Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:Структурно-метаболические параметры иммунокомпетентных клеток у детей с перинатальным поражением ЦНС

На правах рукописи

РГБ од

2 0 сен т

МАКЧУК Татьяна Валерьевна

СТРУКТУРНО-МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ

ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК У ДЕТИ! С ПЕРИНАТ АЛЬНЫМ ПОРАЖЕНИЕМ

цнс

14.00.09 - педиатрия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Красноярск 1999

Работа выполнена в Институте медицинских проблем Севера СО РАМ г.Красноярск.

Научные руководители: доктор биологических наук

В.В. Фефелова; доктор медицинских наук, профессор Е.И. Прахин.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

М.В. Робинсон; кандидат медицинских наук, доцент Э.Ф. Старых.

Ведущая организация: Сибирский медицинский университет,

г.Томск

Защита диссертации состоится "_"_1999 г.

в "_" часов на заседании диссертационного совета К 084.49.01 п

Красноярской государственной медицинской академии (660022, г.Краснояр« ул.Партизана Железняка, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Красноярск! гоударственной медицинской академии (660022, г.Красноярск, ул.Партиза Железняка,!).

Автореферат разослан "_"_1999 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета

кандидат медицинских наук, доцент З.Н.ГОНЧАРУК

Р?23. 6X1.ЩЗ -¿¿,0

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одной из важнейших проблем современной гдиатрии является проблема снижения перинатальной заболеваемости. В ее ■руктуре ведущее место по частоте и значимости занимает перинатальное эражение ЦНС, которое составляет до 60-80 % всех заболеваний нервной 1стемы в детском возрасте (Бадалян JI.О., 1984; Самсыгина Г.А., 1995). Перечень :ихоневрологических расстройств, развивающихся при этом чрезвычайно ирок: от задержки психомоторного развития до тяжелых форм детского гребрального паралича ( Барашнев Ю.И.,1999); являющегося наиболее частой эичиной детской инвалидности, с формированием стойкой психомоторной ^достаточности.

Однако, не только частота перинатального поражения ЦНС и его тяжелые эследствия придают значимость этой проблеме. Огромные усилия следователей направлены на поиск до конца неизученных патогенетических еханизмов повреждения головного мозга, выявления его компенсаторных эзможностей и роли патологически измененной нервной регуляции в гятельности различных функциональных систем организма ребенка в 1тогенезе.(Орехов К.В., 1963; Ратнер А.Ю., 1991; Барашнев Ю.И., 1995; тарыхЭ.Ф.ссоавт., 1998).

Ведущим этиопатогенетическим фактором возникновения и развития гринатального поражения ЦНС на протяжении многих лет считалась гипоксия 1ерсианинов Л.Г., 1967, Шабалов Н.П., 1990, Студеникин М.Я., Халлман Н., )87;AshvalS., 1989).

В последнее время появляются сообщения о возможной роли :йросенсибилизации в патогенезе перинатального поражения ЦНС (Аутеншлюс .И. с соавт., 1995, Грудень М.А. с соавт., 1996, Таболин В.А. с соавт.,1997), что ожет свидетельствовать о прямом вовлечении иммунной системы в развитие шной патологии. Однако, пусковой фактор , приводящий к изменениям в имунной системе, нередко связывают с гипоксией (Савельева Г.М., 1991).

В результате исследований ряда авторов (Нарциссов Р.П., 1978; омиссарова H.A., 1978; Захарова Л.Б., 1979; Качергене Н.Б., 1980) было зосновано положение, согласно которому, по метаболическим параметрам имунокомпетентных клеток можно судить о направленности обменных эоцессов в организме в целом. Показатели активности ферментов используются га выявления изменений, возникающих в связи с гипоксией (Духова З.Н., 1976, урсоваЗ.К. с соавт., 1995).

В то же время, считается доказанным, что изменения функциональной <тивности иммунокомпетентных клеток происходит только при ютветствующих изменениях метаболизма лимфоцитов (Нарциссов Р.П., 1978, >84; Захарова Л.Б. с соавт., 1981, 1997; Робинсон М.В. с соавт., 1986, 1991; руфакин В.А. с соавт., 1992,1997; Савченко А.А., 1994,1996).

Метаболические процессы в лимфоцитах при перинатальном поражении НС изучены недостаточно. Сведения, касающиеся исследования активности ерментов в иммунокомпетентных клетках, неоднозначны, а порой эотиворечивы.

В значительной степени внимание исследователей было привлечено к

изучению субпопуляционных и функциональных показател иммунокомпетентных клеток (Афонина Л.Г., 1975; Стратулат П.М., 1981, 19 1986; Ткаченко С.К., 1986; Мамедова М.М., 1986; Дегтярева М.В. с соавт., 19 ГолочаловаС.А., 1996; Быстрицкая Т.С., 1996).

Учитывая важнейшую роль иммунокомпетентных клеток - лимфоцитов формировании ответных реакций организма на патогенные воздейств] чрезвычайно важным является исследование их структурно-метаболическ параметров у детей, перенесших перинатальное поражение ЦНС (Фурсова З.Ь соавт., 1995). Тем более, что до настоящего времени мы имеем недостаточ? число информативных биохимических и иммунологических критериев оцен степени тяжести патологических проявлений со стороны различных сист организма на фоне перинатального поражения ЦНС (Ильенко Л .С. с соавт., 199

Несмотря на значительное количество работ, посвященных изучен] различных параметров при перинатальном поражении ЦНС, патогенез этс состояния до конца не выяснен.

Представляется весьма актуальным проведение сопоставительного анал* значимости гипоксии и изменений иммунной системы в формирован перинатальной патологии ЦНС.

В соответствие с вышесказанным нами была поставлена цель сформулированы задачи исследования.

Цель исследования: Изучить особенности метаболизма лимфоцитов кров] новорожденных детей и детей первых месяцев жизни с перинатальш поражением ЦНС для уточнения роли гипоксии и иммунных нарушений патогенезе этой патологии.

Задачи исследования:

1. Провести анализ клинических проявлений перинатального поражен ЦНС у новорожденных в сопоставлении с морфофункциональными параметра иммунокомпетентных клеток.

2. Изучить в лимфоцитах пуповинной крови активность ряда НАД (С зависимых дегидрогеназ, характеризующих основные метаболические п> (аэробные и анаэробные) в клетке: цикл Кребса, гликолиз, пентозо-фосфатн] шунт, а также малатаспартатный и глицеро-фосфатный шунты.

3. Изучить соотношение фракций нейтральных липидов и фосфолипидо! дать характеристику особенностей структурных параметров лимфоцитов у дет с перинатальным поражением ЦНС различной степени тяжести.

4. Провести сравнительную оценку активности СДГ лимфоцит периферической крови как одного из наиболее информативных показател энергетического обмена у детей первых месяцев жизни здоровых и перинатальным поражением ЦНС в подостром периоде заболевания.

Научная новизна.

Впервые проведено комплексное исследование метаболических параметр иммунокомпетентных клеток пуповинной крови, характеризующих основн пути внутриклеточного обмена, и соотношение фракций нейтральных липидо] фосфолипидов, являющихся структурными компонентами мембран, новорожденных детей с перинатальным поражением ЦНС, родившихся соматически здоровых матерей, от срочных родов, без признак внутриутробного инфицирования и асфиксии.

Впервые показано существование двух различных механизмов развития гринатального поражения ЦНС у обследованных детей. Один из них связан с шоксией, моделью которой может служить группа детей с тяжелым зринатальным поражением ЦНС, родившихся с обвитием пуповины, о чем (идетельствует угнетение активности ферментов, характеризующих аэробные роцессы превращения субстратов, и резкая активация ферментов, ггализирующих пути анаэробного окисления (пентозофосфатный шунт и школиз), что сопровождалось изменениями во фракционном составе гйтральных липидов и фосфолипидов.

Другой механизм развития тяжелого перинатального поражения ЦНС ожет быть связан с изменениями в иммунной системе плода и не имеет гношения к гипоксии, поскольку нами не выявлено снижения активности ерментов, маркирующих аэробные циклы. Напротив, обнаружено -атистически достоверное их увеличение, как и повышение активности зльшинства изученных нами дегидрогеназ (СДГ, Г6ФДГ, ЛДГ, ГЗФДГ, ГДГ),а 1кже нарастание количества корреляционных связей между ферментами. Эти анные свидетельствуют о напряженности обменных процессов в чмунокомпетентных клетках.

У детей первых двух месяцев жизни с перинатальным поражением ЦНС [желой степени в подостром периоде выявлено статистически достоверное шжение активности СДГ, что сочеталось с высокой частотой очагово-кпалительных заболеваний и свидетельствовало об угнетенном состоянии имунокомпетентных клеток.

Практическая значимость.

1. Разнонаправленный характер изменений метаболических параметров ямунокомпетентных клеток пуповинной крови при гипоксии и при иммунном шряжении у новорожденных детей с тяжелым перинатальным поражением НС свидетельствует о необходимости определения разной тактики коррекции веющихся нарушений.

2. Отсутствие изменений метаболизма и структурных параметров, фактеризующих состояние мембран иммунокомпетентных клеток у детей с :гкой степенью перинатального поражения ЦНС может служить эполнительным дифференциально-диагностическим критерием для 1ределения степени тяжести в первые сутки жизни, а также использоваться как эитерий прогноза.

3. Выявленное нами угнетение метаболизма иммунокомпе-тентных клеток в эдостром периоде перинатального поражения ЦНС тяжелой степени, >провождающееся развитием различных очагов инфекции, можно расценивать, 1к вторичный иммунодефицит.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У новорожденных с перинатальным поражением ЦНС легкой степени в «мунокомпетентных клетках отсутствуют существенные различия с 1 алогичными показателями здоровых новорожденных.

2. У новорожденных с перинатальным поражением ЦНС тяжелой степени в имунокомпетентных клетках выявляются два типа изменений направленности гтаболизма. Один из них связан с гипоксией, другой - подразумевает шряженное состояние иммунной системы. Изменения липидного спектра

лимфоцитов носят более выраженный характер при изменениях метаболизи вызванных гипоксией.

3. В подостром периоде перинатального поражения ЦНС тяжелой степе обнаруживается статистически достоверное угнетение энергетических процесс в иммунокомпетентных клетках, что сочетается с высокой частотой очаго! воспалительных заболеваний.

Апробация работы проведена на межкафедральном заседании Красноярск государственной медицинской академии и НИИ медицинских проблем Севе СО РАМН 30 апреля 1999 года. Основные положения диссертации представле] на Итоговой научной конференции НИИ медицинских проблем Севера ( РАМН за 1998 год (Красноярск, 1999 г.) и на III Конгрессе педиатров Росс (Москва, 1998 г.)

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Структура и объем работы:

Диссертация изложена на страницах и состоит из введения, обзо литературы, главы "Материалы и методы" и трех глав, содержащих результа собственных исследований и их обсуждение, заключения, выводов, спис литературы, включающего отечественных и зарубежных авторов, содерж таблиц, рисунков, иллюстрирована 2 выписками из истории развит новорожденного и истории болезни.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

В работу включены результаты обследования 148 человек, из них: 59 эношенных новорожденных и 59 их матерей обследованы на базе родильного эма №4 г. Красноярска, 17 детей первых двух месяцев жизни обследованы в етской городской клинической больнице №1, где они проходили стационарное :чение по поводу перинатального поражения ЦНС тяжелой степени, 13 Яровых детей первых двух месяцев жизни обследованы на базе детской эликлиники Дорожной больницы ст. Красноярск.

Обследованные нами новорожденные были разделены на три группы, онтрольную группу составили 19 здоровых новорожденных. В группу с гринатальным поражением ЦНС легкой степени вошли 22 ребенка, группу с зринатальным поражением тяжелой степени составили 18 детей. Последняя )уппа была разделена нами на две подгруппы: родившиеся с обвитием пуповины 5 новорожденных, родившиеся без обвитая -13. Все наблюдаемые матери были азделены на три группы в соответствии с состоянием здоровья их эворожденных.

На всех обследованных детей была заведена специально разработанная 1кета, куда вносились сведения анамнеза, а также данные клинического и гврологического осмотра в динамике.

Исследование ферментного статуса, спектра нейтральных липидов и осфолипидов иммунокомпетентных клеток у детей изучался в пуповинной зови, у матерей те же параметры определялись в венозной крови, забор которой :уществлялся сразу же после родов. У детей первых двух месяцев жизни хледовались лимфоциты в периферической крови из пальца, в которых тределялась активность СДГ.

Выделение лимфоцитов осуществляли в градиенте плотности фиколл-грографина. Для выявления метаболических особенностей им-унокомпетентных клеток изучена активность ряда ферментов. Био-юминесцентное определение активности дегидрогеназ (глюкозо-6-осфатдегидрогеназы (Г6ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (ГЗФДГ), жтатдегидрогеназы (ЛДГ), НАД(Ф)-зависимых малатдегид-рогеназы (НАД-1В.-МДГ, НАДФ-зав.-МДГ) и глутаматдегидрогеназы (НАД-зав.-ГДГ, НАДФ-1В.-ГДГ), глутатион-редуктазы) проводили по методике А.А.Савченко, .Н.Сунцовой (1989). Активность сукцинатде-гидрогеназы (СДГ) определяли по етодике Р.П.Нарциссова (1969). Активность кислой фосфатазы в лимфоцитах СФЛ) и гранулоцитах (КФГ) выявлялась по методу А.Р.ОоШЬе^, Т.Вагка (1962) использо-ванием нафтола Аэ-Е-фосфата. Для определения фракционного >става спектра нейтральных липидов (общие фосфолипиды - ОФЛ, свободный шестерол - СХ, свободные жирные кислоты - СЖК, триацилглицериды - ТАГ, [шры холестерола - ЭХС), и фосфолипидов использовался метод тонкослойной юматографии (Ростовцев В.Н., Резник Г.Е., 1982). Липидные экстракты из шфоцитов готовили по методу Фолча с соавт.(Ро1сЬ I. е1 а1., 1957).

В сыворотке пуповинной крови новорожденных и венозной крови их матерей ;следован уровень иммуноглобулинов классов А, М, в, определяемый методом щиальной иммунодиффузии (Мапаш Ь. й а1., 1965).

Результаты исследований обрабатывались методами вариационной

статистики и системного анализа с использованием IBM/PC/AT 486.

Результаты исследований.

Анализ собранных данных анамнеза и клинического обследования выяв: различия между группами обследованных в родильном доме. Так, у матере родивших детей с перинатальным поражением ЦНС, осложнения беременное встречались чаще, чем у родивших здоровых новорожденных. Угро прерывания настоящей беременности отмечена у 36,4 % женщин родивш: новорожденных с перинатальным поражением ЦНС легкой степени, у 55,6 женщин родивших новорожденных с перинатальным поражением ЦНС тяжел< степени, в контрольной группе - у 5,2%. Гестоз второй половины отмечен у 22,1 женщин, родивших детей с перинатальным поражением ЦНС легкой степени, 33,3% - родивших детей с тяжелой степенью данной патологии, в контрольн< группе - у 10,5%. Фето-плацентарная недостаточность (поданным УЗИ) выявле в 22,7%, 27,8% и 5,2% наблюдений по группам соответственно. Сочетание двух более осложнений беременности выявлялось у матерей родивш) новорожденных с перинатальным поражением ЦНС при легкой степени в 54,5° при тяжелой степени в 66,7% случаев. Такая же тенденция определялась в отнош нии осложнений родов: бурная родовая деятельность (быстрые и стремительш роды) наблюдалась у матерей родивших детей с перинатальным поражеши ЦНС легкой степени в 22,7% случаев, тяжелой степени - в 33,3% , в контрольн< группе- 21% случаев; слабость родовой деятельности в 4,5%, 5,5% и С наблюдений соответственно.

Анализ распределения новорожденных по половому признаку выявил, чте группе с перинатальным поражением ЦНС преобладают мальчики. В группе легкой степенью перинатального поражения ЦНС их 63,6%, в группе с тяжел( степенью - 77,8% , в контрольной группе- 52,6%. Средние показатели оценки ) шкале Апгар у новорожденных всех обследованных групп практически не име: отличий и составили: на 1 -ой мин - 8,05 балла, 8,03 балла и 8,00 балла, на 5-ой ми 8,42 балла, 8,38 балла и 8,57 балла соответственно у здоровых новорожденнь детей с перинатальным поражением ЦНС легкой степени и с перинатальнь поражением ЦНС тяжелой степени. Существенных различий меж, показателями массы и длины тела при рождении у новорожденных изученш групп также не выявлено. Средние показатели массы - 3457,89 г, 3484,25 г и 3346, г, средние показатели длины - 52,9 см, 54,2 см и 52,2 см соответственно в групп здоровых новорожденных, новорожденных с перинатальным поражением ЦК легкой и тяжелой степени. В отношении абсолютных показателей физическо развития у новорожденных с перинатальным поражением ЦНС выявлялся бол ший разброс значений, большая потеря первоначальной массы тела и бол медленные темпы ее восстановления, по сравнению со здоровыми детьм Физиологическая убыль массы составила у новорожденных с перинатальнь поражением ЦНС легкой степени в среднем 183,50 г, тяжелой степени - 228,18 г здоровых новорожденных - 108,16 г. Дети с перинатальным поражением Щ легкой и тяжелой степени в 17,5% случаев имели пренатальную гипотрофию Г степени. В нашем исследовании основными критериями в оценке тяжес поражения ЦНС в остром периоде были клинические синдромы, : выраженность и сочетание, а также динамическая картина трансформащ синдромо-комплексов. В группу с перинатальным поражением ЦНС легкой ст

ени мы отнесли детей с транзиторными неврологическими проявлениями. Чаще тмечалось умеренное повышение нейро-рефлекторной возбудимости эеспокойство, тремор рук, активация безусловных реф-лексов и т. п.). Реже -егкое угнетение ЦНС (вялость, снижение спонтанной двигательной активности, [ышечная гипотония умеренной выраженности, угнетение безусловных ефлексов). У большинства новорожденных основные проявления поражения ЩС купировались к моменту выписки.

У новорожденных с перинатальным поражением ЦНС легкой степени мы не ыявили статистически достоверных различий в сравнении со здоровыми оворожденными ни по показателям активности ферментов ммунокомпетентных клеток, ни по спектру нейтральных липидов, за сключением СЖК (таблицы 1 и 2).

Это может свидетельствовать о том, что резких сдвигов в метаболизме имфоцитов при перинатальном поражении ЦНС легкой степени не происходит, ровень обменных процессов соответствует или незначительно превышает аковой у здоровых новорожденных, не имевших неврологической имптоматики.

Иная картина была выявлена нами при исследовании детей с тяжелым еринатальным поражением ЦНС. По клиническим признакам дети с тяжелым еринатальным поражением ЦНС характеризовались более стойкими и более ыраженными, чем у новорожденных с легкой степенью перинатального оражения ЦНС неврологическими нарушениями.

В неврологическом статусе у новорожденных с перинатальным поражением [НС тяжелой степени на первый план выходили проявления синдрома угнетения [НС (общая вялость, адинамия, мышечная гипотония разной степени ыраженности и распространенности вплоть до диффузной, угнетение езусловных рефлексов). У 30 % новорожденных с тяжелым перинатальным оражением ЦНС манифестировался синдром внутричерепной гипертензии эеспокойство, гиперестезия, срыгивания, набухание большого родничка, имптом Грефе, нистагм, высокие сухожильные рефлексы и др.). У большинства етей этой группы диагностировано НМК 1-П степени. Наконец, треть детей мели клинические и нейросонографические признаки геморрагического оражения головного мозга: интравентрикулярные, субдуральные и аренхиматозные кровоизлияния. Все новорожденные этой группы проходили альнейшее лечение в условиях стационара.

Активность изученных ферментов (М+ш) в лимфоцитах пуповинной крови у новорожденных обследованных групп

Таблица

Показатели

Обследованные группы новорожденных

Здоровые п= 19 С перинатальны м поражением ЦНС легкой степени п = 22 С перинатальным поражением ЦНС тяжелой степени (с обвитием пуповины) п = 5 С перинатальн ым поражением ЦНС тяжелой степени (без обвития пуповины) п= 13 От беременности осложненной угрозой прерпывания п = 18

5,53+0,75 6,09+0,85 1,31+0,14 ** 8,57+1,32 * 9,39+1,26 **

0,49+0,14 0,71+0,14 6,96+3,52 ** 1,56+0,55 * 0,74+0,16

0,22+0,03 0,42+0,02 0,95+0,04*** 0,36+0,18 0,58+0,16*

11,80+2,63 9,08+3,57 41,25+17,6** 10,27+3,64 5,71 + 1,40*

32,15+9,87 16,22+4,94 41,70+9,21 25,17+8,02 16,63+4,77

0,27+0,04 0,28+0,05 0,43+0,01 0,34+0,09 0,32+0,07

3,35+1,16 2,51+0,85 1,09+0,18 2,82+0,87 2,71+0,76

16,93+3,63 48,37+15,96 45,30+27,79 42,92+19,1 33,71 + 11,4(

11,37+3,12 15,26+3,44 8,24+3,56 30,00+7,6* 15,88+4,28

74,11+4,20 80,64+5,16 90,50+10,39 86,00+4,50 83,89+5,25

118,42+4,8 125,09+4,4 149,5+13,7* 123,00+6,0 123,56+5,5

сдг,

гранул/кл

Г6ФДГ, мкЕ

лдг,

МкЕ МДГ, МкЕ НАДФ-

мдг,

мкЕ

ГЗФДГ,

мкЕ

НАДФ- ГДГ, мкЕ

НАД-ГДГ, мкЕ

Глутатион-

редуктаза,

мкЕ

КФЛ,

ед.Кар1о

w

КФГ,

ед.Кар1о

w

Примечание: Достоверность различий определялась относительно групп здоровых новорожденных * -р <0,05 ** -р<0,01 ***-р< 0,001

Анализ показателей активности ферментов у этих новорожденных показал, то среди детей с тяжелым перинатальным поражением ЦНС четко выявляются ве группы: одна с очень низкими показателями активности СДГ - фермента эробного превращения субстратов, и одновременно с очень резко увеличенной ктивностью ферментов, отражающих интенсивность безкислородного ревращения глюкозы. Как выяснилось, все дети, имеющие выше перечисленные зменения активности ферментов, родились с обвитием пуповины.

СДГ - митохондриальный фермент, маркирующий цикл Кребса, достаточно азносторонне характеризует морфологическое и функциональное состояние леток крови, является одним из ведущих показателей реакций энергетического бмена в клетках (КондрашоваМ.Н., 1989).

У новорожденных, родившихся с обвитием пуповины, активность СДГ в реднем по группе составила 1,31 гранул на клетку, что в 4,2 раза меньше, чем оказатель у здоровых новорожденных (р<0,01).

Снижение активности СДГ отражает сокращение роли аэробного пути ревращения глюкозы у детей с тяжелым перинатальным поражением ЦНС, одившихся с обвитием пуповины.

Наряду со снижением активности СДГ у новорожденных с обвитием уповины отмечено резкое увеличение активности ЛДГ(р<0,001), фермента атализирующего заключительную реакцию гликолитического анаэробного ревращения глюкозы, и значительное, почти четырнадцатикратное увеличение, сравнении с показателем контрольной группы, активности Г6ФДГ - ключевого ¡ермента пентозо-фосфатного шунта, также безкислородного пути метаболизма июкозы(р<0,01).

Эти данные подтверждают, что в лимфоцитах новорожденных, родившихся с бвитием пуповины, преобладают анаэробные пути превращения глюкозы. В езультате высокой интенсивности гликолиза происходит накопление в итоплазме восстановленной формы НАД-Н2, который не способен проникать ерез митохондриальную мембрану. Водород с НАД-Н2 переносится через ембрану митохондрий с помощью челночных систем: малат-аспартатного гунта и, в меньшей степени, глицерофосфатного шунта. Этим объясняется величение активно-сти ферментов, функционирующих в челночных системах: !ДГ-НАД-зависимой (р<0,01), ГДГ-НАД-зависимой, МДГ-НАДФ-зависимой, ЗФДГ в лимфоцитах пуповинной крови новорожденных с тяжелым еринатальным поражением ЦНС, родившихся с обвитием пуповины по равнению с контрольной группой.

Чрезвычайная активность пентозо-фосфатного шунта ведет к избыточной аработке НАДФН2, который, являясь восстановителем, способен активировать ероксидное окисление, то есть выступает в роли прооксиданта. Строев Е.А.,1986). В то время как глутатион-редуктаза, фермент, арактеризующий активность антиоксидантной защиты в лимфоцитах (Gumpriht . et al.,1990; Gonzales M., Pablo P.L.,1994), у детей, родившихся с обвитием уповины, имеет наименьшее значение в лимфоцитах пуповинной крови в равнении с параметрами активности глутатион-редуктазы, определенными у хоровых новорожденных и новорожденных с перинатальным поражением ЦНС, одившихся без обвитая пуповины.

Низкий уровень антиоксидантной защиты и высокая концентрация [АДФН2, являющегося прооксидантом, создает почву для чрезмерной

активности ПОЛ.

В норме ПОЛ является одним из механизмов обновления липиднс компоненты клеточных мембран. Однако, при определенных услови? неконтролируемая активация этого процесса может привести к дестабилизацк мембран (БурлаковаЕ.Б., 1981;СоловейЛ.И.,МанчукВ.Т.,1998).

Таблица

Содержание фракций нейтральных липидов в лимфоцитах пуповинной крови у новорожденных обследованных групп

Примечание: Достоверность различий проставлена относительно групп

Показател и Обследованные группы новорожденных

Здоровые п= 19 С перинатальным поражением ЦНС легкой степени п = 22 С перинатальным поражением ЦНС тяжелой степени (с обвитием пуповины) п = 5 С перинатальны; поражением ЦН< тяжелой степени (без обвития пуповины) п= 13

ОФЛ, % 13,54+0,69 13,02+0,35 8,60+0,84 ** 11,76+0,55

схс, % 14,91 + 1,04 15,15+0,57 16,18+1,88 14,19+0,95

сжк, % 5,04+0,29 4,22+0,27 * 4,50+0,57 4,67+0,28

ТАГ, % 15,08+1,19 14,61+0,97 9,68+1,34 * 15,58+1,82

эхе, % 48,97+1,30 50,94+1,25 60,38+2,36*** 50,35+2,22

здоровых новорожденных * -р<0,05 ** -р<0,01 ***-р<0,001

Выявленные нами изменения в спектре нейтральных липидов лимфоцитов новорожденных с перинатальным поражением ЦНС тяжелой степен родившихся с обвитием пуповины: снижение содержания обни фосфолипидов(р<0,01), увеличение количества свободного холестерола и е] эфиров (р<0,001) (таблица 2) могут быть расценены, как результ; повреждающего действия интенсивных процессов ПОЛ. В пользу это! предположения свидетельствует то, что снижение процентного количесп суммарных ФЛ происходило за счет потери легкоокисляемых фракций Ф (фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол, фосфатидилэтаноламин ), как бьи выявлено нами при изучении фракционного состава ФЛ в лимфоцит; пуповинной крови у данной группы новорожденных.

Увеличение процентного содержания стабильных фосфолипидных фракщ (сфингомиелин, фосфатидилхолин и его лизоформа) при снижен!-легкоокисляемых (полиненасыщенных) и суммарных фосфолипидов, а тага увеличение удельного веса свободного холестерола свидетельствует о нарасташ жесткости мембран, что может оказывать влияние на функциональное состоят

жесткости мембран, что может оказывать влияние на функциональное состояние леток, изменять активность клеточных рецепторов и внутриклеточных )ерментов (Арчаков А.И., Бородин ЕА.,1981; 11туау е1 а1., 1980; Во«ош1еу е1 а1., 980). Уменьшение числа ненасыщенных связей остатков жирных кислот ОФЛ [зменяет гидрофильное окружение рецепторов и вынуждает рецепторы гринимать менее активную конформацию (Титов В.И., 1998).

В лимфоцитах пуповинной крови новорожденных, родившихся с обвитием [уповины, нами выявлены также изменения соотношения СЖК/ТАГ в сторону величения СЖК, и статистически достоверное снижение процентного оличества ТАГ(р<0,05) по сравнению с показателями контрольной группы оворожденных, что свидетельствует о катаболической направленности ипидного обмена (Климов А.Н., 1977; Соловей Л .И. с соавт., 1998). Достоверное величение активности маркерного фермента лизосом КФГ (р<0,05) и тенденция увеличению активности КФЛ (р<0,1) у этих новорожденных также отражает атаболическую направленность метаболизма.

Поскольку обвитие пуповины ведет к развитию гипоксии плода, а в екоторых случаях, даже к асфиксии новорожденного (Персианинов Л.Г., 1967; Набалов Н.П., 1984), обнаруженные нами изменения активности дегидрогеназ и оотношения фракций нейтральных липидов в лимфоцитах пуповинной крови у оворожденных, родившихся с обвитием пуповины, характеризуют особенности [етаболизма иммунокомпетентных клеток в условиях гипоксии, и в овокупности, представляют модель реагирования иммуноцитов на едостаточное поступление кислорода.

У новорожденных, имевших перинатальное поражение ЦНС тяжелой тепени, но родившихся без обвития пуповины, исследованные метаболические араметры иммунокомпетентных клеток, существенным образом отличались от аковыхудетей родившихся с обвитием пуповины.

Анализ данных, полученных при исследовании метаболизма им-[унокомпетентных клеток у новорожденных с тяжелым поражением ЦНС, одившихся без обвития пуповины, выявил увеличение активности большинства зученных нами дегидрогеназ: СДГ (р<0,05), Г6ФДГ (р<0,05), ГДГ-НАД-ависимая (р<0,1), глутатион-редуктазы (р<0,05). Активность ЛДГ, ГЗФДГ была акже увеличена, хотя и не достигала уровня статистической достоверности азличий с показателями контрольной группы новорожденных.

Отмечена тенденция к увеличению активности КФЛ (р <0,1) и КФГ. [звестно, что высокая интенсивность обменных процессов способствует величению активности реакций ПОЛ (Мусаев А.Т. с соавт., 1991). У оворожденных обсуждаемой группы обнаружено, кроме того, повышение цутатион-редуктазы (р <0,05), что также можно расценивать как признак, видетельствующий об изменениях в процессах ПОЛ.

Корреляционный анализ исследуемых дегидрогеназ лимфоцитов у оворожденных с тяжелым перинатальным поражением ЦНС, родившихся без бвития пуповины, показал резко выраженную скоррелированность между ерментами энергетического профиля, как в пределах одного компартмента, так между внутриклеточными компартментами, что свидетельствует о апряженности метаболических процессов в иммунокомпетентных клетках.

Таким образом, выявленные нами особенности метаболизма

и

иммунокомпетентных клеток пуповинной крови новорожденных перинатальным поражением ЦНС тяжелой степени, родившихся без обвита пуповины, свидетельствуют о напряженности внутриклеточных обменнь процессов, и имеют иную направленность, чем изменения, обнаруженные новорожденных, родившихся с тяжелым перинатальным поражением ЦНС обвитием пуповины, совокупность которых, определена нами, как моде; реагирования метаболизма иммуноком-петентных клеток на гипоксию.

Мы проанализировали показатели активности ферментов новорожденны родившихся у матерей, беременность которых протекала с поздним гестозом и угрозой прерывания. Изменения активности дегидрогеназ в лимфоцитг пуповинной крови у новорожденных, родившихся от матерей с патологие беременности аналогичны изменениям, обнаруженным у новорожденных перинатальным поражением ЦНС тяжелой степени, родившихся без обвита пуповины. Особенно значительное повышение активности отмечено для СД] показатели которой, у новорожденных, родившихся от беременност протекавшей с угрозой прерывания, были наиболее высокими в сравнении показателями СДГ у других исследованных групп новорожденных (таблица 1).

Таким образом, общие закономерности метаболизма ИКК пуповиннс крови у новорожденных, родившихся с тяжелой степенью перинатально1 поражения ЦНС без обвитая пуповины, и у новорожденных, родившихся матерей, беременность которых протекала с осложнениями (гестоз вторе половины, угроза прерывания), сводятся к активизации обменных процессов лимфоцитах.

Для изучения состояния метаболизма иммунокомпетентных клеток подостром периоде нами была исследована активность СДГ в лимфоцитг периферической крови у детей, находившихся на стационарном лечении г поводу тяжелого перинатального поражения ЦНС. Как указывалось выше, СД достаточно разносторонне характеризует морфологическое и функциональж состояние иммунокомпетентных клеток крови (Нарциссов Р.П., 1989, 199 Захарова Л.Б. с соавт., 1984, 1996; Шищенко В.М., 1988; 1998; Степанова Е.И. соавт., 1987), а также, является одним из ведущих показателей энергетическо! обмена в клетках. До настоящего времени этот фермент считается одним, из на более информативных и стабильных показателей уровня метаболизма клета (ГГеИ М. е1 а1., 1997; КиЬо1а 8. а1., 1998; ЗаЫ С е1 а1., 1998; МиШикитаг А. а 1998).

У всех обследованных детей выявлена сочетанная форма перинатально] поражения ЦНС (повреждение головного и спинного мозга), о че свидетельствовала выраженная неврологическая симптоматика, даннь нейросонографического исследования и рентгенологического исследования.

Неблагоприятный акушерский анамнез, отмечаемый у матерей родивчи детей обсуждаемой группы детей, обусловил высокий процент фоновь состояний, отмеченных у обследованных младенцев. Так, 47 % из них име; пренатальную гипотрофию П-Ш степени, многие дети родились с признакаи, физиологической незрелости. Обращает на себя внимание большой проце] локальных гнойно-воспалительных заболеваний и инфекционнь бактериальных и вирусных процессов в респираторном тракте у обследованнь нами детей.

Активность СДГ лимфоцитов у детей в подостром периоде тяжело]

1еринатального поражения ЦНС оказалась резко сниженной в сравнении с юказателем контрольной группы детей, которую составили младенцы первых щух месяцев жизни, не имевшие перинатального поражения ЦНС, с физиче-:кими показателями, соответствующими возрасту, родившиеся у здоровых латерей. Активность СДГ лимфоцитов периферической крови у детей с перинатальным поражением ЦНС была почти вдвое ниже, чем у здоровых детей р<0,001).

В работах последних лет (Булыгин Г.В.,1981; Савченко A.A., 1989, 1996; Суртасова JI.M., 1999) сообщается, что метаболические нарушения лимфоцитов, >пределяющие аэробные процессы, играют важную роль в патогенезе вторичных шмунодефицитов.

Если сопоставить обнаруженные нами крайне низкие показатели 1етаболизма иммунокомпетентных клеток у детей в подостром периоде 1еринатального поражения ЦНС, с клиническими данными, которые видетельствуют о том, что у 70,6% обследованных нами детей выявляются »азличные очаги воспаления (омфалиты, отиты, коньюнктивиты, очаговые [невмонии, ОРЗ и др.) можно придти к заключению, что в подостром периоде яжелого перинатального поражения ЦНС развивается вторичный [ммунодефицит.

Таблица 3

Активность СДГ лимфоцитов (М+ш) периферическо крови у детей с перинатальным поражением ЦНС тяжелой степени в подострый период

Группы обследованных детей Активность СДГ, гранул/кл

Контрольная (п= 13) 2,04+0,27

Дети с перинатальнь^ 1,03+0,08

поражением ЦНС (п=17)

Примечание: Достоверность различий проставлена относительно группы цоровых новорожденных ** -р<0,001

Известно, что высокая частота поражений органов дыхания наряду с озникновением очагов гнойной инфекции на коже, поражениях среднего уха, пизистых является проявлением иммунодефицитных состояний у детей( Лопухин Э.М. с соавт, 1981 ; Гомес Л.А., Кондратенко И.В., 1986; Середа Е.В. с соавт., 991; Leickley F., Buckley R., 1986; Smith Т., Bein R., 1986; Bremard-Oury С., 1989; 'orin L. et al, 1989). Для большинства форм иммунной недостаточности арактерно, помимо снижения противоинфекционной резистентности, клонность к затяжному рецидивирующему течению заболеваний, вялая реакция рганизма на воспаление и частый переход в хроническую форму (Гомес Л.А. с эавт., 1988; Хахалин Л.Н. с соавт., 1989; Володина H.H. с соавт., 1996; Timpher I.L.,Neuhans F., 1979).

В клинических анализах крови обследованных нами детей с наслоившейся нфекционной патологией мы не обнаружили значительного проявления

реакции нейтрофильных клеток крови на воспалительный процесс даже пр наличии у детей нескольких очагов воспаления ( пневмония, омфалит, отит и п.). Эти данные свидетельствуют о вялой реакции на воспаление и лишний р: подтверждают правильность наших представлений о развитии вторично1 иммунодефицита у детей, перенесших тяжелое перинатальное поражение ЦНС.

ВЫВОДЫ

1. Среди детей с клиническими проявлениями тяжелого перинатально! поражения ЦНС четко выделяются две группы, в которых прослеживают« разные закономерности изменений структурно-метаболических параметре иммунокомпетентных клеток. В группе новорожденных, родившихся с обвитие пуповины, в лимфоцитах пуповинной крови выявлено резкое снижен! активности СДГ(р<0,01), маркирующей аэробный процесс превращен! субстратов, и активация ферментов ЛДГ (р<0,001) и Г6ФДГ (р<0,01 катализирующих процессы анаэробного окисления субстратов (гликолиз пентозофосфатный шунт соответственно), что характеризует выраженну гипоксию, развившуюся у этих детей.

2. В группе детей с тяжелой степенью перинатального поражения ЦНС новорожденных, родившихся без обвитая пуповины, выявлено повышение сравнении с контрольной группой) активности почти всех исследованнь НАД(Ф) - зависимых дегидрогеназ: СДГ (р<0,05), Г6ФДГ (р<0,05), ЛДГ, ГЗФД ГДГ, глутатион-редуктазы (р<0,05). Полученные данные отражак напряженность обмена в иммунокомпетентных клетках у детей данной группы.

3. В иммунокомпетентных клетках новорожденных детей с клинически проявлениями перинатального поражения ЦНС легкой степени отсутствуй статистически достоверные изменения активности дегидрогеназ, липидно] спектра (за исключением СЖК), фракционного состава фосфолипидов г сравнению с контрольной группой новорожденных.

4. Статистически достоверные изменения липидного спектра выявляются группе детей с тяжелой степенью перинатального поражения ЦНС, родившихся обвитием пуповины. У них отмечено снижение (в сравнении с контрольно группой) ОФЛ (р<0,01), СЖК, ТАГ (р<0,05) и повышение СХС и ЭХС (р<0,001): также, снижение содержания легкоокисляемых фракций ФЛ на фо! относительного увеличения содержания трудноокисляемых фракци Выявленные изменения свидетельствуют об увеличении вязкости мембрг лимфоцитов, повышении их ригидности у детей данной группы.

5. У большинства обследованных нами детей первых двух месяцев жизн находившихся на стационарном лечении по поводу перинатального поражен] ЦНС, выявлены сопутствующие локальные воспалительные заболевани омфалиты, отиты, евстахииты, конъюнктивиты, пневмонии, ОРЗ, которь сочетались с очень низкой (по сравнению с контрольной группой дете активностью СДГ (р<0,001) лимфоцитов периферической крови, что мож! расценивать как симптомокомплекс, характерный для вторичнь иммунодефицитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется исследование активности дегидрогеназ лимфоцитов [уповинной крови в качестве дополнительного дифференциально-;иагностического критерия, способствующего более раннему и более четкому ыявлению тяжелых форм поражения ЦНС, уменьшению случаев ипердиагностики, а также использование полученных данных как критерий :рогноза.

Рекомендуется определение активности СДГ лимфоцитов периферической рови у детей в подостром периоде перинатального поражения ЦНС для ыявления вторичных иммунодефицитных состояний и определения тактики их оррекции.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Метаболические параметры иммунокомпетентных клеток у детей с еринатальным поражением ЦНС.// Материалы V Конгресса педиатров России Здоровый ребенок", 16-18 февраля 1999г.- М.,1999.- С. 492. (в соавторстве с В.В. >ефеловой, Е.И. Прахиным, Е.В. Шашило, A.A. Савченко, Е.А. Теппер, А.И. шьбрандтом).

2. Функциональное состояние сердечно-сосудистой и вегетативной нервной истем у детей, перенесших перинатальное поражение головного мозга.// Материалы V Конгресса педиатров России "Здоровый ребенок", 16-18 февраля 999г.- М. ,1999.- С. 97. (в соавторстве с Галактионовой М.Ю.)

3. Активность дегидрогеназ и кислой фосфатазы лимфоцитов пуповинной рови новорожденных детей с пренатальной гипотрофией// Этноэкологические роблемы сохранения здоровья населения Сибири и Крайнего Севера, тезисы окладов итоговой научной конференции НИИ медицинских проблем Севера СО АМН за 1998 год, Красноярск.- 1999.-С.68-69.

4. Клинико-функциональные особенности сердечно-сосудистой и егетативной нервной систем у детей с отдаленными последствиями пе-инатального поражения ЦНС.// Юбилейный сб. научн. трудов педиатрического 1акультета,-Красноярск, 1998.-С.74-82. (всоавторстве с Галактионовой М.Ю.)