,05) (рис. 1). Дальне0.пие !сследования показали, что сохранявшиеся у больных в процессе 1аблюдения нарушения количественных показателей периферического 1вена эритрона сочетались с выраженными изменениями качественного состава популяции зрелых эритроцитарных клеток крови. При этом если ;редние показатели сухой массы эритроцитов, позволяющие, как уже указывалось, косвенно судить о состоянии гемоглобинсшггзтических троцессов в эритронормобластах костного мозга, к 14-м сут исследования практически восстанавливались до »юрмы, то концентрация сульфгидрильных групп и липопротеи чов даже к окончанию периода наблюдения (соответственно 0,294±(,011 и 0,372± 0,011 усл.ед. отической плотности) оставалась достоверно ниже (в обоих случаях р <0,001) их уровня у здоровых женщин (0,360±0,060 и 0,43010,007 усл.ед. оптической плотности) (рис. 2).

Исследованиями Н.В. Гомзяковой и соавт. [1967] установлено, что характер изменения эритрограмм, отражающих концентрацию сульфгидрилышх групп и липопротеиночого комплекса в клетке,

зависит от степени анемиэации ор1анизма. Проведенное ш цитофотометрическое исследование эритроцитов периферической кр< у больных острым сальпингоофоригом в процессе традициош терапии позволило установить, что на 4-е сут лечения эритрограм были отчетливо сдвинуты в сторону клеток с низкой концентрат тиоловых соединений (менее 0,30 усл.ед. оптической плотности] липопротеидов (менее 0,40 усл.ед ); обращала на себя внимание тш выраженная разнородность эритроцитов по данному признаку сравнению с нормой. К 14-м сут традиционной терапии суммар! эритрограммы несколько нормализовались за счет увеличения проце клеток с повышенным содержанием изучаемых субстратов, одн: разнородность эритроцитов по концентрации в них БН-групп липопротеидов оставалась в значительной степени выраженной.

Выявленная гетерогенность распределения эритроцитов содержанию в них сульфгидрильных групп и липопротеинов комплекса у обследованных пациенток на протяжении всего пери наблюдения является не только важным диагностическим тестом, н указывает на существенное повреждение антиоксидантной сист« клеточных популяций у больных острым сальпингоофоритом. В сроет в условиях острого воспалительного процесса наступает окисление 1 блокирование БН-групп накапливающимися в крови тиолопривиь токсинами, сопряженное с разрушением липидного матри эритроцитарных мембран. По мнению Ю.И. Гринштейна [19 снижение уровня тиоловых и "липидных" антиоксидантов (в основ! токоферола) обычно ггриводипг к активации ПОЛ и, напротив, уенле образования свободны* радикалов и ПОЛ сопровождается обы снижением как уровня "липидных" антиоксидантов, так и содержа таолов'. "

Элекгронно-микроскогтическое исследование клеток крас крови у больных острым сальпингоофоритом в динамике проведе традиционной терапии не позволило выявить сколько-ниб значительных (достоверных) изменений в содержании нормалы двояковогнутых фор*« эритроцитов, общее количество которых даз 14-м сут наблюдения (84,02±1,34%) практически не отличалось (р>0 от такового в 1 -е сут поступления больных на стационарное лече (82,8510,76%). При этом вплоть до последнего (14-го) дня исследова сохранялся высокий (достоверно превышавший норму) прог переходных (11,5610,83% при нерме 9,7110,08%; р<0,05)

предгемолитических (4,29+0,33% при норме 1,35±0,11%; р<0,001) форм эритроцитов. Количество необратимо измененных (дегенеративных) форм клеток в этот период наблюдения (0,48+0,18%) также превышало их содержание у здоровых женщин (0,19±0,03%; р>0,05). При этом обращал на себя внимание тот факт, что процент наиболее старых из переходных форм клеток (эритроциты с гребнем, в виде тутовой ягоды) к окончанию курса наблюдения не только не снижался, а даже немного увеличивался. Следует указать также, что несмотря на постепенное уменьшение диаметра центральной впадины эритроцитов в динашпсе проведения традиционной терапии по сравнению с аналогичными показателями у женшин в острый период заболевания, даже к 14-м сут наблюдения величина этого показателя (35,99+1,99%) все еще достоверно (р<0,001) превышала контрольные значения (рис. 3).

Таким образом, выявленные при остром салытингоофорите нарушения поверхностной архитектоники эритроцитов носили стойкий характер и практически не изменялись в динамике проведения традиционной терапии. Длительно сохранявшиеся изменения1 формы и поверхности зрелых циркулирующих клеток красной крови у больных острым сальпингоофоритом в процессе проводимого лечения традиционными методами были обусловлены, очевидно, плохо- или некорригируемыми нарушениями в композиции их поверхностных мембран, что в известной степени подтверждается полученными нами данными о низких показателях ЗН-групп и липопротеинового комплекса в эритроцитах в данный период наблюдения.

Таким образом, проведение традиционной терапии при остром сальпингоофорите не приводило к полной нормализации изученных количественных (конце1гграция гемоглобина, интенсивность гемолиза) и качественных показателей периферического эвена эритрона (концентрация сульфгидрильных групп и липопротеидов, процентное распределение эритроцитов по особенностям их поверхностной ультраструюуры) даже к 14-м сут наблюдения.

Морфофункцноналыдое состояние периферического звеил Ьрнтрм прн комплексном лечении больных острым салыпш оофорнтш с

применением эндоваскулярпого лазерного облучения кропн

Изучение количественных и качественных показателе периферического звена эритрона у больных острь сальпингоофоритоы, обследованных нами в 1-е суг традиционно] лечения и в 1-е сут терапии, сочетанной с ЭЛОК, не позволило выяви достоверных различий между ацалоп'щыми значениями сравниваемых группах наблюдения (рис. I, 2, 3). Анализируя результат изученных показателей периферического звена эритрона в динами проведения комплексного курса лечения, мы установили фа нормализации показателей концентрации гемоглобина и величш сухой массы эритроцитов уже на 4-е суг с момента проведения перво сеанса лазерной светотсрапии (рис. 1,2).

В работах И.Я. Чернявского и соавт. [1990] убедителы показано, что применение низкоэнергетического лазерного облучения качестве дополнительного терапевтического компонента в услови экспериментального эндометрита приводит к более ускорегно1 регрессу воспалительного процесса, что проявляется нормализаци гематологических показателей.

Как показали результаты выполненных нами исследований, в процес проведения сочетанного с внутрисосудисгым лазерным облучена крови лечения у больных острый салйпингоофоритом происходи постепенная нормализация уровня осмотической резистентное эритроцитов. Так, уже на 7-е сут лечения концентрация свободно гемоглобина в крови снизилась до 3,43±0,80 усл.ед. и статистически у: не отличалась от нормы (2,70±0,23 усл.ед.; р>0,05). Уместно напомни: что при лечении больных традиционными метода] противовоспалительной терапии интенсивность гемолиза зреш эритроцитарных клеток крови даже на 14-е сут наблюдения значитель (статистичеа-и значимо) превышала физиологическую гибс эритроцитов в условиях сбалансированною гемолиза (рис. Выявленное нами у больных сальпингоофоритом повышение стойкое эритроцитов в процессе сочетшшой терапии с использовани внутрисосудистого лазерного излучения прямо согласуется с данньи С.В. Скибинской (1972], Л.И. Сергеевой, СВ. Ереминой [1984] и д отметивших этот феномен при облучении лазерным светом человек?

хабораюрных животных. Нельзя не согласиться и с мнением этих iBTopoB о том, что механизм выявленных сдвигов связан со симулирующим влиянием лазерной энергии малой интенсивности на кроветворную функцию эритроидного ростка костного мозга с последующим поступлением в кровоток более резистентных молодых форм эритроцитов. Действительно, по нашим данным, средние показатели количества ретикулоцнтов у больных острым сальпингоофоритом на протяжении всего курса комплексной светотерапии значительно превышали контрольные значения, при этом максимальные значения величины этого показателя были зарегистрированы на 1-е и 14-е сут наблюдения. Следует отметить также, что явления ретикулоцитоза у жен ищи, проходивших курс сочетанного лечения с использованием ЭЛОГС, оказались значительно более выраженными (увеличение числа ретикулоцнтов в среднем на 148,9% по сравнению с контролем) и продолжительными (в период с 1-х по 14-е сут включительно), чем у женщин, леченных только традиционными методами (в среднем на 110,2%, в период с 1-х по 7-е сут) (рис. 1).

Многообразный терапевтический эффект излучения ГНЛ, по-видимому, связан с его воздействием на какие-то наиболее общие для живых систем структуры или процессы. Одними из первых кандидатов на эту роль могуг быть названы клеточные мембраны, поскольку, во-первых, взаимодействие излучения с веществом наиболее выражено на поверхностях раздела, во-вторых, структура мембран делает весьма вероятными кооперативные эффекты, при которых изменения небольшого звена, вызванные минимальной затратой энергии, приводят к существенным сдвигам в системе в целом. С другой стороны, перестройки структуры мембраны могут вызвать зн. чительные изменения в интенсивности и направлении биохимических и биофизических процессов в клетке. В.Н. Колмаков н соавт. [1985] предполагают, что облучение светом ГНЛ не только стабилизирует структуру -мембран эритроцитов, но и оказывает нормализующее влияние на периодические изменения проницаемости, возможно, отражающие работу механизма "клеточных часов". По мнению авторов, снижение проницаемости при облучении хорошо коррелирует с увеличением каталазной активности эритроцитов, следовательно, .сдвиги проницаемости мембран эритроцитов при облучении светом

П1Л связаны с изменениями состояния окислительно-восстановительных систем клетки.

Как уже отмечалось, состояние сульфгидр ильных групп существенно влияет на течение катализируемых различными ферментными системами окислит:льно-восстановительных процессов в клетке, а уменьшение содержания липопротендов в эритроцитах приводит к структурной перестройке поверхностной мембраны клеток и изменению ее проницаемости для ионов натрия, вследствие чего изменяются форма эритроцита и его деформабельность, что вызывает преждевременный гемолиз. С этих позиций представляется важным детально обсудить результаты проведенного цитофотометрического исследования, выявившего заметную тенденцию к увеличению концентрации тиоловых групп и литюпротеидов в эритроцитах больных острым сальпингоофоритом на протяжении сочеташюй с ЭЛОК терапии по сравнению с соответствующими показателями у женщин, леченными традиционными методами. Так, концентрация тиоловых соединений в зрелых эритроцитарных клетках крови у больных, леченных с использованием лазерного излучения, в период с 4-х по 14-е суг исследования превышала соответствующие значения в 1-е сут наблюдения в среднем на 32%, а содержание липопротеинового комплекса - на 13,3% (у пациенток, леченных традиционными методами терапии - на 24 и 9% соответственно). Полного восстановления уровня тиоловых групп и липопротендов к окончанию периода наблюдения (14-е сут) не отмечалось (рис. 2). Резюмируя сказанное, можно утверждать, что темп восстановления концентрации SH-групп и липопротеинового комплекса в эритроцитах периферической крови у больных острым сальпингоофоритом при проведении терапии с использованием ЭЛОК несколько опережал скорость нормализации данных нарушений у пациенток, леченных только традиционными методами. Увеличение уровня сульфпидрильных групп и липопротендов в эритроцитах периферической крови при облучении светом ГНЛ у людей и экспериментальных животных отмечалось также C.B. Скибинской [1972], Л.П. » одионовой и соавт. [1985], Ю.И. Гринштейном [1994], И.И. Тютриным и соапт. [1994] и А.Р. Braslavskaia [1995].

Известно,что липопероксидация представляет собой трафаретный ответ организма на воспаление, гипоксию, интоксикацию. Высокий уровень ПОЛ обусловливает морфофункциональную нестабильность клеточных мембран, что и свою очерки» прояштястся

нарушением деформируемости мембран эритроцитов. Вместе с тем доказано, что влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на неспецифическую резистентность организма осуществляется за счет модификации ряда биохимических реакций [Kupin V.L., 1982; Гамалея Н.Ф. и соавт., 1986; Basford J.R., 1989; Козлов В.И., Буйлин В.А., 1992; Garry R et al., 1995 и др.], в частности тех, которые имеют прямое или косвенное отношение к функционированию антиокислительной системы (АОС). Сюда относятся окислительно-восстановительные реакции в тиолдисульфидной и аскорбатной системах, активность антиперикисных ферментов и оксидоредуктаз, участвующих в поддержании гомеостаза АОС. Таким образом, в результате лазерной светотерапии происходит ингибирование процессов

свободнорадшсалыюго окисления и активация ферментов-антиоксидантов. Об этом свидетельсьпуют также результаты исследований Ю.И. Гринштейна [1994], выявившего достоверное уменьшение содержания промежуточных продуктов ПОЛ в крови (диеновых конъюгатов в эритроцитах и малонового диальдегида в сыворотке крови) и повышение ферментативной активности каталззы и супероксиддисмутазы в опытах in vitro и после ЭЛОК светом ГНЛ. Ингибирование процессов свободнорадикального окислегия и активация ферментов-антиоксидантов способствуют восстановлению морфофункционального статуса клеточных мембран.

Мембраностабилизирующий эффект лучей ГНЛ, как показали результаты наших исследований, был отчетливо прослежен и при изучении поверхностной архитектоники эритроцитов больных острым сальпингоофоритом. Как видно из рис. 3, в процессе проведения сочетанного с ЭЛОК курса лечения отмечалось постепенное увеличение процента нормальных дискоцитов, коррелирова' шее с уменьшением числа переходных, предгемолитических и дегенеративно измененных форм клеток. Уже к 7-м сут терапии количество двояковогнутых дисков достигало 87,22±1,09% и уже практически не отличалось от нормы. Полная нормализация размеров центральной впадины дискоцитов отмечалась к 14-м сут лечения. У пациенток, лечившихся только традиционными методами, нормализации этих показателей не отмечалась и к 14-м сут наблюдения. Улучшение деформируемости эритроцитов и достоверное уменьшение числа патологических форм клеток красной крови при внутривенном облучении больных светом ГНЛ отмечалось также И.М. Байбековым [1991].

Анализ изученных показателей периферического звена эритрона у больных острым сальпингоофоритом позволяет утверждать, что включение в традиционную схему противовоспалительной терапии эндовасхулярного лазерною облучения крови приводит к более раннему восстановлению количественных и качественных характеристик эритроцитов вследствие более выраженной и продолжительной во времени активации эритропоэза в костном мозге, чем при традиционном лечении.

Таким образом, проведенное нами исследование показало, что при интравазальном облучении крови светом ГНЛ достигается значительное стимулирующее влияние на кроветворную функцию эритроидных клеток костного мозга. Полученные по итогам работы результаты и данные литературы по обсуждаемой проблеме позволяют составить представление о некоторых механизмах биологического действия низкоинтенсивного лазерного излучения на клетки красной крови (рис. 4). Это действие сводится к усилению пролиферативной активности костномозгового звена эритрона, ингибированию гнперлипопероксидации, повышению антиоксид антной активности эритроцитов, восстановлению морфофункционального статуса клеточных мембран. Вызванное этими явлениями увеличение количества ре-посул оцитов, числа эритроцитов, концентрации гемоглобина, осмотической резистентности и деформабельности эритроцитов приводит к восстановлению оксигенации крови и ее реологических свойств. Можно предположить, что именно через эти базисные механизмы биологического действия низкоэнергетического лазерного облучения на систему эритрона в дальнейшем реализуются не менее важные физиологические процессы и, в частности, повышение скорости микроциркуляции, улучшение оксигенации тканей, что, в свою очередь, приводит к повышению интенсивности энергетических, синтетических и пролиферативных процессов в клетках крови и тканей.

Резюмируя сказанное, возможно заключить, что патофизиологическим обоснованием корригирующего эффекта эндоваскулярного лазерного облучения крови светом ГНЛ при острой сальпингоофорите на выявляемые при этом заболевании нарушения структуры, метаболизма и функции эритроцитов являются стимулирующее влияние лазерного излучения на пролиферативную активность клеток костномозгового пула эритрона, а также лежащий в основе его действия комплекс благоприятных изменений в составе

Рис.4. Механизмы биологического действия излучения гелий-неонового лазера на морфофункциональное состояние эритрошггарных клеток кров» и костного мозга при эндоваскулярном облучении крови больных 'острым сальпингоофоригом (по данныц литерапуры и результатам собственных наблюдений).

мембранных белков и липидов, показателей ПОЛ и антиоксидантной защиты клеток, свидетельствующих в целом о возможности структурно-функционального обновления эритроцитарных мембран.

ВЫВОДЫ

1. Развитие воспалительного процесса у больных острым сальпингоофоритом сопровождается выраженными нарушениями структурно-метаболического статуса и функционального состояния эритроцитов периферической крови и приводит к возникновению регенераторной анемии легкой и средней степени тяжести.

2. К характерным нарушениям морфологических, метаболических и функциональных свойств эритроцитов периферической крови у больных острым сальпингоофоритом относятся снижение их осмотической стойкости, показателей сухой массы, концентрации сульфгидрильных групп и липопротеинового комплекса, увеличение числа переходных, предгемолитических и дегенеративно измененных форм клеток.

3. Механизмы анемии, развивающейся у больных острым сальпингоофоритом, связаны с ускоренным старением и повышенной гибелью зрелых циркулирующих эритроцитов и нарушением синтетических процессов в эритронормобластах костного мозга.

4. Проведение традиционной терапии больных острым сальпингоофоритом, несмотря на очевидную тенденцию к нормализации количественных и качественных показателей периферического звена эритрона в первые 14 сут наблюдения, не приводит к полному восстановлению концентрации гемоглобина, уровня свободного гемоглобина, концентрации сульфгидрильных групп и липопротеинового комплекса, количества нормальных двояковогнутых дискоцитов и размеров центральной впадины эритроцитов.

5. Проведение комплексной терапии больных . острым сальпингоофоритом с использованием эндоваскулярного лазерного облучения крови приводит к сокращению сроков нормализации концентрации гемоглобина, аеличины сухой маесы эритроцитов и показателей их осмотической резистентности, количества нормальных дискоцитов и размера центральной впадины эритроцитов.

Ошеек статей, опубликовании* по теме днссертацнотюй работы;

1. Гемоглобинсинтегаческая функция эритрона при интравазальной лазерной терапии больных острыми воспалительными заболеваниями женской половой сферы // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов / Под ред. акад. РАМН Е.Д. Гольдберга. - Томск. -1995. - Том 8. - с. 101.

2. Гемоглобинсинтегаческая функция эритрона у больных острыми воспалительными заболеваниями женской половой сферы // Молодые ученые теории и практике медицины: Сб. тр. аспирантов и соискателей Сибирского мед. университета / Под ред. акад. МАИ ВIII проф. В.В. Новицкого. - Томск. - 1995. - с. 26.

3. Функциональная характеристика эритроцитов и нейтрофильных гранулоцитов у женщин при остром воспалении матки и ее придатков / Давыдова Ю.Г., Махмутходжаев А.Ш. // Экоген: Сб. науч. сообщ. Томск. - 1995. - №5. - с. 39.

Заказ 199 Тираж 100 Томск, пр: Ленина, 40,'ТАСУР,