Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Сравнительные аспекты полиморфных вариантов генов ИЛ-4 и ИЛ-10 при бронхиальной астме у коренного и пришлого населения республики Хакасия
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.03.09
Автореферат диссертации по медицине на тему Сравнительные аспекты полиморфных вариантов генов ИЛ-4 и ИЛ-10 при бронхиальной астме у коренного и пришлого населения республики Хакасия
005003665
АНДРЕЙЧИКОВА ЕЛЕНА АНАТОЛЬЕВНА
СРАВНИТЕЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ ИЛ-4 И ИЛ-10 ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ У КОРЕННОГО И ПРИШЛОГО НАСЕЛЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ
ХАКАСИЯ
14.03.09-клиническая иммунология, аллергология
Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
2 4 НОЯ 2011
Новосибирск-2011
005003665
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Росздрава.и
Учреждении РАМН / Научно-исследовательском институте клинической иммунологии Сибирского отделения РАМН I
Научные руководитель: академик РАМН, профессор, доктор медицинских наук
Владимир Александрович Козлов
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор
Владимир Васильевич Климов
доктор медицинских профессор
наук,
Любовь Михайловна Куделя
Ведущая организация: Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение «Государственный научный центр Институт иммунологии» ФМБА России
Защита состоится «_» ___2011 г. в __часов на заседании диссертационного
совета Д 001.001.01 в Институте клинической иммунологии по адресу: 630099, г.Новосибирск, ул.Ядринцевская, 14
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института клинической иммунологии СО РАМН (630099, г.Новосибирск, ул.Ядринцевская, 14)
Автореферат диссертации разослан "_"__ 2011 г.
Учёный секретарь диссертационного совета
Ольга Петровна Колесникова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Бронхиальная астма является одной из актуальных медико-социальных проблем. Это обусловлено, в первую очередь, широкой распространенностью заболевания среди всех возрастных слоев населения. Бронхиальная астма относится к группе мультифакториальных заболеваний, этиология и патогенез которых определяется сложным взаимодействием факторов окружающей среды и генетических факторов (комбинации аллельных вариант генов, ответственных за возникновение предрасположенности к развитию патологии) (Фрейдин М.Б., 2001; Cookson W.O., 2003).
За последние десятилетия изучения генетической основы бронхиальной астмы выявлено значительное число локусов, сцепленных с болезнью, где локализованы гены-кандидаты, продукты которых могут участвовать в трех основных звеньях заболевания: иммунологическом, воспалительном и нейрогенном. Особое внимание уделяется генам семейства цитокинов и цитокиновых рецепторов (Фрейдин М.Б., 2006; Barnes, P.J., 2008). Наличие определенных полиморфных вариантов может приводить к изменению уровня экспрессии данных генов и изменению структуры кодируемых ими белков (Пузырев В.П., 1999; Kips J.C., 2001).
Взаимосвязь полиморфных вариантов генов цитокиной сети с бронхиальной астмой у жителей России изучена несколькими группами исследователей (Казначеев В.А. и др., 2005; Карунас A.C. и др., 2007; Огородова J1.M., 2002; Фрейдин М.Б., 2006; Рамазанова, H.H., 2007). Полученные результаты, однако, весьма противоречивы и не дают однозначного ответа на вопрос об их патогенетической роли в развитии астмы.
Допустимо, что для такого сложного заболевания как бронхиальная астма имеет место этническая специфика в детерминации, что доказывается различием некоторых участков сцепления в этнически дифференцированных популяциях. Имеющиеся наблюдения свидетельствуют, что, по-видимому, коренные и некоренные популяции, проживающие в одинаковых климатогеографических и социально-экономических условиях, могут иметь значительные различия в распространенности бронхиальной астмы.
В Республике Хакасия изучения ассоциации полиморфизма генов цитокинов с бронхиальной астмой среди взрослого населения не проводилось. Исходя из всего этого, нами была сформулирована цель исследования.
Цель исследования - охарактеризовать особенности генетического полиморфизма цитокинов и их ассоциацию с развитием бронхиальной астмы у коренного и пришлого населения Республики Хакасия. Задачи исследования:
1. Оценить количественные показатели иммунного статуса (СОЗ+, С04+, С08+, С022+, С056+, 1§А, [§М, 1§0, ^Е), уровни сывороточных концентраций цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10 у больных БА Республики Хакасия.
2. Изучить распределение частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов цитокинов 1Ь-4 (-590С—>Т, -ЗЗТ—>С) и 1Ь-10 (-592С—>А, -1082А—Ю) у больных аллергической бронхиальной астмой и здоровых индивидуумов республики.
3. Провести анализ ассоциации исследованных полиморфных вариантов генов и возможных их сочетаний с риском развития бронхиальной астмы с учетом этнической принадлежности анализируемых групп.
4. Провести анализ ассоциаций исследуемых аллельных вариантов с уровнем продукции соответствующих цитокинов у больных бронхиальной астмой.
5. Проанализировать распределение частот аллелей и генотипов изученных полиморфных локусов у коренных жителей, с учетом степени тяжести, клиническими и функциональными показателями бронхиальной астмы.
Научная новизна исследования:
Впервые получены данные о распределении аллельных вариантов промоторных регионов генов 1Ь-4, 1Ь-10 в точках полиморфизма -590С—>Т и -ЗЗТ—>С 1Ь-4, -592С—>А и -1082А—1Ь-10 в популяции монголоидов Хакасии и проведён сравнительный анализ характера их распределения с другими монголоидными популяциями, по литературным данным. Установлено, что генетические факторы риска развития атопической бронхиальной астмы у хакасов ассоциированы с генотипами -ЗЗС/Т , -590С/Т гена 1Ь-4 и -592А/А, аллелем А в локусе -592 гена 1Ь-10.
Обнаружена ассоциация аллеля А локусов -592 и -1082 гена 1Ь-10, с такими фенотипическими проявлениями бронхиальной астмы, как тяжесть заболевания, наличие поливалентной сенсибилизации.
Впервые проведено комплексное исследование концентрации противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-10) на системном уровне во взаимосвязи с другими показателями иммунного статуса при атопической бронхиальной астм * у коренных жителей Хакасии. Особенностью эндогенной регуляции межклеточных взаимодействий при БА у коренных жителей является: повышение содержания абсолютного и относительного числа CD4+ лимфоцитов, увеличение концентрации ИЛ-4 и ИЛ-10 в сыворотке крови, снижение относительного числа CD3+ и CD8+ лимфоцитов. При медикаментозно контролируемом течении болезни, сывороточный уровень ИЛ-4 и ИЛ-10 не отличались у хакасов с БА от контрольных значений. Теоретическая и практическая значимость работы:
Данные, полученные в результате проведенного исследования, расширяют знания в области генетики заболеваний органов дыхания и этно-экологических аспектов аллергологии.
Определение концентрации цитокинов у пациентов с БА позволяет оценить интенсивность атопического воспаления на системном уровне.
Полученные данные об ассоциированности аллельных вариантов генов цитокинов с атопической бронхиальной астмой у хакасов позволяют использовать их в качестве дополнительных скрининговых тестов для выявления генетических факторов риска развития болезни.
Полученные результаты позволят прогнозировать течение бронхиальной астмы. Наличие аллеля А локусов -592 и -1082 гена IL-10 предполагает включение в базисную терапию бронхиальной астмы у хакасов противовоспалительных препаратов ( ингаляционных глюкокортикостероидов) в максимально рекомендуемых дозах, длительными курсами. Положения, выносимые на защиту:
1. В обследованных группах населения больных БА выявляется дисбаланс субпопуляций лимфоцитов, при этом регистрируется сдвиг соотношения Thl/Th2-лимфоцитов в сторону Th2, что поддерживает аллергическое воспаление, эти изменения выражены в большей степени среди пришлых жителей в отличие от коренных.
2. Носительство генотипа -590СТ, -ЗЗСТ гена ИЛ-4 и -592АА гена ИЛ-10 является фактором генетической предрасположенности к развитию аллергической БА у хакасов. Аллель -592 А гена ИЛ-10 ассоциирован с
5
тяжелым характером течения БА. Сочетание генотипов -590ТТ/-ЗЗТТ гена ИЛ-4 является маркером пониженного риска развития заболевания.
3. Выявлены достоверные отличия в частотах встречаемости аллелей и генотипов генов ИЛ-4 в точке -33 и -590, ИЛ-10 в области -592 и -1082 у коренных и пришлых жителей, больных БА. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 41 таблицей и 12 рисунками. Список литературы содержит 205 источник, в том числе 28 работ отечественных и 177 зарубежных авторов. Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на 11, 12, 13 межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицины» (Абакан, 2008, 2009, 20 Юг).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе 4 журнальные статьи, из которых 3 - в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Работа выполнена на базе лаборатории молекулярной иммунологии НИИКИИ СО РАМН (зав. лаб. - д.м.н., профессор C.B. Сенников).
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы. Работа основана на результатах обследования неродственных индивидуумов, больных аллергической IgE-опосредованной (атопической) БА, различной этнической принадлежности, постоянно проживающих на территории Республики Хакасия. Обследованный контингент подразделяли на две популяции: хакасов (монголоидов или коренных жителей) и европеоидами (пришлое население). Группы больных составили пациенты, имеющие положительные результаты кожных аллергопроб и ранее подтвержденный диагноз бронхиальной астмы (GINA, 2006). Под наблюдением находилось 99 человек: 66 больных БА хакасов и 33 больных европеоидов. Сбор данных, включал жалобы больного, семейный и аллергологический анамнез производился в личной беседе с больным. Всем больным проводились инструментальные обследования, включающие в себя спирографию, электрокардиографию и рентгенографию. По степени тяжести больных хакасов разделили на 3 группы - легкого течения (25 пациентов), средней тяжести (23
пациентов) и тяжелого течения (18 человек). По ответу на проводимую базисную терапию больных БА разделили на две группы: 1 группа - с контролируемым течением (12 человек), 2 группа - с неконтролируемым (34 человека).
В качестве контроля в работе использовалась выборка практически здоровых лиц, представленная жителями различных районов Республики Хакасия (100 человек), хакасской этнической принадлежности. Все входящие в группу контроля, являлись неродственными индивидуумами. Критериями для включения в контрольную группу являлось отсутствие аллергических заболеваний на момент включения и в анамнезе, наличие у них отрицательных аллергопроб.
Иммунологическое обследование включало определение субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитофлоуметрии с помощью моноклональных антител фирмы «Orto Diagnostig» (США). Определяли субпопуляции Т-клеток, несущие поверхностные антигены CD3+, CD4+, CD8+, рассчитывали иммунорегуляторный индекс-соотношение CD4+/CD8+. Концентрацию иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG) сыворотки крови определяли методом радиальной иммунодифузии по G. Mancini с помощью стандартных антииммуноглобулиновых сывороток. Содержание общего IgE сыворотки крови определяли методом твердофазного иммуноферменгного анализа с помощью стандартного набора реагентов «Вектор-БЕСТ», Новосибирск.
Содержание цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10 в сыворотке крови определяли с помощью меченых моноклональных и поликлональных антител («R&D Systems», США) методом элекгрохемилюминесценции с использованием прибора «Origen Analyzer» фирмы IGEN (США) и реагентов, приготовленных согласно протоколам [Sennikov S.V. др. 2003].
Для генотипирование индивидов использовали образцы тотальной ДНК, выделенной из цельной венозной крови, с использованием комплекта реагентов для выделения нуклеиновых кислот «Проба НК» научно-производственной фирмы ООО «ДНК- технология» (г.Москва).
Исследованы полиморфные варианты генов цитокинов: ИЛ-4 -590С—>Т, -ЗЗТ—>С и ИЛ-10 -592С—>А, -1082А—>G. Генотипирование аллельных вариантов осуществляли методом рестриктного анализа продуктов амплификации (ПДРФ -анализ), используя последовательности праймеров и параметры температурных циклов, описанные в литературе и учитывая рекомендации производителя
использованного в работе амплификатора "РТС-200 DNA Engine" фирмы MJ Research (США) (табл. 1).
Таблица 1
Характеристики исследованных полиморфизмов.
Ген Полимор физм Структура праймеров Фермент рестрикци и Литература
ИЛ-4 -590С—>Т 5'-tatggacctgctgggacccaaacta-3' 5'-tgatctggggctccttctctgcatag-3' BsIF Gervaziev Y.V et al„ 2006
-ЗЗТ—С 5'-tttccctcggtttcagcaattttaaatc-3' 5'-ctagcaggaagaacagagggggaagc-3' BstMA
ИЛ-10 -592С—>А 5'-atccaagacaacactactaa-3' 5' -taaatatcctcaaagttcc-3' Rsa Alam artine E. et al., 2003
-1082А—G 5 '-tctgaagaagtcctgatgtcactg-3' 5'-actttcatcttacctatccctacttcc -3' Mnl Lowe P.R et al„ 2001.
Обработка цифрового материала результатов исследования проводилась в соответствии с общепринятыми методами статистики, с использованием прикладного рабочего пакета статистического анализа «Statistica v.6.0» на персональном компьютере «Petntium IV 1700» в рабочей среде «Windows ХР». Для представления количественных данных, не подчиняющихся нормальному закону распределения, применялись непараметрический критерий U-test Манна-Уитни [С. Гланц, 1999]. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий X2 Пирсона. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05. Для анализа ассоциации аллелей и генотипов с риском развития БА рассчитывали отношения шансов (ОШ) с 95%-ными доверительными интервалами (ДИ).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ Характеристика результатов иммунологического обследования пациентов с БА. Анализ распределения субпопуляционного состава лимфоцитов выявил статистически значимое уменьшение количества CD3+ -лимфоцитов в группе коренных жителей с БА 67,54(56-75)% в отличие от индивидуумов без БА 76,73(61-79)%. Что возможно, свидетельствует о снижении суммарного
содержания Т-лимфоцитов за счет миграции этих клеток в очаг повреждения, либо с подавлением дифференцировки Т-клеток, либо с селективным апоптозом наиболее зрелых Т-лимфоцитов.
Концентрация иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов была изменена неравномерно. Анализ относительного количества С04+-лимфоцитов показал, что у больных хакасов происходит достоверное повышение данного показателя до 53,18(49-61)%, в отличие от контроля 42,0(36-51)% (р<0,05). Снижения С08+клеток, у хакасов с патологией составляла 15,72(3-30)%, а в контрольной группе 28,73(4-33) (р< 0,05), что соответственно приводит к увеличению ИРИ, у пациентов с БА 3,36(1,3-20,3)% и 1,46(1,24-3,4)% в контроле (р<0,05). Высокое содержание Т-хелперов периферической крови может быть обусловлено замедленнной их элиминации (Jang A.S, 2000). Бронхиальная астма сопровождается нарушением процессов клеточной гибели. Дефект апоптоза является ключевым звеном в развитии заболевания (Невзорова В.А., 2001). У больных БА происходит снижение апоптотической гибели (Majno G., 1995).
У больных БА хакасов, в отличие от здоровых, отмечен дефицит NK клеток (CD56+) 8,86(4-15)% и 13,27(6-15)% соответственно (р< 0,05). Эффекторные функции NK- клеток заключаются в уничтожении клеток-мишеней, продукции ИФН-у и других цитокинов. Таким образом, дефицит NK клеток может приводить к развитию острых респираторных инфекций (в особенности вызванных риновирусом или респираторно-синцитиальным вирусом) (Tan W.S., 2005), которые, как известно, индуцируют обострение воспалительного процесса у больных БА.
Содержание В-лимфоцитов (CD 22+) выше у больных БА хакасов в отличие от здоровых 14,18(10-20) и 12,8(11-14) соответственно (р< 0,05).
Отмечено изменение содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови у больных БА хакасов: достоверно увеличено содержание IgA, IgM и IgG, а концентрация IgE у больных БА значительно превышала значения в контрольной группе. Таким образом, изменения, выявленные у больных БА хакасов, соответствуют современным представлениям о том, что при БА наблюдается избыточная активация В-лимфоцитов и развитие IgE- опосредованных реакций (Laffer S.et al, 2001).
Анализируемые группы больных отличаются между собой по содержанию отдельных субпопуляций лимфоцитов периферической крови. У европеоидов отмечается достоверное снижение CD3+ 64,8(54-72)% в отличие от хакасов с БА
9
67,54(56-75)%. Количество CD8+ -лимфоцитов у больных БА европеоидов также ниже в отличие от лиц хакасской этнической принадлежности с БА 12,4(2-24) и 15,72(3-30)% соответственно (р< 0,05). Вместе с тем, отмечаются и общие закономерности показателей иммунного статуса у больных БА хакасов и европеоидов: содержание CD4+-, С022+-лимфоцитов, CD56+ , ИРИ, иммуноглобулинов класса М. Концентрация общего IgE в сыворотке крови у больных БА хакасов регистрировались достоверно выше в отличие от группы европеоидов с БА 448,32(84,2-1256,1)МЕ/мл и 311,70(102,4-985,5)МЕ/мл (р<0,05) соответственно. В исследуемых популяциях у больных БА выявляются однотипные изменения показателей иммунного статуса, характерные для больных бронхиальной астмой.
ИЛ-4 - один из основных пусковых медиаторов воспаления ТЬ2-типа. Исследование цитокинового профиля в сыворотке крови коренных жителей больных БА выявило повышение среднего уровня ИЛ-4 в отличие от группы контроля 60,78(5,8-132,2)пг/мл и 19,4(2,3-24,6)пг/мл соответственно (р<0,01). При сравнении уровня ИЛ-4 у больных БА, различающихся по этнической принадлежности, выявил повышение его у коренных жителей в отличие от пришлых 60,785(5,8-132,2) пг/мл и 30,49(6,3-45,6)пг/мл соответственно (р<0,01).
К противоспалительным механизмам относится локальное и системное действие интерлейкина-10, направленное на ингибирование продукции провоспалительных цитокинов. Известно, что IL-10 продуцируется другой иммунорегуляторной субпопуляцией Т-клеток - Tri, а также дендритными клетками, ТЪ2-лимфоцитами и др [Lan R.Y., 2005; Mocellin S., 2003;]. Полученные результаты отражают повышенную активность Tri-клеток, что, возможно, связано с их участием в регуляции аллергического воспаления.
Отмечается достоверное увеличение ИЛ-10 в группе хакасов с БА в отличие от контроля 1383,5(23,8-2171,2)пг/мл и 63,55(3,56-83,5)пг/мл соответственно (р<0,05). Средний уровень ИЛ-10 у больных БА европеоидов превышал значения у хакасов с БА, 1436,57(15,4-2563,3)пг/мл и 1383,5(23,8-2171,2)пг/мл соответственно.
Таким образом, выявленные отклонения в цитокиновом профиле, свидетельствуют о дисбалансе иммунных реакций в сторону избыточной активации Th-2 пути, что соответствует классическим представлениям об иммунопатогенезе атопического воспаления [Leung D.Y.M., 2004]. Вместе с тем, у больных хакасской этнической принадлежности выявлены некоторые особенности в содержании цитокинов аллергического воспаления в сравнении с больными БА европеоидами.
10
На фоне проводимой иммуносупрессорной терапии сывороточные концентрации цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10 в группах больных коренной национальности с контролируемым течением БА достоверно снижаются и достигают значений, не отличающихся от здоровых доноров (рис. 1).
2000 1500 1000 500
о
В Неконтролируемая БА п=34 ■ Неконтролируемая БА п=34
В Контролируемая БА п=12 В Контролируемая БА п=12
□ Контрольная группа п=21 □ Контрольная группа п=21
Рис.1 Сывороточные уровни ИЛ-4 (А) и ИЛ-10 (Б) при контролируемом ГКС и неконтролируемом течении БА у хакасов и в группе контроля Примечание: * р<0,05
Проводимая базисная фармакотерапия у данной категории больных была представлена высокими дозами ИГКС или сочетанием их системными ГКС. Изучение полиморфных вариантов генов цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10 Распределение аллельных вариантов гена ИЛ-4 в позиции -590С-^Т и -ЗЗТ—>С среди жителей Хакасии
Анализ распределения генотипов в точке -590 гена ИЛ-4 среди 100 здоровых коренных жителей Республики Хакасии, выявил преобладание гомозиготного Т/Т и гетерозиготного С/Т варианта (37% и 45% соответственно), над гомозиготным С/С (18%). Частота аллелей С и Т - 40% и 60%. В сопоставлении с данными по популяциям различных регионов Земного шара, распределение частоты генотипов полиморфизма -590С—»T гена ИЛ-4 у коренных жителей Республики Хакасия близко к северомонголоидным популяциям Евразии (Noguchi Е et al., 1998; Lee, S.G., 2004; Freidin M.B., 2002).
Проведенный нами анализ частоты аллелей и генотипов в локусе -590 этого гена среди коренных жителей РХ с бронхиальной астмой (61 человек), показал, что частота гетерозиготного генотипа С/Т у пациентов с БА 60,7% что выше, в отличие от группы контроля 45% (х2 = 3,72; р=0,03; ОШ=1,88; 95% ДИ 1-3,6 (табл.
пг/мл
2). В этой связи генотип С/Т полиморфного локуса -590 гена ИЛ-4 можно рассматривать как кандидатный ген аллергической БА, в хакасской популяции.
Таблица 2
Распределение генотипов и частот аллелей полиморфизма в локусе -590 гена ИЛ-4 у здоровых доноров и больных БА
Исследуемые группы Аллели Генотипы
С абс.(%) Т абс.(%) С/С абс.(%) С/Т абс.(%) Т/Т абс.(%)
Европеоиды 1.С БА п=33 14(21) 52(79) 4(12) 6(18) 23(70)
Хакасы 2. СБА п=61 55(45) 67(55) 9(15) 37(60) 15(25)
З.Без БА п=100 81(40) 119(60) 18(18) 45(45) 37(37)
Критерии различий, X2 (р1-2) 10,5(0,0006)* 15,56 (0,0008)* 18,09 (0,0002)*
Критерии различий, Г(Р2-3) 0,65(0,2) 0,29 (0,3) 3,72(0,03)* 2,66(0,1)
Примечание: * - обозначены статистически значимые различия между группами, р<0,05.
Известно, коренные и некоренные популяции, проживающие в одинаковых климатогеографических и социально-экономических условиях, имеют значительные различия в полиморфизме генов цитокинов влияющих на патогенез БА. Что доказывает сравнительный анализ полиморфизма сайта -590 гена ИЛ-4 между пациентами с БА коренными и пришлыми. При анализе частот генотипов и аллелей в области -590 среди европеоидов преобладает «дикий» гомозиготный генотип Т/Т, среди хакасов гетерозиготный С/Т (р<0,001). В изученных популяциях доминирует встречаемость аллеля Т, но среди европеоидов аллель Т встречается достоверно чаще 79%, в отличие от хакасов 55% (р<0,001).
При анализе полиморфизма промоторной области гена ИЛ-4 в точке -33 среди здорового коренного населения Республики Хакасия показано преобладание гомозиготного Т/Т и гетерозиготного С/Т генотипов (36% и 46% соответственно) над гомозиготным С/С (18%). Частота аллелей Т и С -59% и 41% соответственно. В опубликованных работах по изучению распределения частоты встречаемости аллелей и генотипов данных локусов гена 1Ь-4 в сопоставлении с
данными популяциями различных регионов Земного шара, у коренных жителей Республики Хакасия распределение частоты генотипов и аллелей близко к северомонголоидным популяциям Евразии (Elliott К., 2001; Choi E.H., 2002; Lee S.G., 2004; Suzuki I., 2000). Следовательно, полученные нами данные свидетельствуют о сходстве частот аллельных вариантов гена ИЛ-4 в позиции -33 и -590 с монголоидным популяциями.
Результаты сравнительного анализа показали достоверное повышение частоты гетерозиготного генотипа С/Т 65,2% (х2 = 5,86; р = 0,02; ОШ =2,20; 95% ДИ 1,564,17) среди больных БА хакасов в отличие от здоровых 46%. Можно допустить ассоциацию данного генотипа с предрасположенностью к аллергической форме БА в хакасской популяции (табл. 3).
Так же показана расовая специфика в распределении частот аллелей и генотипов полиморфного варианта -ЗЗС—»T гена ИЛ-4. У хакасов преобладал генотип С/Т 65,2% и 21,2% у европеоидов (р< 0,001), а у европеоидов Т/Т 69,8% и 22,7% у хакасов (р<0,001). У европеоидов доминировала частота аллеля Т-80% и 55% у хакасов (р<0,001).
Таблица 3
Распределение генотипов и частот аллелей в промоторной области -33 гена ИЛ-4 у доноров и больных БА
Исследуемые группы Аллели Генотипы
Т п(%) С п(%) Т/Т п(%) С/Т п(%) С/С п(%)
Европеоиды 1.С Б А п=33 53(80,3) 13(19,7) 23(69,8) 7(21,2) 3(9,0)
Хакасы 2.С БА п=66 73(55,3) 59(44,7) 15(22,7) 43(65,2) 8(12,1)
З.Без БА п=100 118(59) 82(41) 36(36,0) 46(46,0) 18(18,0)
Критерии различий, Х2(р1-2) И ,88(0,0006)* 20,51 (0,0001)* 16,95 (0,0004)* 0,21(0,6)
Критерии различий, X2 (р2-3) 0,44(0,5) 3,29(0,07) 5,86 (0,02)* 1,04(0,3)
Примечание: *-обозначены статистически значимые различия между группами,р<0,05
Бронхиальная астма относится к группе заболеваний трактующихся как экологически обусловленных. Одним из факторов заставляющим реализовать
генетическую предрасположенность к манифесту БА является проживание в городе, что увеличивает риск заболевания в 2 раза (Черняк Б.А., 2008). Анализ распространенности частот аллелей у хакасов, зависимости от места проживания, выявил: что у городских жителей преобладает частота аллеля С в локусах -590 и -33 гена ИЛ-4 среди пациентов с БА в отличие от здоровых (%2 = 4,18 ; р = 0,04; ОШ =1,92; 95% ДИ 1,02-3,62) и (х2 = 6, 33; р = 0,01; ОШ =2,24; 95% ДИ 1,19-4,23) соответственно (табл.4). Можно предположить, что носительство аллеля С в полиморфных областях -590С—>Т и -ЗЗТ—»С гена ИЛ-4 у лиц хакасской национальности, проживающих в городах с индустриальной загрязненностью и интенсивным автомобильным движением, является фактором риска аллергической БА.
Таблица 4
Распределение алелей и генотипов в полиморфном локусах -33 и -590 гена ИЛ-4 в группе хакасов городских жителей, больных БА и здоровых
Локус Исследуемые группы Аллели п(%) Генотипы п(%)
Т С Т/Т С/Т С/С
-33 1. СБА п=28 24(42,9) 32(57,1) 3(10,7) 18(64,3) 7(25,0)
2. Без БА п=67 84(62,7) 50(37,3) 28(41,8) 28(41,8) 11(16,4)
-590 З.СБА п=28 29(51,8) 27(48,2) 6(21,4) 17(60,7) 5(17,9)
4. Без БА п=67 48(35,8) 86(64,2) 10(14,9) 28(41,8) 29(43,3)
Критерии различий, Х2(р1-2) 6,33(0,01)* 4,01(0,04)* 0,95(0,3)
Критерии различий, X2(р 3-4) 4,18(0,04)* 0,59(0,4) 2,84(0,09)
Примечание: * - обозначены статистически значимые различия между группами, р<0,05
Распределение аллельных вариантов гена ИЛ-10 в позиции -592С—»А и -1082А—среди здоровых лиц и больных аллергической бронхиальной астмой.
ИЛ-10 является потенциальным противовоспалительным медиатором. Было показано, что увеличение продукции ИЛ-10 сдвигает баланс ТЫ/ ТЬ2 в сторону увеличения эффектов ТЬ2 цитокинов и приводит к развитию механизмов патогенеза астмы (1ип£ М. е1 а1, 2004).
В случае полиморфизма гена ИЛ-10 в локусе -592С—»А, у здорового населения Хакасии, нами показано преобладание гомозиготного С/С и гетерозиготного С/А вариантов (31% и 53% соответственно) над гомозиготным А/А (16%). Частота аллелей С и А - 57% и 43% соответственно. Данные по распределению частот аллелей полиморфизма -592С—»А гена ИЛ-10 хакаской популяции занимают промежуточное положение между кавказоидными популяциями Европы и монголоидными популяциями (K.ang-Hsi \Уи й а1, 2005; СЬаПефе Я. й а1 2005; Тга]коу Э. е1 а1 2008).
При анализе распространенности генотипов по маркеру -592С—»А гена ИЛ-10 обнаружено преобладание гомозигот А/А среди больных БА хакасов в сравнении с группой контроля (0111=2,27; 95% ДИ 1,07—4,88; р<0,05) табл. 5.
Таблица 5
Распределение генотипов и частот аллелей полиморфизма в точке-592 гена ИЛ-10 у коренных жителей РХ
Исследуемые группы Аллели п(%) Генотипы п(%)
С А С/С С/А А/А
БезБА п=100 115(57,5) 85(42,5) 31(31,0) 53(53,0) 16(16,0)
С БА п=66 59(44,7) 73(55,3) 13(19,7) 33(50,0) 20(30,3)
X2 (р) 5,23(0,01)* 2,61(0,1) 0,14(0,7) 4,79(0,01)*
Примечание: * - обозначены статистически значимые различия между группами, р<0,05.
Анализ частот встречаемости аллелей в изучаемых группах позволил выявить преобладание носителей аллеля А среди пациентов, страдающих БА, в сравнении со здоровыми лицами (ОШ=1,67; 95% ДИ 1,07- 2,61; р<0,05). Таким образом, носительство аллеля А и гомозиготного генотипа А/А полиморфного локуса -592 гена ИЛ-10 является фактором риска формирования аллергической БА в хакасской популяции.
Показана расовая специфика в распределении частот генотипов полиморфного участка -592С—»А гена ИЛ-10 у больных БА коренного и
пришлого населения Хакасии: отмечается достоверное преобладание гомозиготного генотипа С/С среди европеоидов 57,6%, у хакасов 19,7% соответственно (%2 = 14,43; р<0,001) и гомозиготного А/А среди хакасов 30,3% у европеоидов 12,1% (х2 = 3,916; р < 0,05). У европеоидов больных БА преобладал аллель С-73%, а у хакасов аллель А-55% (х2= 13,92; р< 0,001).
При сравнении частот аллелей данного локуса в зависимости от тяжести БА получены достоверные различия. Нами показало, что в группе больных БА с тяжелым течением заболевания отмечалась тенденция к увеличению встречаемости аллеля А 68,7% в сравнении с 42,5% в группе контроля (х2=6,32; р=0,01, ОШ=2,93; 95% ДИ=1,60-6,19) (табл. 6).
Таблица 6
Распределение частот аллелей полиморфного локуса -592 гена ИЛ-10 в группах больных с различным течением БА и контроля у коренных жителей
Аллели Контрольная группа п (%) Хакасы с БА п (%)
легкое средней тяжести тяжелое
С 115(57,5) 25(59,5) 16(34,8) 10(32,3)
А 85(42,5) 17(40,5) 30(65,2) 22(68,7)*
Примечание: * - обозначены статистически значимые различия между группами, р<0,05
Показатели нарушения ФВД коррелировали с тяжестью заболевания. Уровень ОФВ] является признаком, характеризующим тяжесть бронхиальной астмы. Отмечено преобладание аллеля А в точке -592 гена ИЛ-10 (р<0,001) при более низких показателях ОФВ1(<60%),и аллеля С при ОФВ1>80% (р<0,001) табл. 7.
Таблица 7
Распределение частот аллелей в промоторном регионе -592 гена ИЛ-10 в зависимости от показателей ОФВ,
Аллель ОФВ ,<60% п(%) ОФВ, 60-80% п(%) ОФВ,> 80% п(%)
С 9(25) 19(41,3) 33(68,8)*
А 27(75)* 27(58,7) 15(31,2)
Примечание: * обозначены статистически значимые различия, р < 0,001
Результаты проведенного нами исследования доказывают наличие ассоциации аллеля А в локусе -592 гена ИЛ-10 с тяжестью течения БА в хакасской популяции.
Известно, что продукция провоспалительных цитокинов Т-лимфоцитами у больных БА взаимосвязана с экспозицией аллергена и IgE-ответом (Воробьев A.A., 2006). Установлена ассоциация аллеля А в точке -592 гена ИЛ-10 с валентностью сенсибилизации. При моновалентной сенсибилизации чаще встречался аллель С (68,8%), при поливалентной аллель А (69,1%), соответственно (р <0,001). Таким образом, носительство аллеля А полиморфизма -592С—»A гена ИЛ-10 предрасполагает к поливалентной сенсибилизации у лиц хакасской национальности.
При оценке частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -1082А—>G гена ИЛ-10, у здоровых коренной национальности, нами показано значительное преобладание частоты гомозиготного А/А (54%) и гетерозиготного G/A(39%) вариантов над гомозиготным G/G(7%). Частота аллелей G-26% и А-74% соответственно. Наши данные по распределению частот аллелей полиморфизма гена ИЛ-10 A-1082G жителей Республики Хакасии занимают промежуточное положение между европейскими и азиатскими популяциями (Crawley Е. et al, 1998; Turner D.M. et al, 1997).
При изучении полиморфизма промоторного региона гена ИЛ-10 в точке (-1082) нами получены следующие результаты: у коренного населения Республики Хакасия с БА преобладает гетерозиготный A/G и гомозиготный А/А вариант (40% и 49,3% соответственно) над гомозиготным G/G (10,7%). Распределение частот аллелей и генотипов в группах хакасов с аллергической БА и здоровых лиц не имело статистических различий (р>0,05).
При исследовании обнаружены особенности распределения частот генотипов и в точке -1082 гена ИЛ-10 у больных БА хакасов и европеоидов проживающих на одной территории: у пришлых преобладал гетерозиготный генотип A/G (54,5%), а у коренных гомозиготный А/А (49,3%) р< 0,001.
Это обстоятельство представляется важным в связи с тем, что закономерности распространения БА также имеет свои особенности в популяциях различающегося национального состава. Возможно, такая специфика обусловлена различиями в частотах "патогенетически значимых" аллелей генов-кандидатов заболеваний.
При анализе распределения частот аллелей в области -1082 гена ИЛ-10 в зависимости от скоростных показателей ФВД (ОФВ1) выявлены различия (табл.8). Отмечалось преобладание аллеля А при показателях ОФВ1<80% (р<0,05), т.е. носительство аллеля А -1082 определяет выраженную обструкцию дыхательных путей.
Таблица 8
Распределение генотипов и частот аллелей полиморфизма гена ИЛ-Ю локуса -1082 в зависимости от показателей ФВД
Генотипы, аллели ОФВ1 <59% п(%) ОФВ1 60-79% п(%) ОФВ1 >80% п(%)
А 27(75)* 35(76,1)* 28(58,3)
G 9(25) 11(23,9) 20(41,7)
Примечание: * - обозначены статистически значимые различия между группами, р<0,05.
При оценке ассоциации различных комбинаций изучаемых генотипов с риском развития БА у хакасов, страдающих данной патологией, было обнаружено значительные различия в частотах комбинации генотипов -ЗЗСТ/ -592А А полиморфных областях -ЗЗТ—С гена ИЛ-4 и -592С—А гена ИЛ-10 в группе больных с БА и в контрольной выборке. Что указывает на рисковую значимость данного сочетания генотипов в развитии БА, у хакасов 22,7% и 7% соответственно в группе контроля (х2 = 8,81; р < 0,01; ОШ =3,63; 95%ДИ 1,02-8,28).
Так, комбинация генотипов -590ТТ / -ЗЗТТ гена ИЛ-4 встречалась статистически значимо реже в группе хакасов с Б А 10% в отличие от здоровых 33% (х2 = 5,34; р<0,05; 0111=0,39; 95% ДИ 0,07-0,33). Данная комбинация генотипов указывает на протекгивное значение в отношении развития БА в хакасской популяции.
ВЫВОДЫ
1. У больных БА хакасов в отличие от здоровых выявлены: дисбаланс в содержание СОЗ+, С04+, СО8+-лимфоцитов периферической крови, снижение СБ56+ клеток, увеличение содержания В-лимфоцитов (С022+) и иммуноглобулинов основных классов (А, М, в, Е) в сыворотке крови. У больных БА европеоидов достоверное снижение содержания субпопуляций лимфоцитов - СОЗ+, СЭ8+ в сыворотке крови в отличие от хакасов. В обеих
популяциях у больных БА выявляются однотипные изменения, свидетельствующие о нарушенной регуляции иммунного ответа.
2. В выборке больных БА коренной национальности отмечается достоверное повышение концентрации ИЛ-4 и ИЛ-10 в сыворотке крови показателей средней популяционной нормы, причем у больных БА хакасов содержание ИЛ-4 достоверно превышает значения больных европеоидов. При медикаментозно контролируемом течении болезни, сывороточные уровни ИЛ-4 и ИЛ-10 не отличались у хакасов с БА от контрольных значений.
3. Установлено, что исследованные молекулярно-генетические маркеры генов ИЛ характеризуются расовой специфичностью. У коренных жителей Республики Хакасии распределение аллельных вариантов гена ИЛ-4 ( в локусах-33 и-590) соответствует монголоидным популяциям, а ИЛ-10 (-592 и -1082) занимают промежуточное положение между европеоидными и монголоидным популяциями.
4. Показано, представители популяций европейского и азиатского происхождения, проживающие в Хакасии, имеют очевидные отличия в генетических маркерах предрасположенности к аллергической бронхиальной астме. Частоты аллельных вариантов генов ИЛ-4 в точке -33 и -590, ИЛ-10 в области -592 и -1082 у больных БА коренных жителей достоверно различаются с пришлыми, больными БА.
5. Факторами риска развития атопического бронхиальной астмы в популяции хакасов являются наличие в геноме пациента генотипа СТ в промоторных зонах гена ИЛ-4 -590С—>Т и -ЗЗТ—>С, аллеля А и генотипа АА полиморфного участка -592С—>А гена ИЛ-10.
6. Носительство аллеля С полиморфных областях -590 и -33 гена ИЛ-4 у лиц хакасской национальности, проживающих в городах, является фактором риска развития аллергической БА.
7. Выявлено, что генетическим маркером пониженного риска возникновения аллергической бронхиальной астмы у хакасов является сочетание генотипов ТТ / ТТ полиморфных локусах -590 и-33 гена ИЛ-4.
8. Установлено, что аллель А полиморфного локуса -592 гена ИЛ-10, у лиц коренной национальности с БА, ассоциированы с выраженными нарушениями функции внешнего дыхания, тяжестью заболевания и с валентностью сенсибилизации (у носителей данного генотипа достоверно
19
чаще встречается поливалентная сенсибилизация). А носительство аллеля G в точке -1082 гена ИЛ-10 предрасполагает легким нарушениям ФВД и течения заболевания. ПЕРЕЧЕНЬ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Исследование полиморфизма генов ИЛ-4 и ИЛ-10 у больных бронхиальной астмой / A.A. Пискунов, Е.А. Андрейчикова, А.Н. Силков, A.C. Жовмер, С.В.Сенников, В.А. Козлов // Омский научный вестник. - 2007. - №3(61). - С.202-204.
2. Состояние системного иммунитета у коренного населения с бронхиальной астмой в Хакасии / Е.А. Андрейчикова, В.А. Козлов // XI ежегодная межрегиональная научно-практическая конференция «Актуальные проблемы медицины». - Абакан. - 2008. - С. 92-96.
3. Полиморфизм гена интерлейкин 4 у коренных жителей республики Хакасия, больных аллергической бронхиальной астмой / Е.А. Андрейчикова // XII ежегодная межрегиональная научно-практическая конференция «Вопросы сохранения и развития здоровья Республики Хакасия». - Абакан. - 2009. - С. 5456.
4. Популяционные особенности полиморфизма генов цитокинов (IL-4, IL-10) у коренных жителей Республики Хакасия больных аллергической бронхиальной астмой / Е.А. Андрейчикова, Ю.А. Сенникова, A.A. Пискунов, C.B. Сенников, В.А. Козлов// Цитокины и воспаление. -2009. -№ 4. - С. 37-40
5. Состояние системного иммунитета у больных аллергической бронхиальной астмой Республики Хакасия / Е.А. Андрейчикова, Ю.А. Сенникова, В.А. Козлов // Медицинская иммунология. - 2009. - № 2 . - С.273-278
6. Изменения цитокинового статуса у пациентов с бронхиальной астмой / Е.А. Андрейчикова // XIY ежегодная межрегиональная научно-практическая конференция «Актуальные проблемы медицины».-Абакан.-2011.-С. 92-96.
7. Сравнительные аспекты аллельного полиморфизма гена IL-4 у коренных и пришлых жителей Республики Хакасия больных аллергической бронхиальной астмой / / Е.А. Андрейчикова, A.A. Пискунов, C.B. Сенников, В.А. Козлов // Бюллетень СО РАМН.-2011.- №6 .-С.56-59
Подписано в печать: 19.10.2011 Объем: 1 усл.п.л. Тираж: 100 экз. Заказ №732 Отпечатано в типографии «Реглет» 119526, г. Москва, Ленинградский пр-к, д.74, корп.1 (495) 790-47-77; www.reglet.ru
Оглавление диссертации Андрейчикова, Елена Анатольевна :: 2011 :: Новосибирск
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Бронхиальная астма как мультифакториальное заболевание
1.2. Механизм развития бронхиальной астмы
1.3. Роль цитокинов в патогенезе бронхиальной астмы.
1.4. Интерлейкин - 4.
1.4.1. Свойства ИЛ-4 и его роль в патогенезе бронхиальной астмы
1.4.2. Ген ИЛ-4 и его ассоциация с предрасположенностью к бронхиальной астме
1.5. Интерлейкин 10.
1.5.1.Функциональные особенности ИЛ-10 и его роль при бронхиальной астме.
1.5.2.Ген ИЛ-10 и исследования ассоциации его полиморфизмов с бронхиальной астмой в различных популяциях.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования.
2.2. Методы исследования.
2.2.1. Клинические исследования.
2.2.2. Аллергологические исследования.
2.2.3. Иммунологические исследования.
2.2.4. Молекулярно-генетические исследования.
2.3. Статистистическая обработка данных.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1. Показатели иммунного статуса у больных астмой хакасской и русской этнической принадлежности Республики
Хакасия
3.2. Результаты изучения полиморфных локусов -590 и -33 гена интерлейкина 4 у коренного и пришлого населения Хакасиии их связь с клинико-функциональными характеристиками болезни.
3.3. Результаты изучения полиморфных локусов -592 и -1082 гена интерлейкина 10 у коренного и пришлого населения Хакасии и их связь с клинико-функциональными характеристиками болезни.
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
4.1. Сравнительный анализ показателей иммунного статуса у-больных аллергической бронхиальной астмой коренного и пришлого населения Республики Хакасия.
4.2. Сравнительный анализ уровня цитокинов у больных бронхиальной астмы республики Хакасия.
4.3. Связь полиморфизма генов цитокинов с уровнем при аллергической бронхиальной астме
4.4. Анализ взаимосвязи полиморфных вариантов генов ИЛи ИЛ-10 с аллергической БА в Республики Хакасия
4.4.1. Особенности полового диморфизма генов ИЛ-4иИЛ-10 при аллергической бронхиальной астме у коренных жителей Хакасии
4.4.2. Влияние полиморфизма гена ИЛ-4 на риск развития БА у лиц коренной национальности проживающих в городе.
4.4.3. Взаимосвязь полиморфизма гена ИЛ-10 и тяжести течения бронхиальной астмы укоренных жителей Хакасии
4.4.4. Влияние полиморфизма генов ИЛ-4, ИЛ-10 у хакасов с бронхиальной астмой на выраженность атопии
4.4.5. Асоциациия полиморфизма генов ИЛ-4 и ИЛ-10 с тяжестью нарушения функции внешнего дыхания
Введение диссертации по теме "Клиническая иммунология, аллергология", Андрейчикова, Елена Анатольевна, автореферат
Бронхиальная астма является одной из актуальных медико-социальных проблем. Это обусловлено, в первую очередь, широкой распространенностью заболевания среди всех возрастных слоев населения. Распространенность БА в России среди детей составляет от 5,6 до 12,1%, а среди взрослых- 5,6-7,3%; смертность на 100000 населения 1,6—1,8 случая в год [85], что является одной из высокой в мире.
Бронхиальная астма относится к группе мультифакториальных заболеваний, этиология и патогенез которых определяется сложным взаимодействием факторов окружающей среды и генетических факторов (комбинации аллельных вариант генов, ответственных за возникновение предрасположенности к развитию патологии) [63, 24].
За последние десятилетия изучения генетической основы бронхиальной астмы выявлено значительное число локусов, сцепленных с болезнью, где локализованы гены-кандидаты, продукты которых могут участвовать в трех основных звеньях заболевания: иммунологическом, воспалительном и нейрогенном. Особое внимание уделяется генам семейства цитокинов и цитокиновых рецепторов, обеспечивающих нормальное функционирование слизистой бронхов и тучных клеток, контролирующих уровень иммуноглобулина Е, участвующих в реализации аллергического воспаления и бронхиальной гиперреактивности [16, 42, 25]. Наличие определенных полиморфных вариантов может приводить к изменению уровня экспрессии данных генов и изменению структуры кодируемых ими белков [16, 110].
Среди генетических факторов можно выделить «главные» гены и гены-«модификаторы», взаимодействие которых определяет клинические особенности бронхиальной астмы [16]. Наиболее вероятными кандидатами на роль «главного гена» предрасположенности к бронхиальной астме являются гены интерлейкина-9 и интерлейкина-4, картированные на хромосоме 5д31-qЗЗ. Предполагается, что помимо двух указанных генов в формирование генетической предрасположенности к этому заболеванию играют еще несколько генов, локализованных в хромосомных регионах 6р21.3 - р21.1, \\q\2-(\\Ъ, 1^24.1, 1ц31-^32. Продуктами этих генов являются : (3-фактор некроза опухолей, белок регулирующий уровень общего иммуноглобулина Е, у-интерферон и интерлейкина-10 соответственно [5, 109].
Взаимосвязь полиморфных вариантов генов цитокиной сети с бронхиальной астмой у жителей России изучена несколькими группами исследователей [6,7,12,24,25]. Полученные результаты, однако, весьма противоричивы и не дают однозначного ответа на вопрос об их патогенетической роли в развитии астмы. Это свидетельствует о необходимости комплексного исследования генетических механизмов развития данного заболевания для оценки факторов риска развития БА и последующей разработки профилактических мероприятий с учетом индивидуальных особенностей каждого больного.
Допустимо, что для такого сложного заболевания как бронхиальная астма имеет место этническая специфика в детерминации, что доказывается различием некоторых участков сцепления в этнически дифференцированных популяциях. Такие различия могут лежать в основе межпопуляционной вариабельности заболеваемости атопическими патологиями, обусловливая отличия в подверженности к астме у разных народов. Имеющиеся наблюдения свидетельствуют, по-видимому, что коренные и некоренные популяции, проживающие в одинаковых климатогеографических и социально-экономических условиях, могут иметь значительные различия в распространенности бронхиальной астмы.
В Республике Хакасия изучения ассоциации полиморфизма генов цитокинов с бронхиальной астмой среди взрослого населения не проводилось. Исходя из всего этого, нами была сформулирована цель исследования.
Цель исследования - охарактеризовать особенности генетических полиморфизмов цитокинов и их ассоциацию с развитием бронхиальной астмы у коренного и пришлого населения Республики Хакасия.
Задачи исследования:
1. Оценить количественные показатели иммунного статуса (СБЗ+, СБ4+, СЭ8+, СБ22+, СЭ56+, ^А, ^М, ^Е), уровни сывороточных концентраций цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10 у больных БА Республики Хакасия.
2. Изучить распределение частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов цитокинов 1Ь-4 (-590С—>Т, -ЗЗТ—>С) и 1Ь-10 (-592С—>А, -1082А—у больных аллергической бронхиальной астмой и здоровых индивидумов республики.
3. Провести анализ ассоциации исследованных полиморфных вариантов генов и возможных их сочетаний с риском развития бронхиальной астмы с учетом этнической принадлежности анализируемых групп.
4. Провести анализ ассоциаций исследуемых аллельных вариантов с уровнем продукции соответствующих цитокинов у больных бронхиальной астмой.
5. Проанализировать распределение частот аллелей и генотипов изученных полиморфных локусов у коренных жителей, с учетом степени тяжести, клиническими и функциональными показателями бронхиальной астмы.
Положения, выносимые на защиту:
1. В обследованных группах населения больных БА выявляется дисбаланс субпопуляций лимфоцитов, при этом регистрируется сдвиг соотношения ТЫ/Т]12-лимфоцитов в сторону ТЬ2, что поддерживает аллергическое воспаление, эти изменения выражены в большей степени среди пришлых жителей в отличие от коренных.
2. Носительство генотипа -590СТ, -ЗЗСТ гена ИЛ-4 и -592АА гена ИЛ-10 является фактором генетической предрасположенности к развитию аллергической БА у хакасов. Аллель -592 А гена ИЛ-10 ассоциирован с тяжелым характером течения БА. Сочетание генотипов -590ТТ/-ЗЗТТ гена ИЛ-4 является маркером пониженного риска развития заболевания.
3. Выявлены достоверные отличия в частотах встречаемости аллелей и генотипов генов ИЛ-4 в точке -33 и -590, ИЛ-10 в области -592 и -1082 у коренных и пришлых жителей, больных БА.
Научная новизна исследования:
Впервые получены данные о распределении аллельных вариантов промоторных регионов генов 1Ь-4, 1Ь-10 в точках полиморфизма -590С—»Т и -ЗЗТ—>С 1Ь-4, -592С—»А и -1082А—1Ь-10 в популяции монголоидов Хакасии и проведён сравнительный анализ характера их распределения с другими монголоидными популяциями по данным литературы. Установлено, что генетические факторы риска развития атопической бронхиальной астмы у хакасов ассоциированы с генотипами -ЗЗС/Т , -590С/Т гена 1Ь-4 и -592А/А, аллелем А гена 1Ь-10.
Обнаружена ассоциация аллеля А локусов -592 и -1082 гена 1Ь-10, с такими фенотип и ческими проявлениями бронхиальной астмы, как тяжесть заболевания, наличие поливалентной сенсибилизации.
Впервые проведено комплексное исследование концентрации противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-10) на системном уровне во взаимосвязи с другими показателями иммунного статуса при атопической бронхиальной астмой у коренных жителей Хакасии. Особенностями эндогенной регуляции межклеточных взаимодействий при БА у коренных жителей является: повышением содержания абсолютного и относительного числа СБ4+ лимфоцитов, увеличение концентрации ИЛ-4 и ИЛ-10 в сыворотке крови, снижение относительного числа СЭЗ+ и СЭ8+ лимфоцитов. При медикаментозно контролируемом течении болезни, сывороточный уровень ИЛ-4 и ИЛ-10 не отличались у хакасов с Б А от контрольных значений. Теоретическая и практическая значимость работы:
Данные, полученные в результате проведенного исследования, расширяют знания в области генетики заболеваний органов дыхания и этно-экологических аспектов аллергологии.
Определение концентрации цитокинов у пациентов с БА позволяет оценить интенсивность атопического воспаления на системном уровне.
Полученные данные об ассоциированности аллельных вариантов генов цитокинов с атопической бронхиальной астмой у хакасов позволяют использовать их в качестве дополнительных скрининговых тестов для выявления генетических факторов риска развития болезни.
Полученные результаты позволят прогнозировать течение бронхиальной астмы. Наличие аллеля А локусов -592 и -1082 гена 1Ь-10 предполагает включение в базисную терапию бронхиальной астмы у хакасов противовоспалительных препаратов типа ингаляционных глюкокортикостероидов в максимально рекомендуемых дозах длительными курсами.
Внедрение в практику:
Результаты исследований используются в учебном процессе кафедры терапии внутренних болезней МПСИ ХГУ им. Н.Ф. Катанова, г. Абакан, внедрены в работу ГУЗ «Хакасская республиканская больница им. Г.Я. Ремишевской» (г. Абакан).
Данные диссертационной работы могут послужить основой для последующих исследований по определению генетических факторов риска развития МФЗ в РХ. Они также могут быть использованы на циклах усовершенствования и семинарских занятиях ГОУ ВПО «Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова» Медико-психолого-социального института.
Апробация рботы:
Материалы диссертационной работы были представлены на 12 межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицины» (Абакан 2009г.).
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано числе 4 журнальные статьи, из которых 3 - в ВАК РФ.
Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 41 таблицами и 12 рисунками. Список литературы содержит 205 источник, в том числе 28 работ отечественных и 177 зарубежных авторов.
Заключение диссертационного исследования на тему "Сравнительные аспекты полиморфных вариантов генов ИЛ-4 и ИЛ-10 при бронхиальной астме у коренного и пришлого населения республики Хакасия"
Выводы
1. У больных Б А хакасов в отличие от здоровых выявлены: дисбаланс в содержание СЭЗ+, СБ4+, С08+-лимфоцитов периферической крови, снижение СЭ56+ клеток, увеличение содержания В-лимфоцитов (С022+) и иммуноглобулинов основных классов (А, М, О, Е) в сыворотке крови. У больных БА хакасов и европеоидов выявлены различия в содержании субпопуляций лимфоцитов - СЭЗ+, С08+ в сыворотке крови. В обеих популяциях у больных БА выявляются однотипные изменения, свидетельствующие о нарушенной регуляции иммунного ответа.
2. В выборке больных БА коренной национальности отмечается , достоверное повышение концентрации ИЛ-4 и ИЛ-10 в сыворотке крови показателей средней популяционной нормы, причем у больных БА хакасов содержание ИЛ-4 достоверно превышает значения больных европеоидов. При медикаментозно контролируемом течении болезни, сывороточные уровни ИЛ-4 и ИЛ-10 не отличались у хакасов с Б А от контрольных значений.
3. Установлено, что исследованные молекулярно-генетические маркеры генов ИЛ характеризуются расовой специфичностью. У коренных жителей Республики Хакасии распределение аллельных вариантов гена ИЛ-4 ( в локусах -33 и -590) соответствует монголоидным популяциям, а ИЛ-10 (-592 и -1082) занимают промежуточное положение между европеоидными и монголоидным популяциями.
4. Показано, представители популяций европейского и азиатского происхождения, проживающие в Хакасии, имеют очевидные отличия в генетических маркерах предрасположенности к аллергической бронхиальной астме. Частоты аллельных вариантов генов ИЛ-4 в точке -33 и -590, ИЛ-10 в области -592 и -1082 у больных БА коренных жителей достоверно различаются с пришлыми, больными БА.
5. Факторами риска развития атопического бронхиальной астмы в популяции хакасов являются наличие в геноме пациента генотипа СТ в промоторных зонах гена ИЛ-4 -590С—и -ЗЗТ—»С, аллеля А и генотипа АА полиморфного участка -592С—»А гена ИЛ-10.
6. Носительство аллеля С полиморфных областях -590 и -33 гена ИЛ-4 у лиц хакасской национальности, проживающих в городах, является фактором риска развития аллергической БА.
7. Выявлено, что генетическим маркером пониженного риска возникновения аллергической бронхиальной астмы у хакасов является сочетание генотипов ТТ / ТТ полиморфных локусах -590 и -33 гена ИЛ-4.
8. Установлено, что аллель А полиморфного локуса -592 и-1082 гена ИЛ-10, у лиц коренной национальности с БА, ассоциированы с выраженным нарушением функции внешнего дыхания, тяжестью заболевания и с валентностью сенсибилизации (у носителей данного аллеля достоверно чаще встречается поливалентная сенсибилизация).
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Лицам из групп риска по возникновению бронхиальной астмы целесообразно проводить тестирование генетического маркера предрасположенности к заболеванию для осуществления комплекса мероприятий по первичной профилактике.
2. На начальных этапах установлении диагноза атопической бронхиальной астмы рекомедуется проводить генотипирование исследованных полиморфизмов генов цитокинов для установления дальнейшего варианта его клинического течения. При выявлении маркеров тяжелого течения БА, пациентам изначально назначать наибольшие средние суточные дозы ИГКС.
3. Результаты показателей уровня сывороточных ИЛ-4 и ИЛ-10, использовать как один из критериев медикаментозного контроля бронхиальной астмы.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Андрейчикова, Елена Анатольевна
1. Воробьев, A.A. Иммунология и аллергология / A.A. Воробьев, А.С.Быков, A.B. Караулов. М.: Практическая медицина.-2006. - 246-47с.
2. Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы (Пересмотр 2007. Перевод с английского) / Москва: «Атмосфера», 2008.-С. 21-28.
3. Гланц, С. Медико-биологическая статистика./ С. Гланц //М: Практика. 1999. - 459С.
4. Дугаров, И.Д. О роли цитокинов при бронхиальной астме. / И.Д. Дугаров, Э.Х. Анаев, А.Г. Чучалин // Пульмонология. 2009.- № 4. - С.96-102.
5. Иванов, В.И. Генетика / В.И. Иванов, Н.В. Барышников, Дж.С. Билева и др.// Москва: ИКЦ «Академкнига», 2006. С. 554-57.
6. Карунас, A.C. Анализ ассоциации полиморфных вариантов генов цитокинов с бронхиальной астмой в Республике Башкортостан. / A.C. Карунас, А.Р. Измайлова, Ш.З. Загидуллин и др.// Цитокины и воспаление. 2007. - №4. - С. 84-90.
7. Кетлинский, С.А. Цитокины / С.А. Кетлинский, A.C. Симбирцев -С.- Петербург: Фолиант, 2008,- 552с.
8. Мамонтова, Т.В. Новые аспекты апоптоза мононуклеарных клеток в патогенезе атоптотической бронхиальной астмы / Т.В. Мамонтова, И.П. Кайдашев // Аллергология. 2005. - №4. - С. 15 - 23.
9. Ю.Чучалин, А.Г. Мониторирование и лечение тяжелой бронхиальной астмы у взрослых: результаты многоцентрового национального исследования
10. НАБАТ / А.Г. Чучалин, JI.M. Огородова, Ф.И. Петровский и др. // Терапевтический архив. 2005. - Т.77, №3. - С. 36-42.
11. П.Невзорова, В.А. Апоптоз и воспаление при бронхиальной астме / В.А. Невзорова, Т.Н. Суворенко, E.H. Коновалова // Терапевтический архив. 2001. -№ 12. - С.92-96.
12. Огородова, Л.М. Взаимосвязь полиморфных вариантов генов интерлейкинов и их рецепторов с атопической бронхиальной астмой / Л.М. Огородова//Мед. генетика. 2002. - №1(Т.1). - С.86-92.
13. Огородова, Л.М. «ACT» новый инструмент для оценки контроля над астмой / Л.М. Огородова, О.С. Кобякова // Аллергология. - 2005.- №2.-С. 17-22.
14. Огородова, Л.М. Генетические маркеры бронхиальной астмы у детей, больных атопическим дерматитом / Л.М. Огородова, О.С. Федорова, Е.Ю. Брагина и др. // Пульмонология. №4. - 2007. - С.-37-41.
15. Пузырев, В.П. Патологическая анатомия генома человека./ В.П. Пузырев, В.А. Степанов/^Новосибирск: Наука; 1997.
16. Пузырев, В.П. Роль генов интерлейкинов и их рецепторов в формировании предрасположенности к бронхиальной астме./ В.П. Пузырев /УБюл. эксперим. биологии и медицины. 1999 - Т. 127. прил.1. - С.3-6.
17. Пузырев, В.П. Генетическое разнообразие народонаселения и здоровья человека / В.П. Пузырев, М.Б. Фрейдин, А.Н. Кучер.// Томск: Печатная мануфактура. 2007. — 320С.
18. Рамазанова, H.H. Полиморфизм генов ИЛ-4(-590С>Т) у детей больных бронхиальной астмой, проживающих в Республике Башкортостан/ H.H. Рамазанова, Э.И. Эткина, А.Х. Хузинова и др. //Казанский медицинский журнал.- 2007.- Т.8 №6.-С.574-576.
19. Рязанцева Н.В. Аллельный полиморфизм генов ИЛ-4 и ИЛ-10 как один из возможных механизмов, способствующих хронизации вирусныхгепатитов / H.B. Рязанцева, И.О. Наследникова, В.И. Коненков и др. //Иммунология.- 2007.- №2.-С.70.
20. Сиделева, О.Г. Полиморфные аллели генов, ассоциированные с патогенезом атопической формы бронхиальной астмы у жителей Северо-Запада России : автореф. дис. . канд. биол. наук / О.Г. Сиделева. 2002.
21. Стригин, В.М. Клеточный иммунитет и уровень циклонуклеотидов в иммунорегуляторных клетках больных бронхиальной астмой и хроническим бронхитом./С.А. Стригин, А.П. Колесников // Тер.арх.-1997.-№!.-С. 72-75.
22. Фасахов, Р.В. Ксолар (омализумаб): новые возможности терапии тяжелой бронхиальной астмы./ Фасахов Р.В.// Пульмонология. 2007. - №4.-С.100-102.
23. Федосеев, Г.Б. Бронхиальная астма / Г.Б. Федосеев ' Санкт-Петербург: Нордмедиздат. 2006. - С. 108.
24. Фрейдин, М.Б. Генетические основы подверженности к бронхиальной астме./ М.Б. Фрейдин // В кн.: Масленникова А.Б. (ред.) Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике. Новосибирск: Изд. дом'« Манускрипт». 2001. 130-141.
25. Фрейдин, М.Б. Генетика атопии: современное состояние / М.Б. Фрейдин Е.Ю. Брагина J1.M. Огородова и др. // Вестник ВОГиС. -2006. -Том 10, №3,-С. 492-503.
26. Черняк, Б. А. Тяжелые формы Бронхиальной астмы./ Видеоконференция май 2008.
27. Чучалин, А.Г. Актуальные вопросы пульмонологии / А.Г. Чучалин // Русский Медицинский Журнал. 2004. - N2. - С.7-9.
28. Шалухина, А.Р. Эпидемиологическое и клинико-генетическое исследование бронхиальной астмы в Республике Башкортостан: Автореф. Дис. . канд. мед. наук.— Уфа, 2006.
29. Achsah, D. IL-4 / D. Achsah, Keegan. Cytokine Reference Book . Jost J. Openheim, Marc Feldmann. -San Diego, California: Academic Press. -2001. -V.l. -127-135 p.
30. Akbari, O. CD4+ invariant T-cell-receptor+ natural killer T cells in bronchial asthma./ O. Akbari, J.L. Faul, E.G. Hoyte et al.// N Engl J Med. -2006. -354(11). -1117-29.
31. Adcock, I.M. Interactions of glucocorticoids and 2 -agonists / I.M. Adcock, D.A. Stevens, P.J. Barnes // European Respiratory Journal. 1996. - Vol.9. - P. 160168.
32. Akbari, O. CD4+ invariant T-cell-receptor+ natural killer T cells in bronchial asthma./ O. Akbari, J:L. Faul, E.G. Hoyte et al.// N Engl J Med. -2006.-354(11).- 1117-29.
33. Akdis, C.A. A molecular basis for T cell suppression by IL-10: CD28-associated IL-10 receptor inhibits CD28 tyrosine phosphorylation and phosphatidylinositol 3-kinase binding / C.A. Akdis, A. Joss, M. Akdis et al // FASEB.- 2000,- V.14- P.2128.
34. Alamartine, E. Interleukin-10 promoter polymorphisms and susceptibility to skin squamous cell carcinoma after renal transplantation / E. Alamartine, P. Berthoux, C. Mariat, et al // J Invest Dermatol. 2003. - V.120.- P.5-6.
35. Anderson, G.G. Recent advances in the genetics of allergy and asthma / G.G. Anderson, W.O.C.M. Cookson// Mol. Med. Today. -1999. -V. 5. -P. 264-273.
36. Astermark, J. Polymorphisms in the ILIO but not in the ILlbeta and IL4 genes are associated with inhibitor development in patients with hemophilia / J. Astermark, J. Oldenburg, A. Pavlova A, et al // A. Blood.- 2006.- V.107.- P.3167-3172.
37. Atamas, S.P. Interleukin 4 in systemic sclerosis: not just an increase / S.P. Atamas, B. White // Clin Diagn Lab Immunol. -1999. -V. 6. P. 658-9.
38. Banchereau, J. Long-term human B cell lines dependent on interleukin-4 and antibody to CD40/ J. Banchereau, P. de Paoli F.Valle et al.// Science. -1991. -V. 251.-P. 70-2.
39. Banchereau, J. Functions of interleukin-4 on human B lymphocytes/ J. Banchereau, F. Rousset // Immunol Res. -1991. -V. 10. P. 423-7.
40. Barnes, K. Evidence for common genetic elements in allergic disease. / K.S. Barnes // Allergy Clin Immunol. 2000. 106. - P. 192-200.
41. Barnes P.J. Th2 cytokines and asthma: an introduction/P.J. Barnes // Respir Res.-2001.-V.2-P.64-65.
42. Barnes, P.J. The cytoKine network in asthma and chronic obstructive pulmonary diseases. / P.J. Barnes// J. Clin. Invest. 2008.- № 118 (11). - P. 35463556.
43. Barnes, PJ. Cytocine modulators as novel therapies for asthma. /P.J. Barnes//Annu Rev Pharmacol Toxicol.-2002.-№ 42. C.81-98..
44. Beasley, R. The Global Burden of Asthma Report, Global Initiative for Asthma (GINA). Available from http: // www. Ginasthma:org. 2004.
45. Beghe, B. Polymorphisms in the interleukin-4 and interleukin-4 receptor alpha chain genes confer susceptibility to asthma and atopy in a Caucasian population/B.Beghe, S. Barton, S.Rorke et al. // Clin Exp Allergy. 2003. - V.33. -P.l 111-1117.
46. Bidwell, J. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases / J. Bidwell, L. Keen, G. Gallageher et al. // Genes Immun. 1999 - Vol. 1. -P. 3-19.
47. Blaser, K.Interleukin-10, T regulatory cells and specific allergy treatment/ K.Blaser, C.A.Akdis // Clin. Exp. Allergy. 2004. - V.34 - P.328-331.
48. Burrows, B. Association of asthma' with serum Ig E leves and skin-test reactivity to allergens/ B. Burrows, F.D. Martinez, M.Halonen et al.// <• N. Engl.J.Med.- 1989. V.320. - P.271.
49. Busse, W.W. Effects of growth and development on lung function. Models for study of childhood asthma / W.W. Busse, S.P.Banks-Schlegel, G.L.Larsen// Am. J. Respir.Acrit. Care Med.- 1997. Vol. 156(1). - P. 314-319.
50. Cai, G. IL-10 enhances NK cell proliferation, cytotoxicity and production of IFN- gamma when combined with IL-18/ G.Cai, R.A.Kastelein, C.A.Hunter // Eur. J. Immunol.- 1999. V.29- P.2658-2665.
51. Castro-Giner, F. Joint effect of obesity TNF A variability on asthma: two international cohort studies / F. Castro-Giner, M. Kogevinas, M. Imboden et al. // Eur Respir J. 2009. -№ 5.
52. Chang, C.C., Tolerization of dendritic cells by T(S) cells: thecrucial role of inhibitory receptors ILT3 and ILT4 / C.C. Chang, R.Ciubotariu, J.S. Manavalan et al/ // Nat. Immunol.- 2002. V.3- 237-243.
53. Chatterjee R., Batra J., Kumar A., Mabalirajan U., Nahid S., Niphadkar P.V., Ghosh B. Interleukin-10 promoter polymorphisms and atopic asthma in North Indians // Clin Exp Allergy. 2005. - V.35 - P.914-919.
54. Chiang,C.H. Association between the IL-4 promoter polymorphisms and asthma or severity of hyperresponsiveness in Taiwanese / C.H. Chiang, Y.C. Tang, M.Y. Lin et al.// Respirology. 2007 Jan. - 12(1) - P. 42-8
55. Chilton, P.M. Regulation of the expression of the soluble and membrane forms of the murine IL-4 receptor / P.M. Chilton, R.Fernandez-Botran // Cell Immunol. 1997. -V. 180.-P. 104-15.
56. Choi, E.H. Association between chronic disseminated candidiasis in adult acute leukemia and common IL4 promoter haplotypes / E.H. Choi, C.B.Foster, J.G.Taylor et al. // Infect Dis. 2003. -V.187. - P.l 153-1156.
57. Choi, E.H. A common haplotype of interleukin-4 gene IL4 is associated with severe respiratory syncytial virus disease in Korean children / E.H. Choi, H.J. Lee H., T.Yoo et al.//Infect Dis.-2002. V.186.- P.1207-1211.
58. Chomarat, P. An update on interleukin-4 and its receptor / P.Chomarat, J.Banchereau // Eur Cytokine Netw. 1997. - V. 8. - P. 333-44.
59. Chung, K.F. Cytokines and asthma / K.F.Chung, P.J.Branes // Thorax . -1999. V.54 - P.825-57.
60. Colloff, M. J. Dust-mite control and mechanical ventrilation: when the climate is right / M. Colloff// Clinical and Experimental Allergy. 1994. - Vol.24-P.94-96.
61. Cookson, W.O.C.M. Anew gene for asthma: would you ADAM and Eve it? / W.O.C.M Cookson // Trends Genet. 2003. - V. 19. - P. 169-172.
62. Cui, T. Polymorphisms of IL-4, IL-4R alpha, and AICDA genes in adult allergic asthma / T.Cui, L.Wang, J.Wu et al. // Huazhong Univ Sei Technolog Med Sei.-2003.- V.23. P.134-137.
63. Cui, T. Polymorphisms in the IL-4 and IL-4R alpha. genes and allergic asthma / T.Cui, J.Wu., S.Pan et al. // Clin Chem Lab Med. 2003. - V.41. - P.888-892.
64. Defrance, T. Human recombinant interleukin 4 induces Fc epsilon receptors (CD23) on normal human B lymphocytes / T.Defrance, J.P. Aubry, F.Rousset et al. // J Exp Med. 1987. - V. 165. - P. 1459-67.
65. Defrance, T. B cell growth-promoting activity of recombinant human interleukin 4 / T.Defrance, B.Vanbervlie, J.P.Aubry et al. // J Immunol. 1987. - V. 139.-P. 1135-41.
66. Defrance, T. Interleukin 10 and transforming growth factor beta cooperate to induce anti-CD40-activated naive human B cells to secrete immunoglobulin A / T.Defrance, B.Vanbervliet, F.Briere et al. // Exp. Med. 1992. - V.175 - P.671-682.
67. Dieckmann, D. Activated CD4+CD25+ T cells suppress antigen-specific CD4+ and CD8+ T cells but induce a suppressive phenotype only in CD4+ T cells / D. Dieckmann, H.Plottner, S.Dotterweich et al. // Immunology. 2005. - V.115 -P.305- 314.
68. Deniz, G. Human naturel cell subsets cytokine pattern and IgE regulation / G.Deniz, M. Akdiss, K.Blaser // Allergy 1999. - Vol. 54 (supp. 57).-P. 840-851.
69. Doucet, C. IL-4 and IL-13 specifically increase adhesion molecule and inflammatory cytokine expression in human lung fibroblasts / C. Doucet, D.Brouty-Boye, C. Pottin-Clemenceau et al. // Int Immunol. 1998. -V. 10.- P. 1421-33.
70. Elliott, K. The -590C/T and -34C/T interleukin-4 promoter polymorphisms are not associated with atopic eczema in childhood / K. Elliott, E.Fitzpatrick, D.Hill et al. // Allergy Clin Immunol. 2001.- V.108.- P.285-287.
71. Engel, P. The SAP and SLAM families in immune responses and X-linked lymphoproliferative disease / P.Engel, M.J.Eck, C.Terhorst // Nat. Rev. Immunol. -2003.- V.3- P.813-821.
72. ETAC. Early Treatment of the Atopic Child. The complete results. Brussel: The USB Institute of Allergy- 2001.
73. Falconer, D.S. The inheritance of liability to certain diseases, estimated from the incidence among relatives./ D.S. Falconer // Ann. Hum. Genet.- 1965.-Vol. 29.-P. 51-76.
74. Farrar, J.J. Biochemical and physicochemical characterization of mouse B cell growth factor: a lymphokine distinct from interleukin 2 / J.J.Farrar, M.Howard, J. Fuller-Farrar et al. // J Immunol. 1983. - V. 131. - P. 1838-42.
75. Fiorentino, D.F. Two types of mouse T helper cell. IV. Th2 clones secrete a factor that inhibits cytokine production by Thl clones / D.F. Fiorentino, M.W.Bond, T.R.Mosmann // Exp. Med. 1989. -V.170. - P.2081-2095.
76. Freidin, M.B. Polymorphism of interleukins and interleukin receptor genes: population distribution and association with atopic bronchial asthma / M.B. Freidin, V.P.Puzyrev, L.M.Ogorodovaet al. // Genetika.- 2002. V.38. - P. 1710-1718.
77. Fukai, K. Proximal promoter polymorphisms of the interleukin-4 receptor alpha are associated with psoriasis in Japan: inverse association* pattern compared with atopic dermatitis/ K.Fukai, N.Hosomi, N.Oiso et al.// Dermatol Sci. 2004. -V.35. -P.78-80.
78. Galizzi, J.P. Molecular cloning of a cDNA encoding the human interleukin 4 receptor / J.P. Galizzi, C.E.Zuber, N.Harada et al.// Int Immunol. -1990. -V. 2. -P. 669-75.
79. Gervaziev, Y.V. Allelic Polymorphisms in the interleukin-4 promoter regions and their association with bronchial asthma among the Russian Population / Y.V.Gervaziev, V.A.Kaznacheev, V.B.Gervazieva // Int Arch Allergy Immunol. -2006.-V. 141.-P.257-266.
80. Global Initiative for Asthma. Global Strategy for Asthma Management and Prevention. National Institutes of Healt. (Revised 2006). No. 02-3659. Bethesda, MD.
81. Glare, E.M. Asthmatic airway biopsy specimens are more likely to express the IL-4 alternative splice variant IL-4delta2 / E.M. Glare, M.Divjak, J.M.Rolland et al.// J Allergy Clin Immunol. 1999. - V. 104. -P. 978-82.
82. Gleich, G.J. The eosinophil leukocyte: structure and function / G.J. Gleich, C. R. Adolphson // Adv. Immunol. 1996. - Vol. 39. - P.177-253.
83. Go, N.F. Interleukin 10, a novel B cell stimulatory factor: unresponsiveness of X chromosome-linked immunodeficiency B cells / N.F.Go, B.E. Castle B, R.Barrett et al.// Exp. Med. 1990. - Vol.172- P.1625-1631.
84. Gonzales, J.R. Interleukin-4 gene polymorphisms in Japanese and Caucasian patients with aggressive periodontitis / J.R. Gonzales, T.Kobayashi, J.Michel et al.// Clin Periodontol. 2004. - Vol.31. - P.384-389.
85. Haig, D. M. Immunity and counter-immunity during infection with the parapoxvirus orf virus / D.M.Haig, C.J.McInnes // Virus Res. 2002. -Vol.88. -P.3-16.
86. He, J.Q. Genetic variant sof the IL13 and IL4 genes and atopic diseases in at-risk children / J.Q. He, M. Chan-Yeung, A.B. Becker et al. // Genes Immun. -2003. Vol. 4. - P. 385-389.
87. Hershey, G.K. The association of atopy withagain-of-function mutation in the a subunit of the interleukin-4 receptor / G.K. Hershey, M.F. Friedrich, L.A. Esswein// New Eng. J. Med. 1997. - Vol. 337. - P. 1720-1725.
88. Hijazi, Z. Interleukin-4 gene promoter polymorphism C590T. and asthma in Kuwaiti Arabs / Z. Hijazi, M.Z.Haider // Int Arch Allergy Immunol. 2003. -Vol.122. -P.190-194.
89. Holgate, S.T. Genetic and environmenttal interaction in allergy and asthma. / S.T. Holgate. // Allergy Clin Immunol. 1999. - № 104. - P. 1139-46.
90. Holgate, S.T. The epidemic of allergy and asthma. / S.T. Holgate.// Nature. 1999. - № 402. - P. 2-4.
91. Holloway, J.W. The genetic basis of atopic asthma. / J.W. Holloway, B. Beghe, S.T. Holgate // Clin Exp Allergy. 1999. - №29. - P. 1023-32.
92. Howard, M. Identification of a T cell-derived b cell growth factor distinct from interleukin 2 / M.Howard, J.Farrar, M.Hilfiker et al. // J Exp Med. -1982.-Vol. 155.-P. 914-23.
93. Huang J.L. Lowered IL-4-producing T cells and decreased IL-4 secretion in peripheral blood from subjects with juvenile rheumatoid arthritis / J.L. Huang, M.L. Kuo, I.J. Hung, C.J.Wu et al.// Chang Gung Med J. 2001. -Vol. 24. -P. 77-83.
94. Imai, Y. Antiproliferative and differentiative effects of recombinant interleukin-4 on a granulocyte colony-stimulating factor-dependent myeloblastic leukemic cell line / Y. Imai, N.Nara, S.Tohda et al.// Blood. -1991. -Vol. 78. -P. 471-8.
95. Jang, A.S. Bcl-2 expression in sputum eosinophils in patients acute asthma /A.S. Jang, I.S. Choi, S. Lee et al. //Thorax. 2000. - Vol 16, № 5. - P. 370 -374.
96. Jung, M. Expression profiling of IL-10-regulated genes in human monocytes and peripheral blood mononuclear cells from psoriatic patients during IL-10 therapy/ M.Jung, R. Sabat, J.Kratzschmar et al. // Eur. J. Immunol. 2004. -Vol.34.-P.481^93.
97. Kabesch, M. A complete screening of the IL4 gene: novel polymorphisms and their association with asthma and IgE in childhood / M.Kabesch, I.Tzotcheva, D.Carr D. Et al. // Allergy Clin Immunol. 2003. - Vol.112. - P.893-898.
98. Kang-Hsi, W. Interleukin 4, interleukin 6 and interleukin 10 polymorphisms in children with acute and chronic immune thrombocytopenic purpura / W. Kang-Hsi, P.Ching-Tien, L. Tsai-Chung et al.// Br J Haematol. 2005. - Vol.128. - P.849-852.
99. Karjalainen, J. Interleukin-10 gene promoter region polymorphism is associated with eosinophil count and circulating Immunoglobulin E in adult asthma / J.Karjalainen, J.Hulkkonen, M.M.Nieminen et al.// Clin. exp. Allergy. 2003. -Vol.33 - P.78-83.
100. Kips, J.C. Cytokines in asthma / J.C. Kips // Eur Respir J. 2001. -Vol.18. - P.24-33.
101. Kotenko, S.V. Identifi cation and functional characterization of a second chain of the interleukin-10 receptor complex / S.M. Kotenko, C.D.Krause, L.S.Izotova et al. // EMBO J. 1997. - Vol.16 - P.5894-5903.
102. Kube, D., Platzer C., von Knethen A. Isolation of the human interleukin 10 promoter. Characterization of the promoter activity in Burkitt's lymphoma cell lines // Cytokine.- 1995. Vol.7- P. 1-7.
103. Kuhn, R. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis / R.Kuhn, J.Lohler,D. Rennick et al.// Cell. 1993. - Vol.75 - P.263-274.
104. Lai, K.C. Association of genetic polymorphisms of MK, IL-4, pl6, p21, p53 genes and human gastric cancer in Taiwan / K.C. Lai, W.C.Chen, L.B. Jeng et al.// Eur J Surg Oncol. 2005. - Vol.31. - P. 1135-1140.
105. Lambrecht, B.N. The Immunological Basis of Asthma / B.N. Lambrecht, H.C. Hoogsteeden, Z. Diamant // Lung Biology in Health and Disease. 2003. - Vol.174. p. 14.
106. Larcen, M. The role of T lymphocytes in the patogénesis of asthma. / M. Larcen, D.S. Robinson, A.B.Kay// J Allergy Clin Immunol. 2003. -111(3).-P. 450-63.
107. Lazarus, M. Genetic variation in the interleukin 10 gene promoter and systemic lupus erythematosus/ M.Lazarus, A.H.Hajeer, D.Turner // J Rheumatol . -1997. Vol.2. - P.2314-2317.
108. Lee, S.G. Gene-gene interaction between interleukin-4 and interleukin-4 receptor alpha in Korean children with asthma / S.C.Lee, B.C. Kim, J.H. Kim et al.// Clin Exp Allergy. 2004. - Vol.34. - P.1202-1208.
109. Liu, Y. Expression cloning and characterization of a human IL-10 receptor /Y. Liu., S.H. Wei, A.S.Ho et al.// Immunol. 1994. - Vol.152 -P.1821-1829.
110. Lowe, P.R. A novel PCR-RFLP assay for the detection of the single nucleotide polymorphism at position -1082 in the human IL-10 gene promoter / P.R.1.we, H.F. Galley // European Journal of Immunogenetics. 2001. -Vol.28. -P.563.
111. MacNeil, I.A. IL-10, a novel growth cofactor for mature and immature T cells / I.A. MacNeil, T. Suda, K.W. Moore et al.// Immunol. 1990. - Vol.145.1. P.4167^173.
112. Magnan, A.O. Assessment of the Thl/ Th2 paradigm in whole blood in atopy and asthma. Increased IFN-gamma-producing CD8(1) T cells in asthma / A.O. Magnan, L.G. Mely, C.A. Camilla // Am J Respir Crit Care Med. 2000. - Vol. 161-P.790-796.
113. Majno, G. Apoptosis, oncosis, and necrosis: an overview of cell death / G. Majno, I. Joris // Am. J. Pathol. 1995. - №146. - P. 3 - 15.
114. Manavalan, J.S. High expression of ILT3 and ILT4 is a general feature of tolerogenic dendritic cells / J.S. Manavalan, P.C. Rossi, G.Vlad et al.// Transpl. Immunol. 2003. - Vol.1. - P.245-258.
115. Masoli, M. The global burden of asthma: executive summary of the GIN ADissemination Committee report /M. Masoli, D. Fabian, S. Holt et al.// Allergy. -2004. -№59(5). -P. 447.
116. Masutani, K. Impact of interferon-gamma and interleukin-4 gene polymorphisms on development and progression of IgA nephropathy in Japanese patients / K. Masutani, K. Miyak, H.Nakashima et al.// Am J Kidney Dis. 2003. -Vol.41 -P. 371-379
117. Mattner, F. The role of IL-12 and IL-4 in Leishmania major infection / F. Mattner, G.Alber, J. Magram et al.// Chem Immunol. 1997. - Vol. 68. - P. 86-109.
118. Maurer, D. The high affinity IgE receptor (FcsRI) mediates IgE-dependent allergen presentation / D. Maurer, C. Ebner, B. Reininger et al. // J. Immunol. 1995. - Vol. 154. - P. 6285-6290.
119. McFadden, G. Host-related immunomodulators encoded by poxviruses and herpesviruses / G. McFadden, P.M. Murphy // Curr. Opin. Microbiol. 2000. -Vol.3.-P.371-378.
120. Michel, G. l,25-(OH)2-vitamin D3 and calcipotriol induce IL-10 receptor gene expression in human epidermal cells / G. Michel, A. Gailis et al.// Inflamm Res. 1997. - Vol.46. - P.32-34.
121. Mitchell, L.C. Promotion of human T lymphocyte proliferation by IL-4 / L.C. Mitchell, L.S. Davis, P.E. Lipsky // J Immunol. 1989. -Vol. 142. - P. 154857.
122. Mochizuki M. IL-4 induces eotaxin: a possible mechanism of selective eosinophil recruitment in helminth infection and atopy / M. Mochizuki, J. Bartels, A.I. Mallet et al. // J Immunol. 1998. - Vol. 160. - P. 60-8.
123. Moore, K.W. Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor /K.W.Moore, R. de Waal Malefyt, R.L. Coffman et al.// Rev Immunol. 2001. - Vol.19. - P.683-765.
124. Mulder, G.J. Toxicology of industrial compounds. T.-F. Ltd. UK. -1995.- P.37-44.
125. Noguchi, E. Association of asthma and the interleukin-4 promoter gene in Japanese / E. Noguchi, M. Shibasaki, T.Arinami et al. //Clin Exp Allergy . 1998. -V.28. - P.449-443.
126. Noguchi, M. Characterization of the human interleukin-2 receptor gamma chain gene / M.Noguchi, S.Adelstein, X.Cao et al. // J Biol Chem. -1993. -V. 268. -P. 13601-8.
127. Novae, N. Allergy and nonallergy forms of atopic diseases./ N. Novae, T. Bieber// J. Allergy Clin. Immunol. 2003. - 112. - P. 252-262.
128. Ober, C. Perspectives on the past decade of asthma genetics. / C.
129. Ober // J Allergy Clin Immunol. 2005.- Vol.l 16(2). - P. 274-8.
130. Oh, J.W. CD4 T-helper cells engineered to produce IL-10 prevent allergen-induced airway hyperreactivity and inflammation / J.W. Oh, C.M. Seroogy , E.H. Meyer // Allergy Clin Immunol. 2002. -Vol.l 10. - P.460^168.
131. Or, R. IL-4 and IL-2 promote human T-cell proliferation through symmetrical but independent pathways / R. Or, H. Renz, N. Terada et al // Clin Immunol Immunopathol. 1992. -Vol. 64. - P. 210-7.
132. Paul, W.E. Interleukin-4: a prototypic immunoregulatory lymphokine / W.E. Paul // Blood. 1991. - Vol. 77. - P. 1859-70.
133. Pearce, N. How muchasthma is really attributable to atopy ? / N. Pearce, J. Pekkanen, R. Beasley. // Thorax. 1999. - № 54. - P. 268-72.
134. Platzer, C. Catecholamines trigger IL-10 release in acute systemic stress reaction by direct stimulation of its promoter/enhancer activity in monocytic cells / C. Platzer, W.Docke, H.Volk et al.// Neuroimmunol. 2000. - Vol.105. - P.31-38.
135. Pop, S.M. Single cell analisis shows decreasing FoxP3 and TGFbetal coexpressing CD4+CD25+ regulatory T cells during autoimmune diabetes/ S.M. Pop, C.P. Wong, D.A.Cutton // Exp. Med. 2005. - Vol.201. - P. 1333-1346.
136. Punnonen, J. IL-10 and viral IL-10 prevent IL-4-induced IgE synthesis by inhibiting the accessory cell function of monocytes / J.Punnonen, R. de Waal Malefyt, P.van Vlasselaer et al. // Immunol. 1993. - Vol.151. - P.1280-1289.
137. Pure, E. T cell-derived B cell growth and differentiation factors. Dichotomy between the responsiveness of B cells from adult and neonatal mice / E.Pure, P.C. Isakson, J.W. Kappler et al.// J Exp Med. 1983. - Vol. 157. - P. 60012.
138. Raymond, P. The expanded family of class II cytokines that share the ILIO receptor-2 (IL-10R2) chain / P.Raymond, F.Donnelly, S.Sheikh et al.// J of Leuk Biol. 2004. - Vol.76.
139. Riese, U. Catecholamines induce IL-10 release in patients suffering from acute myocardial infarction by transactivating its promoter in monocytic but not in T-cells / U. Riese, S. Brenner, W.D. Docke et al.// Mol Cell Biochem. 2000. -Vol.212.-P.45-50.
140. Rioux, J.D./ Familial eosinophillia maps to the cytokine gene cluster on human chromosomal region 5q31-q33 / J.D. Rioux , V.A. Stone, M.j.Daly // Am. J. Hum. Genet. 1998. -Vol. 63. - P. 1086-1094.
141. Robinson, D.S. The Thl and Th2 concept in atopic allergic disease / D.S. Robinson //Chem. Immunol. 2000.-Vol.78. - P.50-61.
142. Rousset, F. Interleukin 10 is a potent growth and differentiation factor for activated human B lymphocytes / F. Rousset, E. Garcia, T.Defrance et al. // Proc Natl Acad Sei USA.- 1992. -Vol.89 P. 1890-1893.
143. Russell, S.M. Inlerleukin-2 receptor gamma chain: a functional component of the interleukin-4 receptor / S.M. Russell, A.D. Keegan, N.Harada et al.// Science. -1993. -Vol. 262. P. 1880-3.
144. Ryan, D.H. Cytokine regulation of early human lymphopoiesis / D.H. Ryan, B.L.Nuccie, I.Ritterman et al.// J Immunol. 1994. - Vol. 152. - P. 5250-8.
145. Sakaguchi, S. Naturally arising CD4+ regulatory t cells for immunologic self-tolerance and negative control of immune responses/ S. Sakaguchi // Rev. Immunol. 2004. - Vol.22. - P.531-562.
146. Sakaguchi, S. Foxp3+CD25+CD4+ natural regulatory T cells in dominant self-tolerance and autoimmune disease/ S. Sakaguchi, M. Ono, R. Setoguchi et al. // Rev. Immunol. 2006. - Vol.212. - P.8-27.
147. Sandford, A.J. Polymorphisms in the IL4, IL4RA and FCERIB genes and asthma severity / A.J. Sandford, T. Chagani, S. Zhu // J. Allergy Clin. Immunol.- 2000. Vol. 106. - P. 135-140.
148. Schroder, M. Different Modes of IL-10 and TGF-D to inhibit cytokinedependent IFN-gamma production: consequences for reversal of lipopolysaccharide desensitization / M.Schroder, C. Meisel, K. Buhl et al.// Immunol. 2003. - V.170 - P.5260-5267.
149. Schwarz, M.J. IL-2 and IL-4 polymorphisms as candidate genes in schizophrenia / M.J. Schwarz, H. Kronig, M.Riedel et al. // Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci. 2005. - Vol.256. - P.72-76.
150. Schmidt, D. Serum IgE leves predict Human airway reactivity in vitro/ D. Schmidt, N. Watson, E. Ruhlmann et al.// Clinical and Experimental Allergy. -2000.- Vol.30. P. 233-241.
151. Seah, G.T. Interleukin-4 and its alternatively spliced variant (IL-4delta2) in patients with atopic asthma / G.T. Seah, P.S. Gao, J.M. Hopkin et al. // Am J Respir Crit Care Med. 2001. - Vol. 164. - P. 1016-8.
152. Seewaldt, S. Interleukin-10 is crucial for maintenance but not for developmental induction of peripheral T cell tolerance / S. Seewaldt, J. Alferink, I. Forster // Eur. J. Immunol. 2002. - Vol.32 - P.3607-3616.
153. Sennikov, S.V. Quantitative analysis of human immunoregulatory cytokines by electrochemiluminescence method / S.V. Sennikov, S.V. Krysov, T.V.Injelevskaya et al. // J Immunol Methods. 2003. - Vol.275. - N.l-2. - P. 81-8.
154. Shanafelt, A.B. An immune cell-selective interleukin 4 agonist / A.B. Shanafelt, C.P. Forte, J.J. Kasper et al. // Proc Natl Acad Sci USA.- 1998. Vol. 95. - P. 9454-8.
155. Shapira, S.K. Molecular analysis of the induction of immunoglobulin E synthesis in human B cells by interleukin 4 and engagement of CD40 antigen / S.K. Shapira, D. Vercelli, H.H. Jabara et al.// J Exp Med. 1992. - Vol. 175. - P. 289-92.
156. Shi, H.Z. Regulatory CD4+CD25+ T lymphocytes in peripheral blood from patients with atoric asthma /H.Z. Shi, S.Li, Z.F.Xie et al.//Clin. Immunol-2004.-Vol. 113,- P.172-178.
157. Sieling, P.A. Immunosuppressive roles for IL-10 and IL-4 in human infection. In vitro modulation of T cell responses in leprosy / P.A. Sieling, J.S.Abrams, M.Yamamura et al. // J Immunol. 1993. - Vol. 150. - P. 5501-10.
158. Spits,H. Functional characterization of human IL-10 / H. Spits, R. de Waal Malefyt // Int Arch Allergy Immunol. 1992. - Vol.99. - P.8-15.
159. Steinke, J.W. Interleukin-4: its role in the pathogenesis of asthma, and targeting it for asthma treatment with interleukin-4 reseptor antagonists / J.W. Steinke, L. Borish // Respir. Res. 2001. - Vol.21.- P.66-70.
160. Suciu-Foca, N. Generation and function of antigen-specific suppressor and regulatory T cells / N.Suciu-Foca, J.S. Manavalan, R.Cortesini // Transpl. Immunol.- 2003. Vol.11- P.235-244.
161. Suzuki, I. Association between a C-33T polymorphism in the IL-4 promoter region and total serum IgE leves. / I. Suzuki, N. Hizawa, Y. Kawakami//Clin Exp Allergy. 2000. - №12. - P. 1746-9.
162. Tan, W.S. Viruses in asthma exacerbations./W.S. Tan // Curr Opin Pulm Med. 2005. - Vol.11(1). - 21-26.
163. Tay, K.I. Asthma among elderly people/ K.I. Tay// Int. Immunorehabil-1997.-Vol.7 -P.22-24.
164. Thompson-Snipes, L. Interleukin 10: a novel stimulatory factor for mast cells and their progenitors / L.Thompson-Snipes, V. Dhar, M.W.Bond et al.// Exp. Med. 1991. -Vol.173. - P.507-510.
165. Trajkov, D. Association of cytokine gene polymorphisms with bronchial asthma in macedonians. / D. Trajkov J. M. Stojkovikj, T. Arsov et al. // Iran J Allergy Asthma Immunol. 2008. - № 7(3). - P. 143-56.
166. Trejaut, J.A. Cytokine gene polymorphisms in Taiwan / J.A. Trejaut, Z.U. Tsai, H.L. Lee et al. // Tissue Antigens. 2004. - Vol.64. - P.492-499.
167. Tsai, M.H. Interleukin-4 gene, but not the interleukin-1 beta gene polymorphism, is associated with oral cancer / M.H.Tsai, W.C. Chen, C.H.Tsai et al.// Clin Lab Anal. 2005. - Vol.19. - P.93-98.
168. Turner, D.M. An investigation of polymorphism in the interleukin-10 gene promoter / D.M.Turner, D.M. Williams, D.Sankaran et al. // Eur J Immunogenet. -1997.-Vol.24.-P. 1-8.
169. Uboldi de Capei, M.U. Genotyping for cytokine polymorphisms: allele frequencies in the Italian population / M.U.Uboldi de Capei, E. Dametto, M.E. Fasano etal. // Eur J Immunogenet. 2003. - Vol.30. -P.5-10.
170. Waal Malefyt, R. Direct effects of IL-10 on subsets of human CD4+ T cell clones and resting T cells. Specific inhibition of IL-2 production and proliferation / R.Waal Malefyt, H.Yssel, J.E.de Vries // Immunol. 1993. - Vol.150 - P.4754-4765.
171. Walker, C. Allergic and nonallergic asthmatics have distinct patterns of T-cell activation and cytokine production* in periferal blood and bronchoalveolar lavage / C. Walker, E. Bode, L. Boer // Am. Tev. Respir. Dis. 1992. - Vol. 146. - P. 109115.
172. Walter, M.R. Crystal structure of recombinant human interleukin-4 / M.R.Walter, W.J.Cook, B.G.Zhao et al.// J Biol Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 20371-6.
173. Wan, S. Hepatic release of interleukin-10 during cardiopulmonary bypass in steroid-pretreated patients / S.Wan, J.L. LeClerc, D.Schmartz et al. //Am Heart J. -1997. Vol.133. - P.335-339.
174. Weiner, H.L. Induction and mechanism of transforming growth factor-P-secreting Th3 regulatory cells / H.L. Weiner // Immunol. Rev. 2001. -Vol.182.-P.207-214.
175. Wiesch, D.G. Genetics of asthma. / D.G. Wiesch, D.A. Meyers, E.R. Bleecker // Allergy Clin Immunol. 1999.-Vol. 104.- P. 895-901.
176. Weiss, S.T. Epidemiology and natural history. In: Bronchical Asthma Mechanisms and Therapeutics, 3d ed.//S.T. Weiss, M.Stein (Eds). Litlle, Brown-Boston, 1993.-P.15
177. Weiss, S.T. Gender differences in asthma/ S.T. Weiss, D.R. Gold// Pediatr. Pulmonol.-1995 .-Vol. 19.-P. 153.
178. Wenzel, S. Mechanisms of severe asthma /S. Wenzel//Clin. Exp. Allergy.-2003,- Vol.33(12). P. 1622-28.
179. Wlodaver, A. Crystal structure of human recombinant interleukin-4 at 2.25 A resolution / A.Wlodaver, A.Pavlovsky, A.Gustchina // FEBS Lett. -1992. -Vol. 309.-P. 59-64.
180. Woiciechowsky, C. Sympathetic activation triggers systemic interleukin-10 release in immunodepression induced by brain injury / C.Woiciechowsky, K.Asadullah, D.Nestler et al.// Nat Med. 1998. - Vol.4. - P.808-813.
181. Yang, J. Polymorphisms of IL-13 and IL-4-IL-13-SNPs in patients with penicillin allergies /J.Yang, H.L. Qiao, Z.M. Dong // Eur J Clin Pharmacol. 2005. - Vol.61.-P.803-809.
182. Yea, S.S. Interleukin-4 C-590T polymorphism is associated with protection against nasal polyps in a Korean population / S.S.Yea, Y.I. Yang, S.K.Park et al.// Am J Rhinol. 2006. - Vol.20. - P.550-553.
183. Zdanov, A. Crystal structure of interleukin-10 reveals the functional dimer with an unexpected topological similarity to interferon gamma Structure/ A.Zdanov, C. Schalk-Hihi, A.Gustchina et al.// 1995. - Vol.3. - P.591-601.
184. Zhang, J. Correlation beetween polymorphism of IL-4 and IL-10 gene promoter and childhood asthma and their impact upon cytokine expression / J. Zhang, H. Chen, L.Hu et al // Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2002. -№ 2. -P. 114-118.
185. Zimmerman, N. Chemokines in asthma: cooperative interaction chemokines and IL-13 / N. Zimmerman, G.K. Hershey, P.S. Foster et al.// J. Allergy. Clin. Immunol. 2003. - №11 l(2).-P.227-242.