Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Сравнительная оценка биотехнологических процессов стерилизации и консервации, используемых в производстве холерной бивалентной химической таблетированной вакцины

РГ6 ол

- 8 ОКТ 1996

На прав г:; руїкшкси

КЛОКСЗА ОЛЬГА г.спкзгнл

УЖК 616.932:615.371/.372+GÍ6-G93/-03S

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ШЮТЕХНОЛОГИЧЕСКЖ ПРОЦЕССОВ СТЕРИЛИЗАЦИИ И КОНСЕРВАЦИИ, ШЮЛЬЗУЕИЖ В ПРОИЗВОДСТВЕ ХШЗЕРНРЙ БКВАЛЕНТКОЛ ХКг.СІЧЕСКСЯ ТАВЛЕТИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ '

14.00.36 - аллергология и имыутгогкя

Автореферат диссертации на соискание ученой степени ікетидата медицдасип наук

САРАТОВ - .1986;

РёЭота шпоБнена в паучпэ-хгсслехаваз-егьс;:си пратаїотуіЕс:; институте "йжроЗ".

Научный рукогодетегь : j:o:nop кэдпхннскгз: паук:, старпсп сауч-ный сотрудник Елисеев D.D.

Ознцвдсышэ оплозееты: ксапор издкцпнаах наук, стг?=

саучкшї согругшк Bezos Л.Г.; кагзздаз игдкгкксшз; cayu, ста:

■ паучпы* согруцнп: íjsas: Г.E.

Редуггя срга-пгзсцлг : ьзігсгрг^агзі Ea-^o-is^es^siarbatrv. cparcKKyiKini шетгіггг:

Двторес-зраї разсзузп 192

Bourra состоііїсї: *'.Á. . ISS^Tг. га'загєланп:'.

диссертационного cor.eva К 074.SS.Oí пс пр’.геугаеаиэ учєнзі: сг-у-пекп ¡сакцщата «сдкцкаскж нам: пря Госс:і;сі^і Eavszo-irccrszcss-.-тєльсігзи пр0тії20ч\'ш;0^ ¡інстстуто “їійгрзЗ" ( 4.1С305, г. Сгргггс., ул. УШШСрСйТЭТСИаП, 45).

С дшссртадк-і ысхжо озіаїчалггьс: £ каучноі 0іДі.\рїє:е? егс-т.тгуга *\Міїкро5*\

i'Vieitiiil сократарі диссортащкніизго совста, доетор кгдицйасиві наук, егараай научный сотрудшк

Essssp^aim S..L.

- з -

• СЕЦАЯ ХАРАКТЕНЗЛПКА РАБОІН

Актуальность проблем. Прсдолдгзстаяся седакаа пандемия холері еє ™-ее? тенденции х затухання (Оннценко Г.Г. с соавт., 1992, 1SQ3, 1994; МараігіЕііч A.C., Пнннгян А.О., 1992; Лсг.еов D.M. с со-ает., 1SS2).

Холера- язлзетса налболее тзгалнм инфекционный тоіїсїікозоїі. Полсг-енна в ыгфе по заболеваемости холерой признано критическим, гак как количество охваченных еэ стран (около сорока), массовость, Енссяаа летальность и быстрота распространения в настоящее время преЕкзэзт ямензие место в 1S71 г., во зрекп пика текущей Паазеї-Еїз.

В ідауорандума ЕПЗ (1990, 1991), основанием на работах и мнениях специалистов из 14 стран, было заявлено о необходимости со-верзентсвсваннн специфической профилактика холеры путей создания новых вакцинных препаратов для персрального применения.

Создание оральной холерной вакцины рассматривается ЕШ (1990

- 1993 гг.) з качестве одного пз ведущих направлений по соЕер-сенстзозащэ спеагфичесмзл профилактика этой особо опасной инфекции (Desxarchelier et al., 1989; Klents, 1991; ЛомоЗ Я. M. с со-

азт., 1S32; Марамовпч A.C., с соазт., 1S92; Снидзнко Г.Г. с со-азт., 1992) . '

На Есе?4 протяжная наготозлешя холерных вакцин технология ■я производства постсннно созерленствуетса (Адаиса А. К. с соазт., 197-1-1933; 3=асгрлдз9 L3.H. с соазт., 1975-1993; Svennerfcolm L.et al., 1033-19S9; Finkeistein R.A. et al., 1985-1990; Тихонов Н.Г. c ссав?.-, 1985-19Ш; Саирноза H.H.' с. соазт., 1SS0-1992; Hayuos A.B. с ссавг., 1SS9-19S3; Король В.В. С соазт., 1SS0-1992; Елпсе-es Ю.Э., 1994}. ’ • . -

Одним аз Basssfenx этапов сонерс-знстЕованля химической вал-гртя» является получение тгчуЕогсглческа активных антигенов или кстлексоз антигчннкх ДеТЭСНЙНЗЗГ- ' ‘

При этой прпнщпшазвко вахез как гьгбор аятигэна нз всего сг-ремного набора у того или иного зозбугнталя» так я использование обгенидсвых антигенов._Известно, что оснсванэ патогенные свойства холерного определи??: зкготокелн - холероген, которий

зызызаег хзезктеента ашняческув картину заболевания и спецнфп-чеошй компонент КЗЄТОЧНОЙ ПСНерХЕССТП - О-антиген НЛП ЭНДОТОКСИН вибрионов. ?rgig£rastä~ каруттгпгэ сбигших процессов ~ ызкроерганиз-

ма. Несомненно в развитии инфекционного процесса участвуют, хотя и не являются ведущими факторами, различные внеклеточные ферменты вибрионов, механизм повреддаюцего действия которых разнообразен (Уралева B.C., 1988). •

Тагам образом, празоыерньы является полсг.ение, что заболевание холерой обусловлено комплексом антигенных детерминант холерного вибриона, играющих определенную роль в обцей картине Солез-. ни, в связи с чем в полноценной специфической вакцине необходимо присутствие всех вышеперечисленных факторов.

Многие исследователи в последние годы ведут поиск еще неизвестных антигенных детерминант и протєктивньк антигенов (Смирнова

Н.И. с соазт., 1889;&апарндзе М.Н., 19S3; ' Yeliseyev Yu.Yu. et

al., 1994.). . •

’ Вместе с тем использование-новых антигенов и их комплексов при конструировании холерных ваїздін требует своевременной оценки и разработки новых методов определения ихтиологической перест-ройїш организма (Елисеев Ю.Ю. с соазт., 1993; Сумароков A.A. с соавт., 1993)'. ' _

В настоящее Бремя для производства оральной холерной вакцини используют .гипертоксигенный щта^-л Y.cholerae КМ-76, продуцирувздй 0-антиген Кнаба и токсин в 6-8 раз больпэ, чем природный птасдг V. choleras 569В (Смирнова Н.И. с соавт.. 1989; Дкапаридзе I-.i.H., Наумов A.B. с соавт., 19-94),. ■

Актуальность проблемы обусловлена ese и тем,. что серийное изготовление оральных холерных химических (молекулярных) вакцин имеет целый ряд весьма существенных особенностей в отличие от парентеральных противохолерных препаратов -и только начинает внедряться в практику отечественного • здравоохранения. Многие этапы технологии изготовления оральных холерных таблетировашшх вакщш нузкдеотся в доработке и глубоком детальном изучении (Елисеев Ю.Ю., 1994). .

Нель-.исследоващм. Провести сравнительную оценку биотехнологических процессов стерилизации и консервации, кспользуешх в . производстве холерной бивалентной химической таблетированной_вак-цины. . ' ’ . .

. Задачи исследования. .

1. Изучение стерилизующего эффекта фильтрационных свечей, кеыбран ’-'Владипор" различных типов и дробного прогревают текучій

плрсм, псполда/оіллх з про:::::;" далсрлсЗ хпнкчбс:»:) Сизалс-ит-ііо:ї тгЗлетлрслачдоч ваіадши.

2. ;'сс.гедслл.к”Э эдл îkv:ллхсти илподззлланпд в ¡сгчестле кед-:^р?ач':а :-;рт::о.’"л,гг'. пр" :'.2Т£':гз-.<-:!:"\ ::о.~х-ъ::о'\ тг^дотиг-овяк;:-'.? г"хд:лд!. ■

■ 3. 'Дддл:о-лілялісс-десраллппеедлд, . дїулссдслелдлгасд;

л. тср-длут ллліллз ллллдгг^дстдл" доллрлчд ллдлдн. V рл:;ллл; долсд: слорллллдлгдд :: ксксерпсиний.

ïij-’ili'--1 Прлдле'Д'ч ‘-г.од ¡гдеедллилл ‘'лллдлдатс:;

?;..;c¡r/- :.7доглдл: х •: ргл'лдг'-, длоллллд; л слдгдд лелерлел лл 'д'лдл.;-"~лплл <;Д'д длдлтдлд >\і '‘-лдл.лол д:ддл-д:и йдуллд лнглглнльлі ссстлд лл/лс .:ллсі лд w дл-ra. л ллу-1 злзпд: уссл-rç. л д:сїеср£лдсд техислегз:-

Дчдрлд; л:>, лрлд;л.л олл^зтлд ло'лрллд лл.л” л;н псзсазс.іГі ссзл-р?д’:сс'Гї. дллллле ‘'г.длл д-—гу. , л~лроопг.лзлзгд.Я (з тлетлд д/тсл-дл;ллдг'Д:л''л.л;лллд лллл л;л.л: лг.ллездзд). рпьрльд, д.гз -'лу^ -л; дд2дл'™3!ддлд ''лллл-л-'л л'ллі'ід : Ддлд прллігзлд ллгздл . ..л: . лл. елллл’. л • л л -■ л- л’л^гллет-: ■ лс.Д' до,‘л';л±:д; лл пллл-

* д- ' л ’* до сД'Гл-'дсдіЛ у: ■ л -лллль дгрлд. г, L д:.*Гсдллол, лдд/-

"U " ■ с . тл-л л ;д,, ■ - л1 і -'лл с дсд:л д і сддсглллл—: л-д, ;--г^дд : д "лдл'с • л .д. -, ддсЛ- лл’ ;і г'лд.лдлп.;::. ?ллл: л длд;-ло:;,

л дллдз’л . ллл' л ■ :лл:;і лзли :гпч"Л:Л^ >?.лс: .

л ' " ,.rr:z\.c д'Дс:д'''Д" до : д;. дрд :;v--v.4.

У. Гддад; лл_ гл лл.іл-ллллллгд л^ллл ■ л ^лр'л-. :! :'/■> лел-.р: .:д "

Я. м-_ ' л’длд ’V д Д’л'ллл'т ' . ілл:',,:~’і л ддол лдделлл ллл д д-.л.д-’ лл.. К Сі Г ■ Г і Тд ;д: . т„ ,.їе ., _

•і. Ссс;ллл;:;л л'улдо-'лсдул.сезг'л дслузл лглд лї "”лдллл.л-. д ' •% р:ллл''::::>’ллл:л;гс:ллл" !! Д7Г-С-' гл длчл'"’у хс'УЛ'чул '".'/гл:1.--

ГИСК им. Л. А.Тарасовича. i ' •

Впервые отработаны биотехнологические приемы кассового, получен:« вакцины с кспользовашкы оптимальной экспозиции и швшь-кой консервирующей лозы ыертиолата/ .

Апрооаііпл parkin. Материалы диссертации долоквни и обсуздеш ка ктогогой научной конференции ;щстктута "Микроб" (1994 год); на ыогслукдроднзм конгрессе по 1и.п,гунэроабил:тацки в Дхадхубэ (1СЭ4 год); на ¡¿кзедог'ствгкпой Hayuito-npsimrteciioft коцферешци "Акту-аяььш вопросы профялаотпки чуны и других квфекцвкгзлс заболеваний", посвяцанкой ЮЭ-гетко открытия возбудителя чуш (Ставрополь, 19Q5 год); на иа.учко-прс.чтлч'еской конференции "Эл;:де:.жэло-ггчесгде и іаішко-іп&г/іздзгхззсіяг аспекту ноо-Г'.'дактккн г:.;:кой-e:s: ЕНфокщкэшпа заСслеваллй" (Астрахань. 1СС5г.). ,

П^блілсзиля. По їзі:й диссергсЬки опубліковано 6 ¡ючлтнз::; р-> 00?. '

Обтзн и структура работы. ~;;ссертл:ц!Я состоят из гзздэлпл пяти глд", сод5р:.2іхч сбзор ллтературы, опкоанггэ !,:г.тер:'г.:.оз и методов, результатов ссЗстзеїлдж тдхпзлт ?сліі:й, здят::чс:;';л, еіподог. и бі:5лї:зграфкчес:-:ого указателя.

■ объо:! дпеззргзллл 1C 5 с-тратдц глл-ллзідлс::. Работа ;:рз-

гл.ітстрі,розана И т^зсіліалі « 2 р:!су:::со-г.Е:діт:-ограф:гас:ид”: у::а-затедъ содерллт 331 іззточдлл, из к;”; 113 г*уудэ:;,п::.

С о •• ,:і по."х:£ііД~, ;::-';;зг?'д:о ;;п гагл:¿у; .

1. дзилл.гз по сг.,.:-”'-Тгл5НЗ;7 пзучзл...; V.-.і ОД 32 ІХДСоРЗаХЛ: (цзрт>:златс2д к :.їр"-я-) к сюр;:г-:а?!з"» (иа^ірл-л. «робкая стзрз.г.га-ция паро”. с-“>тргг;-'01й-к.13 сззчп) с»«/зэгсноа хк-зак с;юй хоазр'-сл бивалентной тг^летлрозалной вакіггпі.

2. .Э::спор:;..;здтадвкая вагікпа, получошіал кэтодо:.! консерва-

ции, не вызавгат яз:,.оьзекй взугреяезе оргс:;оз кш»:п!х, безгрэвка в іштсгргільгсм тесте аутоангдте,лобразовлп:;л на волелтерзл п соот-ветсвует їрсбовашілх: Ь‘42-426 ВС-94 и РП-478-94 "Ваіщіша холер-

ная бивдлонїк^я химдчсскал третированная".

3. Использование консерванта в технолог:;:: приготовления ко-

лерной тайлзтдрозалной зшециа .значительно упрсдает процесс производства (экономия аппаратуры, материалов), у'.;зньхгэт трудовые и материальное затраты. ■

- 7 -

СОДЕРЖАНИЕ PAEQTlí

Материалы'« и е т о д н. В работе использованы 3 птаїсга Vibrio choleras choleras, язляюяиеся продуцентами антиге-Еоз холерной бивалентной химической вакцины (природный 569 В -серовара Инайа, М-41 - серовара Огава, КМ-76 - гипертоксигенный, серовара Инаба), птаммы Vibrio choleras cholerae (штамм 3122 -серовар Огава, птаїгм 879 - серовар Инаба), лтамм Vidrio cholerae oltor Р-15429, используемый для продукта! адгезшов. .

В опытах применялись сыворотки: диагностическая холерная "0"-сызосотка адсорбированная сухая для РА; антихолерогенная стандартная сыворотка (0С0); гипериммукныэ противоорганные кро-ліїчьи сыворотки для контроля специфической активности эритроци-тарный. диагностику« античеловеческий (ЭДАЧ).

Питательной средой для холерных птачмов-продуцентов 569 В и М-41 служи ферментативный казеиновый гидролизат с 200-350 мг% амяпного азота, 0,5% хлорида п 0,05% двухзамещенного фосфата натрій, pH 7,6. Для вырзгквания штамма ИЛ-76 использовали те ¡se среди, но q добавлением 20 ют/мл канаыицина. ■

. Получение антигенных фракций проводили по технологии производства и новым методом с применением мертиолатного консерванта.

В работе использовали биохимические методы: - определение

Зэлка по 0.Лоури (1951); _ _ ' '

' - количественное определение протеазы,■ фосфолипазы методом

(унптца; дополнительно методиками, разработанными Т.Н.Донской :iG78 ); . .■

* - опргделениэ- свободного формальдегида по методу M.Ja-

:cbs(1851); . • • ' .

- содержание углеводов- определяла по реггащя с фенолом я :орпсй кйслотсй ('Захарова И.Я., 1982 );•

- спектрсфотометрнчесиое определение суглмгркого ¡количества

укгеяковых ККС2009 по методу A.C. Спиршіа(і958); .. V

- определение глюксзамина по методу Элъссяа и Норгзяа в мо-

гфзкации- В. И. Гладьтава (1956); -

- для определения обеих липидов использовали б’-ютэс'т ’’Lache-

д." (ЧССР, Chemapol). _ . -

Тля характеристики препаратов' применяли гель-хроматографет з сбцегк^нятсй методике Д. .$райфэльдера (1980). .• . . -

Серологическую ситїпзпссть О-антигенов- Огаза а Инаба. спреде-.

ЛЯЛК В рйа'ЩІйі непрямой ГЄК£ГГ£ЗХЇІНЗЩПІ (РИГА), КЗДГССДЕффуЗИЗ Ї геле по 0. Оухтсрлоки (РИД).

Акхигепную активность апагоіссина характеризовали в едїсваих связившия (EC).

Прэсекгивнуа ¿кїіівкссїь препаратов определяли в тесте асіїз-ноЛ зацггты на белых шглах (Оми Д., Пішая ї.і., 1953).

Тоіссімлость препаратов характерлзовалп величиной LD50. раз-читаиной по методу Кербера (Ашазрка й.П., Воробьёв А. А., 1962).

Токсичсаіие свойства ваіанпш к ео снтїтєіюв били охарактеризован:» наряду с пршятши коптродлші In vivo, га;-10 новы;;:.! in vitro, предложенная: O.B. Громовой (1935).

В отихах по изучгнкз *г:гк5»;ру:од9го действия нропаратоз на аігез;аз холерна: вибрионов к Еритроцитам бш ггсізіонон погод З.П. Брнлиса с еоавт., (1ES5). ' ’ -

Патоиорёохсгическпе кзцспз:::ін ео внутренних органах лЕбсра-херних kkbotkk, іаедтаїзіфованЕах зі:спер;ііізнтальной важкаой, би-~и охараехсризованы по тосту Ю.1.!. їарч;л:::::зго (1971) к по "Wotc-дичесгсы рекоьЕОПдашаш по нэрфолопяоской оценке бэзвродпосги орс^ьних холеркык ва;-таі" (1981).

ДЛЯ ДОПОШШТОЛВІЮЙ оц-знхи безвредности холерной 3KCnepi2¿;-K-тадьной вгкшлц: с.;.:л кгпагьзован ¡гнтегр:иіній тест аутознисгаобра-гованпя, предлргг.с-гг.дв'і Л.Н. Егаияо’1 (1983). ‘ ' .

Статкстімесісув cü^iúoviry результатов прегодигк по 31:1!. Аго-ркпу лі А. А. Воробьеву, (12І2). '

Для сценки результатов серологических реааий в РИГА в і:л-хеградьиа-' тесте аутоактатедсс .".ргзовс:п:л пользовалась ыотодон арифметического усредняй (іЬслн Б., с coset. , 1868).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЇЗІОЗ/іНіВІ II ИХ ОЕСЙЩЛЕНІІЕ.

Орськая холерная хвлкес::ая бивалентная вакцина, выпускаемая ішетитутон "Макроб", представляет собой препарат весьма сложного состава. '

Материалом для исследования слугаші пркготовленіше наги антигенные фракции экспериментальных, экспериментально-производственных и производственных серий, а такте готовые формы препаратов 8-ми серий холерной вакцины. '

С зтой целью было проведено вырадивание 16-ти реакторов с

бульонисй кухьтуроЛ V.cholt-rsá И (Orara). 550 (líasSa) її ¡073 (йіаЗа).

З^лопоморлссти рсста ир2.са*пьк агаа-юз £6£3 и №41 п гипзр-тс;:с:.го:п:сго зтага к.л-70 пр.:йшзгигел&ко была сходпи. • Ре&кы их культнллрсвлчпл бнд иатло;;аогл:Л за 1Q-11 чгссв роста

пслугкгь і-ллсроСлуз :;.лссу б ксЯіїїщоцяй 75±10 ‘ 109 ‘исесбзк л-эл в 1 “'3 сролм, T.S. сїеспсчлзал мгксіаальгиЗ вгхсд ясіузсгеяоь чг вргьекв зрс-:фсзбши шрагдаенЕЗ.

ССЇІОГІПЛЗ ЙЛХПГеїИ ХО.ГСрНСГО 2”Ср!;Г’-:.- (xc.tc-pcreu, О-СПЛЛГСі) н пл ~ Ç-îp-'сллсл (гтр^/золл, ‘лсл-лглліл, лглрялллпллз;:) опро^елл-л-:лъ н т.':::л'урллілол лллксслл у : •• в нлчлло логпрл‘-:;лт;лс;соп ¡г лги "лота л ссстлллллн для (л рлллллл ;:л;Гуллсл прэл^ллт-цпп з галз по СулллрлнлО 0-г:гл:г.т»г inicia 1:2, Огсгг 1:16, тсксклі і: г. il ¡лл'цу ллллл:-л;.-:л:л ссугір" л г л; с г:.:Т.':.'У..г~ г лл слеллс улэлгмлла-лсль (С-ллллглл Плл’л, 1:4, о-с-л._лл- ; Сл.л: л 1: і'л::с:ік 1:10 -

1:32). .

Таблица 1

Химический состав специфичоских фракций ИнаОа (холероген - анатоксин),полученных стерилизацией И КОЙСврПаЦИеЛ.

і I

N иозрепне N N 1 1 способи , химические компоненты В % К сухому весу *

п/п[ фракция репкторог[обраВотки Iі" ■" " 1 . г - 1 -■■■—■

* і 1 Оелок углеводы 1 Л »41VI ди ¡нуклеиновые |гяюкоэямии

1 1 кислоты | 1 . 1 . .

1.¡Фракция Инаба (хо- 03 04 [1 и 2 се- 1 і . , ... — 1 1

[ я с рогеи-аввтокскп) |пораиия, 1 1 1

Істаммы 559П 05 06 |пред$ильт 1 1 1 1

| КМ-76 ¡рация и 50,4 10,2 І 6,0 | 2,4 1 — »-*

І , 09 011 | 1 и 2 1 . О

! |фипьтра- 1 1

■ 013, 1 ция 1 1 1 . 1

і 2.(Фракция КявСа (хо- 015, 1 |добавле- 1 ■ і 1

ілерог«н-внатоксин) нию перги ■ 1

етоммы 569В 016, олати 65,0 12,2 1 7,2 | 2,4 | —

| КН-76 ¡1:20000 | I |

.1 . ' | (1:10000) ' ... 1 .1.. 1 1 1 1

* Срплиил зна^епие из.5-7 определения,средняя оииОка В - 10 %

В процесса- исследования были таете изучены новые антигены- -адгезипы, явлгаппщеся возможными дополнительными гашуногенами, включение которых в холерную вакцину признано целесообразна.! Все-икрной организацией здравоохранения (Меморандум ВОЗ, 1990, 1991; Король В.В., 1992). •

При исследовании адгезивных свойств использовали регистрация адгезгої холерных вибрионов к эритроцитам по методу В.И. Брилиса (1986). Было установлено, что холероген-анатоксин вакцину обладал бо.-.je выраженным ингибирующим действием на проц-эсс адгезии, чем □-антиген (КУЭ, СПА, ИАМ - 44,2 - 46,2 , 076 - 0,70, 1,52 - 1,72 у колерогена анатоксина; у 0-антигена 65,7-68,3, 1,24 - 1,95,

1,94 - 2,80). Отметить какого-либо выраженного влияния способа обработки на адгезгшы не удалось, и добавление к препарату мерти-злата не приводило к ухудшению поісазателей эффективности адгезии. Эффективность адгезга по показателям КУЭ, СПА, НАМ, в среднем, іля холерогена-анатоксина, стерилизованного по регламенту и по говой технологія, составляла 46,3 - 46,2, 0,78 - 0,70, 1,69 -

1,52; дал О-антигена - Ей,7 - 63,3, 1,05 - 1,95, 1,31 - 2,80, со-ЗТ23ТСЕЄНЛО. ’ -

Изучение следул-эго компонента вгящаш - О-апткгена проводили по зеем T5CT2U, зааагсентві в регламенте производства и ■".ристатье. ■ До этапа стерилизация получение его велось согласно' ■ехнологни производства. Заменив стерилизация дробно текучим па-ом добавлением консерванта, провели исследование кая активности,

•?.'л и хг-йічесісого состава 0-антигенных .• ка*аанентоз, полученных ггзлзчкши методами обработки (см. табл. 2., 3.). Тах, з первом г/чае, при хроматографіні на TSK-гєле HW-G0 в элпатэ определялось пачило Солыпеэ количество антигена VI, относящегося к кеспецифп— еекя! ссмаииескпм термостаЗильнкм антигенам. При этой фракции, . Зработаяные мертиалатсм натрия,•. обладали больней серологической =ст$ностьэ (татра РКГА.в 2 раза визе, чей у фракции, стерилизо-анких нагреванием) (рис. 1). Изучение химического состава пыяза-э больвее количество бежеа (р<0,01) во фракциях с консервайтсм / э сравнения с гретой. Существенных различий з содер:халия углевоза, ЛИПИД03 И Пу::ЛЄНН02ЬЕЇ КИСЛОТ ЕШЗЛЄПО КО ¿НЛО. " ■

Остаточная токсичность для белых мылен, зависящая в осяознсу : о-антигэкол Сгаза и Инаба, входящих в состав вакцин, была оха-зятеризована наряду с принятыми контраяпни.іп vivo тшеїе и новы-.

, Таблица 2.

Сравнительные результаты получения специфической фракции Огевя (О-антигеп) £ стерилизацией и консе-рвоциея

Паэвание прЬ- : СпосоВ ! ОЗъеи :ОВьем :Виход :Содержание :Величяка:К-во тэВ-

парата. : стери- : исход- ¡стериль- гсухого !в 1иг 0-ан-:чел.лози:летон .

NN реакторов : язции : ного : пого :прапа-' !тпгеяо :по О-пн-:(из 1,5л)

: : диали- :прапара- : ратп :(титр РНГА)!тигвну :

: ' : зата (л) *. та (п) !(О-опти: : ■ !

: • ! ! :гена) г ! 1

О-оитигев нагре- •' •

Огева (р-ры вание - 1,5 1.5 32г . 1:127 10мг 3200

01, 02, 0?,

08, 012, 014)

О-внтиген добавле-

Огона (р-ри ние мер- 1,5 1,5 34г 1:223 5мг 6800

01, 02, 07, тиолото

08, 012, 014) (1:10000,

1:20000)

х) Прйведени средние арифметические вепичвии (15 определения], средняя опивка 12%

■ ■ . '■ Таблица 3.

Сравнительная характеристика химического состава франция О-антигоноо (Огава п Инаба), полученных стерилизацией и консервацией. .

Наименооание препаратов (атамм-продуцент)

О-аитиген ((1-41) О-антиген (И-41) 0-антиген (КН-76,569В)

О-оптиген (КИ-76,569В)

ПП :СпосоО реакторов:сторили :эоции .

01,02,07 Ой,012,

014

по регламенту* '

• Химические КОМПОНОНТН й % К СУЕРНУ

:0алок: углевода: липиды: нуклеин.: глюкоэа-

35,0

16,3

15,2

кислота

4,2

мин

1,63

по новому 46,1 варианту* *

18,3

16, 3

3, а

1,55

03,04,05,

06,09,

011,013,

015,016

по г-оглп- 38,4 иеиту* .

13,2

15,2

4,1

1,60 •

по новому вариам-

49,3

15,4

17,2

3,Г-

1, 75

М прогревание текучим паром:

**) ионсервпцил мертиолатом при концентрации 1:200^0 (1:10000); **>) среднее из 5-7 определений, средняя оыибка й-10%.

А280пт . А280пт

1.

ЕГ

г

Е ^

—н-рД П ^ -

.1кьл —1—і—і—і—і—

О 1 2 3 4 З Б 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21

НОГЛЕРА ПРОБ | —з— зпюциябепка гтУІад СИЗІад |

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2

.0,1

/і

П!

т

-А-

Т

-Р —

1 і]

ад

70

єз

50

40

30

20

10

-і---(--1---1_

0 1 2 3 4 5 6 7 8 а 10 11 12 13 14 15 10 17 18 13 20 21

НОМЕРА ПРОБ

■о— олюция бєша

Г.7І г.д

?ис. І . Хроматография на Т5К-голе Н'ЛЛбО О-антигена штамма М-41 Огааа: і - стерилизация нагреванием, 2 - консервация мертиолатом. '

ТИТРЫ ТИТРЫ

кн t.;sTодами In vitro, предложенными O.B. Громовой (1995): определенно содержания глюкозашша в препарате, определение цктотоксич-ностл на простейших и по способности увеличивать агрегация тромбоцитов , нндуцировгнную АДФ и тромбином.

Основанием для оцеггки токсичности О-антигенсодеркаидах фракций по содорг^знют гдоюзгшква явились литературные данные, свидетельствуйте, что токсичность молекулы ДПС окределяется липидам А, который содержит в качестве характерного компонента D-глюкоза-ijssh (Езепчук Ю.В., 1985; Кпирзль Ю. А., 1993; Luderitz 0. et al.,

1985). Результаты покэзкга присутствие г^эк-лснина зо фракциях, причём значгткых отличи": как у разных птаймов, так и при разных методах обработка не наведалось. .

Принимая во внимание цитопатогеияое воздействие ЛПС на меьй-ралы клеток различных оргеноз и систем (Ягозкия Э.А., 1981; Алексеева JI. П., 1953), исследовали вдтотстиесяоэ действие ллшополи-сахзридного кхпезениа гакцин, полученного различными ыетодают, на простейших (гаВугсрхах Paranediuni caudatum). Выявлено, что отличий иззду то;?сга:остаа препаратов, полученных нон разлитых СП0С052Х обработки, не быю.

Устсногх2:пл_'Г! факт того,, что бактериальные ЛИС увеличивают агрэгацгзэ чедезечееггнх и гфоличьпх тромбоцитов, индуцированную АД'З и тромбином (Matera С. ot al., 1992), нами бал использован

таг;"гэ ¡сак доБодсятельЕКй тест для изучения тогагсности. Исследования покгзази, -.что нззгвпе::;» от .мзтедоз обработки :>:ннимапьная доза для иссхедуеглвс антигенов, пгзиг.з^зя 100% агрегация .трембг-пптоз, составляла 500 ют. '

Сугк:«руя. E”~c-ii3j;c;::e:iHoe, потно сделать вывод, что добавление столь i.:avis: концентраций нертиолата вагряя в качестве консерванта не ше-лзает гозскчйость О-антпгена (см. тайл. 4.).

Результаты, получение в процессе изучения отдельно фракшг; С-антигена и анатоксинсодерчащнх, позволили сделать вывод, что обработка вьзгауказанн'за дсзгл:и иертгголата натрия не ухудпаяа качество !гглюнсктов вачщш, а в ншазторых случаях имела преимущество перед :,:е:.:бралксй технологией и дробной стерилизацией па-•Нс-г.

' Воллпгаэ внздгвиэ было удалено ергзяителыюй оценке готовь»: Форм холерной бивалентной химической вакцины, изготовленной из фракций с различии:.™ метода:.™ стерилизации и консервации. Коктро-

ли прозоякгась по все:.: теста;.!, залокэккш в рогл£1\;о::тс прокзвзпс-тве К-Л79-94 "Вачщта холеркач бнгагбникк химическая таОлеи^а-закная". Они вкиочагл в соСЗя кзученпо фшко-х»йогчэсяе2; сеоГ.с'г:;, бе'сериальной контантагадш!, спещ:-::ч:сксй гкткгностк, тс;,с;.'^:сг-тк, ювг/когзанзстк, реактогекн.'сть.

Т&5ЛИЦГ. ■!.

Хщзактеркстйгол 1'с:-".с;гнк0с'г1'т ¡.гстодаг:: 1п vit.ro пронг-ЕОдс^ЕОРли.": фракций о-гггхп:ге::г., псиучс/чк двуь'п: 1.:ехода:;и

Оарелелешге тсклгчпости по

;-.5\!>.:гкоьан1:е прет: (стам1• - проду цок т) Способ стс-п::.!::;зац;"1 содер:;:яиет г т;:;‘эзз' гяг.! ^о;'; % к суло:.:у : >:о :ц. д.ч-:. ГС-Су* :Р.СЙ!ЙЙ№' гигг/ыл лх:: ТСС::”С1Г1-чо7:-, »'гг/:

0-а;:т;:ге1: (пга:.-: '.МI, Ога; а) пс гог”'> уо:л-у** 1,03 ¿О'.з ;:;.о

_ * < _ , > пс ¡:о...о Е.'1.’ 'УЛ’У 1,63 У!0 Г;у>

О-с-Н 1. (¿гл-'-ч '¡-.¿гос.)- по гсгл?.-!/-;ЛУ ■ -1 г;, у ' 1 ГСО

~ 6« .. гп г г.-. г 7 1 1,1'о .' V ’ 5 V ‘

'¡Г : '■) , ' 4ч г (::1СЗЭЗ}! >■3 ...:■:• . ". С ... . . ■ ¡1.:.. :: ■ ч.’ ‘ •. 1 -- - . -

л:.;-.., ст.',.'-:"5. с. с,,;'::." г го.:

ссГи.-. 1 :г ./'.с, С со;;. , .г

ГГ.ЗЛІ ^еТОДЗУИ обраЗотісл, зкетізш различий пз наблкщалось. ВаКЦЛ-на, стеригизоааяЕгя по регламенту и полученная с дг/5азлениеы консерванта, ‘ илела з споём составе £ос$ол:птазу (С5 1,4 - 1,2), протеазу ЩЕ 1,55 -1,7). По активности основних аатэтенов (зііаток-стпі, О-гнтягек) обе лакщплі гажо били почти од;ша;:овы (см. тязл. * 5.). Следователе» дсбаалеякз нсртиолата патрнл не повлекло за собой ухудзокип ісспества з спэщфкчсской сктлзпости препасгта.

Особое зшмгдпе УДЗЛЯГССЬ ИЗУЧ-ЗІЛЛО ТС¡ХІККССТЛ (бсзпреднос-ти) готового препарата. і.'з регламенту производства проверка токсичности проводилась яа бэль-х пєліезйеьк кыззх, кзгсрым зводили яэдкогзо ргстзср, ссдсгкаяяй 1/160 чгсмь таблетки. Гкболн гдзог-

* •

пух но нгблщалссь в течение 7 суток. Больной интерес прглставлз-

■ ло пгучеппо гсз:.:с:::нсс?п алязпть пгтеїгортолопгческие изменения го пнутресгкх органах лабораторна етвотких, зкатнровзпикх зкспе-ргп.іентзтна'ч препаратом. Спытп били проведеш да ¡фолшсг-л, ксю-р:-?і через зонд б полость лэлудха вводили 3 чзлезега-доза (25 человека* доз па ісг веса .‘.".плотного), .Азотных забнпзлн н-ъ 5 - 23 сутки и изучала срезы заутренних органез (печен:!, ночек, тснгсго іядзечшзса, .т.елудка, падпокзчшзеоз, селезенки). Контролен слулети •¡ролики, сгкісппірозгшше производственной серией закидіш. Биго установлено, что у тешотзз«, который вводил ка:-; протаводствеп-пуа, Тек. я зяслерісгентагануо серім вгкщшы развивались норфологи-чесятз изменения однотипного адалтацпогаю-ко’яіексаториого характера. • '

На сснозанин прсведенгтл исследований было сделано заключение, что найденные изменения укладывались з граниш допустиш. нзлеленннх з '"'зтодячесіси рекомендациях по морфологической оцен-:оэ безвредности сралькых холерных зггадо" (Саоатоз, 1531).

Лсподнптельпкй тест на лег га реагирукгие 2Н-группы белков ?:"'тренних оргаяоз г'гзотных псісазал, что блекага пх ргутю не происходила, хотя изчрстно, что последняя макет избирательно реагировать с днілі, обладав гнсскнм сродством к £Н-группам (Торчинс-:г :• , 1С71). ’

. 7лк?п< образом, ягмеаевий, тяшгшых для ртутного шжроэлеиея-геза (Дзцин Л.П. с ссазт.. 1991), во внутренних органах обнаружено не біта. Следовательно затаїнна, изготовленная с добавлением иер"г.одата натрия, з концентрациях, пркменяё«их йзмн (1:20000), ае вмгіяала изменений з органах вуге допустили границ.

Таблица

одной таблетки оральной вакцины, изготовленной двумя ми і одами стерилизаций

■ | ■ ' Пзкция:і (Н^ТОЯ СТйрЯЛИЗвЦ. ) Моссе сухая,г. ( хол. анатокс./ О-антиген) , :Анатоксин, :ЕС . 103, 0-антиген в РНГА*, УЕ .-10-3 :фосфоли-паэа, % ФЕ* * Протеазо, :Везнроди. ПЕ . 103 :длн белых !мыией :(часть : таблет« :Остаточи. :холеро-:генность ;1 теблет. ;Иммуно-:генность : ЕД50 :(часть • :табл . 10-

Ор»льнап холерна я бивалентная ьакцина 1/160 На хо~

4 серии {Стерилизация по регламанту) * 25/10 , і ' 100+10 98 3 ,4 4), 22 1,5Ь^0, 1Й безвредна л&роганна 30+5Н »-»■ СО і

Оральная холерная бивалентна £ вакцина • 1/160 Пе хо~

4 серии Клоый ьорииит стери-яизецяи (мергиопаг) . 12/4,5 ' * ; 100+10 « . 110 1,2+0,24 1*7+0,19 безвредна л&рогонна 36+4,4

*)Обратный титр в РНАГ. **}В единицах активности.

■ Проверка рвэкгогенксстн зг»спор:;:в:ггс.,&ной и производственной серий совжстло с Ерзчаіяі медпункта, СЕК и ЛСК лм Л. А. Тарасеви-ча, проведенная на 25 добровольцах, ранге не ггчиулкзлроваллых протгз холеры, паказата, что зкспер^гкта-ъная згтсжа ни у одного из всгдайярогсалкгс es зг^іївгиа тзмперггурксй раггац-'п, наприят-аих с:^уцопі:й в зпягссщш и рнастрсйсгв ггзлуаотво-юкаинсго траста. .

2~я доітгжгітлчглоЛ оцзллп Ссзврздгоега холерной зкспзримеа-талм-сй zzxznrj гыя ;.сполhzc'ixi iiivrxspрллілл*л тест аутсаагигехооЗ-раасгзнля, прзд'л;. ллл:кл Л.П. ПзлллоЛ (1833).

Jíssosrno, 'Ivo np¡i ігсхстьссзозяи хгзскгситц. хагерннх вакцзн, з лорлігз гонг кггг;і:мгатсс;:о;'с ьр-лд-зеса по.ізггоїїся neftmmtl зле аутссатптод o:2cpov:o :грс?л; грзчакх (Grabar Р., 1975; Albísc-n

A. S. et al., 10Ті). Зі’а ^ллглл-'і .¿ста крояглевяй йуЕОСзксибжшзз-rcrr: спясгпа с с/кгг^г.'їщгзЗ £тгг«гзпзз їжжіп, з резулугаха ікіо-рсй про::сход::г яег^-ш-гздьпоо і]с?рл,'до;шо кеглей п пойзлзялз у:л лулолгрзсслл^сслл. "-..ала з1::; алллгзпн алзхро аг ’'¡лпірукдел лз cprcjccia, а аулол1 лулллз процэссз угасла?.

На ç.oiïs йсспзшщз: алїпгслсв, якєделях а сссгаз закціт;?, епслсхолпт ’.¡цдукцпз ск?іг1:ггбского л'луллтета. Заіс.м послзд'ілл ¿ступаст в грсдукгсзуэ Сагу, чгс ця :: ла/плгаилл ааотгаз-

•ггг лаггг-’сер-їзуехс:: cccoGc'ssc'-rnsi' оргаллсла сі' гсяфс2ов, а лрл кс-пользгілллл уолтал л лллллс-’ллл препаратом злллшзцлзл алтлі'епсл (С;;:с':лова Л.В., 1SG3; ГелсСорсдо^ P.A., ÍC-57). Луто;”.':.іунііі;о ира-г.осси з 3¿o ароля угаааюг. Оледозаїольло ¡¿азы разллтлл c.'v-h-'It-is-с;ссго л аутслаалллизта to грзлзнл us солладаот мсгду ссбсм.

"заду лралллзллплп &у-іс;с.-;гуїшоїа я пс-.^зателл»л! спсігіллзс-їсал р.^пехёатпгетм к лл'зкцли суг.зсгвуєт обраная завлзл!.газ:л> С’лллла Л.Н., 1SG5). Огслда слодуег прачгллоскл взл*ая залала

•лгучсіглг» гуасагрессизЕЬК сзолстз рзаргба’гнзазшх и усгзер^енстЕо-л-л; взхцля.

Поотлзсоргалллз зктитзяа з сызоротлзх крози пряватых определяли па l-э :: 7-е суда ааляшальиого процесса, т.к. на эта гремя пртсоднгся пл:; ау7оселскблл;излру"ол,ого дейс??!И холерных какиш Дїїгшша Л.Н.. 1С85). Исследования похаз?ля, что экспериментальная ■вг:-ц;:па лэ глзмвала алачитэльного унэллазялл гктрез .зутоантител к гк?нгм !5.-!гзч:шка (не еулз 1:8), а погшгзшет -аутоавтитэл к другій органам осечено кэ бняо. Сравзжгельяый апализ аутсаягателоі'ра'.м

¡c.ixpcsv“ г"Л грунт: 'с л'ллл л;.лл:лл ' глолллолсххолле:/ со.-..і r.o-лсрлол еі:::пкл;) ;¡ :лхл-.л:~. С:г:;лллл.:л..ллг~. пропсрахсл с

пл^рхлоллха) пс поі-їлзалЕллпл аухо^гхлтел.ло^лзохал'';: і::.

тллльс лл ::з сллх;\?., чхо злспг^лхлллг’лллл хл:_ц,д:о ::с лС.л.л:л-л ліухслі рлсіл :ллл "і слслсххллл.

Trxj-слрллсл:, ллл^хрллллл". :,.cï сухо: • ;л±слсб;лл ;хллл: ,лл;

ДОПОЛЛ ЛЛл ЛЛ Л*УЛ. ЕСЛ.„ЛЛ.'ССХг ОЦЛЛЛ Л..ЛЛСЛ.Х ЛЛ.Х сЛЛЛіу!.' С -Л - Л ' '

лреалхогсйлу:;; сллоласлу:.:.

ЛГЛу<-ЛЛЛЮ ЛУ;'уЛЛГСЛЛЛХ (Л Л Xj. 1.ЛЛ Л ; -- .■ Лі - XX Л Л і X. Л;ЛЛ л

ллолхлсллл ;сл:: і:л : ллл.л::л;, хсл лл г;/ ^лл хдххлл, л: л:

лл ех кхлл:ух л'х улх:ч ллслхл. ІХ.ло ул;, лхх:лл:хл л,.’л л.лхлхха сіло

ЛЛЛЛЛуС .‘ОГ О ПрхЛЛЛЛ'. Л Л.. Пр^ХЛЛЛ. , Л - Л X _ ..к'Л:..' 1 / ".XX .. j ЛХ ЛЛ‘.

тлДлєїкл ллл лхсллхх лз:л,стл> с-лл^ лл. ехххл" ■ ллл х с;л.,.л'хх cat-í,4 ’ líTS.

р"''сігі' с.. с т ;ігіч ...n

Lxxexocxxx. ' •

ілг'хллл, хлх-"л хл хлхл_, х:-...хл: б глх. /:лх..';:лл1 у,.: л. ллл лліхлслхл хх ссл.л:: л; r.cx-js (ух.: с,і лххлл ІУхлл.) ¡іїл^л л сороьлпл огагл;. .

Тл.; " ■ і гх їл:лЛ' ллл;л лул ; - л " ” л:лл , . л :.ллх. с ,.х .:л

.' л/.. ■' ’■ х- 1 : л ..„—'_ і ; л л С. .-. .х . ■1 лл 1 ...ллл; л х.х’ л . Сл . _

с:л л ьл іл .,лтл-- :лл сл„;, : л...Хл.ухл :.;■ рх-. х:.. лл^гл: лххх.л....

Схч..лсхлл с з:лл лллл л./.. п; лл„лл,;лхі.л.лолл •: .... :.л ,..лул.

"Лі: лу-'лл! ол;л оххх. їххллл лл:л:лл,хсл.;СЛ;:о-зло'“лл .. г................. ^

лллл. Х:;йлсі!.ї:злллі:л.: лсл.ул'л'. лллгглл-... і ../лл.л плл,л^л л. чх-

Л:;ЛІ;0,: ч^С.С.Г. Г “ЛЛ ЛОЛ-ПЛ О.: Л1Л ЛІГ ЛіЛ.Л: СХ^;. ЛЛ.Л-ЛЛ. ХІ. сХЛ..

консервации позволил сократить общее время с 162 до 69 часов, регламентное (время работы оборудования) с 131 до 41 часа. В результате -было получено укорочение цикла выпусгса одчсй серии препарата па 93 часа (4 суток), высвобождено из зіссплуатации 9,12 оборудования, и количество сотрудников, занятых на данных операциях, что составило 9,5 ілли. рублей. . .

Наиболее наглядно эксношгческий зффэкт бкдсн • при сравнении стоіяіости оборудования, занятого ка данном этапе стерилизации и консервации (см. табл. 6.). Если при стерилизация по мембранной технологии стоимость оборудования составляла 115 млн. рублей, то с учётом амортизации остаточная стоімссть на 1995 год вышеназван-пого оборудования разнялась 33,3 млн. рублей. При этом годовая амортизация, приходшгдяся на одну серга препарата, составляла 10,13 млн. рублей. -

Следовательно предлагав?<ый наш вариант консервации позволяет не только сократить общее и регламентное время, но и снизить трудовые затраты 'с 42 часов до 1 часа, пысвободкз часть сотрудников із производства. ' •

В результате энонсшя оборудования, энергозатрат и заработной плата юдяо констатировать снижение себестоимости одной человек-дозы па 9,1", т.с. с 15 тксяч до 13,5 тнсяч рублей.

Таблица G.

^ і*. 'tnanrorct jsa втапы с v f- ;*»í ►*' з а или к Ko;ic;fcpdaii/:-rt вакцины

•* ; tp І. -.î. K'jf 'і О* fj\r4 дс Ufíss,&¿ Zftmmb ifJOH-ЬО ие

tf.» "ifsbttitl , fc-b&JÏ-Vn4iß - X Г'ЛІІ+'рйРУ. JteefJHD.,

4.»•>*;*r срепаратг • '

‘і; t-'-' ; - ■ ■' ;.’- . .: - ' «

Годовой : Оститочная: МЕТОПЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ . t

процепт ісгояиосїі. ;------------------—■——

аморгі'з . : на сtrоди. ; иемОрициал: доОавляяио :день :т«хнология:иортиолотв

:(тис.руО.): 1:20000 .

ї« . ,ï*çfiâS#»b ¡!U нниі фильтрпв1

?■'{- /' /¡¿їкнтсич 29 s *»r» 15-т»:раиив8 .

от.

.•<0617, f.

1-1,3 8726,0

X. . S»p**t«»-b Hfciiíf-atínt»* фильтров ' ВТ. . 3 5970-1,3 П,3 5671,9 + -

’ ■ ДИв»*Т>ОМ ns ИИ 17~т»рвмниЯ

Jv &якуу»-.ніім імнг.п 20 литровой т от. 4 . 1В370,6 14,3 5235,6 + , -

,• і . ■ ■ ъ6<,ру«»»ьяная ивиоивтром

4 Селардіор АСГ-ЗИ , ' . ВТ. 2 ■5515,1 10 ■ иэпос ♦ ' -

попиия

3. игпвглии "впаикпгл'"! ■

I МА-І ‘-2 дииі>ьтрс,и ,293, им . ИТ. 15 210,0 разового + “

Ml лй«и«і(яя 3 42 л» ВТ, 4Й 700,0 ИСЛОЛЬЖ?- -

MfAC-0<; «2 /MDHsipoK 142 им ВТ. 48 700,0 оннии ♦ -

HMC-I.>f. УЗ диаметром 142 nu ВТ- 4Й 700, 0 + -

» ■ €. ИврТИОЛаТ і . ' ' гр. 22,0 - ♦

ИТОГО» И У/00,0 J0J30,0 33300,0

* ' 1 Uí.. руО .

Принвчіїикмі " + " - использование дойного - и« авдяяствовяиноо ив оОоруковеиия дивном ртелг> И МЦТврИиЛОв ІШ ДВ Инон этепе) ОПОЩг'ИОвеНИ»! И HUTipiJO/Ití ,

FS

♦

W о

Ü м

<3 ü

!

Ч

ш

Ь о

% ы

о ю а»

и •?]

0 о

'ü М

4 Ь 8 4

ill

<0 tï> » ft

1 V I» о

К У

н и

5 о ■й й *• 3

4 •

3

w •< о ~ и о»

5 ?

S-8

О

0 й «8

р и

у Й ч j Ö ІЗ

0> О

l¿ а

о

и Ё

HI й íD Q

а я

1 g

0

1 Ü

=; "Î W р rj (і

W >í íJ o |í| •1 Гз Q l'l •i H t 1

a- 4 ¿3 U ;?! <í> ¡P q и ". 8 J С J с . } (ï <::*

o Q i) T? г.) (; H

И o СЛ <>. o l'l (b Oí O :i !o Cí3

< j [j и (U o ? f ,\ ti f] П y 'Л “I c; u k> h CJj

t] ЇЯ P i-i ?;3 í¿) Ö ü P Гкї o H »4 a>

*4 11 íí> y íi) Ui ІІ tí ¡,J cu i-J ti (i С’Л (j - V-i

o 'O fi ÍO O ::í tj'4 [j¡ ’O

l:i ¡i $ Vi Й Й1 ji ß Ы гі с * J

Ci O Oí І4 b< t-1 i о u

СЛ ,-Xl • f t • w 1-,- y tí 9. >4 (Ô trî

(A! P ;-t fn t> Ф Ö и hl О

fó h :5 Ij Pí ÍU ai h w O "Л Й 'M o ß ¡í w Çiï О ► :!

1 O LJi ; UJ PJ Ü o І" Ü< Й Й W p LH

0» ü :J W Ы 4.7 В •3 fí a *U ñ Й а S’ tô ?

Я £ 8 Ф Й g 4 ir o Ÿ M Q

V ro Ö i ІЗ Ф trj 8 o ci *8- tá § ■R CJ I «с H« г»- If \D І

¿V -‘i o a *a EÜ la t-4 O 'íl s а-э it) Г-1

<0 П P3 o l;! fD tíí 13 Ы

rj Ы P Cjl ф Ы O x'í o TÎ ГЗ $ о

33 w y í> o ? Î-1 o f-í И

и p* и из q Ü (1 0 td *CJ G H

i kf». ¿1 <а а ?3 a !? ]ó o íq U О •9« ■о

•vj ú> *-5 T) ■/*■ Й d О

V Гм 1-5 Q І..4 rtj '*i ? 4 î-rt v-3

P o j" 5« (D : t Й id л> <5>

íD M w O Ф iD H rs iD P n I

o »3 & & *3 їч O (J *o '0 pj> И *•3

ÎT* U O (D C« H В ts <0 % cd и R îu ІЗ П9 а о

w O M ■< У o» c'< Xi ІІ C" ‘•J b M-

к; cJ » ü <r> o d t-J O CO OJ Ц ?í {) üí ri fí % 7і D В

R 5 Ш Î.4» i-I Ь ‘í U4 CJ •І Л

Ы *a w o *< (0 ÍJ o b M* (D

o t,1 ф tí* '■‘i 'O Г' а < а

П fc> Q rj q Bí и G ‘Jí í tu и b О

o Ei ґІ »** PJ ro J'4 ^•5 Ci, ы о

c5 (l> o 4 J H! ¡’) iu рз /-S

i—j ■Д5 ?-* >-í (i L-J O 5 i"! ."Ü rf t.1' \A

w w со tí o S ¿] l'j p*’ i >, q u ¿A P 1'{ о

r1J ‘3 'w (і i o f1 13 Ch 0\

И ■u (3 1У (b \ i o Í-Э *f.J o* i’S <0 PJ

№ (0 • J 4.» O 1..Î o }íi M > m H bj

'*? i-» a Я P íi *• *ü t < n O П & г,

C3 o Kr} В oj rj C3 ! t b 5 ‘ J «»> úi О (D

'U r * ;« •- :’:í o d H ‘••* ьз

e J [■*:■■ s 'í Y] 0 1 0 1 o ’A! o s ? "f Й І f? ГС

О р? -

Ь і

S М ID tí II)

a ó І о В

í» >4 У fh p

8

список работ, опубликованных по т&е'дшертащш.

- і-. Дкапаридзе М.Н.Елисеев Ю.Ю. Ада^сз А.К., Клозсоаа О.Д.,

Громова О.В., Палатки А.Ю, Оптгсдізацзі производства сра.ты:ой холерной химической таблеткрованной вакгспш// Российски науч.-но-исследовательский противочумный институт "ліпфоЗ". - IOC. (Рукопись ден. В ВИНИТИ 15.04.96., ,vl232-BS5). . ' ■

2. Клокова 0. Л., Елисеев Ю.Ю., Палатин А.Ю. Усоверхзнствова-.

ние способа очистки и стерилизации фракций холерной бивалентной таблетировакнок вакцины// Сериалы межгосударственной научно-пракииеской конференции: "Актуальные ворпросы профилактика

чумы и других инфекционных заболеваний", восвяцеякой ІОО-лаїчіз открытия возбудителя «iyui. - Ставрополь, 1995. - С. 134-135. -

3. Клокова 0.Д., Д-тлпаридэе Н.Н., Елисеев Ю.Ю., Грс^эга

О.В., Палатин А.Ю. Биохимическая и кздЕологическая хараістерксп:-ка оральной холерной химической вачцииы, полученной дву;-^я иетода-ыи стерилизации// Российский научно-исследовательский протиъочуи-ный институт "Микроб". - 13С. (Рукопись деп. ь ЕКШ-ШІ 05.05.SS., Ш443-ВЭ6). " .

4. Ысхин.К;М.. Таран В.Н.Шанин П.В., Клокопа О.Д., Кедрова

О.В. Влияние травиирувдаго воздействия па динаджу поствгкцннагь-кого >шыуните'та //Тезисы докладов IV ВсессззЕого сгззда патофіг^-слогов. - Ростс2-на-Дону, 1289. - 1389. - С.73. '

. 5. Gerasimova К. I., -Yeliseyev Yu. Yu. , Tichcxnircva L.a: , Led-

v^anov tf.Yu., . Klokova O.D. Effectivlty of tosmorebrMlltatlon of patients vaccinated Kith different preparations against plaquo and choleras// International Journal of icaunorohsbllitatlcn. -Tskhaltubo, 1994. - N1. -Supplement, - P.121.

. 6.. Yellsayev Yu. Yu., Adairav A.K., Hajorov H.V., Alyonklna T.V.Sotnova E.A., Nazarova L.S., Klokova O.D., Pair sin A.Yu., Dzhaparidze МЛ?., Pahomov D.A. Insiunolcgle approaches to estimation; of new.anttcholeraa preparations //International Journal of lrasunarehabilltation. - Tsiihaltiibo, 1934. - 121. Supplement. -P.382. ' ;v •' • '