Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Секреторная функция нейтрофилов при острой физической нагрузке в эксперименте

МИНИСТЕРСТВО аиРАВООХРАНЕЗШ РОССИЙСКОЙ федераций ЧЕЛЯШЮКИЛ ГОСУДАРСТВЕШШ МЕДИЦИНСКИ»! ШСШГ7Т

На правах рукописи "Дая служебного пользования" Экз. л

Оюатор Александр Васильевич

СЕКРЕТОРНАЯ ФУНКЦИЯ НЕЙЕРОШОВ.ПЕИ ОСТРОЙ ШЗИЧЕСКОЙ НАГРУЗКЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.00.36 - аллергология я иммунология

А. В Т О Р Е 4> Е Р & Т диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Челябинск - 1992

Работа выполнена на кафедре микробиологии Челябинского ' государственного медицинского.института.

Научный руководитель: доктор тлттсквх наук, профессор ИЛ.Долгу шин

Официальные оппоненты: доктор медицинских ндук, профессор А.Н.Ыаянский доктор биологических наук, профессор Н.А.фомин

Ведущая организация - Институт экспериментальной медицины АГЛ

г. Санкт-Петербург.

Защита состоится срЛр&лЛ Ш2 года в /^ ^

-часов на заоеданаз специализированного Ученого совета К.084.01, Челябинского государственного медицинского института (454092, Челябинск, уд. Воровского* 64),

С диссертацией мохао ознакомиться в йайдаотеке Челябинска! медицинского института.

Автореферат разослан "М" а+гб*-^ 1392 года.

Ученый оекретзрь специализированного Ученого совета, ¡саадидат медициноких наук

Н.И.йигалова

Актуальность доследования,. Процессы кооперации между различными клетками иммунной системы являптся в настоящее время объектом пристального внимания ученых (Петров Р.В. и соавт., 1981; Адо А.Д., Цаянский А.Н., 1983; Брондз БД., 1987). Многочисленны-мя исследованиями достаточно полно изучено взаимодействие между различными популяциями лимфоцитов, лимфоцита'.« и макрофагам:: (Зеглсков D.M., 1983; ФреЙдлин U.C., 1У84; Манысо В.М..Хаитов P.M. 1985; V.akaman Б., IS76; Abba» А.К., I5&7» Tami J.A. IS£7).

Рассматривая вопросы участия нейтрофалов в каскадных процессах реагирования валунной систеш, ряд авторов отводит грануасцитам роль вспомогательных зффекторных клеток, которые лишь воспринимают и выполняют "команды" лимфоцитов а макрофагов (Klempner м. et al., 1979, 1983; Smith R. et al., I9£5 ) . Однако В последние годы появилось достаточное количество доказательств активной роля нейтрофилов в регуляции ¡функций аммуяокомпатентнизс клеток. Такие вещества, кал фактор активирующий тромбоциты (РАГ), эозано-фильаый хемотаксаческий фактор (ЭХФ), фактор стимулирующий фагоцитоз, ввделяются яейтрофилами и играют важную роль в системе межклеточной кооперации и регуляции тканевого гомеостаза (camu -si G. et al., ISfclï Czarnetaki В., Яшгаегшац H., I9EI; Iehiba-_

ahi г., Yamashita т., ISE5) • Биологически активные продукты грану ЛОЦ2ГОВ , объединенные общим названием лейкотриены, опосредуют оарокий круг эффектов, изменяя митогвниндуцированную трансформацию лимфоцитов, увеличивая адгвзшо а цитотоксическое действие нейтрофалов и усиливая процессы перевариваяия возбудителей инфекция макросами (Rae S., ISEI; Goetzl £. et al., ISeis Rola-Pleo-zesynaku M. et al., IÇ£3; Sun T., Gulr J., I9E4; Myers F. et al.,

IS64; Wirth j. et al.IS65.).Способность аэйтрофалов модифицировать такие функции макрофагов, как цитотоксичвскув, фагоцитарнув, сек-

реторную и цролифератдвнуо демонстрируют исследования й.И.Долгу-ашна и соавт. (1986), Е.А.Крашенинниковой (1987), j. Bird et ai., (1984), G.Speer et al. (1984).

Представленные данные свидетельствуют о способности иейгро-филов к активным разнонаправленным регуляторным влияниям на имму-ноциты.

Нейтрофилы очень быстро реагируют на любое стрессорвое воздействие, в том числе на физическую нагрузку (н5Н). Под влиянием мышечной деятельности увеличивается содержание полиморфноядерных лейкоцитов СВЫШЕ) в крови (Горпшова Т.Н., I960; Рябов К.П., 1972; Швнкарев С.И., 1983; Виниченко Н.С. я соавт., 1984). Действие ФН на нейтрофилы выратается не только в изменении их количественного состава, но и в нарушении функциональной активности гранулоци-тов. Так, максимальные нагрузки вызывают выраженную дегрануляцию и декатионазацию лязосом (Шинкарев С.И., 1983), снижают фагоцитарную и фермент ахи вну в активность ПМЯД (Талько В.Н. и соавт., 1986), угнетают их миграционную способность (Аронов Г.Е., Иванова Н.И., 1987). Следовательно; эффэкторный потенциал нейтрофилов подвержен супрессивному влиянию мышечных нагрузок.

Наследованиями сотрудников нашей кафедры было доказано,' что влияние таких сгрессорных воздействий, как ожог, травма и инфекция не ограничивается угнетением только функционального статуса ШЯЯ. Данные патологические процессы подавляют и секреторную функцию нейтрофилов, что в свою очередь, является одной из причин иммуносупрессии (Власов A.B., 1989; Зурочха A.B., Власов A.B. 1989; Зурочка A.B., 1990; Третьякова К.£., 1991). Однако вопрос об изменении регудяторной функции гранулоцитов при двигательной деятельности не изучался, а каких-либо литературных данных по этому вопросу нами не обнаружено.

Актуальность настоящей работы обусловлена еще и тем, что изучение секреторной функция ШЛИ и их шмунорегуляторных продуктов позволит разработать методы коррекции иммунодефицитов, возникающих в результате Ш.

Цель и задачи исоледов^нвд. Целью настоящей работы явилось экспериментальное исследование секреторной функции нейтрофилов при воздействии на организм однократной физической нагрузки.

Для реализации цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние однократной физической нагрузки на иммунный ответ» функциона!Ьнуа активность нейтрофилов и клеток системы мононуклеарных фагоцитов (С?,'Ф) экспериментальных животных.

2. Исследовать ишунорегулирующие свойства нейтрофилокинов интактных мышей и животных, выполнявших однократную плавательную нагрузку.

3. Экспериментально изучить возможность применения иммуностимулирующих медиаторов нейтрофилов для коррекции иммунных нарушений, возникающих в результате воздействия ФН.

Аатчвад новизда. В работе выявлено, что нарушения иммунореак-тивносги организма,. насту давите в результате выйолнения плавательной ФН, носят волнообразный характер! который характеризуется резким снижением показателей реактивности иилунокомпетентяых клеток сразу после нагрузки, стимуляцией их ^уяюронадьной активности х 3 суткам и нормализацией иммунных реакций испытуемых животных на 7 день.

Впервые показано, что одноразовая ФН влияет на регуляторнув функции нейтрофилов. Нарушение секреторной функции ШЛЯП выранает-ся в снижении продукции этими клеткаыи медиаторов, стимулирующих иммунные процессы, что является одной из причин супрессии функциональной активности клилунокомпетентных клеток, наступающей при

интенсивной мышечной ДбЯЕблЬ80б?й,

Как показано £ проввйеййых йбсяодоганиях, иммуностимулирующие свойства нейтрофйЯокийов сочетаются с их протективным и акто-иротвкгорнш действием ярй выполнении кшш алавательного теста.

В работе экспериментально обосйована принципиальная возможность применения имуяирувдйХ квлтгра^илокинов с целью предупреждения иммунной нсдаегач'очзоегк, вёсгуиаодей в результате воздействия Ж.

Теоретическое значение сабота. Эксперименталншди исследованиями установлено, что снижение эффекторного потенциала и ¡.зд но компетентных клеток, наступающее при мышечной деятельности, связано с угнетением секреторной функции нейтрофллов. Это свидетельствует об ашунорегулирующей роли полкморфпнуклеаров в процессах взаимодействия с вымуноцитами, при этом'взаимосвязь гранулоцитов с имму-нокомпетентными клетками осуществляется с помощью медиаторных контактов.

Получены экспериментальные данные о богатом регуляторноы арсенале активированных пейтрофилов, секреторные продукты которых обладают стимулирующим, протективным и актопротекторным действием.

Практическая ценность работы и внедрение полученных результатов. Работа носит фундаментальный .характер. Полученные результаты могут быть использованы в области физической культуры и спорта для дальнейшей разработки фигериев, определяющих степень на- . рутения нммуко'реахтивности организма при воздействии различных по характеру ФЯ.

Данные о высокой ишунотропаой активности нейтрофилокивов дата возиоанасть для разработки методов коррекции по дефицитные состояний, возникающих в результате выполнения интенсивной мышечной кагрузкг, с помощью медиаторов нейтрофилов.

Положения, рынориитае на ззаиту,

1. Нарушение иммунных процессов в органике датой, наступающее после выполнения вдвоташж Ш. носят стаяяйяыЗ характер и включает период супрессии, компенсация я'нормализация функций им.:уно-компетентных клеток,

2. При воздействии однократной ФН происходя? угнетение секреторной функции нейтрофилов, которое выражается в снижении продукции этими клетками яымуностиьчулирушдая медиаторов, что в свою очередь, является одной из причин супресеяи реактивности икмуно-цитов.

3. Предварительное внутривенное введение в организм мышей супернатаят.ов активированных нейтроФмов иятактных животных и дентидездеряащих продуктов САН человека предупреждает снижение функциональной активности яы^узодомяетевтянх клеток, наступающее аосле выполнения ш&аш ядагаревдого теста. Пептидная фракция А^ повышает противоинфекциояяую резистентность мшпей, выполняющих й!. Помимо протекгвдннх эффектов, исследуемые аейтрофилокины обладает ектопротекторв®« действием, увеличивая продолжительность плаваяия экспериментальны* кироунда,

Аппобапия работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на X ыекинститутской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1990), Всесоюзной конференции "Экологические аспекты иммунологических состояния" (Москга-Ллма-Ата, 1990) в совместном заседании кафедр вщунояогии и микробиологии Челябинского медицинского института (1991).

По теме диссертации опубликовано 2 работы.

Объем и структура диссертация. Диссертация изложена н страницах ыашшопися и состоит из введения, обзора лйтературн,

материалов и методов, трех глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 1$О источников, из них 36 отечественных зарубежных. Текст иллюстрирован 20 таблицами и 5 рисунками.

Материалы и методы исследований. Материал диссертации обобщен и оформлен на основании результатов проведенных экспериментальных исследований. Работа выполнена на 1850 половозрелых мыша>. линий СВА, СЗНА, гибридах Р£ (СБА х С57В1). Животные были получены из питомников АМН СССР "Крюково", "Рапполово".

Для исследования влияния шшачной деятельности на иммунологическую резистентность организма мышей мы использовали плавательный тест, в основу которого был положен метод воспроизведения ФН, предложенный И.С.Дурмишидзе (1984). Плавание проводилось в пластиковом сосуде размером 30x50 см с высотой водяного столба 20 см. Температура воды равнялась 28-2Э°С. Животные выполняли плавательную нагрузи до тех пор, пока уровень летальности в эксперименте не достигал 50$. Данный уровень летальности мышей, в плавательном теоте. использовался в дальнейшем как критерий однократной сгрессорной физической нагрузки.

Нарушение иммунного статуса организма под влиянием однократной $3 тестировалось наш по изменению способности мышей к иммунному ответу на эритроциты барана (ЭБ), с определением количества антителообразуюцих клеток в селезенке (АОК-ЭБ) (jerne ж.к., Worein Л.Л., 1963) я по.изменению функциональной активности нейтро-филов и резидентных перитонеальных макрофагов. Фагоцитарную активность нейтрофилов и'макрофагов оценивали по методу И.С.Фрейд-лин и соавг. (1976), в модофикаци? Л.Я.Эберта и соавт. (1983). Лизосомальную активность этих клеток определяли методом И.С.Фрейд-лин и соавг. (1980), в модификации Л.Я.Эберта и соавт. (1983).

1ля оценки способности фагоцитов восстанавливать- нитрасиний тет-зазолий (ИСТ) использовали метод в.lark et al.(I968). Хемилюми-1есценция нейтрофилов определялась в тесте люминолзависимой ла-гексиндуцированной хемилшинесценции методом А.В.Зурочки и соавт, 1989), с использованием счетчика Бетга-1 (СССР).

Секреторную функции нейтрофилов оценивали с помощью метода, разработанного П.И.Долгушиным и соавт. (1988). В качестве источ-шка секреторных продуктов нейтрофилов использовали чистые взвеси mix клеток. У доноров Ш.Ж выделяли из периферической крови пу-;ем центрифугирования на двойном градиенте фиколл-верографина [Wong I., Wilson в., 1975). У мышей эти клетки получали из перито-1еального экссудата через 6-8 часов после внутрибршинной иньек-цш 4 г,-л 1,2% раствора казеина. Содержание гранулоцвтов в Полуниных суспензиях составляло 95-98^. Выделенные гранулоциты дово-ила до концентрации 5 х 10®клеток/мл. Часть нейтрофилов инкуби-зовали в среде 199 без добавления активатора, другую -в присут-:твии частиц полистерольного латекса в течение I часа при 37°С. [осле инкубации взвеси клетки с частицами латекса удалялись'путем [ентрифугарования при 3000 об/мин в течение 10 минут. Для удале-1ия неосевших частиц латекса супернатанты дополнительно центрифугировали при 8000 об/шн в течение 5 минут и фильтровали через ¡ембранные фильтры с диаметром пор 0,24 ;;1км (Uiliipor, США).

Супернатанты активированных (САН) и интактных (СШ) нейтро-штв получали как от интактных мышей, так и от животных, выполовших однократную физическую нагрузку.

Продукты активированных гранулоцитов доноров подвергала пос-[едовательной ультрафильтрации через фильтры УШ-D 67G00 (Влади-юр, СССР), УА1,:-50 и гельхроглагографии с сефадексоы в - 15 (Phar-laaia , Швеция). Из семи полученных фракций, пятая фракция (А^)

обладала наиболее выраженным иимун ост иму лиру киша эффектом (Зуроч-ка и соавт. A.C. й 1536977 "Способ получения идауностимулвруюцих нейтрофилокинов" ДСП). Пятую фракцию активированных нейтрофилоки-нов подвергали дополнительной очистке методами высокоэффективной жидкостной хроматографии высокого давления на колонке с модифицированными селикогелями (watman íartiail 5 CDS-3 , Швейцария), получая при этом пептидное вещество (Долгушин И.И. и соавт. Положительное решение по заявке JS 4869II8 "Способ получения иммуностимулирующих аейтрофилокинов" от 26.06.91. ДСП).

Тестирование секреторной функции ШЯД проводили in vivo путем внутривенного с интервалом 48 часов введения в организм ин-тактных животных строго определенного количества САП, СШ1 интакт-ных мышей, а также нейтрофилокинов животных, выполнявших с последующим изучением фуавциоаальаой активности цейтрофилов, макрофагов и способности мышей, к иммунного ответу.

С целью исследования возможности использования нейтрофилоки-еов для предупреждения ишуаодефацита, возникающего после выполнения Однократной ФН, животным перед плавательным тестом триады с интервалом 48 часов вводили супернагаазы кнтакгиых мышей, А^ и пептидное вещество. После выполнения животными ФН определяли их способность к иммувноглу ответу и функциональную активность нейтро-филов и макрофагов мегодадш, приведенными выше. Влияние ¿5 на противоинфекциокную резистентность мышей-при выполнении ими ФН . оценивали путем определения средней продолжительности жизни (СПЕ) япзотнюс после проведения плавательного теста и введения под апоневроз задней лапки суточной культуры Та. aeruginosa в дозе Ю9 микробных тел на мышь.

Оценку актопротекторного действия нейтрофилокинов производили поясчето:.: средней максимальной продолжительности плавания в и с-

йользуемом тесте.

Полученные результаты обрабатывали методам вариационной статистики с использованием критерия Стыодента (Мерков А.1.1., Поляков Л. Е., 1Э74).

Результаты работы. Определение функциональной активности гранулоцигов и макрофагов- мышел, выполнявших плавательный тест, а также их способности к иммунному ответу позволило выявить фазовый характер изменения ивдунореакгивности животных под влиянием однократной ФН. Период кшунодепрессии, наступающий' на следующие сутки после выполнения мышами плавательного упражнения, характеризуется снижением всех исследуемых иммунологических показателей организма. Налицо угнетение фагоцитарной, лазосомальной и НСГ-вос-сган^вливашш.ей активности ШЯЛ и макрофагов. Наблюдается снижение показателей иммунного ответа (таблица I). Стадия компенсации, в течение которой увеличивается имлувореактввность приходится на 3 сутки после ФН. Седьмые сутки характеризуются нормализацией функций ишунной системы.

Угнетение функциональной активности нейтрофялов, регистрируемое после выполнения ¡щтащ Ш, может быть обусловлено различными "факторами, такими как изменение кислотно-щелочного состава крови под влиянием мышечной нагрузки и медиаторов межклеточного взаимодействия, опосредующих регуляторное воздействие иммунной и нейроэндокринной систем на фагоциты. Возможной причиной.снижения

функциональной способности гранулоцитов при напряженной мышечной

%

деятельности может быть поглощение Ш.Ж продуктов тканевого распада, что снижает их способность в обезвреживании другого чужеродного материала (Талько В.Н. и соавт., 1986).

Основываясь на литературных денных о тесном взаимодействии нейтрофилов с коноцитшли и макрофагами и влиянии веществ, синте-

Таблица I.

Влияние однократной ФН на функциональную активность нейтрофилов и резидентных перитонеальных макрофагов, а также на способность мышей к иммунному ответу на ОБ.

Иммунологические показатели

Индекс лизосомальной активности нейтрофилов (ПЛАН)

Интегральный фагоцитарный индекс нейтрофилов (ИФИ)

Процент НСТ-позитивных нейтрофилов

Индекс лизосомальной активности макрофагов (ИШ)

Интегральный фагоцитарный индекс макрофагов (Ш?Н)

Процент НСТ-позитивных макрофагов

Число антитело о бразувдвх клеток в селезенке х 102

Число ядросодержатоих клеток * в селезенке х Ю8 .

Стат. по-_____ОЭ25ПЫ_1Ивотных_

казагели Контроль Ыыши после _____(мыши в покое) ФН I суткг.

Ц + м 475,0+57,8 267+49,8

п 6 6

Р ¿0,05 .

К ± м 311,2+24,4 183+14,9

п 5 5

• Р ' -¿0,01

Г.5 ± м 70,4+ 3,26 36,0+ 3,34

Ь 5 6

Р <0,001

М + и 202,4+19,3 133 + ГО ,4

п .10 9

Р • ¿0,01

!«1 + к 104,5+11,7 63,3+13,2

п Ю 9

Р ¿0,05

и ± к 57,4 + 5,4 32,5+4,8

п 10 9

Р -¿0,01

Ы + ц 254,0+28,3 Г61+И,8С

п 16 16

Р _

11 + и 2,93+0,24 2,67+0,27

п 16 16

Р >0,05

Примечание: Р - показатель достоверности различий по отношению к контролю.

зйруеыых гранулоцитами на функция клеток CMJ> в норке (Pzurzancki и. et al., IÇE2, IÇ£4; Speer С.Г. et al., I9E4; lima M.P., Kierszen-baum F., I9£5, I9£7i Wasserman et al., 1987) и при различных патологических процессах и стрессорных воздействиях (Зе.мсков L......

1984; *рейдлин U.C., 1984; Паянскм А.Н., ;.1аянский Д.Н., 1080; Власов A.B., IS69; Третьякова И., 1991; ЗурочкаА.В., 1991) мокно предположить, что снижение уровня пилуиного ответа и угнетение функциональной активности макрофагов, регистрируемое нам;: в результате воздействия vil, связано с уменьшением продукции Гь.1ДЛ иммунотропных (¡акторов.

С целью изучения секреторной функции нейтрофилов и изменения ее в результате воздействия однократной £>¡1 мы получали нейтрофило-кины Gr интактных животных и мышей, выполнявших плавательный тест. Выбор I, 3, и 7 суток после <Ш для приготовления супернатаятов объясняется изменением иммунореактивности организма животных после плавания в эти сроки.

При изучении иммунотропной активности нейтрофилокинов било установлено, что С/Л интактных мышей оказывают выракенное стимулирующее влияние на способность мышей к иилунному ответу, а продукты неактивированных гранулоцитов угнетают эту способность. Изменение иммунного ответа под влиянием нейтрофилокинов может быть связано с воздействием последних на функциональную активность макрофагов. Результаты проведенных исследований показывают стимулирующее влияние САН интактных мышей на лизосомальную, ¿агоцитарную z ¡¡СТ-восстанавливающую активность резидентных макрофагов. Данные А.Б.Власова (1989) свидетельствуют о том, что одним из механизмов модуляции ишуааого ответа при введении мышам продуктов нейтрофилов может являгся действие нейтрофилокинов ва антигенпредставля-ющую функцию макрофагов.

Функциональный статус ШЯЛ .повышался как при воздействии САН, так и СНН интактных мышей. Аналогичное стимулирующее влияние медиаторов активированных и интактных ШЯД объясняется, по-видимому тем, что у животных нельзя выделить абсолютно интактные нейтрофи-лы для определения их функциональной активности. Получение их из очага асселтического воспаления (при введении раствора казеина) приводит к дополнительной стимуляции.

Таким образом, секреторная функция ПШЯ в норме характеризуется продукцией этими клетками веществ, обладающих иммунотропной активностью. При этом, активированные латексом гранулоциты ввделя-рт большее количество иммуностиодлируюнщх факторов чем интактные.

Исследование иммунотропной активности нейтрофилокинов г.аизей, рлученных после выполнения ими ФН, показало, что введение этих продуктов в организм интактных животных тоже изменяло'исследуемые иммунные показатели. Однако эти изменения носили другой характер, чем цри введения супернатантов интактных мышей. Следовательно, регуляторная функция гранулоцитов нарушается под воздействием ¿Н. Изменение секреторной функции нейтрофилов носит волнообразный характер. Период супрессии проявляется в угнетении севрецив полимор-фонуклеарами иммуностигзулируюцих веществ, о чем свидетельствует снижение показателей вщунного ответа и реактивности клеток-мишеней под влиянием супернатантов, полученных на I сутки, после плавательной нагрузки. Возможно, что эти нарушения функций иккуноци-тов связаны и с увеличением яммуносудрессирувдих медиаторов в дяннну супернатангах. Процес стабилизации регуляторного потенциала ШЯЕ заканчивается к третьим суткам, судя по нормализации показателей 'реактивности иммунокошетентных клеток. На 7 день после ФН се!феторная функция грану лоцитов несколько снижается (таблица 2)

Принимая во внимание, что угнетение ишунорвактивности орга-

Таблица 2

Влияние супернатантов активированных пейтрофилов интактных мышей и мышей выполнявших <Й1 (САН выделены на 1,3 и 7 сутки после выполнения ФН) на .функциональную активность перитонеальных макрофагов и иммунный ответ интактных реципиентов.

Бид воздействия Стат. показатели ИФИ - макрофагов Процент НСТ-положи-тельных макрофагов Число АОК-ОБ в селезенке х I02

I. Контроль - I Ц+м 175 + 9,74 80,0 + 2,08 206 + 19,8

(введение среда п 9 9 10

199) .

2. Контроль - 2 М+м 240 + 21,6 88,9 + 2,76 319 ± 20,12

(введение САН п 9 9 9

интактных мышей) Р <0,02 <0,02 <0,05

3. Введение САН, !а+м 112,2+ 12 64,8 + 4,21 190 + 11,5

полученных на I П ' 9 9 9

сутки после ФН р ■¿0,01 <0,01 >0,05

р <0,001 < 0,001 < 0,01

1. Введение САН« М+м 210,7£ 12,5 ' 91,0 + 7,04 284,6+ 28,1

полученных на 3 п 8 • 8 • 9

зутки-после ФН .Р ¿0,05 >0,05 < 0,05

Р >0,05 . .>0,05 >0,05

5. Введение САН ц+м 195 + 24,82 та ,8 + 4,21 207,4+ 21,5

юлученных на 7 п 8 а 9

зутки после ФН р >0,05 >0,05 >0,05

р >0,05 >0,05 <0,01

[римечание: Рр % ~ показатель достоверности различий по отношению к I и 2 грушам.

низма мышей на следующие сутки после выполнения плавательного теста совпадают с аналогичными изменениями секреторной функции нейтрофилов, можно заключить, что одной из причин развития иммунодефицита, возникающего при мышечной деятельности, может являться уменьшение выброса гранулоцитами иммуностимулирующих медиаторов. В таком случае, предварительное введение этих продуктов животным, выполняющим плавательную нагрузку, будет препятствовать угнетению иммунной реактивности организма.

Изучая возможность коррекции иммунного статуса организма с помощью нейтрофилокинов, мы исследовали иммунокорригирующий эффект не только супернатантов мышей, но и А^ - пептидсодержащей фракции САП человека и пептидного вещества, выделенного из нее (Долгушин И.И. и соавг., 1991).

Результаты проведенных экспериментов показали, что внутривенное введение САП.мышей и пептидных продуктов САН человека, предшествующее•плавательному упражнению, благоприятно сказывается на состоянии клеток иммунной системы. При этом, полностью исключается супрессия поглотительной способности нейтрофилов и макрофагов, не наблюдается уменьшения лизосом в цитоплазме и КСТ- " восстанавливающей активности этих клеток после выполнения экспериментальными животными $1. Помимо этого, Ас- восстанавливает по-

О

казатель ИХЛ нейтрофилов. Кроме иымунокоррагирующего воздействия на. НУЛИ и макрофаги, данные нейтрофилокины препятствовали угнете- ' аию иммунного ответа мышей на ЭБ (таблица 3).

Продукты неактивированных гранулоцитов интактных мышей обладали стимулирующим действием только в отношении функциональной активности нейтрофилов.

Оценивая степень воздействия тестируемых медиаторов ПЫЛЕ на реактивность яммунокоипетентвых клеток, можно отметить более мощ-

Таблица 3.

Имдунокорригирующие эффекты нейтрофилокинов.

Супегнатанты Иммунологические показатели интакпшх мышдй

СМ СНН

Пептидные продукты САН человека

Фракция Ыоновещес-

д тво из 5 %

Кзйтрофилы [. Лизосомальная активность

2. Активность фагоцитоза

3. Интенсивность фагоцитоза 1. ИФИ

5. СХЛ 5. ИлЛ

7. НСТ-активность 3. НСТ-интенсивность

+ + +

+ ¥

+ + + +

+ + + +

Макрофаги [. Лизосомальная активность 2. Активность фагоцитоза

Интенсивность фагоцитоза 1. Ш1

НСТ-активность 1. йСТ-интенсивность .

[. Имг.1унный ответ на ЭБ

+ +

+ + + +

+ + ■ + +

+

¡римечание: + - наличие корригирующего эффекта, -корригирующего эфТекта.

- отсутствие

ный протективный эффект пептвдсодержащих продуктов CAII человека, нежели еулераатангов мышей, Возможно это связано с тем, что стимулирование казеином нейтрофилы перитонеального экссудата кивот ных, шдедешше для приготовления супернатантов, реализуют часть своего рсгуляторного потенциала еще в организме мышей. Следовательно, в дальнейшем при инкубации с латексом ШЯЛ выделяют мень oes количество иммуностимулирующих факторов {Власов А.Е., 1989).

Таким образом, в проведшадк »©следованиях экспериментально обосновала возмовдост$ лслользаванйя .нейтррфмоглнов для предотвращения ишуводепре.седи организма, возникающей в результате воз' действия однократной физической вагрузкв.

Учитывая внсокуда степень шэдвотропной активности вейтрофи-докинов z эффективность их протективзого воздействия на реактив-йость имцунокомветеатанзс клеток, необходимо было определить способность медиаторов вейтрофядов уменьшать тяжесть инфекционного процесса.

Результате проведенного исследования даказаля, что предварительное внутривенное введение- цедтидаого продукта Ag снижало детальность животных. мфицяроваяных Pe, после. вдаодне. ния ишз Щ, на 30%, Додазатель С1Ш мышей, получавших перед вщюл> вен и ем плавательного теста я щфицвррвааием повышался на 118; С Р 0,05).

Таким образом, если влияние биодогичесяз ектидаих девтйдов нейтрофидов на реш^иадосгь издвоко.'.тгьетентншс клеток доказывает вх активную роль в регуляции внутревнег.0 гомеост.ада оргакгама на клеточном уровне, то способнрст*. нейтрофидокинрв повышать резистентности к инфекции демонстрирует участие ах в кизнеобеспечени! организма в целом. • '

Исследования в области неВроинмунологии определили основные

¡ехапизш реализации взаимодействия нервной и иммунной систем, акболее подробно изучены закономерности нейрогуморальной регуля-ки различных звеньев иммунной системы (Корнева Е.А. и соавт., 282, ISS0; Михайлова A.A., 1990; Seidel J», 1989). Между тем, ос-ается ;,-.алоисследованншл влияние медиаторов нейтрофилов на нерв-ую систему, которая играет решающую роль в обеспечении механиз-юв адаптации к внешним воздействиям, в том числе к стрессу.

Влияние антистрессорного действия нейтрофилокинов на механиз-я адаптации животных изучали на модели wli (плавательный тест), сследование показало, что трехкратное введение секреторных про-уктов И.1ЯЯ интактных мышей, а также донорских САН и пептидсодер-ащей фракции А^ увеличивало продолжительность выполнения плава-ельной физической нагрузки до летального исхода, что свидвтель-твует о нарастании адаптивных возможностей мышей.

Проведенные исследования позволяют констатировать, что био-огически активные продукты гранулоцитов обладают актопротектор-ш свойством и являются модуляторами механизмов взаимодействия ммупной и нервной систем, которое ведет к повышению устойчивос-и организма к внешним воздействиям. '

выводы ; •

1. При Еыпонении плавательного теста, испльзуеыого в работа ! качестве модели однократной физической нагрузки, наблюдается

ри стадии изменения иммунной реактивности организма мышей: пери-д имцунодепрессии, возникающий сразу после физической нагрузки; :ериод компенсации, характеризующийся повышением ишунореактиз-:ости и период нормализации функций иммунной системы.

2. Однократная.физическая нагрузка вызывает нарушение секреторной функции нейтрофилов, что проявляется в снижении продук-

цик медиаторов о .иммуностимулирующими свойствами. Угнетение ре-гуляторпой функции гранулоцитов является одной из причин возникающей при физической нагрузке супрессии реактивности имлуноком-петенгных клеток.

3. Введение секреторных продуктов активированных нейгрофи-лов интактных мышей, пептидсодержащей фракции А^ и пептидного вещества сукернатантов активированных нейтрофилов человека препятствует сяииенир реактивности макрофагов, гранулоцитов и уровня иммунного ответа мышей, выполняющих физическую нагрузку.

4. Продукты активированных нейтрофилов повышают противоин-фекционную резистентность аизотных после выполнения ими плавател! ного теста и обладают выраженным актопротекторным действием, увеличивая продолжительность выполнения физической нагрузки.

5. Нейтрофилы, реализуя свой регудяторный потенциал, принимают активное участке в поддержании гомеостаза организма при воздействии физической нагрузки.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ГШЕ ДИССЕРТАЦИЙ

1. Влияние острой физической нагрузки на функциональную активность нейтрофилов // Факторы неточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях: Тез.докл. X научн.конф. Челябинск, 1990. - С..107-108.

2. Состояние фагоцитов периферической крови у высококвалифицированных спортсменов // Экологические аспекты иммунопатологических состояний: Тез.докл. Всесотан.научн.конф. - и.- Алка-Ата, 1990. - С. 103 (Соавг. Д.Н.Гйатвеева, Д.А.Дятлов, В.А. Колу-паев, Н.И.дигалова).

Подписано ж печати 26.12.91. Формат 60X90 I/I6. Печ. л. 1,25. Уч.-изд. л. 1,0. Тирах 100 эвз. Заказ 5/1. УОП ЧШ..