Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Сравнительная морфологическая характеристика цирроза печени, индуцированного четыреххлористым углеродом, и его патоморфоза после воздействия на печень высокоинтенсивного диодного лазера (экспериментальное исследование)

На правахрукопией

АБРАМОВСКАЯ

Наталья Владимировна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ, ИНДУЦИРОВАННОГО ЧЕТЫРЁХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ, И ЕГО ПАТОМОРФОЗА ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ПЕЧЕНЬ ВЫСОКОИНТЕНСИВНОГО ДИОДНОГО ЛАЗЕРА

(экспериментальное исследование) 14.00.15 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2008

003165300

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации» на кафедрах патологической анатомии и факультетской хирургии, в Южно-Уральском научном центре Российской академии медицинских наук

Научные руководители:

доктор медицинских наук, член-корреспондент РАМН, профессор, заслуженный деятель науки Российской Федерации

кандидат медицинских наук, доцент

Официальные опоиенты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация:

Санкт-Петербургский государственный университет им Академика И П Павлова

Защита диссертации состоится «_»_ 200 г. в

часов на заседании диссертационного совета Д 208 117 01 при ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия». Адрес 454092 г Челябинск, ул Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» Автореферат разослан «/Ь » фЮ'/Шж 200/г

Учёный секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук,

профессор Долгушина ВалентинаФедоровна

Коваленко Владимир Леонтьевич Гарбузенко Дмитрий Викторович

Гиниатуллин Равиль Усманович Фрейнд Генриетта Герхардовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Сохраняющаяся устойчивая тенденция во всём мире к росту алкогольных поражений печени, нарастающие неблагоприятные экологические сдвиги и бурная химизация современной жизни, повышение заболеваемости вирусными гепатитами, привод ят к увеличению хронических диффузных поражений гепатобилиарной системы, в том числе и циррозов печени (Недогода В В., 2000). Заболеваемость циррозом печени в настоящее время в России составляет около 20—40 на 100 тысяч населения и непрерывно растёт. Самые частые осложнения цирроза печени - желудочно-кишечные кровотечения, развивающиеся у 45% больных, и печёночная недостаточность, которая выявляется у 67% пациентов В 2004 году смертность от цирроза печени у российских мужчин увеличилась в 2,3 раза по сравнению с 1991 годом.

В комплексном лечении цирроза печени альтернативой пересадке органа рассматривается стимуляция компенсаторно-приспособительных (адаптивных) реакций. Одни авторы (Саркисов Д С., Пауков B.C., Литвицкий П.Ф , 2002) к этим реакциям относят регенерацию, гипертрофию и перестройку тканей, другие же (Пальцева Е М., Кузнецова A.B., Иванов A.A., 2007) включают в них атрофию, гипертрофию, гиперплазию и метаплазию Причем при коррекции портальной гипертензии и обусловленных ею осложнений при циррозе печени, в связи с перестройкой сосудистого русла, особое внимание уделяется стимуляции неоангиогенеза (Reichen J., Lcbrec D., 2007).

В этом плане привлекают внимание возможности использования высокоинтенсивного лазерного излучения для управления процессами сано-генеза

В последнее десятилетие в литературе широко освещались отдельные проявления особенностей альтерации, воспалительно-репаративных и адаптивных реакций при использовании различных видов лазерного излучения как на неизменённые, так и на патологически изменённые органы в эксперименте и клинике (Неворотин А И., 2000; Головнёва Б.С., Попов Г.К, Астахова J1.B., 2002; Гиниатуллин Р.У и соавт., 2003, Крочек И В , Привалов В.А, Лаппа A.B. и соавт, 2004).

Г

В связи с этим актуальным представляется проведение комплексного сравнительного морфологического исследования для получения достоверных данных о естественном патоморфозе индуцированного токсического цирроза печени и изменчивости его при воздействии на орган высокоинтенсивным диодным лазером в импульсном режиме работы.

Цель работы

На экспериментальной модели представить сравнительную морфологическую характеристику повреждения и компенсаторно-приспособительных (адаптивных) процессов при циррозе печени, индуцированном у беспородных кроликов четырёххлористым углеродом, и его патоморфозе после воздействия высокоинтенсивного диодного лазера для решения вопроса о целесообразности применения данного метода реваскуляризации печени при лечении циррозов и связанной с ними портальной гипертензии.

Задачи исследования

1 Представить морфологическую характеристику процессов повреждения, компенсации и приспособления в цирротически измененной печени при воздействии четырёххлористого углерода и их динамику в течение месяца после окончания затравки,

2. Изучить динамику морфологических изменений в нормальной печени кроликов после воздействия высокоинтенсивного диодного лазера на орган;

3. Оценить динамику процессов повреждения и адаптивных реакций при последовательном воздействии на печень четырёххлористым углеродом и высокоинтенсивным диодным лазером,

4 Сравнить регенеративную способность и неоангиогенез в цирротически изменённой печени в эксперименте без и после дополнительного воздействия лазером;

5. На основании результатов данного исследования решить вопрос о возможности применения высокоинтенсивного лазерного излучения в клинической апробации данного метода реваскуляризации печени в лечении циррозов и связанной с ними портальной гипертензии.

Научная новизна работы

Впервые с применением гистологических, морфомепгрических и элек-тронномикроскопических методов на подопытных беспородных кроликах, у которых цирроз печени был индуцирован четырёххлористым углеродом, проведено комплексное изучение динамики процессов альтерации, компенсации и приспособления после воздействия на печень высокоинтенсивного излучения с использованием диодного лазера.

Показано снижение проявлений белковой и жировой дистрофий в цирротически измененной печени спустя месяц после лазерного воздействия. В экспериментальной группе кроликов, где на цирротически измененную ткань печени воздействовали высокоинтенсивным лазерным излучением, продемонстрировано нарастание таких проявлений репаратив-ной регенерации как увеличение в гепатоцитах числа митохондрий с восстановлением крист, нарастание площади дезоксирибонуклеопротеидов в ядрах, повышение уровня гликогена в цитоплазме паренхиматозных клеток печени, увеличение числа двуядерных гепатоцитов и синусоидальных клеток В ходе эксперимента были отмечены снижение воспалительно-клеточной инфильтрации в портальных трактах и септах, увеличение количества новообразованных сосудов и желчных протоков в трактах и септах, которые носили приспособительный характер. Была зафиксирована частичная инволюция фиброзной ткани, характеризующаяся истончением и укорочением фиброзных септ с уменьшением содержания колла-геновых волокон.

При изучении морфологических изменений в печени животных после воздействия на орган высокоинтенсивного лазерного излучения осложнений выявлено не было

На основании сравнительного анализа полученных результатов при экспериментальном циррозе показано, что регенерация в печени протекает активнее после воздействия высокоинтенсивным диодным лазером в импульсном режиме работы, а процесс неоангиогенеза существенно превалирует за счет новообразования сосудов, преимущественно в зонах лазерного воздействия.

Практическая значимость

Результатами проведенного экспериментального исследования показана целесообразность воздействия на цирротически изменённую печень подопытных кроликов высокоинтенсивного диодного лазера с целью стимуляции регенерации и активации неоангиогенеза Это позволяет проводить дальнейшее исследование адаптивных реакций при использовании данного метода реваскуляризации в цирротически изменённой печени человека

Внедрение результатов диссертационной работы

Результаты данного исследования используются в педагогическом процессе на кафедрах патологической анатомии и факультетской хирургии Челябинской государственной медицинской академии

Высокоинтенсивный диодный лазер в импульсном режиме работы и мощностью 18 Вт применяется в клинической апробации метода реваскуляризации печени с целью лечения циррозов печени человека и связанной с ними портальной гипертензией

Апробация диссертации

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на пленарном заседании Челябинского отделения Российского общества патологоанатомов (июнь 2007 г )

Объем и структура диссертации

Работа состоит из оглавления, списка сокращений, введения, 4 глав собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, списка литературы и приложения Материал изложен на 182 станицах машинописного текста, иллюстрирован 112 рисунками (в том числе. 7 макрофотографиями, 67 микрофотографиями, 17 электронограммами, 15 диаграммами, 6 графиками) и 2 таблицами При написании обзора литературы использовано 156 источников (128 отечественных и 28 зарубежных публикаций).

Положения, выносимые на защиту

1. Через месяц после окончания четырёхмесячной затравки подопытных животных четыреххлористым углеродом имеют место частичная инволюция фиброзной ткани в цирротически изменённой печени, признаки репаративной регенерации, неоангиогенез,

2. При воздействии на изначально неизмененную печень кроликов высокоинтенсивным диодным лазерным излучением в импульсном режиме работы экссудативная фаза воспаления имеет слабо выраженные этапы плазматической экссудации и клеточной инфильтрации В исходе про-лиферативной стадии воспаления заживление происходит путем замещения травмированной зоны васкуляризированной соединительной тканью;

3. Спустя месяц после последовательного воздействия на печень четыреххлористым углеродом и высокоинтенсивным диодным лазером определяется частичная инволюция фиброзной ткани и признаки репаративной регенерации Одним из проявлений адаптивных реакций цирротически изменённой печени фигурирует неоангиогенез как в портальных трактах и септах, так и в зоне лазерного повреждения;

4 Явления репаративной регенерации и неоангиогенез происходят активнее в цирротически изменённой печени после дополнительного воздействия высокоинтенсивным диодным лазером

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ Материалы и методы

Эксперимент осуществляли на 72 здоровых разнополых беспородных кроликах. Все манипуляции на экспериментальных животных проводили в соответствии с требованиями Этического комитета СПбГМУ им акад И.П. Павлова, разработанной на основе Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации.

Модель цирроза печени у подопытных животных создавали при помощи четырёххлористого углерода (ССЬ4). Кроликам подкожно 2 раза в неделю на протяжении 4 месяцев водили 40% раствор ССЬ. в подсолнечном масле из расчета 0,3 мл на килограмм массы тела.

В ходе эксперимента животные были разделены на 5 групп. В основной группе изучали патоморфоз индуцированного цирроза печени после воздействия высокоинтенсивным диодным лазером. В первой группе сравнения у подопытных животных исследован цирроз печени, сформированный при помощи четырёххлористого углерода. Во второй группе сравнения оценивался естественный патоморфоз цирроза печени в различные сроки в течение месяца после окончания затравки В третьей группе сравнения в течение месяца изучены изменения, обусловленные действием на ткань печени кроликов, не подвергшихся предварительной затравке ССЬ4, высокоинтенсивного диодного лазера В контрольную группу включены животные без каких-либо воздействий на них

Распределение подопытных животных по группам отражено в таблице 1

Таблица 1

Количество животных в экспериментальных группах

Основная группа 11

1-я группа сравнения 6

2-я группа сравнения 9

3-я группа сравнения 10

Контрольная группа 6

Погибли в ходе затравки ССЬ4 30

Всего 72

В качестве источника излучения мы использовали диодный лазер модели SHARPLAN - 6020 (производство Израиль). Рабочие параметры лазерной установки при выполнении эксперимента были следующими мощность 18 Вт в импульсном режиме, где продолжительность импульса была 0,1 секунды, пауза - 0,25 секунды, длина волны 805 нм, диаметр световода - 0,6 мм. Предложенный способ реваскуляризации печени является авторской разработкой А О. Гужиной, В.Н Бордуновского, Е.С. Головнёвой, Д.В. Гарбузенко, А.И. Козель и защищен патентом на изобретение № 2186545 РФ 10 августа 2002 года «Способ хирургического лечения цирроза печени и внутрипечёночной портальной гипертензии».

Подопытным кроликам основной и 3-ей группы сравнения в условиях операционной, под общей анестезией, выполняли лапаротомию. Далее

создавали по 10 точечных каналов посегментарно на диафрагмальной поверхности правой и левой долей печени лазерным световодом глубиной до 1 см, продолжительностью воздействия 7-8 секунд Животных выводили из эксперимента на 7-е, 14, 21, 30 сутки путем передозировки кета-мина и последующим утоплением.

Морфологическое исследование печени осуществляли после фиксации кусочков органа в 10% нейтральном растворе формалина, их стандартной гистологической проводки, с изготовлением парафиновых блоков. Депарафинированные срезы окрашивались гематоксилином и эозином, пикрофукином по методу Ван Гизона, фукселин-литиевым кармином по Вейгерту, по Перлсу, ставились ШИК-реакция с контролем амилазой и реакция Фёльгена, срезы импрегнировались коллоидным раствором нитрата серебра по J Crocker и Р Nar, а также по методу Гомори. Гистологические срезы, приготовленные на замораживающем микротоме из фиксированных в 10% нейтральном растворе формалина кусочков печени подопытных животных и животных контрольной группы, окрашивали Суданом III с докраской гематоксилином. Для электронномикроскопического исследования материал обрабатывали по общепринятой схеме, изложенной в соответствующих рекомендациях (Гайер Г., 1974; Уикли Б, 1975; Райхлин Н Т и др , 1981; Втюрин Б В., Пальцын А А., 1996). Готовые препараты исследовали с помощью трансмиссионного электронного микроскопа ПЭМ-100 (Россия) и просвечивающего электронного микроскопа LIBRA 120 производства германской фирмы «Karl Zeiss»

Исследования гистологических препаратов на светооптическом уровне проводили с использованием микроскопа Helmut Hund 500 GmbH фирмы LEICA (Германия)

Количественная оценка в поле зрения двуядерных гепатоцитов и ге-патоцитов, содержащих в своей цитоплазме гликоген осуществлялась с использованием окулярной точечной вставки с наличием 25-и узловых точек, а для количественной оценки синусоидальных клеток мы применяли окулярную сетку с 400 равными квадратами (Автандилов Г.Г., 1990). При проведении на срезах реакции Фёльгена, с целью выявления дезокси-рибонуклеопротеидов (ДНП), площадь красно-фиолетовых гранул в ядре (мкм2), интенсивность их окрашивания (%), площадь не окрашенных участков ядра (мкм2) определяли с использованием компьютерной програм-

мы Dia Morph «Cito W» и микроскопа DMRXA LEICA (Германия). Морфо-метрическая оценка фиброзной ткани в паренхиме печени складывалась из отношения фуксинофильных волокон к общей площади паренхиматозных клеток в поле зрения. Обработка данных проводилась с использованием компьютерной программы Dia Morph «Cito W» и микроскопа DMRXA LEICA (Германия). Статистическая обработка полученных результатов проводилась при помощи компьютерной программы Dia Morph «IPSO-W». Диаметр ядер гепатоцитов и диаметр самих паренхиматозных клеток печени оценивались с использованием компьютерной программы MOTIC-IMAGES plus2.0 и микроскоп «Axiophot» производства германской фирмы «Karl Zeiss» Количественную и качественную оценку арген-таффинных гранул, сосудов в портальных трактах, септах и зонах лазерного воздействия, а также желчных протоков мы выполняли путём определения среднего количества объекта в каждом поле зрения отдельного случая, в каждой исследуемой группе. Количественное соотношение новообразованных сосудов демонстрировалось в процентах. Статистические сравнения были проведены с помощью критерия Манна — Уитни с учётом поправки Бонферрони с использованием компьютерной статистической программы Biostat. Учитывалось, что если р<0,05, то отличия статистически значимые, если р>0,05, то отличия статистически незначимы

Результаты исследования и их обсуждение

У 56-и подопытных животных моделирование цирроза печени проводилось путем введения раствора четырёххлористого углерода (Саркисов Д.С., Рубецкой Л.С, 1965, Брейслер и соавт., 1969, Верин В.К, 1970; Со-лопаев Б.П, 1980; СкобелеваТ.В.,1994; Cameron G.R., Karunaratne W.A.E., 1936; Zimmerman H.J, 1978, Smejkalova J. et al., 1985, Kohno et al, 1991, Abraldes J.G, Garcia-Pagan J.C., 2006). Эта модель формирования цирроза была выбрана ввиду того, что воспроизведенные таким образом склеротические изменения печени сходны с проявлениями цирроза печени человека В течение 4-х месяцев введения CCL4 погибли 30 животных (53,6%). При гистологическом исследовании печени этих кроликов мы наблюдали морфологическую картину острого токсического гепатита, детально описанную Н.Х Абдуллаевым (1989).

Морфологическая характеристика цирроза печени, индуцированного четырёххлористым углеродом, и его естественного патомор-фоза. У всех 6-н животных первой группы сравнения, забитых через 4-е месяца систематического введения CCL4, был выявлен микронодуляр-ный цирроз печени с узелковой трансформацией паренхимы, где узлы-регенераты не превышали в диаметре Змм. При анализе состояния внеклеточных структур установлено, что развитая сеть ретикулярных волокон присутствует в зонах портальных трактов, аргирофильные волокна в узлах-регенератах повсеместно обнаруживались по ходуя синусоидов, фуксинофильные пучки были видны, преимущественно, между ложными дольками При этом процентное содержание кирпично-красных волокон в органе через 4-е месяца от начала затравки кроликов CCL4 в среднем составило 15,2±1,28 Этот внеклеточный матрикс, по данным Н Nakatsukasa et al. (1990), Н. Herbst (1997), представлен коллагеном I, III и IV типов

Выявленная нами капилляризация синусоидов после длительного воздействия CCL4, обусловлена выделением при токсической травме клетками Купфера, гепатоцитами, тромбоцитами и лимфоцитами трансформирующего фактора роста-b, приводящего к активации клеток Ито, которые, в свою очередь, выбрасывая липидсодержащие частицы и приобретая богатый актином цитоскелет, трансформировались в миоб-ласты, вырабатывающие проколлаген (Feroldi J., Mallet-Guy Y., 1979; Greenwel P etal., 1991, Schmitt-Graff A. et al., 1993; Lukita-Atmadja W, Subowo, 1993; Seifert W.F. et al, 1994; Flisiak R., 1997; Herbist H. et al., 1997).

Нами установлена тенденция к уменьшению количества синусоидальных клеток в цирротически изменённой печени по сравнению с их содержанием в печени контрольной группы кроликов, что согласуется с результатами исследований С.Н. Кутиной, Д.Н. Маянского ДН. (1981), К. Hamazaki et al. (1994). В этой связи интерес представляют данные о снижении коллагеназной активности в цирротически измененной печени (Okazaki I.et al., 1976, RoykindМ., Kerschenobich О., 1981; Okazaki J., MaruyamaK., 1985). Длительное и постоянное действие повреждающего фактора (CCLJ, в нашем эксперименте привело к дисбалансу между основными факторами фиброгенеза и коллагенолиза, что обусловлено нарушением антагони-

стической регуляции и, по мнению Г.Н. Крыжановского (2002), является проявлением дизрегуляционной патологии.

Изменения паренхиматозных элементов печени после четырёхмесячной затравки CCL4 подопытных кроликов первой группы сравнения имели диффузный характер и проявлялись гистологическими и ультраструктурными признаками белковой, вакуольной, мелкокапельной жировой дистрофии, а в некоторых гепатоцитах - первой и второй стадиями апоптоза. Этот комплекс обратимых и необратимых изменений обусловлен прямым мембранотропным цитотоксическим действием на гепатоциты CCL4 с активацией перекисного окисления липидов (Владимиров Ю.А, Арчаков А.Н., 1972, Блюгер А.Ф , Майоре А.Я, 1978; Новиков К.Н., 1985; Brattin W.I. et al., 1985, James I.L. et al., 1986; Poli G., 1993). С другой стороны, в персистенции и прогрессировании альтерации гепатоцитов имеют значение выявляемые повреждения эндотелиальных клеток синусоидов ложных долек, накопление коллагена как между эндотелиальными клетками, так и в просветах синусоидов. При морфометрическом анализе установлено, что скопления амилазолабильных ШИК-позитивных гранул (гликогена) определялись в цитоплазме лишь 10,7±0,47% гепатоцитов. Количество интра- и экстрануклеолярных аргетаффинных гранул (8,9±0,03), отражающих скорость клеточной пролиферации, в гепатоцитах было существенно выше, чем в паренхиматозных клетках печени контрольной группы кроликов (4,7±0,07). Нередко у животных первой группы сравнения регистрировались двуядерные гепатоциты (10,9±0,33%). Выявленное в нашем эксперименте достоверное (р<0,001) увеличение диаметра одноядерных и количества двуядерных гепатоцитов при токсическом циррозе, по сравнению с печенью контрольной группы кроликов явилось, по-видимому, результатом продукции и секреции в кровь гепатоцитами, клетками Купфе-ра и Ито факторов, стимулирующих клеточную пролиферацию (инсули-ноподобный, гепатоцитарный, эпидермальный, тромбоцитарный, трансформирующий факторы роста, гепатопоэтины и др.) (Гарбузенко Д В., Попов Г.К, 2001).

Среднее количество сосудов в портальных трактах и септах цирроти-чески изменённой печени в 3 раза превосходило содержание сосудов в печени кроликов контрольной группы 7,2±0,04 и 2Д±0,15 соответственно. 67,8% сосудов в печени животных 1 группы сравнения нами отнесены к

микроциркуляторному руслу, 7,3% - к артериям и 24,8% - к венам. В условиях хронической интоксикации ССЬ4 это явление, вероятно, обусловлено действием основного фактора роста фибробластов, имеющим мощный ангиогенный потенциал, а также действием фактора роста сосудистого эндотелия, которые выделяются фибробластами, макрофагами, нейтро-филами (Головнева Е С., 2000).

При макроскопическом и гистологическом исследовании печени 6-и подопытных кроликов второй группы сравнения, выведенных из эксперимента на 3-4-ой неделе после прекращения затравки, выявлены изменения, характерные для активного микронодулярного цирроза. Основные морфологические проявления этой патологии были сходными с таковыми у животных первой группы сравнения, печень которых мы исследовали после четырехмесячного воздействия ССЬ4 Различия определялись по ряду морфометрических и ультраструктурных показателей альтеративных и компенсаторно-приспособительных реакций.

Через месяц после окончания затравки значительно снизились проявления белковой и жировой дистрофий в гепатоцитах, уменьшилась воспалительно-клеточная инфильтрация в портальных трактах и септах. Достоверно (р<0,05) увеличилась площадь дезоксирибонуклеопротеидов (ДНП) (с 2,3±0,014 до 5,9±0,027мкм2) в ядрах гепатоцитов, что демонстрировало нарастающий уровень синтетических процессов в печени С 10,7±0,47% до 60,4±0,26% возрасло во 2-ой группе сравнения число гепатоцитов, содержащих в цитоплазме гликоген по сравнению с печенью кроликов 1-ой экспериментальной группы, а наультраструюурном уровне нами было отмечено увеличение количества митохондрий в цитоплазме и восстановление кх крист Это согласуется с результатами исследований многих авторов (Саркисов Д.С , рубецкой Л С , 1965; Клярицкая И Л, 1982; Сакута Г.А. и Кудрявцев Б.Н., 1996; Ылкапя Ь.Е. ег а1., 1994), которые в эксперименте доказали, что прекращение повреждающего воздействия на печень сопровождается некоторым улучшением структурной организации и частичной нормализацией функции печени Количество интра- и экстрануклеолярных аргентаффинных гранул, отражающих скорость клеточной пролиферации, достоверно (р<0,001) в нашем эксперименте уменьшалось по истечении месяца с момента окончания затравки с 8,9±0,03 до 6,13±0,048, однако этот уровень был статистически значимо (р=0,0001)

больше, чем в печени контрольной группы кроликов (4,7±0,07).

При сопоставлении результатов исследований в 1-ой и во 2-ой группах сравнения, нами было отмечено достоверное (р<0,005) увеличение количества двуядерных гепатоцитов с 10,9±0,33% до 14,9±0,66%, синусоидальных клеток - с 2,7±0,12 до 7,1±0,24. А как известно, именно синусоидальные клетки, влияя на функции фибробластов, способствуют увеличению секреции коллагеназы, расщепляющей сформированный коллаген (Рината К. & а1., 1973; Оказав1. ег а1., 1974,1976). Достоверное (р<0,05) уменьшение процентного содержания фиброзной ткани с 15,2±1,28 до 9,6±1,23 в течение месяца после окончания интоксикации кроликов ССЬ4 можно объяснить как действием коллагеназы, фагоцитозом и внутриклеточной резорбцией коллагена макрофагами и фиброкластами, так и деструкцией коллагена при активном участии лизосомальных ферментов (Рыв-няк В В и соавт, 1990, Рывняк В В. и соавт., 1996) На светооптическом уровне исследования обращало на себя внимание сужение и укорочение соединительнотканных септ и уменьшение фуксинофильных волокон в портальных трактах. Наиболее тонкие ретикулярные волокна регистрировались в центре узлов-регенератов. При электронной микроскопии фибриллы коллагена в синусоидах имели участки разрыхления.

Неоангиогенез, обусловленный существенной перестройкой внутри-органной сосудистой системы печени при циррозе в портальных трактах и септах подопытных животных, достоверно (р<0,05) увеличился с 7,23±0,15 до 9,15±0,28 в течение месяца после окончания затравки. Среди вновь сформированных сосудов регистрировались мелкие артерии (10,4%), вены (28,4%), сосуды микроциркуляторного русла, на долю которых пришлось 61,2%.

Новообразование мелких желчных протоков в портальных трактах во 2-ой группе сравнения было больше, чем в печени кроликов 1-ой группы сравнения. 6,5±0,42 и 5,8±0ДЗ соответственно, и является, по всей вероятности, отражением местной адаптивной реакции.

Таким образом, через месяц после окончания сиситематического введения ССЬ4, нами были отмечены уменьшения дистрофических и воспалительных изменений, явления резорбции коллагена, нарастание регенераторной активности печени, компенсаторное новообразование сосудов микроциркуляторного русла, мелких артерий и вен.

Динамика морфологических изменений в печени, обусловленных воздействием высокоинтенсивного диодного лазера. В первые сутки после лазерного воздействия на изначально неизменённую печень кроликов нами было зафиксировано несколько различных по морфологическим признакам зон повреждения- собственно зона абляции, зона коагуляционно-го некроза; зона дистрофически измененных гепатоцитов без признаков явного цитолиза Подобные же зоны выделялись И.Я. Бондаревским (1999) при локальном воздействии на печень Nd.YAG, диодным и углекислотным лазерами в экспериментально-клиническом исследовании Эти изменения явились результатом местного фотодеструкгивного эффекта, обусловленного в большей степени термическим воздействием света (Приезжаев А В , 1989), а также механическими эффектами, вызванными скоростью извержения продуктов абляции и ударными волнами (Неворотин А И, 2000).

На 7-е сутки в области предсуществующих лазерных каналов при гистологическом исследовании печени имело место разрастание грануляционной ткани с сосудами капиллярного типа и расположенными между ними макрофагами, фибробластами, лимфоцитами и нейтрофильными гра-нулоцитами Это обусловлено выбросом биологически активных веществ (медиаторов гуморального и клеточного происхождения) после воздействия повреждающего фактора (лазера) на ткани (Серов В.В, Пауков В.С, 1995). Иначе говоря, мы наблюдали следствие «запуска» местной воспалительной реакции, носящей защитно-приспособительный характер (Струков A И., Серов В.В , 1993). Как известно, при воздействии лазером на ткани, в результате денатурации белков не только клеток, но и плазмы, в сосудах происходит её термическая коа1уляция, с последующей незамедлительной остановкой кровотечеши. Отсутствие в такой ране кровяного сгустка и скоплений тромбоцитов приводит к дефициту вазоакгивных посредников играющих большую роль в экссудативной фазе воспаления (Курбанов И.А, 1990, Galetti G, 1983; Maker YK et al, 1990, Грачёва C.B. и соавт, 1993). Причем в очагах лазерной перфорации быстро появляется большое количество тучных клеток с признаками дегрануляции, макрофагов, происходит пролиферация и усиление функциональной активности фиброб-ластов (Головиева Е.С., 2003). Таким образом, можно предположить, что именно эти факторы способствовали невыраженной экссудативной фазе воспаления, которая быстро сменилась фазой пролиферации в зонах ла-

зерной перфорации в печени подопытных животных.

Преобразование зон лазерного воздействия в печени подопытных животных через 30 суток в зрелую соединительную ткань с новообразованными мелкими венами (34%) и сосудами микроциркупяторного русла (66%) в нашем эксперименте обусловлено комплексным взаимодействием факторов роста и протеолитических ферментов, которые создают необходимые условия для пролиферации и миграции эндотелиальных и гладко-мышечных клеток сосудистой стенки и ремоделирования тканей в зонах лазерного воздействия (Головнёва Е.С., 2003).

Через месяц в печени 6-и кроликов 3-ей группы сравнения изменения паренхиматозных клеток вне зон воздействия лазером имели очаговый характер и проявлялись гистологическими признаками белковой дистрофии. Большое количество гепатоцитов (97,6±0,47%) содержали в своей цитоплазме гликоген

Сопоставляя результаты исследований печени третьей экспериментальной и контрольной групп кроликов, отмечалось достоверное (р<0,05) нарастание площади ДНП с 3,09±0,0012 до 4,3±0,054мкм2 в ядрах гепатоцитов, увеличение количества интра- и экстрануклеолярных аргентаффин-ных гранул (с 4,7±0,07 до 8,4±0,089), что явилось отражением пролифера-тивной активности паренхиматозных клеток печени спустя месяц после воздействия лазером. Определялось достоверное (р<0,05) увеличение количества новообразованных сосудов с 2Д±0,04 до 15,4±0,45, преимущественно, за счёт неоангиогенеза в зонах лазерной перфорации, и желчных протоков (с 1,3±0,07 до 3,4±0,2) в портальных трактах спустя месяц после воздействия лазером по сравнению с печенью контрольной группы кроликов. Данные адаптивные процессы в печени, явившиеся следствием повреждения лазером, обусловлены действием широкой палитры факторов роста, способствующих развитию репаративной регенерации в органе (Гар-бузенко Д В , Попов Г К, 2001; Головнёва Е С., 2003).

Заметим, что инфекционно-воспалительных осложнений при исследовании печени после воздействия высокоинтенсивным диодным лазером выявлено не было. Это, по мнению многих авторов (Шестирко Л.И, 1982; Крепак О.М., 1984; Курбанов И.А., 1990; Крочек И.В., 2004; Maker Y.K. et al, 1990), обусловлено гипертермическим воздействием лазерного излучения, ведущим к гибели микробов.

Патоморфоз индуцированного четырёххлористым углеродом цирроза печени через месяц после воздействия высокоинтенсивным лазерным излучением. При макроскопическом и гистологическом исследовании печени 7-и кроликов основной группы, выведенных из эксперимента на 3-4-ой неделе после воздействия высокоинтенсивным диодным лазером, выявлены признаки, характерные для микронодулярного цирроза, общие морфологические проявления которого были схожи с цирроти-ческими изменениями печени подопытных животных 1-ой и 2-ой групп сравнения. Однако обнаружены различия при полуколичественном и количественном анализе степени выраженности репаративной регенерации, склеротических проявлений и неоангиогенеза

В зонах лазерного воздействия поля альтерации в результате последующей воспалительной реакции преобразовались в клеточно-волокнистую соединительную ткань, содержащую сосуды микроциркуляторного русла (67,5%) и мелкие вены (32,5%). Существенных различий в морфогенезе лазерных каналов в печени основной и 3-ей групп сравнения выявлено не было.

Через месяц после воздействия лазером на цирротически изменённую печень кроликов основной экспериментальной г руппы вне зон повреждения среднее количество гепатоцитов, содержащих в своей цитоплазме гликоген, увеличилось в 5,7 раза по сравнению с печенью подопытных животных 1-ой экспериментальной группы (табл 2). Наибольшее количество гепатоцитов, содержащих гликоген, располагалось вблизи портальных трактов, где, безусловно, явления оксигенации выше, а соответственно с большей скоростью нарастает функциональная активность паренхиматозных клеток печени

При изучении патоморфоза индуцированного цирроза печени через месяц после дополнительного лазерного воздействия нами была зарегистрирована достоверно большая площадь ДНП в ядрах гепатоцитов основной группы кроликов, чем в ядрах паренхиматозных клеток печени животных 1-ой и 2-ой групп сравнения (см табл.2) Данный факт является отражением повышения уровня активности синтетических процессов в печени через месяц после стимуляции регенерации лазером

В ходе нашего исследования количество интра- и экстрануклеоляр-ных аргентаффинных гранул достоверно увеличилось в цирротически из-

менённой печени кроликов основной группы (5,4±0,034) по сравнению с печенью контрольной группы подопытных животных (4,7±0,07)

При сопоставлении среднего количества двуядерных гепатоцитов при сформированном токсическом циррозе печени, в группах кроликов через месяц после окончания затравки без и после воздействия лазером, было отмечено их достоверное увеличение (см. табл. 2).

Таблица 2

Сравнительная характеристика ряда морфологических признаков в печени различных групп подопытных кроликов

—^Группы Основная I группа II группа

Признаки группа сравнения сравнения

Количество 61,5±0,054 10,7±0,47 60,4±0,26

гликогенсодержащих Р (1-3) Р (2-1)* Р (3-2)*

гепатоцитов,%

Площадь ДНП в 4,68±0,0078 2,3±0,014 5,9±0,027

гепатоцитах,мкм2 Р (1-2)* Р (2-3)* Р (3-1)*

Количество 15,7±0,57 10,9±0,33 14,9±0,66

двуядерных Р (1-3) Р (2—1)* Р (3-2)*

гепатоцитов,%

Примечания р ()*—сравнения между определёнными группа статистически значимые, р () - сравнения между определенными группа статистически не значимые.

Спустя месяц после лазерного воздействия на цирротически изменённую печень кроликов основной группы процентное соотношение фукси-нофильных волокон к общей площади паренхиматозных элементов имело меньшее значение, чем в печени подопытных животных 1-ой и 2-ой групп сравнения (рис.1).

При электронной микроскопии печени было зарегистрировано разрыхление и фрагментация коллагеновых пучков в просветах синусоидов. Таким образом, мы зафиксировали явления фибролиза при циррозе печени через месяц после дополнительного лазерного воздействия.

Качественная и количественная оценка сосудистого русла в цирротически измененной печени основной группы спустя месяц после воздействия лазером, демонстрировала более активный неоангиогенез, чем в печени кроликов 1-ой и 2-ой групп сравнения (рис.2).

Основная группа 1 группа сравнения 2 группа сравнения

Рис.1. Процентное соотношение фуксинофильных волокон к общей площади паренхиматозных клеток печени в различных экспериментальных группах.

28,7

Основная группа 1 группа сравнения 2 группа сравнения I

I_______________________________]

Рис. 2. Среднее количество сосудов в печени кроликов различных

подопытных групп.

Таким образом, при воздействии высошинтеисивного лазерного излучения на цирротически изменённую печень достоверно нарастали проявления обменно-синтетической и пролиферативной активности в паренхиматозных клетках печени, прослеживалась инволюция склеротических изменений в органе к концу первого месяца после окончания затравки и осуществления лазерной перфорации, достоверно нарастал процесс нео-ангиогенеза.

ВЫВОДЫ

1. В ходе естественного патоморфоза цирроза печени через месяц после окончания затравки процент фиброзной ткани уменьшился в 1,6 раза Достоверно увеличилось количество новообразованных сосудов в портальных трактах и септах в 1,3 раза, двуядерных гепатоцитов - в 1,36 раза, в 2,6 раза увеличилась площадь дезоксирибонуклеопротеидов в ядрах гепатоцитов, возросло число гликогенсодержащих паренхиматозных клеток печени в 5,6 раза;

2. При воздействии на исходно неизменённую печень кроликов высокоинтенсивным диодным лазерным излучением в импульсном режиме работы экссудативная стадия воспаления имела слабо выраженные этапы плазматической экссудации и клеточной инфильтрации В исходе пролиферативной стадии воспаления заживление происходит путем замещения травмированной зоны васкуляризированной соединительной тканью. По периферии от зоны лазерного повреждения в ткани печени регистрировались такие проявления компенсаторно-приспособительных процессов как. достоверное нарастание в 1,4 раза площади дезоксирибонуклеопротеидов в ядрах гепатоцитов, увеличение количества аргентаффинных белков, ассоциированных с зонами ядрышковых организаторов (в 1,8 раза), новообразованных сосудов (в 7,3 раза) и желчных протоков (в 2,6 раза),

3. Через месяц после последовательного воздействия на печень четы-рёххлористым углеродом и высокоинтенсивным лазером, было зафиксировано достоверное уменьшение процента фиброзной ткани в 1,8 раза, то есть определялась частичная инволюция фиброзной ткани. Достоверно увеличилось количество новообразованных сосудов в 3,9 раза, преимуще-

ственно за счет неаонгиогенеза в зонах лазерного воздействия Напряжённость репаративной регенерации печени проявлялась- увеличением количества двуядерных гепатоцитов в 1,44 раза, площади дезоксирибонукле-опротеидов в ядрах гепатоцитов (в 2 раза), число гликогенсодержащих паренхиматозных клеток печени выросло в 5,7 раза;

4. Явления репаративной регенерации и неоангиогенез протекают активнее в цирротически измененной печени после дополнительного воздействия высокоинтенсивного диодного лазера;

5 Потенцирование стимулирующего воздействия на регенерацию печени и неоангиогенез, отсутствие каких либо осложнений во время операции и после неё позволяют рекомендовать применение высокоинтенсивного диодного лазера в импульсном режиме работы и мощностью 18 Вт для клинической апробации метода реваскуляризации печени с целью лечения циррозов печени и связанной с ними портальной гипертензией.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1 Абрамовская, Н.В Патоморфоз цирроза печени после воздействия высокоэнергетического лазерного излучения (экспериментальная работа) I Н.В Абрамовская, Д В Гарбузенко, В.Л Коваленко // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии Приложение № 22 Материалы IX Российской конференции «Гепатология сегодня». - Москва, 2004 - С. 35

2. Абрамовская, Н В. Патоморфоз печени после воздействия на нее высокоэнергетическим лазерным излучением (экспериментальная работа) / Н В Абрамовская, Д В Гарбузенко, А В Лукин, Д А Кувыкин // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. Приложение № 24. Материалы X Российской конференции «Гепатология сегодня».-Москва, 2005. - С 96

3 Абрамовская, Н В. Естественный патоморфоз цирроза печени индуцированного четыреххлористым углеродом и особенности репаративной регенерации после воздействия высокоэнергетического лазерного излучения на цирротически измененную печень / Н В Абрамовская, Д.В.Гар-

бузенко, В Л. Коваленко //Актуальные вопросы хирургии. Сборник научно-практических работ. - Челябинск, 2006. - С. 173 - 176.

4. Абрамовская, Н.В. Сравнительная морфологическая характеристика дистрофических изменений, репаративной регенерации при циррозе печени, индуцированном четырёххлористым углеродом, при его естественном патоморфозе и после дополнительного воздействия на цирротически изменённую печень высокоинтенсивным диодным лазером / Н.В. Абрамовская // Иероглиф. Сборник научно-практических работ - Челябинск, 2007.-С. 1299-1305.

5. Коваленко, ВЛ. Морфологическая характеристика компенсаторно-приспособительных реакций в цирротически изменённой печени после воздействия на неё высокоинтенсивным лазерным излучением / В.Л. Коваленко, Н В Абрамовская, Д.В Гарбузенко // Уральский Медицинский Журнал. Специализированный научно-практический медицинский журнал. -Екатеринбург, 2007, № 12(40). - С. 75 - 78.

6. Абрамовская, Н В Сравнительная морфологическая оценка экспрессии аргентаффинных белков области ядрышковых организаторов как показателя пролиферативной активности гепатоцитов при циррозе печени, индуцированном четырёххлористым углеродом, и его патоморфозе после дополнительного воздействия на цирротически изменённую ткань печени высокоинтенсивным лазерным излучением / Н.В. Абрамовская, В Л. Коваленко // Актуальные вопросы нормальной и патологической морфологии Сборник научно-практических работ - Рязань, 2008. - С. 28 - 32.

На правах рукописи

АБРАМОВСКАЯ Наталья Владимировна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ, ИНДУЦИРОВАННОГО ЧЕТЫРЁХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ, И ЕГО ПАТОМОРФОЗА ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ПЕЧЕНЬ ВЫСОКОИНТЕНСИВНОГО ДИОДНОГО ЛАЗЕРА (экспериментальное исследование)

14 00 15 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2008

Отпечатано в полиграфическом отделе ООО "Институт медико-социальных исследований" Подписанов в печать 25 02 2008 г Формат 60x84'Лб Бумага офсетная Гарнитура Times New Roman Cyr Уел пл 1,0 Печать на ризографе Тираж 100

Актуальность темы

Сохраняющаяся устойчивая тенденция во всём мире к росту алкогольных поражений печени, нарастающие неблагоприятные экологические сдвиги и'бурная химизация современной жизни, повышение заболеваемости вирусными гепатитами, приводят к увеличению хронических диффузных поражений гепатобилиарной системы, в том числе и циррозов печени (Недогода В.В., 2000). Среди причин приобретённых циррозов печени в настоящее время 30-35% приходится на токсические причины (чаще алкогольные), 15-20% — на инфекционные (чаще вирусные). В 45-55% случаев цирроз печени относят к билиарному, обменно-алиментарному, дисциркуляторному и смешанному (Некрасова Т.Н., 2007). Заболеваемость циррозом печени в настоящее время в России составляет около 20-40 на 100 тысяч населения и непрерывно растёт. Самые частые осложнения цирроза печени - желудочно-кишечные кровотечения, развивающиеся у 45% больных, и печёночная недостаточность, которая выявляется у 67% пациентов. В 2004 году смертность от цирроза печени у российских мужчин увеличилась в 2,3 раза по сравнению с 1991 годом. При анализе основных причин смерти населения г. Москва в 2005г., по данным Мосгорстата установлено, что 5370 человек умерло от болезней органов пищеварения (XI класс МКБ-10), из них 1390 приходится на смерть от цирроза печени, что составляет 13,3 на 100 тыс. населения или 1,1% ко всем умершим жителям г. Москва (Зайратьянц О.В., Ковальский Г.Б., Рыбакова М.Г. и соавт., 2006).

Возрастание медицинской и социальной значимости хронических заболеваний печени требует новых усилий в разработке вопросов этиологии, патогенеза, иммунологии, диагностики, лечения и профилактики этих заболеваний.

Больные с декомпенсированным циррозом печени нуждаются в диетическом, эндоскопическом, а в ряде случаев и хирургическом лечении. В настоящее время радикальным хирургическим методом лечения циррозов печени является ортотопическая аллотрансплантация печени (Готье С.В., Ермишанцев А.К., Цирюльникова О.М. и соавт., 2005). Однако её техническая сложность, дефицит донорских органов, высокая стоимость лечения ограничивают широкое внедрение этой операции в клиническую практику и стимулируют поиск более доступных методов лечения. В комплексном лечении цирроза печени альтернативой пересадке органа рассматривается стимуляция компенсаторно-приспособительных (адаптивных) реакций. Одни авторы (Саркисов Д.С., Пауков B.C., Литвицкий П.Ф., 2002) к этим реакциям относят регенерацию, гипертрофию и перестройку тканей, другие же (Пальцева Е.М., Кузнецова А.В., Иванов А.А., 2007) включают в них атрофию, гипертрофию, гиперплазию и метаплазию. Причём при коррекции портальной гипертензии и обусловленных ею осложнений при циррозе печени, в связи с перестройкой сосудистого русла, особое внимание уделяется стимуляции неоангиогенеза (Reichen J., Lebreec., 2007). К настоящему времени разработано множество способов стимуляции регенерации печени, которые в основном сводятся к дозированному повреждению или коррекции нарушенных обменных процессов с помощью физиотерапевтических или медикаментозных средств (Муслимов С.А., 2000). Существующие методы, направленные на усиление репаративной. регенерации печени, в большинстве случаев дают определённый положительный эффект, однако, кардинально-не решают проблему регенерации печени (Найтарлаков М.А.,1999; Цирятьева С.Б., 2002). В этом плане привлекают внимание возможности использования высокоинтенсивного лазерного излучения для управления процессами саногенеза. В последнее десятилетие в литературе широко освещались отдельные проявления особенностей альтерации, воспалительно-репаративных и адаптивных реакций при использовании различных видов лазерного излучения как на неизменённые, так и на патологически изменённые органы в эксперименте и клинике (Неворотин А.С., 2000; Головнёва Е.С., Попов Г.К., Астахова J1.B., 2002; Гиниатуллин Р.У. и соавт., 2003; Крочек И.В., Привалов В.A., JIanna А.В. и соавт., 2004).

В связи с этим актуальным представляется проведение комплексного сравнительного морфологического исследования для получения достоверных данных о естественном патоморфозе индуцированного токсического цирроза печени и изменчивости его при воздействии на орган высокоинтенсивным диодным лазером в импульсном режиме работы.

Цель работы

На экспериментальной модели представить сравнительную морфологическую характеристику повреждения и компенсаторно-приспособительных (адаптивных) процессов при циррозе печени, индуцированном у беспородных кроликов четырёххлористым углеродом, и его патоморфозе после воздействия высокоинтенсивного диодного лазера для решения вопроса о целесообразности применения данного метода реваскуляризации при лечении циррозов и связанной с ними портальной гипертензии.

Задачи работы

1. Представить морфологическую характеристику процессов повреждения, компенсации и приспособления в цирротически изменённой печени при воздействии четырёххлористого углерода и их динамику в течение месяца после окончания затравки;

2. Изучить динамику морфологических изменений в нормальной печени кроликов после воздействия высокоинтенсивного диодного лазера на орган;

3. Оценить динамику процессов повреждения и адаптивных реакций при последовательном воздействии на печень четырёххлористым углеродом и высокоинтенсивным диодным лазером;

4. Сравнить регенеративную способность и неоангиогенез в цир-ротически изменённой печени в эксперименте без и после дополнительного воздействия лазером;

5. На основании результатов данного исследования решить вопрос о возможности применения высокоинтенсивного лазерного излучения в клинической апробации данного метода реваскуляризации печени в лечении циррозов и связонной с ними портальной гипертензии.

Научная новизна работы

Впервые с применением гистологических, морфометрических и электронномикроскопических методов на подопытных беспородных кроликах, у которых цирроз печени был индуцирован четырёххлористым углеродом, проведено комплексное изучение динамики процессов альтерации, компенсации и приспособления после воздействия на печень высокоинтенсивного излучения с использованием диодного лазера.

Показано снижение проявлений белковой и жировой дистрофии в цирротически изменённой печени спустя месяц после лазерного воздействия.

В экспериментальной группе кроликов, где на цирротически изменённую ткань печени воздействовали высокоинтенсивным лазерным излучением, продемонстрировано нарастание таких проявлений репара-тивной регенерации печени как: увеличение в гепатоцитах числа митохондрий с восстановлением крист, нарастание площади дезоксирибонуклеопротеидов в ядрах, повышение уровня гликогена в цитоплазме паренхиматозных клеток печени, увеличение числа двуядерных гепа-тоцитов и синусоидальных клеток.

В ходе эксперимента были отмечены снижение воспалительно-клеточной инфильтрации в портальных трактах и септах, увеличение количества новообразованных сосудов и желчных протоков в трактах и септах, которые носили приспособительный характер.

Была зафиксирована частичная инволюция фиброзной ткани, характеризующаяся истончением и укорочением фиброзных септ с уменьшением содержания коллагеновых волокон. При изучении морфологических изменений в печени животных после воздействия на орган высокоинтенсивного лазерного излучения осложнений выявлено не было.

На основании сравнительного анализа полученных результатов при экспериментальном циррозе показано, что регенерация в печени протекает активнее после воздействия высокоинтенсивным диодным лазером в импульсном режиме работы, а процесс неоангиогенеза существенно превалирует за счёт новообразования сосудов преимущественно в ' зонах лазерного воздействия.

Практическая значимость работы

Результатами проведённого экспериментального исследования показана целесообразность воздействия на цирротически изменённую-печень подопытных кроликов высокоинтенсивного диодного лазера с целью стимуляции регенерации и активации неоангиогенеза. Это позволяет проводить дальнейшее исследование адаптивных реакций при использовании данного метода реваскуляризации в цирротически изменённой печени человека.

Положения, выносимые на защиту

1. Через месяц после окончания четырёхмесячной затравки подопытных животных четырёххлористым углеродом имеют место частичная инволюция фиброзной ткани в цирротически изменённой печени, признаки репаративной регенерации, неоангиогенез;

2. При воздействии на изначально неизменённую печень кроликов высокоинтенсивным диодным лазерным излучением в импульсном режиме работы экссудативная фаза воспаления имеет слабо выраженные этапы плазматической экссудации и клеточной инфильтрации. В исходе пролиферативной стадии воспаления заживление происходит путём замещения травмированной зоны васкуляризированной соединительной тканью;

3. Спустя месяц после последовательного воздействии на печень четырёххлористым углеродом и высокоинтенсивным диодным лазером определяется частичная инволюция фиброзной ткани и признаки репаративной регенерации. Одним из проявлений адаптивных реакций цирротически изменённой печени фигурирует неоангиогенез как в портальных трактах и септах, так и в зоне лазерного повреждения;

4. Явления репаративной регенерации и неоангиогенез происходят активнее в цирротически изменённой печени после дополнительного воздействия высокоинтенсивным диодным лазером.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на пленарном заседании Челябинского отделения Российского общества патологоанатомов (июнь 2007 г.), на совместном заседании кафедры патологической анатомии и хирургических кафедр Челябинской государственной медицинской академии (октябрь, 2007 г.).

Внедрение результатов диссертационной работы

Результаты данного исследования используются в педагогическом процессе на кафедрах патологической анатомии и факультетской хирургии Челябинской государственной медицинской академии.

Высокоинтенсивный диодный лазер в импульсном режиме работы и мощностью 18 Вт применяется в клинической апробации метода рева-скуляризации печени с целью лечения циррозов печени человека и связанной с ними портальной гипертензией.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 1 — в центральном журнале.

Объём и структура диссертации

Работа состоит из оглавления, списка сокращений, введения, 4 глав собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Материал изложен на 182 станицах машинописного текста, иллюстрирован 112 рисунками (в том числе: 7 макрофотографиями, 67 микрофотографиями, 17 электроно-граммами, 15 диаграммами, 6 графиками) и 2 таблицами. При написании обзора литературы использовано 156 источников (128 отечественных и 28 зарубежных публикаций).

выводы

1. В ходе естественного патоморфоза цирроза печени через месяц после окончания затравки процент фиброзной ткани уменьшился в 1,6 раза. Достоверно увеличились количество новообразованных сосудов в портальных трактах и септах в 1,3 раза, двуядерных гепатоцитов - в 1,36 раза, в 2,6 раза увеличилась площадь дезоксирибонуклеопротеидов в ядрах гепатоцитов, возросло число гликогенсодержащих паренхиматозных клеток печени в 5,6 раза;

2. При воздействии на исходно неизменённую печень кроликов высокоинтенсивным диодным лазерным излучением в импульсном режиме работы экссудативная фаза воспаления имела слабо выраженные этапы плазматической экссудации и клеточной инфильтрации. В исходе про-лиферативной стадии воспаления заживление происходит путём замещения травмированной зоны васкуляризированной соединительной тканью. По периферии от зоны лазерного повреждения в ткани печени регистрировались такие проявления компенсаторно-приспособительных процессов как: достоверное нарастание в 1,4 раза площади дезоксирибонуклеопротеидов в ядрах гепатоцитов, увеличение количества аргентаф-финных белков, ассоциированных с зонами ядрышковых организаторов (в 1,8 раза), новообразованных сосудов (в 7,3 раза) и желчных протоков (в 2,6 раза);

3. Через месяц после последовательного воздействия на печень четы-рёххлористым углеродом и высокоинтенсивным лазером, было зафиксировано достоверное уменьшение процентного содержания фиброзной ткани в 1,8 раза, то есть определялась частичная инволюция фиброзной ткани. Достоверно увеличились количество новообразованных сосудов в 3,9 раза, преимущественно за счёт неаонгиогенеза в занах лазерного воздействия. Напряжённость репаративной регенерации печени проявлялась: увеличением количества двуядерных гепатоцитов в 1,44 раза, площади дезоксирибонуклеопротеидов в ядрах гепатоцитов (в 2 раза), числа гликогенсодержащих паренхиматозных клеток печени выросло в 5,7 раза;

4. Явления репаративной регенерации и неоангиогенез протекают активнее в цирротически изменённой печени после дополнительного воздействия высокоинтенсивного диодного лазера;

5. Потенцирование стимулирующего воздействия на регенерацию печени и неоангиогенез, отсутствие каких либо осложнений во время операции и после неё позволяют рекомендовать применение высокоинтенсивного диодного лазера в импульсном режиме работы и мощностью 3-5 Вт для клинической апробации метода реваскуляризации печени с целью лечения циррозов печени и связанной с ними портальной гипертен-зией.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При подкожном введении подопытным кроликам 2 раза в неделю на протяжении 4-х месяцев 40% раствора четырёххлористого углерода в подсолнечном масле из расчёта 0,3 мл на килограмм массы тела нами был сформирован микронодулярный цирроз печени, обусловленный цитотоксическим мембранотропным действием яда. Характерными признаками этого цирроза печени были: узелковая трансформация паренхимы с формированием узлов-регенератов не превышающих в* диаметре 3 мм, вакуольная дегенерация цитоплазмы, нарушение целостности ядерной и цитоплазматической мембран, набухание митохондрий с редукцией числа и размера крист, разрушение эндоплазматической сети, кариопикноз, снижение уровня гликогена в гепатоцитах, накопление в синусоидах коллагеновых, ретикулярных волокон и фибробластов, обуславливающих синусоидальную капилляризацию. Одновременно с признаками развития дистрофических, некротических и фибропластических процессов, в различных отделах ложных долек при цирротическом поражении печени нами были отмечены следующие компенсаторно-приспособительные процессы, направленные на восстановление исходной структуры органа: увеличение количества двуядерных гепатоцитов; повышение уровня аргентаффинных белков, ассоциированных с зонами ядрышковых организаторов, нарастание площади дезоксирибонуклео-протеидов в ядрах гепатоцитов, новообразование сосудов и желчных протоков в портальных трактах.

Через месяц после окончания затравки в печени кроликов 2-ой группы сравнения и основной экспериментальной группы при макроскопическом и гистологическом исследовании были выявлены признаки, характерные для микронодулярного цирроза печени. Однако обращали на себя внимание частичная инволюция фиброзной ткани и признаки активной репаративной регенерации, которые характеризовались: увеличением в гепатоцитах числа митохондрий с наличием крист, снижением проявлений белковой и жировой дистрофий, повышением уровня гликогена в цитоплазме паренхиматозных клеток печени, увеличением площади дезоксирибонуклеопротеидов, нарастанием числа двуядерных гепатоцитов и синусоидальных клеток, истончением и укорочением фиброзных септ с уменьшением процентного содержания коллагеновых волокон, увеличением количества новообразованных сосудов и желчных протоков в трактах и септах.

При повреждении изначально неизменённой печени кроликов высокоинтенсивным диодным лазером с импульсным режимом работы, экссудативная фаза воспаления имела слабо выраженные этапы плазматической экссудации и клеточной инфильтрации. В исходе пролифера-тивной стадии воспаления заживление происходило путём замещения травмированной зоны васкуляризированной соединительной тканью. В течение месяца в зоне рубца была отмечена дифференцировка капилляров до мелких вен.

При сравнении естественного и стимулированного лазером па-томорфоза цирроза печени (см. приложение), были обнаружены различия при полуколичественном и количественном анализе степени выраженности реперативной регенерации, склеротических проявлений и не-оангиогенеза. Так, количество двуядерных и гликогенсодержищих гепатоцитов было большее в печени кроликов той экспериментальной группы, где на цирротически изменённый орган воздействовали лазером. Корме этого, содержание фиброзной ткани было меньшее, а процесс не-оангиогенеза- более активным.

Различий в морфогенезе зон лазерных воздействий в печени кроликов основной и 3-ей группы сравнения выявлено не было.

Заметим, что инфекционно-воспалительные осложнения при исследовании печени после воздействия высокоинтенсивным диодным лазером не были обнаружены.

161