Автореферат и диссертация по медицине (14.00.01) на тему:Состояние иммунитета и влияние на его фагоцитарное звено препаратов плацентарных белков у женщин с бесплодием при наружном генитальном эндометриозе

На правах рукописи

Шор Артур Людвигович

СОСТОЯНИЕ ИММУНИТЕТА И ВЛИЯНИЕ НА ЕГО ФАГОЦИТАРНОЕ ЗВЕНО ПРЕПАРАТОВ ПЛАЦЕНТАРНЫХ БЕЛКОВ У ЖЕНЩИН С БЕСПЛОДИЕМ ПРИ НАРУЖНОМ ГЕНИТАЛЬНОМ ЭНДОМЕТРИОЗЕ

14.00.01 - акушерство и гинекология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Иваново -1999 г.

Работа выполнена в Ивановской государственной медицине» академии и Ивановском научно-исследовательском инстшуге материнства детства им. В.Н. Городкова МЗ России.

Научный руководитель -Научный консультант

Офш ^иятгт.пт.ти оппоненты"

Ведущее учреждение

доктор медицинских наук, профеоа Л.В. Посисее доктор медицинских наук, профессх Н10. Сотника доктор медицинских наук, профеосо С.Е. Александр кандидат мрдщ финских на;

Г.Н. Учаева Российский Университет дружбы народа

Защита состоится 8 сентября 1999 года в 10 часов на заседаш диссертационного совета К 084.33.01 при Ивановской государственш медицинской академии по адресу. 153462, г. Иваново, пр. Ф. Энгельса, 8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан «_

года.

Ученый секретарь д иссертационного совета кандидат м^^пшткяу наук, доцент

ВЛ ПАР]

ал

МП.ЪЧ-ЪУ.О

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ЕК - естественные киллеры

БАС-РОЛ - лимфоциты, экспрессирующие рецепторы

к СЗ компоненту комплемента ЕАС-РОН - нейтрофилы, экспрессирующие рецепторы

к СЗ компоненту комплемента ЕАС-РОМ - макрофаги, экспрессирующие рецепторы

к СЗ компоненту комплемента ИФР - индекс фагоцитарного резерва МИФ - фактор ингибируюгции миграцию НСТ-тест - реакция спонтанного восстановления нейтрофилами и макрофагами нитро-тетразолиевого синего ПАМГ-2 - плацентарный а2-микроглобулин ПВК - периферическая венозная кровь ПЖ - перитонеяльпая жидкость

ТБГ — трофобластспецифический Р-глобулин

Тфр - теофиллинрезистенгные Т-лимфоциты

Тфч - теофиллинчувствительные Т-лимфоциты

ФГА - фитогемагглютинин

ФИТЦ - флюоресцеинизотиоционат - иммуноглобулины

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Эндометриоз — одно из наиболее распространенных гинекологически заболеваний. Частота андометриоза колеблется от 7 до 59% у женщи репродуктивного возраста (Адамян JI.B., Кулаков В.И., 1997). В течени последнего десятилетия отмечено возрастание частоты наружного эндометриоз (от 13 до 27% оперированных гинекологических больных). В 30-50% случае эндометриоз сопровождается бесплодием (Пшеничникова Т.Я., Сухих Г.Т. 1994; Кулаков В.И., Овсянникова Т.В., 1997).

Данные о состоянии иммунной системы у женщин с генитальньп эндометриозом рассматриваются в двух аспектах, а именно - роль иммунс логических нарушений в патогенезе эндомегриоза и участие иммунно: системы в развитии бесплодия при эндометриозе. Если первый аспект широк освещен в литературе (Сгрижаков А.Н., Давыдов А.И., 1996), то по второму мнения авторов достаточно противоречивы. Некоторые исследовател отрицают сам факт бесплодия при эндометриозе (Moen М.Н., Rawson J.M.R 1991), однако большинство авторов полагают, что у женщин с эндометриозо! при нормальном двухфазном цикле и сохраненной проходимости маточны труб причиной бесплодия являются иммунные нарушения, но не стольк общею, сколько местного характера (Akoum A. Et а]., 1996; Joliooeur С. et al. 1998).

В литературе встречаются разрозненные данные, характеризующи некоторые особенности иммунологических параметров перитонеально] жидкости при эндометриозе (Старцева Н.В., Швецрв М.В. 1996, Martinez Р. 1998).

Изучение роли плацентарных белков в развитии иммунного ответ организма проводились в связи с проблемой невынашивания беременности ] гесгозов (Татаринов Ю.С. и соавт., 1980; Посисеева JI.B., 1986, 1991; Панов И .А., 1995; Bolton А.Е. et al., 1987). Большинство авторов отмечают высокую иммуносупрессивную активность препаратов ТБГ и ПАМГ-2. Имеются

единичные работы о содержании этих белков в перитонеальной жидкости, взаимосвязи их с эндометриозом, но влияние белков на функциональную активность иммунокомпетентных клеток ранее не исследовалось, в связи с чем и предпринято настоящее исследование.

Цель работы: установить новые звенья патогенеза бесплодия у женщин с наружным гешггальным эндометриозом с учетом участил в иммунных реакциях на системном и локальном уровнях плацентарных белков ТБГ и ПАМГ-2 и разработать новые способы диагностики данной патологии.

Задачи исследования:

1. Дать сравнительную опенку состояния иммунитета на системном и локальном уровнях у здоровых женщин и больных с бесплодием при наружном генитальном эндометриозе.

2. Изучить содержание плапрнтарных белков ТБГ и ПАМГ-2 в перитонеальной жидкости и их взаимосвязь с показателями локального иммунного статуса у здоровых женщин и больных с бесплодием при наружном генитальном эндометриозе.

3. Установить m vitro влияние препаратов ТБГ и ПАМГ-2 на параметры функциональной активности нейтрофилов периферической крови и макрофагов перитонеальной жидкости у здоровых женщин и больных с бесплодием и наружным генитальным эндометриозом.

4. Разработать новые споообы диагностики наружного генитального эндо-метриоза у жешцин с бесплодием.

Научная новизна исследования:

Впервые определены новые звенья патогенеза нарушений репродуктивной функции у женщин с наружным генитальнь1м эндометриозом,

t

связанные с дисбалансом между высоким уровнем активации и сниженным функциональным резерюм фагоцитов на системном и локальном уровнях, а также высоким уровнем ПАМГ-2 в перитонеальной жидаосгги.

В опытах in vitro установлено влияние препаратов плацентарных балке ТБГ и ПАМГ-2 на функциональную активность нейтрофилов периферическо ' крови и макрофагов пер итонеадотой жидавсти в норме и патологии. Препаре ' ПАМГ-2 усиливает активадию нейтрофилов периферической кроки ка здоровых женщин, так и больных с бесплодием при наружном генитально эндометриозе, снижая показатели индекса фагоцитарного резерва перитонеаш ных макрофагов фергилъных женщин. Препарат ТБГ стимулируе НСТ-активность периферических нейтрофилов, снижая индекс фагоцитарно1 резерва как периферических, так и перитонеальных фагоцитов здоровы женщин, но не влияет на показатели функционального состояни фагоцитарных клеток женщин с бесплодием при наружном эндометриозе.

Практическая значимость работы

Предложен новый способ диагностики наружного генигального энд< метриоза по характеру воздействия препарата ПАМГ-2 на показател функциональной активности нейтрофилов периферической крови.

Определены информативные показатели состояния иммунитета к системном и локальном уровне у женщин с бесплодием при наружно генитальном эндометриозе.

Основные положения, выносимые на защиту:

У женщин с бесплодием при наружном генитальном эндометрисх имеют место нарушения общего и локального иммунитета, преимухцеетвенн в виде изменения содержания цитотоксических и иммунорегуляторны субпопуляций лимфоцитов и дисбаланса между высоким уровнем активации сниженным функциональным резервом фагоцитов, которые сочетаютс с низким уровнем ТБГ и высоким ПАМГ-2 в перитонеальной жидкости.

ПАМГ-2 активирует фагоциты периферической крови как в норме так и у больных с бесплодием при наружном эндометриозе, снижая ответ

перитонеальных макрофагов на нагрузку у здоровых женщин. При этом определение показателя НСТ-активности периферических, нейтрофилов после их инкубации с ПАМГ-2 имеет диагностическое значение при эндометриозе. Препарат ТБГ снижает показатели функционального резерва фагоцитов здоровых женщин и не влияет на таковые у больных.

Внеярспие результатов исследования в практику:

Результаты дисхертационной работы внедрены в практику гинекологической клиники Ивановского НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова МЗ России.

Разработан способ диагностики наружного генитального эндометриоза, на который получена приоритетная справка. № 99111032 от 2 июня 1999 года.

Апробагота работы:

Материалы диссертации доложены на пленуме Межведомственного Научного совета и Всероссийской научно-практической конференции «Пути развития современной гинекологии» (Москва, 1995), на республиканском семинаре «Здоровье семьи в репродуктивный период» (Иваново,

1997), на 2-ом Национальном конгрессе Российской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармаколоши» (Москва, 1998), на 7-ом Международном Конгрессе по иммунологии репродукции (Дели,

1998), па клинической конференции Ивановского НИИ МиД им. В.Н. Городкова (Иваново, 1998).

Публикации

По теме диссертации опубликовано четыре печатные работы, го них три - в центральной, одна — в международной печати.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ

Диссертация изложена на 169 страницах машинописного текста, содержит введение, обзор литературы, три главы собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические рекомендации.

; Библиографический указатель включает 82 отечественных и 13 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 32 рисунками 23 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Обследована 71 женщина, поступившая в гинекологическую клиник Ивановского НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова МЗ Россю-Женщины объединены в две клинические группы: группа контроля 27 женщин с нормальной репродуктивной функцией в супружеской паре ] основная группа - 44 женщины с бесплодием в браке, в том числ 19 с первичным и 25 со вторичным бесплодием.

Женщины с нормальной репродуктивной функцией поступали гинекологическую клинику для плановой хирургической стерилизации п социальным показаниям, обследовались в женских консультациях город Иваново и Ивановской области, консультативно-диагностической поликлиник Ивановского НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова МЗ России.

Женщины с нарушенной репродуктивной функцией обследовались н специализированном приеме по нарушению репродуктивной функции поликлинике НИИ МиД, в эндокринологической отделении гинекологическо] клиники.

Функция яичников оценивалась по совокупности тестов функционал! ной диагностики (базальная температура, не менее 3-х циклов, кольпоцитс логическое исследование, биопсия эндометрия), по уровню ПАМГ-2 менстр^ альной крови.

Андрогенная насыщенность определялась по уровню 17-КС моче Функциональное состояние маточных труб оценивал ост, по показателя! кимопертубации или по данным гистеросальпингографии. В схем; обследования также входили рентгенограмма турецкого седла и о предел ел ш полей зрения. Для исключения «шеечного» фактора проводились проб Миллера или посткоитальный тост.

Материалом для исследования служили: периферическая венозная кровь, моча, ооскоб эндометрия, цервикальная слизь, менструальная кровь.

У женщин с ненарушенной репродуктивной функцией в периферической венозной крови исследовали уровень мочевины, холестерина, общего белка, билирубина, глюкозы.

У женщин с бесплодием, для ощгнки общесоматического статуса, в периферической венозной крови исследовали уровень мочевины, холестерина, общего белка, билирубина, глюкозы; в моче — суточную экскрецию 17-КС. В пробах эндометрия оценивали характер морфологических изменений, в менструальной крови определяли уровень ПАМГ-2. В шеечной слизи определяли общий цигоз, арборизацию, длину нити натяжения, объем.

Анамнестически у женщин контрольной группы не отмечено периодов бесплодия, средняя продолжительность бесплодия у женщин основной группы составила 5,5 ± 0,6 лет. Женщин с наружным гениталь-ным эндометриозом в контрольной группе не было.

При проведении сравнительного анализа двух клинических групп, не выявлено достоверных отличий по средним возрастным показателям, возрасту становления и характеру менструальной функции, а также по частоте встречаемости экстрагенитальной патологии.

Главным отличинуг осношой группы от группы контроля является наличие на ,\юшгг операции пердада бесплодия и единзтвзпюй дингаостированной причины его в виде наружного эндомвтриэза различной степени тяжести. Как сждлтие этого, у женщин оспошой группы отмечзна существенная разнипд относительно группы контроля в наличии клиничэских прсявлший гинжшюги1 юской патоиюгии: 34% женщин с эндометриозом предъявляли характерные жалобы на боли, диспареунию, в 11% случаев -альгоманорею.

Данные клинического обследования: не выявили факторов определя-

ющих развитие бесплодия у этой группы женщин, в связи с чем нами был< проведено исследование иммунного статуса на системном i локальном уровне.

Материалом для непосредственного исследования служили перитонеальная жидкость, аспирированная в момент эндоскопи ческого исследования и гепаринизированная венозная кровь, гд< исследовались показатели иммунной системы организма.

Определение содержания ТБГ и ПАМГ-2 в перитонеально] жидкости проводили методом иммуноферментного анализа с примене нием отечественных наборов фирмы «Диагност» на базе кооператив; «Диагностика»- (Москва). Чувствительность метода составляла для ТБГ • 5 нг/мл, для ПАМГ-2 - 1 нг/мл.

Выделение обогащенной популяции лимфоидных клето! периферической крови и перитонеальной жидкости осуществлялся стандартным методом по Boyum А., 1968. Обогащенную популящ» нейтрофилов периферической крови получали по Петровой И. В. Васильевой A.JL, 1983.

Методы оценки иммунного статуса включали:

• определение относительного содержания Т-лимфоцитов мето дом Е-розеткообразования (E-POJ3) по JondalM., Hoim G. Wigzell Н., 1972;

• определение относительного содержания B-лимфоцитов мето дом ЕАС-розеткообразования (EAC-POJI) по Mendes M.F. Tolnai М.Е., Silvera N.P. et al., 1973;

• определение относительного содержания теофиллинрезистент ных и теофиллинчувствительных клеток (Тфр и Тфч) п-Limatibul S., Shore A., Dosch Н.М., Gelfand E.W., 1978;

• определение уровня выработки фактора, угнетающего мшрацш лейкоцитов в ответ на стимуляцию ФГА (Difco, USA) в прямо] капиллярном тесте по Крымкиной Т.Н., Ганковской JT.B Соколовой Е.В. и др., 1983;

• опрсуржниз оснэвных кшэосв иммугкпюбулинов (TgG, IgA, TgJVT) миодэм радигсьнмиммущциф}1узиигоМа1тс^^ Henomns J., 1965;

• опредзлшиэ щфкулирующих иммунных комплексов (ЦИК) нефало-мэтричэским методом по Digrjon M., Laver M., Riza J., Boch J.F., 1977;

• определение опюсигельнош содержания нейтрофилов и макрофагов с рецепторами к эритроцитам барана (Е-РОН и Е-РОМ, соответственно) по Дзержинской И.И., 1982; "

л

• опредэтенш отностнлыюго содержания нейтрофилов и макрофагов с рецепторами к СЗ компоненту комплемента (ЕАС-ГОН и ЕАС-РОМ, соответственно) по Дэержинжой И.И., 1982;

• ощяка бакгеринищюй активности в реакции сгклггашюго воостажвления нешрофилами и макрофагами нигротш^аэолшюго синего (НСГ-тест) гю Домину А-А., (1976) с определением относительного количества НСГ-позитивных клеток и ивджса восстаноалашя (и. а);

• опэнка резерва бактерицидной актишюсга в реакции индуцировашюго зилкваном восстановления нешрофилами и макрофагами нитротетраэали-евого синего (НСГз-тосл) по Демину АА, 1976;

• определяй® фагоцитарной акгишосгш нейтрофилов и макрофагов по поглощению неогюошвированных частиц латекса (d=l,45 мкм) по Сюч H.H., Бебаковой C.B., Шябалину В.И., 1992;

• определял® адгшисвшой активности нейтрофилов и макрофагов по Фримелю Г., 1987;

• определен!® апюсигелънэто содержа! шя основных популяций лимфоцитов перга£>еричэской крови и перигонеалыюй жидкости с помощью набора монокюнальных антител: CD3, CD4, CD8, CD16, CD72, меченных ФИТЦ (МедВюСпекгр, Москва) методом проточной цкгэфлюоримЕтрии на пруборе FACScan («Becton Dickinson», USA) по стандартной мелодике (Ohta J., FujuwaraK, NishiT.,OkaH., 1986).

Изучение влияния белков фертильности ТБГ и ПАМГ-2

на экспрессию рецепторов к СЗ компоненту комплемента и

- 11-

спонтанную и стимулированную зимозаном НСТ-активность перифериче ских нейтрофилов и перитонеальных макрофагов проводили in vitre Для этого 0,1 мл клеток в концентрации 2х106 кл/мл инкубировали с Средой 199, содержащей ТБГ или ПАМГ-2 в течение 1 часа при 37 °( Препараты ТБГ и ПАМГ-2 со степенью очистки около 75 % получали н кафедре биохимии Российского государственного университета (зав. - npoej Татаринов Ю.С.). ТБГ использовался в концентрации 60 мкг/мл, соответствии с ранее разработанными нормативами (Сотникова Н.Ю Бабакова JI.A, Петров Р.В., 1985). Оптимальную концентрацию ПАМГ-установили в результате изучения дозозависимош действия белка н показатели функциональной активности периферических нейтрофилов. Поел инкубации клетки отмывали Средой 199 в течение 10 мин при 1500 об/мин далее оценивали ЕАС-розеткообразование, спонтанную и индуцированну] зимозаном НСТ-активность нейтрофилов по стандартной методик« Параллельно дая исключения влияния самого процесса инкубации н оцениваемые параметры проводили часовую инкубацию клеток в Среде 19 в тех же условиях без стимуляции, затем отмывали клетк Средой 199 в течение 10 мин при 1500 об/мин и определял: показатели ЕАС-РОН, НСТ и НСТз и в дальнейшем использовал эти показатели для сравнения (контроль).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение показателей Т-клеточного звена иммунитета пери ферической крови не выявило достоверных различий в количествен ном содержании основных популяций лимфоцитов по данньп реакции розеткообразования в изучаемых группах, однако следуе отметить выраженную тенденцию к повышению количества теофил линчувствительных клеток (с 5,2 i0,9 % до 8,0 +.1,29 %, р > 0,05). При

этом отмечалось значительное угнетение выработки фактора, ингибирующего миграцию лейкоцитов в группе женщин с бесплодием (с 55,59±2,99 % до 79,18 ±3,11 %, р < 0,001).

Изучение популяций периферических лимфоцитов по экспрессии СБ-маркеров показало, что в основной группе достоверно снижалось количество лимфоцитов с фенотипом СЮЗ-Ь, СТМ+ (р < 0,001, р < 0,01 соответственно) и повышалось количество естественных киллеров (СЮ 16+) в 1,45 раза (р < 0,001). Полученные нами результаты показывают, что в периферической крови при эндометриозе происходит значительное снижение содержания Т-лимфоцитов за счет снижения количества Т-хелперов, происходящее на фоне угнетения продукции МИФ Т-лимфоцитами в ответ на стимуляцию ФГА.

Отмеченные нами изменения свидетельствуют о нарушении иммунорегуляторных проп)ессов на системном уровне, что, по-видимому, приводит к увеличению количества незрелых лимфоцитов. Это предположение согласуется с установленным нами увеличением пула Тфч клеток, которые в литературе описаны как незрелые лимфоциты.

Фагоцитарное звено иммунитета на системном уровне при эндометриозе характеризовалось повышением количества нейтрофилов с мембранными рецепторами к СЗ компоненту комплемента (р > 0,05), НСТ-позитивных клеток (р < 0,01), а также снижением значяшй индекса фагоцитарного резерва (с 1,43 ± 0,29 до 0,77 ± 0,14, р < 0,05) и показателей фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа нейтрофилов (р < 0,01 и р < 0,05 соответственно).

Таким образом, в А-звене иммунитета выявлен резкий дисбаланс между высоким уровнем активации и сниженной поглотительной активностью клеток, сопровождающейся отсутствием резерва функциональной активности. Вероятно, это отражает неспособность периферических нейтрофилов адекватно

- 13-

реализовать воспринятый активирующий сигнал, в результате чего нарушаются процессы элиминации патогенных агентов, в том числе и зндометриоид ных клеток. .

Для опенки иммунитета на локальном уровне нами были изучены характеристики иммунокомпететных клеток ПЖ. Было установлено, что £ перигонеальной жидкости достоверно уменьшалось количество СЕШ (с 70,86 ±1,11% до 64,39 + 1,39%, р<0,01) и СБ8+ (с 29,38 + 1,38 % дс 21,58 ±1,48%, р< 0,001) лимфоцитов и повышалось содержание ЕЖ (с 7,53 ± 1,05 % до 16,3 +1,6 %, р<0,001).

Складывается впечатление, что на локальном уровне происходи! угнетение активности циготоксических Т-лимфоцитов. Известно, что именнс эта популяция циготоксических клеток реагирует на измененные «свои» клетки и снижение их количества может быть одним из факторов, способствующих развитию эндометриоидных гетеротопий в брюшной полости.

Фагоцитарное звено иммунитета на локальном уровне при эндометриозе характеризовалось повышением количества НСТ-позитивных макрофагов (с 20,95 ±2,13% до 28,24 ±2,51%, р<0,05). Это согласуется с имеющимися в литературе данными о повышении уровня активации макрофагов ПЖ при эндометриозе. Кроме того, мы отмечали снижение значений ИФР (р>0,05), что отражает низкий резерв функционального потенциала макрофагов и свидетельствует о неспособности перитонеальных макрофагов при эндометриозе адекватно реагировать на антигеннук стимуляцию. Это также может иметь важное значение для развития эктопического эндометрия.

Таким образом, у женщин с бесплодием при эндометриозе имеют место значительные нарушения иммунитета. На системном уровне они характеризуются недостаточностью эффекторных и иммунорегуляторных Т-лимфоцигоЕ и дисбалансом в А-звене иммунитета, который проявляется высоким уровнем активации и отсутствием функционального резерва фагоцитов.

На локальном уровне происходит угнетение функциональной активности цитотоксических Т-лимфоцитов и усиление спонтанной бактерицидной активности перито'неальных макрофагов на фоне снижения их функционального реоерва.

Следующий этап иоследовашш предполагал поиск факторов, вызьшающих описанные 'выше иммунологические нарушения. К их числу мы отнесли ТБГ и ПАМГ-2, основываясь на литературных данных об их иммуномодулирукжцих свойствах при различных нарушениях репродуктивной системы.

Было изучено содержание в перитонеальной жидкости ТБГ и ПАМГ-2. Достоверных изменений по средним значениям ТБГ в перитонеальной жидкости обнаружено не было, однако, отмечалась выраженная тенденция к снижению уровня белка в ПЖ у женщин с бесплодием (с 9,68 ± 3,93 до 2,95 ± 1,31 нг/мл, р > 0,05).

Содержание ПАМГ-2 в перитонеальной жидкости у женщин с эндометриозом было достоверно выше, чем соответствующий показатель в контрольной группе (29,85 ± 6,75 и 50,0 ± 7,32 нг/мл, р < 0,05).

Для определения возможных механизмов действия белков на локальном уровне нами был проведен корреляционный анализ взаимосвязей между содержанием белков и показателями иммунного статуса в перитонеальной жидкости.

Сильных корреляционных связей между ТБГ и показателями иммунного статуса ПЖ в обеих группах выявлено не было.

Основные корреляционные связи выявлялись между содержанием ПАМГ-2 и показателями функциональной активности перитонеальных Макрофагов.

В группе здоровых женщин содержание ПАМГ-2 в ПЖ было : ■ напрямую связано с показателями ИФР, 1§<1 и 1§А и обратно -с количеством Тфр лимфоцитов. При эндометриозе отмечались сильные корреляционные взаимодействия между содержанием в ПЖ ПАМГ-2 и практически всеми показателями фагоцитарного звена иммунитета.

- 15-

Это позволяет высказать предположение, что установленные нами измененш иммунологических параметров фагоцитарного звена на локальном уровш частично обусловлены повышением уровня ПАМГ-2 в ПЖ женщин < эндометриозом.

Кроме того, нами была проведена серия экспериментов in vitro пс изучению влияния препаратов этих белков на показатели функциональной активности фагоцитов. В группе женщин с эндометриозом ТБГ не влиял ш активность периферических нейтрофилов и макрофагов.

У здоровых женщин балок повышал количество НСТ-позитивньп нейтрофилов (с 17,55±2,17 до 30,33±5,21%, р<0,05) И' значительно снижал резерв функциональной активности как нейтрофилов крови (с 1,36+0,22 дс 0,27±0,08, р<0,001), так и перитонеальных макрофагов (с 0,81+0,15 дс 0,24±0,11, р<0,01).

Особого внимания заслуживает установленное нами влияние препарате ПАМГ-2. В периферичэской крови ПАМГ-2 в группе контроля увеличивал коли чество нейтрофилов с рецепторами к СЗ компоненту комплемента (с 30,57+5,0 дс 48,1+3,66%, р<0,01) и их адгезионную активность (с 41,5+5,88 до 56,13+6,88%; р>0,05). В группе женщин с бесплодием ПАМГ-2 приводил к значительном! повышению количества НСТ-позтивных клеток в спонтанном НСГ-твсте (с 29,4±2,97до 39,63±3,56%, р<0,05).

В перитонеальной жидкости ПАМГ-2 приводил к значительному понижению показателей ИФР (с 0,81±0,15 до 0,09+0,01, р<0,001) и увеличению количества ЕАС-розеткообразующих макрофагов женщин контрольной группы (с 42,56+3,69 до 53,0+3,46%, р<0,05). В группе женщин с эндометриозом инкубация перитонеальных макрофагов с ПАМГ-2 незначительно повышала количестве клеток с рецепторами к СЗ компоненту комплемента и снижала их адгезионную активность (р>0,05).

Полученные нами результаты по различному влиянию препарата ПАМГ-2 на НСГ-активносгь периферических нейтрофилов здоровых женщин и женщин, страдающих наружным эндометриозом позволили предложить высокий (более 24%) показатель количества НСГ-позитивных нейтрофилов после их инкубации с ПАМГ-2 в качестве нового диагностического критерия данной патологии. При этом точность данного диагностического метода составила 84%, специфивдость - 86%, чувствительность - 83%.

Таким образом, полученные нами данные позволяют высказать предположение, что увеличение содержания ПАМГ-2 в ПЖ при эндометриозе имеет патогенетическое значение, так как данный белок напрямую связан с изменениями иммунологических параметров на локальном уровне.

По-видимому, ПАМГ-2 непосредственно регулирует функциональную активность фагоцитарных клеток, стимулируя экспрессию мелйран-ных рецепторов и бактерицидную активность фагоцитов и снижая резерв реагирующего пула перитонеальных макрофагов.

выводы

1. У женщин с бесплодием при наружном генитальном эндометриозе отмечаются значительные иммунологические нарушения как ш системном, так и локальном уровне, касающиеся в основном показателе£ А-звена иммунитета.

2. В периферической крови женщин с эндометриозом уменьшается количество СБЗ+, СЮ4+, повышается содержание СБ 16+ клеток V незрелых лимфоцитов, снижен уровень продукции МИФ. Изменения в А-звене иммунитета характеризуются повышением Н СТ - актив нос и нейтрофилов, количества фагоцитов с рецепторами к СЗ компоненту комплемента и их адгезии при сниженных значениях индексг фагоцитарного резерва и фагоцитарной активности.

3. В перитонеальной жидкости женщин с эндометриозом снижается содержание С03+ и С1)8+ клеток, повышается количество СЮ 164 лимфоцитов и уровень СВЗ+ клеток, не экспрессирующих СБ4 и СЮ£ маркеры на фоне увеличения количества незрелых лимфоцитов г усиления спонтанной бактерицидной активности макрофагов.

4. Содержание ТБГ в перитонеальной жидкости женщин с бесплодием при наружном генитальном эндометриозе уменьшается, а уровень ПАМГ-2 — значительно повышается, при этом отмечаются сильные корреляционные взаимодействия между содержанием ПАМГ-2 и показателями спонтанной и индуцированной НСТ-активности и индекса фагоцитарного резерва перитонеальных макрофагов женщин с бесплодием при наружном генитальном эндометриозе.

5. В периферической венозной крови здоровых женщин препарат ТБ1 усиливает спонтанную НСТ-активность нейтрофилов и снижает показателз индекса фагоцитарного резерва, не оказывая влияния на параметрь функциональной активности периферических нейтрофилов при эндометрио зе. Препарат ПАМГ-2 увеличивает содержание нейтрофилов с рецепторами к СЗ компоненту комплемента и их адгезионнук активность в периферической крови здоровых женщин и повышает

- 18 -

спонтанную бактерицидную активность нейтрофилов у женщин с наружным гениталъным эндометриозом.

6. Препарат ТБГ снижает количество НСГз-позитивных макрофагов и резерв их функциональной активности у фертильных женщин и приводит к уменьшению показателей индекса фагоцитарного резерва и адгезии перитонеальных макрофагов в группе женщин с бесплодием при наружном генитапьном эндомэтриозе. Инкубация перитонеальных макрофагов с препаратом ПАМГ-2 приводит к повышению количества клеток с рецепторами к СЗ компоненту комплемента и снижению значений ИФР в группе здоровых женщин, не оказывая влияния на функциональную активность перитонеальных макрофагов при бесплодии и эндометриозе.

7. Высокие значения НСГ-активности периферических нейтрофилов после их инкубации с ПАМГ-2 являются диагностическим критерием наружного эндометриоза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

У женщин с подозрением на наружный генитальный эндо-метриоз целесообразно проводить оценку иммунного статуса периферической венозной крови.

Для оценки состояния иммунной системы у женщин с бесплодием при наружном эндометриозе рекомендуется проводить исследование содержания СОЗ+, С04+ и СБ16+ популяций лимфоцитов в периферической крови, оценивать уровень выработки лимфоцитами МИФ, определять бактерицидную и

фагоцитарную активность нейтрофилов.

Повышение показателя НСТ-активности периферических нейтрофилов после их инкубации с ПАМГ-2 (более 24%) следует расценивать в качестве диагностического критерия наружного эндометриоза.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ РАБОТ

1. Взаимосвязь иммунологических показателей периферической крови перитонеальной жидкости у жешцин с наружным генитальным эндс мегриозом. // В сб: Пути развития современной гинекологии. - Москва. 1995. - С. 149 (в соавторстве с Н.Ю. Сотниковой, АВ. Кудряшово* Ю.С. Анциферовой, M.JI. Добрыниной).

2. Состояние иммунитета, у женщин с различными формами бесплодия. / В сб: Современные проблемы диагностики и лечения нарушени репродуктивного здоровья женщин. - Ростов-на-Дону. - 1998.- С. 32 (в соавторстве с Н.Ю. Сотниковой., Л.В. Посисеевой, Ю.С. Анциферовой M.JL Добрыниной).

3. Характеристика функционального состояния макрофагов перитонеально] жидкости у женщин с эндометриозом // В сб: Современные проблем! аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. Москва. - 1998. -С. 328 (в соавторстве с Н.Ю. Сотниковой Ю.С. Анциферовой).

4. Different subsets of peritoneal lymphocytes and peculiarities of their activatioi in women with external endometriosis // American Journal of Reproductiv Immunology. -1998. - Vol. 40, №4. - P. 271 (в соавторстве с Н.Ю. Сотни ковой, Ю.С. Анциферовой, JIB. Посисеевой, ТА- Соловьевой).