Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Сравнительная характеристика гиполипидемической активности новых сорбентов холестерина и желчных кислот

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

Ордена Трудового Красного Знамени Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины

На правах рукописи УДК 615.272.4

Фролова Юлия Владимировна

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НОВЫХ СОРБЕНТОВ ХОЛЕСТЕРИНА И ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ

14.00.25 — фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 1992

Работа выполнена в лаборатории фармакотерапия нарушений лшшд-ного обмена отдела биохимии ордена Трудового Красного Знамени Научно-исследовательского института экспериментальной медицины АМН (директор — академик АМН Б. И. Т КАЧЕН КО)

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор В. Е. РЫЖЕНКОВ

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук И. А. ЛОСЕВ

доктор медицинских наук М. Я■ МАЛАХОВА

Ведущее учреждение: 1-й Ленинградский ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт им. акад. И. П. Павлова

Защита диссертации состоится »—- 1992 г.

в « »час. на заседании специализированного совета Д001.23.01 по защите докторских диссертаций при НИИЭМ АМН по адресу: С-Петербург, ул. акад. И. П. Павлова, 12.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке НИИЭМ АМН по адресу: ул. акад. И. П. Павлова, 12.

Автореферат разослан « »- 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических наук

Л. В. ПУЧКОВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время установлено, что одним из главных факторов риска развития атеросклероза ¡1 его осложнений являются дислипопротеидемии (ДЛП) ате-рогенного характера (А. Н. Климов, 1984; Lipid Research Clinics Program, 1984; National Cholesterol Educ. Program, 1988). Фармакотерапия атерогенных ДЛП направлена на нормализацию нарушенного обмена лнпидов и лппопротеидов (ЛП) и, в первую очередь, на снижение-содержания холестерина (ХС) н атерогенных ЛП в плазме крови. Потребность практической медицины в новых эффективных и малотоксичных соединениях, обладающих гнполипидемическим и/или антиатероскле-ротическим действием, очень велика в связи с тем, что существующие препараты малочисленны и часто вызывают побочные явления.

В литературе имеются сведения о том, что предрасположенность к развитию гиперхолестерннемин и атеросклероза у людей в значительной степени определяется интенсивностью всасывания ХС в кишечнике и синтеза желчных кислот (ЖК) (Kesaniemi, 1986; Simonen, 1987). В этой связи вещества, сорбирующие ХС и ЖК в кишечнике, т. е. энтеросорбенты (ЭС), представляют существенный интерес с точки зрения фармакологической коррекции атерогенных ДЛП, особенно учитывая, что они не всасываются в кровоток и лишены системной токсичности. До настоящего времени не существует специфических ЭС холестерина, а применяемые в качестве гиполипиде-мических средств зарубежные энтеросорбенты ЖК (желчные секвестрам™) холестирамин и колестипол, несмотря на выраженность терапевтического действия (Basta, 1976; Brensike, 1984; Blankenborn, 1987), вызывают ряд побочных явлений со стороны желудочно-кишечного тракта (констипация, метеоризм) вследствие нерастворимости в воде, что приводит к частому отказу больных от их приема (Hanefeld, 1987). В связи с этим поиск и изучение водорастворимых специфических ЭС холестерина п ЖК, лишенных указанных недостатков, является актуальным.

Учитывая изложенное, в данной работе было проведено экспериментальное изучение гиполипидемической активности новых отечественных водорастворимых синтетических ЭС Х-ВПМА, Нto—go и ЭД, содержащих в качестве лнганда холин-хлорид или дигитонин, в сравнении с известным зарубежным препаратом холестирамином.

Имеются указания на эффективность сочегаиного применения веществ с разным механизмом действия при нарушениях липидного обмена и атеросклерозе, что позволяет в большинстве случаев значительно снизить уровень липидов в крови, уменьшить дозу каждого из препаратов и избежать побочного их действия (Thompson, 1989; Illingworth, 1990). В этом отношении экспериментальное изучение нового водорастворимого отечественного ЭС в комбинации с отечественным (ресинтези-рованным) гиполипндемическим препаратом гемфиброзилом представляется актуальным и перспективным.

Одним из подходов к преодолению недостатков нерастворимых ЭС явилось создание вазозана П (ФРГ) —новой формы холестирамина, обогащенной пектином. Последний, как известно, улучшает эвакуаторную функцию кишечника и обладает умеренным гиполипндемическим действием (Kay, 1977; Gibney, 1986). Нами проведено экспериментальное изучение вазозана П в сравнении с холестирамином.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилась экспериментальная оценка гиполипидемической активности новых отечественных водорастворимых синтетических ЭС желчных кислот, в сравнении с холестирамином, а также специфического ЭС холестерина, и эффективности соче-танного применения одного из них с гемфиброзилом.

Конкретные задачи сводились к следующему:

1. Провести сравнительное изучение действия на липиды сыворотки крови и печени лабораторных животных разных видов с экспериментальной гиперхолестеринемией двух холнн-содержащих соединений (Х-ВПМА и Нш_9о), отличающихся по структуре полимера и количеству иммобилизованного холина, а также дигитонинсодержащего энтеросорбента (ЭД)-

2. Определить влияние названных соединений на спектр ЛП сыворотки крови.

3. Выяснить возможный- механизм гиполипидемического действия соединений Х-ВПМА, Hi9_90 и ЭД в опытах in vitro и in vivo.

4. Исследовать действие сочетанного применения соединения И19—90 и отечественного гемфиброзила на липиды сыворот-

ки крови н печени, а также на спектр ЛП сыворотки крови крыс с индуцированной ДЛП.

Положения, выносимые на защиту.

1. Новые отечественные водорастворимые полимерные соединения Х-ВПМА, Н19—90 н ЭД оказывают выраженное гипо-липидемическое действие в эксперименте.

2. В механизме этого действия у соединения Hi9_90 выявляется специфическое свойство сорбировать ЖК, а у ЭД — сорбировать ХС в кишечнике, в то время как у соединения Х-ВПМЛ обнаруживается как способность сорбировать ЖК. так и ингпбировать всасывание ХС.

3. Показано, что сочетанное применение отечественного ЭС желчных кислот Hin-po » гемфиброзила является эффективным способом фармакологической коррекции нарушений обмена лнпндов и ЛП в эксперименте.

Научная новизна исследования. В настоящей работе впервые проведено экспериментальное исследование отечественных водорастворимых полимерных соединений Х-ВПМА, Hi9_9o и ЭД, не имеющих аналогов, в сравнении с известным зарубежным желчным секвестрантом холестирамином. Изучена специфическая активность новой формы холестирамина, обогащенной пектином — вазозана П. Установлено, что по выраженности гиполипидсмического действия и способности улучшать нарушенный спектр ЛП, все названные соединения превосходят холестирамин. Наибольшая эффективность выявлена у Х-ВПМА н вазозана П.

Впервые показано, что соединение Нш_д0 является водорастворимым специфическим ЭС желчных кислот. В опытах in vivo и in vi 1го установлено, что ЭД является аффинным сорбентом ХС. Показано, что соединение Х-ВГ1МА сорбирует ЖК и угнетает всасывание холестерина.

Установлено, что сочетанное применение одного из новых отечественных ЭС Н]г,_м и гемфиброзила приводит к потенцированию птохолсстерикемичсского действия, оказывает нормализующее влияние на нарушенный спектр ЛП, значительно увеличивая фракцию антиатерогенных ЛП высокой плотности (ЛПБП), и эффективно уменьшает аккумуляцию ХС в печени в условиях индицированной ДЛП.

Научно-практическое значение работы. Выраженное гипо-липидемическое действие исследованных ЭС позволяет рекомендовать наиболее активный из них Х-ВПМА, а также сочетание Н|:,_90 с гемфиброзилом в качестве средств профилак-

тики и лечения атеросклероза после полного нредклинического изучения в соответствии с требованиями Фармкомитета МЗ-

В процессе исследования установлено, что иммобилизация дигнтонииа на высокомолекулярном водорастворимом полимерном носи i еле не только не препятствует проявлению гипо-липидемического действия сапонина, но и устраняет его токсическое влияние на кишечную стенку.

Выявленная в эксперименте гиполипидемическая активность вазозана П, более выраженная по сравнению с холе-стирам'Ином, указывает на перспективность обогащения специфических нерастворимых ЭС пектином и другими пищевыми волокнами с целью создания новых лекарственных форм с улучшенными свойствами.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на Всесоюзном симпозиуме по биохимии липидов (Алма-Ата, 1987), VI Всесоюзном съезде фармакологов (Ташкент, 1988), VIII Всесоюзном научном симпозиуме «Синтетические полимеры медицинского назначения» ('Киев, 1989), на Всесоюзной научной -школе-семинаре «Старение и патология» (Тер-нополь, 1989), V Международной конференции «Проблемы клинической и экспериментальной фармакологии и побочных действий лекарственных средств» (Тбилиси, 1990), Республиканской научно-практической конференции «Синтез и применение энтеросорбентов» (Конаково, 1990), VII Международном симпозиуме «Липопротеиды и атеросклероз» (Дрезден, 1991), а также на научных заседаниях лаборатории фармакотерапии нарушений липидного обмена и отдела биохимии НИИЭМ АМН (1988—1991).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Реализация работы. Установленное в ходе исследования гиполипидемическое действие комплексных водорастворимых соединений, являющихся высокомолекулярными полимерами, модифицированными сапонином дигитонином или холин-хло-ридом, позволяет .осуществлять целенаправленный поиск нового класса специфических энтеросорбентов.

На наиболее активное из выявленных соединений — хо-линсодержащий полимер Х-ВПМА подготавливаются материалы для представления в Фармкомитет с целью получения разрешения на его клиническую апробацию в качестве средства профилактики и лечения атеросклероза.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, пяти глав, обсуждения результатов исследования,

выводов и списка литературы, включающего 200 источников. Работа изложена на /to стр. машинописного текста, иллюстрирована 9 рисунками и 24 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Работа выполнена на взрослых животных-самцах: 60 мышах (18—25 г), 400 белых крысах (210—250 г), 116 морских свинках (300—450 г) л 42 кроликах (3,0—3,5 кг).

После предварительного изучения биологической активности более чем 17 образцов высокомолекулярных водорастворимых соединений, отличающихся количеством иммобилизованного лиганда, структурой полимерного носителя, способом синтеза, очистки и др., подробному исследованию были подвергнуты 3 наиболее эффективных из них — Х-ВПМА, Hig-oo н ЭД. Результаты исследования представлены в данной работе.

Изучены отечественные водорастворимые полимеры: а) холинсодержащие — Х-ВПМА и Н10_-9О, которые отличаются количеством иммобилизованного холин-хлорида (250 мг/г и 500 мг/г), структурой мономеров, молекулярной массой (70— 80 тыс. Да и 100 тыс. Да) и т. д.; б) ЭД — полимер, содержащий иммобилизованный дигитонин (450 мг/г), имеющий- молекулярную массу около 80 тыс. Да. Эти соединения были созданы в результате совместной работы НИИЭМ АМН, НИИ физико-химической медицины (Москва) « Института элементоорганическнх соединений им. акад. Несмеянова АН (Москва).

Лиганд холин-хлорнд использован как донатор активных групп триметнламмония, наличие которых в структуре холе-стирамина определяет, в частности, его свойство сорбировать ЖК. Сапонин дигитонин, как известно, образует комплексы с ХС (Windaus, 1909). Однако он оказывает токсическое действие при попадании в системный кровоток (Kofier, 1925). Иммобилизация дигитонина на водорастворимом высокомолекулярном полимерном носителе имела целью создание селективного сорбента ХС, не всасывающегося в кишечнике.

В работе изучена также гиполнпидемическая активность новой формы холестирамина, обогащенной 20% пектина — вазозап П (ФРГ). В качестве препарата сравнения был использован желчный секвестрант холестирамнн (ФРГ). При исследовании гиполипидемической активности одного из новых соединений Hie-so в условиях сочетанного введения-был

применен ресинтезированный отечественный препарат гемфи-брозил ('ВНИХФИ, Мо-сква).

Определение острой токсичности изученных веществ показало, что плюральное введение мышам Х->ВПМА, Нш-м, ЭД, вазозана П и холестирамина в дозах от 5 до 10 г/кг не вызывает токсического действия и видимых изменений поведения животных.

Соединения изучали в следующих дозах: в опытах на кроликах— 250 мг/кг, в опытах на морских свинках — 500 мг/кг (в части случаев — 250 мг/кг), в опытах на крысах — 250 мг/кг (водорастворимые ЭС); 2,5 г/кг (вазозан П); 250 мг/кг, 800 мг/кг и 2,5 г/кг (холестирамин). Вещества вводили с кормом или через зонд, начиная с 1-го дня эксперимента (крысы, морские свинки), или в течение 2-го и 3-го месяцев от начала опыта (кролики). В случае сочетанного применения соединений интервал между введениями составлял не менее 2 часов.

Экспериментальную дислипопротеидемию у крыс вызывали введением в диету животных 2,5% ХС; 0,12% 6-метил-тиоурацила и 30% прогретого подсолнечного масла. В части опытов крысы получали с ;кормом 5% ХС и 30% смеси подсолнечного масла и свиного жира (1:1). Продолжительность экспериментов составляла 14 дней, в части опытов 27 дней.

Дислипопротеидемию у морских свинок индуцировали пероральным введением 0,5 г/кг ХС в смеси жиров (свиной жир м подсолнечное масло в соотношении 4:1) в течение 15—20 дней (Методические рекомендации Минздрава СССР, 1988).

В опытах на кроликах животным перорально вводили 0,4 г/кг ХС в прогретом подсолнечном масле в течение 2-х месяцев. Последующие 30—45 дней кролики получали обычный овощной рацион.

Кровь забирали после 18-часового голодания животных. По окончании опыта крыс и морских свинок забивали дека-питацией, кроликов — воздушной эмболией под наркозом.

Содержание общего ХС, a-ХС и приглицеридов (ТГ) в сыворотке крови животных определяли на автоанализаторе АА-П фирмы «Техникой» (США). Содержание липидоввго-могенатах печени оценивал« после предварительной их экстракции по методу Bragdon (1960); содержание ХС определяли с использованием цветной реакции Либермана — Бур-харда, ТГ — по методу Neri (1973), фосфолипидов — по методу Vaskovsky (1975). Изучение спектра ЛП сыворотки

крови животных проводили, используя ультрацентрифугирование ее в градиенте плотности КВг по методу Terpstra (1981), а также при аналитическом ультрацентрифугирова-11 ни на ультрацентрифуге модели Е фирмы «Beckman» (США) с учетом всех особенностей метода, оговоренных в работе Ewing и соаст. (1965).

В опытах in vitro изучали способность соединений связывать соли ЖК (холат, гликохолат и таурохолат натрия) по методу Kuron (1980), а также холестерина—в соответствии с методом Malinow (1978) в модификации И. П. Андриановой и соавт. (1986).

Изучение влияния соединений на всасывание Н3-холевой кислоты из кишечника крыс проводили по методу Gallo (1965), 4-Си-холестерина— по методу Zilversmit (1974) в модификации Malinow (1977) и Сауеп (1979).

Статистическая обработка результатов, полученных в ходе исследования, проведена с использованием параметрического критерия t Стъюдента. Достоверность различий считали установленной при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Экспериментальное изучение холинсодержащего соединения Х-ВПМА.

а. Влияние Х-ВПМА на развитие экспериментальной дислипопротеиде-мин.

В связи с тем, что спектр ЛП сыворотки крови животных разных видов имеет определенные отличия (Т. Н. Ловягина, 1970; Chapman, 1980), для объективизации оценки и более полной характеристики гиполнпидемического действия исследуемых веществ их изучение проводили на нескольких видах животных согласно Методическим рекомендациям Минздрава СССР (1988).

Гиполипидемнческую активность соединения Х-ВПМА изучали в опытах на крысах, морских свинках и кроликах с индуцированной ДЛП. Крысам и кроликам соединение вводили в дозе 250 мг/кг, морским свинкам — 500 мг/кг. В опытах на крысах было установлено, что пероральное введение Х-В'ПМ'А вызывает снижение гиперхолестеринемии на 29% и уменьшает накопление ХС в печени на 22% (табл. 1). В то же время, подобное гиполипидемическое действие препарат сравнения холестирамин оказал при применении в дозе, в 10 раз большей (2,5 г/кг).

В следующей серии опытов на крысах было проведено сравнительное изучение гиполипидемической активности Х-ВПМА и холин-хлорида, вводившегося животным в количестве, соответствующем его содержанию в примененной дозе Х-!ВПМА. Установлено, что только иммобилизованный на полимере хо-лйн-хлорид обладает гиполипидемлческим действием.

Сравнительное изучение соединения Х-ВПМА и холести-рамина в опыте на морских свинках с индуцированной ДЛИ также показало более выраженную гипохолестеринемическую эффективность цри применении нового холинсодержащего полимера. .•

Таблица 1

Влияние Х-ВПМА и холестирамниа (Ха) на содержание липидов в сыворотке крови и печени крыс с экспериментальной дислипопротеидемией

Группа животных Липиды сыворотки крови, ммоль/л Липиды печени, мг/г

ХС ТГ ХС ТГ

1. Интактная, п = 5 2. Получавшая ГХС диету, /г=12 3. Получавшая ГХС диету-)-Х-ВПМА (250 мг/кг), п= 11 4. Получавшая ГХС диету+Ха (250 мг/кг), п= 11 5. Получавшая ГХС диету+Ха (2,5 г/кг), я=11 1,37+0,05 0,72+0,12 2,93±0,26 10,40±0,60

4,21+0,47 3,00+0,10* 4,16+0,25 2,99±0,28* 0,30±0,04 0,24±0,02 0,25±0,03 0,20±0,03 41,60+1,17 32,90+1,40« 40,00±2,65 32,50±1,29** 37,20±4,80 36,40+5,80 42,60±3,10 35,10±4,50

Примечание. * — р<0,05, в сравнении с группой 2; **—/>< <0,001, в сравнении с группой 2; ГХС диета — гиперхолестеринемическая диета.

Ультрацентрифугирование сыворотки крови крыс я морских свинок позволило установить, что исследуемое соединение оказывает заметное нормализующее воздействие на спектр ЛП в условиях ДЛЛ

При введении кроликам ходинсодержащий полимер ускорял регрессию экспериментальной гиперхолестеринемии.

Таким образом, новое соединение ХнВПМА проявило более выраженную гиполипидемическую активность, в сравне-

нии с изйестным зарубежным желчным секвёстрантом холе-стнрамнном, а также благоприятно влияло на нарушенный в условиях экспериментальной ДЛП спектр ЛП.

б. Результаты исследования способносги Х-ВПМА сорбировать соли Ж К и ХС в опытах in vitro и изменять всасывание Н3-холевой кислоты и 4-С|;-ХС в кишечнике крыс.

Для изучения механизма гиполипидемического действия соединения Х-ВПМА в опытах in vitro была исследована его способность связывать тауро- и гликохолат натрия. Установлено, что по сорбционной активности Х-ВПМА значительно уступает холестирамину. Так, эффективность связывания та-урохолата натрия составила 12%, гликохолата — 24%, в то время как холестирамин связывал их на 67% и 50%, соответственно.

При изучении влияния веществ на абсорбцию Н3-холевоп кислоты в кишечнике было установлено, что при введении их крысам в дозе 500 мг/кг Х-ВПМА угнетает всасывание меченой Ж'К .на 42%, холестирамин — на 36%. Полученные данные указывают на способность Х-ВПМА препятствовать всасыванию ЖК- Однако, по-видимому, последнее является лишь одним из механизмов, определяющих гиполипидемиче-ское действие данного соединения.

Была изучена также способность Х-ВПМА иреципитцро-вать ХС в спиртовых растворах и изменять всасывание меченого ХС в условиях in vivo. Установлено, что Х-ВПМА не связывает ХС в опытах in vitro, но при введении крысам в течение 5 дней в дозе 250 мг/кг снижает абсорбцию 4-С14-ХС в кишечнике на 30%. Полученные данные позволяют говорить об ингибирующем влиянии соединения Х-ВПМА на всасывание ХС.

2. Экспериментальное изучение холинсодержащего соединения Hl9_00.

а. Влияние H(g_9o на развитие экспериментальной ДЛП у крыс и морских свинок.

Соединение Hi9_90 отличается от Х-ВПМА по содержанию иммобилизованного лиганда, структуре мономеров, молекулярной массе.

Изучение гиполипидемической активности этого соединения проведено в опытах на крысах и морских свинках с индуцированной ДЛП.

В опытах .Há крысах соединение Й19-90, примененное в дозе 250 мг/кг, не изменяло содержание общего ХС в сыворотке крови, повышенное под влиянием ГХС диеты, однако увеличивало уровень а-ХС в сыворотке крови (на 31%) и препятствовало аккумуляции липидов в печени (ХС на 27%; ТГ на 36%).

Введение препарата сравнения холестирамина в дозе 800 мг/кг—минимальной эффективной дозе для крыс (Huff, 1963), сопровождалось лишь тенденцией к снижению содержания ХС в печени животных»

Результаты эксперимента на морских свинках показали, что соединение Н19_90, примененное в дозе 250 мг/кг, снижало уровень ХС в сыворотке крови животных на 27% и ТГ на 35%.

Введение холестирамина в той же дозе не только не препятствовало развитию гиперлипидемии, но и повышало содержание ТГ в сыворотке крови морских свинок (на 30%).

Таким образом, холинсодержащее соединение Н19-90 проявило более выраженную гиполипидемическую активность, чем препарат сравнения холестирамин.

б. Изучение способности H19_90 связывать соли ЖК in vitro и изменять всасывание меченой холевой кислоты in vivo.

Результаты опытов in vitro показали, что соединение Н19-90 эффективнее, чем холестирамин, сорбирует холат и гликохолат натрия: на 80% и 66% против 70% и 50%, соответственно. При изучении влияния Ню_оо на абсорбцию Н3-холевой кислоты в кишечнике крыс установлено, что введение его в дозе 250 мг/кг снижает всасывание ЖК на 76%. Применение холестирамина в этой дозе не оказало заметного влияния.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что полимер Hi9_9o является водорастворимым ЭС желчных кислот, превосходящим по эффективности известный желчный секвестрант холестирамин.

3. Экспериментальное изучение новой формы холестирами-на-вазозана П.

При изучении гиполипидемической активности вазозана П в опытах на крысах и морских свинках было установлено, что эта новая форма холестирамина, обогащенная пектином, более эффективна, в сравнении с обычным холестирамином,

как по воздействию на лйпиды сыворотки крови и печени животных, так и по нормализующему -влиянию на нарушенный в условиях ДЛП спектр ЛП.

В опытах in vitro показано, что вазозап П более активно, чем холестирамин, связывает соли ЖК: гликохолат натрия на 79%, холат натрия на 89% против 50% и 70%, соответственно.

Полученные данные свидетельствуют о том, что обогащение холестирамина пищевым волокном пектином, направленное на устранение его побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта, в определенной степени увеличивает пгпохолестеринемическую активность препарата.

4. Экспериментальное исследование дигитокинсодержаще-го энтеросорбента (ЭД).

а. Изучение гиполипидемической активности ЭД в опытах на животных с индуцированной ДЛП.

Гиполипидемическое действие ЭД изучено в опытах на крысах, морских свинках и кроликах, получавших ГХС диету. Крысам и кроликам соединение вводили в дозе 250 мг/кг, морским свинкам — 500 мг/кг.

Результаты опыта на крысах с индуцированной ДЛП показали, что введение ЭД вызывало снижение гиперхолестери-немии на 29% и уменьшало содержание ХС в печени на 26%.

Ультрацентрифугирование сыворотки крови крыс позволило установить, что соединение ЭД благоприятно влияет на нарушенный спектр ЛП, снижая степень атерогенного сдвига.

Сравнительное изучение ЭД и холестирамина в опытах на морских свинках показало примерно равную их гиполипиде-мическую активность.

В опыте на кроликах было установлено, что введение ЭД значительно ускоряет регрессию экспериментальной гиперхо-лестеринемпи.

б. Исследование связывания ХС в опытах in vitro и всасывания

4-С14-холестерина из кишечника крыс под влиянием ЭД.

Опыты по изучению способности ЭД связывать ХС в спир-

товых растворах показали, что весь иммобилизованный на

полимере дигитонин взаимодействует с ХС. При исследова-

нии влияния ЭД на абсорбцию меченого ХС в кишечнике

крыс установлено, что его введение в дозе 250 мг/кг снижало

всасывание 4-С14-ХС на 48%, в дозе 500 мг/кг — на 68%, т. е.

имелась зависимость, доза-эффект.

Таким образом, проведенное экспериментальное изучений ЭД показало, что данное соединение обладает гипохолестери-немическим действием, обусловленным его способностью селективно связывать ХС и снижать его всасывание в кишечнике. Иммобилизация сапонинов на высокомолекулярном водорастворимом полимере является перспективным подходом к созданию новых эффективных гиполипидемических средств.

5. Эффективность сочетанного применения ЭС желчных кислот Н«-до и гемфиброзила в условиях развития дис-липопротендемии.

В литературе имеются сведения о том, что фармакотерапия атерогенных ДЛП при сочетанном применении гиполипидемических препаратов имеет ряд преимуществ перед монотерапией. При изучении комплексного применения синтетических водорастворимых ЭС с отечественным гемфиброзилом в эксперименте наибольшая гиполипидемическая эффективность была отмечена в случае сочетания последнего с соединением Н1Е>_9о. В опытах на крысах с индуцированной ДЛП Н19_9о вводили в дозе 250 мг/кг, холестирамин—в дозе 800 мг/кг, гемфиброзил— в дозе 25 мг/кг, т. е. в количествах, когда гипохолестеринемическое действие только намечалось. Установлено, что сочетанное применение Н1д_9о и гемфиброзила потенцировало гипохолестеринемический эффект, снижая уровень общего ХС в сыворотке крови на 25% (табл.2). Кроме того, данная комбинация вызывала существенное увеличение уровня а-ХС (на 192%), снижение содержания ХС атерогенных липопротеидов (апо В-ЛП), а также в значительной степени препятствовала накоплению ХС в печени, в сравнении с крысами, получавшими только ГХС диету.

Применение сочетания гемфиброзила и холестирамина оказалось менее эффективным.

При изучении спектра ЛП сыворотки крови крыс было установлено (рис.), что сочетанное применение Н^-до « гемфиброзила приводит к практически полному исчезновению из системного кровотока атерогенных ЛП промежуточной плотности (ЛГЩП), появляющихся под влиянием ГХС диеты, и значительному увеличению фракции антиатерогенных ЛПВП, что согласуется с данными определения содержания а-ХС в сыворотке крови животных этой группы.

Таким образом, комбинированное введение нового водорастворимого ЭС желчных кислот Нш-90 и гемфиброзила явля-

Таблица 2

Влияние соединения Н^-эо и холестирамина при сочетанием применении с гемфиброзилом (Гф) на липиды сыворотки крови и печени крыс с экспериментальной дислипопротеидемней

Группа животных Липиды сыворотки крови, ммоль/л Липиды печени, мг/г

ХСо б 1Ц «-ХС ХС апо В-ЛП тг ХС ТГ

1. Интактная, п= 10 1,48+0,05*** 0,86+0,08** 0,62+0,06*** 0,54+0,14* 3,11+0,21*** 5,87+0,49***

2. Получавшая ГХС диету, п= 12 2,85±0,24 0,49+0,06 2,40+0,24 0,14+0,03 32,01+3,12 25,30+3,37

3. Получавшая ГХС днету+ + Гф (25 иг/г), я = 12 2,66+0,14 1,05+0,12** 1,62+0,08** 0,14+0,03 12,16+2,14*** 26,80+4,11

4. Получавшая ГХС диету-f-+Ха (800 т/г), п— 12 2,84 + 0,26 0,50+0,05 2,344=0,25 0,10±0,06 25,40±1,68 20,30+2,82

5. Получавшая ГХС диету+ + Н,0_90 (250 мг/кг), п= 12 2,69±0,09 0,64+0,03* 2,05 + 0,07 0.11+0,07 23,45+1,85* 16,30+2,23*

6. Получавшая ГХС диету-j-+ Гф (25 мг/кг)+Ха (800 иг/кг), п— 12 2,57+0,20 1,01+0,07** 1,57+0,23* 0,09+0,01 9,00+0,93*** 13,60+1,12**

7. Получавшая ГХС диету-f + Гф (25 мг/кг) +Hi9_i>o (250 мг/кг) «=12 2,13+0,13* 1,43+0,10*** 0,79+0,11*" 0,18+0,01 4.30+0,44*!:* 12,20+1,74**

Примечание. * — /;<0,05: **— р<0,01; ***— р<0,001. в сравнении с группой 2; ХС апо В-ЛП = ХС0о.ц-а-ХС.

ется эффективным как по гипохолестеринемическому действию, так и по благоприятному влиянию на спектр ЛП и, прежде всего, на фракцию ЛПВП в условиях экспериментальной ДЛП, что обусловлено потенцированием действия соединений на разные стороны обмена липидов и липопротеидов.

^Ш®

ШШ*

лпонп

лппп лпнп

ЛПВП

А Б В Г Д Е Ж

Рис. Спектр ЛП сыворотки крови крыс при ультрацентрпфугировании з градиенте плотности КВг.

А — интактные животные; Б — получавшие ГХС диету;

В — получавшие ГХС диету-)-гемфиброзил (25 мг/кг);

Г — получавшие ГХС диету+холестирамин (800 мг/кг);

Д—получавшие ГХС диету+гемфиброзил (25 мг/кг)+ холестирампн (800 мг/кг);

Е — получавшие ГХС диету+Hie-eo (250 мг/кг);

Ж — получавшие ГХС диету-}-гемфиброзил (25 мг/кг) + Н19—до (250 мг/кг)

Известно, что гемфиброзил стимулирует катаболизм ЛП очень низкой плотности (ЛПОНП), способствуя их превращению в ЛППП и ЛПНП (Saku, 1985), а желчные секвест-ранты ускоряют деградацию ЛППП и ЛПНП в печени рецептор-опосредованным путем (Shepherd, 1980). Кроме того, гемфиброзил и желчные секвестранты угнетают синтез основного белка этих ЛП — апопротеина В (ano В) (Vega, 1984; Bard, 1990). Комбинированное применение ЭС Hia-so и гемфибрози-ла может приводить к ускоренному удалению ЛППП и ЛПНП из циркуляции и снижению содержания общего ХС в сыворотке крови. С другой стороны, гемфиброзил стимулирует синтез и выделение в кровоток ЛПВП, а также увеличивает их обра-

зование из продуктов гидролиза хиломикронов и ЛПОНП (Saku, 1985; Sirtori, 1990). Кроме того, известно, что ХС ЛПВП в первую очередь окисляется в печени в ЖК, а также интенсивно выделяется в виде билиарного ХС (Schwartz, ¡978; Halloran, 1978). Очевидно, применение сочетания гем-фиброзила ц водорастворимого желчного секвестранта Пю-эо приводит к активации процессов обратного транспорта ХС из периферических тканей в печень, осуществляемого, как полагают, ЛПВП, увеличению его элиминации с желчью при одновременной стимуляции образования ЛПВП.

Таким образом, полученные нами данным дают основание считать, что сочетанное применение соединения Hie-go и гем-фнброзила в клинической практике может явиться одним из эффективных способов коррекции атерогенных ДЛП.

ВЫВОДЫ

1. Новые отечественные синтетические водорастворимые полимерные соединения Х-ВПМА, Но-эо и ЭД оказывают отчетливое гипохолестеринемическое действие в эксперименте, превышающее эффективность известного желчного секвестранта холестирамина, а также нормализуют спектр липопро-теидов у животных с индуцированной дислипопротеидемией.

2. Наиболее активными из изученных соединений являются Х-'ВПМА, а также новая форма холестирамина — препарат вазозан П.

3. По механизму гиполипидемического действия соединение Нш-во является специфическим сорбентом желчных кислот, ЭД-аффинным сорбентом ХС, в то время как соединение Х-ВПМА проявляет свойства как сорбента желчных кислот, так и ингибитора всасывания холестерина.

4. Сочетанное применение отечественного ЭС желчных кислот H1S~90 п гемфиброзила приводит к потенцированию ги-похолестеринемического действия, существенно улучшает спектр ЛП, нарушенный в условиях индуцированной ДЛП. значительно увеличивает фракцию антиатерогепных ЛПВП и эффективно препятствует накоплению ХС в печени животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Экспериментальные дислипопротеидемни атерогенного характера я их коррекция энтеросорбентами.//Тез. докл. Всесоюз. симпозиума по биохимии липидов. — Алма-Ата, 1987. — С. 172 (совместно с А. М. Чистяковой, В. Ф. Трюфановым, В. Е. Рыжеиковым).

2. Новые средства профилактики нарушений липидного обмена и развития атеросклероза.//Тез. докл. VI Всесоюз. съезда фармакологов,—Ташкент, 1988.— С. 319—320 (совместно с В. Е. Рыженковым, А. М. Чистяковой, 'Н. Н. Клюевой, О. О. Вендик, М. А. Соловьевой).

3. Биоактивный полимерный адсорбент желчных кислот.//Тез. докл. VIII Всесоюз. науч. симпозиума «Синтетические полимеры медицинского назначения». — Киев, 1989, —С. 46 (совместно с Ю. М. Лопухиным, В. Е. Рыженковым, Н. А. Самойловой, А. М. Чистяковой, В. Ф. Трюфановым, Я. И. Лапук, М. Л. Овсянниковой, С. М. Насибовым, Л. С. Ягужинским).

4. Биоактивный полимерный адсорбент холестерина.//Тез. докл. VHI Всесоюз. науч. симпозиума «Синтетические полимеры медицинского назначения». — Киев, 1989.— С. 43—44 (совместно с Я. И. Лапук, Н. А. Самойловой, В. Е. Рыженковым, А. М. Чистяковой, А. Б. Рабовским, В. В. Зу-евскнм, Э. П. Кемертслпдзе, Л. С. Ягужинским).

5. Экспериментальное и клиническое изучение Вазозона П — новой формы холестнрамнна, обогащенной пектином.//Кардиология.— 1990.— Т. 30, № 8. — С. 77—79 '(совместно с В. Е. Рыженковым, А. М. Чистяковой, В. Т. Трюфановым. Л. Е. Васильевой, М. А. Соловьевой, О. В. Реме-зовои, В. Т. Лозовским, М. Хансфельд, В. Леонхардт, Л. Шмидт, И. Лин-днер, С. Бергман, 3. Забровски, Г. Мюллер, Г. Меринг).

6. Сравнительное гиполипидемнческое действие энтеросорбентов холестерина и желчных кислот.//Тез. докл. V Межд. конф. «Проблемы клинической и экспериментальной фармакологии и побочных действий лекарственных средств». — Тбилиси, 1990. — С. 39—40 (совместно с А. М. Чистяковой, О. В. Ремезовой. В. Е. Рыженковым, А. Н. Климовым).

7. Влияние дигитонинового водорастворимого энтеросорбента на всасывание холестерина.//Тез. докл. Респ. науч.-практ. конференции «Синтез и применение энтеросорбентов». — Конаково, 1990. — С. 20 (совместное А. М. Чистяковой, В. Е. Рыженковым).

8. Сравнительная гипохолестеринемическая активность разных композиций энтеросорбента холестерина.//Тез. докл. Респ. науч.-практ. конференции «Синтез и применение энтеросорбентов». — Конаково, 1990. — С. 58 (совместно с А. М. Чистяковой, В. Е. Рыженковым, В. Ф. Трюфановым).

9. Action of certain new drugs in experimental hyperlipidemia.//7th Intern. Lipid Symposiuni on Lipoproteins and Atherosclerosis. — Dresden, 1991. —P. 119 (V. E. Ryzhenkov, А. M. Chistyakova, Yu. V. Frotova, M. A. Solovyeva, О. V. Remesova).

Подп. к печ. 21.01.92. Формат 60Х84'/1б. Печать высокая. Печ. л. 1,0.

Уч.-нзд. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 19. Бесплатно. Тип. Ленинградской инженерной школы электроники, пр. Энгельса, 23