Автореферат и диссертация по медицине (14.00.30) на тему:Средства контроля термической стерилизации изделий медицинского назначения

РГ6 од

у ггоскол1с\нэпиднадзор российской федерации

^ центральный

научно-исследовательский институт эпидемиологии

На правах рукописи

ГУТЕРМАН Раиса Лазаревна

СРЕДСТВА КОНТРОЛЯ ТЕРМИЧЕСКОЙ СТЕРИЛИЗАЦИИ ИЗДЕЛИЙ МЕДИЦИНСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ

14.00.30 — Эпидемиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва — 1993

/

. 1' ✓

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте профилактической токсикологии и дезинфекции Госком-санэпиднадзора Российской Федерации.

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ

Доктор медицииских наук, профессор М. И. ЛЕВИ. Кандидат медицинских наук Н. В. РАМКОВА.

Заслуженный деятель науки России, доктор медицинских наук, профессор П. П. ЛЯРСКИЙ.

Кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Г. Е. РУБИНОВ.

Ведущая организация — Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова.

Защита диссертации состоится «Ж-_»___

1993 года в -/й -г. часов на заседании специализировано-го совета (Д.074.19.01) в Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии по адресу: 111123, Москва, ул. Новогиреевская, д. 3-а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ

Автореферат разослан

30

1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

М. Н. ПИМЕНОВА

СШАЯ ХАРАК1ЕК1С1ИКА РАБОЙ Актуальность проблей

В комплексе проетвоэгшдеигоескях мероприятий в лечебно-про-фшактаческах учреждениях (ЛПУ) различного врофлдя паяная роль отводится стеридазап?!и изделий медицинского назначения (Лярский Il.fi. Д98Э;Рвмяога И.В., 1350). Стерняизации предупреждает шутрибольниадыа адфмщаскныз заболевания (ЕБЙЗ) »обусловленные парентераианши лечебными и диагноз тачеснтая манипуляциями (опе-ратавные вметтельства,шу''гриве!ше,Ену5,ршлггзп8ШЫ0 и подкожные и гь екци и, ин о труден талы шз иссаодов8ния,катетеризаг?и[, взятие кропи на анализ, гемотракс^узни к др.) {Бвяякоз В Д. и др., 1976; Денисоз И.Н.Д991). Несгерияьность медицинских инструментов,аппаратов ,перееязочного и поеного иачериала,хирургического белья,а также изделий аз резины - одна кз возмозшос причин возникновения БВМЗ. Наиболее опасны из них - ЕКЧчинфёкция,вирусный, гепатит В, гепатит ни А,ни В с парентеральным механизмом передачи ,постаньен-цнснные и послеоперационные натао&нкя ,сепсио ,а таете столбняк и газозйя гангрена (Покровский В.В. и др.,1989; .Чданоз ВЛ. и др., 1986;Арапоз Д.А. Д972;Сеаша Н.С. я др.,1991).

Кая в <яечестаенноЗ,*га* и зарубежно.! дятеразуро большое кш-мание уделено надёзиоои емршгааарш изделий медицинского назначения (Рубая Г .И. Д990;Рист1т^,га П.А. а др. ,1990; , 1991; ЫсьвЬтбг-Мг , Нгиболео паеяаи прдаззшгага неудов-детаорительной сгеридазагрга является неяспрашссть етерилнзацнен-ноЯ аппаратуры »нарушение тезногепш прозедеккя стерилизации и ие-созераенстзо контрояя «// Д973; <(глЫ / Д974). В овдольньк стационаркс докх неэффективно работающих стерилизаторов составляет от 0,3 до 26,2 % (Яодшця Д. ,1978; ¿Яо&'&игмъ ,1985).

Контроль стерилизации включает оценку соблюдения параметров режимов стерилизации и определение её эффективности .Для его проведения необходимо наличие средств физического.химического и бактериологического контроля »арсенал которых у нас в стреле крайне ограничен и не отвечает современным требованиям(Я^СЬг^' ^ 1988;Вашков Б.И.,1973). Дризнано целесообразным использование одного химического тест-бензойной кислоты для контроля температурного параметра (320+2) °С режима парового метода стерилизации. Химические тесты для контроля температурных параметров при других режимах работы паровых и воздушных стерилизаторов до настоящего времени не предусмотрены.Отсутствуют термоиндикаторныа краски для контроля совокупности параметров термических методов

стерилизации,а также биогесты на основе чистых культур термоус-ючявек спорообразуюцкх микроорганизмов .Контроль работы паровых стерилизаторов до настоящего времени проведали с использованием биопроб "садовой земли" Методические рекомендации по бактериологическое контролю работы воздушных, стерилизаторов отсутствуют, а контроль работы этих аппаратов в ЛБУ не проводился.

Отсутствие надёжных средств химического и бактериологического контроля объясняет неудовлетворительное положение с контролем стерилизации и обусловливает необходимость их разработки.

Цель и задачи исследования

Цель исследования - разработать и оценить средства химического и бактериологического контроля парового и воздушого методов стерилизации применительно к действующий рекинам стерилизации изделий медицинского назначения,а также подготовить рекомендации по их изготовлению и использован«».

Задачи исследования.:

I. Обосновать выбор химических соединений "и методику изготовления химических тестов для контроля-температурных.параметров ре-

жимов работы паровых и воэ^упншс стерилизаторов.

2. Обосновать выбор тест-культур для изготовления биотестов на основании оценки гермоустойчивостн спор микрооорганизмов,кон-таминирулцих изделия медицинского назначения в условиях их про-

3. Идентифицировать тес т-кулыуру, выбранную для контроля воздушного метода стерилизации.

4. Разработать методику изготовления биотестов и культивирования тест-культур до и после стерилизации.

5. ©характераовать биологические свойства тест-культур (гизнеспос оба ость и термоустойчивость) после консервации.

6. Апробировать предложенные средства химического и бактериологического контроля.

На основании данных термографического анализа обоснован выбор химических тестов для кштроля температурных параметров действующих режимов стерилизации в паровых и воздушных стерилизаторах.

Разработана методика изготовления биотестов на основе чистых культур спорообразупцих микроорганизмов.Впервые в нааей стране использована культура Ъ ВКМ В-718 для контроля

парового метода стерилизации .Впервые предложено использовать штамм В. Ьёмы-^гигиь <; ДЛ!1 контроля воздушного метода стерилизации.

Новизна исследования подтверздена авторским свидетельство^

эффективности воздушной стерилизации" (9 1712403 от 15Л0.91 г.) и свидетельством "Учас«шк ВДНХ СССР 1989 г", эа разработку набора биотестов для контроля работы парошх и воз душах стерилизаторов .

из а сд с та а и эксплуатации,« музейных тест-культур.

Научная новизна

на "Шташд бактерий

Практическая ценность

Разработана система контроля парового и воздушного методов стерилизации с применением хишгаёвкнх гестов, зермохшайчески): индикаторов и биотеетов на основе чистые щужьч^р спорообразупцих шкроорганизиов .Разработашша средегва хюатаеского и бактериологического контроля е сю£<т?еяышш результатами исшаганы Дезинфекционной сгаодшЗ Гяашоро управления здравоохранения г .Москвы, а также использована прл иедико-биоаогическйх испытаний

новых стерилизаторов и разработке новых режимов стерилизации.

Внедрение полученных результатов

Разработаны и включена в ОСТ 42-21-2-85 "Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения,Методы .средства и реии-кы" рекомендации по ретицу стерялизазри изделий мединского назначения сухим горячим воздухом.

Подготовлена и утверздены Ыашстерством здравоохранения СССР:

- Методические указания .по изготовлен!® и применению .химических тестов для контроля температурных параметров режимов работы паровых стерилизаторов £ Р 15-6/15 от 05.05.Ш г.),

- Методические рекомендация по организации централизованных стерилизациониых в лечебно-врофвдакигческих у^феэденша;

( В 15-6/8 от 31.01.20 г.),

1 - Методические указания по кадтрсдо работы паровых к воздушных стерилизаторов ( 15/6-5 от 28.02.91 г.).

Апробация работы

Материалы диссертации доложена на:

- Всесоюзной научно-практической конференции .посвященной 50-летип Московской дезинфекционной станции (г.Москва, 1990 г.),

- научно-практической конференции по клинической микробиологии (гЛосква,1992 г.),

- научной конференции,посвященной 90-летию проф.В.И.Башкова (г.Москва,1992 г.),

- заседаниях дезинфекционной секции Московского общества микробиологов »эпидемиологов и паразитологов им Л .М .Мечникова (1987,1988,1991 г.),

- научно-теорстических конференциях ВН>1ИДиС (1990 г.),

-использованы при подготовке стендоэых докладов на Ыеядуна-

родной конференции памяти Ф.Килмера по стерилизации медицинских . изделий (г.Москва,19Ш г.),

- в лекциях для слушателей циклов ЦФИУВ (1989,1991,1992 г.г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 246 страницах машинописи и включает в себя введение,обзор литературы,4 главы собственных исследований, заклвчение, выводы и список использованной литературы (161 отечественный и 112 иностранных авторов).Работа яллпстрирована 29 таблицами и 26 рисунками.

Материалы и метода исследования

При разработке химических тестов исследовали 29 индивидуальных химических соединений и иг механических смесей с красителями. Работу выполняли совместно с сотрудникам кафедры общей химии Московской медицинской академии им. И.Ц.Сеченова .Температуру плавления и другие термические эффекты.происходящие при нагревании химических соединений, определяли метод он дифференциального термического анализа на приборе "Деривагограф 1050" в соответствии с Методическими указаниями "Использование дегаватографяи в фармацевтических исследованиях",1987 г.

_ б -

Выбор тест-культур микроорганизмов для контроля парового и воздушного методов стерилизации проводили на основании данных устойчивости микроорганизмов к средствам термической стерилизации. Определена термсуе гейта в ос гь 205 сдорообразупцих микроорганизмов,из которых .200 ввдедены с изделий медицинского назначения в ЛПУ и на промышленных предприятиях,« 5 представлены музейными тест-культурами (.B.sUazci/uz/vc^hc й'Л ВШ B-7I8.B. suJ-ét-ü* <гал. ni^lb ВШ В-723.В. штаммы б и 7, В .се хгси итамм 96).

Выделение спорообразужхцих микроорганизмов и определение тер-иоустойчивоети к водяному насыщенному пару под избыточным давлением и сухому горячему воздуху проводили по методикам.регламентированным "Методическими указаниями по определению устойчивости микроорганизмов,контаминирупцих изделия медицинского назначения в условиях их производства и эксплуатации,к стерилизующим агентам" ,утверздешшш 29.03.85 г.,¡£28/16-7.Отбор,обработку проб почвы и определение устойчивости биопроб "садовой земли" проводили в соответствии с "Методическими указаниями по контролю паровых стерилизаторов (автоклавов) в лечебных учреждениях (типа "АВ" ,"АГ","ffiVA0B")" .утвержденными 28 .II .*72г. ,Jf99,8-72 .Устойчивость спор к текучему пару определяли по "Инструкции по определению бактерицидных свойств новых дезинфицирующих средств",утвержденной 6.05.68 г.,}|"739-68.Термоустойчивость спор определяли в у ль тра т ерм ос тат е типа Т1-г150,в котором рабочей жидкостью являлось вазелиновое масло (Рогачев В .И. и др. ,196б;Калинина Н.М.и др., 1982) .Контроль физических параметров р'ежимов работы паровых и воздушных стерилизаторов осуществляли с помощью средств измерения температуры,давления и времени (табл.1).

Для изготовления.биотестов сравнительной'оценке подвергали 7 носителей,имитирующих-изделия.из текстиля.стекла,металла и др.: батист,фильтровальную бумагу (ГОСТ 12026-76),си.ликагель .(марка КСЫ-0,Г0С1 3956-76) .стекловолокно,флаконы : из -трубки стеклянной

Таблица I

Средства кдатроля парового и воздушного методов стерилизации

Контроль при режимах стерилизации - температура ( °С ), время стерилизационной выдержки {мин)

метод средства коч-гпслй назначение кратность

Ices нг-рсля паровой метод воздушный метод

(120+2),45 (13212),20 160 t£0 Д50 I80tio * 60

I ¿ 3 4 Soy

Физический

Термометр ртутный стеклянный максимальны^ с диапазоном измерения от 0 .до 150 "С СШ-7) ,цена деления шкалы I С

Секундомер механический Зг0класса точности;часы наручные механические с точ- времени нсчъв измершия +1 мин; индикатор времени на панели блока управления аппарата

Самозаписывапций потенциометр типа Ш1-4 с термопарами типа ХК ; температуры

мост типа КСМ-4 с термодатчикаыи ЭЧП и времени

Мановакуумметр с пределом измерения давления от 0,1 до 0,5 МПа,класс точности не ниже 2,5

Термометр ртутный стеклянный лабо-раторный-с диапазоном измерения от О до 200°С; термометр ртутный стеклянный максимальный.с диапазоном измерения от О до 200 °С ТТП-25);

индикатор температуры на панели блока управления аппарата

метров

измерение

температуры

цикл

i i

Продолжение таблицы X

Химический

химические теста бензойна« кислота, Д(+)-Манноза; левокицетин

сера элементарная никотинамид,мочевина

термохимические индикаторы

( фирма " иЛрьк■

» ИииЛь^К' № «

.Финляндия )" " Тя/и " (фирма 'кб^&к

утсиел-С ".Финляндия );• "рч-Сссйне /нЛияЬч Та/и " ($ирма " 3 М Со.",ОНА )

Бакте-

риологический

5-10й - 5'10ь спор

■ оценка параметров

каздый цикл

винная кислота,гид-рокинсн,тиомочевина

¥ермоиндикаторная краска № 29

термоиндикаторная краска й» 6

Тест-культура В.Тест-культура В. кс/ыт/^тни) ВКМ В-718;носители-флаконы инсулиновые штамм С;носители-инсулиновые фла-фольга алюминиевая; плотность обсеменения-коны, фильтровальная бумага,алюш-на носитель; ниевая фольга; плотность обсемене-

ния 5-Ю2 -5*10^ спор на носитель; упаковка - пакеты из упаковочной бумаги (ОСТ 42-21-2-85)

температуры

температура

температуры и времени

температуры, полноты удаления в оз духа,проникновения пара

оценка эф- ежеме- ! фективности слчно;

не резке 2 раз в год

гибели спор тест-культур

I

С0 1 I

для лекарственных средств (ФИ 1-5 НС-1 ТУ 64-0Ю9-88,флаконы инсу-линовые) алюминиевую фольгу,уголь активированный (ГФ X,ст.135). Каадый образец стерильного носителя обсеменяли суспензией спор тест-культуры в объеме 0,02 мл из расчета 5'10^ -5'10^ спор на носитель (паровой метод стерилизации) и 5'10^ -5*10^ спор на носитель (воздушный метод стерилизации) .Носители высушивали в термостате пр! температура (37+1) °С или в эксикаторе над осушителем (силикагель»хлористый кальций) при комнатной температуре в тече- , ние 24 ч.При готовленные таким образом биотесты помещали кадаый в пакет из упаковочной бумаги и запаивали в полиэтиленовую пленку. Ей ответы до употребления хранили в холодильнике при +4 °С.

/!дентификация атамма,предложенного в качестве тест-культуры для контроля воздушного метода стерилизации,проводили на основе определения хулыуральных, морфологических и фииолого-биахимичес-ких свойств (Лабинская А.С.,1978;Пеажов М.А.Д964;Смирнов В.В. и др.,1982;Ой^« Д,1981) чДля учета результатов идентификации использовали "ключи" (Хоулт Дяс. ,1980;С¿л-г-бб Д.,1981; гиСоп. Я I г^ ,1973).

Обоснованием к выбору питательных сред в зависимости от назначения служили следующие показатели:эффективность.чувствительность и скорость роста.Среди прочих признаков оценивали возможность приготовления в бактериологических лабораториях ЛПУ»доступность и экономичность. '

Сйной из вагиейдих характеристик тест-культур служит возможность сохранения в лабораторных условиях .Кшсервацшо тест-культур проводили методами кри окснс ервации,диофилиэации а высушивания (Герна Р.,1983;Сидягсина ТЛ.,19£б) .Работу выполняли совместно с сотрудниками Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН.

Средства химического и бактериологического контроля исполь-

эованы для контроля работы стерилизационной аппаратуры в ЛПУ,

проведения ыедико-биологических испытаний новых типов стерилизаторов и разработки новых режимов стерилизации изделий медицинского назначения.

Для контроля работы стерилизационной аппаратуры химические тесты,термохимические индикаторы и биотесты резмедали в контрольные точки стерилизаторов: внутри стерилизационных коробок и вне их на разных уровнях стерилизационной камеры (паровые стерилизаторы) и на загрузочные полки мезду изделиями (воздушые стерилизаторы) .Количество контрольных точек зависело от объема стерилизационной камеры.По окончании стерилизации тесты вынимали и визуально определяли изменение агрегатного состояния и цвета (химические тесты и термохимические индикаторы); бяотесты до- . ставляла в бактериологическую лабораторию,где производили посев с соблюдением асептических условий.

При проведении медико-биологических испытаний и разработке режимов стерилизации паровые стерилизаторы загружали перевязочным материалом,операционным бельем и другими изделиями из текстиля, уложенными в стерилизационные коробки,а также шприцами инъекционными и металлическими инструментами в упаковке из бумаги. В качестве имитатора загрузки воздушных стерилизаторов использовали упакованные в бумагу чашки Петри,как наиболее теплоемкие объекты стерилизации .Для оценки эффективности работы паровых и воздушных стерилизаторов проводили не менее трех опытов на каждый режим стерилизации.

Статистическая обработка полученных результатов включала вычисление средних значений .стандартных отклонений и довери- • тельного интервала с вероятность о безошибочного прогноза р?, 95 %.

Результаты и обсуждение собственных исследований

Физический метод контроля стерилизаций обеспечивает регистрацию параметров стзрилиэационного процесса,объективно свидетельст-вупдих об условиях проведения стерилизации.Ограниченность физического контроля состоит в том,что он не отражает эффективность действия стерилиэупцего агента на микроорганизмы.

Прямое измерение температуры в каждой стерилизуемой загрузке трудоемко,поэтому для контроля параметров режимов стерилизации используют также химический метод контроля с применение химических тестов и термохимических индикаторов.Первые представляют различные химические соединения или их смеси с красителями з герметичных стеклянных трубках.Химические тесты свидетельствуют о достижении заданной температуры по изменению агрегатного состояния и цвета.

Выбор веществ для изготовления химических тестов проводит и , на зсмозе- ' ' физико-химических процессов,Происходящих при нагревании .Результаты термографических исследований позволили выбрать из ряда химических соединений отвечалциэ нужным характе-ристикам(табл.1).С учетом конкретных свойств изученных соединений разработана технология изготовления химических тестов. Установлена необходимость добавления красителя в состав химических тестов,предназначенных для контроля работы паровых стерилизаторов (бромтимоловый синий,генциан фиолетовый-,феноловый красный, фуксин основной .фуксин кислый).

Преимущества химических тестов - простота их приготовления

к

и удобство использования.Однако химические тесты не позволяют контролировать длительность поддержания заданной температуры.

Для контроля совокупности нескольких параметров стерилиза-ционного процесса используют термохимические индикаторы,представ-

ляпцие собой листы или полоски бумаги с нанесенной на них тер-моиндик&торной краской ( Абрамовну Б.Г.,1972; Ие&г-к 1983).

По нашим данным .неудовлетворительные результаты работы паровых стерилизаторов,установленные по результатам бактериологического контроля, в 76,3 % подтверждены результатами термохимического контроля (" Укс^сл/Сег ",|ирма " /¿¿/у?& ¡Кг-ойС^Л ".Финляндия). Несмотря на привлекательность использования термохимических индикаторов,их применение дает возможность обнаружить неполадки в работе стерилизаторов и ошибки при проведении стерилизации сразу после её окончания »результаты термохимического контроля не могут служить доказательством эффективности проведенной стерилизации.

Бактериологический метод контроля стерилизации наиболее надежен (Со¡1т У. $> г{ а? ,1974; & ,1991).

Применявшиеся ранее в качестве естественных биотестов для контроля стерилизации пробы "садовой земли" не могли обеспечить стандартные результаты (Астафьева А.К. и др. ,1972) .Перспективным следовало признать использование биотестов,представлящих собой чистые культуры термоустойчивых спорообразупцих микроорганизмов .дозированн о нанесенные на носители.

С целью выбора тест-кульзур определена сравнительная устойчивость спорообразупцих микроорганизмов,контаминирущих изделия медицинского назначения в условиях их производства и Бксплуатации, и музейных тест-культур,используемых для контроля термических методов стерилизация в НИИПТиД .и по данным литературы (Коржинский Ы.,1983) .

В процессе изучения 205 штаммов выявлена их неоднородность по термрустойчивости к стерилизущш агентам. При действии

водяного насыщенного пара под избыточным давлением при температуре (120+2) °С гибель большинства микроорганизмов наступала при продолжительности менее 3 мин,т.®. 156 микроорганизмов (78 %) были чувствительными,44 (22$ ) имели среднюю устойчивость и ввдерживали 3-5 мин .Термоустойчивые микроорганизмы не были выделены с изделий медицинского назначения (рис.1).

А. Водяной насыщенный пар под Б. Сухой горячий воздух избыточным давлением при температурой (180+2) °С

контаминиругщих изделия медицинского назначения к действию термических агентов . А. - устойчивость менее 3 мин Б. - устойчивость менее 5 ю®" - устойчивость 3-5 мин - устойчивость 5-10 мин'

Наиболее устойчивой из музейных тест-культур была"культура Ъ ВНМ В-718,которая могла быть выбрана в ка-

честве тест-культуры для контроля эффективности парового метода стерилизации (табл.2).

При изучении термоустойчивости спорообразугщих микроорганизмов к действию сухого горячего воздуха температурой (180+2) °С установлено,что 183 (91,5 %) микроорганизмов на ввдерживали 5 мин действия сухого горячего воздуха,17 микроорганизмов (8,5$) были устойчивыми при времени воздействия 5-10 мин,в тем числе устойчивостью 10 мин обладал I штамм,который был выбран для исследований (рис.1) .Термоустойчивость ввделенного штамма ,

г

Таблица 2

Сравнительная термоустойчив ость спор музейных тест-культур к действию термических агентов

Наименование тест-культуры

Показатели термоустойчивоста спор

вид термического агента,условия нагрева (суспензионная среда .носитель .плотность спор/мл (на носитель)

нагревание ;уль- водяной насыщенный пар под --------------3^ыт

тратермостат (ди-избыточным давлением п:

стиллированная туре (120+2) С;паровой' 4 _____

вода,,-, тор (флаконы.алюминиевая фольга,

5'105 -5-Ю6)

Д.мин

(флак оны, алшини евая фольга, ^ 'Ю^)

2?. 1с

время , шн

выливания

гибели

Д.мин время гибели, мин

пар тем-(99+1) _ .аппарат ОЯль-Мюллера (батист,

1'106)

время

гибели,

мин

В .5{>"<лЫАп-

ВШ В-718

В.ыИ^&ь ъм штамм ВИИ ВВ. мЫ< к?> штамм 6

штамп 7

В .акшл втамм 96

Лист15

-723

ЛюсГ0'7

Л 105=0,5

Лцо»0'3

II

26

15

¿1 <3 <1

<1

ДХЮ»! >9 5

<5 <гЗ 7

>660

5 15

Примечание:прочерк - исследования не праа'дш

условно обозначенного кал штамм В - G, превышала термоустойчивость музейных тест-куль typ, = 2,8 м::к (табл.2).

В модельных условиях (в ультратермостате и аппарате Ойль-Ыюллера) определены показатели термоустойчивости спор микроорганизмов .предпочтительных в качестве тест-культур,при заданных температурах на основания кривых зыкивания.

Показатели термоустойчивости спор'культуры В. siuftctiu 'ttncj-Juiu.s штамм ВКМ B-7I8 близки аналогичным результатам показателей терисустойчивости спор В. stia^t/иг rief ki -¿ел ,описанных отечественными и зарубежными авто-

рами (Калинина Н.Ы.,1982;Коржинский М.,1983). Показатели термоустойчивости штамма В-0 Ддар 1.7 мин.Дщ^* 1,2 мин 0,9 мин,2 =» 32 °С в ультратермостате и устойчивость к текучему пару 100 мин превышали показатели термоустойчивости спор музейных тест-культур (табл.2).

Таким образом,среди большого числа испытанных микроорганизмов обнаружены термоустойчивые культуры,, выбранные в качестве тест-культур для контроля парового {Ъ. stctuMS'.*."™ ВКМ B-7I8) и воздушого (штэаш В -О методов стерилизации изделий медицинского назначения.

И,тамм B-G-, выделенный с чашки Петри,подвергнутой стерилизации сухим горячим воздухом,при контроле стерильности,идентифицирован по 20 культуралъно-морфологическим и (|изиолого-био-химическим признакам (табл.3) .По совокупности и наличии специфических признаков (образование, газа в среде для денит-рификации при анаэробном культивировании,утилизация пропионата и расщепление аргинина ) взделенный штамм отнесен х семейству

Таблица 3

Результаты идентификации штамма спорообразупцего микроорганизма, устойчивого к действию сухого горячего воздуха

Ш>

Исследуемый признак

Полученная характеристика

1.

2.

3.

4.

5.

6.

V.

8.

9.

10, IX. 12. 13, .14, 15, 16 I? 18,

19,

20,

Форма клетки

Окраска по Грану -

Подвижность

Споры

Форма

Раздутость спорангия Преобладающее пол ахание споры Рост в анаэробных условиях

Температура роста,°С Максимальная минимальная Каталаза Рост при р&5,7 Рост при % А'аС1 Реакция Фогес-Ироскауэра Продукты расщепления глокозы Образ свание индола Лецитиназа

Гидролиз крахмала +

Гидролиз казеина +■

Редукция нитратов +

Дшитрификация в анаэробных условиях + Образование кислоты в лакмусовом ыолоке-Утилизация пропионата +

Расщепление аргинина +

палочковидная,прямая грамп олозятель нал подвигни эндоспоры

2ллилтич0скиз

отсутствует центральное + ,факультативный анаэроб

55

15 +

+ + +

кислота,газ (слабо)

Примечания: +■ положительный результат;

- отрицательный результат. Им^&счлси ,роду »виду

Таксономическое определение штамма подтвврздено Всесоюзной коллекцией микроорганизмов ИЫ41 РАН.

В качестве носителей тест-кулыур для контроля парового метода стерилизации выбраны флаконы в ахшиниеьав фольга .Окк по-

- il -

зволяли получить стандартизованные показатели времени выживания и времени гибели тест-культур при действии водяного насыщенного пара под избыточным давлением температурой (120+2)°с - 5 и 15 мин соответственно.Для контроля воздушного метода стерилизации - флаконы, фильтровальная бумага и алюминиевая фольга - на них споры обнаруживали после воздействия сухого горячего воздуха температурой (IôO+2)°C в течение 4 мин .носители были стерильны через 30 мин. Использование других носителей не обеспечивало получение стандар чих результатов контроля эффективности проведенной стерилизации.

Для культивирования тест-культур В. sécatciUw^Ài âti> ВКМ B-7I8 и В. штамм С-испытаны 7 твердых и 7 кйдких

питательных сред .изготавливаемых как в лабораторных условиях,так и централизованно,сухие питательные среды (Плоскирев Н.В.,1964; Биргер Ы.О. ,1982) .Показана возможность замены питательных сред на основе мясных гидролизатов средами из кровяных сгустков,гидролиз ата кильки,а также полусинтетнческой питательной средой.Оптимальными оказались питательные среды,представленные в табл.4; : > _ .Нами предложены режимы консервации тест-кулыур В. si(cwt-twi-mcfjxéub БШ B-7I8 и В. Чпгмъ штамм &,. методами

; криоконсервациа.диофилиэациа и высушивания.В качестве криопро-тектора целесообразно использовать 10 % раствор глицерина,при лиофилиэации и высушивании - защитные среды -QSA иЮ % раствор глицерина соответственно.Консервация тест-культур перечисленными методами обеспечивала сохранение их жизнеспособности и термоустойчивое та к действию водяного насыщенного nàpa под избыточным давлением и сухого горячего воздуха в течение 24 месяцев (срок наблюдения).

Выбор тест-кулыур и разработка-методики их культивирования, * ■ . а также выбор носителей.для изготовления'биотестов и оценка методов-консервации позволили разработать методику "изготовления и

- ÍB -

Таблица 4

Питательные среды для культивирования тест-куль тур В. &¿o БШ B-7I8 и В. ¿cJatUfewiS штамм G-

До и после стерилизации

Назначение пита- Наименование тест-культуры

тельной среды в, íbuxiolá^ Ж В-718

В. -(л&гик^еъл-г^ъ штамм С-

Определение числа Агар Хоттингера ( содержание емтного азота спор в суспензии от 140 до 160 иг'$)

Питательный агар сухой Мясо-пептонный агар

Выращивание спор Картсфелъно-пептонный агар

J Пшеничный агар

Исследование бис- Булвси Хоттингера (содержание аминного азота

тестов после сте- от 140 до 160 кт'%)

рилизации Мясо-пептонный бульсн

Питательный бульон сухой Бульсн из перевара кровяных сгустков Полусинтетическая питательная среда с индикатором феноловым красным

Сухая питательная среда для контроля стерильности

применения биотестов (рис,2).Результаты исследований использованы для оформления методических указаний,которые введены в практику работы дезинфекционной и санитар! о-эпидемиологаческой службы.

Разработанные средства химического и бактериологического контроля апробированы при проведении планового- контроля работа стеридотационной аппаратуры в ЮУ г Лосквы(табл.5).За 5 лет после введения планового контроля в ЛПУ неудовлетворительные результата работ паровых и воздушна стерилизаторов с . снижены в 1,3 а 7,3 раза соответственно.

Использование разработанных средств химического и бактерио-

ПОДГОТОВКА ТЕСТ-КУЛЬТА

1. Лиофилизированная культура

2. Суточная бульонная культура

3. Суточная агаровая культура

4. Получение спор

5. Прогревание суспензии (55-70 ^С.ЗО мин)

6. Промывка спор с центрифуги-

^зоаанием (3-х кратно), ¡риготовление суспензии спор 8. Определение числа жизнеспо- ^ сооных спор в суспензии

ПОДГОТОВКА НОСИТЕЛЕЙ

1. Промывка флаконов,изготовление носителей из фильтровальной бумаги и алюминиевой фольги

2. Подготовка носителей для стерилизации

3. Стерилизация носителей

/

ИЗГОТОВЛЕНИЕ БИОТЕСТОВ

1.

2.

3.

4.

(0.02 мл) (3$ ВС,24 ч)

Обсеменение носителей Высушивание носителей Упаковка

Проверка жизнеспособности и термоустойчивости Сиответов

КОНТРОЛЬ РАБОТЫ ПАНОВЫХ И В0ЭДУ1ШЫХ СТЕРИЛИЗАТОРОВ

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ¿ЮСЛЕДОВАШЕ БИОТЕСТОВ ПОСЛЕ (ЛШШИЗАЦИИ

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ КОНТРОЛЯ (7 суток)

Рис. 2 Схема изготовления и применения биотестов для контролд парового и воздушного методов стерилизации

- - Таблица 5

Результаты бактериологического контроля работы паровых и воздушных стерилизаторов в ЛОУ г .Москвы

Тип стери- Год Число исследованных ал- Число исследованных лизаторов паратов_биотестов_

всего с неудовдетвори- всего с неудовлетворительным резуль- тельным результатом контроля " татом контроля

абс. % абс. %

Паровые 1986 95 12 12,6 405 30 7,4

1987 425 43 10,1 2125 138 6,5

1988 1167 . 95 8,3 5835 ' 262 4,5

1989 1302 132 10.1 6510 410 6,3

1990 1672 166 9,9 8360 474 5,7

Итого 4661 448' 9,6 23325 1314 5,7

Воздушные 1986 147 15 10,2 735 27 3,7

1987 585 16 2,7 2925 30 1,0

1988 1528 20 1,3 7640 54 0,7

1989 1695 42 2,5 8475 93 1,2

1990 2988 40 1,4 14940 97 0,6

Итого 5415 133 2.5 27075 248 0,9

логического контроля позволило оценить работу 10 паровых и 13 воздушных отечественных и зарубежных стерилизаторов .На основании полученных результатов Комитет по новой медицинской технике МЗСССР рекомендовал вышеперечисленные аппараты к серийному производству ■и закупке*

хИспытаны паровые стерилизаторы: ГВД-100 .Тюменский филиал ЦКП1Б "Медоборудование";АСХ-2с0,в1СЕМ",Куба; Р $ 06/01,20 А,50 У/5, 4/6-А;405 А,405 РА,625 РА, "С/мггг^ " ,ЧѮР; Р£ А 446 " ЫСЗВ", Германия;

воздушные стерилизатора: ГП-20,40,80,320,320-2,320-3 .Белгород-Днестровский филиал ЦКИБ "Цедоборудование'ЧН $' -113 -0100,0200, МШШ",ГДР; Н ¿-122,402 А,402 РА ,"С 1^г<игл, М,ЧСЙР, ГП-40-2,Ульяновский моханичее;:»й завод.

- fci-

Тестнсультура Ъ .ltA&ufwM> итат б использована для разра-. ботки нового режима стерилизации изделий медицинского назначения сухим горячим воздухом в воздушых стерилизаторах с прмудитель-ной циркуляцией .Установлено,что время стерилиэациснной вздержки при температуре 160 °С с предельными. отклонениями температуры

. J)

-10 от H0KWiaJ3íH0r° значения в загруженной стерилизационной камере составляет 150 мкн.

Разработанные биотесты пртменены для оценки возможности выбора режимов термической стерилизации с помещьв компьютера стери-лизацяошого "ДТИ^ 20Ю"(И0иКГ МА,г.Эрфурт) .Установлено преимущество использования биотестов на основэ чистнх культур в сравнении с использованием биопроб "садовой земли".Эффективность стерилизации парой®! методом достигнута при показателе <3=65 (температура 120 °С) и G*40 (температура 132 °С); эффективность стерилизации воздушна методом достигнута при С» 12.

Вызоды

I. На основе установленных термографических показателей обоснован выбор химических соединений и методика изготовления химических тестоэ для контроля температурных параметров реаимов работы паровых и воздушных стерилизаторов.

2.По результата!.! оценки тормоустойчнвости спор микроорганизмов,контаминируядих изделия медицинского назначения в условиях их производства it эксплуатации,и цузейнкх тест-культур сделан выбор тест-культур для оценки эффективности парового (В.sicmo-иагте^/ч. ¿lo БКМ B-7I8) и воздушого (штакы В - G) методов стерилизации.

3. По совокупности 20 признаков птемм В -О.взделенннй а выбранный в качестве тест-культуры для контроля воздудаого метода стерилизации,идентифицирован как ВасlituA iubfnifczstt-b.

4. Разработана методика изготовления биотестов и культивиро-'

вания спор тест-культур Ъ.^иммиху^о^о^ ВКМ В-718 и В. -пС^ггмл штамм & до и после стерилизации .Обоснован выбор носителей для контроля:

- парового метода стерилизации- флаконы и алюминиевая фольга;

- воздушного метода стерилизации- флаконы,фильтровальная бумага, алюминиевая фольга.

5. Показано сохранение жизнеспособности и термоустойчивости спор тест-культур В. ¡каЛо^иъ^о^Ьз ВШ В-718 и В

штайм & к средствам термической стерилизации после криоксисерва-ц:-ш,лиофилизации и высушивания в условиях длительного хранения (2 года) .

6. Разработанные химические тесты и биотесты использованы для контроля работы паровых и воздушных стерилизаторов в ЛПУ (неудовлетворительные результаты в разные годы составили 8,112,6% и 1,3-10,2 % соответственно); оценки новых отечественных и зарубежных стерилизаторов (рекомендованы к серийному выпуску и закупке 10 типов паровых и 13 типов воздушных стерилизаторов ) и разработки нового режима стерилизации изделий медицинского назначения сухим горячим воздухом (160^°С,150 мин).

Список работ,опубликованных по теме диссертации

1.Стерилизация изделий медицинского назначения сухим горячим воздухом при температуре 160°С/Н.В.Рамкова,Р.Л.Гутерман и др.//Вопросы дезинфекции и стерилизации ,1986 .-С .54-68.

2.Устойчивость к стерилизующим средствам микроорганизмов,кснтами-нирущисх изделия медицинского назначенкя/Н .В.Рамкова.К.А.ТроЕин, Ю.ИЛасденников.Р.Д.Гутерман и др .//Актуальные вопросы клинической микробиологии, в яеинфекционной клинике:Тез .докл.II Всесога.

кокф.Барнаул,М, Д988.-Ч Л .-С .120-121.

3 Димические тесты для контроля температурных параметров режимов работы паровых и воздушых стерилиэаторов/Р .Л.Г^терман, В. А Л оп-ков,Л.А.Сарян,В.1).Решетмяк,ИЛ.Деви//Совремешше методы в средства дезинфекции и, стерилизация.41.,1989.-С.78-82.

4. Использование термического анализа для разработки химических тестов стерилизации / Р. Л.Гутерман ,Н.В.Ра«кова,В.А.Попков, Л.А.Сарян.В .Ю.Решетняк.З .Е Лаяинина, H.A. Маторина.М .И.Леви

// Лаб.дело. - 1989. - М2. C.7Ü-74.

5. Апробация биотестов для контроля итерилизап^и / М.И.Леви, Р.Л.Гутврман,Л£.11ярятинскиЯ и др. // Гиг. и сан.. - 1990. - №4. - С.евчгЭ.

6. Бактериологический контроль эффекгавности работы паровых и воздупяых стерилизаторов в лечебно-профилактических учреждениях г.Ыосквы / Р.Л.Гутерман,ВЛ.Бессонова,Е.М.Гагуа,

М.М.Лившиц,!.Б .Пирятинский,11 .И.Леви // Актуальные вопросы

совершенствования дезинфекционных и стерилизацианных мероприятий : Материалы Бсесоюз.науч.практ.конф.,посвящ. 50-летип Моск.дезинфекц. ст. - Ы.,1990. - 4.2. .-С.37-42.

7. Гутерман Р.Л. Оперативный контроль работы паровых и воздушных стерилизаторов с использованием химических тестов // Актуальные вопросы совершенствования дезинфекционных л етери-лизационннх мероприятий : Материалы Всесоюз.науч.-практ. конф.,посБЯщ.50-л®тио Моск.дезинфзкц.ст. -М.,1990. -4.2. -С.46-51.

8. Гутерман Р.Д..Сидякина Т.М. Разработка биотестов на основа консервировали ах культур бактерий // Передовой производственный опыт в медицинской промышленности,рекомендуемый для внод-рения.Научно-техн.инф.сб.статей. - М.,1991. - Вып.2. - C.27-3I.

9. Гутерман Р.Л. Средства контроля работы паровых и воздушных стерилизаторов // Дезинфекционное дало. - 1992. - FI. -С.18-22.

10.Гутерман Р.Л. Нотами бактерий. Ъвас1исЛ _ » используемый для контроля эффективности воздушной стерилизации //Авторское свидетельство £ 1712403,.Stf ,С JZU^CIZQ, Z/00; заявл". 16*.05.69,опубл.15,02.92.-Бпл.ES.

11. Оценка рада варуСеяных стерилизаторов / Н.В .Райкова, Г.Н. Мельникова,Р .Л .Г^терь;и.ч ,В .И .Белова // Актуальные пробдеш деоннфекции.стерилизации.дезинсегауд а доратизацкп: Материалы науч.кшф. ,посеяц.90-лзт1Ш проф.В.И.Вашкова. -М., 1992,-€,131-132.

12. Гугерм&ч Р.Л. Выбор а иепольвовшис сташа Вас/

для контроля воздушного метода стерилизации кздздай ьщщ^аекого назначения Актуальные проблеш де-2Ш5§екции,стершизаофш,дсзиысега51« а дератизации : Материалы шуч. кшф. ,посшц. 90-л«нко проф. ВЛ.Вагшона. -Ц.,1992.-С.134.

ЗаТиа. Л'лмдраоа РФ ТирЛ>0