Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Состояние иммунной системы, интерфероногенез и продукция цитокинов у часто болеющих детей и детей с бронхиальной астмой в разные периоды заболевания

Рамазанова Зарема Керимовна

СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ, ИНТЕРФЕРОНОГЕНЕЗ И ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИИОВ У ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ И ДЕТЕЙ С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ В РАЗНЫЕ ПЕРИОДЫ

ЗАБОЛЕВАНИЯ.

14.00.36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2007

003068544

Работа выполнена в ФГУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотреб-надзора.

Научный руководитель: доктор медицинских наук

Бляхер Мария Сергеевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Куралесова Альбина Ивановна

доктор медицинских наук Пухальский Александр Леонидович

Ведущая организация: ГУ «Научно-исследовательский институт

эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН

Защита состоится « » Л¿¿2 Л 2007г. в /с ^часов на заседании диссертационного совета К 208.046.01 при ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора (125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, г. Москва

Автореферат разослан «./о._» ¿¿п^Ы^2007г.

Ученый секретарь /

диссертационного совета, / г. //

кандидат медицинских наук — Л.И.Новикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Бронхиальная астма - одно из серьезнейших заболеваний, которое, начинаясь у детей, продолжается в зрелом возрасте и часто приводит к инвалидности и преждевременной смерти [Балаболкин И.И., 2005; Пыцкий В.И., 2000].

Согласно современным представлениям, морфологической основой бронхиальной астмы является хроническое воспаление бронхиальной стенки с повышением количества активных эозинофилов, тучных клеток, Т-лимфоцитов в слизистой оболочке бронхов; это воспаление впоследствии приводит к гиперреактивности бронхов и к бронхообструктивному синдрому. Изучение патогенеза бронхиальной астмы дало возможность установить ряд факторов риска её возникновения у детей, из которых наиболее важными являются следующие: наследственная предрасположенность к атопии, воздействие неблагоприятных условий среды на организм матери в периоде беременности, нерациональное питание беременной и ребенка, респираторные инфекции у детей [Балаболкин И.И., 2003; Кирдей Е.Г., 2003; Шелудько Я.С., 2003].

Современная теория бронхиальной астмы исходит из того, что среди С04+-лимфоцитов активность Т-хелперов 2 типа (Тх2) преобладает над функциональной активностью Т-хелперов 1 типа (Txl) [Зайцева О.В., 2001; Мамонтова Т.В., 2005; Retizi Р.М.1999]. Нарушения нормального баланса между Т-хелперами 1 и 2 типа регистрируют по продуктам секреции этих клеток [Балоболкин И.И.,2003; Филянская Е.Г.2003; Simon H.U., 2003]. Txl продуцируют ИЛ-2, ИФНу, ФНОа (провоспалительные цитокины), тогда как Тх2 - ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-10, ИЛ-13 (противовоспалительные цитокины) [Ройт А, 2000; Хаитов М.Р.,2004].

Дети, страдающие бронхиальной астмой, нередко относятся к группе детей часто и длительно болеющих респираторными инфекциями, которые часто сопровождаются появлением у них внутриклеточных патогенов — ми-

коплазм и хламидий (Кузьменко Л.Г., 1999; Меркулова В.Ю.,2005). Проводимые исследования иммунной системы у часто болеющих детей (ЧБД) и сравнение этих данных с данными детей, страдающих бронхиальной астмой, возможно, выявят определенные закономерности и покажут причины перехода ребенка из статуса че.сто болеющего в статус больного бронхиальной астмой.

В связи с вышесказанным представляется актуальным изучение состояния иммунной системы, продукции цитокинов, инфицированности внутриклеточными патогенами у детей с бронхиальной астмой и сравнение этих показателей с аналогичными показателями часто болеющих детей.

Цель настоящего исследования

Целью настоящей работы было сравнение иммунного статуса, интер-фероногенеза и продукции цитокинов у детей с бронхиальной астмой в различные периоды заболевания и у часто болеющих детей.

Задачи исследовании

1. Исследование изменений в состоянии иммунной системы, интерфе-роногенеза и продукции цитокинов у детей с бронхиальной астмой в разные периоды заболевания.

2. Сравнение состояния показателей иммунной системы и интерферо-ногенеза у часто болеющих детей и детей с бронхиальной астмой в разные периоды заболевания.

3. Сравнение содержания в сыворотке крови и индуцированной продукции ИФНу и ИЛ-4 у детей с бронхиальной астмой и часто болеющих детей.

4. Исследование влияния инфицированное™ внутриклеточными микроорганизмами на состояние иммунной системы, интерфероногенез и продукцию цитокинов у детей с бронхиальной астмой и часто болеющих детей.

5. Изучение влияния иммуномодулятора Виферона на имлгунный и ин-терфероновый статус детей, страдающих бронхиальной астмой.

Научная новизна

В работе впервые комплексно проанализировано в динамике по многим иммунологическим параметрам (иммунный статус, интерфероновый статус, продукция цитокинов, фагоцитарная активность нейтрофилов) состояние детей, страдающих бронхиальной астмой, в разные периоды заболевания и детей, часто и длительно болеющих респираторными инфекциями.

Выявлено, что у детей в приступном периоде бронхиальной астмы (БА) наблюдается дефицит клеточного иммунитета и нарушение интерфероноге-неза. В послеприступном периоде эти показатели приходят к норме примерно через три месяца.

Впервые показано, что у ЧБД имеются более выраженные нарушения в клеточном звене иммунитета, чем у детей с приступом бронхиальной астмы. Так, у ЧБД отмечалось статистически достоверное снижение процента и абсолютного количества CD3+, CD4+, С019+клеток по сравнению с нормой и показателями детей с БА.

Было выявлено, что при бронхиальной астме дети, серопозитивные по Chlamydia pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae (C.pneum. и M.pneum.), встречаются в 2 раза чаще, чем в группе часто болеющих детей.

Предложена оригинальная совокупная оценка продукции цитокинов ИЛ-4 и ИФНу для каждого индивидуума, которая дала возможность выявить, что у часто болеющих детей, не страдающих БА, высокая продукция ИЛ-4 сопровождается высокой продукцией ИФНу, а у детей в приступном периоде БА при высокой продукции ИЛ-4 продукция ИФНу снижена.

У детей, находящихся в приступном периоде БА, дисбаланс соотношения Тх1 и Тх2 более выражен, чем у часто болеющих детей, страдающих бронхиальной астмой и находящихся в периоде ремиссии, т.е. в межприступ-ном периоде.

Новыми являются данные о том, что иммуномодулятор Виферон способствует увеличению сниженной численности субпопуляций лимфоцитов и нормализации интерферонового статуса у детей в присгупном периоде БА.

Практическая значимость работы связана с обоснованием необходимости нормализации показателей иммунного статуса, интерфероногенеза и продукции цитокинов у часто болеющих детей, что, вероятно, позволит снизить риск возникновения у них бронхиальной астмы. Внедрение результатов работы

Материалы диссертации включены в курс практических занятий кафедры иммунологии РГ'МУ и вошли в медицинскую технологию «Использование иммуномодуляторов для коррекции показателей тшушгой и цитоки-новой систем при оздоровлении детей, часто болеющих острыми респираторными и вирусными заболеваниями верхних дыхательных путей».

Положения, выносимые на защиту

1. Изменения в состоянии иммунной системы дегей с бронхиальной астмой и часто болеющих детей имеют одну направленность, но разную выраженность — численность субпопуляций лимфоцитов изменена более значительно у ЧБД, продукция интерферонов снижена у обеих групп детей, но у ЧБД в большей степени подавлена продукция ИФНа.

2. Инфицированность внутриклеточными патогенами детей с бронхиальной астмой и ЧБД мало влияет на численность субпопуляций лимфоцитов, но приводит к подавлению продукции ИФНа. Активность Тх1 и Тх2 у часто болеющих детей и больных с приступом БА различна.

3. У часто болеющих детей, не страдавших бронхиальной астмой, высокая продукция ИЛ-4 в культуре клеток крови сопровождается высокой продукцией ИФНу, а у детей в присгупном периоде бронхиальной астмы при высокой продукции ИЛ-4 продукция ИФНу снижена.

Апробация материалов диссертации

Результаты работы доложены и обсуждены на международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы » (Москва, июнь 2004г.), на Всероссийском научном симпозиуме «Цитокины. Стволовая клетка. Иммунитет» (Новосибирск, июль 2005г.), на конгрессе «Дни Иммунологии в Санкт-Петербурге 2006».

Апробация диссертационной работы проведена на заседании Секции Ученого Совета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского "Общая и прикладная иммунология " 10 апреля 2006 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Объем н структура диссертации

Диссертация изложена на 136 страницах и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы «Результаты собственных исследований», обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 10 рисунками и 17 таблицами. В список литературы вошли 157 работ отечественных и зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Исследование было проведено в лаборатории по изучению клеточных и молекулярных основ иммунитета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского в сотрудничестве с врачами кафедры детских болезней РУДН (зав. кафедрой-профессор Л.Г. Кузьменко).

Материалы исслед ования

Основными объектами исследования служили взятые у детей лимфоциты периферической крови, сыворотка крови, супернатанты стимулированных культур лейкоцитов периферической крови.

В ходе работы было обследовано 165 детей в возрасте от 3 до 7 лет.

Первая группа состояла из 59 детей, госпитализированных в стационар с диагнозом «бронхиальная астма средней тяжести, приступный период».

Вторую группу составили часто болеющие дети (106 человек), поступившие в санаторий «Кратово» для прохождения курса реабилитационно-оздоровительных мероприятий. У 21 ребенка имелась бронхиальная астма в фазе ремиссии, 85 детей не имели этого заболевания.

Контрольную группу (норма) составили 47 здоровых детей в возрасте 3 — 7 лет, ранее обследованных теми же методами в лаборатории по изучению клеточных и молекулярных основ иммунитета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского.

Наблюдения поводились в динамике - при поступлении в стационар (санаторий) и через 20 дней. 15 детей с БА были обследованы через 3 месяца после госпитализации.

В качестве иммуномодулятора был использован препарат Виферон в ректальных суппозиториях (рег.№000017/01-2000). Виферон состоит из ре-комбинантного ИФНа2р в комплексе с антиоксидантами: а-токоферола ацетат (витамин Е ) и аскорбиновой кислоты (витамин С) в терапевтических дозах.

Виферон включался в комплексное лечение детей с бронхиальной астмой в приступном периоде. Дети получали Виферон в течение 10 дней, один раз в сутки.

Методы исследования

Иммунофенотипированпе CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD16+ -лимфоцитов осуществляли иммунофлюоресцентным методом с использованием моноклональных антител фирмы «Сорбент» (Россия). Определение ннтерферонового статуса человека проводили микрометодом в цельной гепаринизированной крови по методике С.С. Григорян (Ершов Ф.И.Д996). Определяли уровень интерферона в сыворотке крови, способность лейкоцитов периферической крови к спонтанной продукции интерфе-ронов и под действием индукторов ИФНа (вирус болезни Ньюкасла, штамм Канзас, любезно предоставленный сотрудниками ГУ «Научно- исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи» РАМН, Москва) и ИФНу (фитогемагглютинин Р, «DIFCO», США).

Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по их способности к поглощению и перевариванию Staphylococcus aureus по методу А.Н. Маянского с небольшими модификациями (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989).

Определение концентрации IgA, IgM и IgG в сыворотке крови было выполнено методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини (Чернохвостова Е.В., Герман Г.П., 1984; Manchini G.eta]., 1964).

Серологическую диагностику микоплачменнои и хламидииной инфекции проводили иммуноферменгным методом с использованием тест-систем фирмы "Savyon" (Израиль).

Определение цитокинов ФНОа, ИЛ-4 и ИФНу в сыворотках и су-пернатантах культуры клеток цельной крови проводилось иммунофер-ментным методом с помощью коммерческих наборов фирмы "Вектор-Бест" (Россия).

Статистическая обработка результатов была выполнена с помощью пакета программ Microsoft Excel. Статистически достоверное различие определялось с использованием t-критерия Стьюдента и критерия Манна-Уитни.

Результаты исследования и их обсуждение

Было проведено исследование состояния иммунного, интерферонового и цитокинового статуса часто болеющих детей и детей с бронхиальной астмой в разные периоды заболевания.

При сравнении показателей иммунного статуса детей, больных БА, в приступном периоде, в послеприступном периоде (через 3 недели после госпитализации) и в ремиссии были получены следующие результаты. При приступе бронхиальной астмы наблюдалось снижение процента и абсолютной численности лимфоцитов, Т-хелперов (CD4+л и м ф оцитов), а также снижение абсолютной численности Т-клеток (СОЗ+лимфоцитов) по сравнению с возрастной нормой.

Спустя три недели после приступа бронхиальной астмы эти показатели оставались также сниженными. Через три месяца после приступа у этих же детей отмечалась некоторая положительная динамика: содержание CD3+-клеток нормализовалось. Сохранялось низкое содержание Т-хелперов, что вообще свойственно больным БА. Содержание В-клеток по сравнению с приступным периодом уменьшилось и стало значимо ниже возрастной нормы.

У 75 процентов детей в приступном периоде БА было сниженное количество В-клеток. У этих детей было также снижено содержание в сыворотке крови IgG (9,9±0,6мг/мл) по сравнению с возрастной нормой (12,3±1,8 мг/мл).

Фагоцитарная активность нейтрофилов в разные периоды заболевания БА значимо не менялась и не отличалась от возрастной нормы.

Так как присту п бронхиальной астмы у находившихся под наблюдением детей провоцировался ОРЗ, состояние их иммунной системы было целесообразно сравнить с состоянием часто болеющих детей, не страдающих астмой, но перенесших очередное ОРЗ

Рис. 1. Численность некоторых субпопуляций лимфоцитов у часто болеющих детей и у детей, находящихся в приступном периоде БА.

По оси ординат - количество лимфоцитов в 1 мкл крови

*-значимо отличается от нормы (р<0.05).

**-значимо отличается от приступного периода БА (р<0305)

Показано, что у ЧБД снижение процента и абсолютного количества С 03+, С 04+, С131Ч+л и м фо ци го в было выражено сильнее, чем у детей с БА в приступном периоде, т.е. иммунодефицитное состояние у ЧБД более выражено, чем у детей с Б А.

Анализ результатов исследования янтерферо но во го статуса детей показал, что в приступном периоде БА подавляющее большинство детей имели сниженную способность клеток цельной крови к продукции как ИФНа, так и

ИФНу. Способность к спонтанной продукции интерферона и содержание его в сыворотке крови были в пределах нормы (табл. 1).

Через три недели после приступа БА продукция ИФНа приходила к норме, а способность к продукции ИФНу оставалась сниженной. Однако уже через 3 месяца у этих же детей показатели интерферонового статуса значительно улучшались и достигали пределов возрастной нормы.

Табл. 1. Индуцированная продукция шггерферонов у детей с бронхиальной астмой в разные периоды заболевания (ед/мл, среднее и 95%-ный доверительный интервал).

Бронхиальная астма

ИФН Приступный Послеприступный период Норма

период Знед. Змее.

ИФНа 130* 165 202 188

(102- 162) (123-214) (152-265) (146-241)

ИФНу 17* 16* 27 30

(13-21) (12-23) (17-41) (20-45)

Количество п=56 п=35 п=15 п=13

больных

*- значимо отличается от нормы (р<0,05).

Поскольку большая часть детей поступила в стационар с диагнозом «бронхиальная астма, приступный период, спровоцированный ОРЗ», мы сочли целесообразным проследить влияние ОРЗ на продукцию интерферонов у детей с БА и ЧБД (табл.2).

Дети, госпитализированные в стационар в приступном периоде бронхиальной астмы, имели сниженную продукцию ИФНа и ИФНу. Через три недели от начала лечения отмечалось увеличение уровня стимулированной продукции ИФНа, а продукция ИФНу не изменялась.

Далее была сделана попытка проследить наличие разницы в выше описанных показателях у ЧБД с БА или без неё.

В группе часто болеющих детей, страдающих бронхиальной астмой, при ОРЗ отмечается значительное снижение продукции ИФНа. В группе часто болеющих детей, не страдающих бронхиальной астмой, при ОРЗ также отмечается значимое снижение продукции ИФНа.

Создается впечатление, что уровень ИФНа в обследованных группах снижен за счет ОРЗ, которое истощает его продукцию (табл.2). Во всех группах у детей без ОРЗ продукция ИФНа была выше (значимо или в виде тенденции), чем у детей с ОРЗ. В тоже время у- интерфероногенез одинаково снижен у больных бронхиальной астмой и ЧБД независимо от наличия или отсутствия ОРЗ у ребенка - это выявлено и в группах детей больных бронхиальной астмой, и в группах часто болеющих детей.

Табл. 2. Влияние ОРЗ на индуцированную продукцию ИФНа п ИФНу у детей с бронхиальной астмой н часто болеющих детей.

(ед/мл, среднее л 95%-ный доверительный интервал).

ИФН при приступе БА после ОРЗ У ЧБД, страдающих БА У ЧБД, не страдающих БА Норма

в при-ступном периоде через 3 недели после приступа ОРЗ без ОРЗ ОРЗ без ОРЗ

ИФНа 117* (85-162) 151 (112-204) 49* (30-81) 79* (42-151) 79* (65-98) 120 (87-166) 188 (146-241)

ИФНу 13* (10-19) 17* (12-23) 17* (12-26) 16 (6-45) 22* (8-27) 17* (13-23) 30 (20-45)

Количество детей 33 31 14 6 54 31 13

* - значимое отличие от возрастной нормы

Считается, что у людей, инфицированных внутриклеточными патогенами, страдает система интерфероногенеза и повышается риск возникновения приступов БА.

Действительно, по нашим данным 53% детей, госпитализированных с приступом К Л, оказались серопозитивными по С. рпеиш. и (или) М. рпецт. Среди ЧБД таких детей было меньше - лишь 26% от общего числа I рис.2).

Рис. 2. Частота ннфпцнрованности С. рпешп. и М. рпеиш. детей с обостренней бронхиальной астмы (А) н часто болеющих детей (в).

А

12% 19%

□ чистые

□ микст

12% 19%

□ чистые

□ микст

Представлялось важным узнать, как влияет инфицированность этими внутриклеточными патогенами на иммунный и интерф ср о новы й статуе детей.

Сравнение численности субпопуляций лимфоцитов инфицированных и неинфицироваиных детей (как с БЛ, так и ЧБД) показало, что дефицит лимфоцитов Основных иммунологических субпопуляций у Инфицированных детей несколько более выражен, чем у н е ин ф и ¡дарованных

Интерфероновый статус неинфицированных детей с БА ближе к норме, чем у инфицированных. При одинаково сниженной продукции ИФНу, способность к продукции ИФНа у них находилась в пределах возрастной нормы, тогда как у инфицированных детей она была снижена. У ЧБД продукция ИФНа и ИФНу была снижена одинаково как у инфицированных, так и у неинфицированных (табл.3). Складывается впечатление, что у детей с бронхиальной астмой, помимо основной патологии, на снижение способности к продукции интерферонов влияет инфицированность С. рпеит. и М. рпеит. Вероятно, можно сделать вывод о том, что за счет инфицированности происходит дополнительное угнетение интерфероногенеза.

Табл. 3. Индуцированная продукция ИФНа и ИФНу у детей с БА и ЧБД в зависимости от ннфпцпрованностн С. рпеит. и М. рпеит. (ед/мл, среднее и 95%-ньш доверительный интервал)

ИФН БА не инфиц. БА инфиц. ЧБД не инфиц. ЧБД инфиц. Норма

ИФНа 145 (106- 197) 118* (81-170) 94* (81-110) 86* (63- 118) 188 (146-241)

ИФНу 17* (13-23) 14* (10-20) 20* (16-24) 18* (12-28) 30 (20-45)

Количество больных п=28 п=27 п=50 п=18 п=13

*- значимо отличается от нормы (р<0,05).

Следующий раздел работы был посвящен исследованию продукции цитокинов у обследованных контингентов детей.

При анализе продукции цитокинов и их содержания в сыворотке основным затруднением являлся большой разброс данных, из-за чего при сравнении средних арифметических значений разница между ними бывала недостоверной. Осуществлена попытка индивидуального сопоставления кон-

ценграции ИЛ-4 и ИФНу на графиках, предварительно отделив линиями зоны незначительных концетграций цитокинов.

Для сывороток крови такими границами являлись 50 пг/мл (ИФНу) и 5 пг/мл (ИЛ-4). Для оценки продукции ИФНу в клеточной культуре мы выбрали границу в 1000 пг/мл, а для ИЛ-4 - 5 пг/мл.

На следующих 3-х рисунках по оси абсцисс - концентрация ИФНу в исследуемых образцах, по оси ординат — концентрация ИЛ-4. Каждая точка внутри точечной диаграммы характеризует эти два показателя у обследованного ребенка. Границы незначительных концентраций проведены параллельно осям координат.

Рис. 4. Соотношение количества ИЛ-4 и ИФНу в сыворотке крови у детей с приступом БА

Примерно у половины детей с приступом БА на фоне ОРЗ сывороточная концентрация обоих цитокинов близка к нулю. Повышенная концентрация ИФНу в сыворотке крэви при приступе БА на фоне ОРЗ встречалась чаще, чем повышенная концентрация ИЛ-4 (рис.4). Аналогичное исследование было проведено в отношении сывороток ЧБД с ОРЗ. В целом результаты были похожи, однако, если при приступе БА у части детей концентрация ИЛ-4 в сыворотке была выше 5 пг/мл, то среди ЧБД ни у одного из обследованных нами ИЛ-4 не выявлялся.

В противоположность этому при анализе индуцированной продукции ИФНу и ИЛ-4 в культуре лейкоцитов крови детей с приступом БА наибольшее количество точек определялось в зоне низкой продукции ИФНу и повышенной продукции ИЛ-4 (рис.5).

Рис. 5. Соотноше1ше продукции ИЛ-4 и ИФНу в культуре лейкоцитов крови у детей с приступом БА, развившимся на фоне ОРЗ

3000 6000

концентрация ИФН пг/мл

При сравнении баланса между индуцированной продукцией ИЛ-4 и ИФНу у детей с приступом БА, спровоцированном ОРЗ, и у ЧБД, не страдающих БА, но перенесших очередное ОРЗ, были получены следующие данные.

Если на фоне ОРЗ развивается приступ БА, то несмотря на проводимую терапию повышается активность Тх2, что находит отражение в их способности продуцировать ИЛ-4. Иммунный ответ на возбудителя ОРЗ, спровоцировавшего приступ, отходит на второй план и иммунопатологические механизмы, обеспечивающие развитие БА, преобладают в общей картине цитокино-вого статуса. Это состояние возникает только в приступном периоде БА (рис.5).

У ЧБД через 5-14 дней после очередного ОРЗ типичным является сочетание высокой продукции ИЛ-4 и ИФНу в культуре лимфоцитов. Повышение

индуцированной продукции ИЛ-4 на фоне угнетения продукции ИФНу практически не наблюдается (рис. 6).

Рнс. 6. Соотношение количества ИЛ-4 и ИФНу в культуральном супернатанте у часто болеющих детей при ОРЗ

У ЧБД, страдающих БА и находящихся в стадии ремиссии, после очередного ОРЗ активность Тх1 не была угнетена. Большая часть показателей была локализована в зоне высокой продукции ИФНу. Если у части детей и возникало повышение активности клеток продуцентов ИЛ-4, то оно компенсировалось нормальной активностью Тх1 типа, то есть баланс между Тх1 и Тх2 выглядел так же, как при обычном ОРЗ.

Поскольку в ходе обследования были выявлены пациенты со сниженной способностью лейкоцитов периферической крови продуцировать ИФНу и ИФНа, для части детей в состав комплексной терапии был введен Виферон.

В зависимости от получаемого лечения больные подразделялись на следующие группы.

• терапия без Виферона

• терапия с Вифероном

Виферон вводили в суппозиториях один раз в сутки, в течение Юдней. Оценка воздействия препарата на состояние численности субпопуляций лимфоцитов и интерфероногенез проводилась как на момент выписки из стационара (20 дней), так и на отдаленных сроках (через три месяца).

До начала лечения численность субпопуляций лимфоцитов у детей всех трупп была значимо ниже возрастной нормы.

При использовании в курсе лечения препарата Виферон исходно сниженная численность субпопуляций увеличивалась, хотя и не доходила до возрастной нормы. Ни базисная терапия, ни ее сочетание с антибиотиками такого эффекта не давали (табл.4).

Табл. 4. Изменение численности субпопуляций лимфоцитов у детей с бронхиальной астмой по окончании лечения в стационаре.

Вид лечения Численность субпопуляций лимфоцитов ( в % к исходному уровтпо)

Лейк Лимф СБЗ+ С04+ С08+ СО 19+ С016+

Базисная терапия без Виферона 78 103 101 102 91 84 107

Базисная терапия + Виферон 103 126* 137* 136* 136* 120* 138*

*- значимо отличается от исходных показателей (р<0,05).

Использование Виферона в терапии бронхиальной астмы положительно влияло как на продукцию ИФНа, так и на продукцию ИФНу.

У детей, лейкоциты которых имели сниженную способность к продукции ИФНа, она значимо возрастала и достигала пределов возрастной нормы. Если продукция ИФНа исходно была нормальной, под влиянием Виферона

она даже несколько повышалась. Исходно сниженная продукция ИФНу также значимо увеличивалась при применении Виферона.

В группах, где данный препарат не был включен в терапию, были получены следующие данные. При исходно сниженной способности к продукции ИФНа после курса базисной терапии отмечалась только тенденция к увеличению продукции данного цитокина; возрастная норма не достигалась. Исходно нормальная продукция ИФНа не изменялась.

Исходно сниженная способность к продукции ИФНу в ходе проведения базисной терапии значимо улучшалась. Однако наблюдаемое увеличение не достигало возрастной нор'мы.

Полученные данные свидетельствуют о том, что включение в базисную терапию иммуномодулятора Виферон благоприятно влияет на ингерфе-роногенез.

ВЫВОДЫ.

1. В приступном периоде бронхиальной астмы у детей снижено содержание лимфоцитов, СОЗ+, С04+-клеток и способность к продукции Гуй. По выходе в ремис:ию бронхиальной астмы приближение показателей к норме происходит не сразу, а в течение как минимум трех месяцев.

2. Численность субпопуляций лимфоцитов (СБЗ+, С04+, СБ 19+) у часто и длительно болеющих детей ничем на момент обследования не болевших, была снижена сильнее, чем у детей с приступом бронхиальной астмы. У ЧБД, страдающих бронхиальной астмой и находящихся в ремиссии, все показатели несколько ниже, чем у ЧБД, не имеющих этого заболевания.

3. У детей в приступном периоде бронхиальной астмы и у ЧБД снижена способность лейкоцитов к индуцированной продукции как ИФНа, так и ИФНу. Способность к продукции ИФНа восстанавливается уже через 3 недели после приступа бронхиальной астмы, а способность к продукции ИФНу приходит к возрастной норме лишь через 3 месяца.

4. У ЧБД, не страдающих бронхиальной астмой, высокая продукция ИЛ-4 сопровождается высокой продукцией ИФНу, а у детей в приступном периоде БА наблюдается высокая продукция ИЛ-4, но отсутствует высокая продукция ИФНу. У детей, обследованных в приступном периоде бронхиальной астмы, дисбаланс между Тх1 и Тх2 выражен существенно сильнее, чем у часто болеющих детей с Б А в периоде ремиссии.

5. Среди детей с БА было в 2 раза больше инфицированных С. pneum. и М. pneum., чем среди ЧБД. Инфицированность детей этими внутриклеточными патогенами подавляла у них а-интерфероногенез.

6. Применение Виферона при терапии приступа БА способствует увеличению сниженной численности субпопуляций лимфоцитов и нормализации интерферонового статуса.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Разные аспекты иммуномодулирующего действия препарата Ацилакт И Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы. Сб. материалов международной конференции, Москва, 2—4 июня 2004, с. 93-94. (Бляхер М.С., Капустин И.В., Архипов С.Н., Лопатина Т.К., Федорова И.М., Рамаза-нова З.К., Карпова Н.В., Котелева С.И.)

2. Влияние вакцины ИРС 19 и препарата Ацилакт на продукцию некоторых цитокинов клетками периферической крови. // Russian Journal of Immunology, 2004, Vol. 9, supplement 1. (Федорова И.М., Капустин И.В., Архипов C.H., РамазановаЗ.К.)

3. Продукция TNFa нейтрофилами крови человека в процессе фагоцитоза стафилококка // Цитокины и воспаление, 2005, том 4, № 2, с. 77. (Федорова И.М., Капустин И.В., Рамазанова З.К., Котелева С.И.)

4. Состояние иммунной системы и продукция цитокинов у часто болеющих детей и у детей с бронхиальной астмой // Медицинская иммуноло-

гия, 2005, т.7, № 2-3, с. 135. (Рамазанова З.К., Бляхер М.С., Капустин И.В., Архипов С.Н., Скирда Т.А.)

5. Ацилакт и оздоровление часто болеющих детей // Вестник Российской Академии Медицинских наук, 2005, №12, с.32-35. (Бляхер М.С., Федорова И.М., Лопатина Т.К., Архипов С.Н., Капустин И.В., Рамазанова З.К., Карпова Н.В., Иванов В.А., Шарапов Н.В.)

6. Изменения в иммунной и цитокиновой системах у детей в процессе перехода их от статуса часто болеющих к больным бронхиальной астмой // Медицинская Иммунология, 2006, том 8, № 2-3, с. 210. (Рамазанова З.К., Федорова И.М., Бляхер М.С., Лопатина Т.К., Лукашова И.В.)

Актуальность проблемы.

Бронхиальная астма - одно из серьезнейших заболеваний, которое, начинаясь у детей, продолжается в зрелом возрасте и часто приводит к инвалидности и преждевременной смерти [3, 53].

Согласно современным представлениям морфологической основой бронхиальной астмы является хроническое воспаление бронхиальной стенки с повышением количества активных эозинофилов, тучных клеток, Т-лимфоцитов в слизистой оболочке бронхов; это воспаление впоследствии приводит к гиперреактивности бронхов и к бронхообструктивному синдрому. Изучение патогенеза бронхиальной астмы дало возможность установить ряд факторов риска её возникновения у детей, из которых наиболее важными являются следующие: наследственная предрасположенность к атопии, воздействие неблагоприятных условий среды на организм матери в периоде беременности, нерациональное питание беременной и ребенка, респираторные инфекции у детей [4, 25, 73]. 4

Современная теория бронхиальной астмы исходит из того, что среди СБ4+-лимфоцитов активность Т-хелперов 2 типа (Тх2) преобладает над функциональной активностью Т-хелперов 1 типа (Txl) [21, 38, 129]. Нарушения нормального баланса между Т-хелперами 1 и 2 типа регистрируют по продуктам секреции этих клеток [4, 66, 141]. Txl продуцируют ИЛ-2, ИФНу, ФНОа (провоспалительные цитокины), тогда как Тх2 - ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-10, ИЛ-13 (противовоспалительные цитокины) [55].

Дети, страдающие бронхиальной астмой, нередко относятся к группе детей часто и длительно болеющих респираторными инфекциями, которые часто сопровождаются появлением у них внутриклеточных патогенов - ми-коплазм и хламидий [32, 44]. Проводимые исследования иммунной системы у часто болеющих детей (ЧБД) и сравнение этих данных с данными детей, страдающих бронхиальной астмой, возможно, выявят определенные законог мерности и покажут причины перехода ребенка из статуса часто болеющего в статус больного бронхиальной астмой.

В связи с вышесказанным представляется актуальным изучение состояния иммунной системы, продукции цитокинов, инфицированности внутриклеточными патогенами у детей с бронхиальной астмой и сравнение этих показателей с аналогичными показателями часто болеющих детей.

Цель настоящего исследования

Целью настоящей работы было сравнение иммунного статуса, интер-фероногенеза и продукции цитокинов у детей с бронхиальной астмой в различные периоды заболевания и у часто болеющих детей.

Задачи исследования

1. Исследование изменений в состоянии иммунной системы, интерфе-роногенеза и продукции цитокинов у детей с бронхиальной астмой в разные периоды заболевания.

2. Сравнение состояния показателей иммунной системы и интерферо-ногенеза у часто болеющих детей и детей с бронхиальной астмой в разные периоды заболевания.

3. Сравнение содержания в сыворотке крови и индуцированной продукции ИФНу и ИЛ-4 у детей с бронхиальной астмой и часто болеющих детей.

4. Исследование влияния инфицированности внутриклеточными микроорганизмами на состояние иммунной системы, интерфероногенез и продукцию цитокинов у детей с бронхиальной астмой и часто болеющих детей.

5. Изучение влияния иммуномодулятора Виферон на иммунный и интерфероновый статус детей, страдающих бронхиальной астмой.

Научная новизна

В работе впервые комплексно проанализировано в динамике по многим иммунологическим параметрам (иммунный статус, интерфероновый статус, продукция цитокинов, фагоцитарная активность нейтрофилов) состояние детей, страдающих бронхиальной астмой, в разные периоды заболевания и детей, часто и длительно болеющих респираторными инфекциями.

Выявлено, что у детей в приступном периоде бронхиальной астмы (БА) наблюдается дефицит клеточного иммунитета и нарушение интерфероноге-неза. В послеприступном периоде эти показатели приходят к норме примерно через три месяца.

Впервые показано, что у ЧБД имеются более выраженные нарушения в клеточном звене иммунитета, чем у детей с приступом бронхиальной астмы. Так, у ЧБД отмечалось статистически достоверное снижение процента и абсолютного количества CD3+, CD4+, С019+клеток по сравнению с нормой и показателями детей с БА.

Было выявлено, что при бронхиальной астме дети, серопозитивные по Chlamydia pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae (C.pneum. и M.pneum.), встречаются в 2 раза чаще, чем в группе часто болеющих детей.

Предложена оригинальная совокупная оценка продукции цитокинов ИЛ-4 и ИФНу для каждого индивидуума, которая дала возможность выявить, что у часто болеющих детей, не страдающих БА, высокая продукция ИЛ-4 сопровождается высокой продукцией ИФНу, а у детей в приступном периоде БА при высокой продукции ИЛ-4 продукция ИФНу снижена.

У детей, находящихся в приступном периоде БА, дисбаланс соотношения Тх1 и Тх2 более выражен, чем у часто болеющих детей, страдающих бронхиальной астмой и находящихся в периоде ремиссии, т.е. в межприступ-ном периоде.

Новыми являются данные о том, что иммуномодулятор Виферон способствует увеличению сниженной численности субпопуляций лимфоцитов и нормализации интерферонового статуса у детей в приступном периоде БА. п

Практическая значимость работы связана с обоснованием необходимости нормализации показателей иммунного статуса, интерфероногенеза и продукции цитокинов у часто болеющих детей, что, вероятно, позволит снизить риск возникновения у них бронхиальной астмы.

Внедрение результатов работы

Материалы диссертации включены в курс практических занятий кафедры иммунологии РГМУ и вошли в медицинскую технологию «Использование иммуномодуляторов для коррекции показателей иммунной и цитоки-новой систем при оздоровлении детей, часто болеющих острыми респираторными и вирусными заболеваниями верхних дыхательных путей».

Положения, выносимые на защиту

1. Изменения в состоянии иммунной системы детей с бронхиальной астмой и часто болеющих детей имеют одну направленность, но разную выраженность - численность субпопуляций лимфоцитов изменена более значительно у ЧБД, продукция интерферонов снижена у обеих групп детей, но у ЧБД в большей степени подавлена продукция ИФНа.

2. Инфицированность внутриклеточными патогенами детей с бронхиальной астмой и ЧБД мало влияет на численность субпопуляций лимфоцитов, но приводит к подавлению продукции ИФНа.

3. Активность Тх1 и Тх2 у часто болеющих детей и больных с приступом БА различна. У часто болеющих детей, не страдавших бронхиальной астмой, высокая продукция ИЛ-4 в культуре клеток крови сопровождается высокой продукцией ИФНу, а у детей в приступном периоде бронхиальной астмы при высокой продукции ИЛ-4 продукция ИФНу снижена. т

Апробация материалов диссертации

Результаты работы доложены и обсуждены на международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы » (Москва, июнь 2004г.), на Всероссийском научном симпозиуме «Цитокины. Стволовая клетка. Иммунитет» (Новосибирск, июль 2005г.), на конгрессе «Дни Иммунологии в Санкт-Петербурге 2006».

Апробация диссертационной работы проведена на заседании Секции Ученого Совета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского "Общая и прикладная иммунология "10 апреля 2006 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 134 страницах и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы «Результаты собственных исследований», обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 10 рисунками и 17 таблицами. В список литературы вошли 156 работ отечественных и зарубежных авторов.

ВЫВОДЫ.

1. В приступном периоде бронхиальной астмы у детей снижено содержание лимфоцитов, CD3+, CD4+-mieTOK и способность к продукции IgG. По выходе в ремиссию бронхиальной астмы приближение показателей к норме происходит не сразу, а в течение как минимум трех месяцев.

2. Численность субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD 19+) у часто и длительно болеющих детей ничем на момент обследования не болевших, была снижена сильнее, чем у детей с приступом бронхиальной астмы. У ЧБД, страдающих бронхиальной астмой и находящихся в ремиссии, все показатели несколько ниже, чем у ЧБД, не имеющих этого заболевания.

3. У детей в приступном периоде бронхиальной астмы и у ЧБД снижена способность лейкоцитов к индуцированной продукции как ИФНа, так и ИФНу. Способность к продукции ИФНа восстанавливается уже через 3 недели после приступа бронхиальной астмы, а способность к продукции ИФНу приходит к возрастной норме лишь через 3 месяца.

4. У ЧБД, не страдающих бронхиальной астмой, высокая продукция ИЛ-4 сопровождается высокой продукцией ИФНу, а у детей в приступном периоде БА наблюдается высокая продукция ИЛ-4, но отсутствует высокая продукция ИФНу. У детей, обследованных в приступном периоде бронхиальной астмы, дисбаланс между Txl и Тх2 выражен существенно сильнее, чем у часто болеющих детей с Б А в периоде ремиссии.

5. Среди детей с БА было в 2 раза больше инфицированных С. pneum. и М. pneum., чем среди ЧБД. Инфицированность детей этими внутриклеточными патогенами подавляла у них а-интерфероногенез.

6. Применение Виферона при терапии приступа БА способствует увеличению сниженной численности субпопуляций лимфоцитов и нормализации интерферонового статуса.

Заключение

Исходя из полученных данных, можно сказать, что включение имму-номодулятора Виферона в базисную терапию детей с бронхиальной астмой положительно влияет на численность субпопуляции лимфоцитов и способность лейкоцитов к продукции интерферонов.

Обсуждение результатов

Бронхиальная астма, одно из серьезнейших заболеваний, которое, начинаясь у детей, продолжается в зрелом возрасте, и часто приводит к инвалидности и преждевременной смерти [3, 53]. Это заболевание имеет ряд патогенетических причин возникновения, общепринятой из которых является нарушение аллергического равновесия организма. Такое нарушение может быть спровоцировано разными факторами - пищевыми, бытовыми или растительными аллергенами и др. В настоящее время острые респираторные вирусные инфекции являются настоящим бичом педиатрии, а аллергия на вирусы совсем не редкое явление. Понятие часто и длительно болеющий респираторными заболеваниями ребенок широко распространено. Все это позволяет считать актуальным параллельное обследование детей уже больных бронхиальной астмой и часто болеющих детей в плане изучения иммунопатологических механизмов возникновения бронхиальной астмы у часто болеющих детей.

В настоящем исследовании показано, что в приступном периоде бронхиальной астмы имеются выраженные нарушения в численности субпопуляций лимфоцитов и продукции интерферонов. Эти нарушения несколько исправляются по мере удаления по срокам от приступного периода - через три недели после приступа восстанавливается продукция ИФНа, а продукция ИФНу приходит к норме лишь через три месяца после приступа бронхиальной астмы. У часто и длительно болеющих детей все эти показатели выглядят хуже, чем в приступном периоде бронхиальной астмы, что, вероятно, связано с истощением всех систем защиты воспалительными процессами. Особенно выраженные нарушения выявлены у детей с бронхиальной астмой и у часто болеющих детей, инфицированных внутриклеточными патогенами.

Интересные данные получены при исследовании продукции некоторых цитокинов у больных бронхиальной астмой и часто болеющих детей.

Значительная межиндивидуальная вариабельность, характерная для параметров цитокинового статуса, делает малоинформативным представление результатов в виде средних показателей. Тот факт, что различные исследовательские группы используют тест-системы разных фирм-производителей, создает дополнительные сложности в трактовке полученных результатов. Видимо, по причине использования разных тест-систем авторы расходятся во мнениях о том, имеется ли связь между тяжестью БА и содержанием ИЛ-4 в сыворотке крови [52, 72, 79, 104].

Использование реагентов одного и того же производителя также не исключает разнобоя данных, доступных в научной литературе. Так, на тест-системах фирмы «Протеиновый контур» в сыворотках здоровых людей Кузнецов В.Ф. с соавт.[29] получали среднюю концентрацию ИЛ-4 в сыворотке 27 пг/мл, Лихванцева Г.В. с соавт. - 110 пг/мл [36], а Абаджиди М.А. с соавт. [1] такую концентрацию (109 пг/мл) выявляли в сыворотках больных астмой.

Часть авторов не указывает характеристик, использованных ими ИФА-тест-систем [24,39,57], хотя по косвенным данным можно предположить, что эти тест-системы выявляют не только свободные цитокины, но и связанные с белками. Подобные тест-системы делают возможным выявлять различия в сывороточной концентрации ИЛ-4 у больных в остром периоде и в ремиссии [133], при тяжелом течении астмы и состоянии средней тяжести [6].

Использованные нами ИФА-тест-системы (ООО «Вектор-Бест») не выявляли ИЛ-4, связанного с белками сыворотки крови, а количество свободного ИЛ-4 у большинства больных БА регистрировалось на уровне 0-5 пг/мл (ниже порога чувствительности для данных реагентов). Подобные значения сывороточной концентрации ИЛ-4 более характерны для здоровых людей [5, 7 , 104].

По нашим данным при приступе средней тяжести только у 40% больных концентрация ИЛ-4 в крови была 6-40 пг/мл (через 3 недели после обострения БА - у 20%). Граница в 5 пг/мл и была выбрана нами для разделения больных на группы с нормальной и повышенной активностью Тх2. Единственное заключение, которое мы смогли сделать, исследовав сывороточную концентрацию цитокинов следующее - при обострении БА, связанном с ОРЗ, в сыворотке крови выявляется ИЛ-4, а после ОРЗ у детей, не страдающих астмой - нет. Но для решения задач нашей работы констатации этого факта было недостаточно, поскольку повышенная концентрация ИФНу, являющегося антагонистом ИЛ-4, с одинаковой частотой обнаруживалась в сыворотке крови у тех и у других.

В научной литературе, особенно иностранной, данные довольно часто представляются графически в виде индивидуальных концентраций цитокина в сыворотках или культуральных супернатантах больных и медианы этого распределения [90, 129].

Кроме того, данные о концентрации того или иного цитокина дополняются его соотношением с другими цитокинами. Наиболее часто используются отношения ИЛ-4/ ИФНу, ИЛ-10/ИФНу [90, 106], также представляемые графически в виде индивидуальных значений и медианы этого распределения.

Корреляция между отдельными показателями цитокинового статуса [90] или между ними и другими лабораторными показателями тоже представляется графически [129].

В своей работе мы также отдали предпочтение графическому представлению результатов как наиболее информативному способу анализа полученных данных.

Значения концентраций ИЛ-4, наблюдаемые нами в супернатантах клеточных культур (6 - 40 пг/мл), совпадали с теми, которые другие авторы получали при стимуляции мононуклеаров митогенами: 4,3 пг/мл [100], 7,9 пг /мл [39] у здоровых лиц, а также у больных БА: 10,8 пг/мл, - [149]. Концентрацию 5 пг/мл мы использовали как границу между нормальной и повышенной продукцией ИЛ-4. В то же время, по данным Калининой Н.М. [24] лейкоциты крови здоровых людей продуцируют ИЛ-4 на уровне 185 пг/мл.

Мы сделали выбор пограничной концентрации ИЛ-4 на основании собственных данных и данных большинства зарубежных авторов.

Граница в 1000 пг/мл была взята для оценки продукции ИФНу в культуре клеток цельной крови на основании наших данных о том, что у ЧБД, лейкоциты которых продуцируют ИФНу ниже этого уровня, повышен риск заболевания ОРЗ [54]. Вообще стимулированная митогенами продукция ИФНу в культуре клеток крови здоровых людей по данным разных авторов колеблется от 100 пг/мл [139], 300 пг/мл [134] до 1250 пг/ мл [24], 5516 пг/мл [130].

После выбора указанных граничных значений способность клеток от больных на разных этапах БА к продукции ИЛ-4 и ИФНу оказалась очевидно различной. У больных с приступом БА, спровоцированном ОРЗ, способность лейкоцитов к продукции ИФНу была гораздо ниже, чем у ЧБД, также перенесших ОРЗ. Мы предположили, что именно низкий резерв активности Txl, мерой которой является индуцированная продукция ИФНу, создает риск перехода от частых ОРЗ к такому хроническому заболеванию легких как БА.

Параметры цитокинового статуса больных БА позволяют делать такое предположение. Низкая индуцированная продукция ИФНу в культуре клеток цельной крови наблюдалась у них при условиях, оптимальных для оценки этого показателя: стимуляция 104 лимфоцитов 10 мг ФГА в течение 72 часов.

В этих условиях продукция ИЛ-4, максимум которой по данным литературы приходится не на 72, а на 48 часов, должна быть существенно угнетена, т.к. Txl и Тх2 взаимно подавляют активность друг друга. Однако у больных БА наблюдалась именно недостаточность функционирования Txl даже в оптимальных условиях культивирования, что выявлялось как по сниженному количеству ИФНу, определяемому в ИФА, так и по снижению его биологической активности. Это является наиболее вероятной причиной нарушения баланса между Txl и Тх2. Продукция ИЛ-4, маркера активности Тх2, даже через 72 часов культивирования у больных БА повышена.

Сравнение индивидуальных показателей, наблюдаемых у больных БА и у ЧБД через одинаковый срок после перенесенного ОРЗ, выявляет разницу между этими двумя группами больных. Если у ЧБД обнаруживалась ФГА-индуцированная продукция ИЛ-4 выше 5 пг/мл, то она всегда сопровождалась продукцией ИФНу выше 1000 пг/мл. У больных БА увеличение продукции ИЛ-4 выше 5 пг/мл не сопровождалось увеличением способности к продукции ИФНу, напротив, она была ниже ЮООпг/ мл. У значительного количества больных БА продукция обоих указанных цитокинов происходила ниже уровня указанных границ.

Подтверждением того, что именно недостаточный резерв активности Тх1 (насколько можно судить по их способности продуцировать ИФНу) играет решающую роль в обострении БА при очередном ОРЗ, является также анализ разницы между обследованными нами группами при пересчете концентрации ИФНу на 1 продуцент. При этом становится ясно, что не недостаточное количество клеток-продуцентов является причиной низкого у-интерфероногенеза, а их низкая удельная активность. Серологические признаки инфицирования С. или М. pneum. также имеют значение.

Количество ИФНу, продуцируемое 104 клеток

У ЧБД у детей, больных БА инфиц. неинфиц. инфиц. неин< >иц.

- БА, ремиссия при обострении через 3 недели при обострении через 3 недели м 460 490 150 140 320 365 п 13 12 18 18 12 10 tm 165 150 85 85 110 365

Получается, что для инфицированных детей, госпитализированных с приступом БА после ОРЗ, характерен значимый дефицит у-интерфероногенеза не только по сравнению с ЧБД, переболевших ОРЗ, но и с неинфицированной подгруппой, имевшей приступ БА. Этот дефицит, судя по удельной продукции ИФНу, сохранялся и после лечения.

Наши данные о том, что сниженная активность Тх1 стабильно выявляется у больных с БА подтверждается и данными литературы.

У больных БА выявляли дисфункцию в системе интерфероногенеза, проявляющуюся снижением выработки ИФНа и ИФНу. Показатели были сходны при всех формах БА, но отличались от показателей, наблюдаемых в стадии ремиссии. Устойчивый характер угнетения у-интерфероногенеза данные авторы связывают с активацией Тх2 клеток [19].

Самсыгина Г.А. с соавт. обнаружили, что концентрация ИФНу в сыворотке снижена у детей с бронхиальной астмой вне зависимости от тяжести течения болезни, а содержание ФНОа растет, и тем сильнее, чем тяжелее течение БА [133].

На ведущую роль недостаточности интерфероногенеза в формировании БА указывает и тот факт, что здоровые люди и больные БА не различаются по количеству ИЛ-4-продуцентов среди Т-лимфоцитов крови (0.72 и 0.79% соответственно), тогда как процент ИФНу - продуцентов достоверно различался (23.5 против 5.7%, Р < 0.001) - [147]. Латышева Т. В. с соавт. обнаружили у больных БА увеличение количества ИЛ-4-продуцентов среди Т-лимфоцитов крови [35], но Nagano Y. с соавт. указывают, что в крови таких больных повышено не только количество Тх2, но и количество Txl [117].

По наблюдениям Jyonouchi Н. с соавт. [103] ни у одного из пациентов, у которых продукция ИФНу происходила на уровне не ниже 800 пг на 106 лейкоцитов, не происходило обострения аллергического ринита, тогда как при продукции менее 500 пг на 106 лейкоцитов - у 75% обострение развивалось.

Несмотря на то, что дефицит интерфероногенеза сопровождает многие инфекционные заболевания, особенно хронические, вклад различных инфекций в формирование и обострение БА изучен в различной степени. Наибольшее количество информации относится к роли вирусов в этом процессе [13,87,93,154].

Балаболкин И.И. и соавт. установили, что повторные ОРВИ чаще способствуют развитию респираторных форм аллергии: обострение бронхиальной астмы при присоединении ОРВИ происходило в 88,4% случаев, атопиче-ского дерматита - в 78,6% [3].

Эти авторы подчеркивают, что, чем чаще ребенок с бронхиальной астмой и атопическим дерматитом болеет ОРВИ, тем в большей степени у него имеется персистенция различных вирусов, но одновременно длительная и массивная персистенция различных вирусов в организме ребенка определяет частоту заболеваемости острыми респираторными инфекциями - более 6 раз в течение года. Все это сказывается на цитокиновом статусе ЧБД с аллергическими заболеваниями: недостаточность эндогенного ИФНу у обследованных детей сопровождается увеличением медиаторов фагоцитарных реакций (ФНОа и, частично, ИЛ-8). Однако в отличие от здоровых детей интенсивность продукции и, соответственно, функционирования этих цитокинов у детей с аллергическими болезнями нельзя признать достаточно полноценной.

По нашим данным способность лейкоцитов к продукции ИЛ-4, ИФНу и ФНОа у неинфицированных детей, регистрировалась на несколько более высоком уровне, чем у инфицированных С. или М. pneum., как до, так и после лечения в клинике и была одинаково высока у ЧБД в ремиссии БА независимо от инфицированности. Вероятно, это говорит о снижении резерва активности лейкоцитов при персистенции С. или М. pneum., которое, однако, редко выявляется при текущем ОРЗ, но часто при таком остром состоянии как приступный период БА.

Шелудько Я.С. с соавт [73] определяли уровень сывороточных ИЛ-4, ИФНу и ФНОа у детей с атопической БА, где триггерами обострения были вирусная и бактериальная инфекция. Они показали, что при присоединении к атопическому процессу острого воспаления уменьшается гиперпродукция ИЛ-4. Одновременно на фоне инфекционного процесса отмечалось снижение сывороточной концентрации ИФНу по сравнению с БА, неосложненной инфекциями. По содержанию ФНОа в сыворотке крови группы не различались. Наибольший дефицит ИФНу отмечали при осложнении БА пневмонией.

В то же время, показано, что если РСВ инфекция развивается у больных БА, то уровень ИФНу в сыворотке выше, чем у больных БА, не пораженных этой инфекцией [102].

В ряде работ указывается, что хламидийная и микоплазменная инфекции чрезвычайно часто выявляются при обострении БА и что это сочетается с нарушением интерфероногенеза у больных [32, 51]. Однако этот вопрос изучен гораздо хуже, чем механизмы влияния вирусов на развитие БА. Исследования цитокинового профиля у таких больных проводится еще реже [92].

Следует отметить, что практически не изучены особенности продукции цитокинов при вирусных инфекциях у больных БА и при хламидийной инфекции. Львиная доля клинико-иммунологических наблюдений за больными БА сделана на основании соотношения сывороточных концентраций ИФНу и ИЛ-4.

Таким образом, наша работа, включающая исследование баланса Txl и Тх2 на основании не только сывороточного содержания ИФНу и ИЛ-4, ФНОа, но и резервной способности лейкоцитов к их продукции, позволила получить новую информацию, характеризующую сущность изменений в ци-токиновом балансе при приступе БА, спровоцированном ОРЗ, и их отличие от изменений при ОРЗ, не вызывающем приступ БА у детей, которые ранее имели такие приступы.

Вообще среди ЧБД, не страдающих БА, индуцированная активность клеток-продуцентов ИЛ-4 сравнима с таковой при обострении БА. В сочетании с крайне низкой концентрацией ИЛ-4 в крови это обстоятельство, по-видимому, является положительной характеристикой цитокинового статуса: смещения баланса в сторону Тх2 не наблюдается, а потенциальные возможности для Тх2-ответа при его необходимости имеются.

С другой стороны, если на фоне ОРЗ развивается приступ БА, то активность Тх2 повышается, что находит отражение в повышении их способности продуцировать ИЛ-4, наблюдаемом в культуре клеток. Повышения активности Txl не происходит. Иммунный ответ на ОРЗ, спровоцировавшее приступ, отходит на второй план, и иммунопатологические механизмы, обеспечивающие развитие БА, преобладают в общей картине цитокинового статуса.

Установление факта, что нарушение у-интерфероногенеза менее выражено у больных БА, неинфицированных С. или М. pneum., имеет большое практическое значение. У этих детей через 3 недели после приступа БА, показатели интерферонового статуса улучшаются, тогда как дефицит продукции ИФНу у детей инфицированных хламидиями или микоплазмами, длительно сохраняется, по крайней мере, по данным иммуноферментного анализа культуральных супернатантов. Именно для этой последней группы больных особенно показано лечение препаратами интерферона и интерфероноге-нами.

В связи с вышесказанным полученные результаты о положительном влиянии лечения приступа бронхиальной астмы препаратом Виферон в плане его влияния на численность субпопуляций и продукцию интерферонов актуальны и позволяют надеяться на то, что своевременно проведенная иммуно-модулирующая терапия у часто и длительно болеющих ОРЗ детей позволит предотвратить возникновение у них бронхиальной астмы.