Совершенствование эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней

Щербакова, Светлана Анатольевна

Диссертации по медицине → Эпидемиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.02.02) на тему:Совершенствование эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Щербакова, Светлана Анатольевна Саратов 2012 г.

Ученая степень: доктора биологических наук

ВАК РФ: 14.02.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Совершенствование эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней

На правах рукописи

ЩЕРБАКОВА Светлана Анатольевна

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА И ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

14.02.02 - эпидемиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

1 Ш

Саратов - 2011

005011257

Работа выполнена в ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Научный консультант

Академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Кутырев Владимир Викторович

Официальные оппоненты:

Юсценко Галина Васильевна, Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

ФБУН «Центральный научно исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора, ведущий научный сотрудник лаборатории госпитальных инфекций и эпидемиологического анализа

Шляхтин Геннадий Викторович, Заслуженный деятель науки РФ,

доктор биологических наук, профессор

ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет

им. Н.Г.Чернышевского» Минобрнауки России, декан биологического факультета, заведующий кафедрой морфологии и экологии животных

Короткое Владимир Борисович, доктор медицинских наук ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Саратовской области» Роспотребнадзора, врач - эпидемиолог

Ведущая организация ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора

Защита состоится «22» марта 2012 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 208.078.01 по защите докторских и кандидатских диссертаций при ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора (410005, г. Саратов, ул. Университетская, 46)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФКУЗ «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб»

Автореферат разослан

2012 г.

Ученый секретарь диссертационного сс доктор биологических наук, старший научный сотрудник

А.А. Слудский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Актуальность оптимизации эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями связана с эпидемиологической ситуацией, сложившейся в конце XX начале XXI веков. Глобальное потепление климата и антропогенная нагрузка на природные биоценозы обусловили расширение ареалов возбудителей целого спектра природно-очаговых инфекционных болезней, [Алексеев В.В. и др., 2004; Бутенко A.M., Ларичев В.Ф., 2004; Львов Д.К. и др., 2004], а недостаточный уровень организации и эффективности эпидемиологического надзора способствовали ухудшению эпидемиологической ситуации в Российской Федерации по инфекционным болезням, в том числе и арбовирусной природы [Онищенко Г.Г., 2000, 2006]. В частности, широкое распространение получила лихорадка Западного Нила (ЛЗН), вспышки которой, в том числе с летальными исходами, имели место в России, США, Канаде, Румынии, Израиле, Чехии, Италии [Львов Д.К. и др., 2004; Crichlow R., Bailey J., 2004; Goody R.J., 2008; Siddharthan V., 2009] и Крымская геморрагическая лихорадка (КГЛ), случаи заболевания которой ежегодно отмечаются на территории Южного федерального округа (ЮФО) Российской Федерации [Малецкая О.В. и др., 2010]. В целом за период 1999-2010 гг. зарегистрировано более 1300 случаев КГЛ и более 1500 случаев ЛЗН. При этом наибольшее количество случаев ЛЗН пришлось на регион Нижнего Поволжья.

также риска возникновения арбовирусных инфекционных болезней, возможна лишь на основе осуществления действенного эпидемиологического надзора, включающего все подсистемы информационного обеспечения, эпидемиологической диагностики, разработки и контроля реализации управленческих решений [Беляков В.Д., 1985; Черкасский Б.Л., 1990]. В настоящее время остаются не решенными ряд задач по организации и проведению эпидемиологического надзора по целому спектру арбовирусных инфекционных болезней, возбудители которых широко циркулируют на территории Российской Федерации. Одним из аспектов повышения эффективности эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями является оптимизация эпидемиологического мониторинга.

Другой, не менее важной задачей, в рамках оптимизации эпидемиологического надзора является совершенствование лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней. Это связано в первую очередь с решением организационно-методических вопросов ее проведения на федеральном, региональном и территориальном уровнях в учреждениях здравоохранения и Роспотребнадзора, а также с разработкой и внедрением в практику современных диагностических препаратов.

Цель работы - оптимизация эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней (на примере Саратовской и Астраханской областей) и совершенствование лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.

Задачи исследования:

1. Определить территориальную приуроченность, характер распространённости и структурные особенности природных очагов арбовирусных инфекционных болезней на территории Саратовской и Астраханской областей. Оценить потенциальную эпидемиологическую значимость арбовирусов для данных регионов.

2. Разработать метод дифференциации территории по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными

инфекционными болезнями и провести эколого-эпидемиологическое районирование Саратовской области.

3. Определить направления совершенствования эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями на основе оптимизации эпидемиологического мониторинга в соответствии с полученными данными о степени эпидемиологической значимости отдельных арбовирусов (на примере Саратовской и Астраханской областей).

4. Разработать тест-системы для выявления РНК вирусов ККГЛ и ЗН методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР). Определить их диагностическую ценность и провести апробацию при мониторинге природных очагов арбовирусных инфекционных болезней.

5. Разработать подходы к стандартизации лабораторной диагностики ЛЗП и КГЛ на территориальном, региональном и федеральном уровнях в соответствии с трехуровневой организацией лабораторной диагностики в учреждениях, осуществляющих санитарно-эпидемиологической надзор.

Теоретическая значимость н научная новизна. Разработаны теоретические основы совершенствования эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями на основе комплексного изучения динамики пространственно-временных параметров их проявления, эпизоотологического и лабораторного обеспечения путем расширения арсенала диагностических средств, оптимизации функционирования трехуровневой системы эпидемиологического мониторинга возбудителей инфекционных болезней 1-Н групп патогенности вирусной природы, новой методологии эпидемиологического районирования территорий по арбовирусным инфекциям.

Модельные исследования выполнены на примере Саратовской и Астраханской областей, системные разработки относительно функциональности всех трех уровней лабораторной сети - в масштабе Российской Федерации.

В результате мониторинга арбовирусных инфекционных болезней получены новые данные о современных ареалах арбовирусов, условиях их циркуляции и эпидемиологической значимости на территории Саратовской и Астраханской областей.

Анализ результатов эпидемиологического, эпизоотологического и экологического обследования за последние 10 - 12 лет (1999 - 2010 гг.) позволил выявить циркуляцию на территории Саратовской области вирусов СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, которая характеризуется меньшей интенсивностью по сравнению с Астраханской областью, где циркулируют вирусы СКЭ, Батаи, Синдбис, ККГЛ, ЗН, Дхори, Бханджа, Укуниеми.

Определена структура природных очагов арбовирусных инфекций и их территориальная приуроченность, уточнен спектр арбовирусов и выявлены основные эколого-эпидемиологические и биоценотические особенности их циркуляции, установлены систематические группы носителей и переносчиков арбовирусов, уровни иммунной прослойки населения и сельскохозяйственных животных к арбовирусам. Показано расширение границ ареалов вирусов ЗН и ККГЛ на юг Саратовской области. Впервые на территории Саратовской области на основании данных лабораторных исследований выявлен случай ЛЗН.

Разработан новый методический подход количественной оценки степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями, который основан на результатах корреляционного анализа, свидетельствующего о наличии статистически достоверной (р<0,05) связи каждого из используемых эпидемиологических параметров с циркуляцией арбовирусов - это природно-климатические условия на территории конкретного района; наличие основных переносчиков и природных резервуаров арбовирусов; выявление «маркеров» (антигены/РНК или антитела) арбовирусов в клещах, комарах, в органах мелких млекопитающих, в сыворотках крови людей и сельскохозяйственных животных. Такой подход позволил осуществить объективное эпидемиологическое районирование Саратовской области и выделить территории с высокой, средней и низкой степенью потенциальной опасности заражения арбовирусами.

Научно обоснованы основные направления оптимизации эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями в зависимости от различной эпидемиологической значимости отдельных арбовирусов (на примере Саратовской и Астраханской областей).

Впервые обоснованы принципы организации и функционирования единой многоуровневой системы лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за инфекционными болезнями. Предложены подходы по стандартизации лабораторной диагностики инфекционных болезней в соответствии с трехуровневой системой (на территориальном, региональном и федеральном уровнях), разработаны основные требования к лабораториям, персоналу, методам и схемам лабораторной диагностики, осуществлению внутреннего контроля качества в соответствии с международными стандартами, действующими в Российской Федерации в качестве ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий», ИСО 9001:2000 «Система управления качеством. Требования», ИСО 5725-(1-6) - 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

Разработаны ПЦР-тест-системы для выявления РНК вирусов ККГЛ и ЗН. Предложена схема комплексной лабораторной диагностики болезней, вызванных этими возбудителями, а также алгоритм исследования полевого материала.

Научная новизна и приоритетность выполненных исследований подтверждена патентом Российской Федерации на изобретение № 2324187 «Способ подготовки проб для серологических исследований из сопряженных очагов чумы и арбовирусных инфекций» и свидетельством о государственной регистрации базы данных № 2011620585 «Нуклеотидные последовательности и характеристики геномов, вариабельных тандемных повторов, олигонуклеотидных праймеров и зондов штаммов возбудителей бактериальных и вирусных инфекций 1-П групп патогенности».

Практическая значимость и формы внедрения. Результаты, представленные в работе, были использованы в отчетных материалах НИР, в рамках договоров с ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН при выполнении Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» на 2002 -2006 годы, а также совместных НИР: с ФГУЗ «Астраханская ПЧС» Роспотребнадзора и ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (шифр темы 038-1-00) «Мониторинг очагов арбовирусных инфекций на территории

Астраханской области и разработка специфической диагностики и профилактики этих болезней»; с ФГУЗ Ставропольский НИПЧИ, ФГУЗ Астраханская ПЧС, ФГУЗ Элистинская ПЧС, ФГУЗ Причерноморская ПЧС, ФГУЗ ПЧС Приволжской железной дороги (г. Саратов) и ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (шифр темы 004-1-01) «Мониторинг очагов арбовирусных инфекций на территории юго-востока европейской части России и разработка системы специфической диагностики и профилактики»; НИОКР по Государственному контракту № 67-Д от 25.07.2011 г. «Разработка научно-методического обеспечения мониторинга, эпидемиологического расследования и лабораторной диагностики особо опасных, «новых» и «возвращающихся» инфекционных болезней на базе стационарных и мобильных лабораторий учреждений Роспотребнадзора» в рамках Федеральной целевой программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009-2013 годы)» в 2011 г.

Материалы научных исследований нашли отражение в приведенных ниже документах:

- Методические указания «Организация и проведение мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки» МУ 3.1.12488-09, утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 26.02.2009 г.;

- Методические указания «Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации» МУ 3.1.3.2600-10, утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 19.04.2010 г.;

- Практическое руководство «Специфическая индикация патогенных биологических агентов» - М.: ЗАО «МП Гигиена», 2006 - 288 е.;

Практическое руководство «Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней» - М: «Издательство «Медицина», издательство «Шико», 2009. - 472 е.;

Санитарно-эпидемиологические правила «Профилактика лихорадки Западного Нила» (представлены для утверждения в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека);

- Методические указания «Организация и проведение лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней» (представлены для утверждения в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека);

- Методические указания «Организация и проведение лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней» (представлены для утверждения в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека);

Методические рекомендации «Эпидемиологическое районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями» (утверждены директором ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб», протокол Ученого Совета ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб» № 4 от 28.06.2011).

Депонированы в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб» (Саратов) генетически модифицированные штаммы Е. coli TGI (pCCHF) и Е. coli TGI (plVN ApKJ, используемые для разработки положительных контрольных образцов к тест-системам, стандартных образцов предприятия (СОПк+), применяемые для контроля чувствительности и специфичности препаратов на этапе производства.

Материалы научных исследований использованы при составлении Комплексного плана профилактических и противоэпидемических мероприятий по предупреждению заболеваний лихорадки Западного Нила среди населения Саратовской области на 2011 - 2012 гг., утвержденного Заместителем Председателя Правительства Саратовской области, а также информационных писем Министерства здравоохранения Саратовской области для врачей ЛПУ Саратовской области.

Ученого Совета ГИСК им. Л.А. Тарасевича № 14 от 19.10.04 и № 1 от 17.01.06, соответственно). Получены рекомендации комитета МИБП о регистрации препаратов «Тест-система для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки методом ОТ-ПЦР» и «Тест-система для выявления РНК вируса Западного Нила методом ОТ-ПЦР» в Российской Федерации и внедрении их в практику здравоохранения, а нормативной документации к ним - к утверждению в установленном порядке (протокол заседания комитета МИБП №5 от 28.07.05 и № 1 от 09.02.06, соответственно).

Научные и практически значимые результаты работы по эпидемиологии и лабораторной диагностике арбовирусных инфекционных болезней использованы в лекциях на курсах первичной специализации и повышения квалификации, проводимых в ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб» для специалистов учреждений Минздравсоцразвития, Роспотребнадзора и других ведомств, а также областных семинарах для специалистов Роспотребнадзора и ЛПУ Саратовской области.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Результаты мониторинга арбовирусных инфекционных болезней свидетельствуют о том, что на территории Саратовской области циркуляция арбовирусов носит менее интенсивный характер по сравнению с Астраханской областью. В настоящее время происходит расширение ареалов вирусов ЗН и ККГЛ на территории Саратовской области.

2. В циркуляцию арбовирусов на территории Саратовской и Астраханской областей вовлечены различные виды кровососущих членистоногих и мелких млекопитающих, что определяет особенности структуры природных очагов арбовирусных инфекционных болезней в этих регионах.

3. Разработан новый метод количественной оценки степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями, обеспечивающий объективное эпидемиологическое районирование Саратовской области с выделением территорий с различной (высокой, средней и низкой) степенью потенциальной опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями.

4. Использование дифференцированных подходов к организации эпидемиологического мониторинга в зависимости от степени эпидемиологической значимости арбовирусов для конкретных территорий позволяет оптимизировать эпидемиологический надзор за арбовирусными инфекционными болезнями на территории Саратовской и Астраханской областей.

5. В основу совершенствования организации и проведения лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ положены принципы функционирования трехуровневой системы эпидемиологического мониторинга и лабораторной диагностики инфекционных болезней.

6. Разработанные тест-системы для выявления РНК вирусов ЗН и ККГЛ методом ОТ-ПЦР могут быть использованы при мониторинге природных очагов и лабораторной диагностике арбовирусных инфекционных болезней.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены и обсуждены на Научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России (Саратов, 1997); Всероссийской научно-практической конференции «Природно-очаговые инфекции в России: современная эпидемиология, диагностика, тактика защиты населения» (Омск, 1999); 1-й Всероссийской научно-практической конференции «Генная диагностика особо опасных инфекций» (Саратов, 2000); Научно-практической конференции, посвященной 80-летию Омского НИИПИ «Актуальные аспекты природно-очаговых болезней» (Омск, 2001); VIII съезде Всесоюзного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002); 4-й Научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Москва, 2002); Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология - XXI век» (Саратов, 2004); Международном совещании «Млекопитающие как компоненты аридных экосистем (ресурсы, фауна, экология, медицинское значение и охрана) (Саратов, 2004); VI Межгосударственной научно-практической конференции государств - участников СНГ «Санитарная охрана территорий государств - участников Содружества Независимых государств: проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях» (Волгоград, 2005); VII Межгосударственной научно-

практической конференции государств - участников СНГ «Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита «Группа восьми» и санитарная охрана территорий государств - участников Содружества Независимых Государств» (Оболенск, 2006); VII съезде врачей-инфекционистов «Итоги и перспективы диагностики и лечения инфекционных больных» (Н.Новгород, 2006); Расширенном пленуме проблемной комиссии «Арбовирусы» РАМН и научно-практической конференции «Арбовирусы и арбовирусные инфекции» (Астрахань, 2006); IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007); X Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2007); Научно-практической конференции «Молекулярная диагностика инфекционных болезней» (Минск, 2007); VIII Межгосударственной научно-практической конференции государств - участников СНГ «Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах-участниках СНГ» (Саратов, 2007); II Международной научной конференции «Зоологические исследования регионов России и сопредельных территорий» (Н. Новгород, 2007); X Межгосударственной научно-практической конференции государств - участников СНГ «Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ» (Ставрополь, 2010).

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликованы 52 научные работы, в том числе 19 в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 286 страницах компьютерного текста, содержит введение, обзор литературы, главу с описанием используемых материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключение и выводы, иллюстрирована 39 таблицами, 20 рисунками. Библиография содержит 302 источника, в том числе 55 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Материалы. Сбор материала для исследований в рамках мониторинга арбовирусных инфекционных болезней проводился на территориях Саратовской и Астраханской областей. Точки сбора были подобраны таким образом, чтобы наиболее полно охарактеризовать обследуемую территорию в отношении распространения арбовирусов с учетом ландшафтной зональности Нижнего Поволжья. Участки долговременного наблюдения приурочены к крупным населенным пунктам, активно осваиваемым сельскохозяйственным и промышленным территориям, стыкам ландшафтно-географических зон, путям миграции и местам гнездования перелетных птиц.

Сбор материала в Саратовской области проводили в 2000 - 2010 гг.; на территории Астраханской области - в 1991 - 2000 и 2006 - 2007 гг. во время экспедиционных выездов (с апреля по ноябрь каждого года).

На территории Саратовской области было собрано 5705 экз. комаров 12 видов: Ае. vexans, Ае. lepidonotus, Ае. cataphylla, Ае. detritus, Ае. cyprius, Ае. flavescens, Ае. diantaens, Ае. leucomelas, Ае. subdiversus, An. maculipennis, Сх. pipiens, М. richiardii; 12292 экз. клещей, представленных 7 видами семейства Ixodidae: D. marginatus, D. reticularis, R. schulzei, R. rossicus, H. scupense, I. ricinus, I. persulcatus; 4055 экз. мелких млекопитающих 17 видов: малая лесная мышь, полевая мышь, домовая мышь, желтогорлая мышь, рыжая полевка, обыкновенная полевка, общественная полевка, водяная полевка, малый суслик, большой тушканчик, малый тушканчик, степная мышовка, ондатра, слепушонка обыкновенная, заяц-русак, насекомоядные; 204 экз. птиц 43 видов.

На территории Астраханской области было собрано 76981 экз. комаров 7 видов: Ае. caspius, Ае. communis, Ае. flavescens, Ае. vexans, An. hyrcanus, An. maculipennis, Cx. pipiens; 17020 экз. клещей 4 видов: H. marginatum, Н. asiaatica, Rh. schulzei, Rh. pumilio; 969 экз. мелких млекопитающих 8 видов: малый суслик, гребенщиковая песчанка, полуденная песчанка, домовая мышь, полевая мышь, обыкновенная полевка, общественная полевка, серый хомячок. Полевой материал

был собран сотрудниками ФГУЗ «Астраханская противочумная станция» Роспотребнадзора.

Для изучения уровня иммунной прослойки населения к арбовирусам были проанализированы 1473 сывороток крови здорового населения, проживающего в Саратовской области, и 470 сывороток - в Астраханской области. Иммуносерологическими и молекулярно-генетическими методами было исследовано 50 проб сывороток крови от 32 больных (с подозрением на ОРВИ и лихорадку неясного генеза), госпитализированных в 2010 г. в Городскую больницу № 2 (г. Энгельс, Саратовская область). Для определения иммунной прослойки к арбовирусам среди сельскохозяйственных животных было исследовано 223 образца сывороток крови КРС, собранных на территории Саратовской области, и 279 сывороток крови КРС из Астраханской области.

В ходе Государственных испытаний ПЦР-тест-системы «ГенКонго» и последующей ее апробации исследовали 667 пулов клещей, доставленных с эндемичных и неэндемичных по КГЛ территорий России и 268 сывороток крови здоровых доноров, людей с подтвержденным диагнозом «КГЛ» и другими вирусными заболеваниями. Материал был собран на территории Астраханской, Ростовской областей и Ставропольского края.

Государственные испытания и апробацию ПЦР-тест-системы «ГенНил» проводили при исследовании 28 образцов органов птиц (смешанный пул головного мозга и селезенки) и 122 проб суспензий комаров и 175 сывороток крови здоровых доноров, лиц с заболеваниями, не исключающими арбовирусную этиологию и другие вирусные инфекции. Материал собран на территории Астраханской области и Ставропольского края. Пробы предварительно были протестированы на наличие вируса ЗН вирусологическими и иммуносерологическими методами.

В работе использовали 36 штаммов вирусов, относящихся к различным семействам: Flavi-, Toga-, Burtya-, Reo- и Orthomyxoviridae, геномные ДНК человека и мыши, 9 штаммов бактерий семейств Enterobacteriaceae, Streptococcaceae, Micrococcaceae, а также родов с неясным систематическим положением (Francisella), вызывающих, как и вирусы ЗН и ККГЛ, лихорадку или часто выявляемых в биологическом материале, исследование которого планируется

проводить с помощью конструируемой тест-системы (кровь человека, органы млекопитающих и птиц, суспензии эктопаразитов).

Вирусные штаммы, использованные в работе, получены из Государственной коллекции вирусов Российской Федерации ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (Москва). Все виды работ, связанные с использованием вирусных штаммов, проводились на базе лаборатории биологии и индикации арбовирусов этого института (зав. лабораторией профессор, доктор биол. наук A.M. Бутенко).

Бактериальные штаммы были получены из Государственной коллекции патогенных бактерий ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб» (Саратов).

Методы исследований. В работе были использованы эпидемиологические, молекулярно-генетические, иммуносерологические, вирусологические методы и методы статистического анализа.

В основу проводимых исследований положен комплексный эпидемиологический подход, включающий эпизоотологическое и эпидемиологическое обследование природных очагов арбовирусных инфекционных болезней, вирусологические, иммуносерологические и молекулярно-генетические исследования полевого и клинического материала на арбовирусы, а также анализ полученных данных с использованием компьютерных программ и методов математической статистики.

Для выбора специфичных мишеней и диагностических праймеров использовали программы Oligo, Gene Runner, Vector NTI, Mega, ресурсы интернета и веб-сайты - GenBank (http:/Avww. ncbi.nlm.nih.gov/Genbank) и BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST).

Олигонуклеотиды для амплификации участков генома вирусов ККГЛ и ЗН были синтезированы фосфоамидитным методом на автоматическом синтезаторе ДНК в ЗАО «SYNTOL» (Россия).

Для выделения РНК использовали различные вариации метода нуклеосорбции в присутствии 6М гуанидинтиоцианата и метод фенол-хлороформовой экстракции.

Реакцию обратной транскрипции проводили с использованием обратной транскриптазы M-MLV («Promega», США) и буферного раствора, содержащего

случайные гексануклеотиды («Sigma», США), кроме этого для детекции РНК вируса ЗН использовали специфичный праймер Wn 10588. Для детекции РНК вирусов ЗН и ККГЛ методом ПЦР использовали наборы праймеров, разработанные в ходе настоящей работы. Амплификацию проводили в термоциклерах «Терцик МТС410» («ДНК-Технология», Россия), «ТСР-100» («MJ Research», США).

В качестве положительного контроля к тест-системам генно-инженерным методом были сконструированы СОП (стандартные образцы предприятия), представляющие собой рекомбинантные плазмиды pGEM-T, содержащие фрагмент ДНК, гомологичный нуклеотидной последовательности участка РНК, кодирующего белок NS5 (для СОП вируса ЗН) и S-сегмента (для СОП вируса ККГЛ).

Для проведения ИФА использовали коммерческие тест-системы производства ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (Москва) и тест-системы производства ЗАО «Биосервис» (г. Боровск Калужской обл.).

Статистическую обработку полученных при исследовании полевого и клинического материала данных проводили по методу Кербера в модификации И.П. Ашмарина и A.A. Воробьева (1962) по таблицам А.Я. Боярского (1955), по критерию Фишера [Урбах В.Ю., 1963].

Районирование территории проводили на основе методов балльной оценки показателей [Куклев Е.В.,1999] и регрессионной модели вычисления общего балльного показателя [Наркайтис Л.И., 2008] в собственной модификации.

Мониторинг арбовирусных инфекций на территории Саратовской области был выполнен совместно со специалистами лаборатории эпизоотологического мониторинга ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» (зав. лабораторией доктор биол. наук, профессор Попов Н.В.) и аспирантом СГМУ Кутыревым И.В.

Исследования по изучению распространения арбовирусов и их эпидемиологического значения на территории Астраханской области выполнены совместно со специалистами ФКУЗ «Астраханская противочумная станция» Роспотребнадзора (начальник ПЧС Кабин В.В.), в частности с канд. мед. наук Журавлевым В.И.

Разработка ПЦР-тест-систем осуществлялась совместно со специалистами ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» канд. мед. наук Красовской Т.Ю. и канд. биол. наук Найденовой Е.В., при участии специалистов лаборатории биологии и индикации арбовирусов (зав. лабораторией доктор биол. наук, профессор БутенкоА.М.) ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского. Государственные испытания проводили на базе ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского с участием сотрудников лаборатории стандартизации и контроля медицинских иммунобиологических препаратов против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИДа ГИСК им. Л.А. Тарасевича (зав. лабораторией, доктор мед. наук, профессор М.С. Воробьева).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Эпидемический мониторинг арбовирусных инфекционных болезнен на территории Саратовской и Астраханской областей

Для определения спектра циркулирующих арбовирусов, уточнения видового состава их основных переносчиков и носителей, особенностей распространённости и территориальной приуроченности природных очагов арбовирусных инфекций были проведены комплексные энтомолого-эпизоотологические и лабораторные исследования основных носителей и переносчиков арбовирусов - кровососущих членистоногих, мелких млекопитающих, птиц, а также сывороток крови населения и сельскохозяйственных животных, собранных на территории Саратовской и Астраханской областей.

Результаты энтомолого-эпизоотологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней на территории Саратовской области

В ходе энтомолого-эпизоотологического обследования территории Саратовской области собраны и исследованы пробы от мелких млекопитающих (4055 экз., 17 видов), птиц (204 экз., 43 видов), комаров (5705 экз., 12 видов) и клещей (12292 экз., 7 видов). Выявлены виды комаров и клещей, являющихся основными переносчиками арбовирусов на территории Саратовской области. Установлено, что наиболее часто антигены арбовирусов регистрировали в пулах,

составленных из комаров рода Aedes, что позволяет предположить доминирующую роль комаров этого рода в распространении арбовирусов на территории области. Впервые показано, что на территории южных районов области возможна циркуляция вируса ККГЛ, которая происходит с преимущественным участием клещей видов D. marginatus и R. schulzei. Установлено, что в циркуляции вируса ЗН, помимо комаров, могут участвовать клещи - R. rossicus, R. schulzei, D. marginatus. Впервые на территории Саратовской области выявлены антигены вируса КЭ в клещах I. ricinus.

Среди грызунов, вовлекаемых в циркуляцию арбовирусов, наиболее важную роль играют фоновые виды и, в первую очередь, домовые и лесные мыши, в материале от которых зарегистрированы антигены вирусов СКЭ, Батаи, Синдбис, ККГЛ, ЗН. Показана принципиальная возможность заноса на территорию Саратовской области в период весенней миграции птиц возбудителей арбовирусных инфекционных болезней, в частности вирусов ЗН и Синдбис, маркеры которых обнаружены при исследовании птиц, добытых на территории Саратовского Заволжья. Установлено, что циркуляция арбовирусов наиболее интенсивно осуществляется в степной и полупустынной зонах области, о чем свидетельствуют показатели инфицированное™ членистоногих и мелких млекопитающих. На этих территориях выявлена циркуляция вирусов ЗН и ККГЛ, что свидетельствует о расширении северных границ ареалов этих арбовирусов, в том числе и на территории Саратовской области.

Результаты мониторинга арбовирусных инфекционных болезней на территории Астраханской области

В результате комплексного исследования собранных на территории Астраханской области фоновых видов комаров (76981 экз., 7 видов), клещей (17020 экз., 4 видов) и мелких млекопитающих (969 экз., 10 видов) были выявлены высокие показатели инфицированное™ арбовирусами всех сочленов паразитарной системы: вирус - членистоногое - млекопитающее. Полученные данные являются подтверждением активной циркуляции арбовирусов - СКЭ (Тягиня, Инко), Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, Дхори, Бханджа и Укуниеми, происходящей в данном регионе в настоящее время. Основное значение в качестве переносчиков «комариных»

арбовирусов (СКЭ, ЗН, Синдбис, Батаи) на территории области имеют представители рода Aedes:Ae. caspius, Ае. vexans, а также рода Culex: C.pipiens. Для вирусов, экологически тесно связанных с клещами (ККГЛ, Дхори, Бханджа, ЗН), основное значение в циркуляции имеет клещи Н. marginatum.

Показано, что на территории области в круг циркуляции арбовирусов происходит вовлечение синантропных видов как членистоногих, так и мелких млекопитающих, в частности комаров С. pipiens и домовых мышей, что является условием формирования антропоургических очагов ряда инфекционных болезней и может привести к осложнению эпидемиологической обстановки.

Результаты серологического мониторинга на территории Саратовской и Астраханской областей

Для определения степени активности природных очагов арбовирусных инфекций, их эпидемического значения и распространенности на отдельных территориях проведены исследования сывороток крови населения, проживающего на территориях Саратовской и Астраханской областей, и сельскохозяйственных животных.

На наличие специфических IgG антител к арбовирусам исследовали сыворотки крови людей (1473 образца), постоянно проживающих на территории Саратовской области (пробы получены в Саратовском областном центре по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями). В результате проведённых исследований с помощью ИФА была выявлена иммунная прослойка среди населения к арбовирусам СКЭ (Тягиня, Инко), Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, КЭ. Всего обнаружено 158 образцов (10,7 %), содержащих антитела к арбовирусам. При этом антитела к вирусам ККГЛ и ЗН были выявлены преимущественно в сыворотках крови людей, проживающих в полупустынной и степной зонах Саратовской области, а наличие антител к вирусу КЭ детектировали в образцах из лесостепной зоны. В целом, на территории области выявлен невысокий уровень иммунной прослойки среди населения ко всем арбовирусам (0,8 - 2,9 %), что свидетельствует о низкой активности циркуляции арбовирусов в этом регионе. Эти данные совпадают с результатами эпизоотологического мониторинга и энтомологического обследования территории, в ходе которых также выявлены

невысокие показатели инфицированное™ арбовирусами комаров, клещей, мелких млекопитающих. Наиболее высокий уровень иммунной прослойки к арбовирусам (за исключением КЭ) зарегистрирован в полупустынной зоне (13,4%), что указывает на возможность эпидемиологических осложнений именно на этой территории.

Выявление лихорадки Западного Нила на территории Саратовской области

В связи с обострением эпидемиологической ситуации по ЛЗН в летне-осенний период на территориях Волгоградской и Воронежской областей в 2010 г. нами проведено исследование 50 сывороток крови от 32 больных, находившихся на лечении в МУЗ «Городская больница № 2» (г. Энгельс Саратовской области) с предварительными диагнозами: лихорадка неясного генеза (4 человека), ОРВИ (28 человек). Все обследуемые (жители г. Энгельс и Энгельсского района Саратовской области) заболели в период с 29 августа по 16 октября 2010 г. От 18 человек были получены парные сыворотки крови. Первый забор крови осуществлялся на 2 -19-й дни болезни, повторный - на 7 - 27-й дни. От 14 больных получено по одной сыворотке крови на 3-22 дни болезни. Сыворотки крови людей исследовали на наличие антител классов М и (/ к вирусу ЗН в ИФА.

При исследовании сывороток крови людей специфические антитела к вирусу ЗН и сероконверсия в парных сыворотках выявлены у одного больного - мужчины 49 лет, жителя г. Энгельс. Пациент заболел 3 сентября, находился на лечении в стационаре с предварительным диагнозом лихорадка неясного генеза. Первая сыворотка была взята на 9-й день болезни (11.09.10), титр антител к вирусу ЗН составил: 4' М 1:800,/с; О 1:100. Вторая сыворотка получена на 18-й день болезни (20.09.10) - М 1:3200, О 1:3200. В эпиданамнезе пациента отсутствовал факт посещения неблагополучных по лихорадке ЗН регионов, но был отмечен выезд на Волжские острова в районе с. Шумейка (в 10 км севернее г. Энгельс) и нападение комаров.

Для верификации результатов исследования образцы сывороток крови этого больного были направлены в Референс-центр по мониторингу за лихорадкой Западного Нила (ФКУЗ Волгоградский НИПЧИ Роспотребнадзора). В Референс-центре подтвердили полученные данные.

Впервые выявленный в 2010 г. на территории Саратовской области случай J13H, наряду с результатами изучения иммунной прослойки населения области к арбовирусам, служит еще одним доказательством расширения ареала вируса ЗН на территорию области.

Исследование сывороток крови сельскохозяйственных животных Саратовской области

В исследования были включены 223 сыворотки крови КРС, собранные сотрудниками СГАУ им. Н. Вавилова в районах области, расположенных в лесостепной, степной и полупустынной зонах области. Сыворотки крови исследовали в ИФА на наличие специфических иммуноглобулинов JgG к вирусам СКЭ, Батаи, Синдбис, КЭ, ЗН и ККГЛ. Всего выявлено 50 положительных образцов (22,4 %), содержащих антитела к указанным выше арбовирусам, за исключением вируса КЭ. Показано, что КРС наиболее часто инфицируется вирусами Батаи и СКЭ (8,9 и 7,6 % положительных проб соответственно), а риск инфицирования этими вирусами наиболее высок в районах, относящихся к лесостепной и стенной зонам. Иммунная прослойка среди КРС к вирусам ЗН и ККГЛ наиболее высока в степной (4,0 и 2,0 %, соответственно) и полупустынной (2,9 и 2,8 %, соответственно) зонах области. В целом результаты изучения уровня иммунной прослойки среди КРС к арбовирусам полностью согласуется с данными, полученными при изучении иммунной прослойки среди населения, и свидетельствуют о невысокой активности арбовирусов на территории Саратовской области.

Исследования сывороток крови людей, проживающих на территории Астраханской области

В исследование включены 158 сывороток крови людей (постоянно проживающих в Астраханской области), которые изучали на наличие специфических иммуноглобулинов к наиболее эпидемически значимым для этого региона арбовирусам - СКЭ, Батаи, ККГЛ, Синдбис, ЗН (пробы получены со станции переливания крови 1-й городской клинической больницы в 1998 г.). Кроме этого, во время вспышки ЛЗН в 1999 г. на территории Астраханской области получены и исследованы в ИФА на наличие IgG к вирусу ЗН 163 сыворотки крови

доноров. Помимо использования серологических методов для исследования сывороток, часть образцов (307 сывороток) была протестирована в реакции нейтрализации (РН) на наличие нейтрализующих антител к вирусу ЗН. Все серологические исследования проводили с участием сотрудников Астраханской ПЧС. РН выполняли на базе НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского, при участии сотрудников этого института и Астраханской ПЧС.

В результате проведенных исследований выявлен высокий уровень иммунной прослойки среди населения к вирусам СКЭ, Батаи и ЗН (8,9 - 17,7 %). Кроме этого, в сыворотках крови выявлены антитела к вирусам Синдбис и ККГЛ.

При исследовании в РН сывороток крови людей, собранных до вспышки ЛЗН и после нее, выявлено двукратное увеличение числа положительно реагирующих проб (с 23,4 до 44,2 %). Этот факт, вероятно, указывает на массовый характер вспышки ЛЗН и большое количество инаппарантных форм, так как среди обследованных не было лиц с диагнозом «ЛЗН» или указывающих на перенесенное в прошлом заболевание. По данным ИФА, не удалось обнаружить существенных различий в уровне иммунной прослойки населения к вирусу ЗН в 1998 и 1999 гг. По всей видимости, это объясняется тем, что в ИФА определяли /^С-антитела, а увеличение числа положительных проб произошло за счет выявления в РН нейтрализующих антител, в том числе /^Л/.

Исследование сывороток крови сельскохозяйственных животных в Астраханской области

Объектами исследования были 279 сывороток крови КРС, собранных на территории 6 районов Астраханской области. Сыворотки крови тестировали в ИФА на наличие специфических антител к вирусам СКЭ, Батаи, Дхори, Укуниеми, Бханджа, Синдбис, ЗН, ККГЛ. Всего выявлено 204 положительно реагирующих сыворотки (73,1 %). В целом, зарегистрированы высокие показатели иммунной прослойки (12,5 - 17,5 %) среди КРС к арбовирусам: СКЭ, Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис и Дхори. Эти данные согласуются с результатами исследований членистоногих и мелких млекопитающих, в результате которых выявлены высокие показатели инфицированное™ различными арбовирусами, а также с результатами, полученными при исследовании уровня иммунной прослойки среди населения

области к арбовирусам. Результаты исследований указывают на высокую активность природных очагов арбовирусных инфекционных болезней на территории Астраханской области.

Обобщенные данные об арбовирусах, циркулирующих на территории Астраханской и Саратовской областях, полученные нами в ходе исследования, представлены в таблице.

Таблица - Обобщенные данные эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней на территории Саратовской н Астраханской областей ___

Вирус Основные переносчики/ Носители Уровень иммунной прослойки среди людей^'д Уровень иммунной прослойки среди с/х животных//,

1 2 3 4 5

Батаи Саратовская область

А е. хехат Ае. 1ер(с1опоШ$ Ае. са!ар1гу11а Малый суслик Малая лесная мышь Желтогорлая мышь 2,4 14,8

Астраханская область

Ап. тасиИрепмх Ап. тасиИрептя Ае. /¡тезеепя Домовая мышь полевая мышь Обыкновенная полевка 8,9 16,1

СКЭ Саратовская область

Ае. уехат Ае. 1ер1с1опоШ5 Домовая мышь Малый суслик Желтогорлая мышь 2,6 7,5

Астраханская область

Ае. уехат Ае. савртэ Ае. Ааумсет Домовая мышь Обыкновенная полевка Гребенщиковая песчанка 17,7 24,0

ККГЛ Саратовская область

О. та^таШ Я. зс!ш1ге1 Малый суслик Домовая мышь Обыкновенная полевка 1,6 1,7

1 2 3 4 5

Астраханская область

Н. marginatum Rkschulzei Н. asiaatica Гребенщиковая песчанка Обыкновенная полевка Малый суслик 1,9 12,5

зн Саратовская область

Ае. cataphylla An. maculipennis D. marginatus R. schulzei R. rossicus Домовая мышь Обыкновенная полевка Общественная полевка 2,3 3,5

Астраханская область

Ae.caspius Ае. vexans С. pipiens II. marginatum Домовая мышь Обыкновенная полевка 15,3 17,5

кэ Саратовская область

D. reticulatus I. ricimis Н.и. 0,2 0

Астраханская область

Н.и. Н.и. н.и. н.и.

Синд- Саратовская область

бис Ае. cataphylla Ае. detritus Малый суслик Малая лесня мышь Домовая мышь 1,5 0,9

Астраханская область

Ае. vexans С. pipien Гребенщиковая песчанка 3,2 12,2

Примечание. Н.и. - не исследовали

Оптимизация эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями

Одним из аспектов повышения эффективности эпидемиологического надзора арбовирусных инфекционных болезней является оптимизация эпидемиологического мониторинга. Получаемая в ходе эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных -болезней информация должна

обеспечить возможность проведения оперативной динамической оценки состояния и тенденции развития эпидемического и эпизоотического процессов, а также ретроспективного эпидемиологического анализа [Беляков В.Д., 1985; Черкасский Б.Л., 1990]. В соответствии с этими задачами эпидемиологический мониторинг арбовирусных инфекционных болезней должен включать несколько уровней сбора информации: о состоянии заболеваемости, циркуляции возбудителей среди основных носителей и переносчиков, состоянии уровня коллективного иммунитета среди людей и животных к арбовирусам.

Оптимизация информационного обеспечения в рамках эпидемиологического мониторинга должна проходить по нескольким направлениям. Во-первых, необходимо оценить результативность диагностических методов, используемых на различных этапах эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней (при проведении лабораторной диагностики арбовирусных инфекций, в ходе энтомолого-эпизоотологического обследования территорий и серологического мониторинга) и определить место этих методов в схемах диагностических исследований. Во-вторых, требуют дифференциации объемы диагностических исследований, проводимых в рамках эпидемиологического мониторинга различных арбовирусных инфекционных болезней.

В рамках первого направления нами проведен анализ информативности ряда методических подходов, используемых в ходе эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней. Показано, что наибольшей результативностью при энтомолого-эпизоотологическом обследовании территории обладают ИФА (для выявления антигенов) и ПЦР; при лабораторной диагностике арбовирусных инфекций - ИФА (для выявления М и /^С) и ПЦР; при серологическом мониторинге - ИФА (для выявления ¡'¿О).

С целью реализации второго направления - дифференциации объемов диагностических исследований, проводимых в рамках эпидемиологического мониторинга различных арбовирусных инфекционных болезней, нами проведена оценка эпидемиологической значимости различных арбовирусов, циркулирующих на территориях Саратовской и Астраханской областей, и с учетом этого

осуществлено их распределение на группы. За основу такого распределения взят методический прием, предложенный Е.И. Андаевым (2009). К первой группе отнесены те арбовирусные инфекционные болезни, заболеваемость которыми официально регистрируется на территории области и в отношении которых проводится эпидемиологический надзор. Ко второй группе инфекционных болезней мы отнесли арбовирусные инфекции, возбудители которых широко распространены на территории области, но их значение в инфекционной патологии требует дополнительного изучения. К третьей группе отнесены арбовирусные инфекционные болезни, не представляющие серьезного эпидемиологического значения для этого региона. На основании различной эпидемиологической значимости отдельных арбовирусов предложены основные направления оптимизации эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней с определением объемов и методических подходов проводимых диагностических исследований. Показано, что эпидемиологический мониторинг арбовирусных инфекционных болезней, относящихся к первой группе, должен проводиться в полном объеме по следующим направлениям:

- организация и проведение целенаправленной лабораторной диагностики заболеваний;

проведение ежегодного комплексного паразитологического и эпизоотологического мониторинга;

- изучение популяционного иммунитета населения и сельскохозяйственных животных к арбовирусам.

В отношении второй группы инфекционных болезней эпидемиологический мониторинг должен включать следующие направления:

- установление эпидемиологического значения арбовирусов в инфекционной патологии на конкретной территории;

- изучение популяционного иммунитета населения и сельскохозяйственных животных к арбовирусам на территориях высокого и среднего риска заражения арбовирусными инфекционными болезнями;

- проведение комплексного паразитологического и эпизоотологического мониторинга на территории районов, относящихся к зонам высокого и среднего риска заражения арбовирусными инфекционными болезнями.

Проведение комплексного энтомолого-эпизоотологического обследования территории областей должно проводиться на основе областных программ, направленных на изучение экологических и эпизоотологических аспектов циркуляции арбовирусов на территории Саратовской и Астраханской областей, что позволит уточнить ареал и характер распространения вирусов, биоценотическую структуру природных очагов арбовирусных инфекций в различных природно-климатических и ландшафтных зонах региона. Энтомолого-эпизоотологическое обследование целесообразно осуществлять на территориях районов, относящихся к зонам высокого и среднего риска заражения арбовирусными инфекционными болезнями. С учетом данных по изучению уровня иммунной прослойки к арбовирусам среди населения Саратовской и Астраханской областей рекомендуемые объемы серологических исследований составляют 200 - 250 сывороток крови людей и 150 - 200 сывороток крови КРС.

В рамках эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней, вошедших в третью группу, предлагается проводить серологический мониторинг и исследовать материал от больных с подозрением на заболевание арбовирусной этиологии.

Обследование территории, скрининговые исследования сывороток крови людей и сельскохозяйственных животных могут проводиться учреждениями противочумной системы и «ЦГиЭ». В этих же учреждениях должна быть организована и лабораторная диагностика сезонных лихорадочных заболеваний, симптомы которых не исключают арбовирусную этиологию.

С целью подбора показателей для районирования были изучены экологические, природно-климатические, географические условия на территориях,

эндемичных для арбовирусных инфекционных болезней, а также данные по видовому составу основных носителей и переносчиков арбовирусов, их инфицированное™, уровню иммунной прослойки среди населения и сельскохозяйственных животных. Это позволило определить основные эпидемиологические параметры, статистически достоверные (р<0,05), которые в дальнейшем использовали как показатели при районировании территории по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями. В качестве показателей для дифференциации территории по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями использовали природно-климатические условия на территории конкретного района (температурный режим, количество осадков), наличие основных переносчиков и природных резервуаров арбовирусов: комаров родов Culex, Aedes и др., клещей Н. marginatum, D. marginatum, I. ricinus и др., выявление «маркеров» (антигены/РНК или антитела) арбовирусов в клещах, комарах, в органах мелких млекопитающих, в сыворотках крови людей и сельскохозяйственных животных.

На основе данных энтомолого-эпизоотологического обследования районов Саратовской области и результатов серологического мониторинга проведено районирование территории по степени потенциальной опасности заражения лихорадками Тягиня, Инко, Батаи, Синдбис, ЛЗН, КГЛ и в целом арбовирусными инфекционными болезнями. Данные по районированию Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения КГЛ и ЛЗН представлены на рисунках 1 и 2.

Показано, что территориями высокого потенциального риска заражения арбовирусными инфекционными болезнями являются Александрово-Гайский, Красноармейский, Ровенский, Краснокутский, Питерский и Новоузенский районы области. К группе районов со средней степенью потенциальной эпидемической опасности заражения относятся Дергачевский, Воскресенский, Лысогорский, Озинский, Самойловский, Энгельсский и Саратовский районы. Аткарский, Духовницкий, Федоровский, Базарно-Карабулакский, Хвалынский, Советский, Калиниский, Ершовский и Марксовский районы входят в группу территорий с

низкои степенью потенциальном эпидемическои опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями (рисунок 3).

«•О._____Ч ) — Ч г-^-Ъ-Ч —- ^ ^— \ . г^ъ

3 .г' ¿р ^^З Г7}

/ V,

„ — ^ , , -) ^ '-си \ сг Ч Г'"' ~г- Ч » :

Ч V 1 - г? Г- - тр^

^ I

Рисунок 1 - Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения КГЛ

, Л-7

V/ ЯГ сГ[п Ч > { >™ГО? У"' ^ . I, ^ у ^ \ ^■"»п»"^» { ¿.Т"""

•К \ . „"М" Ч __ I »а—— V

, З-Ч' г^—Р'К^У < ч у \ . * ; <р?*ггу \—ЦЛнГ"

3;: 1 3 - г;"'

.....Н г ,Г

V \ !

\ ХЗ

Рисунок 2 - Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения ЛЗН

Рисунок 3 - Районирование территорий Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями

Предложенная нами методика и проведенное с ее помощью районирование позволяют дифференцировать территорию Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями. Предложенный метод районирования может быть использован для любой другой территории с коррекцией отдельных показателей, характерных именно для этого региона.

Совершенствование лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней

Стандартизация лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила и Крымской геморрагической лихорадки

Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней бактериальной и вирусной природы является важной составляющей эпидемиологического надзора в рамках санитарной охраны территории Российской Федерации. Лабораторную диагностику опасных инфекционных болезней, к которым относятся и арбовирусные инфекции, в Российской Федерации осуществляют учреждения

Роспотребнадзора: центры гигиены и эпидемиологии, противочумные учреждения, научно-исследовательские институты эпидемиологического и вирусологического профиля, государственные научные центры, а также профильные учреждения других ведомств. Все эти учреждения осуществляют исследование возбудителей инфекционных болезней в рамках единой многоуровневой системы индикации, идентификации и типирования возбудителей особо опасных, возвращающихся и новых инфекций [Куличенко А.Н., Кутырев В,В., 2007; Кутырев В.В., Куличенко А.Н., 2007]. С целью совершенствования организации лабораторной диагностики инфекционных болезней нами были предложены и научно обоснованы принципы функционирования единой многоуровневой системы лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора, в том числе разработаны подходы по стандартизация лабораторной диагностики JI3H и КГЛ, а также разработаны ОТ-ПЦР-тест-системы для детекции вирусов ЗН и ККГЛ, что расширяет арсенал диагностических средств, используемых в ходе осуществления эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями.

Вступление в действие Международных медико-санитарных правил (ММСП) (2005) на территории Российской Федерации, обусловливает необходимость проведения ряда мероприятий, направленных на укрепление национальных ресурсов, одним из ключевых компонентов которых является лабораторная сеть страны. В связи с этим лаборатории, осуществляющие диагностические исследования в рамках эпидемиологического надзора, должны соответствовать определенным требованиям, позволяющим получать результаты исследований, которым будет доверять международное сообщество. Одним из таких требований является соответствие международным стандартам, действующим в Российской Федерации в качестве ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий», ИСО 9001:2000 «Система управления качеством. Требования», ИСО 5725-(1-6) - 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений». В соответствии с требованиями этих документов, а также трехуровневой системой лабораторной диагностики, действующей в Российской Федерации (на территориальном, региональном и федеральном уровнях), разработаны основные

требования к лабораториям, персоналу, осуществлению внутреннего контроля качества, методам и схемам лабораторной диагностики инфекционных болезней и др.

В качестве основного принципа при организации лабораторной диагностики инфекционных болезней предлагается использовать подход, позволяющий дифференцировать объемы и сложность используемых методов в зависимости от базового уровня лаборатории, обеспечивая при этом единство требований биологической безопасности и преемственность на всех этапах исследования. С повышением уровня организации лабораторной базы должен повышаться уровень ее оснащенности оборудованием, как аналитическим, так и обеспечивающим более высокий уровень биологической безопасности при выполнении работ. Соответственно этому должны увеличиваться объемы и повышаться методический уровень исследований, в том числе при работе с материалом, содержащим ПБА в высоких концентрациях. Такой подход позволит обеспечить требуемый уровень биологической безопасности проводимых работ и рационального оснащения диагностических лабораторий.

Одним из основных моментов, направленных на повышение надежности и качества лабораторной диагностики, является верификация результатов на каждом последующем уровне с увеличением числа подтверждающих тестов. Это достигается за счет последовательного изучения материала в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней. Причем, если на первом уровне может проводиться только индикация возбудителя, то на третьем (в лабораториях Референс-центров и Национальных центров верификации диагностической деятельности) должна осуществляться полная идентификации выделенных штаммов микроорганизмов с использованием современного арсенала диагностических средств и методических подходов.

Основные принципы организации лабораторной диагностики в соответствии с трехуровневой системой отражены в практическом руководстве «Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней» (Москва, 2009), а так же проектах методических указаний «Организация и проведение лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях территориального, регионального и

федерального уровней» и «Организация и проведение лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней». Реализация требований к организации и проведению исследований, изложенных в указанных документах, обеспечит функционирование многоступенчатой системы верификации получаемых результатов, в ходе подтверждающего тестирования проб, что позволит повысить надежность и качество лабораторной диагностики опасных инфекционных болезней, в том числе J13H и КГЛ.

Конструирование тест-систем для выявления РНК вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки и Западного Нила методом ОТ-ПЦР

С целью конструирования ПЦР-тест-систем для детекции РНК вирусов ЗН и ККГЛ, были подобраны специфические праймеры. Для выявления РНК вируса ККГЛ - праймеры, комплементарные участку гена, отвечающего за синтез белка, входящего в состав нуклеопротеина и локализованного в области консервативного участка S-сегмента; для детекции РНК вируса ЗН - системы праймеров (для двухэтапной ПЦР) на основе участка гена, кодирующего неструктурный белок NS5 РНК вируса ЗН. Кроме того, были подобраны оптимальные условия ПЦР с выбранными праймерами, обеспечивающие высокую чувствительность и специфичность реакции, а также методы выделения РНК.

В целях обеспечения биологической безопасности при работе с тест-системами и их производстве были сконструированы генно-инженерным методом стандартные образцы предприятия (СОПк+) и положительные контрольные образцы для тест-систем. Штаммы-продуценты Е. coli TGI (pCCHF) и Е. coli TGI pWN АрЛ депонированы в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб» (Саратов).

Диагностическую ценность (чувствительность, специфичность и воспроизводимость результатов) разработанных препаратов «ГенКонго» и «ГенНил» определяли в ходе Государственных комиссионных испытаний в соответствии с Программами, утвержденными Комитетом МИБП.

Специфичность и чувствительность ПЦР с разработанными тест-системами оценивали в экспериментах с гомологичными и гетерологичными штаммами

вирусов, СОПк+ - при тестировании различного биологического материала: сыворотки крови людей, суспензии клещей, суспензии комаров и др. Одновременно пробы тестировали в ИФА с тест-системами для выявления антигена вируса ККГЛ или ЗН. Титр вируса ККГЛ определяли путем интрацеребрального заражения вируссодержащим материалом новорожденных беспородных белых мышей, а титр вируса ЗН - на культуре клеток Vero Е6.

Сравнительный анализ результатов, полученных вирусологическими методами, ИФА и ПЦР, показал, что ПЦР-анализ с использованием предложенных нами тест-систем превышает по чувствительности ИФА и не уступает методу выделения вирусов на чувствительной биологической модели (в организме биопробных животных или в культуре клеток). Преимуществами ПЦР-анализа, по сравнению с вирусологическими методами, является скорость получения результатов (6-8 часов) при исследовании штаммов вирусов и проб полевого и клинического материала, а также повышение уровня биологической безопасности персонала, так как применение молекулярно-генетических тестов не сопряжено с накоплением возбудителя в чувствительных биологических моделях.

Проведенные Государственные испытания показали, что чувствительность тест-системы «ГенКонго» составила 5-103 ГЭ/мл (соответствует заявленной чувствительности препарата), специфичность - 100 %, воспроизводимость результатов - 100 %. Чувствительность ПЦР с тест-системой «ГенНил» составила МО3 ГЭ/мл (соответствует заявленной чувствительности препарата), специфичность - 98,3 %, воспроизводимость результатов - 100 %. Отчет о проведенных Государственных приемочных испытаниях тест-системы «ГенКонго» рассмотрен на Ученом Совете ГИСК им. Л.А. Тарасевича (протокол № 14 от 19.10.04) и утвержден Комитетом МИБП (протокол № 5 от 28.07.05). Тест-система «ГенНил» также рекомендована Ученым советом ГИСК им. Л.А. Тарасевича (протокол X» 1 от 17.01.06) и Комитетом МИБП (протокол № 1 от 09.02.06) к регистрации в Российской Федерации.

диагностики J13H и КГЛ провели их апробацию при исследовании полевого и клинического материала. Показано определенное преимущество ПЦР-анализа, по сравнению с ИФА при мониторинге природных очагов арбовирусных инфекционных болезней и целесообразность использования ПЦР совместно с ИФА, направленным на выявление специфических антител при лабораторной диагностике ЛЗН и КГЛ.

ВЫВОДЫ

1. Анализ данных эпизоотологического мониторинга в динамике показал, что на территории Саратовской области осуществляется циркуляция вирусов СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ; процессы циркуляции характеризуются меньшей интенсивностью по сравнению с Астраханской областью, на территории которой циркулируют вирусы СКЭ, Батаи, Синдбис, ККГЛ, ЗН, Дхори, Бханджа, Укуниеми.

2. Расширены представления и выявлены различия в популяционной структуре природных очагов арбовирусных инфекций на территории Саратовской и Астраханской областей и степени вовлеченности отдельных видов кровососущих членистоногих и мелких млекопитающих в циркуляцию арбовирусов. В Саратовской области циркуляция арбовирусов осуществляется с участием комаров родов Aedes (Ае. vexans, Ае. lepidonotus, Ае. cataphylla) и Culex (С. pipiens), клещей родов Dermacentor (D. marginatus, D.reticulatus), Rhipicephalus (R. schulzei, R. rossicus) и Ixodes (I. ricinus). Среди мелких млекопитающих в циркуляцию арбовирусов наиболее часто включаются видовые сообщества домовых, малых лесных мышей и обыкновенных полевок, а в Заволжье - популяции малого суслика и ондатры. На территории Астраханской области основное эпидемиологическое значение в циркуляции арбовирусов принадлежит популяциям комаров родов Aedes (Ае. caspius и Ае. vexans), Anopheles (An.maculipennis и An. hyrcanus) и Culex (С. pipiens), клещей родов Hyalomma (Н. marginatum) и Rhipicephalus (R. schulzei), a также видовым сообществам обыкновенных полевок, домовых мышей и гребенщиковых песчанок.

3. Результаты изучения иммунной прослойки к арбовирусам среди населения Саратовской области свидетельствуют о потенциальном эпидемическом

значении вирусов ЗН, ККГЛ, Батаи, СКЭ, Синдбис для данного региона, при этом установлено, что наиболее высокие показатели уровня иммунной прослойки к вирусам Батаи и СКЭ зарегистрированы в районах, приуроченных к степной и лесостепной зонам области, а к вирусам ЗН и ККГЛ - в районах, расположенных в степной и полупустынной зонах. Специфические антитела к вирусу КЭ выявлены только при исследовании сывороток крови людей, проживающих на территории лесостепной зоны области. Среди сельскохозяйственных животных определен популяционный иммунитет к вирусам ЗН, ККГЛ, Батаи, СКЭ и Синдбис. Высокий уровень иммунной прослойки среди населения Астраханской области к вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, Синдбис, ЗН подтверждает их эпидемическую значимость. У сельскохозяйственных животных выявлена иммунная прослойка к вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис, Бханджа, Дхори, Укуниеми, при этом наиболее высокие показатели уровня популяционного иммунитета зарегистрированы к вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис и Дхори.

4. Выявлены тенденции к расширению ареалов вирусов ЗН и ККГЛ на территории Саратовской области, о чем свидетельствуют исследования иммунной прослойки населения и данные эпизоотологического мониторинга в динамике. На расширение границ природного очага ЛЗН указывает впервые выявленный в 2010 г на территории Саратовской области случай ЛЗН, диагностированный на основании четырехкратного увеличения титров специфических антител и ^М) к вирусу ЗН при исследовании парных сывороток крови.

5. Впервые с использованием стандартизованных показателей - природно-климатические условия на территории конкретного района, наличие основных переносчиков и природных резервуаров арбовирусов, выявление «маркеров» (антигены/РНК или антитела) арбовирусов, проведено эпидемиологическое районирование Саратовской области и определены территории высокой, средней и низкой степени потенциальной опасности заражения арбовирусами. На основании данных ранжирования территории предложены схемы эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней в отдельных административных образованиях области.

6. На основе данных о распространенности арбовирусов на территориях Саратовской и Астраханской областей, эпизоотической активности природных очагов арбовирусных инфекционных болезней и различной эпидемиологической значимости отдельных арбовирусов для этих регионов разработаны дифференцированные подходы и предложены пути оптимизации эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней.

7. Разработаны основные принципы организации и проведения лабораторной диагностики инфекционных болезней, в том числе J13H и КГЛ, в соответствии с трехуровневой системой (на территориальном, региональном и федеральном уровнях), что позволяет повысить надежность и качество диагностических исследований за счет дифференциации их объемов в зависимости от базовой оснащенности лабораторий и многоуровневой верификации получаемых результатов.

8. Показано, что разработанная тест-система для выявления РНК вируса ЗН методом ОТ-ПЦР «ГенНил» характеризуется чувствительностью 1-Ю3 ГЭ/мл, специфичностью - 98,3 %, воспроизводимостью результатов - 100 %, позволяет выявлять возбудитель ЛЗН в сыворотке (плазме) крови, суспензиях клещей, комаров, органов животных (мозг, селезенка) и может быть использована при проведении лабораторной диагностики ЛЗН, в том числе при мониторинге природных очагов этой арбовирусной инфекционной болезни.

9. Установлено, что разработанная тест-система для выявления РНК вируса ККГЛ методом ОТ-ПЦР «ГенКонго» характеризуется чувствительностью 5-Ю3 ГЭ/мл, 100 % специфичностью и воспроизводимостью результатов, позволяет выявлять возбудитель КГЛ в сыворотке (плазме) крови, суспензиях клещей и органов животных (мозг, селезенка) и может быть использована при проведении лабораторной диагностики КГЛ и мониторинге природных очагов этой арбовирусной инфекционной болезни.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Рогаткин А.К., Щербакова С.А., Андросова C.B., Журавлев В.И.,

Ларичев В.Ф., Хуторецкая Н.В., Букаева И.Н., Яшков А.И., Куклев Е.В.,

Куличенко А.Н., Кутырев В.В., Бутенко A.M. Дальнейшее изучение циркуляции арбовирусов в Астраханской области (1998-1999 г.г.)// Мед. паразитол. и паразитарн. болезни - 2000. - № 4. - С.49-51. (из перечня ВАК).

2. Гаранина С.Б., Щербакова С.А., Ларичев В.Ф., Яшечкин Ю.И., Тучков И.В., Меркулова Т.К., Хуторецкая Н.В., Бутенко A.M., Куличенко А.Н. Разработка тест-систем для индикации вирусов Западного Нила и Конго-Крымской лихорадки методом полимеразной цепной реакции// Матер. 1-й Всерос. науч-практ. конференции «Генная диагностика особо опасных инфекций». - Саратов. -2000. -С.52-54.

3. Гаранина С.Б., Рогаткин А.К., Щербакова С.А., Журавлев В.И., Клюева Е.В., Мальков П.М., Путилина Н.Г., Куличенко А.Н. Сравнительное изучение эффективности ПЦР-анализа и ИФА при детекции вирусов Западного Нила и Крымской геморрагической лихорадки в полевом и клиническом материале// Матер. 1-й Всерос. науч.-практ. конференции «Генная диагностика особо опасных инфекций». - Саратов. -2000. - С.56-57.

4. Гаранина С.Б., Щербакова С.А., Куличенко A.A., Журавлев В.И., Рогаткин А.К. Комплексное использование ПЦР и ИФА при детекции вируса Западного Нила в полевом и клиническом материале// Природно-очаговые особо опасные инфекции на юге России, их профилактика и лабораторная диагностика. -Сб. науч. тр., поев. 100-летию Астраханской противочумн. ст. - Астрахань, 2001. -С. 139- 142.

5. Клюева Е.В., Щербакова С.А., Головинская О.Н., Гаранина С.Б., Чекашов В.Н., Попова Э.З., Попов Н.В., Куклев Е.В., Куличенко А.Н. Изучение циркуляции некоторых арбовирусов на территории Саратовской области// Матер, науч-практ. конф. «Актуальные аспекты природноочаговых болезней», поев. 80-летию Омского НИИПИ. - Омск. 2001. - С. 39-40.

6. Шишкина Е.О., Бутенко A.M., Гайдамович С.Я., Ларичев В.Ф., Журавлев В.И., Щербакова С.А., Ковтунов А.И., Джаркенов А.Ф., Ситков В.Г., Донская М.Г. Применение реакции нейтрализации, ИФА-IgG, ИФА-IgM и РТГА для изучения иммуноструктуры населения Астраханской области к вирусу Западного Нила в 1998 и 1999 гг.// Матер. Науч.-практ. конф. «Актуальные аспекты природноочаговых болезней», поев. 80-летию Омского НИИПИ. - Омск. 2001. - С. 79-80.

7. Шишкина O.E., Бутенко A.M., Гайдамович С.Я., Ларичев В.Ф., Журавлев В.И., Щербакова С.А., Ковтунов А.И., Джаркенов А.Ф., Ситков В.Г., Донская М.Г. Изучение иммуноструктуры населения Астраханской области к вирусу Западного Нила в 1998 и 1999 гг.// Матер. Науч.-практ. конф. «Актуальные аспекты природноочаговых болезней», поев. 80-летию Омского НИИПИ. - Омск. 2001.-С. 80-82.

8. Журавлев В.И., Рогаткин А.К., Щербакова С.А., Путилина Н.Г., Андросова С.В., Мацуга Т.П., Ибрагимов Ф.Х. Экология и эпидемиологическое значение арбовируса «913=64» now?// Пробл. особо опасных ннф. - 2001. - Вып.1 (81). - С. 26- 30. (из перечня ВАК)

9. Щербакова С.А., Куляш Г.Ю., Куклев Е.В., Кутырев В.В. Арбовирусные инфекции их актуальность для здравоохранения Саратовской области// Пробл. особо опасных инф. - 2001. - Вып.1 (81). - С. 13-25. (из перечня ВАК).

10. Журавлев В.И., Рогаткин А.К., Щербакова С.А., Путилина Н.Г., Ибрагимов Ф.Х., Андросова С.В., Мацуга Т.П., Гаранина С.Б. Экологические аспекты циркуляции арбовирусов на территории Астраханской области// Пробл. особо опасных инф. - 2001. -Вып.2 (82). - С. 71-77. (из перечня ВАК).

И. Щербакова С.А., Головинская О.Н., Клюева Е.В., Гаранина С.Б., Савицкая Л.В., Куличенко А.Н., Кутырев В.В. Результаты исследования сывороток крови населения Саратова на антитела к арбовирусам // Вопр. вирусол. - 2002. -№3. - С. 32-34. (из перечня ВАК).

12. Клюева Е.В., Щербакова С.А., Головинская О.Н., Гаранина С.Б., Савицкая Л.В., Чекашов В.Н., Слудский A.A., Удовиков А.И., Князева Т.В., Колнобрицкая O.A., Попов Н.В., Куклев Е.В., Куличенко А.Н. Изучение циркуляции вирусов Западного Нила и Крымской геморрагической лихорадки в южных районах Саратовской области // Матер. VIII съезда Всесоюзн. об-ва. эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М., 2002. - С. 336-337.

13. Клюева Е.В., Шарова И.Н., Щербакова С.А., Добло А.Д., Чекашов В.Н., Удовиков А.И., Слудский A.A., Дмитриева Л.Н., Ерофеев A.B., Пристанский Р.В., Коломеец В.В., Куличенко А.Н. Изучение зараженности клещей вирусом Крымской-Конго геморрагической лихорадки, собранных на территории Саратовской, Волгоградской и Ростовской областей // Матер, юбил. науч.-практ.

конф. «Эпидемиология и безопасность на Кавказе. Итоги и перспективы», поев. 50-тилетию Ставропольского НИПЧИ. - Ставрополь, 2002. - С. 125 - 126.

14. Гаранина С.Б., Журавлев В.И., Щербакова С.А., Рогаткин А.К., Куличенко А.Н. Совершенствование схемы идентификации арбовирусов с использованием молекулярно-генетических методов// Матер, юбил. науч.-практ. конф. «Эпидемиология и безопасность на Кавказе. Итоги и перспективы», поев. 50-тилетию Ставропольского НИПЧИ. - Ставрополь, 2002. - С 274 - 275.

15. Шишкина Е.О., Бутенко А.М., Гайдамович С.Я., Ларичев В.Ф., Журавлев В.И., Щербакова С.А., Ковтунов А.И., Джаркенов А.Ф., Ситков В.Г, Донская М.Г. Изучение иммуноструктуры населения Астраханской области к вирусу Западного Нила в 1998 и 1999 гг.// Вопр. вирусол. -2002. -№ 6. - С. 1317. (из перечня ВАК).

16. Билько Е.А, Щербакова С.А., Красовская Т.Ю., Клюева Е.В., Куличенко А.Н. Изучение иммунной прослойки к арбовирусам у жителей Саратова// Матер. Всероссийск. науч.-практ. конф. «Медицинская микробиология - XXI век» - Саратов, 2004. - С. 35-36.

17. Малюкова Т.А., Ляпин М.Н., Головко Е.М., Костюкова Т.А., Щербакова С.А., Плотникова Е.А., Дроздов И.Г. Оценка бактерицидного действия ß-пропиолактона на взвеси вакцинного штамма чумного микроба// Матер. Всероссийск. науч.-практ. конф. «Медицинская микробиология - XXI век» -Саратов, 2004. - С. 144-145.

18. Клюева Е.В., Щербакова С.А., Слудский A.A., Чекашов В.Н., Князева Т.В., Колнобрицкая О.Н., Попов Н.В., Куличенко Н.В. Зараженность арбовирусами мелких млекопитающих, отловленных в пустынной зоне Саратовской области // Матер. Междунар. совещ. «Млекопитающие как компоненты аридных экосистем (ресурсы, фауна, экология, медицинское значение и охрана)». - Саратов, 2004. - С. 60-61.

19. Красовская Т.Ю., Билько Е.А., Данилов А.Н., Матвеева Т.Ф., Моисеенко О.Г., Щербакова С.А., Куличенко А.Н. Результаты исследования сывороток крови населения Пугачевкого и Балаковского районов Саратовской области на антитела к арбовирусам// ЗНиСО - 2004. -№ 12/141 -С. 25-27. (из перечня ВАК).

20. Щербакова С.Л., Билько Е.А., Клюева Е.В., Данилов А.Н., Плотникова Е.А., Тарасов М.А., Чекашов В.Н., Удовиков А.И., Князева Т.В., Шилов М.М., Самойлова Л.В., Храмов В.Н., Казакова JI.B., Куклев Е.В., Куличенко А.Н. Особенности экологии и ландшафтного распространения арбовирусов на территории Саратовской области // ЖМЭИ - 2005. - № 5 -С. 27-30. (из перечня ВАК).

21. Найденова Е.В., Шарова И.Н., Щербакова С.А., Яшечкин Ю.И., Куличенко А.Н. Разработка и апробация ПЦР-тест-системы для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки методом ОТ-ПЦР// Матер. VI Межгос. науч.-практ. конф. государств-участников СНГ «Санитарная охрана территорий государств-участников содружества независимых государств: проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях». - Волгоград, 2005. - С. 270-271.

22. Красовская Т.Ю., Шарова H.H., Щербакова С.А., Яшечкин Ю.И., Ларичев В.Ф., Хуторецкая Н.В., Бутенко A.M., Куличенко А.Н. Тест-система для выявления РНК вируса Западного Нила методом ПЦР // Матер. VII Межгосуд. науч.-пракг. конф. «Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербуржского саммита «Группа восьми» и санитарная охрана территорий государств-участников СНГ». -Оболенск, 2006.-С. 212.

23. Найденова Е.В., Шарова И.Н., Щербакова С.А., Яшечкин Ю.И., Ларичев В.Ф., Воробьева М.С., Бутенко A.M., Куличенко А.Н., Львов Д.К., Кутырев В.В. Тест-система для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки методом ОТ-ПЦР // Пробл. особо опасных инф. -2006. - Вып.2 (92). - С. 54-56. (из перечня ВАК).

24. Найденова Е.В., Яшечкин Ю.И., Щербакова С.А., Шарова И.Н., Куличенко А.Н. Конструирование положительного контрольного образца к тест-системе для выявления РНК вируса ККГЛ методом ОТ-ПЦР// Матер. VII съезда врачей-инфекционистов «Итоги и перспективы диагностики и лечения инфекционных больных». - Н.Новгород, 2006. - С. 169 - 170.

25. Красовская Т.Ю., Шарова И.Н., Щербакова С.А., Яшечкин Ю.И., Ларичев В.Ф., Хуторецкая Н.В., Куличенко А.Н. Разработка тест-системы для выявления РНК вируса Западного Нила методом ОТ-ПЦР // Матер. VII съезда

врачей-инфекционистов «Итоги и перспективы диагностики и лечения инфекционных больных». - Н.Новгород, 2006. - С. 159.

26. Красовская Т.Ю., Найденова Е.В., Шарова И.Н., Яшечкин Ю.И., Щербакова С.А., Ларичев В.Ф., Хуторецкая Н.В., Саркисян К.А., Воробьева М.С., Бутенко A.M., Куличенко A.M., Львов Д.К., Кутырев В.В. Разработка и внедрение ПЦР-тест-систем для детекции вирусов Западного Нила и ККГЛ// Арбовирусы и арбовирусные инфекции: Матер, расширенного пленума пробл. комиссии «Арбовирусы» РАМН. - Астрахань, 2006,- С. 97-99.

27. Топорков A.B., Кабин В.В., Тарасов М.А., Щербакова С.А., Слудский A.A., Шарова И.Н., Попов Н.В., Кологоров А.И., Кутырев В.В. Организационно-методические аспекты обследования сочетанных очагов особо опасных арбовирусных и бактериальных инфекций (на примере Среднего и Нижнего Поволжья)// Арбовирусы и арбовирусные инфекции: Матер, расширенного пленума пробл. комиссии «Арбовирусы» РАМН. - Астрахань, 2006.-С. 147- 149.

28. Щербакова С.А., Билько Е.А., Найденова Е.В., Красовская Т.Ю., Шарова И.Н., Пионтковский С.А., Уткин Д.В., Чекашов В.Н., Слудский A.A., Попов Н.В., Куклев Е.В., Фирстов E.H., Потемина Л.П., Логунова Т.Е., Водина Е.А., Куличенко А.Н., Кутырев В.В. Экологические и эпидемиологические аспекты циркуляции арбовирусов на территории Саратовской области// Арбовирусы и арбовирусные инфекции: Матер, расширенного пленума пробл. комиссии «Арбовирусы» РАМН. - Астрахань, 2006,- С. 150-152.

29. Клюева Е.В., Щербакова С.А., Билько Е.А., Красовская Т.Ю., Самойлова Л.В., Данилов A.B., Слудский A.A., Чекашов В.Н., Удовиков А.И., Шилов М.М., Князева Т.В., Колнобрицкая О.Н., Попов Н.В., Куличенко А.Н. Зараженность мелких млекопитающих арбовирусами на территории Саратовской области // Бюл. Московского об-ва испытателей природы. Отдел биологический. -2006. - Т. 111., №3. - С.42-43.

30. Щербакова С.А., Куклев Е.В., Куличенко А.Н., Самойлова Л.В., Слудский A.A., Попов Н.В., Кологоров А.И. Совершенствование эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекциями // Матер. IX съезда Всерос. науч.-практ. об-ва эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - 2007. -Т.З.-С. 238-239.

31. Куклев Е.В., Кологоров А.И., Попов Н.В., Щербакова С.А. Совершенствование эпидемиологического надзора в сочетанных природных очагах бактериальных и вирусных инфекций// Матер. IX съезда Всерос. науч.-практ. об-ва эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - 2007. - Т.З. - С. 192- 193.

32. Матросов А.Н., Щербакова С.А., Слудский A.A., Чекашов В.Н., Фирстов E.H., Князева Т.В., Красовская Т.Ю., Тарасов М.А., Кузнецов A.A., Шилов М.М., Удовиков А.И., Яковлев С.А. Эпизоотологический мониторинг в природных очагах зоонозных инфекций в Саратовской области // Матер. IX съезда Всерос. науч.-практ. об-ва эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - 2007. -Т.З.-С. 201.

33. Найденова Е.В., Щербакова С.А., Яшечкин Ю.И., Куклев Е.В. Районирование территории Саратовской области по возможности осуществления циркуляции вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки// Матер. 10-й Всерос. медико-биол. конф. молодых исследователей «Человек и его здоровье». -СПб., 2007.-С. 296-297.

34. Найденова Е.В., Щербакова С.А., Шарова И.Н., Ларичев В.Ф., Хуторецкая Н.В., Бутенко A.M. Изучение эффективности методов лабораторной диагностики КГЛ в зависимости от срока начала заболевания// Матер, науч.-практ. конф. «Молекулярная диагностика инфекционных болезней». - Минск, 2007. -С. 184.

35. Ларичев В.Ф., Манзенюк И.Н., Найденова Е.В., Карань Л.С., Шарова H.H., Щербакова С.А., Хуторецкая Н.В., Скороход М.А., Куличенко А.Н., Воробьева М.С, Платонов А.Е., Бутенко A.M. Характеристика ИФА- и ПЦР-тест-систем для детекции вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки// Вопр. вирусол. - 2007. — №4 - С. 43-47. (из перечня ВАК).

36. Билько Е.А., Щербакова С.А., Красовская Т.Ю., Кутырев И.В., Шарова И.Н., Найденова Е.В. Разультаты лабораторных исследований по выявлению антигенов арбовирусов из полевого материала, собранного в Александрово-Гайском районе в 2006-2007 гг. // Матер. VIII Мегос. Науч.-практ. конф. государств-участников СНГ «Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах-участниках СНГ». - Саратов, 2007. - С. 20-22.

37. Матросов А.Н., Чекашов В.Н., Красовская Т.Ю., Кутырев И.В., Щербакова С.А., Билько Е.А., Шарова И.Н., Найденова Е.В., Осина H.A., Плотникова Е.А., Ивашенцева Л.Н., Шилов М.М., Яковлев С.А., Князева Т.В., Удовиков А.И., Тарасов М.А., Кузнецов A.A., Мокроусова Т.В., Попов Н.В., Топорков A.B., Кутырев В.В. Результаты эпизоотологического мониторинга по зоонозам в южной части Саратовского Заволжья // Матер. VIII Мегос. Науч.-практ. конф. государств-участников СНГ «Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах-участниках СНГ» - Саратов, 2007. - С. 20-22.

38. Красовская Т.Ю., Шарова И.Н., Щербакова С.А., Яшечкин Ю.И., Хуторецкая Н.В., Ларичев В.Ф., Бутенко A.M., Куличенко А.Н. Разработка и внедрение тест-системы для лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила методом ПЦР // ЗНиСО -2007. - №6 (171). - С. 42-46. (из перечня ВАК).

39. Малюкова Т.А., Головко Е.М., Костюкова Т.А., Щербакова С.А., Плотникова Е.А., Ляпин М.Н. Подготовка материала, отобранного в сопряженных очагах чумы и арбовирусных инфекций, к проведению серологического исследования. Сообщение 1. // Пробл. особо опасных инф. - 2007. - Вып. 2 (94). -С. 12-15.

40. Матросов А.Н., Чекашов В.Н., Красовская Т.Ю., Шарова И.Н., Кутырев И.В., Щербакова С.А., Билько Е.А., Кузнецов A.A., Князева Т.В., Яковлев С.А., Тарасов М.А., Шилов М.М., Удовиков А.И., Толоконникова С.И., Слудский A.A., Попов Н.В., Кутырев В.В. Результаты эколого-эпизоотологического обследования в природных очагах зоонозов в Левобережье Саратовской области// Матер. II Междунар. науч. конф. «Зоологические исследования регионов России и сопредельных территорий». - Н.Новгород, 2007. -С. 172-176.

41. Найденова Е.В., Щербакова С.А., Билько Е.А., Красовская Т.Ю., Шарова И.Н., Водина Е.А., Логунова Т.Е., Потемина Л.П., Куличенко А.Н. Изучение уровня иммунной прослойки населения к вирусу ККГЛ // Матер, науч.-практ. конф. «Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России». - Ставрополь, 2007. -Ч. II.-С. 34-35.

42. Малюкова Т.А., Ляпин М.Н., Щербакова С.А., Костюкова Т.А., Головко Е.М., Плотникова Е.А., Найденова Е.В. Способ подготовки проб серологических исследований из сопряженных очагов чумы и арбовирусных инфекций// Бюл. - 2008. - № 13 от 10.05.2008.

43. Малюкова Т.А., Костюкова Т.А., Головко Е.М., Ляпин М.Н., Щербакова С.А., Плотникова Е.А., Найденова Е.В. Подготовка материала, отобранного в сопряженных очагах чумы и арбовирусных инфекций, к проведению серологического исследования. Сообщение 2. // Пробл. особо опасных инф. - 2008. -Вып. 1 (95). - С. 41—43.

44. Кутырев В.В., Пакскнна Н.Д., Щербакова С.А. Перспективы совершенствования лабораторной диагностики особо опасных инфекционных болезней// Дез. дело. - 2009, - №2. - С. 36-37. (из перечня ВАК).

45. Щербакова С.А, Билько Е.А., Найденова Е.В., Красовская Т.Ю., Слудский A.A., Князева Т.В., Матросов А.Н., Чекашов В.Н., Шарова H.H., Самойлова JI.B., Кутырев В.В. Выявление антигенов арбовирусов в комарах и клещах, обитающих на территории Саратовской области// Мед. паразитол. и паразитарн. бол. - 2009. - №2. -С. 38-41. (из перечня ВАК).

46. Онищенко Г.Г., Кузькин Б.П., Кутырев В.В., Щербакова С.А., Пакскнна Н.Д., Топорков A.B. Актуальные направления совершенствования лабораторной диагностики особо опасных инфекционных болезней // Пробл. особо опасных инф. - 2009. - Вып. 1 (99). - С. 5-10. (из перечня ВАК).

47. Кузнецов A.A., Матросов А.Н., Осипов В.П., Князева Т.В., Поршаков A.M., Попов Н.В., Куклев Е.В., Щербакова С.А., Топорков В.П. Принципы организации эпнзоотологического мониторинга сочетанных природных очагов чумы н других опасных инфекционных болезнен в регионе Нижнего Поволжья // Пробл. особо опасных инф. - 2009. - Вып. 4 (102). - С.17-20. (из перечня ВАК).

48. Турцева М.А., Кресова У.А., Матросов А.Н., Поршаков A.M., Яковлев С.А., Шарова H.H., Красовская Т.Ю., Кузнецов A.A., Князева Т.В., Мокроусова Т.В., Щербакова С.А., Котоманова В.Г., Сантылова O.A. Новые данные о распространении иксодовых клещей и переносимых ими возбудителей природно-очаговых инфекций в Саратовской области // Пробл. особо опасных ннф. - 2009. - Вып. 4 (102). - С. 40-44. (из перечня ВАК).

49. Щербакова С.А., Шарова И.Н., Казакова Е.С., Кутырев В.В. Стандарты лабораторной диагностики, как основа модернизации единой системы мониторинга и диагностики инфекционных болезней // Матер. X науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ». - Ставрополь, 2010. - С. 126-127.

50. Попов Н.В., Куклев Е.В., Топорков В.П., Адамов А.К., Щербакова С.А., Малецкая О.В., Ковтунов А.И., Яшкулов К.Б., Кабин В.В., Подсвиров A.B., Кологоров А.И., Кузнецов A.A., Матросов А.Н., Князева Т.В., Григорьев М.П., Санджиев В.Б.-Х., Осипов В.П., Пискунова Н.В., Сангаджиева Г.В. Сочетанные природные очаги бактериальных, риккетсиозных и вирусных инфекционных болезней в регионе СевероЗападного Прикаспия // Пробл. особо опасных инф. - 2010. - Вып. 1 (103) -С. 44-47. (из перечня ВАК).

51. Щербакова С.А., Найденова Е.В., Билько Е.А., Водина Е.А., Логунова Т.Е., Потемина Л.П., Кутырев В.В. Выявление специфических антител к арбовирусам в сыворотках крови людей, проживающих на территории Саратовской области // Пробл. особо опасных инф. - 2011. - Вып. 2 (108) - С. 72-75. (из перечня ВАК).

52. Красовская Т.Ю., Щербакова С.А., Шарова И.Н., Найденова Е.В., Билько Е.А., Чекашов В.Н., Матросов А.Н., Яковлев С.А., Поршаков A.M., Шилов М.М., Рябова A.B., Князева Т.В., Мокроусова Т.В., Федорова З.П., Кресова У.А., Талаева Е.А., Миронова Н.И., Кутырев В.В. Изучение циркуляции вируса Западного Нила на территории Саратовской области в 2010 г.// Пробл. особо опасных инф. - 2011. - Вып. 3 (109) - С. 13-17. (из перечня ВАК).

Подписано к печати 07.02.2012 Формат 60x84 1/16 Печать лазерная Бумага офисная Объем 2,6 усл. п. л. Тираж 100 экз. Отпечатано на полиграфическом оборудовании ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» 410005, г. Саратов, ул. Университетская, 46

Оглавление диссертации Щербакова, Светлана Анатольевна :: 2012 :: Саратов

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1 ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ И ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАСПРОСТРАНЕНИЯ АРБОВИРУСОВ

1.1 Общая характеристика и эпидемиологическое значение арбовирусов.

1.2 Климатическое и антропогенное воздействие на паразитарные системы арбовирусов в регионе Нижнего Поволжья.

1.3 Организация эпидемиологического надзора арбовирусных инфекционных болезней.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Места сбора и количество исследованных проб.

2.2 Использованные в работе вирусные и бактериальные штаммы.

2.3 Сбор, учет, хранение и доставка полевого материала.

2.4 Сбор, обработка и хранение сывороток крови людей и КРС.

2.5 Подготовка проб для исследований.

2.6 Определение инфекционной активности вируса Западного Нила путем титрации в культуре клеток.

2.7 Подбор праймеров для детекции вирусов ККГЛ и ЗН методом ОТ-ПЦР

2.8 Проведение ГЩР-анализа.

2.9 Создание стандартного образца предприятия и положительного контрольного образца.

2.10 Иммуноферментный анализ.

2.11 Статистическая обработка полученных данных.

2.13 Разработка методических подходов районирования территории.

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ НА ТЕРРИТОРИИ САРАТОВСКОЙ И АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТЕЙ.

3.1 Результаты энтомолого-эпизоотологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней на территории Саратовской области

3.2 Результаты энтомолого-эпизоотологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней на территории Астраханской области.

3.3 Результаты серологического мониторинга на территории Саратовской и Астраханской областей.

ГЛАВА 4 ОПТИМИЗАЦИЯ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО

МОНИТОРИНГА АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ.

4.1 Разработка основных направлений оптимизации эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней на примере Саратовской и Астраханской областей в современных условиях.

4.2 Разработка методического подхода дифференциации территорий по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями и районирование территории Саратовской области.

4.2.1 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения лихорадками Тягиня, Инко (СКЭ)

4.3.2 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения лихорадкой Батаи.

4.3.3 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения КГЛ.

4.3.4 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения ЛЗН.

4.3.5 Районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения лихорадкой Синдбис.

4.2.6 Районирование территорий Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями.

ГЛАВА 5 СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

АРБОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ.

5.1 Стандартизация лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила и Крымской геморрагической лихорадки.

5.2 Конструирование тест-систем для выявления РНК вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки и Западного Нила методом ОТ-ПЦР.

5.2.1 Подбор олигонуклеотидных праймеров.

5.2.2 Отработка оптимальных условий ПЦР.

5.2.3 Выбор метода выделения РЖ.

5.2.4 Создание стандартных образцов предприятия и положительных контрольных образцов к разрабатываемым тест-системам.

5.2.5 Характеристика тест-систем для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки и вируса Западного Нила методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции.

5.3 Определение диагностической ценности ОТ-ПЦР-тест-систем для выявления РНК вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила - «ГенКонго» и «ГенНил».

5.4 Апробация разработанных тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил».

5.4.1 Применение тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил» для выявления циркуляции вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.

5.4.2 Апробация тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил» при лабораторной диагностике Крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.

Введение диссертации по теме "Эпидемиология", Щербакова, Светлана Анатольевна, автореферат

Актуальность проблемы Актуальность оптимизации эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями связана с эпидемиологической ситуацией, сложившейся в конце XX начале XXI веков. Глобальное потепление климата и антропогенная нагрузка на природные биоценозы обусловили расширение ареалов возбудителей целого спектра природно-очаговых инфекционных болезней, [Алексеев В.В. и др., 2004; Бутенко A.M., Ларичев В.Ф., 2004; Львов Д.К. и др., 2004], а недостаточный уровень организации и эффективности эпидемиологического надзора способствовали ухудшению эпидемиологической ситуации в Российской Федерации по инфекционным болезням, в том числе и арбовирусной природы [Онищенко Г.Г., 2000, 2006]. В частности, широкое распространение получила лихорадка Западного Нила (ЛЗН), вспышки которой, в том числе с летальными исходами, имели место в России, США, Канаде, Румынии, Израиле, Чехии, Италии [Львов Д.К. и др., 2004; Crichlow R., Bailey J., 2004; Goody R.J., 2008; Siddharthan V., 2009] и Крымская геморрагическая лихорадка (КГЛ), случаи заболевания которой ежегодно отмечаются на территории Южного федерального округа (ЮФО) Российской Федерации [Малецкая О.В. и др., 2010]. В целом за период 1999-2010 гг. зарегистрировано более 1300 случаев КГЛ и более 1500 случаев ЛЗН. При этом наибольшее количество случаев ЛЗН пришлось на регион Нижнего Поволжья.

Помимо вирусов Западного Нила (ЗН) и Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ), на территории Российской Федерации происходит активная циркуляция и других арбовирусов, о чем свидетельствуют результаты многолетних исследований [Бутенко А.М и др., 1989; Львов Д.К. и др., 2001], в частности, - это вирусы серогруппы калифорнийского энцефалита (СКЭ) - Тягиня, Инко, а также вирусы Батаи, Синдбис и др. Широкая распространенность, экологическая адаптивность, генетическая изменчивость, пантропность действия этих арбовирусов создают потенциальную опасность возникновения заболеваний среди людей [Львов Д.К. и др., 1989]. Разработка эффективных противоэпидемических и профилактических мероприятий, направленных на снижение заболеваемости, а также риска возникновения арбовирусных инфекционных болезней, возможна лишь на основе осуществления действенного эпидемиологического надзора, включающего все подсистемы информационного обеспечения, эпидемиологической диагностики, разработки и контроля реализации управленческих решений [Беляков В.Д., 1985; Черкасский Б.Л., 1990]. В настоящее время остаются не решенными ряд задач по организации и проведению эпидемиологического надзора по целому спектру арбовирусных инфекционных болезней, возбудители которых широко циркулируют на территории Российской Федерации. Одним из аспектов повышения эффективности эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями является оптимизация эпидемиологического мониторинга.

Задачи исследования:

2. Разработать метод дифференциации территории по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями и провести эколого-эпидемиологическое районирование Саратовской области.

5. Разработать подходы к стандартизации лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ на территориальном, региональном и федеральном уровнях в соответствии с трехуровневой организацией лабораторной диагностики в учреждениях, осуществляющих санитарно-эпидемиологической надзор.

Теоретическая значимость и научная новизна Разработаны теоретические основы совершенствования эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями на основе комплексного изучения динамики пространственно-временных параметров их проявления, эпизоотологического и лабораторного обеспечения путем расширения арсенала диагностических средств, оптимизации функционирования трехуровневой системы эпидемиологического мониторинга возбудителей инфекционных болезней 1-П групп патогенности вирусной природы, новой методологии эпидемиологического районирования территорий по арбовирусным инфекциям.

Научная новизна и приоритетность выполненных исследований подтверждена патентом Российской Федерации на изобретение № 2324187

Способ подготовки проб для серологических исследований из сопряженных очагов чумы и арбовирусных инфекций» и свидетельством о государственной регистрации базы данных № 2011620585 «Нуклеотидные последовательности и характеристики геномов, вариабельных тандемных повторов, олигонуклеотидных праймеров и зондов штаммов возбудителей бактериальных и вирусных инфекций 1-П групп патогенности».

Практическая значимость и формы внедрения Результаты, представленные в работе, были использованы в отчетных материалах НИР, в рамках договоров с ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН при выполнении Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» на 2002 -2006 годы, а также совместных НИР: с ФГУЗ «Астраханская ПЧС» Роспотребнадзора и ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (шифр темы 038-1-00) «Мониторинг очагов арбовирусных инфекций на территории Астраханской области и разработка специфической диагностики и профилактики этих болезней»; с ФГУЗ Ставропольский НИПЧИ, ФГУЗ Астраханская ПЧС, ФГУЗ Элистинская ПЧС, ФГУЗ Причерноморская ПЧС, ФГУЗ ПЧС Приволжской железной дороги (г. Саратов) и ФГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (шифр темы 004-1-01) «Мониторинг очагов арбовирусных инфекций на территории юго-востока европейской части России и разработка системы специфической диагностики и профилактики»; НИОКР по Государственному контракту № 67-Д от 25.07.2011 г. «Разработка научно-методического обеспечения мониторинга, эпидемиологического расследования и лабораторной диагностики особо опасных, «новых» и «возвращающихся» инфекционных болезней на базе стационарных и мобильных лабораторий учреждений Роспотребнадзора» в рамках Федеральной целевой программы «Национальная щ ; система химической и биологической безопасности Российской Федерации

2009 - 2013 годы)» в 2011 г.

Материалы научных исследований нашли отражение в приведенных ниже документах:

- Практическое руководство «Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней» - М: «Издательство «Медицина», издательство «Шико», 2009. - 472 е.;

- Санитарно-эпидемиологические правила «Профилактика лихорадки Западного Нила» (Представлены для утверждения в Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека);

- Методические рекомендации «Эпидемиологическое районирование Саратовской области по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями» (утверждены директором ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб», протокол Ученого Совета ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб» № 4 от 28.06.2011).

Депонированы в Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб» (Саратов) генетически модифицированные штаммы Е. coli TGI (pCCHF) и Е. coli TGI (pWN ApR), используемые для разработки положительных контрольных образцов к тест-системам, стандартных образцов предприятия (СОПк+), применяемые для контроля чувствительности и специфичности препаратов на этапе производства.

Проведены Государственные испытания разработанных тест-систем для выявления РНК вирусов ККГЛ и ЗН. Результаты Государственных испытаний одобрены на Ученом совете ГИСК им. Л.А. Тарасевича (протокол заседания Ученого Совета ГИСК им. Л.А. Тарасевича №14 от 19.1004 и № 1 от 17.01.06, соответственно). Получены рекомендации комитета МИБП о регистрации препаратов «Тест-система для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки методом ОТ-ПЦР» и «Тест-система для выявления РНК вируса Западного Нила методом ОТ-ПЦР» в Российской Федерации и внедрении их в практику здравоохранения, а нормативной документации к ним - к утверждению в установленном порядке (протокол заседания комитета МИБП №5 от 28.07.05 и № 1 от 09.02.06, соответственно).

Основные положения, выносимые на защиту

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены и обсуждены на:

- 1-й Всероссийской научно-практической конференции «Генная диагностика особо опасных инфекций» (Саратов, 2000);

- VIII съезде Всесоюзного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002);

4 Научно-практичической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Москва, 2002);

- Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология -XXI век» (Саратов, 2004);

- Международном совещании «Млекопитающие как компоненты аридных экосистем (ресурсы, фауна экология, медицинское значение и охрана) (Саратов, 2004);

- VI Межгосударственной научно-практической конференции Государств - участников СНГ «Санитарная охрана территорий государств участников содружества независимых государств: проблемы биологической безопасности и противодействия биотерроризму в современных условиях» (Волгоград, 2005);

VII Межгосударственной научно-практической конференции Государств - участников СНГ «Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита «Группа восьми» и санитарная охрана территорий государств -участников Содружества Независимых государств» (Оболенск, 2006);

- VII съезде врачей-инфекционистов «Итоги и перспективы диагностики и лечения инфекционных больных» (Н.Новгород, 2006);

- Расширенном пленуме проблемной комиссии «Арбовирусы» РАМН и научно-практической конференции «Арбовирусы и арбовирусные инфекции» (Астрахань, 2006);

IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007);

- Десятой Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье»(Санкт-Петербург, 2007);

- Научно-практической конференции «Молекулярная диагностика инфекционных болезней» (Минск, 2007);

VIII Межгосударственной научно-практической конференции Государств - участников СНГ «Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах-участниках СНГ» (Саратов, 2007);

- II Международной научной конференции «Зоологические исследования регионов России и сопредельных территорий» (Н. Новгород, 2007);

- X Межгосударственной научно-практической конференции Государств - участников СНГ «Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ» (Ставрополь, 2010).

Публикации

По теме диссертационного исследования опубликованы 52 научные работы, в том числе 19 в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов.

Структура диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "Совершенствование эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней"

выводы

2. Расширены представления и выявлены различия в популяционной структуре природных очагов арбовирусных инфекций на территории Саратовской и Астраханской областей и степени вовлеченности отдельных видов кровососущих членистоногих и мелких млекопитающих в циркуляцию арбовирусов. В Саратовской области циркуляция арбовирусов осуществляется с участием комаров родов Aedes (Ае. vexans, Ае. lepidonotus, Ае. cataphylla) и Culex (С. pipiens), клещей родов Dermacentor (D. marginatus, D.reticulatus), Rhipicephalus (R. schulzei, R. rossicus) к Ixodes (I. ricinus). Среди мелких млекопитающих в циркуляцию арбовирусов наиболее часто включаются видовые сообщества домовых, малых лесных мышей и обыкновенных полевок, а в Заволжье - популяции малого суслика и ондатры. На территории Астраханской области основное эпидемиологическое значение в циркуляции арбовирусов принадлежит популяциям комаров родов Aedes (Ае. caspius и Ае. vexans), Anopheles (An.maculipennis и An. hyrcanus) и Culex (С. pipiens), клещей родов Hyalomma (Н. marginatum) и Rhipicephalus (R. schulzei), а также видовым сообществам обыкновенных полевок, домовых мышей и гребенщиковых песчанок.

3. Результаты изучения иммунной прослойки к арбовирусам среди населения Саратовской области свидетельствуют о потенциальном эпидемическом значении вирусов ЗН, ККГЛ, Батаи, СКЭ, Синдбис для данного региона, при этом установлено, что наиболее высокие показатели уровня иммунной прослойки к вирусам Батаи и СКЭ зарегистрированы в

249 районах, приуроченных к степной и лесостепной зонам области, а к вирусам ЗН и ККГЛ - в районах, расположенных в степной и полупустынной зонах. Специфические антитела к вирусу КЭ выявлены только при исследовании сывороток крови людей, проживающих на территории лесостепной зоны области. Среди сельскохозяйственных животных определен популяционный иммунитет к вирусам ЗН, ККГЛ, Батаи, СКЭ и Синдбис. Высокий уровень иммунной прослойки среди населения Астраханской области к вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, Синдбис, ЗН подтверждает их эпидемическую значимость. У сельскохозяйственных животных выявлена иммунная прослойка к вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис, Бханджа, Дхори, Укуниеми, при этом наиболее высокие показатели уровня популяционного иммунитета зарегистрированы к вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис и Дхори.

4. Выявлены тенденции к расширению ареалов вирусов ЗН и ККГЛ на территории Саратовской области, о чем свидетельствуют исследования иммунной прослойки населения и данные эпизоотологического мониторинга в динамике. На расширение границ природного очага ЛЗН указывает впервые выявленный в 2010 г на территории Саратовской области случай ЛЗН, диагностированный на основании четырехкратного увеличения титров специфических антител (^в и ^М) к вирусу ЗН при исследовании парных сывороток крови.

5. Впервые с использованием стандартизованных показателей -природно-климатические условия на территории конкретного района, наличие основных переносчиков и природных резервуаров арбовирусов, выявление «маркеров» (антигены/РНК или антитела) арбовирусов, проведено эпидемиологическое районирование Саратовской области и определены территории высокой, средней и низкой степени потенциальной опасности заражения арбовирусами. На основании данных ранжирования территории предложены схемы эпидемиологического мониторинга арбовирусных инфекционных болезней в отдельных административных образованиях области.

7. Разработаны основные принципы организации и проведения лабораторной диагностики инфекционных болезней, в том числе ЛЗН и КГЛ, в соответствии с трехуровневой системой (на территориальном, региональном и федеральном уровнях), что позволяет повысить надежность и качество диагностических исследований за счет дифференциации их объемов в зависимости от базовой оснащенности лабораторий и многоуровневой верификации получаемых результатов.

8. Показано, что разработанная тест-система для выявления РНК вируса ЗН методом ОТ-ПЦР «ГенНил» характеризуется чувствительностью 1-10 ГЭ/мл, специфичностью - 98,3 %, воспроизводимостью результатов -100 %, позволяет выявлять возбудитель ЛЗН в сыворотке (плазме) крови, суспензиях клещей, комаров, органов животных (мозг, селезенка) и может быть использована при проведении лабораторной диагностики ЛЗН, в том числе при мониторинге природных очагов этой арбовирусной инфекционной болезни.

9. Установлено, что разработанная тест-система для выявления РНК вируса ККГЛ методом ОТ-ПЦР «ГенКонго» характеризуется чувствительностью 5-103 ГЭ/мл, 100 % специфичностью и воспроизводимостью результатов, позволяет выявлять возбудитель КГЛ в сыворотке (плазме) крови, суспензиях клещей и органов животных (мозг, селезенка) и можЬт быть использована при проведении лабораторной диагностики КГЛ и мониторинге природных очагов этой арбовирусной инфекционной болезни.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема инфекционных болезней с природной очаговостью, к которым относятся и арбовирусные инфекционные болезни, имеет особую актуальность для национальных и международных систем здравоохранения в связи с регистрацией новых очагов инфекций, риском заноса возбудителей на неэндемичные территории, активными миграционными процессами среди населения [Онищенко Г.Г., 2000, 2004].

Изменение климата и антропогенное вмешательство обусловили трансформации видовых сообществ носителей и переносчиков арбовирусов и послужили предпосылками расширения ареалов возбудителей ряда арбовирусных инфекционных болезней [Алексеев А.Н.; 2004; Бутенко A.M., Ларичев В.Ф., 2004; Львов Д.К. и др., 2004], что, в свою очередь, привело к резкому обострению эпидемической обстановки по ЛЗН и КГЛ на территории юга Российской Федерации в конце 20- начале 21 века. Эта ситуация была расценена как чрезвычайная в области общественного здравоохранения, одной из причин которой явились неудовлетворительное состояние эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями [Онищенко Г.Г., 2000].

Повешение эффективности эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями предполагает детальное и продолжительное (динамическое) изучение эпизоотологических и эпидемиологических особенностей очагов в различных регионах.

Нами был осуществлен мониторинг арбовирусных инфекционных болезней на территории Саратовской и Астраханской областей.

Для определения спектра арбовирусов, уточнения видового состава их основных переносчиков и носителей, изучения особенностей распространения и территориальной приуроченности природных очагов арбовирусных инфекций, было проведено комплексное исследование основных носителей и переносчиков арбовирусов - кровососущих

231 членистоногих, мелких млекопитающих, птиц, а также сывороток крови населения и сельскохозяйственных животных.

В ходе комплексного обследования Саратовской области были исследованы комары (5705 экземпляров, 12 видов), клещи (12292 экземпляров, 7 видов), мелкие млекопитающие (4055 экземпляров, 17 видов), птицы (204 экземпляров, 43 видов).

Комаров исследовали методом ИФА на наличие антигенов вирусов СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН. Выявлено 28 проб (17,7 %), содержащих антигены арбовирусов. В целом показана не высокая инфицированность комаров различными арбовирусами на территории Саратовской области. Антигены вируса ЗН выявлены в 3-х пробах (1,8 %), Батаи - в 8 (4,8 %), вирусов СКЭ -в 14 (8,5 %), Синдбис в 3-х (1,8 %).

Установлено, что наиболее часто антигены арбовирусов регистрировали в пулах, составленных из комаров рода Aedes, что позволяет предположить доминирующую роль комаров этого рода в распространении арбовирусов на территории Саратовской области.

Показано, что наиболее интенсивно циркуляция вирусов Батаи и СКЭ осуществляется в Правобережных районах области, относящихся к зоне степи, а антигены вирусов ЗН и Синдбис были выявлены в Левобережных районах области, относящихся к степной и полупустынной зонам.

При исследовании клещей (12292 экземпляров, 7 видов, объединенных в 791 пул), собранных на территории Саратовской области, в ИФА и ПЦР выявлены маркеры вирусов ЗН, ККГЛ и КЭ. Антигены вируса ЗН выявляли чаще всего в суспензиях клещей R. rossicus, R. schulzei и D. marginatus. Всего было выявлено 9 (1,1 % положительных проб). Антигены вируса ККГЛ (2,0 % положительных проб) были обнаружены в пробах клещей видов R. schulzei и D. marginatus. Все положительные пробы, содержащие антигены вирусов ЗН и ККГЛ, были сформированы из клещей, собранных на территории левобережных районов области (Ровенском, Александрово Гайском и Новоузенском районах), относящихся к полупустынной и степной зонам.

Антигены вируса КЭ (2,5 % положительных проб) были зарегистрированы при исследовании пулов, составленных из клещей /. ricinus и D.reticulatus, собранных на территории правобережных районов области в лесостепной и степной зонах.

Необходимо отметить, что ранее циркуляция вирусов ККГЛ, ЗН и КЭ в Саратовской области не отмечалась [Львов Д.К., 2001]. Однако, на территориях Волгоградской области и Республики Казахстан, которые граничат с южными районами Саратовской области выявлены природные очаги КГЛ и практически ежегодно отмечаются заболевания КГЛ [Смирнова Е.А. и др., 2009]. Также на территории Волгоградской области широко распространена ЛЗН [Путинцева Е.В. и др., 2010; Краснова Е.М., 2001], и выявление антигенов этих вирусов указывает на расширение ареалов вирусов ЗН и ККГЛ к северу, т.е. на территорию южных районов Саратовской области.

Результаты проведенных исследований указывают на то, что циркуляция вируса ККГЛ в южных районах Саратовской области происходит с участием клещей D. marginatus и R. schulzei. Кроме этого, в настоящее время отмечается расширение ареала клещей рода Hyalomma [Кутырев И.В., 2009], что также свидетельствует в пользу расширения границ вируса ККГЛ.

Полученные положительные результаты при тестировании проб клещей I. ricinus и D.reticulatus на наличие антигена вируса КЭ могут свидетельствовать о циркуляции этого возбудителя на территории Саратовской области, что, несомненно, требует дальнейшего изучения этого вопроса, тем более что клещи I. ricinus довольно широко распространены по территории Саратовской области. Этот вид обычен в пойменных участках рек, лесных опушках широколиственных лесов, лесопосадках в ряде районов области.

Для определения степени вовлеченности в циркуляцию арбовирусов мелких млекопитающих, обитающих в различных ландшафтно-экологических формациях, и изучения возможностей формирования эндемичных очагов арбовирусных инфекций на территории правобережных и левобережных районах Саратовской области, проведено эпизоотологическое обследовании территории, в ходе которого собраны мелкие млекопитающие, при этом пункты отлова находились в тех же зонах, где проводили сборы комаров и клещей. Всего в исследование было включено 4055 экземпляров мелких млекопитающих. Суспензии внутренних органов грызунов (1599 проб) исследовали на наличие антигенов или РНК вирусов Батаи, СКЭ (Тягиня, Инко), Синдбис, ЗН, ККГЛ с помощью ИФА или ПЦР. При исследовании материала от мелких млекопитающих выявлено 190 (11,9 %) положительных образцов, содержащих антигены арбовирусов Батаи, СКЭ, Синдбис, ЗН и ККГЛ, что свидетельствует о циркуляции указанных вирусов на территории области. Установлено, что среди грызунов, вовлекаемых в циркуляцию арбовирусов, наиболее важную роль играют домовые и лесные мыши. Определены основные экологические связи арбовирусов, циркулирующих на территории Саратовской области, с мелкими млекопитающими.

В результате комплексных исследований выявлена зависимость степени активности циркуляции арбовирусов от ландшафтно-экологических особенностей мест обитания основных носителей и переносчиков вируса. Показано, что максимального уровня интенсивность циркуляции арбовирусов на территории Саратовской области достигает в степной и полупустынной зонах, что подтверждается результатами, полученными при исследовании комаров, клещей и мелких млекопитающих.

Выявление большего количества положительных проб, содержащих антигены арбовирусов ЗН и ККГЛ в материале из Александрово Гайского и Новоузенского районов, может быть объяснено территориальной близостью указанных районов к Волгоградской области, где действуют эпидемически активные природные очаги этих инфекционных болезней [Краснова Е.М., 2001; Савченко Т.С. и др., 2007].

С целью определения возможности интродукции с птицами на территорию Саратовской области арбовирусов проведены исследования птиц, добытых в весенний период в Александрово Гайском и Новоузенском районах. Материал исследовали на наличие антигенов или РНК арбовирусов, в циркуляцию которых включаются птицы. Это вирусы СКЭ (Тягиня, Инко), ЗН, Синдбис.

При исследовании материала от птиц были выявлены антигены вирусов ЗН и Синдбис, а также РНК вируса ЗН, что указывает на принципиальную возможность заноса на территорию Саратовской области в период миграций птиц возбудителей арбовирусных инфекционных болезней. Видовой состав птиц, в образцах от которых были зарегистрированы маркеры арбовирусов, представлен как типично водоплавающими, так и птицами, обычными для антропургических биотопов.

Таким образом, проведенное комплексное эпизоотологическое обследование территории Саратовской области выявило циркуляцию арбовирусов СКЭ (Тягиня, Инко), Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, КЭ, что подтверждается многолетним обнаружением маркеров (антигенов, РНК) указанных возбудителей в пробах членистоногих, органов мелких млекопитающих и птиц. Установлено, что циркуляция арбовирусов наиболее интенсивно осуществляется в степной и полупустынной зонах области, о чем свидетельствуют показатели инфицированности членистоногих и мелких млекопитающих. Выявлены основные виды комаров и клещей, являющихся основными переносчиками арбовирусов на территории Саратовской области. Установлено, что наиболее часто антигены арбовирусов регистрировали в пулах, составленных из комаров рода Aedes. Показано, что на территории южных районов области возможна циркуляция вируса ККГЛ, которая происходит с участием клещей видов D. marginatus и R. schulzei, а в циркуляцию вируса ЗН включаются клещи R. rossicus, R. schulzei, D. marginatus. Впервые выявлены антигены вируса КЭ в клещах I.ricinus.

Среди мелких млекопитающих, вовлекаемых в циркуляцию арбовирусов, наиболее важную роль играют фоновые виды, и в первую очередь домовые и лесные мыши, в пробах от которых зарегистрированы антигены вирусов СКЭ, Батаи, Синдбис, КККГЛ, ЗН. Показана принципиальная возможность заноса на территорию Саратовской области в период миграций птиц возбудителей арбовирусных инфекционных болезней, в частности вирусов ЗН и Синдбис, маркеры которых были обнаружены при исследовании перелетных птиц, добытых на территории Саратовского Заволжья.

С целью изучения распространения арбовирусов на территории Астраханской области было проведено комплексное исследование комаров (76981 экз,7 видов), клещей (17020, 4 вида), мелких млекопитающих (969 экз, 10 видов).

При исследовании комаров, собранных на территории Астраханской области, выявлены антигены вирусов СКЭ, Батаи, ЗН, Синдбис, Укуниеми. Показано, что основное значение в качестве переносчиков арбовирусов имеют комары рода Аес1ез:Ае. саяртя, Ае. уехат, а также рода Сикх: С.р1ргет. Кроме этого, для вируса Батаи основными переносчиками являются комары Ап. кугсапт и Ап.тасиИрептз. Особого внимания заслуживает факт высокой инфицированности арбовирусами комаров С. р{р\ет (8,7 % положительных проб), синантропного вида, массово выпловаживающегося в подвалах жилых зданий. Именно это обстоятельство было одной из основных причин, приведших к вспышке ЛЗН в Астраханской области в 1999 г [Краснова Е.М., 2001]. Помимо этого выявлены высокие показатели инфицированности комаров Ае. сазршБ (11,9 % положительных проб) и Ае. \exans (24,5 % положительных проб) - доминирующих видов на территории Астраханской области.

Для изучения роли клещей в циркуляции арбовирусов на территории Астраханской области их исследовали методом ИФА на наличие антигенов вирусов ККГЛ, ЗН, Бханджа и Дхори. Анализ полученных результатов показывает, что наиболее вероятными переносчиками вирусов ККГЛ, ЗН, Бханджа и Дхори являются клещи вида H.marginatum. Кроме того, в циркуляцию вирусов Бханджа, Дхори, ККГЛ могут включаться видовые сообщества клещей Rh.schulze, о чем свидетельствуют единичные положительные находки антигенов указанных вирусов в клещах этого вида.

Высокие показатели инфицированности клещей вирусом ККГЛ, особенно H.marginatum - основного носителя и переносчика вируса, привели к осложнению эпидемической обстановки по КГЛ на территории южных районов области.

С целью выявления природных резервуаров арбовирусов на территории Астраханской области был исследован, с использованием ИФА, материал от мелких млекопитающих. Показано, что мелкие млекопитающие вовлечены в процесс циркуляции арбовирусов: Батаи, СКЭ, ККГЛ, Синдбис, ЗН, Укуниеми, Бханджа, Дхори.

Установлено, что вирус Батаи на территории области экологически связан с популяциями гребенщиковых песчанок, домовых мышей, полевых мышей и обыкновенных полевок. В круг циркуляции вирусов СКЭ вовлечены популяции обыкновенной полевки. В поддержании природных очагов ККГЛ участвуют видовые сообщества малого суслика и гребенщиковых песчанок, вирус ЗН связан с популяциями домовых мышей, что согласуется с предположением об антропургических очагах лихорадки ЗН на территории Астраханской области. Циркуляция вируса Синдбис поддерживается видовыми сообществами гребенщиковых песчанок. В циркуляцию вируса Дхори включаются видовые сообщества малого суслика, а вируса Бханджа - полевых мышей. Вирус Укуниеми экологически связан с популяциями гребенщиковых песчанок.

Комплексное исследование фоновых видов членистоногих и мелких млекопитающих показало, что на территории Астраханской области происходит весьма активная циркуляция арбовирусов, о чем свидетельствуют высокие показатели инфицированности всех сочленов паразитарной системы: вирус-членистоногое-млекопитающие. При этом в круг циркуляции арбовирусов происходит вовлечение синантропных видов, в частности комаров С. pipiens и домовых мышей, что является условием формирования антропургических очагов ряда инфекций и неизбежно приводит к осложнению эпидемической обстановки.

С целью определения эпидемического значения арбовирусов, степени контакта с возбудителями людей и сельскохозяйственных животных, территориальной распространенности арбовирусов проведено изучение уровня иммунной прослойки КРС и населения, проживающего на территориях Саратовской и Астраханской областей.

При исследовании 1473 образцов сывороток крови здоровых жителей г. Саратова и Саратовской области была выявлена иммунная прослойка среди населения области к арбовирусам: СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, КЭ. При этом выявлено 158 образцов (10,7 %) положительно реагирующих проб.

В целом, выявленный не высокий уровень иммунной прослойки к арбовирусам среди населения Саратовской области объясняется не значительным уровнем инфицированности комаров и клещей арбовирусами и еще раз подтверждает наше предположение о невысокой интенсивности циркуляции арбовирусов в этом регионе.

Анализ результатов проведенных серологических исследований позволил определить территориальную приуроченность арбовирусов. Так, наиболее высокий уровень иммунной прослойки ко всем арбовирусам зафиксирован в полупустынной зоне (13,4 %), что указывает на возможность эпидемических осложнений именно в районах этой зоны. Полученные данные свидетельствуют о циркуляции вирусов ККГЛ и ЗН преимущественно в полупустынной и степной зонах Саратовской области, а вируса КЭ - на территории лесостепной зоны.

В результате изучения сывороток крови КРС (223 образца), собранных на территории Саратовской области, установлено, что сельскохозяйственные животные имеют иммунную прослойку к вирусам СКЭ, Батаи, Синдбис, ЗН,

ККГЛ. При этом КРС наиболее часто инфицируются вирусами Батаи и СКЭ (8,9 и 7,6 % положительных проб, соответственно), а риск заражения наиболее высок в районах, относящихся к лесостепной и степной зонам. Заражение КРС вирусами ЗН и КЕТ Л наиболее вероятно в степной (4,0 и 2,0 %, соответственно) и полупустынной (2,9 и 2,8 %, соответственно) зонах области.

Сыворотки крови людей (470 проб), проживающих в Астраханской области, исследовали в ИФА для выявления специфических иммуноглобулинов к наиболее эпидемически значимым вирусам для этого региона - вирусам СКЭ, Батаи, ККГЛ, Синдбис, ЗН. В результате проведенных исследований выявлен значительно более высокий уровень иммунной прослойки среди населения (по сравнению с результатами серологического мониторинга в Саратовской области), преимущественно по отношению к вирусам СКЭ, Батаи и ЗН.

При тестировании сывороток крови людей, собранных в 1998 и 1999 гг. (до и после вспышки ЛЗН), было выявлено двукратное увеличение числа проб, содержащих нейтрализующие антитела к вирусу, что указывает на массовый характер вспышки ЛЗН и большое количество инаппарантных форм, т.к. среди обследованных не было лиц с диагнозом «ЛЗН» или перенесших в прошлом это заболевание.

В результате исследования сывороток крови КРС (279 образцов), собранных на территории Астраханской области, также был зарегистрирован высокий уровень иммунной прослойки среди сельскохозяйственных животных к арбовирусам (73,1 %), что свидетельствует о весьма интенсивной циркуляции на территории Астраханской области вирусов СКЭ, Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис, Дхори.

Таким образом, по результатам комплексного исследования полевого материала, собранного на территориях Саратовской и Астраханской областей (суспензии комаров, клещей, органов мелких млекопитающих), а также сывороток крови людей и сельскохозяйственных животных, анализа данных, полученных другими исследователями в результате аналогичных работ [Журавлев В.И., 2002; Львов Д.К. и др., 2001], можно сделать заключение о том, что в Саратовской области осуществляется циркуляция вирусов СКЭ (Тягиня, Инко), Батаи, Синдбис, ЗН, ККГЛ, КЭ, а на территории Астраханской области - арбовирусов СКЭ (Тягиня, Инко), Батаи, ККГЛ, ЗН, Синдбис, Дхори, Бханджа, Укуниеми. Основными переносчиками этих вирусов являются фоновые виды комаров родов Aedes, Anopheles и Culex, клещи родов Hyalomma и Rhipicephalus, а в процесс циркуляции вовлекаются фоновые виды мелких млекопитающих из семейств Мышей {Muridae) и Хомякообразных (Cr/cei/tfoe).Эпизоотическая активность циркуляции арбовирусов значительно выше в Астраханской области, о чем свидетельствуют более высокие показатели инфицированности комаров, клещей и мелких млекопитающих, а также уровни иммунной прослойки среди населения и сельскохозяйственных животных. Показано расширение ареалов вирусов ЗН и ККГЛ на территорию юга Саратовской области.

Активизация природных очагов арбовирусных инфекционных болезней диктует необходимость организации и проведения эпидемиологического надзора. Одним из аспектов повышения эффективности эпидемиологического надзора за арбовирусными инфекционными болезнями является оптимизация эпидемиологического мониторинга. Получаемая в ходе эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями информация должна обеспечить возможность определения состояния и тенденции развития эпидемического и эпизоотологического процессов, а также ретроспективного эпидемиологического анализа. В соответствии с этими задачами эпидемиологический мониторинг за арбовирусными инфекционными болезнями должен включать несколько уровней сбора информации: о состоянии заболеваемости, о циркуляции возбудителей среди основных носителей и переносчиков, о состоянии уровня коллективного иммунитета среди людей и животных к арбовирусам [Беляков В.Д., 1985].

Оптимизация информационного обеспечения в рамках эпидемиологического мониторинга должна идти по нескольким направлениям. Во-первых, необходимо оценить результативность диагностических методов, используемых на различных этапах эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями (при проведении лабораторной диагностики арбовирусных инфекций, в ходе энтомолого-эпизоотологического обследования территорий и серологического мониторинга) и определить место этих методов в схемах диагностических исследований в рамках проведения эпидемиологического мониторинга. Во-вторых, требуют дифференциации объемы диагностических исследований, проводимых в рамках эпидемиологического мониторинга за различными арбовирусными инфекционными болезнями.

Нами проведен анализ информативности ряда методических подходов, используемых в ходе эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями. Показано, что наибольшей результативностью при энтомолого-эпизоотологическом обследовании территории обладает ИФА (для выявления антигенов); при лабораторной диагностике арбовирусных инфекций - ИФА (для выявления 1§М и ^в) и ПЦР; при серологическом мониторинге - ИФА (для выявления ^й).

С целью реализации второго направления оптимизации эпидемиологического мониторинга - дифференциации объемов диагностических исследований, проводимых в рамках эпидемиологического мониторинга за различными арбовирусными инфекционными болезнями, нами проведена оценка эпидемической значимости различных арбовирусов, циркулирующих на территориях Саратовской и Астраханской областей и с учетом этого проведено их распределение на группы. За основу такого распределения взят методический прием, предложенный Е.И. Андаевым (2009). В первую группу отнесены те арбовирусные инфекционные болезни, заболеваемость которыми официально регистрируется на территории области и в отношении которых проводится эпидемиологический надзор. Ко второй группе инфекционных болезней мы отнесли арбовирусные инфекции, возбудители которых широко распространены на территории области, но их значение в инфекционной патологии требует дополнительного изучения. К третьей группе отнесены не представляющие серьезного эпидемиологического значения для этого региона арбовирусные инфекционные болезни. На основании различной эпидемической значимости отдельных арбовирусов предложены основные направления оптимизации эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями с определением объемов и методических подходов, проводимых диагностических исследований.

Для оптимизации и повышения эффективности эпидемиологического мониторинга за арбовирусными инфекционными болезнями нами предложен методический подход дифференциации территорий по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями и проведено районирование территории Саратовской области. Установлено, что территориями высокого потенциального риска заражения арбовирусными инфекционными болезнями являются Александрово-Гайский, Красноармейский, Ровенский, Краснокутский, Питерский и Новоузенский районы области. К группе районов со средней степенью потенциальной эпидемической опасностью заражения относятся Дергачевский, Воскресенский, Лысогорский, Озинский, Самойловский, Энгельсский и Саратовский районы области. Аткарский, Духовницкий, Федоровский, Базарно-Карабулакский, Хвалынский и Марксовский районы входят в группу территорий с низкой степенью потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями. Одним из основных приемов оптимизации стратегии и тактики эпидемиологического мониторинга должно стать периодически повторяемое районирования территории по степени потенциальной эпидемической опасности заражения арбовирусными инфекционными болезнями, так как ареалы арбовирусов в течение времени претерпевают изменения и активность природных очагов арбовирусных инфекций может существенно меняться.

С учетом данных районирования территории и результатов мониторинга за лихорадкой ЗН на территории Саратовской области разработан трехсторонний (Министерство Здравоохранения Саратовской области, Управление Роспотребнадзора по Саратовской области и ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб») «Комплексный план профилактических и противоэпидемических мероприятий по предупреждению заболеваний лихорадкой Западного Нила среди населения Саратовской области на 2011-2015».

Важной составляющей эпидемиологического надзора является лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Нами предложены и обоснованы принципы организации и функционирования единой многоуровневой системы лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за инфекционными болезнями.

Лабораторную диагностику опасных инфекционных болезней, к которым относятся и арбовирусные инфекции, в Российской Федерации осуществляют учреждения Роспотребнадзора: центры гигиены и эпидемиологии и противочумные учреждения. В соответствии с приказом Роспотребнадзора от 17.03.2008 «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней» лабораторная диагностика инфекционных болезней осуществляется по трехуровневой схеме: в лабораториях учреждений территориального, регионального и федерального уровней. Организация лабораторной диагностики опасных инфекционных болезней по трехуровневой схеме требует разработки основных принципов проведения исследований, что позволит определить объемы проводимых исследований, схемы анализов и используемые методы в лабораториях на каждом из уровней. Такой подход дифференциации диагностических исследований в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней позволит проводить верификацию получаемых результатов и повысить надежность и качество проводимых диагностических исследований. В целях совершенствования организации лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за инфекционными болезнями, предложены основные подходы, направленные на стандартизацию лабораторной диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, в том числе и таких арбовирусных инфекционных болезней как ЛЗН и КГЛ.

При выполнении работы в рамках Федеральной целевой программы «Химическая и биологическая безопасность Российской Федерации» (20092013 гг.) разработаны два проекта МУ: «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Лихорадки Западного Нила в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней» и «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней». Эти документы определяют основные требования к организации и проведению лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ в соответствии с трехуровневой структурой, формы взаимодействия различных учреждений, номенклатуру и объем лабораторных исследований.

При организации и проведении лабораторной диагностики в соответствии с трехуровневой системой должна осуществлятся дифференциация объемов и сложность используемых методических подходов для лабораторий каждого уровня. С повышением уровня организации лабораторной базы также должен повышатся и уровень ее оснащенности оборудованием, в том числе обеспечивающим более высокий уровень биологической безопасности при выполнении работ. Соответственно этому должны возрастать объемы и методический уровень исследований, в том числе и при работе с материалом, содержащим вирус в высоких концентрациях. Такой подход позволит обеспечить требуемый уровень биологической безопасности проводимых работ и рационального оснащения диагностических лабораторий. Реализация основных принципов организации и проведения исследований в соответствии с трехуровневой системой обеспечит функционирование многоступенчатой системы верификации получаемых результатов в ходе подтверждающего тестирования проб, что позволяет повысить надежность и качество лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ.

Одним из условий повышения надежности и качества диагностических исследований является использование зарегистрированных, в установленном порядке, препаратов. В настоящее время отсутствуют зарегистрированные ИФА- и ПЦР-тест-системы Российского производства для диагностики арбовирусных инфекций, в том числе и для проведения диагностики ЛЗН и КГЛ - наиболее актуальных арбовирусных инфекционных болезней для Российской Федерации. Для решения этой проблемы необходима разработка и внедрение в практику диагностических препаратов, в частности ПЦР-тест-систем для выявления РНК вируса ЗН и ККГЛ.

В результате проделанной работы нами был разработан метод детекции вирусов ККГЛ и ЗН с помощью ПЦР и предложены два диагностических препарата: «Тест-система для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции «ГенКонго», «Тест-система для выявления РНК вируса Западного Нила методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции «ГенНил», определены сроки и условия их хранения, разработана нормативная документация.

Для решения вопроса о целесообразности внедрения разработанных тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил» в практику проведены Государственные комиссионные испытания, в ходе которых определена диагностическая ценность препаратов. Чувствительность тест-системы «ГенКонго» составила 5-10 ГЭ/мл, специфичность - 100 %, воспроизводимость результатов -100 %. Чувствительность ПЦР с тест-системой «ГенНил» составила

1-10Л ГЭ/мл, специфичность - 98,3%, воспроизводимость результатов - 100%. Продолжительность ПЦР-анализа составила 6-8 часов, что значительно меньше времени, требующегося для выделения вирусов на культуре клеток или при заражении биопробных животных.

В результате сравнительного анализа данных, полученных культуральным методом, ИФА и ПЦР, установлено, что ПЦР-анализ с использованием предложенных нами тест-систем превышает по чувствительности ИФА и не уступает по чувствительности методу выделения вирусов в организме биопробных животных или в культуре клеток. Таким образом, показано, что одним из преимуществ ПЦР-анализа с разработанными нами тест-системами, по сравнению с вирусологическими методами, является скорость получения результатов при исследовании штаммов вирусов и проб полевого и клинического материала.

Отчет о проведенных Государственных приемочных испытаниях тест-системы «ГенКонго» рассмотрен на Ученом Совете ГИСК им. Л.А. Тарасевича (протокол № 14 от 19.10.04) и утвержден Комитетом МИБП (протокол №5 от 28.07.05). Тест-система «ГенНил» также рекомендована Ученым советом ГИСК им. Л.А. Тарасевича (протокол № 1 от 17.01.06) и Комитетом МИБП (протокол № 1 от 09.02.06) к регистрации в Российской Федерации.

Для того, чтобы оценить разработанные нами препараты с точки зрения их эффективности, удобства применения в ходе эпизоотологического мониторинга природных очагов арбовирусных инфекционных болезней и лабораторной диагностики ЛЗН и КГЛ, провели их апробацию при исследовании полевого и клинического материала.

Диагностическую ценность тест-системы «ГенКонго» определяли при исследовании полевого материала, собранного на территориях, эндемичных по КГЛ - в Волгоградской и Астраханской областях, а также в южных районах Саратовской области. Материал тестировали в ПЦР и в ИФА. Совпадение результатов ПЦР-анализа с использованием тест-системы «ГенКонго» и ИФА при тестировании полевого материала составило 97,8 %.

Тест-система «ГенНил» была апробирована при исследовании полевого материала, собранного в 2006 г. (апрель и сентябрь-октябрь) при проведении эпизоотологического обследования эндемичной по ЛЗН территории Астраханской области и прилегающей к ней части территории Республики Калмыкия. Материал тестировали двумя методами: ОТ-ПЦР и ИФА. Совпадение результатов ИФА и ПЦР-анализа составило 98,5 %. При исследовании полевого материала, собранного на неэндемичной по ЛЗН территории Ставропольского края в 2005 - 2006 гг., совпадение результатов ИФА и ПЦР-анализа составило 96,0 %.

В 2006 г. тест-система «ГенНил» была апробирована при исследовании полевого материала, собранного при эпизоотологическом обследовании территории Саратовской области, неэндемичной по ЛЗН, но граничащей с Волгоградской областью, где сформирован стойкий природный очаг инфекции, а также с территорией Казахстана, которую охватывает ареал вируса ЗН. Совпадение результатов ИФА и ПЦР-анализа составило 99,6 %.

Таким образом, в ходе апробации разработанных нами тест-систем «ГенКонго» и «ГенНил» показано, что эти препараты обеспечивают достаточно высокую точность анализа и могут быть использованы при проведении эпизоотологического мониторинга природных очагов арбовирусных инфекций - КГЛ и ЛЗН, а также для выявления циркуляции возбудителей этих инфекций на неэндемичных территориях. Наибольшая эффективность отмечена при комплексном использовании двух подходов: ПЦР-анализа с разработанными диагностическими препаратами и ИФА, направленного на выявление антигенов вирусов ККГЛ и ЗН.

С целью изучения возможности использования тест-системы «ГенКонго» для диагностики КГЛ были исследованы в ПЦР 28 сывороток крови больных людей - жителей Ростовской, Астраханской областей и Ставропольского края - с диагнозом КГЛ, поставленным на основании клинико-эпидемиологических данных и подтвержденным, в ряде случаев, ИФА. Совпадение результатов ПЦР-анализа и «антигенного» варианта ИФА зарегистрировано в 63,0 % случаев, а ПНР и ИФА, направленного на выявление антител класса 1%М - в 30,4 % случаев. Показано, что для надежной и достоверной диагностики КГЛ целесообразно использовать несколько лабораторных методов.

С целью выяснения возможности применения сконструированной тест-системы «ГенНил» при диагностике ЛЗН исследовали 90 образцов крови больных, проживающих на эндемичной по этой инфекции территории - в Астраханской области. Апробация тест-системы «ГенНил» при исследовании клинического материала показала целесообразность ее применения в ранний период заболевания (первые 6 дней болезни) и наибольшую эффективность комплексного использования ПЦР-анализа и ИФА, направленного на выявление специфических антител класса /^М к возбудителю ЛЗН.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о возможности использования ПЦР-анализа с разработанными диагностическими препаратами «ГенКонго» и «ГенНил» в комплексе методов лабораторной диагностики КГЛ и ЛЗН.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Щербакова, Светлана Анатольевна

1. Нормативно-методические документы

2. Приказ Минздрава РФ от 22.11.2001 № 414 «Об утверждении годовых форм отраслевого статистического наблюдения»

3. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 8.12. 2010 г. № 441 «Об утверждении формы отраслевого статистического наблюдения № 2-10 и инструкции по заполнению указанной формы»

4. Приказ Федеральной службы в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека № 88 от 17.03.08 г. «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней».

5. Постановление Главного государственного санитарного врача РФ № 27 от 11.05.2007 г. «О введении в действие Международных медико-санитарных правил (2005 г.)», зарегистрировано Министерством Юстиции РФ №9575 31мая 2007 г.

6. Протокол заседания коллегии Роспотребнадзора от 02.06.2010 г «О совершенствовании эпидемиологического надзора и профилактике клещевого вирусного энцефалита в Российской Федерации»

7. ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025 «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий».

8. ИСО 9001:2000 «Система управления качеством. Требования».

9. ИСО 5725-(1-6) 2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

10. СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-П групп патогенности (опасности)». М., 2003. - 144 с.

11. СП 3.1.3.2352-08 «Профилактика клещевого вирусного энцефалита». М., 2008. - 21 с.

12. МУ 3.1.3.2600-10 «Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации». М., 2010. - 20 с.

13. МУ 3.1.3.2488-09 «Организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки». М., 2009. - 22 с.

14. МУ 1.3.1794-03 «Организация работы при исследовании методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами 1-П групп патогенности». М., 2003. - 18 с.1. Научные публикации

15. Азарян А.Р., Гришанова А.П., Бутенко А.М. и др., Серологическая диагностика арбовирусных инфекций в Астраханской области // Матер, науч.- практ. конф. «Арбовирусы и арбовирусные инфекции». Астрахань, 2007. - С. 115-120.

16. АтэИсЬепсо М.В., Щелканов М.Ю., Алексеев В.В. и др. Молекулярные маркеры патогенности вируса Западного Нила // Вопр. вирусол. 2010. - № 1. - С. 4-10.

17. Альховский С.В., Дерябин П.Г., Гафарова И.Э. и др. молекулярно-генетические методы детекции вирусов серокомплекса калифорнийского энцефалита // Молек. медицина. — 2010. № 5. - С. 21-26.

18. Андаев Е.И. Научно-организационные основы эпидемиологического надзора за природно-очаговыми и особо опасными вирусными инфекциями В Восточной Сибири: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Иркутск, 2009. - 46 с.

19. Аристова В.А., Громашевский В.Д., Скворцова Т.М. и др. Изоляция вируса Батаи в центре Европейской части России // Итоги науки и техн. ВИНИТИ, Сер. вирусол. 1991. - Т.24. - С.47-48.

20. Аристова В.А., Колобухина JI.B., Щелканов М.Ю., Львов Д.К. Экология вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки и особенности ее клиники на территории России и сопредельных стран // Вопр. вирусол. 2001. - № 4. - С. 7-19.

21. Ашмарин И.П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. М.: Медгиз, 1962. 180 с.

22. Беляков В.Д. Эпидемиологический надзор основа современной организации противоэпидемической работы // ЖМЭИ, 1985. - № 5. - С. 5358.

23. Березин В.В., Чумаков М.П., Башкирцев В.Н. и др. Арбовирусные инфекции в дельте реки Волги // Вопр. мед. вирусол.: Тез. докл. М., 1971. -С. 137-138.

24. Березин В.В., Чумаков М.П., Столбов Д.Н. и др. К вопросу о естественных хозяевах вируса Крымской геморрагической лихорадки в Астраханской области //Труды ИПВЭ АМН СССР. М, 1975. T.XIX. - С.210 -217.

25. Бойко А.В., Ивлиев В.Г., Аюпов А.С. Иксодовые клещи в лесах Среднего Поволжья (лесостепная зона). Казань, 1982. -148 с.

26. Боярский А. Я., Шушерин П. П. Демографическая статистика. -М., 1955.

27. Бруммер-Корвенконтио М., Куусисто П. Болезь Погоста // Этиология, эпидемиология и профилактика. Карельская лихорадка Болезнь Погоста: Тез. междунар. симпозиума. - Петрозаводск, 1984. - 20 с.

28. Булычев В.П., Костюков М.А., Данияров О.А. и др. Выделение вируса Тягиня из комаров Anopheles hyrcanus и иммунологическая структура населения к вирусу Тягиня в Таджикистане // Экология вирусов: Сб. науч. тр. -М.Д975.-С. 113-117.

29. Булычев В.П., Костюков М.А., Данияров O.A. Кровососущие комары (Díptera, Culicidae) Таджикистана и их связь с арбовирусами // Экология вирусов: Сб. науч. тр. М., 1982. - С. 130-131.

30. Бутенко A.M. Материалы по изучению этиологии, лабораторной диагностики и иммунологии КГЛ: вопросы экологии вируса-возбудителя: Автореф. дис. . докт. биол. наук. М., 1970. - 24 с.

31. Бутенко A.M., Галкина И.В., Кузнецов A.A. и др. Изучение вирусов комплекса Калифорнийского энцефалита в РСФСР (серологические исследования) // Арбовирусы и арбовирусные исследования. Тез. докл. Междунар. симпоз. - М., 1989. - С. 10-11.

32. Бутенко A.M., Дерябин П.Г. Вирусы и вирусные инфекции группы Калифорнийского энцефалита // Вопр. вирусол. 1991. - № 4. - С. 349-350.

33. Бутенко A.M., Ковтунов А.И., Джаркенов А.Ф. и др. Эпидемиологическая характеристика лихорадки Западного Нила в Астраханской области // Вопр. вирусол. 2001. - № 4. - С. 34-35.

34. Бутенко A.M., Лещинская Е.В., Семашко И.В. и др. Вирус Дхори возбудитель заболевания человека. Пять случаев лабораторной инфекции // Воп. вирусол. 1987. - № 6. - С. 724-729.

35. Бутенко A.M., Столбов Д.Н. История изучения арбовирусных инфекций на территории Астраханской области // Вопр. риккетсиол. и вирусол. Астрахань. - М., 1996. - С.53-54

36. Бутенко A.M., Чумаков М.П., Башкирцев В.Н. и др. Выделение и изучение астраханского штамма «Дроздов» вируса крымской геморрагической лихорадки и материалы по серодиагностике этой инфекции

37. Матер. 15 науч. сесс. нн-та полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР. М., 1968. - В. 3. - С. 88-90.

38. Василенко В.А. Антитела к вирусу Инко у населения Эстонии //Итоги науки и техники: ВИНИТИ, Сер. вирусол. М., 1991. - Т. 24. - С.35-36.

39. Василенко Н.Ф. Опыт применения ИФА и ОТ-ПЦР в диагностике Крымской геморрагической лихорадки в Ставропольском крае в 2002 г. // ЖМЭИ. 2005. - № 4 (приложение). - С.90-93.

40. Василенко Н.Ф. Изучение распространения возбудителя крымской геморрагической лихорадки в отдельных регионах юга России // ЖМЭИ. 2005. - № 4. - С. 23-27.

41. Василенко Н.Ф., Афанасьев E.H., Тюменцева И.С., Ефременко В.И., Вышемирский О.И., Марков В.И., Евченко Ю.М., Бейер А.П. Лабораторная диагностика вспышки Крымской геморрагической лихорадки на юге России // ЖМЭИ. 2001. - №6 (приложение). - С.95-97.

42. Василенко Н.Ф., Бейер А.П., Чумакова И.В. и др. Циркуляция некоторых арбовирусов на территории Ставропольского края // РЭТ-инфо. -2007. -№1(61).-С. 15-17.

43. Василенко Н.Ф., Малецкая О.В., Бейер А.П. и др. Эпидемиологическая обстановка по лихорадке Западного Нила в Южном

44. Федеральном Округе в 2006 г. // Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России: матер, науч.- практ. конф. (21-22 марта 2007, Ставрополь). Ставрополь, 2007.-Ч. I.-С. 64-67.

45. Васильев A.B., Щелканов М.Ю., Джаркенов А.Ф. и др. Заражаемость сельскохозяйственных животных вирусом Западного Нила в Астраханской области по данным серологического обследования (2001-2004 гг.) // Вопр. вирусол. 2005. - №6. - С. 36-41.

46. Венгеров Ю.Я., Фролочкина Т.Н. Жуков А.Н. и др. Инфекция, вызываемая вирусом лихорадки Западного Нила, как клиническая и эпидемиологическая проблема // Эпидемиол. и инф. болезни. 2000. - № 4. -С.-27-31.

47. Виноград И.А. Экология арбовирусов на территории Украины //Арбовирусы и арбовирусные инфекции Тез. докл. Международн. симпозиума. - М., 1989. - С.17-19.

48. Виноград И.А., Белецкая Г.В., Чумаченко С.С. и др. Экологические аспекты изучения арбовирусов в Украинской ССР // Экология арбовирусов и диагностика арбовирусных инфекций Сб. научн.тр. - М., 1989. - С.21-27.

49. Виноград И.А., Виговский А.И., Чумаченко С.С. и др. Новые изоляты арбовирусов на Украине и их биологические особенности //Арбовирусы: Сб. науч. тр. М., 1981. - С. 45^18.

50. Вышемирский О.И., Жуков А.Н., Прилипов А.Г. и др. Выделение вируса лихорадки Западного Нила от больного менингоэнцефалитом в Волгоградской области в 2000 г. // Вопр. вирусол. 2001. - №4. - С. 33-34.

51. Галкина И.В. Распространение арбовирусов в Поволжье: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1991. - 24 с.

52. Галкина И.В., Бутенко A.M., Кузнецов A.A. и др. Изучение циркуляции арбовирусов на территории Поволжья // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. - Т.24. - С. 24-25.

53. Галкина И.В., Бутенко A.M., Кузнецов A.A. и др. Изучение циркуляции вирусов серогруппы Калифорнийского энцефалита на территории Поволжья // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. -1992. -121.- С. 61-69.

54. Гаранина С.Б. Конструирование тест-системы, основанной на полимеразной цепной реакции, для детекции возбудителя бруцеллеза: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 1996. - 24 с.

55. Гордеева З.Е., Абдусалимов И.А., Костюков М.А. и др. Роль птиц в экологии арбовирусов в Таджикистане // Изв. АНТадж. ССР. Отд-ние биол. наук 1989. - № 2. - С. 28-33.

56. Горин О.З., Гусарова H.A., Жарская C.JI. и др. Результаты серологической разведки 7 в отношении вируса Батаи на юге восточной Сибири //Итоги науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. - Т.24. - С.37-38.

57. Горин О.З., Гусарова H.A., Жарская C.JI. и др. Результаты серологической разведки в отношении вируса Батаи на юге восточной Сибири. // Итоги науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1992. - Т. 27. - С. 25-30.

58. Гражданов А. К., АязбаевТ. 3., Белоножкина Л. Б и др. Первые сведения о проявлении в Казахстане Лихорадки Западного Нила //Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане № 1-2 (23-24), Алматы, 2011.-С. 58-61.

59. Гражданов А. К., Танитовский В.А., Белоножкина Л. Б и др. Новый природный очаг Крымской геморрагической лихорадки в Казахстане //Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане № 1-2 (23-24), Алматы, 2011.-С. 66-69.

60. Громашевский В. Л., Гайдамович С.Я., Червонский В.И. Выделение вируса лихорадки Западного Нила и Синдбис у птиц юго-восточного Азербайджана // Матер, симпоз. по изучению птиц в распространении арбовирусов. Новосибирск, 1972. - С. 232-238.

61. Давидович В.Ф. Экологические факторы природной очаговости туляремии в Саратовской области: Автореф. дис. . канд. биол. наук, Саратов, 1968., 25 с.

62. Данияров O.A., Халимов М.Х. Головко Э.Н. Выделение вируса Синдбис от туркменской крысы в Таджикистане // Экология вирусов: Сб. науч. тр.-М., 1980.-С. 130-138.

63. Демихов В.Г., Чайцев В.Г. Невролгическая характеристика заболеваний, вызываемых вирусами Инко и Тягиня // Вопр. вирусол. 1995. -№ 1. - С. 21-25.

64. Денисов A.A., Савченко С.Т., Лазоренко В.В. и др. Носители и переносчики крымской геморрагической лихорадки в Волгоградской области // ЖМЭИ. 2005. - № 4. - С. 119-121.

65. Дуров В.И., Донец М.А., Перелатов В.Д. Разведка очагов КГЛ на территории юго-востока Европейской части РСФСР (Краснодарский край, Ставропольский край и Калмыцкая АССР) // Акт. пробл. вирусол. и профилакт. вирусных забол. -М., 1972. С. 358-356.

66. Дятлов А.И., Котти Б.К. Теоретические аспекты природной очаговости крымской геморрагической лихорадки на юге России //ЖМЭИ. -2005.-№4. -С. 98.102.

67. Евченко Ю.М., Григорьев М.П., Грижебовский Г.М. Возможный подход к эпидемиологическому районированию Ставропольского края по крымской геморрагической лихорадке // ЖМЭИ. 2005. - № 4. - С. 45—48.

68. Еременко Е.И., Афанасьев E.H., Солодовников Б.В., Василенко Н.Ф. Диагностика методом ОТ-ПЦР Крымской геморрагической лихорадки в Ставропольском крае в 2001-2002 гг. // ЖМЭИ. 2005. -№ 4 (приложение). -С.82-85.

69. Жибурт Е.Б., Губанова М.Н., Максимов В. А. Гемотрансмиссивная передача вируса Западного Нила // Эпидемиол. и инф. болезни. 2007. - № 3. - С. 28-32.

70. Журавлев В.И. Эпидемиологические и экологические аспекты циркуляции арбовирусов на территории Астраханской области. Дис. . канд. мед. наук. Саратов, 2002. - 149 с.

71. Завьялов Е.В., Шляхтин Г.В., Табачишин В.Г. и др. Птицы севера Нижнего Поволжья. Кн.1. История изучения, общая характеристика и состав орнитофауны. Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 2005. 296 с.

72. Завьялов Е.В., Шляхтин Г.В., Табачишин В.Г. и др. Птицы севера Нижнего Поволжья. Кн. 2. Состав орнитофауны. Саратов: Изд-во Сарат. унта, 2005.-324 с.

73. Завьялов Е.В., Шляхтин Г.В., Табачишин В.Г. и др. Птицы севера Нижнего Поволжья. Кн. 3. Состав орнитофауны. Саратов: Изд-во Сарат. унта, 2007.-328 с.

74. Зимина Ю.В., Куликова А.Н., Салько В.Н., Ковтунов А.И. Иксодовые клещи Астраханской области, их роль в формировании природных очагов и передаче арбовирусов человеку //Вопр. риккетсиол. и вирусол. Астрахань - М., 1995. - С. 58-62.

75. Изотов В.К., Журавлева М.Г., Кузьминская О.П. Выделение трех штаммов вируса Укуниеми из клещей в Вологодской области // Актуал. пробл. вирусол. и профил. вирусных заболеваний. М., 1972. - С. 283-291.

76. Кандауров Е.К., Андреев В.П., Аристова В.А. и др. Арбовирусы в центральной части Русской равнины // Итоги науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. - Т. 24. - С 46-47.

77. Карась В.Ф. Арбовирусы Киргизии //Арбовирусы / Под ред. Д.К.Львова. М., 1978. - Вып. № 3. - С. 40-44.

78. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных. Учебное пособие. Под ред. Луговцева В.Ю., Васильева Д.А. Ульяновск, 2002 - 268 с.

79. Кнороз М.Ю., Ермаков Н.М., Скворцова Т.М. и др. Изоляция вируса Батаи (Bunyaviridae, Bunyavirus, комплекс Буньямвера) на территории Саратовской области // Деп. в ВИНИТИ. Вып. 92. - № 362 - Саратов, 1991.

80. Ковтунов А.И., Юстратов В.Б. Никешина Н.Н. и др. Эпидемиология Крымской геморрагической лихорадки в Астраханской области // Матер, науч. практ. конф. «Арбовирусы и арбовирусные инфекции». - Астрахань, 2007. - С. 108-114.

81. Ковтунов А.И., Юстратов В.Б. Никешина Н.Н. и др. Эпидемиологическая характеристика лихорадки Западного Нила в Астраханской области // Матер, науч.- практ. конф. «Арбовирусы и арбовирусные инфекции». Астрахань, 2007. - С. 114-115.

82. Колобухина Л.В., Львов Д.К., Бутенко A.M. и др. Значение вирусов антигенного комплекса Калифорнийского энцефалита в патологии // Клин. мед. 1989. - Т. 67. - № 9. - С. 61-64.

83. Колобухина Л.В., Львов Д.К., Скворцова Т.М. и др. Заболевания в России, ассоциированные с вирусами серогруппы калифорнийского энцефалита // Вопр. вирусол. 1998. - № 1. - С. 14-17.

84. Кондратенко В.Ф. Значение иксодовых клещей в переносе и хранении возбудителя Крымской геморрагической лихорадки в очагах инфекции // Паразитология, 1976. Т. 10. - № 4. - С. 297-302.

85. Кононова Ю.В., Терновой В.А., Протопопова Е.В. и др. Генотипирование вируса лихорадки Западного Нила, вызвавшего заболевания в Новосибирской области в 2004 г. // Матер. IX съезда

86. Всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (26-27 апреля 2007, Москва) М., 2007. - Т. 3. - С. 186-188.

87. Кормиленко И.В. Экологические и эпидемиологические аспекты Крымской геморрагической лихорадки, лихорадки Ку и иксодовых клещевых боррелиозов в Ростовской области: Дисс. . канд. биол. наук. Ростов-на-Дону., 2010.-179 с.

88. Кормиленко И.В., Мороз Н.В., Айдинов Г.В. Клинико-эпидемиологическая характеристика геморрагической лихорадки в Ростовской области // Эпидемиол. и инф. болезни. 2008. - № 2. - С. 23-27.

89. Короткое В.Б. Научно-организационные основы эпидемиологического надзора за зоонозными инфекциями в Саратовской области. Дис. в виде науч. докл. на соиск. уч. ст. докт. мед. наук. Саратов, 1997. - 79 с.

90. Костюков М.А. О роли летучих мышей в экологии арбовирусов в Таджикистане // Экология вирусов: Матер. X симпоз. по экологии вирусов. -Баку, 1976.-С. 92-93.

91. Костюков М.А., Гордееева З.Е., Бухачев В.П. и др. Озерная лягушка (Rana radibunda) один из прокормителей кровососущих комаров Таджикистана -резервуар вируса Западного Нила // Мед. паразитол. и паразитар. бол. - 1985. - № 3. - С. 49-53.

92. Костюков М.А., Данияров O.A., Булычев В.П.и др. Итоги и задачи изучения арбовирусов в Таджикистане // Арбовирусы: Тез. докл. пленума Всесоюз. пробл. комиссии. Таллин, 1984. - С. 20-21.

93. Краснова Е.М. Эпидемиологические особенности лихорадки Западного Нила в Волгоградской области и совершенствование еепрофилактики. Автореф. дис. канд. мед. наук. Саратов, 2001. - 21 с.

94. Кузнецов A.A., Бутенко A.M., Галкина И.В. и др. Изучение циркуляции некоторых арбовирусов в зонах смешанных и южно-таежных лесов Русской равнины и их роль в патологии человека // Итого науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. -Т.24. - С.26-27.

95. Куликова JI.H., Зимина Ю.В., Ковтунов А.И., Седова А.Г. Кровососущие комары Астраханской области видовой состав, численность, биология, возможная роль в передаче арбовирусов // Вопр. риккетсиол. и вирусол. - Астрахань-М., 1995. - С. 62-65.

96. Куклев Е.В. Количественная оценка эпидемиологического потенциала природных очагов чумы: Автореф. дис. докт. мед. наук. -Саратов, 1999 г.-219 с.

97. Кутырев И.В., Билько Е.А., Шарова И.Н. и др. Оценка роли фоновых видов мышевидных грызунов в сохранении возбудителей арбовирусных инфекций в полупустынной зоне Саратовского Заволжья // Проблемы ООИ. Саратов 2008 г. № 3. - с. 19-22.

98. Кутырев И.В. Особенности циркуляции возбудителей природно-очаговых инфекционных болезней (на примере арбовирусов) на территории Саратовской области. Автореф. дис.канд.мед.наук. Саратов, 2009. -22с.

99. Кутырев В.В. Актуальные проблемы особо опасных инфекционных болезней и санитарная охрана территории в современных условиях // Журн. микробиол. 2008. - № 1. - С. 17-23.

100. Кучерук В.В. Антропогенная трансформация окружающей среды и грызуны // Бюл. МОИП. 1976. - Вып. 81, № 2. - С. 5-19.

101. Кучерук В.В. Антропогенная трансформация окружающей среды и природно-очаговые болезни // Вест. АМН СССР. 1980. - № 10. - С. 24-32.

102. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство /Под ред. академика РАМН, профессора Г.Г.Онищенко, чл.-корр. РАМН, профессора В.В.Кутырева. М.: ОАО «Издательство «Медицина», издательство «Шико», 2009. - 472 с.

103. Лавровский A.A., Денисов П.С., Добронравов В.П., Попов Н.В. Антропогенный ландшафт и чума// Акт.вопр. зоогеографии. Кишинев: Штиинца, 1975. - С. - 139-140.

104. Лебедев А.Д., Пак Т.П., Бируля Н.Б. и др. Экология вируса крымской геморрагической лихорадки // Деп. в ВИНИТИ. Сер. Мед. география. М., 1977. - Т. 8. - С. 122-168.

105. Лещинская Е.В. Клиника крымской геморрагической лихорадки и сравнение ее с геморрагическими лихорадками других типов. Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва, 1967. - 25 с.

106. Лещинская Е.В., Костюков М.А., Смирнова С.Е. Варианты клинического течения Крымской-Конго геморрагической лихорадки

107. Арбовирусы и арбовирусные инфекции. Международный симпозиум. М, 1989.-С. 30.

108. Лещинская Е.В., Чумаков М.П. Сравнительное изучение Крымской геморрагической лихорадки в разных эпидемиоологических очагах и сходных с ней заболеваний в Средней Азии // Тр. ИПИВЭ АМН СССР. М., 1965.-Вып. 7.-С. 315-323.

109. Лобанов А.Н. Савченко С.Т., Смелянский В.П. и др. Крымская геморрагическая лихорадка в Волгоградской области // Арбовирусы и арбовирусные инф. М., 2007. - С. 132-135.

110. Локтев В.Б. Флавивирусы как новые и вновь возникающие патогены // Матер. IX съезда Всероссийского науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (26-27 апреля 2007, Москва) М., 2007. - Т. 3. - С. 121-122.

111. Луговой А.Е. Птицы дельты Волги // Фауна и экология птиц дельты Волги и побережий Каспия: Тр. Астраханск. заповедника. -Астрахань: Волгарь, 1963. № 8. - С. 9-185.

112. Львов Д.К. Лихорадка Западного Нила // Вопр. вирусол. 2000. -№2.-С. 4-9.

113. Львов Д.К. Новые и вновь возникающие вирусные инфекции // Вопр. вирусол. 2000. - № 4. - С. 4-7.

114. Львов Д.К. Значение вновь возвращающихся инфекций в биобезопасности // Вопр. вирусол. 2002. - № 5. - С. 4-7.

115. Львов Д.К., Бутенко A.M., Вышемирский О.И. и др. Выделение вируса лихорадки Западного Нила от больных людей в период эпидемической вспышки в Волгоградской и Астраханской областях // Вопр. вирусол. 2000. - № 3. - С. 9-12.

116. Львов Д.К., Бутенко A.M., Гайдамович С .Я. и др. Эпидемическая вспышка менингоэнцефалита в Краснодарском крае и Волгоградской области, вызванная вирусом лихорадки Западного Нила // Вопр. вирусол. -2000.-№ 1.-С. 37-38.

117. Львов Д.К., Бутенко A.M., Скворцова Т.М. и др., Заболевания в России, ассоциированные с вирусами серогруппы Калифорнийского энцефалита //Вопр. вирусол. 1998. - № 1. - С. 14-17.

118. Львов Д.К., Дерябин П.Г. Флавивирусы (Flaviviridae) // Медицинская вирусология: Руководство /Под ред. Д.К.Львова. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. - С. 228-235.

119. Львов Д.К., Дерябин П.Г., Аристова В. А. и др. Атлас распространения возбудителей природно-очаговых вирусных инфекций на территории Российской Федерации. М., Изд-во НПЦ ТМГ МЗ РФ, 2001. -192 с.

120. Львов Д.К., Джаркенов А.Ф., Львов Д.Н. и др. Изоляция вируса лихорадки Западного Нила от большого баклана Phalacrocorax carbo, вороны

121. Corvus corone и собранных с нее клещей Hyalomma marginatum в природных и синантропных биоценозах в дельте Волги (Астраханская область, 2001 г.) // Вопр. вирусол. 2002. - № 5. - С. 7-12.

122. Львов Д.К., Ильичев В.Д. Миграции птиц и перенос возбудителей инфекции (эколого-географические связи птиц с возбудителями инфекций). -М.: Наука, 1979.-271 с.

123. Львов Д.К., Клименко С.М., Гайдамович С.Я. Арбовирусы и арбовирусные инфекции. М.: Медицина, 1989. - 336 с.

124. Львов Д.К., Лебедев А.Д. Экология арбовирусов. М., 1974. -184 с.

125. Львов С. Д., Громашевский В. Л., Скворцова Т.М. и др. Циркуляция вирусов комплекса Калифорнийского энцефалита на северо-западе Русской равнины // Мед. паразитол. и паразитар. бол. 1989. - № 2. -С. 74-77.

126. Львов С.Д., Митчелл К.Д., Громашевский В.Л. и др. Природные очаги вирусов серогруппы Калифорнийского энцефалита в различных ландшафтных зонах средней и западной Сибири // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1992. - Т. 27. - С. 30-38.

127. Малеев В.В., Галимзянов Х.М., Бутенко A.M., Черенов И.В. Крымская геморрагическая лихорадка. Москва-Астрахань, 2003. - 120 с.

128. Малецкая О.В., Бейер А.П., Агапитов Д.С. и др. Эпидемическая ситуация по крымской геморрагической лихорадке в Южном Федеральном округе // ЖМЭИ. 2009. - С. 51-54.

129. Малецкая О.В. Харченко Т.В., Брюханов Г.Д. и др. Эпидемическая ситуация и заболеваемость крымской геморрагической лихорадкой в Южном Федеральном округе в 2009 г. // ЗНиСО. М., 2010. -№5.-С. 35-37.

130. Мамонтов И.М. Отношение малого суслика (Citellus pygmaeus) к изменению условий его существования в животноводческих и земледельческих районах // Вопросы экологии. 1975. - Т. 2. - С. 190-220.

131. Маниатис Т., Фрич Э., Самбрук Дж. Молекулярноеклонирование. Перевод с англ. Под ред. Баева A.A., Скрябина К.Г. М: «Мир». - 1986. - 479 с.

132. Материалы к государственному докладу о состоянии окружающей природной среды РФ по Астраханской области за 1999 г. -Астрахань, 2001. 157 с.

133. Медицинская вирусология. Часть вторая / Под ред. Королюка A.M. и Сбойчакова В.Б. -ЭЛБИ-СПб, 2002. 164 с.

134. Медицинская вирусология: Руководство / Под ред. Д.К.Львова. -М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. 656 с.

135. Момыналиев К.Т., Говорун В.М. Перспективы применения методов ДНК диагностики в лабораторной службе. Часть 1 (лекция) //Клин, лаб. диагност. - 2000. - № 4. - С. 25-33.

136. Москвитина Э.А, Водяницкая С.Ю., Пичурина Н.Л. и др. Изучение современного состояния природного очага Крымской геморрагической лихорадки в Ростовской области // Пробл. особо опасных инф. Саратов, 2004. - Вып. 1 (87). - С. 34-37.

137. Москвитина Э.А., Забашта М.В., Ломов Ю.М., и др. Лихорадка I Западного Нила в Ростовской области. Результаты эпидемиологического с надзора // Матер, науч.- практ. конф. «Арбовирусы и арбовирусные инфекции». Астрахань, 2007. - С. 124-127.

138. Наркайтис Л.И. Разработка системы оценки и анализа предвестников осложнения эпидемиологической ситуации при кишечных инфекциях, связанных с водным фактором: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 2008. - 22 с.

139. Новикова В.П. Иксодовые клещи Карачаево-Черкесской республики и их эпидемиологическое значение. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 2007.-20 с.

140. Онищенко Г.Г. Распространение вирусных природно-очаговых инфекций в Российской Федерации и меры по их профилактике // Эпидемиол. и инф. бол. 2000. - № 4. - С. 4-8.

141. Онищенко Г.Г. Борьба с инфекционными болезнями -приоритетная тема председательства Российской Федерации на саммите группы восьми в 2006 г. И Журн. микробиол. 2006. - № 7. - С. 3-7.

142. Онищенко Г.Г., Ефремов В.И., Байер А.П. Крымская геморрагическая лихорадка. Москва, ГОУ ВУНМЦ, 2005. - 269 с.

143. Опарин M.JL, Опарина О.С. Изменение природных комплексов Заволжских степей в связи с динамикой климата и антропогенным преобразованием // Поволжский экологический журнал. 2003. - № 1. - С. 31-40.

144. Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот // Электрофорез и ультрацентрифугирование / Практ. пособие. М., «Наука», 1981.-288 с.

145. Пилипенко В.Г., Щекина Т.А. О влиянии сельскохозяйственной деятельности человека на природный очаг туляремии степного типа // Особо опасные инф. на Кавказе: Тез. Докл. 4-й краевой науч.- практ. конф. -Ставрополь, 1978. С. 67-69.

146. Пискунов В.В. Влияние изменений пограничных зон пойменных ландшафтов на структуру сообществ гнездящихся птиц Волгоградского водохранилища / Проблемы изучения краевых структур биоценозов //Тез. докл. Всерос. семинара. Саратов, 1997. С. 21—22.

147. Пискунов В.В. Антропогенная трансформация сообществ птиц в пойменных экосистемах Волгоградского водохранилища // Экологические проблемы крупных рек Тез. докл. Международной и молодежной конф. -Тольятти, 2003. - С.219-328.

148. Пискунова H.B. Актуальные проблемы и совершенствование мероприятий по санитарной охране территории Астраханской области в современных условиях: Дис.канд. мед. наук. Саратов, 2010. - 130 с.

149. Платонов А.Е., Карань Л.С., Тялина Ю.Ю. и др. ПЦР-диагностика лихорадки Западного Нила // Генодиагностика инфекционных заболеваний: сб. тезисов 4-й Всероссийской научно-практ. конф. (Москва, 22-24 октября 2002 г.). М., 2002. - С. 292-294.

150. Попов Н.В., Рогаткин А.К., Козлова Т. А. Букаева H.H. Цикличность эпизоотии чумы в регионе Северного и Северо-Западного Прикаспия и факторы ее определяющие. Астрахань, 1999. - 112 с.

151. Попов Н.В., Сурвилло A.B., Князева Т.В. и др. Биоценотические последствия антропогенной трансформации ландшафтов Черных земель // Биота и природная сеть Калмыкии. Элиста, 1995. - С. 211-221.

152. Попов Н.В., Яковлев С. А., Санджиев В.Б.-Х. и др. Эпизоотологические последствия орошения энзоотичных по чуме территорий Северо-Западного Прикаспия // Пробл. санитарно-эпидемиол. Охраны территории СНГ. Саратов, 1998. - С. 81-82.

153. Прилипов А.Г., Кинни Р., Самохвалов Е.И. и др. Филогенетический анализ новых вариантов вируса лихорадки Западного Нила // Вопр. вирусол. 2002. - №4. - С. 36^1.

154. Смирнова С.Е. Крымская-Конго геморрагическая лихорадка: этиология, эпидемиология и лабораторная диагностика. Автореф. дис. . докт. мед. наук. М, 2003. - 121 с.

155. Смирнова С.Е. К 60-летию изучения Крымской-Конго геморрагической лихорадки // Эпидемиол. и инф. болезни. 2005. - № 6. - С. 45-51.

156. Смирнова С.Е., Карань JI.C., Платонов А.Е., и др. Циркуляция вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки в районах северной границы ареала этой инфекции на территории республики Казахстан // Эпидемиол. и инф. болезни. 2009. - № 5. - С. 42-47.

157. Смирнова С.Е., Седова А.Г., Зимина Ю.В. Караванов A.C. О случаях Крымской-Конго геморрагической лихорадки в Астраханской области // Вопр. вирусол. 1990. - № 3. - С. 228-231.

158. Смирнова С.Я., Скворцова Т.М., Седова А.Г., и др. О вновь выделенных штаммах вируса Баткен // Вопр. вирусол. 1988. - № 3. - С. 360362.

159. Смирнова С.Е., Шалунова Н.В., Мартьянова Л.И. Клещевой энцефалит, геморрагические лихорадки и комариные арбовирусные инфекции. М., 1968. - С. 96-97.

160. Соколова Э.И., Мирзоева H.H., Кулиева Н.И., Султанова З.И. Участие птиц в циркуляции арбовирусов на территории Азербайджана // Экология вирусов: Сб. науч. тр. М., 1975. - С. 94-97.

161. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Ветеринарная вирусология. Учебник для студентов выс. с/х учебных зав. по спец. «Ветеринария». М. «Колос», 1984. - 375 с.

162. Терехин С.А. Гребенникова Т.В. Хуторецкая Н.В., Бутенко A.M. Филогенетический анализ штаммов вируса Батаи, выделенных из комаров в

163. Путинцева Е.В., Смелянский В.П., Антонов В.А. и др. Прогноз эпидемиологической ситуации по лихорадке Западного Нила на территории Российской Федерации на 2010 год // Пробл. особо опасных инф. Саратов, 2010.-№2.-С. 14-18.

164. Рогаткин А.К. Экологические аспекты обеспечения эпидемического благополучия по особо опасным и природноочаговыминфекциям на территории Астраханской области. Диссерт.канд. мед.наук. Волгоград, 1995. - 80 с.

165. Рубахова Ю.В. Распространение арбовирусов в субтропической зоне Краснодарского края и их роль в патологии человека. Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1994. - 22 с.

166. Рубахова Ю.П. Распространение арбовирусов в субтропической зоне Краснодарского края и их роль в патологии человека. Автореф. дис. . канд. мед. наук. Москва, 1994. - 22 с.

167. Русев И.Т. Иксодовые клещи северо-западного Причерноморья и их роль в циркуляции природно-очаговых арбовирусных инфекций // Вестник «СумДУ», сер. «Медицина». 2008. - №. 2, т. 1. - С. 82-100.

168. Сангаджиева Г.В. Сочетанные природные очаги чумы, туляремии и Крымской геморрагической лихорадки на территории Республики Калмыкия: Дис. канд. биол. наук. Саратов, 2009. - 152 с.

169. Сангаджиева Г.В., Санджиев В.Б.-Х., Подсвиров A.B. и др. Анализ эпизоотической и эпидемиологической ситуации по крымской геморрагической лихорадке в республике Калмыкия в 200-2007 годах // ЗНиСО.-М., 2009.-№ 1.-С. 12-16.

170. Санникова И.В., Ефременко В.И., Попов П.Н., Бейер А.П., Ковалевич Н.И., Еременко Е.И., Василенко Н.Ф., Солодовников Б.В.,

171. Колобухина JI.В. Диагностическая ценность лабораторных методов диагностики Крымской геморрагической лихорадки в клинической практике // ЖМЭИ. 2005. - № 4 (приложение). - С.27-32.

172. Саратовская область. Административно-территориальное деление. Саратов: из-во Саратовского СГУ. - 1985. - 205 с.

173. Свешникова М.О., Селецкая В.Л., Вершинский Б.В. и др. Арбовирусы и арбовирусные инфекции на северо-западе России // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1991. - Т. 24. - С. 34-36.

174. Серегин C.B., Туманова И.Ю., Петрова И.Д. и др. Особенности S-сегмента генома вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки, циркулирующего в России и Болгарии // Вопр. вирусол. 2007. - № 3. - С. 25-32.

175. Семашко И.В., Матевосян К.Ш., Пиванова Г.П., Чумаков М.П. Изоляция вируса Бханджа (Bhanya) из клещей Dermacentir marginatus, собранных с овец в районе озера Севан, Армения // Тр. ИПВЭ АМН СССР, 1973. Т. 21. - № 2. - С. 160-164.

176. Скоферца П.Г., Степанова O.A. Арбо- и аренавирусы в Молдавской ССР // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1991.-Т. 24.-С. 32-33.

177. Скоферца П.Г., Степанова O.A. Арбовирусные инфекции и лимфоцетарный хориоменингит в Молдове // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1992. - Т. 27. - С. 97-101.

178. Скоферца П.Г., Яровой П.И., Прока Л.М., Степанова O.A. Некоторые результаты исследования на арбовирусы в Молдавии // Арбовирусы: Тез. докл. пленума Всесоюз. пробл. комиссии. Таллин, 1984. -С. 24-25.

179. Славский A.A., Щелканов М.Ю., Петренко М.С. и др. Применение Марковских цепей для описания миграционных путей птиц с целью прогнозирования заносов вирусных инфекций // Орнитологические

180. Волгоградской области, Западной Украине и Чешской республике // Молекул, генетика, микробиол. и вирусол. 2010. -№ 1. - С. 27-29.

181. Тинкер Ю.А., Пиликова О.М., Адимов B.JI. и др. Результаты обследования территории северо-западного Кавказа на арбовирусные инфекции // Итоги науки и техн. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. 1991. - Т.24. -С.27-28.

182. Топорков В.П. Теоретические и практические аспекты информативности методов диагностики чумы при эпидемиологическом надзоре в природных очагах: Автореф. дис. докт. мед. наук. Саратов, 1997.-272 с.

183. Трансмиссивные инфекционные заболевания в Европе их распространение и влияние на общественное здравоохранение Всемирная организация здравоохранения // Сообщение ВОЗ, 2005 г. 158 с.

184. Туманова И.Ю., Серегин C.B., Вышемирский О.И. и др. Генетический мониторинг вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки в Казахстане и Таджикистане в период 2001-2003 гг. // Молекул, генетика, микробиол. и вирусология. 2006. - № 2. - С. 36-41.

185. Турцева М.А. Спонтанные микробиоценозы некоторых видов иксодовых клещей (Ixodidae) и слепней (Tabanidae). Автореф. . канд. Биол. наук. Саратов, 2005. - 20 с.

186. Чиров П.А., Турцева М.А. Иксодовые клещи (Ixodidae) Саратовской области // «Зоологические исследования регионов России и сопредельных территорий» Матер, междунар. науч. конф. Н.-Новгород, 2002. - С. 61-62.

187. Чумаков М.П. Новая вирусная клещевая болезнь геморрагическая лихорадка в Крыму // Крымская геморрагическая лихорадка. - Симферополь, 1945.-С. 13-43.

188. Чумаков М.П. Крымская геморрагическая лихорадка // Вирусные геморрагические лихорадки. Научный обзор. Сер. «Эпидемиология». М., 1979. -№3.- С. 10-33.

189. Чумаков М.П., Андреев С.К., Заводова Т.М. Вопросы экологии КГЛ в природных очагах этой инфекции в Крыму // Тр. ИПВЭ АМН СССР. -1974.-Т. 22, вып. 2.-С. 19.

190. А.Н.Северцова РАН / Под ред. Академика Д.С.Павлова. Саратов: Изд-во СГУ, 2005.-264 с.

191. Урбах В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков. -М., 1963.- 323 с.

192. Федоров H.A., Суханов Ю.С., Асади Мобархан А.Х., Артемьев М.И. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) М.:, 1996.

193. Феоктистов А.З., Никулина H.A., Перевозчиков В.А. Роль перелетных птиц Байкала в распространении арбовирусов // Рекреации и охраняемые территории Матер. 5-го совещ. по прикладной географии. -Иркутск, 1988.-С. 92-95.

194. Феоктистов А.З., Чапоргина Е.А., Перевозчиков В.П. и др. Материалы изучения арбовирусов в Восточной Сибири // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1991. - Т.24. - С. 12-14.

195. Харченко Т.В. Современные эпидемиологические особенности Крымской геморрагической лихорадки в Российской Федерации. Автореф. дис. . канд. мед. наук. Ставрополь, 2011. - 18 с.

196. Хубалек 3. Экология арбовирусов в Чехословакии // Арбовирусы и арбовирусные инфекции Тез. докл. Междунар. симпоз. - М., 1989. - С.11-12.

197. Черкасский Б.Л. Эпидемиологический надзор// Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней Том 1., М.: «Медицина», 1993. -98 с.

198. Черкасский Б.Л. Эпидемиологический диагноз. Л. Медицина, 1990.-208 с.

199. Черкасский Б.Л. Справочник по ообо опасным инфекциям. М.: «Медицина», 1996. - 160 с.

200. Чумаков М.П., Беляева Н.К., Бутенко A.M., Мартьянова Л.И. Вирус Западного Нила в СССР // Эпидемиология вирусных инфекций. М., 1968. -Т. 12.-С. 373-376.

201. Чумаков М.П., Беляева А.П., Лещинская Е.В. Вирусная этиология заболеваний типа Крымской геморрагической лихорадки в Астраханской области // Тр. ИПИВЭ АМН СССР М., 1965. - Вып. 7. - С. 197-201.

202. Чумаков М.П., Заводова Т.М., Марьянова Л.И. Обнаружение вируса КГЛ у некоторых видов кровососущих клещей, собранных в 1973 г. на территории Киргизской и Узбекской ССР // Тр. ИПВЭ АМН СССР. -1974.-Т. 22, вып. 2.-С. 35.

203. Чумаков М.П., Рубин С.Г. Выявление природных очагов КГЛ в территории Азербайджанской ССР по данным серологического обследования животных // Вопр. эпидемиол. и профилакт. клещ, энцефалита. М., 1970. -С. 120-132.

204. Чунихин С.П., Леонова Г.Н. Экология и географическое распространение арбовирусов. М., 1985. -125 с.

205. Шахназарян С.А., Оганесян A.C., Манукян Д.В. и др. Выделение арбовирусов в Армянской ССР // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1991. - Т. 24. - С. 22.

206. Шахназарян С.А., Оганесян A.C., Манукян Д.В. и др. Выделение арбовирусов на территории республики Армения // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Вирусол. М., 1992. - Т. 27. - С. 57-60.

207. Шишкина Е.О. Серологическая диагностика лихорадки Западного Нила: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2003. - 20 с.

208. Шляхтин Г.В., Аникин В.В., Завьялов Е.В. Волга как единый интразональный природный комплекс // Экологические проблемы крупных рек Тез.: докл. Межд. молодежной конф. - Тольятти, 2003. - С. 328-329.

209. Шопенская Т.А. Федорова М.Е., Карань Л.С. и др. Новый вариант вируса Западного Нила и его потенциальное эпизоотическое иэпидемиологическое значение // Эпидемиол. и инф. болезни. 2008. - № 5. -С. 38-44.

210. Щелканов М.Ю., Ананьев В.Ю., Львов Д.Н. и др. Комплексный эколого-вирусологический мониторинг на территории Приморского края в 2003-2006 гг. // Вопр. вирусол. 2007. - № 5. - С. 37-47.

211. Щелканов М.Ю., Колобухина Л.В., Москвина Т.М. и др. Выявление циркуляции вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки в предгорных степях Северного Кавказа // Вопр. вирусол. 2005. - № 5. - С. 9-15.

212. Щербакова С.А. Распространение и экология вирусов Батаи, Тягиня и Инко (сумейство Bunyaviridae) в Нижнем Поволжье. Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 1997. - 26 с.

213. Anderson C.R. Resent advances in arthropod-borne virus research in India // Bull. Inst. Sci. India. 1963. - Vol. 24. - P.205-216.

214. Anderson C.R. et al. Oropouche virus: a new human disease agent from Trinidad // Amer. J. Trop. Med. And Hyg. 1961. - № 4. - P. 574-578.

215. Bakonyi Т., Hubalek Z., Rudolf I., Nowotny N. Novel Flavivirus or New Lineage of West Nile Virus, Central Europe // Emerg. Infect. Dis. 2005. -Vol. 11,No. 2.-P. 225-231.

216. Bardos V., Cupkova E. The Calovo virus -the second virus isolated from mosquitoes in Czechoslovakia. // J. Hyg. Epidemiol. Microbiol. Immunol. -1963. Vol. 6, N 3. - C. 255-260.

217. Bardos V., Danielova V. The Tahyna virus- a virus isolated from mosquitoes in Czechoslovakia // Hyg., Epid., Microb. Immunol., 1959. № 2. - P. 264-276.

218. Barr J.N., Elliott R.M., Dunn E.F., Wertz G.W. Segment- specific terminal sequences of Bunyamwera bunyavirus regulate genome replication. // Virology, 2003. Vol. 311. - p. 326-328.

219. Boom R, Sol C, Wertheim-van Dillen P. Rapid purification of ribosomal RNAs from neutral agarose gels //Nucleic Acids Res. 1990. - 18(8). -P. 2195.

220. Brummer-Korvenkontio M. Arboviruses of the California complex and the Bunyamwera group in Finland // Arboviruses of the California complex and the Bunyamwera group. Bratislava, 1969. - P. 131-133.

221. Brummer-Korvenkontio M. Bunyamvera arbovirus supergroup in Finland. A study of Inkoo and Batai viruses // Comment. Biolog. 1974. - V. 76. -P. 1-52.

222. Butenko A.M., Vladimirtseva E.A., Lvov S.D. California serogroup viruses from mosquitoes collected in the USSR //Am. J. Trop. Med. Hyg. 1991. -Vol. 45 (3), N 7 - P.366-370.

223. Butenko A., Lvov D., Kolobukhina L. Arboviruses of the Genus Bunyavirus (Family Bunyaviridae) and caused illnesses in the Former USSR // Sov. Med. Rev. E: Virology Reviews. 1993. - Vol. 5. - P. 77-135.

224. Burgdorfer W. et al. Isolation of California encephalitis virus from the blood of a snowshoe hare (Lepus americanus) in Western Montana // Amer. J. Hyg . 1961. - N 3. -P 344-349.

225. Calisher C.H. Taxonomy, classification and geographic distribution of California serogroup Bunyaviruses. In.: California serogroup viruses. New York: Publ. A.R. Liss Inc., 1993. - P. 1-16.

226. Crichlow R, Bailey J, Gardner C. Cerebrospinal fluid neutrophilic pleocytosis in hospitalized West Nile virus patients // American Board of Family Practice. 2004. - 17 (6). - P. 470-472.

227. Danielova V., Minar J., Rosicky B. Experimental survival of the virus Tahyna in 1968 //Am. J. Trop. Med. Hyg. -1969. Vol. 33, № 6. - P.1203-1215.

228. Epsmark A., Niklasson B. Ockelbo-disease in Sweden: epidemiol., clinical, and virodical data from the 1982 outbreak //Am. J. Trop. Med. Hyg. -1984. Vol. 33, N 6. - P.1203-1215.

229. Frese M. Weeber V., Weeber F. et al. MX1 sencitivity of Batken viruses an Orthomyxovirus // J. Gen. Virol. - 1997. - Vol. 78. - P. 205-216.

230. Gaidamovich S.Ya., Obukova V.R. Olyka an arbovirus of the Bunyamvera group in the USSR // Acta, virol. - 1973. - Vol. 17. - P. 444.

231. Goody RJ, Schittone SA, Tyler KL. Experimental reovirus-induced acute flaccid paralysis and spinal motor neuron cell death // Journal of neuropathology and experimental neurology. 2008. Mar; 67(3). - P. 231-239.

232. Gonzales J.P., Camicas J.L., Cotnet J.P. // Res.Virol. 1992. - Vol.143, N 1. -P.23-28.

233. Gordon S.W., Linthicum K.J., Moulton J.R.Transmission of Crimean

234. Congo hemorrhagic fever virus in two species of Hyalomma ticks from infected adults to cofeeding immature forms // J. Trop.Med.Hyg. 1993. - Apr; 48 (4). - P. 576-80.

235. Hayes E.B., Komar N., Nasci R.S et al. Epidemiology and transmission dynamics of West Nile virus disease // Emerg. Infect. Dis. 2005. -Vol.11,N. 8.-P. 1167-1173.

236. Hoogstraal H. The epidemiology of tick-born Crimean-Congo hemorrhagic fever in Asia, Europe and Africa. Review article // J.Med.entomology. 1979. - Vol. 15, N 4. -P. 307-417.

237. Hubalek Z., Halouzka J. West Nile fever a reemerging mosquito-borne viral disease in Europe // Emerg. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 5, No. 5. - P. 643-650.272. http://www.cdc.gov.273. http://www.cdc.gov, 2004.

238. Jacobcon E.R., Ginn P.E., Troutman J.M. et al. // J. Yildlie Dis. -2005. Vol.41,N l.-P. 96-106.

239. Karabatsos N. International Catalogue of Arboviruses including certain other viruses of vertebrates. Amer. Soc. Trop. Med. Hyg., 1985. - 1146 p.

240. Kolman J.M. et al. Isolation of a presumably new virus from unengorged Ixodes ricinus ticks // Acta virol. 1966. - N 2. - P. 171-172.

241. Kuno Goro, Gwong-Jen J. Chang, K. Richard Tsuchiya et al. Phylogeny of the Genus Flavivirus // J. of Virology. 1998 . - Vol. 72, No. l.-P. 73-83

242. Lanciotti R.S., Roehrig J.T., Deubel V. et al. Origin of the West Nile virus responsible for an outbreak of encephalitis in the northern United States // Science. 1999. - Vol. 286. - P. 2333-2337.

243. Lim J.K., Lisco A., McDermott D.H. Genetic variation in OAS 1 is a risk factor for initial infection with West Nile virus in man // PLoS Pathog. 2009. -Vol. 5,N. 2.-P. 1-12.

244. Lvov D., Avershin A., Andreev V. et al. Surveillance for arboviruses in the Soviet Union: relationships between ecologic zones and virus distribution // Arch. Virol. 1990- Suppl.l. -. -P.259-266.

245. Lvov D.K. Karas F.R., Tsyrkin G.V. et al. Batken virus, a new arbovirus isolated from ticks and mosquitoes in Kirghis SSR // Arch. Ges. Virusforschung. 1974. - Bd. 44 - S. 70-73.

246. Mackenstein H., Pilaski J. Isolation of Tahyna-virus (Bunyaviridae) from mosquitoes collected in two different European natural foci // Zbl. Bakteriol. Mikrobiol. und Hyg. 1984. - Vol. 257, N 1. - P. 152.

247. Mälkovä D. Study of arboviruses in the region of Most from 1981 to 1982. Isolation of Tahyna viruses // Chesk Epidemiol Mikrobiol Imunol. 1984. -P. 33-88.

248. M.H.V. van Regenmortel, C.M. Fauquet, D.H.L. Bishop et al. Virus Taxonomy: The Classification and Nomenclature of Viruses // The Seventh Report of the International Committe on Taxonomy of Viruses. 2000. - Academic Press, SanDiego. - 1167 p.

249. Nashed N.W., Olson J.G., Ah. El-Tigani. Isolation of Batai virus (Bunyaviridae: Bunyavirus) from the blood of suspected malaria patients in Sudan // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1993. - Vol. 48, N 5. - P. 676-681.

250. Niklasson B., Esmark A., Lundstrom J. Occurrence of artralgia and specific JgM antibodies three to four yers afte Ocelbo disease // J.Infect. Dis. -1988.-Vol. 157, N4.-P. 832-835.

251. Olson K., Trent D.W. Genetic and antigenic variations among geographical isolation of Sindbis virus // J. G. Virol. 1985. - Vol. 66. - P.797-810.

252. Ozkurt Z., Kiki I., Erol S. et al. Crimean-Congo hemorrhagic fever in Eastern Turkey: clinical features, risk factors and efficacy of ribavirin therapy // J. Infect. 2006. - Vol. 52, N 3. - P. 207-215. ^

253. Peleg J. Infection of mosquito larvae by arboviruses // Amer. J. Trop. Med. Hyg. 1965, Vol. 14, N 1. -p. 158-165.

254. Petersen, L.R. and A.A. Marfin. West Nile virus: a primer for the clinician. Ann. Inter. Med. 2002. - Vol -137: 173-179.

255. Pilaski J., Mackenstein H. Nachweisdes Tahyna-virus bei Stechmücken in zwei verseheidenen-europaisehen Naturherden. // Zbl. Bakteriol. -1985. Abt IB. - Vol. 180, N 4. - P. 394-420.

256. Senne DA, Pedersen JC, Hutto DL. et al. Pathogenicity of West Nile virus in chickens // Avian Dis. 2000. - 44(3). - P.642-649.

257. Shah K.V., Johnson H.N., Rao T. Isolation of five strains of Sindbis virus in India. // Ind. Med. Res. 1960. - Vol. 48, N 3. - P. 300-308.

258. Siddharthan V, Wang H, Motter NE, Hall JO et al. Persistent West Nile virus associated with a neurological sequela in hamsters identified by motor unit number estimation // J Virol. 2009. - May, 83(9). - P.4251-4261.

259. Smithburn K.S., Hughes T.P., Burke A.W., Paul J.H. A neurotropic virus isolated from the blood of a native of Uganda // Amer. J. Trop. Med. 1940. -Vol. 20,N. 4.-P. 471-493.

260. Stefan A., Banet-Noach C., Tal S. et al. // Emerg. Infect. Dis. 2003. -Vol. 9, N 7. - P 887-889.

261. Swayne DE, Beck JR, Smith CS, Shieh WJ, Zaki SR. Fatal encephalitis and myocarditis in young domestic geese (Anser anser domesticus) caused by West Nile virus // Emerg. Infect Dis. 2001. - 7(4):751-3.

262. Taylor R.M., Hurlbut H.S., Work T.H. et al. Sindbis virus: a newly recognized arhropodtransmitted virus // Amer. J. Trop. Med. Hyg. 1955. - Vol. 4,N5.-P. 844-862.

263. Yasuo M., Yuji I., Shigeyoshi H. A survey of antibodies to arthropod-borne viruses in Japanese cattle // Inst. Anim. Health. Quart. 1980. - V.5, N 4. -P. 277-282.

264. Unguraunu A., Popovici V., Nicolescu G. et al. Date preliminare privind raspindirea actuala a'unor arbovirusuri peteritoriul farii noastre //Bacterid., virusol., parazitol., epidemiol. 1988. - V. 33, N 4. - P.341-346.

265. WHO. Scientific Group, Technical Report Series. 1967. -N 369.

266. Woodall J.P., Williams M.C., Simpson D.L. Congo virus: a hither undescribed virus occurring in Africa. II. Identification studies // East. Afr. Med. -1967.-N44.-P. 93-98.

Автореферат диссертации по медицине на тему Совершенствование эпидемиологического надзора и лабораторной диагностики арбовирусных инфекционных болезней

Оглавление диссертации Щербакова, Светлана Анатольевна :: 2012 :: Саратов

Введение диссертации по теме "Эпидемиология", Щербакова, Светлана Анатольевна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Щербакова, Светлана Анатольевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций