Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Экспериментальное исследование гиполипидемического действия и безвредности энтеросорбента полисорба

О 6 за

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МВДЩИНСКИХ НАУК НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАКОЛОГИИ

На правах рукониса 'УЖ

ПОЛЕСЯ ТАТЬЯНА ЛЕОНИДОВНА

ЭКСПЕИШЕГАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Ш10ЛИШД£?ШЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ И ЕЕЗВТЕДаОСТи ЭНТЕРОСОРЕЕЖТА ШШСОРЕА

14.00.25 - фармакология 03.00.04 - биохвшя

Автореферат дассертацяя на соискание . "■той сгепаня кандидата бзологетоских нар:

Наупша руксшодятмш:

докт. кал. наук, проф, А.А.Патжя

лота. шл. наук, проф. Н.Б,Луда

Москва - 1992

Работа выполнена в совиаотной дабораторая Института ходил поверхности АНТкрашт и Винницкого медицинского института

Научные руководители;

докт. мед. наук, проф. А.А.Пентюк докт. мед. наук, проф. Н.Б.ЛЗгцшс

Официальные оппоненты: докт. биол. наук М.Ф.' Минеева

докт.' мед. наук, проф. НД1, Богданов Ведущее учреждение -

Московский медицинский стоматологический институт им. Н.А.Семашко

Защита состоитоя..."Ж." Ш&Щ 1992 г. в^Очасоа т заседании специализированного,совета Д 001.25.01 при НИИ фармакологии Российской академии медицинских наук (125315, .Москва,. Балтийская ул. 8 )

С диссертацией' можно ознакомиться в научной части института Автореферат разоолан " " 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета, докт. мед. наук

А.Н.Яворский

':!■•„ j

t j

•■^оЬмЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

¿^•ЖЩльдость jffio&rewu. В настоящее время сорбционная терапия стала важнейшим элементом лечения многих заболеваний, сопровояпа»-дпхся накоплением продуктов обмена или развитием эндогенной я экзогенной интоксикации.

Сорбцпогоше метода нашли широкое применение и в борьбе с атеро-зклорозогд. Этому способствовало возроспое понимание важной патогене-гпческой роля нарушений обмена лшидов а установление факта снине-шя риска сардечно-сосудпстнх катастроф при коррекции уровня липи-гов {tempos л соавт., 1989; Р.Г.Оганов и соавт.,1990; Ю.М.Лопухин, иИ.Арчаков, 1991; Е.ИЛазов и соавт. ,1991). Применение сорбентов с шсокой емкостью по отношению к атерогеннкм ляпопротеившл позволяет i процесса гемо- ми плазмосорбщш добиться впечатляющих результатов, 'Собешю при тяжелых Формах гшарлигшяемай (Ю.М.Лопухин и соавт., :983,1988; I.T.Малая и соавт.,1991; Г.А.Коновалов, 1991 л другие), дпако, ияваэивносгь шэшательства, кратковременность глполипидеми-еского эффекта существенно ограничивает масштабы применения экстра-орпоральной сорбции при нарушениях обмена липядов, которые носят ерманентшй характер и требуют непрерывной коррекции. Безопасность ятераяьного применения сорбентов, возмояность регулирования дозы, астоти в продолжительности приема создает избйстныэ преимущества ля энтеросорбции. Создание сорбентов нового поколения существенно эвнсяло эффективность энтерального применения сорбентов.

Для коррекции нарушений лвшцшого обмена используется несколько эугш веществ с сорбвдошшд механизмом действия. Ионообменные смоли галестярашш, колестппод и др.), растительные стеринн (бета-сито-t рин, полиспо1шн, диоспошш) образуют комплексы с желчнши кисло-змп и холестерином и тем самым препятствуют их. всасыванию в квшеч-ikq, одновременно стимулируя превращение в печени Холестерина £

- 2 -

желчные кислоты фгои/п и соавт.,1980;/Уе«-г/'л/ . 1982;ЛИМсиеп и соавторы, 1989; М&пп/пеп, 1990). Гиполипидемическое действие проявляя? угольные сорбенты и пищевые волокна - комплекс полисахаридов растений (М.С.Дшшн л соавт.,1988; ,1989; О.В. Коркуико и соавт.,1991; И.К.Слидзевская и соавт.,1991; М.Ууситупа, 1991). На основе растительных полисахаридов создан эффективный сорбент гиполипидамического действия - гуарем.

Однако, применяемые в настоящее время, сорбенты не всегда достаточно эффективны, а их применение часто связано с развитием побочных эффектов. Действие многих сорбентов проявляется при использовании больших доз в течение длительного временя (например для угольных сорбентов суточная доза может достигать 90 г). Некоторые сорбенты имеют неприятные вкусовые свойства, вызывают диспептвческие расстройства, оказывают повреждающее действие на слизистые оболочки кишечника, нарушают процессы пищеварения и усвоения нутриентов и в особенности витаминов и минеральных веществ. Многие эффективные сорбенты имеют высокую стоимость или импортируются.

Перспективным классом сорбентов является высокодисперсные оксиды. Они обладают высокой адсорбционной способностью и, в отличив, от кристаллических форм не оказывают неблагоприятного действия на организм. Некоторые из этих веществ нашли применение в качестве пищевых добавок или используются при изготовлении лекарственных форм. На их основе создан сорбент аппликационного назначения - полисорб, который в настоящее время разрешен для медицинского использования.

Гиполипядемические и антиатеросклеротвческие свойства полисорба ранее не изучались, на изучено его возможное неблагоприятное действие при длительном введении.

Целью исследования явилось экспериментальное изучение антиатеро-склеротического и гиполипидамического действия полисорба, его безвредности при длительном введении.

Задачд исследования:

1. Изучить антиатеросклеротичзскую и гиполипидемическую активность полисорба на шдзла атеросклероза у кроликов и холестериноза у 1ЯШ8Й

2. Исследовать токсичность полисорба для экспериментальных яивотшх при однократном и длительном введении

3. Оценить в сравнении с другими сорбентами влияние полисорба на обеспеченность крнс ваташшамд и минеральны® веществами .Научяад новизна работы. Впервые выявлена высокая антлатеросклеро-

тическая и гиполнпидемическая активность полисорба. По уровня Фармакологической активности нолисорб существенно прзвосходит полиспошш а угольный сорбент СУГС.

Впервые обнаружена способность полисорба адсорбировать большие количества кошлексов неполярнкх липидов с фосфалипидами и бедками.

Впервые провалено комплексное изучение влияния псшиссрба на организм животных, включая функциональное состояние нервной, сердечнососудистой, выделительной и эндокринной систем, печени, углеводного, липидного, белкового, азотистого и минерального обмена, неспецифл-чэской и иммунологической резистентности, в котором показано отсутствие неблагоприятного действия полисорба в дозах, оказывающих гипо-липидвмический эффект.

Показано, что поласорб не всасывается в кишечнике и не накапливается в органах зивотных. Препарат обладает слабым мастнораздрапающим и аллергизирунции действием.

Впервые прогэлано сравнение ьлияния полисорба и других сорбентов на усвоениа витаминов и минеральных веществ и выявлена специфика в действия сорбентов на обмен отдельных витаминов.

Научнад и практическая значимость работа. Полученные данные существенно расииряют представления о механизмах лечебного и токсического действия сорбентов. Показано, что гиполшгадвмаческоз дэйствиа

- 4 -

полисорба в значительной степени определяется его высокой сорбцион-ной активностью по отнопению к лишшши комплексам. Выраженность неблагоприятного действия полясорба в других сорбентов на организм в известной мере определяется их способностью нарушать усвоение микронутриентов.

Установлен факт адаптации организма животных к на благоприятному действию больших доз полисорба. В начальные сроки длительного воздействия сорбента возникают некоторые нарушения гомеостаза, которые в последующие сроки нормализуются.

На примере сорбентов, относящихся к трем классам (долясорб, угли и энтародез), установлено, что выраженность и специфичность влияния сорбентов на витаминный статус определяется как тпиродой сорбента, так и природой витамина. Различия между сорбентами до некоторой степени могут быть объяснены избирательным характером сорбции отдельных витаминов.

Высокая фармакологическая активность полисорба в сочетании с его низкой токсичностью явились основанием для оформления материалов на получение разрешения Фармакологического комитета на проведение клинических испытаний в качестве средства лечения атеросклероза.

Способность сорбентов нарушать усвоение микронутриантов послужила основанием для включения методов оценки витаминного статуса в перечень тестов, рекомендуемых Межведомственной комиссией МЗ УССР для оценки безвредности сорбентов.

В клинической практике при назначении сорбентов необходимо учитывать их способность нарушать витаминный статус и то обстоятельство, что подисорб значительно меньше снижает витаминную обеспеченность. Возникающий под влиянием полисорба, дефицит тиамина и ретинола легко может быть компенсирован дополнительным введением этих витаминов в дозах примерно в 5 раз превышакдих суточнуп потребность.

Материалы токсикологических исследований, проведенных автором,

- 5 -

ранее были использованы при создания препарата "Полисорб", который разрешен Фармкоштетом СССР в качестве средства лечения гнойных рак. Основные положения, вшоснша па яоп".т:,;:

1. Полисорб по величине антиатеросклеротического и гиполкпидемичес-кого действия превосходит полиспошш и угольныЛ сорбент СУГС

2. Полисорб, в дозах обладающих гиполипидемическкм действием, не оказывает неблагоприятного влияния на функциональное состояние различных органов и систем, обман зецяств, показатели нзепецифя-ческоЛ и иммунологической резистентности, на всасывается в кпееч-нике и не накапливается во внутренних органах. Препарат обладает слабым местноразщшапцим и аллергизирунцим действием.

3. При длительном введении больаих доз полисорба возникает адаптация животных к неблагоприятному действию сорбента.

I. По сравнению с сорбентами других классов полисорб в меньшей степени нарушает витаминный статус животных, а возникающий под влиянием полисорба дефицит тиамина и ретинола легко компенсируется введением дополнительных количеств этих витаминов. Апробации работы. Материалы долояены на 1У республиканской конференции "Сорбенты медицинского назначения ш механизмы их лачебного [ействия",Д)нецк, 1988; республиканской конференции "Синтез и пряма-генио знтеросорбзнтов", Конаково, 1990; 1У Всесоюзной конференции 'Биологическая активность соединений кремния, германия и олова".Краток, 1990; 7111 и X объединенных научных мздико-тахяичакзх кон-яренциях, Винница, 1990,1992; III международной конференция "Наука i производство - здравоохранению" по проблемам медицины катастроф, ;иав, 1991; У1 Украинском биохимическом съезда, Киев,1992; заседаете Винницкого областного биохимического общества, 1989,1992,

Структура и объем работы: Диссертация состоят из введения, обзо-лгературн, 5 глав собственных исследований, списке» цитированной итературн, содержащего отечественных и зарубежных источит»

коб. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и содержит таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Мдтеркаж. модели и матодк исследования.

Работа выполнена на 2127 крысах популяции Вистар, 112 кроликах, 14? киках-самцах линии С 57 BI/6, 78 морских свинках и 36 свиньях.

Лабораторные яивотные находились на рационе вивария, но в экспериментах по изучению влияния сорбентов на усвоение микронутриентов животные получали рацион, позволяющий контролировать поступление питательных веществ в организм. Он содержал казеин, лярд, подсолнечное масло, смесь солей л витаминов в оптимальных количествах (Ю.М.Островский, 1379).

Параметра острой токсичности полисорба оценивали при пероральноы введении 10% водной взвеси сорбента в дозах 2, 4, 6, 8, 10, 20 и 40 г/кг. Хроническая токсичность исследована при длительном введении полисорба в течение различных сроков (вклшая и 6 месяцев) в дозах 100, 330 и 1000 мг/кг.

Модель атеросклероза воспроизводили на кроликах, которые получали перорально холестерин (0,5 г/кг) в течение трех месяцев. После етого срока кроликов переводили на подцералващую дозу холестерина (0,2 г/кг) и в течение I месяца лечили подисорбом (200 мг/кг) или полиспонином (10 мг/кг). В сыворотке крови животных оценивали уровень липидов, а после умерщвления кроликов измеряли площадь поражения аорты.

Модель хояеетерлноза печени на мышах линии С 57 BI/6 создавали скарг,йиваняем полу синтетического рациона, сбалансированного но всем нутриентам, который дополнительно содержал 1% холестерина и0,5? хо-левой кислоты. У животных через 3 недели возникал гепатоз и желче-каменная болезнь. Этих животных в дальнейшем на протяжении 3-х недель лечили полисорбом (100 мг/кг) и угольным сорбентом СУГС (100

- 7 -

мг/кг). Исследования липидного обмена, функция печени, активности ферментов проведены посяэ умзрквяения животных.

Состояние яивотных в грушах предназначенных для исследования токсичности полисорба оцениваюсь з соответствии с требованиями Фармкомитета СССР.

Измеряли порог болевой чувствительности, ректальнуя температуру, биоэлектрическую активность сердца (во II отведения). Фут-щиопальное состояние Евделительной системы оценивали по величине диуреза, концентрации белка в моча, хреатинина и мочевины в сыворотке кроля, используя методы описанные в руководстве (В^В.Мвньшжов, 1987). Состояние эндокринной системы определяли измерением массы щитовидной яа-лезы и надпочечников, экскреции 17-кетостероидов с мочой по реакции о мета-динитробензолом (В.В.Меньшиков, 1987(.

Клеточный состав крови, уровень гемоглобина, свертываемость крови определяли унифицированными методами (В.З.Меньяиков, 1987).

Состояние липидного обмена оценивали определением в сыворотке крови холестерина, триглицеридов, общих липидов, липопргтеинов низкой плотности, фосфолипидов (В.В.Менышков, 1987; А.А.Пентш и соавторы, 1987). Липядный спектр печени исследован методом тонкослойной хроматографии (М.Кейтс, 1975).

Состояние белкового я азотистого обмена оценивали определением содержания в сыворотке крови общего белка, билирубина, активности юпартатаминотрансферазн <КФ 2.6.1.1) и аланинаминотрансферазн (ко 2.6.1.2) по методам, описанным в руководстве (В.В.Меньшиков, 1Э87). 3 мышечной ткани свиней определяла белковый и небелковый азот мето-юм Кьельдаля (М.Г.Остапец, Н.Ы.Романская, 1974).

Состояние минерального обмена оценивали определением в сыворотке фови хлоридов, неорганического фосфора, натрия и калия, кальция и лагния. Использованы унифицированные методы, оппсагише В.В.Мепь'та-50выгл,(1987) и О.Г.Архаповой (1988) Содержание крашшя определяла

- 8 -

по реакции образования кремномолибденой гетерополикислоты (К.И.Го-рацанка, П.Б.Луцгак, 1286), нелэза по реакции с бато-фенантроыном, а активность щелочной фосфатазы (КФ 3.1.3.1) по гидролазу 4-нитро-фенилфосфата (В.Б.Меяызииов, 1987). Обеспеченность кадью оценивали по активности медьсодержащего белка царулоплазмина (КФ 1.16.3.1), который способен окислять парафенидвшшамин (В.С.Асатиани, 1965).

Состояние печени определяли по показателям белкового, азотистого углеводного (уровень глюкозы в крови) обмена, а также определением в субклеточных фракциях печени малонового диальдегида, аскорбат-за-висимого перекисяого окисления липидов, активности НАДЯ- и ШЩН-редуктаз дахлорфенолиндофанола (КФ 1.6.2.2 и 1.6.2.4), арилэстеразн (КФ 3.1.1.2), гамма-глутамялтрансферазы (КФ 2.3.2.2), глутатион-3-трансфзразы (КО 2.5.1.18), гидроксилазной и деметилазной активности, методами описанными Ю.В.Владкмьровш и А.И.Арчаковым (1972), И.И. Карузиной, А.И.Лрчаковым (1977).

Адлоргизируэдеа действие полисорба оценивали по реакциям непрямой дегрануляции тучных клеток, торможения миграции макрофагов, активной козиой анафилаксии, гидерчувствительноств замедленного типа, ноныонктивальной пробо в соответствии с методическими рекомендациями Фармакологического комитета СССР (М.1988).

Местнораздражащее действие полисорба оценивали по его действии на слизистые оболочки глаза кроликов и по реакции кожи кроликов на внутрикожное введение (С.Д.Заугольников и соавт.,1978; В.В.Гацура, 1974).

Неспецифическую резистентность оценивали, по бактерицидной активности 'сыворотки крови, титру гетерофильных агглютининов, активности лизоцима, комплемента (Л.С.Резникова, 1967 ; В.Г.Дорофейчук, 1368). Количество Т и В-димфоцитов оценивали пг тестам розеткообразования, а субпопуляции Т-лкифоцатов определяли с помощью теофиллинового теста (А.С.Козлхж и соавт., 1987).

Обеспеченность крыс витамином Л оценивали по уровни ретинола в сыворотке крови и печени, а витамином Е по содержанию токоферола в сыворотке крови и спонтанному гемолизу эритроцитов,_ (Ю.М.Островский, 1979). Насыщенность животных витамином К и витамином Д определяли косвенным путем: по активности витамин К-зависимого белка протромбина и определением содержания кальция, неорганического фосфора я активности щелочной фосфатазы (Ю.М.Оетровскяй, 19714 В.Б.Спиричев, 1984).

Насыщенность животных тиамином определяли по ТДр-эффекту эритроцитов (коэффициент активации транскетолазы, К5> 2.2.1.1), экскреции тиамина с мочой и содержании тиамина в печени, а обеспеченность рибофлавином по величине ФАД-эффекта эритроцитов (коэффициент активации глутатионредуктазы, КФ 1.6.4.2) и экскреции рибофлавина с мочой (Ю.Н.Островский, 1979; В.Б.Спиричев, 1984). Обеспеченность крыс пантотеновой кислотой оценивали по ацетилирования 4-аминоантипирина, количество которого определяли как описано Т.¿Поповым и О.Б.Леонен-ко, 1977). Насыщенность ниацином определяли по экскрещп У-метид-никотинамида, а пирлдокеяном - по экскреции 4-пиридоксиловой кислоты (В.Б.Спиричев, 1984).

Обеспеченность крыс фояатами и цианкобалаыином определяли косвенным путем - по количественному и качественному составу периферической крова. Уровень аскорбиновой кислоты в тканях определяла по реакции с 2,4-ДЕнитрофенилгадразином (Ю.М.Островский, 1979).

Процессы адсорбции лепидов и витаминов на поверхности сорб нтов исследовали общепринятыми методами физической химии.

Статистическую обработку результатов исследований проводили методами биометрии.

Автор выражает благодарность Ю.В.Однорогову, Р.П.Пискун, В.В.Да-нильчуку, В.Н.Сяицаранко,-И.И.Геращенко за помощь ь проведении ю-следований.

- 10 -

Р23УП>ТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Экспериментальная оценка антиатеросклеротического и гиполгаи-домического действия полисорба

Установлено, что введение полисорба в дозе 200 мг/кг в течение I месяца кроликам с юдельв атеросклероза оказывает существенный лечебный эффект, который по величине значительно превосходит таковой у полнспонина (рис. I). Полисорб более значительно чем полиспонин снижал содержание в сыворотке крови кроликов холестерина, липопроте-пнов низкой плотности (ЛЕИ), фосфолипидов и триглицеридов. Площадь поражения аорты у кроликов, получавших полисорб, составила всего 10,3±3,18# ¿при 32,4±4,2#£ У нелечэнннх животных), тогда как под влиянием полиспошша она практически на изменилась (34,6^3,21/5).

Полисорб проявлял высокую активность и на модели холестериноза у милей. Пол влиянием трехнедельного введения в дозе 100 мг/кг сорбент

"'А

: ® в - Ы - к г/л V,'

У- ^ 1 " Г: Я 1 % 1 ■0-л -V »

т. ■ -~ - • ь г' ' Ш ЩК Щ Ш ¡Ш т Ш Я 1У: 4 Щ'/ЖЛ Шш V тт-. 1 ш Р осЬч щ т

ЕЗСгарГ} Б ЕЖгарГ! С Ш&гарЬ В ^Сгарй Я

холостарин ЛНЛ фоофолипиды триглицерады

Рис. I. Влияние сорбентов на уровень лишйов в сыворотке крови ( А - исходный уровень; В - модель без лечения; С- лечение полиспонином; Д - лечение полисорбои

■ - II -

более эффективно, чем СУГС устранял гиперлипядемию у мгаой (табл.2). Полисорб оказывал и более значительное положительное действие на липидный спектр печени и активность фэрментоз (рис. 3). В отличие от угольного сорбента СУГС полисорб нормализовал с-живность 11АЛН-я НАДШ-редуктаз, гздроксилазы, демегялазы, арилэстеразы, значительно понизил активность гамма-глутамилграясфзразы (ГГТ-азы).

Механизм гиполишщешческого действия полисорба, очевидно, связан о адсорбцией на его поверхности липидов, благодаря чему нарушается всасывание липидов в кишечнике. Оказалось, что в составе лшшдных комплоксов (мицелл), включающих кроме липидов белки я фосфолкпиды, полисорб способен связать до 99 мг/г холестерина я до 46 мг/г три-стеарина. Полисорб извлекает больше количества нейтральных липидов я холестерина и из природных нидкостей (сыворотки крови,дуоденальной лелчи). При этом добавление в яелчь фосфолшкдов я белка резко уси-, тгао1/1

ЕЭ Graph D ESS Graph С ШСгарЬ В Graph fl

холестерин ЛШ триглицериды билирубин (от/л)

Рйс. 2. Влияние сорбентов на уровень липидов и билирубина в сыворотке крови мышей ( А - контроль; В - модель без---лечения; С - лечение СУГС; Д - лечение полясорбом

SUS Graph D ЕЭЗ Graph С EZZ2 Graph 8 ШGraph R

холестерин тригли- фосфатидил- полиглице- ГГТ-аэа цариды холин рофосфатиды

Рис. 3. Влияние полисорба и СУГС на липидннй спектр печени и активность га\Е/а-глута',алтранс$еразы (А - контроль; В - модель без лечения; С - лечение СУГС; Д - лечение полисорбои

ливает сорбции холестерина. Можно думать, что связывание холестерина и тркглицэридов преимущественно обусловлено высоким сродством полисорба к белкам { удельная сорбция достигает 700 мг/г) я фосфо-лишщам (удельная сорбция фосфатидилхолина достигает 155 мг/г), которые входят в состав лишшшх комплексов (мацелл, липопротеинов),

2. Экспериментальное исследование токсичности полисорба Как показали проведенные опыты на крысах и щгаликах, полисорб относится к практически нетоксическим веществам. Однократное введение его в дозе 10 г/кг на вызывает гибели животных и лишь на короткий срок изменяет некоторые биохимические показатели крови. Дробное введение кивотикм сорбента в дозах 20 и 40 г/кг вызывало гибель кивот-нгос из-за разрывов яелудка и кишечника, что было обусловлено чрезмерно больапмз объемами вводимой взвеси полисорба.

- 13 -

Возможное токсическое действие долисорба при длительном введении ^включая а 6-мзсячпоэ введение) оценивалось на крысах,кроликах и свиньях (таблица ). В таблице приведены сводные данные о влиянии различных доз полисорба на состояние экспериментальных животных.

Оказалось, что полисорб в течение всего периода наблюдения не оказывал влияния на динамику массы подопытных животных, на нарушал функцию сердечно-сосудистой и нервной систем. В дозах, обладающих гиполипидемическим действием (100 и 330 мг/кг), сорбент не влиял на функции почек. Однако, в большой дозе (100* мг/кг) сорбент все же вызывая кратковременное (на срок I месяц) повышение уровня белка в моче и мочевины в сыворотке крови яивотных. Следует отметить, что в дальнейшие срока опыта подобные нарушения уже не регистрировались, что можно расценить как включение адаптационных механизмов организма яивотных, направленных на компенсацию сдвигов гомеостаза. У кроликов длительное введение полисорба на изменяло функцию выделительной системы.

Сорбент во всех использованных дозах не влиял на функциональное состояние щитовидной железы. В дозах 100 и 330 от/кг полисорб не оказывал какого-либо воздействия и на функции надпочечников. В то ае время большая доза сорбента (1000 мг/кг) вызывала кратковременное увеличение массы надпочечников и снижение экскреции 17-кетостероилов с мочой. Однако эти сдвиги регистрировались только в начальный период эксперимента и в дальнейшем компенсировались.

Длительное введение полисорба в небольших дозах (100 и 330 мг/кг) не вызывало каких-либо неблагоприятных сдвигов в гематологических показателях животных. Правда,в более высокой дозе (1000 мг/кг) сорбент все же снияал содержание гемоглобина и эритроцитов, но эти изменения быстро проходили. Возможно, что анемия, вызванная полисор-бом, является следствием нарушения усвоения железа в кишечнике, о чем свидетельствует соответствуйте эксперименты.

- 14 -

Таблица

Влияние длительного введения полисорба на функциональное состояние экспериментальных животных

Показатели ' \ ' Дад^с°Р6' !

..................- 1 Динамика массы тела _____ 0 ■»—'¿У.Ц— ' 0 _3_ш 0

Порог болевой чувствительности 0 0 О

ЭКГ во II отведении 0 0 0

Функция почек: диурез 0 0 0

Белок в моче, мочевина сыворотки крови 0 0 +

Креатннин сыворотки крови 0 0 0

Функция эндокришшх желез: масса щито- 0 о 0

видной железы

Масса надпочечников, экскреция 17-кето- 0 о

стероидов V +

Гематологические показатели:

Гемоглобин, эритроциты 0 0 +

Сегшктощсернне лейкоциты 0 0 +

Лимфоциты 0 0

Тромбоциты 0 0 0

Показатели обмена веществ:

Общий белок сыворотки крови 0 0 0

Билирубин -"- 0 0 0

Алании- я аспартатаюшотраясферазн 0 0 0

Белковый, небелковый азот мышц 0 0 0

Водорастворимые белки шщ 0 0 0

Перекисное окисление лишдов печени 0 0 0

Глюкоза крови 0 0 0

Холестерин, триглицерлдо сыворотки кровп + + +н

Липопротеины сыворотки крови + + -н

Комплементарная активность 0 0 +

Бактерицидная активность 0 0 0

Титр гетерофильных агглютининов 0 0 0

Активность лизоцима 0 0 0

Т-сулре ссоры О 0 О

Т-халперы 0 0 +

Примечание: 0 - означает отсутствие- отклонений от контроля; +• -незначительное или кратковременное отклонение; -н- означает выра-канноа или длительное отклонение' от контроля

- 15 -

Сорбент при длительном введении но оказывает влияния на состояние углеводного обмана (глюкоза крови), белкового и азотистого обмена ( белок сыворотки крови и мышечной ткани, содержание билирубина, активность трансаминаз).

В го жа врата полисорб во всех изученных дозах проявлял гиполипи-дедаческое действие, хотя и выраженность такового была не столь велика как у аявотных о гялвряилидемией. Эффект полясорба был дозо-зависимым, а максимальное его действие проявлялось в первые 1-2 месяца эксперимента. В последующие сроки происходила практически полная или частичная ( в зависимости от дозы сорбента) нормализация уровня лишихов. Способность полисорба снинать уровень липидов у нор-молшидемических животных отнзиь не является уникальной, так как и другие гиполипидемические препараты обладают подобным действием (Е.Г.Гаврицук и соавт., 1985).

В дозах 100 и 330 кг/кг полисорб не оказывал влияния на показатели наспсцифической резистентности и клеточного иммунитета у животных. В дозе 1000 мг/кг сорбент вызывал кратковременное снижение комплементарной активности сыворотки крови и количества Т-хелперов и Т-супрессоров.

Одной из сторон токсикологической оценки полисорба явилось изучение возможности его всасывания в.желудочно-киаэчном тракте, поскольку предполагается, что сорбенты не должны проникать во внутреннюю среду организма. Оказалось, что ни однократное, ни курсовое введение различных доз полисорба (100, 330 и 1000 мг/кг) не приводит к увеличению экскреции кремния с мочой или к повышению концентрации этого элемента в крови, легких, печени и почках аивотных. Эти данные в определенной мерз соответствуют сведениям литературы, в которых показано, что всасываются наиболее легко ыономерные и растворимые форш кремнезема, а полимерные и плохорастворимые формы (к которым относится и полисорб) практически не всасываются. Отсутствие накопления кремния в легких при пероральном введении свидетельствует так-

- 16 -

же и об отсутствии реальной угрозы развития фиброза легких. Тщательное морфологически исследование легких не выявило каких-либо нарушений структуры лагочной ткани. Это мнение совпадает с данными литературы о низкой фиброгенной активности дисперсных кремнеземов (в отличив от кремнеземов с кристаллической структурой) даже при ингаляционном поступлении в организм (БЛ.Величковский, 1969; А.Н.Тимченко, 1969; 1970).

Морфологические исследования влияния полисорба на слизистые желудочно-кишечного тракта,'проведенные Е.И.Штатько и Р.П.Пискун, не выявили сколько-нибудь заметного повреждающего действия полисорба. Сравнение с другими сорбентами показало более "щадящий" характер влияния полисорба на состояние зелудна и кишечника у экспериментальных животных.

Исследования показали, что полисорб обладает слабыми ыестнораз-.дражамцими и аллергизирувдими свойствами, что показано в опытах на кроликах, морских свинках и крысах.

В исследованиях, проведенных Е.И.Штатько, не обнаруаено эмбрио-токсического, тератогенного и гонадотропного действия сорбента. ,Судя по данным литературы высокодасперсные кремнеземы не обладают канцерогенным и мутагенным действием { it.itКо{{ ,1978; Т^сД. ,1987).

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о безвредности полисорба при его длительном введении в дозах 100 и 330 мг/кг, то есть в тех дозах, которые предполагается использовать в качестве лечебных при проведении клинических испытаний. Длительное применение полисорба в дозе 1000 мг/кг очевидно не является целесообразным.

3. Оценка влияния полисорба на обеспеченность животных минеральными веществами и витаминами

Анализ литературы свидетельствует, что одним из специфических проявлений неблагоприятного действия сорбентов на организм может быть их влияние на усвоение нутриентов ("синдром обкрадывания").

- 17 -

На исключено, что атот фактор может определять степень выраженности неблагоприятного влияния энтеросорбентов на организм. Haï® проведено сравнительное исследование влияния сорбентов, принадлежащих к трем классам ( полисорб - дисперсный кремнезем; карболен и СУГС- угли; энтеродез - органический полимер), на обеспеченность минеральными веществами и витаминами. Для повышения обоснованности выводов животные в период экспериментов получали полусинтетический рацион, позволяющий контролировать поступление всех нутраектов в организм.

Длительное введение полисорба в дозах 100 и 330 от/кг не оказывает влияния на содержание в сыворотке крови животных натрия, калия, кальция, магния, неорганического фосфора и хлоридов и только в дозе 1000 мг/кг, сорбент на короткое время сникал уровень неорганического фосфора. СУГС и энтеродез мало влияли на уровень большинства исследованных электролитов, хотя и несколько снижали концентрацию кальция. Полисорб а другие сорбенты на изменяли обеспеченность крнс медью, о которой судила по активности церулоплазшна. Энтеродез и СУГС в терапевтических дозах снижали содержание лелеза в сыворотке кровп, тогда как полисорб проявлял подобное действие только в доза 1000 мг/кг, которая в 10 раз превышает предполагаемую терапевтическую дозу.

Длительное введение сорбентов способно нарушить обмен витаминов (рис. 4 и 5 ).

Так например, полисорб, карболен, СУГС л энтеродез сникает содер-даняе ретинола в сыворотке крови яивотных (на рисунках оптимальная обеспеченность витаминами принята за 100$), причем в одинаковой дозе ( 330 мг/кг) полисорб оказывал меньший, аффект по сравнению с другими сорбентами. Полисорб практически не оказывал влияния на уровень то-кофэрола в сыворотке крови а незначительно,удлинял протромбиновоэ время крови (протромбин - витамин К-зависимый белок), тогда как угли (карболен, СУГС ), но не энтеродез, существенно снижали обеспеченность крыс витаминами Е и К. Эффект сорбентов был дозозависимнм, а макси-малыше сдвиги в обеспеченности витаминами наблюдаются в течение пэр-

2 I недели месяц

100

50

0

РЕТИНОЛ ТОКОФЕРОЛ 11РОТЮШ-НОВОЕ ВРЕМЯ

2 I недели месяц

2 I недели месяц

Е^гарй Б ЕЕЭСгарИ С ЕЭБгарЬ В ^БгарЬ Я

Рис. 4. Влияние долисорба ( А ), карболена ( В ), СУГС ( 0 ) и энтеродеэа ( Д ) на содержание ретинола и токоферола в сыворотке крови и протромбиновое время крови у крыс

ЭКСКРЕЦИЯ РИБОФЛАВИНА 2 недели I месяц

Рве. 5. Вд!;лние полисорба , за (Д) на экскрецию ри

сасгари Б

ЕШСгарЬ С В

^СгарИ Я карболена (В), СУГС (С) и знтероде-

_ ^ . _ _ _ ----------- ----^^ у-----

на и тиамина с мочог

крыс

- 19 -

вого масяда эксперимента. К концу исследования (3 месяца) только большие дозы сорбентов (1000 мг/кг) вызывали достоверные сдвиги.

Полисорб не оказывал существенного влияния па обеспеченность животных витамином Д, о которой судили по уровню кальция и неорганического фосфора и активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови.

Сорбенты уяе через 2 недели после начала введения в дозе 100, 330 и 1000 от/кг существенно снижают обеспеченность тиамином крыс. На рис. 5 показано, что под влиянием полисорба, карболена, СУГС и. энтеродеза в дозе 330 от/кг существенно снижается экскреция тиамина с мочой. Параллельно этому у животных возрастает ТД5-эффект (коэффициент активации транскетолазы под влиянием тиакинюгфосфата). Эффект полисорба значительно уступал.девитаминизирующему действию других сорбентов. Полисорб на вызывал тостоверннх сдвигов в обеспеченности крыс рибофлавином (о ней судили по экскреции рибофлавина с мочой в по ФАД-эффзкту - коэффициенту активации глутатионредуктазы под влиянием флавинадениядинуклеотида). Другие сорбенты - карболен, но особенно СУГС и■энтеродез, вызывали резкое сникениэ обеспеченности животных рибофлавином. Например, под влиянием энтеродеза в доза 1000 мг/кг экскреция рибофлавина с глочой падала более чем в 5 раз.

Выраженность,вызываемых сорбентами, сдвигов в обмене тиамина и рибофлавина сильно зависит от дозы (минимальные изменения наблюдается при введении сорбентов в дозе 100 мг/кг, а максимальные - при введении в дозе 1000 мг/кг) в продолжительности введения сорбентов. Пик сшиения витаминной обеспеченности наблюдается в первый месяц эксперимента, а затем выраженность сдвигов уменьшается.

Введение животным полисорба в дозах 100 и 330 мг/кг существенно не нарушает обеспеченность крыс гшридоксином и ниацином и только в дозе 1000 мг/кг сорбент снижал статуо этих витаминов. Другие сорбента существенно наруиала насыщенность этими витаминами. IIa рис. 6 представлены данные о влиянии сорбентов в лозе 330 от/кг. Обращает на себя внимание, что угольные сорбенты и энтеродез в значительно

- 20 -

4 -ПИРИДЖСИЛОВАЯ КИСЛОТА У-МЕЭДЛШОТИНАМИД

2 недели I месяц

2 недели I месяц

Е=3

25

50

75

О

Е'ЛСгарЬ В ЕддЗСгвРй С ШАЪгарЬ В ^СгарИ Й

Рис, 6. Влияние лолвсорба ( А ), карболена ( В ), СУГС ( С ) а энтеродеза ( Д ) на экскреции 4-пиридоксмовоЁ кислоты и и -метилнпкотинашяа с мочой у крыс

большей степени чем полисорб сникает экскрецию 4-пиридоксиловой молоты и У-матилникотинамида. Например карболен в дозе 1000 мг/кг снижал экскрецию этих метаболитов соответственно более чем в 6 и 5 раз.

Полисорб не оказывает существенного влияния на обеспеченность крыс пантотеновой кислотой, о чем свидетельствует отсутствие всяких изменений в ацетилировании 4-даиноантипирина. Не влияет полисорб и на обеспеченность фолатами и цишгаобаламином, о которой судили по уровню гемоглобина, эритроцитов, количеству гиперсегмантироврщшх лейкоцитов. Полисорб не нарушает обмен аскорбиновой кислоты у крыс, хотя не известно, как сорбент будет влиять на обеспеченность этим витамином у животных, не способных к синтезу витамина С.

Таким образом проведенные исследования свидетельствуют о способ-

- 21 -

ности сорбентов нарушать усвоение витаминов и о существенно меньшем влиянии полисорба на витаминный статус. Полисорб в дозах близких к предполагаемым терапевтическим снижает обеспеченность крыс только двумя витаминами - ретинолом и тиамином. После отмены приема полисорба восстановление тиаминового и ротинолового статуса за счет витаминов, имеющихся в рационе, происходит не ранее недели.

3 отдельном эксперименте нами установлено, что потери тиамина и ретинола в процессе применения полисорба могут быть компенсированы дополнительшя,! перорашши введением этих витаминов в количествах примерно в 5 раз превышающих суточную потребность ( 250 мкг тиамина и 125 МБ ретинола).

Механизм дэватаманизирущего действия сорбентов скорее всего связан с адсорбцией витаминов, благодаря чему уменьшается их всасывание в кшзечнлке. Во всяком случае более высокая (сравнительно с по~ лисорбогл) адсорбционная активность углей по отношении к витаминам проявляется на аивотннх и более высоким уровнем снижения обеспеченности витаминами.

Таким образом, проведенные исследования показали, что полисорб обладает значительным антиатеросклеротическим я гиполиявдемическим действием, превосходящим таковое у полиспоннна а СУГС. В дозах, оказывающих фармакологический эффект, полисорб не оказывает неблагоприятного действия на гокеостаз, а кратковременные наруленпя, возникающие под влиянием больших доз сорбента , быстро компенсируются. В отлична от других сорбентов полисорб в меньшей степени нарушает витаминный статус, а дефицит ретинола и тиамина легко компенсируется дополнительным введением небольших количеств этих витаминов.

Выявленные в процессе экспериментального исследования, положительные качества полисорба даст основания рекомендовать проведение клинических испытаний этого препарата в качестве средства для лечения атеросклероза я нарушений обмена липядов.

- 22 -

ВЫВОДЫ

1. Полйсорб оказывает выраженное антиатеросклеротическое и гглоли-пидемическое действие, превосходящее таковое у полиспонина и угольного сорбента СУГС

2. Механизм лечебного действия полисорба, очевидно, связан с ого высокой адсорбционной способностью по отношению к лшщдным комплексам

3. Полйсорб относится к практически натоксическш веществам и при однократном введении не вызывает гибели животных

4. Длительное введение полисорба в дозах, обладающих гшсшшидами-ческим действием, на нарушат функциональное состояние нервной, сердечно-сосудистой, выделительной и эндокринной систем, печени, показателей углеводного, лидшшого, белкового, азотистого и минерального обмена, неспецкфаческой резистентности и клеточного иммунитета. Полйсорб не всасывается в кишечнике в не накапливается во внутренних органах, обладает слабовнраженшш местнораз-дракащим и алларгизирущим действием.

5. При длительном введении больших доз полисорба мояет происходить адаптация организма животных к неблагоприятному действию сорбента

6. По сравнению с другими сорбентами (угли, энтеродез) полйсорб не столь значительно нарушает витаминный статус животных, а дефицит ретинола и тиамина, возникающий при длителььом введении полисорба, метет быть компенсирован введением дополнительных количеств этих витаминов

7. Совокупность фармакологических и токсикологических свойств полисорба позволяат рекомендовать проведение клинических испытаний полисорба в качестве гиполипидемического и антватеросклеротичес-кого средства

- 23 -

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. О проявлении общего действия нерастворимых адсорбентов при их аппликационном или пероральном применении. Тезисы докладов 1У республиканской конференции "Сорбенты медицинского назначения и механизмы их лечебного действия", Донецк, 1988, с. 17-18 (совместно с Н.Б.Дуцюком, А.А.Пентюком, В.И.Богомазом, Ю.В.Однороговым, Н.Д.Дем-чуком).

2. Возможные подходы к изучению безвредности энтеросорбентов. Тезисы докладов республиканской научно-практической конференции "Синтез

и применение энтеросорбентов". Конаково, 1990, о.18 (совместно с

A.А.Пентвком, Н.Б.Дуцюком, В.И.Богомазом, О.И.Бондарчуком, С.В.Сандером, И.И.Геращэнко, Ю.В.Однороговым, Е.И.Йгатько).

3. Изучение токсичности сорбента медицинского назначения полисорба. Тезисы докладов 1У Всесоюзной конференции "Биологическая активность соединений кремния, германия и олова", Иркутск, 1990; с. 92,(совместно с А.А.Пентюком, Р.П.Пискун, Ю.В.Однороговкм, С.В.Санларом,

B.И.Богомазом, Е.И.Штатько).

4. Влияние адсорбентов на содержание витамина А в сыворотке крови, слизистой оболочке тонкой кишки, печени. Тезисы докладов УП1 объединенной научной медико-технической конференции, Винница, 1990, с. 101-102 (совместно с А.А.Пентиком, М.НЛервяк, А.Т.Тамиловичем)

5. Влияние некоторых энтеросорбентов на витаминную обеспеченность крыс. Тезисы докладов 71 Украинского съезда биохимиков, Киев, 1992, (совместно с Е.И.Штатько, М.НЛервяк). с. 307.

¿8-100 1Шв