Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Современные клинические и молекулярно-генетические подходы к диагностике и лечению рака щитовидной железы

005048383

ШЕВЧЕНКО Сергей Петрович

СОВРЕМЕННЫЕ КЛИНИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ РАКА ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

14.01.12 — онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени ■ доктора медицинских наук

1 о ЯНВ 2013

Новосибирск 2013

005048383

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении "Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (Новосибирск, Россия) и Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении Высшего профессионального образования Новосибирском национальном исследовательском государственном университете

Научные консультанты:

Сидоров Сергей Васильевич Доктор медицинских наук, профессор Гуляева Людмила Федоровна Доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты:

Новиков Валерий Александрович Доктор медицинских наук

ФГБУ «Научно-исследовательский институт онкологии» Сибирского отделения РАМН, ведущий научный сотрудник отделения опухолей головы и шеи

Лебедев Игорь Николаевич Доктор биологических наук ФГБУ «Научно-исследовательский институт медицинской генетики» Сибирского отделения РАМН, руководитель лаборатории цитогенетики

Попов Олег Сергеевич

Доктор медицинских наук, профессор ГБОУ ВПО «Сибирский медицинский университет» Минздравсоцразвития РФ, профессор кафедры общей хирургии

Ведущая организация: ФГБУ Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена Минздравсоцразвития РФ. Защита диссертации состоится «_»_2013 г. в "]_ часов на заседании диссертационного совета Д 001.032.01 в ФГБУ «НИИ онкологии» СО РАМН по адресу 634009 г.Томск, п. Кооперативный, 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке в ФГБУ «НИИ онкологии» СО РАМН

Автореферат разослан «_»_2012 г.

Ученый секретарь /' /у

диссертационного совета ///"¿'-7 —*

д.м.н., проф. Фролова Ирина Георгиевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Рак щитовидной железы (РЩЖ) - наиболее часто встречающаяся злокачественная опухоль эндокринных органов [Davies, Welch, 2006; Чиссов и др., 2005]. Доля РЩЖ среди злокачественных опухолей всех локализаций составляет 1-1,5% [Давыдов, Аксель, 2007; Kilfoy et al., 2008]. Ежегодный прирост заболеваемости РЩЖ в различных странах мира варьирует от 2 до 12% [Netea-Maier R.T. et al., 2008; Sprague B.L. et al., 2008]. В РФ в последние годы заболеваемость РЩЖ лидирует по ежегодным темпам прироста, который в последнее время составляет в среднем 3,5% в год [Чиссов и др., 2007]. Так, в 1998 году в РФ было зарегистрировано около 6,5 тысяч впервые выявленных случаев РЩЖ, а в 2007 году - 8,5 тысяч. Заболеваемость РЩЖ в РФ составляет 6,1 случаев на 100 тыс. населения в год [Чиссов В.И. и др., 2007]. В г. Новосибирске в 2004 г. данный показатель составил 6,5, в 2005 году - 8,7, а в 2010 году уже 8,9 на 100 тысяч населения. Пик заболеваемости РЩЖ по данным различных авторов приходится на возраст 41—45 лет, но нередки случаи диагностики злокачественных опухолей щитовидной железы (ЩЖ) в молодом, юношеском и даже детском возрасте. Рак щитовидной железы значительно чаще встречается у женщин (соотношение женщины: мужчины = 3:1), что объясняется особенностями гормонального статуса.

Вопросы этиологии, патогенеза, диагностики, лечения и прогноза больных РЩЖ в последние два десятилетия находятся в фокусе фундаментальных и клинических исследований. Разнообразие гистологических типов РЩЖ отражается на характере клинического «поведения» опухоли, однако даже внутри одного и того же гистологического типа РЩЖ часто наблюдается вариабельность клинического течения и прогноза заболевания.

Последнее десятилетие ознаменовалось значительными успехами в понимании канцерогенеза щитовидной железы на молекулярном уровне. Но, несмотря на то, что некоторые генетические мутации уже описаны, в особенности для папиллярного гистотипа РЩЖ, механизмы, лежащие в основе развития этих новообразований, пока еще далеки от полного понимания. Между тем, для клинической практики большое значение имеет их использование в диагностике, прогнозе и лечении.

Поиск генетических аномалий, обусловливающих наследственную пред-расположешюсть к развитию РЩЖ, является клинически востребованным направлением фундаментальной медицины. В результате таких исследований выявлено, что в этиологии медуллярного рака ЩЖ часто играют роль наследуемые (терминальные) мутации в протоонкогене RET [Machens et al., 2001; Dotto, 2008; Nose, 2011]. Мутация V600E в гене В RAF в большинстве случаев обнаружена и превалирует в папиллярных карциномах, она также выявляется в ана-пластических и слабодифференцированных формах РЩЖ [Xing, 2007].

Очевидно, что без изучения молекулярных и генетических причин и механизмов канцерогенеза ЩЖ нельзя ожидать значительного прогресса в диагностике и лечении больных РЩЖ. Речь идет, прежде всего, об исследовании мутаций в специфичных для РЩЖ онкогенах (RET, BRAF), а также инактивации генов- онкосупрессоров (RBI, pl6/CDKN2a, pl5/CDKN2b, pl4/ARF, CDH1 и др.). в последние годы наметилось еще одно направление в ранней диагностике онкологических заболеваний. Это связано с недавним открытием в геноме человека генов, кодирующих регуляторные молекулы - микроРНК, которые негативно регулируют экспрессию многих генов. Показано, что микроРНК участвуют почти во всех биологических процессах в клетке в норме и при разных патологических состояниях. По современным представлениям нарушение экспрессии отдельных микроРНК, регулирующих онкогены и раковые супрессор-ные гены, является одним из механизмов канцерогенеза. Более того, сами микроРНК могут выступать в роли как онкогенов, так и супрессоров опухолевого роста (Krutovskikh, Herceg, 2010). Кроме того, они могут быть использованы в качестве биомаркеров в диагностике и прогнозе многих онкозаболеваний (Ко-saka et al., 2010), в том числе и при раке щитовидной железы (Marini et al.,2011). В связи с этим, поиск новых маркеров с использованием передовых технологий анализа экспрессии микроРНК для РЩЖ представляется весьма актуальной и перспективной задачей.

В то же время, наряду с прогрессом в молекулярно-генетических исследованиях РЩЖ совершенствуются стандартные и разрабатываются новые клинические подходы. Высокоразрешающие и высокочувствительные методы лучевой и нелучевой диагностики РЩЖ также постоянно улучшаются. Широкое внедрение метода УЗИ в практическое здравоохранение, наблюдаемое в течение последних двух десятилетий, привело к выявлению большого числа карцином ЩЖ на субклинической (непальпируемой) стадии опухоли, потенциал агрессивности которых чрезвычайно неоднороден [Пушников и др., 2003; Wang et al., 2012].

Актуальность проблемы является очевидной и свидетельствует о необходимости не только дальнейшего совершенствования существующих методов диагностики и оценки их эффективности, но и поиска новых достаточно информативных и неинвазивных методов исследования, разработки оптимизированного диагностического алгоритма с целью ранней диагностики опухолей щитовидной железы, а также о необходимости выработки рациональной хирургической и лечебной тактики у больных с этой патологией.

Цель работы: Улучшить диагностику и лечение больных раком щитовидной железы путем разработки и внедрения этиопатогенетических и прогностических подходов, основанных на современных передовых клинических технологиях и достижениях молекулярной биологии и генетики.

Задачи исследования:

1. Проанализировать фоновую патологию как этиологический фактор возникновения рака щитовидной железы.

2. Оценить дифференциально-диагностические возможности основных современных методов исследований (ультразвуковой диагностики и тонкоиголъ-ной аспирационной биопсии) при опухолях щитовидной железы.

3. Разработать и внедрить оптимизированный диагностический алгоритм с использованием новых методов исследований (соноэластография, метод компьютерного анализа изображений и нейросетевых технологий) при узловых образованиях щитовидной железы с целью раннего выявления рака щитовидной железы.

4. Определить показания к выбору вида, объема и характера хирургического вмешательства при разных клинико-морфологических формах опухолей щитовидной железы.

5. Разработать новые методы диагностики новообразований щитовидной железы с применением генетических онкомаркеров В КАР и вЗТР.

6. Провести анализ генетического полиморфизма ферментов метаболизма ксенобиотиков СУР1А1, СУР1А2, СУР 19 и 8иЬ'Г1А1 у больных раком щитовидной железы для выявления групп повышенного онкологического риска.

7. Определить экспрессию микроРНК (пнК21, т ¡1*221, пиК222, ггп'[Ш5 и гт11205) в новообразованиях щитовидной железы для диагностики злокачественного процесса.

Научная новизна работы

Впервые РЩЖ изучался не только с точки зрения особенностей клинического течения гистологических типов, но и с современных молекулярно-генетических позиций. На достаточном по численности клиническом материале проанализирована фоновая патология ЩЖ, как этиологический комплекс факторов возникновения РЩЖ. Показано, что наиболее частыми предопухолевыми изменениями были коллоидный зоб (37,91%), токсический зоб (20,88%), аденомы (10,99%) и аутоиммунный тиреоидит (10,99%).

С целью улучшения дооперациоиного выявления РЩЖ автором впервые проанализированы и систематизированы данные традиционных исследований, а также внедрены новые методы лучевой диагностики (соноэластография), что позволило повысить диагностическую точность ультразвукового исследования при узловой патологии щитовидной железы. Чувствительность соноэластогра-фии для выявления рака щитовидной железы составила 90%, специфичность -93,7%, диагностическая точность - 92,9%.

В алгоритме дифференциальной диагностики фолликулярного РЩЖ внедрен метод компьютерного анализа изображений и нейросетевых технологий, что позволило повысить диагностику с чувствительностью до 92%, с сокраще-

нием времени исследования с 30 мин до 5 мин и исключить зависимость результата от квалификации врача.

Разработаны и внедрены новые подходы к тактике хирургического лечения больных РЩЖ, заключающиеся в определении объема операции на пораженном органе и вмешательствах на зонах регионарного метастазирования.

Впервые в Сибирском регионе проведен анализ соматической мутации УбООЕ в онкогене ВЯАР при спорадическом папиллярном РЩЖ. Установлено, что данная мутация регистрируется в 64 % опухолей щитовидной железы.

Исследована экспрессия гена и ферментативная активность С5ТР1-1 в тканях щитовидной железы. Показано 2-4-х кратное повышение активности ОБТРЫ и {,4—8-ми кратное усиление экспрессии ее гена в доброкачественных новообразованиях ЩЖ. В тканях карциномы ЩЖ отмечено 1,5-2-х кратное снижение активности и 1,5-3-х кратное снижение экспрессии гена ОБТРЫ. Впервые С5ТР1-1 рассматривается как потенциальный онкомаркер для папиллярного РЩЖ.

Впервые проведен анализ генетического полиморфизма ферментов метаболизма ксенобиотиков у женщин с заболеваниями ЩЖ. Показано, что женщины, носители дикого аллеля О и генотипа С\0 сульфотрансферазы БиЬТ1А1 имеют повышенный риск развития рака щитовидной железы с отношением шансов 0111=0,38 (р=0,0004) и ОШ=0,11 (р=0,0013) соответственно.

При узловой патологии ЩЖ впервые исследовалась экспрессия микроРНК и показана перспективность разрабатываемого подхода в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных образований. Установлено, что экспрессия пнК.-21, гшН-221 и гшК-222 достоверно увеличивается более, чем в 5 раз в 50-85% случаев рака щитовидной железы.

Практическая значимость

Большой по объем)' клинический материал позволил изучить проблему РЩЖ на современном научно-доказательном уровне. Проанализировано влияние фоновой патологии на вероятность возникновения дифференцированного РЩЖ, что является важным аспектом тактики ведения больных в клинической практике, включающей формирование групп риска с последующим углубленным обследованием.

Уточнены и систематизированы возможности существующих ультразвуковых методов диагностики РЩЖ. В дополнение к традиционным внедрен новый метод — соноэластография. В результате комплексного анализа с помощью данной методики усовершенствованы дифференциально-диагностические алгоритмы выявления злокачественных опухолей при узловой патологии ЩЖ, позволяющие повысить диагностическую точность до 92,9%. со специфичностью 93,7%.

Применение метода компьютерного анализа изображений и нейросетевых технологий значительно повысило чувствительность ТАПБ при фолликулярном РЩЖ, что может определять дальнейшую тактику лечения узловой патологии щитовидной железы при цитологическом диагнозе «фолликулярная опухоль».

Выявление соматической мутации У600Е в онкогене ВЯАР в пунктате и смыве пункционной иглы позволило улучшить информативность ТАПБ при спорадическом папиллярном Р1ДЖ, а также определить тактику лечения.

Методами анализа генетического полиморфизма ферментов метаболизма ксенобиотиков у женщин показано, что носители дикого аллеля в и генотипа сульфотрансферазы $1ЛьТ1А1 имеют повышенный риск развития рака щитовидной железы по сравнению с носителями мутантного генотипа в—>Л в позиции 638, что может явиться важным аргументов в скрининге населения для формирования групп риска

Анализ профиля экспрессии микроРНК гш11-21, пи 11-221 и пи11-222 в узловых образованиях ЩЖ выявил специфические и перекрывающиеся профили в разных типах опухолей. Показана перспективность данного подхода для создания новых методов ранней диагностики РЩЖ.

Изучение закономерностей частоты и обширности регионарной диссемина-ции ГПРЩЖ позволили определить показания и оптимизировать выбор объема регионарной лимфодиссекции с учетом различных факторов, оказывающих независимое влияние на риск прогрессирования. В хирургическую практику внедрен метод интраоперационной диагностики «сторожевого» лимфоузла, метод определения инвазии опухоли за собственную капсулу в свободную тиреоидную ткань, что позволяет оптимизировать дальнейшую тактику операции.

Таким образом, в результате проведенного исследования разработаны и внедрены новые подходы к диагностике и лечению больных дифференцированными формами РЩЖ.

Положения, выносимые на защит}':

1. С целью улучшения диагностики РЩЖ включать в дополнение к общепринятому алгоритму обследования новые клинические методы, такие как соноэла-стография, метод компьютерного анализа изображений и нейросетевых технологий, повышающий информативность цитологической дифференциал ьной диагностики фолликулярных опухолей щитовидной железы.

2. Эффективность хирургического лечения РЩЖ определяется адекватным характером операции на пораженном органе и зонах регионарного метастазиро-вания. Объем операции зависит не только от размера и инвазивных свойств первичной опухоли, но и ог локализации последней в щитовидной железе. Интрао-перационная лимфография с целью поиска «сторожевого» лимфоузла позволяет также обосновать необходимость хирургического вмешательства на органе и зонах ближайшего регионарного метастазирования.

3. Применение новых молекулярно-генетических методов, таких как:

— определение соматической мутации УбООЕ в онкогене ВЯАР в пунктате узла щитовидной железы;

-— определение экспрессии гена и ферментативной активности ОБТРЫ в опухолевых тканях щитовидной железы;

— анализ генетического полиморфизма ферментов метаболизма ксенобиотиков с выявлением женщин, несущих дикий аллель G в позиции 638 и дикий генотип G/G гена SULTJA1;

— определение экспрессии микроРНК miR-21, miR-221 и miR-222 в тканях тиреоидной карциномы,

позволяет повысить точность существующих методов диагностики РЩЖ.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на международных и российских конференциях: Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Опухоли головы и шеи» (Анапа, Россия, май 2006), Первый украино-российский симпозиум по эндокринной хирургии с международным участием «Современные аспекты эндокринной патологии» (Киев, Украина, 2006), VIII Дальневосточная онкологическая конференция «Современные возможности и актуальные проблемы диагностики и лечения злокачественных опухолей» (Владивосток, Россия, сентябрь 2006), Межрегиональная конференция с международным участием «Рак щитовидной железы и эндемический зоб» (Екатеринбург, Россия, апрель 2007), Международный научный симпозиум «Малоинвазивные технологии в эндокринной хирургии» (Санкт-Петербург, Россия, 2008), Международный конгресс по онкологической хирургии (Краснодар, Россия, 2008), Российская научно-практическая конференция с международным участием «Совершенствование онкологической помощи в современных условиях» (Барнаул, Россия, 2008), Международный научный форум «Рак щитовидной железы: современные принципы диагностики и лечения» (Санкт-Петербург. Россия, 2009), Международный научный форум «Патология околощитовидных желез: современные принципы диагностики и лечения» (Санкт-Петербург, Россия, 2010), Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Достижения современной онкологии» (Барнаул, Россия, 2010), XIX Российский симпозиум с международным участием «Современные аспекты хирургической эндокринологии» (Челябинск, Россия, 2010), IV Международный конгресс «Опухоли головы и шеи» (Иркутск, Россия, 2011), II Украино-российский симпозиум «Современные аспекты хирургической эндокринологии» (Харьков, Украина, 2011). XX Российский симпозиум с международным участием «Современные аспекты хирургической эндокринологии» (Казань, Россия, 2012).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 41 печатная работа, из которых 15 - статьи в рецензируемых журналах перечня ВАК.

Структура работы: Диссертация построена по традиционному плану, содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы,

результаты, обсуждение, выводы, список литературы и приложения. Рукопись содержит 25 таблиц, 51 рисунок. В списке литературы 429 источника. Общий объем работы — 258 страниц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе проанализирован накопленный в клинике МБУЗ г. Новосибирска «Городская клиническая больница № 1» опыт диагностики и лечения больных РЩЖ, а также результаты совместных исследований с цитологической лабораторией Дорожной клинической больницы на ст. Новосибирск-Главный ОАО «РЖД», с ФГБУ «Институт химической биологии и фундаментальной медицины» СО РАН, а также с ФГБУ «Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики» СО РАМН. Всего в эксперимент было взят 901 пациент с новообразованиями щитовидной железы с соотношением женщины: мужчины 801:100. Средний возраст составлял 47±30 лет. Количество больных со злокачественными опухолями щитовидной железы было 687 (75,5 %), с доброкачественными новообразованиями щитовидной железы — 214 (24,5%) человек. Онкологическая патология ЩЖ была представлена, в основном, дифференцированными формами рака (ПРЩЖ и ФРЩЖ), что составило 95% от всех видов злокачественных опухолей, включенных в исследование. Больные с диагнозом рак щитовидной железы на момент исследования имели преимущественно стадию I (45%) или II (50%). Больные с экстратире-оидным распространением процесса составляли 5% случаев. Доброкачественные процессы ЩЖ представлены различными видами аденом, аутоиммунным тиреоидитом, ДУЗ.

Из 901 пациентов, включенных в исследование было оперировано 746 человек, что составило 82,8%. По поводу рака щитовидной железы прооперировано 578 больных (77,5%), по поводу доброкачественных новообразований — 168 (22,5%). Операцией выбора при раке щитовидной железы была тиреоидэкто-мия — 526 больных (91%), 52 (9%) пациентам выполнена гемитиреоидэктомия. В 33% случаев операции по поводу РЩЖ сопровождались тем или иным вариантом лимфодиссекции.

Остальным 155 (17,2%) пациентам, исходя из характера патологического процесса в щитовидной железе, оперативное лечение не было показано. Р1м было рекомендовано динамическое наблюдение.

Исследования соответствовали рекомендациям стандартов этического комитета, принятым в Российской Федерации, разработанным в соответствии с Хельсинской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека», поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266. Все лица, участвующие в исследовании, дали письменное информированное согласие.

Для исследования фоновой патологии, как прогностического фактора заболеваемости РЩЖ, выполнен анализ 247 историй болезни пациентов, пролеченных по поводу рака щитовидной железы в период с 2005 по 2007 год включительно. Диагноз РЩЖ установлен на основании планового гистологического исследования, проведенного в патоморфологическом отделении больницы. На дооперационном этапе использовали исследование уровней гормонов (Т3, Т4, ТТГ,), ультразвуковое исследование ЩЖ, тонкоигольную аспирационную биопсию под контролем УЗИ, сцинтиграфию. Всем больным выполнено послеоперационное плановое гистологическое исследование.

Из всех применяемых в настоящее время методов лучевой диагностики анализировались результаты ультразвукового обследования из лечебных учреждений, направивших больных для оперативного лечения в МБУЗ г. Новосибирска «ГКБ № 1». Оценивали следующие УЗИ-признаки РЩЖ: гипозхогенность новообразований; негомогенность эхоструктуры; наличие микрокальцинатов; неровность контуров; интранодулярный кровоток; наличие гипоэхогенного ободка.

Соноэластография проводилась на ультразвуковом сканере «HITACHI EUB-8500» линейным высокочастотным датчиком с частотой 8-12 МГц.

Для компьютерного анализа цитологических и гистологических препаратов использовали систему анализа изображений (САИ), состоящую из микроскопа проходящего света «AxioStar+» (Carl Zeiss, Germany), компьютера Pentium IV IBM, цветной цифровой видеокамеры Axiocam (Carl Zeiss, Germany) и программы Axio Vision 3.1.

Для решения задач дифференциальной диагностики фолликулярных опухолей с помощью нейросетевых технологий использовали многослойные нейронные сети, обученные при помощи алгоритма обратного распространения ошибки (Тарков М.С. и др., 2007). Моделирование нейронной сети осуществляли при помощи специально созданного для этих целей на языке «С++» нейроимитато-ра «НЕЙРОКЛАСС» (регистрационный № 2006612844, фирма МИКРОМЕД), работающего в среде MS Windows 95, 98, 2000, NT, ХР, позволяющего моделировать различные архитектуры искусственных нейронных сетей, обучать их и тестировать. Выходом сети был диагноз: фолликулярный рак и фолликулярная аденома.

Для лечения РЩЖ использовали традиционные хирургические подходы с учетом ультразвуковых характеристик узла, результатов дооперационного цитологического исследования и интраоперационных данных.

Соматическую мутацию в гене BRAF V600E (Т1799А) в опухолевых образцах щитовидной железы определяли методом аллель-специфичной амплификации в режиме реального времени. ПЦР проводили в стандартном буфере. Полученные результаты интерпретировали исходя из анализа графиков накопления флуоресценции, специфичность оценивали с помощью кривой плавления.

Генотипирование женщин проводили методом ПДРФ-анализа продуктов ПЦР с использованием подобранных праймеров и соответствующих ферментов

рестрикции: для Msp\ для CYP1A1; ApaI для CYPIA2; SfáNl для CYP19; Hhal для SULT1A1. Геномную ДНК выделяли методом высоко-солевого осаждения белков из буккального эпителия больных и здоровых женщин. Статистическая обработка результатов проведена с помощью программы SISA (http://home.clara. net/sis а/). В качестве критерия, определяющего, является ли исследуемый признак фактором риска заболевания, было использовано отношение шансов (odds ratio, или ОШ).

Экспрессия гена hGSTPl-1 была определена методом мультиплексной ОТ-ПЦР на амплификаторе Терцик (Компания «ДНК Технологии», Россия). Содержание мРНК hGSTPJ оценивали в относительных единицах как отношение интенсивности окрашивания специфической полосы исследуемых генов к интенсивности полосы гена домашнего хозяйства GAPDH. Для определения ферментативной активности hGSTP 1-1 выделяли цитозольную фракцию щитовидной железы. В качестве субстрата использовали этакриновую кислоту. Продукты реакции были разделены методом ВЭЖХ с использованием автоматизированного комплекса Altex, который включал два насоса Beckman 110В, системный контроллер Beckman 420 (США) и был доукомплектован детектором с переменной длиной волны SpectroMonitorSlOO (LDS Analytical, Англия), самописцем Pharmacia (Швеция), а также компьютером, оснащенным программой GME712 для количественной оценки хроматографических пикон.

Для определения количества микроРНК использовали опухолевую ткань щитовидной железы, удаленную в ходе хирургического вмешательства. В качестве контроля служила прилегающая к опухоли нормальная ткань. Забор образцов и их характеристика проводились под контролем врача. Для определения уровня экспрессии miRHK 21, 221,222, 155,205 проводили ПЦР в реальном времени на амплификаторе CFX96 (Bio-Rad Laboratories). В качестве внутреннего контроля использовали малую РНК U6, которая стабильно экспрессируется как в норме, так и в опухоли. Изменение количества miRHK в опытном образце по отношению к контрольному вычисляли по формуле: 2 iACt, где AACt = (Ct -^^иб^опытный ofip. ~ (CtmiR - ai>v)kuHrp oSp. Статистическую обработку результатов проводили с помощью компьютерной программ Statistica 6.0. и ORIGIN Pro 8.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В настоящее время не вызывает сомнения, что успех в диагностике и лечении онкологических заболеваний, в том числе и РЩЖ, зависит от комплексного подхода с применением существующих передовых клинических и молекулярно-генетических методов.

Фоновая патология ЩЖ, как прогностический фактор заболеваемости РЩЖ

Выполнен анализ 247 пациентов, оперированных по поводу РЩЖ, из них женщин -218 (88,3%), мужчин-29 (11,7%) . Соотношение м : ж = 1 : 7,5. Воз-

раст больных составил: у женщин от 17 до 78 лет и у мужчин от 25 до 66 лет. Пик заболеваемости приходится на возраст от 50 до 59 лет, что может явиться основанием для включения этого возрастного контингента в группу риска.

Выявлено, что наиболее частой фоновой патологией являются: коллоидный зоб, токсический зоб, аденомы, аутоиммунный тиреоидит и фолликулярные опухоли. Обращают на себя внимание несколько важных моментов.

1. Процент аденоматозных изменений в ткани ЩЖ - 10,99%. Небольшой процент объясняется тем, что в последние годы диагноз «аденома» считается облигатным предраковым заболеванием и принятой во всем мире агрессивной тактикой при установлении данного диагноза. Таким образом, удельный вес РЩЖ на фоне аденом резко снизился.

2. Результаты исследования показывают, что в 20,88% случаях РЩЖ развивается на фоне тиреотоксических изменений. Следует отметить, что не во всех случаях диагноз тиреотоксического процесса сопровождался клинической картиной и даже лабораторными изменениями. Это результаты гистологической диагностики и, соответственно, диагноз тиреотоксикоза не был установлен до оперативного лечения.

Следует обратить внимание на данные, полученные по поводу коллоидного зоба, который в 37,91% явился фоном РЩЖ. Столь большие цифры можно объяснить как региональными особенностями развития РЩЖ, так, вероятно, и методами статистической обработке данных. Многие авторы исходят из того, сколько выявлено РЩЖ среди всех пациентов с коллоидным зобом. Мы же, в свою очередь, исходили из прямо противоположного: какой процент коллоидного зоба является фоновой патологией при РЩЖ.

Методы УЗИ исследования как этап дооперацштной диагностики рака щитовидной железы

Проведен анализ информативности лучевых методов диагностики и оценки распространенности РЩЖ (ультразвуковое исследование, соноэластография).

Режим серой шкалы

Установлено, что эхоструктурные характеристики отличаются широкой вариабельностью. Определены специфические эхографические характеристики (гипоэхогенность образований, негомогенность эхоструктуры, наличие микро-кальцинатов, неровность контуров, интранодулярный кровоток, наличие гипоэ-хогенного ободка).

При ретроспективном анализе гистологического послеоперационного материала выявлено: 1) у 36 пациентов диагноз РЩЖ был подтвержден (64,3%); 2) у 6 больных отмечен ложноотрицательный результат (10,7%); 3) у 14 больных предположение по УЗИ-признакам о РЩЖ не подтвердилось (25,0%).

Из числа подтвержденных гистологически (42 случая РЩЖ) частота встречаемости анализируемых УЗИ-признаков распределилась следующим образом: 1) ипоэхогенность образований - 14; 2) негомогенность эхоструктуры - 8; 3) на-

личие микрокальцинатов — 6; 4) неровность контуров — 5; 5) интранодулярный кровоток — 2; 6) наличие пптоэхогенного ободка — 1. наиболее часто встречаемыми УЗИ-признаками РЩЖ являются: гнпоэхогенность образований, негомогенность эхоструктуры и наличие микрокальцинатов. Неровность контуров ЩЖ также необходимо отнести к симптому РЩЖ, которая встречается достаточно часто (13,9%). В то же время, такие признаки, как интранодулярный кровоток и гипоэхогенный ободок регистрируются достаточно редко. Следует заметить, что при проведении УЗИ-анализа ЩЖ эти признаки часто сочетаются. Для оценки таких сочетаний был проведен математический анализ Парето: гипоэхогенность новообразований, негомогенность эхоструктуры, наличие микрокальцинатов являются существенно важными факторами, при сочетании которых диагностическая ценность составляет 77,8%.

Соноэластографт

Для оценки жесткости (эластичности) узловых образований наряду с УЗИ щитовидной железы с оценкой ЦДК, проводили «виртуальную пальпацию» с получением изображения деформации в зоне интереса в виде цветового кодирования на экране и оценки коэффициента жесткости. В ходе нашей работы мы обнаружили, что многие опухоли окрашиваются в соноэластографическом режиме неоднородно, и коэффициент жесткости в разных участках одного новообразования может различаться. Это связано с неоднородностью популяции клеток опухоли. Согласно данным гистологических заключений, у прооперированных пациентов было выявлено 10 случаев рака ЩЖ и 4 - доброкачественной патологии. По данным соноэластографии в данной группе оказалось 1 ложно-отрицательное заключение (КЖ<3, гистологически выявлен рак) и 2 ложнопо-ложительных (КЖ>3, гистологически рака нет), 9 истинно положительных результатов (КЖ>3, гистологически рак подтвержден) и 2 истинно отрицательных (КЖ<3, гистологически рака нет). В группе пациентов, которым оперативное лечение показано не было (28 случаев), все результаты СЭГ были отрицательны (КЖ<3). Чувствительность метода составила 90%, специфичность - 93,7%, диагностическая точность — 92,9%.

Таким образом, метод соноэластографии можно использовать для динамического наблюдения пациентов с уже имеющимися узлами ЩЖ. СЭГ является не-инвазивным методом диагностики, ее рекомендовано проводить одновременно с УЗИ, повышая информативность обследования. Известно также, что клеточный пул опухоли неоднороден, и при тонкоигольной аспирационной биопсии в пунктат могут не попасть злокачественные клетки. В таких случаях СЭГ можно использовать как дополнительный метод диагностики.

На основании проведенного анализа можно вывести следующие соноэласто-графические критерии рака ЩЖ: I ) окрашивание исследуемого образования в режиме СЭГ в синие тона; 2) значение коэффициента жесткости более 3 единиц.

При сочетании клинических и соноэластографических признаков рака ЩЖ (даже при отсутствии цитологического подтверждения злокачественной опухо-

ли по ТАБ) мы предлагаем рассматривать данное узловое новообразование как злокачественное и выставлять больным показания к хирургическому лечению. Предлагаем ввести следующий алгоритм действий в случае, когда данные ТАБ малоинформативны или сомнительны (рис. 1).

Рисунок 1. Предлагаемая тактика при малоинформативных или сомнительных результатах ТАБ.

Учитывая высокую информативность СЭГ (по данным нашего исследования диагностическая точность составляет 93%), данный метод, не являясь альтернативой морфологическому исследованию при ТАБ, в совокупности с другими данными, улучшает диагностику злокачественного процесса в щитовидной железе.

Метод компьютерного анализа изображений и нейросетевых технологий для дооперационной диагностики РЩЖ при цитологическом заключении «фолликулярная опухоль»

Для решения задачи дифференциальной цитологической диагностики фолликулярного рака и аденомы ЩЖ в материале ТАБ была применена нейросете-вая технология и автоматический анализ изображений цитологических образцов опухоли, полученных с использованием системы анализа изображений [Полоз и др., 2006; Тарков и др., 2007; Shapiro et al„ 2007].

В качестве диагностирующей системы, разбивающей множество изображений на два класса («аденома» и «фолликулярный рак»), использовали двуслойную нейронную сеть. Применение нейросетевого анализатора «НЕИРОКЛАСС [Полоз и др., 2007; Шкурупий, 2009], обученного на примерах изображений опухолей, полученных с использованием компьютерной системы анализа изображений и прошедшего предварительное тестирование способно значительно повысить диагностическую ценность цитологического метода исследования фолликулярных опухолей ЩЖ, как в пункционном материале, так и при интраопера-ционном исследовании, благодаря своей быстроте и высокой чувствительности.

В исследовании в качестве тестовых использовали изображения трех полей зрения 44 фолликулярных аденом и 40 фолликулярных раков с установленным гистологическим диагнозом. В результате тестирования 80 из 84 примеров были диагностированы правильно, что составило 95% совпадения с гистологическими диагнозами.

Актуальность использования нейросетевого метода классификации изображений фолликулярных опухолей обусловлена трудностями дифференциальной диагностики этих новообразований, высокой ответственностью и «ценой» принятого решения. Проведенное исследование показало, что использование нейро-сетевой технологии может значительно повысить чувствительность метода до-операционной цитологической диагностики фолликулярных опухолей ЩЖ (до 95%), за счет унифицирования и стандартизации способа диагностики, исключающего компонент субъективизма при автоматическом распознавании серии цветных цифровых изображений образцов при этих патологических процессах.

Интраоперационпая тактика определения объема хирургического вмешательства па щитовидной железе и зонах регионарного метастазирования приДРЩЖ

Определение объема операции на ЩЖ и зонах регионарного метастазирования при РЩЖ является актуальной задачей. В результате исследования были использованы следующие подходы.

Определение объема операции на ЩЖ

Согласно современной тактике хирургического лечения РЩЖ операцией выбора на органе является тиреоидэктомия. Органосохраняющие операции возможны только в строго определенных случаях (размеры опухоли по символу Т и отсутствие экстратиреоидной распространенности процесса). Однако в реальной жизни хирург часто сталкивается с вопросами необходимости расширения объема операции до тиреоидэктомии при раках малых размеров (микрокарциномы). Проведен анализ интраоперационного гистологического исследования инвазии опухоли ЩЖ за собственную капсулу (если такая имеется) в свободную тиреоидную ткань.

Во всех анализируемых случаях (7 пациентов с диагнозом папиллярный рак щитовидной железы) при срочном гистологическом исследовании препарата выявлена инвазия раковых клеток за собственную капсулу опухоли в свободную тиреоидную ткань. Это определило изменение интраоперационной тактики - удаление оставшейся части щитовидной железы (т.е. объем операции - тиреиодэк-томия). При плановом гистологическом исследовании во всех случаях в предполагаемом тиреоидном остатке обнаружены микрофокусы папиллярного рака.

Таким образом, при выполнении органосберегающей операции (гемитиреои-дэктомия с перешейком) при микрокарциномах (не более Т;) папиллярного рака, необходимо срочное интраоперационное гистологическое исследование состояния капсулы опухоли. При выявлении инвазии последней опухолевыми клетка-

ми в свободную тиреоидную ткань необходимо расширять объем операции до тиреоидэктомии.

Определение тактики на зонах регионарного метастазирования при ЩЖ

В случае подтвержденных метастатических изменений в лимфоузлах шеи не вызывает вопросов необходимость их диссекции. Однако выполнение диссек-ции в превентивном варианте (в случае субклинического поражения) является предметом многочисленных дискуссий. Особенно это касается У1-го уровня регионарного метастазирования (центральная клетчатка шеи).

Проанализированы результаты оперативного вмешательства у 90 пациентов. Всем больным выполнялась тиреоидэктомия по поводу ДРЩЖ, которая дополнялась диссекцией центральной клетчатки шеи в превентивном варианте.

После завершения гистологического исследования выявлено, что папиллярный рак встречался в 78 случаях (86,7%), фолликулярный - в 12 (13,3%). В 58,9 % случаев (53 пациента) отмечено метастатическое поражение лимфоузлов центральной клетчатки шеи. При анализе этих групп по гистологическому варианту опухоли выявлено: фолликулярного рака 16,7% (2 больных из 12); папиллярного рака 65,4% (51 пациент из 78).

Таким образом, необходимость превентивной ДЦКШ при фолликулярном раке щитовидной железы без применения дополнительных интраоперацион-ных методов исследования подвергается сомнению.

У 24 пациентов мы проанализировали частоту метастатического поражения в лимфоузлы ЦКШ папиллярного рака в зависимости от локализации опухоли в доле (Рис. 2).

%

Ш20

90,00 75,00

80,00 | 111111111111111

70,00 Н

60,00 | |1|

50,00 -1

40,00 -|

30,00 -1

20,00 'Ш !

10,00 Ш II

0,00 -Р®..................I--Г

в/3 доли ср/3 доли н/3 доли

Рисунок 2. Частота метастазирования в ЦКШ в зависимости от локализации опухоли в доле.

Выявлена следующая закономерность: при локализации опухоли только в верхнем полюсе доли (2 случая) метастазов центральной клетчатки не найдено; при опухоли в средней трети метастазы выявлены в 84,6 % (11 случаев из 13); в нижней трети - 77,8 % (7 случаев из 9). У остальных 24 пациентов опухоль занимала больше чем треть доли. Они исключены из анализа для объективизации исследования по данной характеристике.

100 90 80 70

50 40 30 20 10 0

Рисунок 3. Частота метастазирования в ЦКШ в зависимости от характера опухоли

по символу Т.

При исследовании частоты метастазирования в ЦКШ в зависимости от характера опухоли по символу Т (ШМ от 2002 г.) выявлена следующая закономерность (Рис. 3): при Т, наблюдается 40% метастазирования (10 случаев из 25); при Т2 - 64,1 % (25 случаев из 39); при Т3, Т4 - 92,9 % (13 случав из 14).

С целью дополнительной интраоперационной диагностики у 14 пациентов было применено интраоперагоюнное контрастирование (Рис. 4).

А В

Рисунок 4. Методика выполнения интраоперационной лимфографии. А — введение лимфотропного красителя ларанодулярно. В - окончательный результат лимфографии (окрашен сторожевой лимфоузел). Использован краситель Bine Patente V Sodique Guberber 2,5% (France).

У 7 больных (50%) были выявлены метастазы в «сторожевом» узле и при последующем гистологическом исследовании в «несторожевых» лимфоузлах

центральной клетчатки шеи. У 6 пациентов (42,9%) метастазы отсутствовали в обеих группах, в одном случае (7,1%) имелся ложноотрицательный результат (отсутствие метастаза в «сторожевом» лимфоузле и их наличие в «несторожевых»). Общая информативность данного исследования составила 92,9%.

Собственные результаты специфических осложнений после выполнения ДЦКШ приведены в табл. 1. Группа А (20 чел.): выполнена тиреоидэктомия с диссекцией центральной клетчатки шеи. Группа В (20 чел.): выполнена тиреоидэктомия. Оценивались следующие параметры: нарушение фонации, жалобы на чувство дискомфорта, боли в области операции, уровень кальция крови.

Согласно таблице, односторонний парез гортани встречался одинаково часто в обеих сравниваемых группах, причем его частота не превышала 10%, тогда как двустороннего пареза гортани практически не регистрировался. Средний уровень кальция в крови в раннем послеоперационном периоде был снижен в обеих группах, что связано с объемом проведенной операции. Однако через год этот показатель возвращался к норме. Дискомфорт, боли в области шеи отмечались только в раннем послеоперационном периоде, что можно объяснить реакцией организма на раневую боль. Через год пациенты обеих групп практически не предъявляли жалоб.

Таблица 1

Послеоперационные осложнения у пациентов, оперированных по поводу

ДРЩЖ

Осложнения Группа А Группа В

Через 10 дней после операции Через 1 год после операции Через 10 дней после операции Через 1 год после операции

Односторонний парез гортани 2 (10%) 1 (5%) 2 (10%) 2 (10%)

Двусторонний парез гортани 1 (5%) — — —

Средний уровень кальция в крови (моль/л) 2,0 2,2 2,1 2,35

Дискомфорт, боли в области шеи 11 (55%) 1 (5%) 10(50%) —

Группа А — тиреоидэктомия с диссекцией центральной клетчатки шеи;

Группа В — тиреоидэктомия.

Таким образом, учитывая высокую частоту субклинического метастатического поражения лимфоузлов центральной клетчатки шеи, можно рекомендовать её диссекцию в превентивном варианте при папиллярном раке щитовидной железы Т3, Т4 и локализации опухоли в средней и нижней трети доли. Во всех остальных случаях папиллярного РЩЖ, а также при фолликулярном гистологическом варианте, показания к проведению превентивной диссекции центральной клетчатки шеи должны выставляться по результатам интраоперационного

исследования «сторожевых» лимфатических узлов, выявленных методом лим-фографии.

Анализ послеоперационных осложнений показал, что диссекция центральной клетчатки шеи не увеличивает частоту их возникновения и, следовательно, не ухудшает качество жизни пациентов.

Молекулярно-биологические аспекты диагностики рака щитовидной железы

В последние годы достигнуты значительные успехи в исследовании молекулярно-генетических механизмов канцерогенеза щитовидной железы. Однако несмотря на то, что некоторые генетические мутации уже используются для диагностики, в особенности для папиллярного гистотипа РЩЖ, многие вопросы, касающиеся поиска новых специфичных онкомаркеров РЩЖ, а также возможность их применения в клинической практике для диагностики, лечения и определения прогноза заболеваний остаются нерешенными.

Определение соматической мутации BRAF Т1799А (V600E) в опухолях щитовидной железы

Определение мутации в гене BRAF проводилось в 107 образцах аспиратов из узловых новообразований щитовидной железы и в 47 образцах интраопе-рационных биоптатов пациентов с папиллярной карциномой. Мутация в гене BRAF в позиции Т1799А, ведущая к замене V600E в последовательности белка, в большинстве случаев обнаружена и превалирует в папиллярных карциномах с классической гистологией с высокой частотой: до 83% [Lima et ah, 2004; Nikiforova et al, 2004]. Она также выявляется в анапластических и слабо дифференцированных карциномах [Xing, 2007]. Такая мутация не найдена в фолликулярной карциноме и доброкачественных узлах ЩЖ и, таким образом, может служить специфическим маркером папиллярной карциномы. При исследовании пункционных биоптатов частота соматической мутации гена BRAF в группе с цитологическим диагнозом папиллярной карциномы составила 62,5% (Табл. 2), что соответствует аналогичному показателю для регионов со спорадической заболеваемостью папиллярной карциномой (29-63%) [Kebebew et al, 2007; Henderson et al., 2009].

Таблица 2

Мутация V600E в гене BRAF в пушщиоиных биоптатах РЩЖ

Варианты цитологического диагноза Количество случаев Процент от общей выборки Наличие мутации, п, %

Коллоидный зоб 63 58,9% —

Фолликулярная опухоль 21 19,6% —

Аутоиммунный тиреоидит 10 9,3% —

Папиллярный рак 8 10,3% 5 (62,5%)

Медуллярный рак 2 1,9% -

Данная мутация не была определена при иных цитологических вариантах узлового образования. Всем пациентам с установленным цитологическим диагнозом папиллярная карцинома было выполнено хирургическое лечение с последующей гистологической верификацией диагноза. Подтверждение диагноза получено во всех случаях. В исследовании послеоперационных биоптатов данная мутация была выявлена в 18-ти случаях папиллярного рака из 28 (64 %), в группе с фолликулярным вариантом папиллярного рака мутация определена в 5 случаях из 7 (71 %) и лишь в 1 случае фолликулярной опухоли (Табл. 3).

Таблица 3

Мутация У600Е в гене В КАР в послеоперационных биоптатах РЩЖ

Варианты гистологического диагноза Количество случаев Процент от общей выборки Наличие мутации, п, %

Папиллярный рак 28 59% 18 (64%) 5(71%) 1

Фолликулярный вариант папиллярного рака 7 15%

Фолликулярная опухоль 3 6%

ДУНТЗ 9 19% —

Таким образом, частота соматической мутации ВИАР У600Е (Т1799А), установленная как в пункционных, так и в послеоперационных биоптатах, характеризует Новосибирский регион, как регион со спорадической заболеваемостью папиллярной карциномой. Более того, некоторые авторы выявили ассоциацию изучаемой мутации с более агрессивным течением опухолевого процесса. Поэтому такие пациенты, по нашему мнению, нуждаются в дополнительном исследовании с целью уточнения диагноза и более тщательного выбора тактики и объема лечения. Для фолликулярной карциномы данная мутация в гене ВКАР не характерна. При фолликулярном варианте папиллярного рака, обсуждаемая в литературе частота анализируемой мутации ВКАР, значительно ниже (до 30%).

Анализ генетического полиморфизма ферментов метаболизма ксенобиотиков у пациентов с заболеваниями щитовидной железы

Известно, что многие гормонозависимые опухоли женщин, прежде всего, рак молочной железы и эндометрия, связаны с нарушениями в метаболизме эстрогенов и других стероидных гормонов. Известно, что женщины в пять раз больше подвержены онкологическим заболеваниям щитовидной железы, чем мужчины [Соок е1 а1. 2009]. Эстрогены, воздействующие на клетки-мишени через взаимодействие с эстрогеновыми рецепторами, вовлечены во многие процессы, протекающие в опухолевых клетках щитовидной железы [Ка]опа е1 а1. 2011]. Поэтому одной из задач данной работы было исследование взаимосвязи

полиморфных вариантов генов ферментов, участвующих в метаболизме ксенобиотиков и эстрогенов, с риском развития РЩЖ, где, согласно нашим исследованиям, преобладали женщины (88 %). В ходе проделанной работы было исследовано 40 женщин с диагнозом рак щитовидной железы, 40 женщин с доброкачественными новообразованиями щитовидной железы и 170 женщин контрольной группы с отсутствием данных патологий. Анализ полиморфных вариантов гена CYP1A1 показал снижение частоты мутантного аллеля С гена CYP1A1 у женщин, больных РЩЖ (8,7%) и среди пациенток с доброкачественными новообразованиями щитовидной железы (3,7%), по сравнению с контрольной группой (10,8%), но эти различия были недостоверными (0111=0,32; Р= 0,725), (ОШ=0,32; Р=0,081). В группе пациенток с РЩЖ было обнаружено увеличение частоты встречаемости как мутантного аллеля С гена CYP1A2 (20%) по сравнению с группой контроля (16,5%) (0111=0,92; Р=0,895), так и гетерозиготного генотипа С/А (35%) по сравнению с контролем (32,9%) (ОШ=0,90; Р=0,919). Однако среди этих сравниваемых данных достоверных различий не обнаружено. При анализе полиморфных вариантов гена ароматазы (СУР 19), ключевого фермента синтеза эстрогенов, было выявлено недостоверное увеличение частоты встречаемости мутантного аллеля Т, как в группе больных РЩЖ (7,5%), так и у пациентов с доброкачественными новообразованиями щитовидной железы (6,2%) по сравнению с контролем (5,2%),

Частота мутантного аллеля А гена SULT1A1 в группе больных РЩЖ (25%) статистически меньше, чем в контрольной группе (47,1%) (ОШ-0,38; Р=0,0004), Кроме того, было выявлено достоверное снижение частоты встречаемости гомозигот мутантного типа А/А у больных (5,0 %) по сравнению с группой контроля (29,4%) (0111=0,11; Р =0,001). В группе пациенток с доброкачественными новообразованиями щитовидной железы (16,2%) частота мутантного аллеля А статистически отличается от контроля (47,1%) (0111=0,22; ГМ10001), и также наблюдается статистически значимое снижение частоты гетерозиготного аллеля G/A у пациентов данной группы (12,5%) по сравнению с контролем (35,3%) (ОШ=0,18; Р=0,0005). Наряду с этим следует отметить, что доля мутантных гомозигот А/А в группе больных женщин (10%) меньше, чем у здоровых женщин (29,4%) (ОШ=0,40; Р=0,0004).

Исходя из этих результатов, можно предположить, что наличие дикого аллеля G и дикого генотипа G/G является фактором риска развития как РЩЖ и доброкачественных новообразований щитовидной железы, так и доброкачественных и злокачественных заболеваний матки. Как известно, нуклеотидная замена G638-+A в гене SULT1A1 приводит к значительному снижению активности (до 85%) фермента у лиц, гомозиготных по мутантному His аллелю, т.е. у носителей дикого генотипа отмечается повышение активности фермента SULT1A1 в сравнении с мутантами [Adjei, Weinshilboum, 2002]. Известно, сульфотрансферазы, участвуют не только в детоксикации эстрогенов и ксенобиотиков, но и в биоак-

тикании потенциальных канцерогенов, таких как ароматические и гетероциклические амины [Coughtrie et al. 200 i ], а также в метаболизме тиреоидных гормонов [Robbins, 1981]. Тиреоидные гормоны взаимодействуют с тиреоидными рецепторами, что сопровождается экспрессией генов-мишеней, регулирующих многие клеточные процессы, в том числе пролиферацию тироцитов [Cheng el al., 2010]. Любое нарушение в этой системе может привести к развитию патологических процессов, в том числе канцерогенезу. Выявленные нами различия в частоте мутаций в гене SULT1A1 у здоровых и больных РЖЩ женщин подтверждают роль этой ферментативной системы в развитии патологий ЩЖ. Женщины, носительницы дикого аллеля G и генотипа G/G, имеют повышенную вероятность развития РЩЖ, что может быть основанием для формирования групп риска по этому заболеванию.

Ферментативная активность глютатион S-трансферазы Р1-1 и уровень экспрессии ее гена в опухолевых тканях щитовидной железы человека

Изменение экспрессии глютатиои-8-трансферазы класса Р показано при ге-патокарциноме, раке молочной железы и других видах рака [Simic et ai., 2009; Lasabova et al., 2010]. Однако роль этой ферментативной системы в развитии патологий ЩЖ до настоящего времени не исследовалась. Поэтому нами была проведена оценка ферментативной активности GSTP1-1 и уровня экспрессии ее гена в опухолевых тканях щитовидной железы человека. В качестве контроля была использо вана прилегающая нетранс формированная ткан ь щитовидной железы. Результаты измерения представлены на рис. 5.

Рисунок 5. Диаграмма изменения активности 05ТР1 в тканях ДУЗ и РЩЖ по сравнению с контрольной тканью.

Проанализировано 19 послеоперационных образцов тканей ЩЖ, из которых была выделена цитозолъная фракция. Как видно из представленных диаграмм, изменение активности ЬСвТРЫ в опухолевых тканях происходит по-разному у больных с диагнозом диффузно-узловой зоб (ДУЗ) и папиллярный рак щитовидной железы. В случае ДУЗ наблюдается в среднем 2-4-х кратное повышение ферментативной активности в 70% случаев. При карциноме ЩЖ активность в

Диффузно-узлоеой зоб Карцинома ЩЖ

опухолевой ткани относительно нормы понижается в 1,5-2 раза в 80% случаев. Таким образом, в процессе злокачественной трансформации в клетках щитовидной железы происходит снижение активности фермента НСЖГР1 -1 в опухолевой ткани по сравнению с контролем в большинстве случаев.

Для оценки уровня экспрессии гена Н08ТР]-1 в тканях щитовидной железы человека был использован метод полуколичественной мультиплексной ОТ-ПЦР (Рис. 6). Для количественной оценки уровня экспрессии электрофореграмма была денситометрирована, результаты были представлены как отношение интенсивности окрашивания специфической полосы гена ИСЯТР!-! к интенсивности полосы гена домашнего хозяйства ОАРВН.

-■»«■»Ж*» -ОАРОН. 350 и.о.

„И* -ж*, шж мш V . ¡,<35ТР, 2.33 а.».

I г з

Рисунок 6. Типичная картина разделения продуктов амплификации генов кОБТР1-1 и ОАРВН. / — больной с диагнозом рак ЩЖ; 2,3 — больные с диагнозом ДУЗ ЩЖ;

И — нетрансформированная ткань, О — опухолевая ткань.

Экспрессия была измерена в образцах опухолевых и нормальных тканей у 30-ти больных. Результаты представлены на рис. 7. Показано, что у двенадцати больных (70,59%) с диагнозом ДУЗ наблюдалось повышение уровня экспрессии гена ИС8ТР1-1 в опухолевой ткани по сравнению с нормой (от 1,35 до 8 раз), у четырех больных он не менялся, а у одного понижался (в 1,5 раза). В случае рака щитовидной железы наблюдается понижение уровня экспрессии гена ИОБТР]-! в опухолевой ткани ЩЖ в 1,5-3 раза у одиннадцати из двенадцати пациентов (91,67%). И лишь у одного больного экспрессия ИС8ТР1-1 повышается.

Повышение Снижение Нет изменений

Диффузно-узяовой зоб

Карцинома ЩЖ

Рисунок 7. Диаграмма изменения уровня экспрессии кС8ТР1-1 в тканях ДУЗ и РЩЖ по сравнению с контрольной тканью.

Таким образом, полученные результаты показывают, что снижение активности ЬС5ТР1-1 и уровня мРНК ИСБТР!-! в опухолевой ткани по сравнению с нормальной тканью можно использовать в качестве подтверждающего показателя злокачественности новообразования щитовидной железы. В пользу такого утверждения свидетельствуют расчеты коэффициента корреляции (Таблица 4).

Таблица 4

Параметр S , % е' s4,% Ас, % R (Коэффициент корреляции) Р £ 0,05

Ферментативная активность hGSTPl-1 88,9 80,0 84,2 0,85

Уровень мРНК hGSTPl-1 83,3 70,6 75,9

Определение микроРНК в узловых образованиях щитовидной железы

Исследован операционный материал от 69 пациентов, оперированных по поводу узловой патологии щитовидной железы. Согласно данным гистологического исследования, образцы распределились следующим образом: неопухолевые заболевания ЩЖ (НЗЩЖ) - 15 (аутоиммунный тереоидит - 3, зоб - 12), аденома - 26, рак - 28 (медуллярный рак - 2, фолликулярный рак - 3, папиллярный рак - 23).

Повышением или понижением уровня микроРНК в образце принято считать изменение значения в пять и более раз по отношению к нормальному (контрольном}') образцу, соответственно. Этот расчет обусловлен тем, что изменение уровня соответствует разнице в два пороговых цикла между образцами при проведении ГПДР в реальном времени. Было показано изменение уровня трех микроРНК: miR21, miR221 и miR222 в злокачественных новообразованиях ЩЖ. Так, содержание miR21 повышается в 50% случаев всех исследуемых образцов РЩЖ. В образцах тиреоидной карциномы повышение уровня miR221 и 222 наблюдалось в 60,5% и 64,9% случаев. Эти данные можно интерпретировать следующим образом: повышение уровня miR21 с большой вероятностью указывает на рак, но только в половине случаев рака щитовидной железы происходит это повышение. Повышение уровня miR221 и miR222 наблюдается почти всегда в тканях тиреоидной карциномы и в половине случаев аденом, что указывает, скорее, на развитие опухолевого процесса, а не на конкретную его форму.

Что касается изменения экспрессии miR155 и miR205, то уровень miR155 в основном остается неизменным при любом диагнозе. Увеличение содержания miR205 в 72,7% происходило в случае рака, но с другой стороны, это соответствует только 29,6% всех образцов с наличием раковой опухоли. В 26% случа-

ев рак сопровождался снижением гшИ205, тогда как в 44,4% изменения не происходило.

Таким образом, показано, что изменение уровня 1шШ55 и гшЛ205 не позволяет надежно отличать случаи с неопухолевыми заболеваниями от опухолей щитовидной железы. Сходные результаты получаются при попарном сравнении групп, включающих в себя неопухолевые заболевания, рак и аденому щитовидной железы с помощью и-критерия Манна-Уитни. Показано, что группа образцов с тиреоидной карциномой достоверно отличается от случаев с неопухолевым заболеваниями только по уровню ппЯ21, ппК221 и тШ222, а от образцов с аденомой - по уровню тШ21,тП1221, пп11222 и тШ205.

Полученные данные показывают, что изменение уровня только одной ппК не может быть надежным показателем состояния ткани. Диагностическое значение может иметь только анализ изменения уровня экспрессии сразу нескольких пнЯ. В нашем исследовании это т¡К21, гшК221 и т¡11222.

Таким образом, мы продемонстрировали, что уровни экспрессии гшК21, пи 112 21 и т111222 в норме, а также при раке или аденоме щитовидной железы достоверно отличаются. С другой стороны, изменения уровня гшШ55 и т ¡14205 не удалось ассоциировать с какими либо новообразованиями, что указывает на тот факт, что эти микроРНК не играют существенной роли в развитии тех или иных опухолей в щитовидной железе. В практическом смысле ясно, что данный подход можно применять как для типирования разных опухолей, подобрав набор специфичных микроРНК, так и для ранней диагностики, зафиксировав изменения количества нескольких ключевых микроРНК.

ВЫВОДЫ

1. Изучение этиологических факторов возникновения рака щитовидной железы показало, что наиболее частыми фоновыми процессами являются: коллоидный зоб (37,91%), токсический зоб (20,88%), аденомы (10,99%) и аутоиммунный тиреоидит (10,99%).

2. Анализ информативности ультразвуковой сонографии в выявлении рака щитовидной железы продемонстрировал, что сочетание наиболее часто встречающихся комбинаций эхографических признаков: гипоэхогенность, нечеткие контуры, кальцинагы позволяет прогнозировать наличие рака щитовидной железы в 77,8 % случаев. В моноварианте эти признаки не имеют диагностического значения.

3. Применение метода соноэластографии повышает диагностическую точность ультразвукового исследования рака щитовидной железы и качество наблюдения за пациентами с узловыми образованиями щитовидной железы. Чувствительность соноэластографии для выявления рака щитовидной железы составила 90%, специфичность - 93,7%, диагностическая точность - 92,9%. Вы-

сокоспецифичиыми критериями рака щитовидной железы является значение КЖ>3 и окрашивание узлового образования в синие тона.

4. Использование нейросетевого анализатора для автоматической классификации фолликулярных аденом и фолликулярных Р1ЦЖ по цветным цифровым изображениям образцов цитологических препаратов опухолей позволяет максимально повысить диагностику с чувствительностью до 92%, значительно сократив время исследования с 30 мин до 5 мин и зависимость результата от квалификации врача. Такой подход позволяет включить метод нейросетевого анализатора в алгоритм дооперационной дифференциальной диагностики фолликулярных опухолей.

5. Превентивная диссекция центральной клетчатки шеи показана при папиллярном раке щитовидной железы Т3, Т4 (по ТЫМ от 2002 г.) и локализации опухоли в средней и нижней трети доли щитовидной железы. В остальных случаях, а также при наличии фолликулярного рака щитовидной железы, показания к вмешательству на VI уровне регионарного метастазирования следует определять после получения результатов дополнительного интраоперационного исследования (лимфография).

6. Частота соматической мутации УбООЕ в онкогене ВЯАР при папиллярной карциноме составила 64%, что характеризует Новосибирскую область, как регион со спорадической заболеваемостью папиллярной карциномой. Определение этой мутации как на дооперационном, так и на послеоперационном этапах может быть использовано для более точной диагностики и выбора адекватного метода лечения.

7. Исследование частот встречаемости аллельных вариантов генов, кодирующих ферменты метаболизма ксенобиотиков, у здоровых и женщин с диагнозом рак щитовидной железы и нетоксический зоб щитовидной железы показало, что носители дикого аллеля О и генотипа С\0 гена 5С/¿'Г 1.4 / имеют повышенный риск развития патологий щитовидной железы с отношением шансов 0ш=0,38 (р-0,0004) и 01И-0,11 (р=0,0013) соответственно.

8. В большинстве случаев (70%) в доброкачественных новообразованиях щитовидной железы наблюдается 2-4-х кратное повышение ферментативной активности ОЯТР!-! и 1,4-8-ми кратное усиление экспрессии ее гена. В тканях карциномы ЩЖ (80-90 % случаев) отмечено 1,5-2-х кратное снижение активности и 1,5-3-х кратное снижение экспрессии гена 08ТР1-1, что можно использовать в качестве онкомаркера рака щитовидной железы с чувствительностью 83-88%, специфичностью 70-80% и диагностической точностью 76-84%.

9. Доказана возможность определения экспрессии микроРНК в тканях щитовидной железы. Экспрессия тЖ-21, пиК-221 и т ¡11-222 достоверно отличается в аденомах и карциномах щитовидной железы по сравнению с условно нор-

мальной прилежащей тканью, что указывает на перспективность их использования в диагностических целях.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При папиллярном раке щитовидной железы Т3, Т4 (по TNM от 2002 г.) и локализации опухоли в средней и нижней трети доли необходимо выполнять превентивную диссекцию центральной клетчатки шеи (VI уровень).

2. Во всех случаях фолликулярного рака, при папиллярном раке Т, Т„ и локализации опухоли только в верхнем полюсе доли показания к проведению диссекции центральной клетчатки шеи в превентивном варианте должны определяться по результатам исследования сторожевого лимфоузла, выявленного с помощью интраоперационной лимфографии.

3. В случае неопределенного характера цитологического заключения после ТАПБ, применять метод соноэластографии с целью повышения диагностической точности. При окрашивании узла в синие тона и наличии КЖ больше 3 трактовать узел как «вероятно злокачественный» и выставлять показания к хирургическому лечению.

4. Если в результате динамического наблюдения за узлом в щитовидной железе (доброкачественный характер которого был ранее подтвержден методом ТАПБ) при проведении соноэластографии происходит изменение цветовой характеристики в синие цвета и увеличение КЖ более 3 - расценивать узел как «вероятно злокачественный» и рекомендовать хирургическое лечение.

5. При цитологическом заключении «фолликулярная опухоль» рекомендовано использование нейросетевого анализатора для улучшения дооперацион-ной диагностики.

6. С целью повышения дооперационной диагностической точности и определения агрессивности течения папиллярного рака определять соматическую мутацию BRAF V600E в пунктате узла и при исследовании послеоперационного материала.

7. В случае выявления лиц, носителей дикого аллеля G и генотипа G/G SULTJA/, рассматривать данную категорию пациентов как группу повышенного риска по развитию рака щитовидной железы и рекомендовать углубленное тиреидологическое обследование.

8. При трудностях дифференциального диагноза доброкачественной и злокачественной узлопатологии щитовидной железы рекомендовать исследование экспрессии гена GSTP1-1 в пунктате методом ОТ-ПЦР.

На основании выполненной работы предложен лечебно-диагностический алгоритм при узловой патологии щитовидной железы (рис.8).

Интерпретация результатов и формулировка клинического диагноза

Гистологический тип карциномы Уровни предположительно пораженных метзсодами регионарных лимфатических узлов (¡-УИ1 Вероятная стадия

............................................................................. Варивиы шейных лимфодиссекций в случае йыяеления метастатического поражения лимфоузлов

Планирование объема операции на щ^тзвидной железе и регионарном «имфэтичотом коллекторе

Тиреоидзктомия (гари опухоли >Т;)

--г---------

Фолликулярный рЗК (

Папиллярный рак

X

гисгаяогически«

Тм; Локализация г опухоли в н/з - ср/з |

Метастаза нет

Метастаз есть

Объем операции адекватный

центральной клетчатки шеи

Тм; N0 Мо [

>

| Объем операции ! адекватный р

Гемитир&оидэктоми** с перешейком {приДЙДЖ; Т4

ишщгаз за от6;:тввдиуя>.

ВДИуЮ ткань

Да

Тиреоидактомия

Объем операции | адекватный_I

Рисунок 8. Алгоритм диагностических и лечебных мероприятий при узловой патологии щитовидной железы

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шевченко С.П. Диссекиия центральной клетчатки шеи при высоко-дифференцированном раке щитовидной железы при клинически невыделенных регионарных метастазах [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, К.В. Вардосанидзе, C.B. Сидоров, В.А. Белобородой, H.H. Выборнова, H.A. Таранов // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. 2006. Т. 4, вып.2. С. 44-47.

2. Шевченко С.П. Трудности морфологической верификации узловых образований щитовидной железы [текст] / В.А. Белобородое, С.Г1. Шевченко, О.С. Олиферова, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, В.А. Маньковский, Н.Р. Левченко, О.В. Елесевич, Р.В. Модин //Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. 2007. Т. 5, вып. 1. С. 26-30.

3. Шевченко С.П. Причины возникновения, принципы лечения и профилактики послеоперационного рецидивного зоба [текст]/ В.А. Белобородое, С.П. Шевченко, О.С. Олиферова, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, В.А. Маньковский, О.В. Елесевич, Р.В. Модин // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. 2007. Т. 5, вып. 1. С. 35-41.

4. Шевченко С.П. Морфологическая верификация рака щитовидной железы [текст] / В.А. Белобородое, С.П. Шевченко, О.С. Олиферова, A.A. Дымов, А.Т. Саая, В.А. Маньковский, О.В. Еселевич, Р.В. Модин // Сибирский онкологический журнал. 2007. Т. 22, №2. С 69-72.

5. Шевченко С.П. Сравнительный анализ генетического полиморфизма ферментов метаболизма эстрогенов у женщин с заболеванием репродуктивной сферы и щитовидной железы {текст] /Е.П. Хвостова, В.О. Пустыльняк, Е.С. Барков, A.A. Дымов, С.Э. Красильников, C.B. Сидоров, Л.Ф. Гуляева, С.П. Шевченко // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. 2008. Т6. С 25-31.

6. Шевченко С.П. Качество жизни больных после проведения лимфо-диссекции центральной клетчатки шеи при дифференцированном раке щитовидной [текст! / A.A. Дымов, Л.Н. Балацкая, С.П. Шевченко // Сибирский онкологический журнал. 2011. № 1. С. 21-24.

7. Шевченко С.П. Превентивные вмешательства на регионарном лимфатическом аппарате при раке щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, Е.В. Карпинская, Д.Н. Ровенских // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. 2011. Т. 9, вып. 1. С. 159-164.

8. Шевченко С.П. Удаление 6-й группы лимфоузлов шеи при дифференцированном раке щитовидной железы — да или нет? {текст] / С.П. Шевчен-

ко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, E.B. Карпинская, Д.Н. Ровенских // Онкохи-рургия. 2011. Т. 3, № 1. С. 28-31.

9. Шевченко С.П. Эпидемиологическая характеристика и оценка факторов риска рака щитовидной железы в г. Новосибирске [текст] / С.П. Шевченко, А.Б. Шинтяпина, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, Л.Ф. Гуляева // Сибирский онкологический журнал. 2011. № 1. С. 44-49.

10. Шевченко С.П. Ферментативная активность глготатион S-трансферазы Р и уровень экспрессии ее гена в опухолевых тканях щитовидной железы человека [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, JT.A. Мостович, Л.Ф. Гуляева, Е.Л. ЧоГшзоиов // Сибирский онкологический журнал. 2011. № 2. С. 57-61.

11. Шевченко С.П. Соноэластография в комплексе дооперацнонной диагностики рака щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, Е.М. Долгова, Е.В. Карпинская, А.И. Шевела, A.A. Махотин // Онкохирур-гия. Опухоли головы и шеи. 2011. Т. 3. С. 60-63.

12. Шевченко С.П. Определение мутации гена BRAF в дооперацнонной диагностике папиллярного рака щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, Е.Ю Кире, Г.И. Лившиц, Е.С. Малахина, М.Л. Филипенко, A.A. Дымов, Е.В. Карпинская // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. 2011. Т. 9, вып. 3. С. 119-123.

13. Шевченко С.П. Фоновая патология щитовидной железы как прогностический фактор заболеваемости раком щитовидной железы, [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, Е.В. Карпинская, C.B. Сидоров, Д.Н. Ровенских //Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. 2011. Т. 31. № 6. Новосибирск. С. 103-107.

14. Шевченко С.П. Проблемы цитологической диагностики фолликулярных опухолей щитовидной железы [текст]/ С.П. Шевченко, Т.Л. Полоз // Сибирский онкологический журнал. 2011. №6. С. 62-65.

15. Шевченко С.П. Молекулярная биология тиреоидной карциномы [текст]/ С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, H.H. Колесников, Л.Ф. Гуляева //Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. 2011. Т. 9, вып. 4. С. 200-206.

16. Шевченко С.П. Диссекция центральной клетчатки шеи при высокодиф-ференцированном раке щитовидной железы [текст]/ С.П. Шевченко, A.A. Дымов, К.В. Вардосанидзе, C.B. Сидоров, H.H. Выборнова, П.А. Таранов И Сибирский онкологический журнал. Материалы всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Опухоли головы и шеи» 28 мая - 1 июня 2006 г., г. Анапа, 2006. - С. 142

17. Шевченко С.П. Диссекция центральной клетчатки шеи при высокодиф-ференцированном раке щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, К.В. Вардосанидзе, C.B. Сидоров, В.А. Белобородое, О.С. Олиферова, H.H. Выборнова, П.А. Таранов //' Современные аспекты хирургического лечения эн-

докринной патологии. Материалы Первого Украинско-Российского симпозиума по эндокринной хирургии с международным участием, г. Киев, Украина. 2006. -С. 215.

18. Шевченко С.П. Метастатическое поражение центральной клетчатки шеи при высокодифференцированном раке щитовидной железы - интраоперацион-ная тактика лечения [текст] /' С.П. Шевченко, A.A. Дымов, К.В. Вардосанид-зе, C.B. Сидоров, В.А. Белобородов, H.H. Выборнова, П.А. Таранов // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием, г.Барнаул. 2006. - С. 246-247.

19. Шевченко С.П. Обоснования выполнения диссекции центральной клетчатки шеи при высокодифференцированном раке щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, В.А. Белобородов, H.H. Выборнова, П.А. Таранов // Современные возможности и актуальные проблемы диагностики и лечения злокачественных опухолей: материалы конференции. Восьмая Дальневосточная онкологическая конференция 19-21 сентября 2006 г., г.Владивосток. Отв. редактор В.И. Апанасевич.- Владивосток: Изд-во Дальне-вост. Ун-та, 2006. - С. 102-106.

20. Шевченко С.П. Специфические осложнения после диссекции центральной клетчатки шеи [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, В.А. Белобородов, О.С. Олиферова, C.B. Сидоров, H.H. Выборнова, П.А. Таранов, А.Т. Саая// Рак щитовидной железы и эндемический зоб. Материалы межрегиональной конференции с международным участием 5-7 апреля 2007 г., г. Екатеринбург. Под ред. проф. С.А. Берзина,- Екатеринбург: Изд. ГОУ ВПО УГМА Росздрава, «Терминал плюс», 2007. — С. 142-143.

21. Шевченко С.П. Обоснование выполнения превентивной диссекции центральной клетчатки шеи при дифференцированном раке щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, В.А. Белобородов, и др. // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием, 2007г., г. Барнаул, 2007. - С. 77-79.

22. Шевченко С.П. Послеоперационные осложнения после выполнения диссекции центральной клетчатки шеи при высокодифференцированном раке щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, В.А. Новиков, П.А. Таранов // Онкохирургия. 2008. №2. Сборник Тезисов международного конгресса по онкохирургии, 28 мая-1 июня 2008г., г. Краснодар, 2008. - С. 46.

23. Шевченко С.П. Прогнозирование метастатического поражения лимфоузлов центральной клетчатки шеи при высокодифференцированных формах рака щитовидной железы на основании топической локализации первичной опухоли [текст] / С.П. Шевченко, C.B. Сидоров, H.H. Выборнова, A.A. Дымов, П.А. Таранов // Онкохирургия. 2008. № 2. Сборник Тезисов международного конгресса по онкохирургии, 28 мая-1 июня 2008г., г.Краснодар, 2008. - С, 44.

24. Шевченко С.П. Особенности метастатического поражения центральной клетчатки шеи при дифференцированном раке щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, ILA. Таранов // Сибирский онкологический журнал. 2008. Приложение № 1. - С. 44-45.

25. Шевченко С.П. Хромолимфографическая визуализация «сторожевых» лимфоузлов при высокодифференцированном раке щитовидной железы [текст] / В.А. Белобородов, С.П. Шевченко, A.A. Дымов, П.А. Маньковский, П.А. Таранов //Современные аспекты хирургической эндокринологии: материалы XVII Российского симпозиума по хирургической эндокринологии с международным участием. - Пермь: ГОУ ВПО ПГМА им. Ак. Е.А. Вагнера, 2008. - С. 213.

26. Шевченко С.П. Возможности исследования сторожевых лимфоузлов при высокодифференцированном раке щитовидной железы методом прямой хромо-лимфографии [текст] / C.II. Шевченко, A.A. Дымов, В.А. Новиков, П.А. Таранов // Онкохирургия. 2008. №2. Сборник Тезисов международного конгресса по онкохирургии, 28 мая-1 июня 2008г., г.Краснодар, 2008.- С.46.

27. Шевченко С.П. Необходимость дифференцированного подхода к выполнению превентивной диссекции центральной клетчатки щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, H.A. Таранов // Актуальные вопросы клинической и экспериментальной онкологии в системе ФМБА России. Москва, 2008. - С 43-45.

28. Шевченко С.П. Дифференцированный подход к выполнению превентивной диссекции ЦКШ при РЩЖ [текст] / С.П. Шевченко, C.B. Сидоров, П.А. Таранов, A.A. Дымов// Материалы XII Российского онкологического конгресса. -М.: Изд. Гр. ГУРОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, 2008. - С. 159.

29. Шевченко С.П. Превентивная диссекция центральной клетчатки шеи при дифференцированном раке щитовидной железы [текст]/ С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, П.А. Таранов //Рак щитовидной железы: Современные принципы диагностики и лечения. Материалы международного научного форума. СПб., 2008. - С.151-152.

30. Шевченко С.П. Необходимость дифференцированного подхода к выполнению превентивной диссекции центральной клетчатки шеи при раке щитовидной железы [текст]/ С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, П.А. Таранов // Материалы научно-практической конференции МБУЗ г. Новосибирска ГКБ№ 1, 2008.-С. 122-123.

31. Шевченко С.П. Дифференцированный подход к превентивной диссекции центральной клетчатки шеи при раке щитовидной железы [текст]/ С.П. Шевченко, C.B. Сидоров, A.A. Дымов, П.А. Таранов // Материалы Евразийского конгресса по опухолям головы и шеи 16-19 июля 2009г., г.Минск, Республика Беларусь. Вестник РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, т.20, № 2 (прил.1), 2009. - С. 267.

32. Шевченко С.П. Диссекция центральной клетчатки шеи при раке щитовидной железы - необходимость с точки зрения превентивного подхода [текст] /

С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, П.А. Таранов, Е.В. Бородулина // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 30-летию НИИ онкологии СО РАМН «Современная онкология: достижения и перспективы развития» 10-11 сентября 2009 г., г.Томск. Сибирский онкологический журнал. Приложение №2, 2009. - С. 22 Шевченко С.П. Влияние лимфодиссекции центральной клетчатки шеи, выполняемой при дифференцированном раке щитовидной железы, на качество жизни [текст] / С.П. Шевченко, A.A. Дымов, Л.Н. Балацкая, В.А. Новиков // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 30-летию НИИ онкологии СО РАМН «Современная онкология: достижения и перспективы развития» 10-11 сентября 2009 г., г.Томск. Сибирский онкологический журнал. Приложение № 2,2009. - С. 66.

33. Шевченко С.П. Превентивная диссекция центральной клетчатки шеи при раке щитовидной железы - дифференцированный подход к выполнению [текст]/ С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, П.А. Таранов // Научно-практическая конференция с международным участием « Совершенствование медицинской помощи при онкологических заболеваниях, включая актуальные проблемы детской гематологии и онкологии. Национальная онкологическая программа» VII съезд онкологов России 29-30 октября 2009г., г. Москва. Сборник материалов. T. I, 2009- С. 208.

34. Шевченко С.П. Дифференцированный подход к выполнению превентивной диссекции центральной клетчатки при раке щитовидной железы [текст]/ С.П. Шевченко, A.A. Дымов, C.B. Сидоров, П.А. Таранов // III Конгресс с международным участием «Опухоли головы и шеи». Т1. 2009. - С. 225.

35. Шевченко С.П. К вопросу о значимости определения микро-РНК в дифференциальной диагностике рака щитовидной железы [текст] / Е.В. Карпинская, С.П. Шевченко, С.Е. Титов, H.H. Колесников // Двадцатый Российский симпозиум (с международным участием) «Современные аспекты хирургической эндокринологии» 6—8 сентября 2012 г., г. Казань. 2012. - С 38.

36. Шевченко С.П. Возможности использования глютатион S-трансферазы Р1-1 как специфического маркера новообразований щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, C.B. Сидоров, Л.А. Мостович, Л.Ф. Гуляева // Двадцатый Российский симпозиум (с международным участием) «Современные аспекты хирургической эндокринологии» 6-8 сентября 2012 г., г. Казань, 2012. - С 101.

37. Шевченко С.П. Глутатион S-трансфераза как потенциальный маркер новообразований щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, C.B. Сидоров, Л.А. Мостович, Л.Ф. Гуляева // III Всемирное турне IFHNOS «Современные аспекты лечения опухолей головы и шеи». Материалы научной конференции «Нерешенные проблемы рака щитовидной железы» 30 сентября - 02 октября 2012 г., г. Киев, Украина. 2012. - С. 17.

38. Шевченко С.П. Применение microRNA в диагностике рака щитовидной железы [текст] /' Е.В. Карпинская, С.П. Шевченко, С.Е. Титов, H.H. Колесников, И.Ф. Жимулев // Материалы Первого Конгресса «Общества специалистов по опухолям головы и шеи» 18-19 октября 2012 г., г. Москва, 2012. - С. 17

39. Шевченко С.П. Опыт применения трепанобиопсии щитовидной железы с целью дифференциальной диагностики фолликулярных опухолей [текст] / С.П. Шевченко, Е.В. Карпинская, Д.Н. Ровенских, A.A. Дымов, // Материалы Первого Конгресса «Общества специалистов по опухолям головы и шеи» 18-19 октября 2012 г., г. Москва, 2012. - С 41.

40. Шевченко С.П. Возможности использования птутатион S-трансферазы Р1-1 как дифференциального маркера новообразований щитовидной железы [текст] / С.П. Шевченко, C.B. Сидоров, JI.A. Мостович, Л.Ф. Гуляева // Материалы Первого Конгресса «Общества специалистов по опухолям головы и шеи» 18-19 октября 2012 г., г. Москва, 2012. - С 42.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АРЩЖ — анапластический рак щитовидной железы

АТкТГ — антитела к тироглобулину

ВГН — возвратный гортанный нерв

ГТТТ — гипопаратироз

hGSTPl-1 — глютатион S-трансфераза класса Р1-1человека

ГТЭ — гемитироидэктомия

ДИ — доверительный интервал

ДЛТ — дистанционная лучевая терапия

ДРЩЖ — дифференцированный рак щитовидной железы

ИЭМГ — интраоперанионная элекромиография

КТ —кальцитонин

МРТ — магнитно-резонансная томография

МРЩЖ — медуллярный рак щитовидной железы

МЭН — множественные эндокринные неоплазии

НМРЩЖ — наследственный медуллярный рак щитовидной железы

НРЩЖ — низкодифференцированный рак щитовидной железы

ПРЩЖ — папиллярный рак щитовидной железы

РФП — радиофармпрепарат

РЩЖ — рак щитовидной железы

СВТ — сцинтиграфия всего тела

СГИ — срочное гистологическое исследование

СпМРЩЖ — спонтанный медуллярный рак щитовидной железы

СемПРЩЖ — семейный папиллярный рак щитовидной железы

СпПРЩЖ — спонтанный папиллярный рак щитовидной железы

СО — стандартное отклонение

СТТ — супрессивная терапия тироксином

СТТЭ — субтотальная тироидэктомия

СЭГ — соноэластография

ТАБ, ТАПБ — тонкоигольная аспирационная (пункционная) биопсия

ТАБ ЦИ — цитологическое исследование тонкоигольного аспирацион-

ного биоптата

ТГ — тиротобулин

ТСГ — тироксин-связывающий глобулин

ТТГ — тиротропны й гормон

ТТЭ — тотальная тироидэктомия

УЗИ — ультразвуковое исследование

ФАЩЖ — фолликулярная аденома щитовидной железы

ФРЩЖ — фолликулярный рак щитовидной железы

ффИ — фасциально-футлярное иссечение

ЦИ — цитологическое исследование

ЦЛД — центральная лимфодиссекция

ЩЖ — щитовидная железа

OR — англ. Odds ratio — Отношение шансов

HR — англ. Hazard ratio — Отношение рисков

CYP 1А1/2 — цитохромы Р450 1А1 и IА2

СYP19 — цитохром Р450 19 (Аром атаза)

SULT1A1 —сульфотрансфераза 1А1

ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография

miR-21 — микроРНК (Mirs)

Подписано в печать 28.11.2012 г. Формат 60 * 84 / 16 Бумага офсетная. Гарнитура Times. Ризография Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Изд. № 287 п. Оригинал-макет изготовлен издательством «Сибмедиздат» НГМУ г. Новосибирск, ул. Залесского, 4 Тел.: (383) 225-24-29. E-mail: sibmedisdat@rambler.ru Отпечатано в типографии НГМУ г. Новосибирск, ул. Залесского, 4. Тел/факс: (383) 225-24-29