Автореферат и диссертация по медицине (14.00.30) на тему:Роль внутривидового типирования госпитальных штаммов при эпидемиологической оценке внутрибольничных инфекций новорожденных

РГВ

2 3

ОД

На правах рукописи МОРОЗОВА ОЛЬГА ТИМОФЕЕВНА

РОЛЬ ВНУТРИВИДОВОГО ТНПИРОВАНИЯ ГОСПИТАЛЬНЫХ ШТАММОВ ПРИ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ ВНУТРИБОЛЬНЙЧИЫХ ИНФЕКЦИЙ НОВОРОЖДЕННЫХ

14.00.30 - Эпидемиология 03.00.07 - Микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва, 1997

Работа выполнена в Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Семина H.A.

кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Прямухина Н. С.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

Соколова Н.Ф. доктор медицинских наук Влодавец В. В.

Ведущая организация - Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф.Гамалеи РАМН

Защита состоится июня 1997 г. на заседании диссертационного совета Д 074.19.01 в Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии Минздрава РФ (111123, Москва, ул. Новогиреевская, д. За)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЦНИИЭ Минздрава

РФ

Автореферат разослан мая 1997 г.

, профессор , профессор

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук

Пиыенова Ы.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Широкое распространение внутрибольнич-ных инфекций (ВБИ) возможно в стационарах любых профилей, однако особую актуальность они представляют для акушерских стационаров.

Важность проблемы неонатальных ВБИ в России определяется прежде всего тем, что эти инфекции усугубляют ситуацию по снижению рождаемости в стране, осложняют соматическую патологию новорожденных, представляя угрозу для полноценного развития нового поколения (Ген-чиков Л.А., 1993, 1996 г.; Покровский В.И.,1996 г.; Венцел Р.П.,1990). Интенсивные показатели регистрируемой заболеваемости ВБИ среди новорожденных в Российской Федерации в 1992 - 1995 гг. в 3-10 раз превосходили соответствующие показатели среди получавших помощь в других медицинских учреждениях. Удельный вес неонатальных ВБИ в указанное четырехлетие являлся также наибольшим в РФ, составляя от 27,1 до 33,6Z в суше всех ВБИ. Нередки вспышки новокомиаль-ных инфекций среди новорожденных, которые сопровождаются повышенной летальностью (в 1992 - 1994 гг. ее показатели колебались от 8,2 до 11,8%.) (Семина H.A., Прямухина Н.С., 1993, 1996 г.).

Не вполне эффективная борьба и профилактика неонатальных ВБИ теснейшим образом связана с недостаточной изученностью эпидемиологии этих инфекций. По официальным материалам расследования вспышеч-ной заболеваемости неонатальными ВБИ известно, что источники возбудителей этих инфекций и факторы их передачи устанавливаются менее чем в половине вспышек. Возникают серьезные затруднения в определении этиологии вспышек. При выделяемых у пострадавших новорожденных микроорганизмов, нередко в ассоциативной форме, остается не установленным конкретный возбудитель, определяющий этиологию вспышки.

Одним из проблематичных вопросов в эпидемиологии неонатальных ВБИ остается дифференцирование микробной колонизации от инфекции. В

- г -

решении этого вопроса важная роль принадлежит использованию систем маркирования штаммов микроорганизмов, в том числе госпитального происхождения. Однако в нашей стране до сих пор применение внутривидовой дифференциации госпитальных штаммов в целях эпидемиологического анализа ВБИ или анализа этиологической значимости микроорганизмов весьма ограничено.

Представляется, что одним из путей для получения более полных познаний по эпидемиологии ВБИ, в частности неонатальных, может быть широкое использование известных или разработка новых методов внутривидового типирования штаммов ведущих микроорганизмов в инфекционной патологии новорозкденных. Эта мера позволит осуществлять более детальный и тонкий анализ эпидемиологических ситуаций по ВБИ, в том числе в акушерских стационарах.

С учетом вышеизложенного, цель» работы явилось определение роли внутривидового типирования госпитальных штаммов при эпидемиологической оценке внутрибольничных инфекций новорожденных.

В соответствии с поставленной целью основными задачами исследования являлись;

Изучить эпидемиологические особенности внутрибольничных инфекций новорожденных.

2. Провести микробиологический мониторинг за ВБИ новорожденных и определить его значимость в системе эпидемиологического надзора.

3. Изучить биологические свойства и провести маркирование штаммов микроорганизмов, выделенных у новоровденных,

4. Оценить роль внутривидового типирования госпитальных штаммов при анализе внутрибольничной заболеваемости и бактериальной колонизации новорожденных.

Научная новизна. Используя микробиологический мониторинг и маркирование госпитальных штаммов бактериальных видов микроорганиз-

мов, выделенных у новорожденных, впервые показана возможность дифференциации внутрибольничной инфекции и колонизации и расшифровки сложных эпидемиологических ситуаций.

- Методом серотипирования К.pneumoniae установлена неодинаковая значимость различных К сероваров клебсиелл при разных новофор-мах ВБИ. Инфицирование новорожденных сероваром К25, как правило, приводило к развитию у них пневмонии, а сероварами К2, К13, К24 и К67, в основном, - к развитию менее тяжелых нозоформ (конъюнктивит, омфалит и др.).

- Впервые показана возможность использования метода биотипиро-вания Е,cloacae по Олду в модифицированном варианте для маркирования штаммов энтеробактеров.

- В результате оптимизации метода серотипирования К. pneumoniae клебсиеллевными сыворотками- отечественного производства впервые показана возможность определения "моно" к сероваров у полиагглютина-бельных штаммов клебсиелл, что уменьшило число "нетипируемых" штаммов и тем самым повысило эффективность метода.

- Выявлена высокая частота колонизации новорожденных оксапил-линустойчивыми штаммами S.epidermidis и S.haemolyticus.

- Установлена целесообразность применения теста на фаголизис К.pneumoniae в целях ранней бактериологической диагностики клебси-едлезной инфекции.

Практическая ценность работы. Маркирование микроорганизмов обеспечивает углубленный эпидемиологический анализ заболеваемости ВБИ новорожденных с дифференциацией колонизации и заболеваемости.

Обоснованы рекомендации для практического использования оптимизированного метода серотипирования К.pneumoniae и модифицированного варианта метода Олда для биотипирования Е.cloacae, ранее не применявшегося в отечественных исследованиях.

Дано обоснование практического применения теста с клебсиеллез-ными поливалентным и моновалентным фагами в целях ускоренной этиологической диагностики клебсиеллезной инфекции.

Внедрение результатов исследований в практику. Результаты исследований используются при эпидемиологической оценке заболеваемости ВВИ новбровденных Российским Центром по внутрибольничным инфекциям, а также при проведении семинаров по внутрибольничным инфекциям в Российской-медицинской академии последипломного образования.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на: Российской научно-практической конференции "Актуальные проблемы внутрибольничных инфекций" (Москва, 1993 г.), 9-ом конгрессе по химиотерапии стран Средиземноморья (Милан, Италия, 1994), 7-ом Европейском конгрессе по клинической микробиологии и инфекционным болезням (Вена, Австрия, 1995 г.), на V Российском съезде специалистов по лабораторной диагностике (Москва, 1995 г.), на семинарах для врачей тематических циклов Российской медицинской академии последипломного образования, на конференциях лаборатории госпитальных инфекций ЦНИИ эпидемиологии МЗ РФ.

Диссертационная работа апробирована на межлабораторной конференции ЦНИИ эпидемиологии Минздрава РФ.

Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 12 опубликованных научных статьях.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на листах машинописи и состоит из введения, обзора литературы (3 главы), 5 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 4 рисунками и 36 таблицами. Библиография включает 199 источников, в том числе 62 отечественных и 137 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Работа выполнена на базе родильного дома и отделения патологии новорожденных (ОПН) центральной районной больницы (НРБ) г.Подольска Московской области, где проводился зпидемиологиический и микробиологический мониторинг в течение 1992 - 1993 гг.

Материал исследования включал годовые отчеты Подольского городского центра Госсанэпиднадзора о заболеваемости внутрибольничны-ми инфекциями новорожденных, данные официальной статистики о заболеваемости ВБИ в Московской области и Российской Федерации, а также наблюдения в родильном доме.

Под наблюдением находился 131 новорожденный. Исследовано 335 штаммов микроорганизмов, выделенных от новорожденных и из объектов окружающей среды.

В работе использовали эпидемиологический, микробиологический и статистический методы исследования.

На протяжении всей работы осуществлялся эпидемиологический надзор, проводилось эпидемиологическое обследование, анализ ретроспективной и текущей заболеваемости новорожденных, определяли удельный вес. Показатели заболеваемости ВБИ сопоставляли с областными показателями и федеральными. Проанализирована нозологическая и этиологическая структура ВБИ.

Выделение и первичную идентификацию культур микроорганизмов осуществляли специалисты бактериологических лабораторий Подольского центра Госсанэпиднадзора и ЦРБ, Для дальнейшего исследования культуры направляли в лабораторию госпитальных инфекций ЦНИИ эпидемиологии МЗ РФ для идентификации и маркирования.

Биохимические свойства штаммов микроорганизмов изучали с помощью микросистем API 20Е и API Staph (фирмы bioMerieux, France). С

помощью последней видовую дифференциацию стафилококков проводили в соответствии с классификацией по Kloos и Schleifer.

На этапе первичной идентификации К.pneumoniae была испытана проба с коммерческими лечебными клебсиеллезными очищенными жидкими бактериофагами (поливалентным и моновалентным), изготовляемыми в Научно-производственном объединении "Иммунопрепарат", Уфа.

Чувствительность штаммов энтеробактерий (К.pneumoniae и Е.cloacae) к антибактериальным препаратам изучали с помощью системы АТВ G- (MoMerieux, France), включавшей 14 препаратов.

У штаммов S. epidermldis и S.haemolyticus чувствительность к антибактериальным препаратам определяли с помощью системы АТВ Staph (bioMerieux, France), включавшей 15 препаратов, в том числе и окса-циллин (ОХА). С помощью той же системы АТВ Staph дополнительно была определена гетерогенная резистентность к оксациллину путем использования АТВ Na Medium, в составе которой в отличие от АТВ Medium содержится 5Z NaCl. Штаммы S.epidermldis испытывали на чувствительность их к метициллину (Met) с помощью диско-диффузионного метода на среде "Iso-sensitest" agar и дисков с метициллином (10 мг) фирмы "Oxoid", Великобритания.

Внутривидовую дифференциацию К.pneumoniae проводили по К антигену с помощью набора коммерческих клебсиеллезных сывороток к 77 К антигенам (Kl - К72, К74, К79 - К82) фирмы "Илья Мечников" в реакции агглютинации на стекле.

Для маркирования Е.cloacae по биохимическим реакциям в серии специальных экспериментов испытали два метода биотипирования знте-робактеров с целью отбора оптимального: 1) оригинальный по Олду (Old D.C., 1982)., 2) модифицированный того же автора ( Garaizar J. et al., 1991). Субстратами, предназначенными для биотипирования по Олду (оригинальному и модифицированному вариантам) послужили сахара

и спирты (адонит, дульцит, инозит, альфа-метилглюкозид, рамноза, эскулин или салицин) и соль органической кислоты (натрия малонат).

При проведении исследований по маркированию штаммов и определению чувствительности к антибактериальным препаратам в качестве контролен использовали референс-штаммы: К.pneumoniae КЗО - из Шведской коллекции, Е.cloacae №10005 из лондонской Национальной коллекции типовых культур (NCTC), S.epidermidis №14990 из американской коллекции типовых культур (АТСС); S. saprophytics №15305 (АТСС); S.aureus №25923 (АТСС); E.coli №25922 (АТСС) из той же коллекции.

При статистической обработке результатов некоторых проведенных исследований были использованы методы вариационного анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Проведенный ретроспективный анализ заболеваемости ВБИ новорожденных в родильном доме в 1992 - 1994 гг. позволил установить, что заболеваемость новорожденных удерживалась на высоком уровне с показателями на 1000 родившихся живыми в 1992 г. - 108,9, в 1993 г. -124,8 и в 1994 г. - 91,6. Эти показатели в 3 - 4 раза превышали областные показатели и в 9 - 10 раз - федеральные.

Высокий уровень ВБИ среди новорожденных в родильном доме в основном определялся одной из нозоформ - пневмонией, удельный вес которой в общей нозологической структуре неонатальных ВБИ составлял более 30 - 50%.

В результате ретроспективного эпидемиологического анализа было установлено, что при вспышке ВБИ среди новорожденных в июне 1992 г. доминирующей нозоформой была также пневмония, ее доля достигла 63,0%. Во время вспышки пострадало 54 новорожденных, из которых у 34 была диагностирована пневмония и у 6 сепсис и менингит (4 и 2

соответственно). Умерло 4 новорожденных (3 от пневмонии и 1 от сепсиса). Причиной вспышки послужило нарушение салитарно-противоэ-пидемического режима вследствие аварийной ситуации (прекращения горячего водоснабжения) и предшествовавшего временного размещения физиологического отделения в обсервационном (косметический ремонт). Этиология вспышки не была точно определена, не выявлены и факторы распространения инфекционного агента. В числе выделенных микроорганизмов у пострадавших при вспышке новорожденных (заболевших, умерших) преобладали S. epidermidis и К.pneumoniae (50,0 и 39,5% соответственно), при этом у одной трети пострадавших детей были выделены оба бактериальных вида.

Осуществленный нами эпидемиологический надзор за ВБИ, включавший микробиологический мониторинг, позволил, во-первых, установить уровень и структуру внутрибольничной инфекционной заболеваемости новорожденных, и, во-вторых, определить спектр выделявшихся у детей микроорганизмов.

При наблюдении у 53 (40,5%) новорожденных были выявлены ВБИ. Ш числа последних семь были недоношенными, у сорока четырех была отмечена сопутствующая соматическая патология, представленная двумя или несколькими формами.

Среди ВБИ наибольший удельный вес составила пневмония (71,7%), меньший - конъюнктивит (20,7%), инфекции кожи и мягких тканей составили менее десяти процентов.

В числе выделенных у наблюдавшихся новорожденных во время мониторинга микроорганизмов были: К.pneumoniae - 18,1%, другие виды клебсиелл - 1,5%, E.cloacae - 22,9%, другие виды энтеробактеров -5,3%, Е.coli - 4,8%, различные виды Proteus - 4,6%, A.calcoaceticus - 0,5%, S.epidermidis - 35,1% и S.aureus - 7,1%. Доминировавшие К.pneumoniae, E.cloacae и S.epidermidis суммарно составили 76%.

В результате изучения биохимических свойств штаммов микроорганизмов уточнена их родовая и видовая принадлежность. Все исследованные штаммы микроорганизмов обладали биохимическими свойствами, соответствующими таксономическим характеристикам их видов. Установлено 4 доминировавших вида микроорганизмов: К.pneumoniae, Е.cloacae, S.epidermidis и S.haemolyticus.

Анализ результатов изучения чувствительности к антибактериальным препаратам этих видов микроорганизмов показал, что все они были полирезистентны (устойчивы к трем и более антибактериальным препаратам) , причем наибольший удельный вес составили штаммы, устойчивые к 5 и более антибиотикам. Все изученные штаммы К.pneumoniae были резистентны к ампициллину и карбенициллину, но всего лишь пятая часть изученных штаммов была устойчива к аминогликозидам и цефалос-поринам третьего поколения. Почти все штаммы Е.cloacae были резистентны к аминогликозидам и цефалоспоринам третьего поколения. Подавляющая часть штаммов S.epidermidis и S.haemolyticus была резистентна п оксациллину (80,0 и 97,0% соответственно).

Испытана и дана оценка теста с лечебными клебсиеллеаными поливалентным и моновалентным фагами на изученных штаммах К.pneumoniae. Установлено, что испытанные поли- и моновалентные фаги лизировали исследованные штаммы клебсиелл в пределах трех четвертей и более чем двух третей, соответственно. В абсолютном большинстве фаголизис клебсиелл хорошо просматривался невооруженным глазом. Тот факт, что при исследовании парных штаммов К. pneumoniae в этом тесте были получены повторяемые результаты у штаммов со своей эпидемиологической меткой по К антигену, свидетельствует о стабильности этого метода и его надежности. Полученные данные впервые обосновывают возможность применения пробы на фаголизайельность К.pneumoniae с целью ранней бактериологической диагностики клебсиеллезной инфекции. Этот тест

может быть применен на этапе отбора подозрительных на клебсиеллы колоний с получением предварительного ориентировочного ответа на вторые сутки или на этапе первичной идентификации подозреваемой на клебсиеллы культуры с получением ответа о вероятном выделении возбудителя клебсиеллеза на третьи сутки, что ускоряет установление этиологического диагноза. Постановка рекомендуемого теста очень проста и не требует дополнительных трудовых и материальных затрат.

Результатом выполненных экспериментов методического характера явилась оптимизация метода серотилирования К.pneumoniae и отбор оптимального варианта ранее не применявшегося в стране метода биоти-пирования по Олду.

Отработка оптимального метода серотипирования К.pneumoniae включала способ селекции капсульных форм этих бактерий и определение конкретного К серовара у полиагглютинабельных штаммов К.pneumoniae. Как показали наши исследования, преимуществом обладал метод микроскопии тушевого препарата по сравнению с методом просмотра колоний в косопроходящем свете. Определение К серовара у полиагглюти-- набельных штаммов достигалось путем постановки реакции агглютинации на стекле с сыворотками (с двухкратными последовательными разведениями) .

Следующие исследования были посвящены апробации метода биохимического типирования E.cloacae по Олду (оригинальному и модифицированному) и отбору оптимального. Оба испытанных нами метода биоти-пирования E.cloacae позволяют получать четкие и стабильные результаты. Вместе с тем, по нашему мнению, предпочтителен модифицированный метод Олда: во-первых, он не ограничивает числа выявляемых био-варов; во-вторых, не требует альфа-метилглюкозида, не всегда доступного для приобретения в микробиологической практике; в-третьих, позволяет получать сравниваемые с зарубежными данные о циркуляции

различных биоваров Е.cloacae, так как, если судить по литературе последнего времени, зарубежные исследователи пользуются именно этим методом.

По полученным результатам вышеуказанных методов обоснованы рекомендации для их использования в практических лабораториях.

Штаммы четырех доминировавших видов микроорганизмов (К.pneumoniae, Е.cloacae, S.epidermidis и S.haemolyticus) были маркированы.

При использовании метода серотипирования К.pneumoniae по К антигену из всех изученных штаммов удалось установить К серовары в 84,5%. Следует отметить, что из всех штаммов клебсиелл-, выделенных от пациентов (новорожденных из родильного дома и ОПН и от больных детского инфекционного стационара), К серовар был установлен в 89,4%, все штаммы, выделенные из объектов окружающей среды акушерского стационара, были нетипируемыми. Среди новорожденных в акушерском стационаре циркулировали три серовара - К2, К13 и К67, а в ОПН - серопейзаж был более разнообразен и включал 7 сероваров (К13, К14, К24, К25, К48, К54, К67, из которых доминировали К24, К25 и К13). В неакушерском стационаре у детей с диагнозом ОКИ, являвшихся как бы контрольным контингентом, определены 8 различных сероваров, но с преобладанием К14, составившего 36,4%, остальные - единичные; серопейзаж в целом явно отличался от такового в акушерском стационаре и ОПН для новорожденных.

Используя метод внутривидовой дифференциации Е.cloacae по биохимическим реакциям в модифицированном варианте Олда, мы установили, что Е.cloacae, выделенные от новорожденных иэ родильного дома и ОПН, по биоваровой эпидемиологической метке в абсолютном большинстве относились к биовару 62 (97,9%) и всего лишь 2 штамма - к другой эпидемиологической метке (биовару 22). Штаммы от пациентов стационаров неакушерского профиля характеризовались широким спектром

биоваров, включавшим бисшары 20, 22, 23, 26 и 62.

Полученные данные по маркированию штаммов К.pneumoniae, Е.cloacae, S.epidermidis и S.haemolyticus, выделенных у 131 новорожденного, при сопоставлении с данными о наличии или отсутствии у них ВБИ дали возможность определить этиологическую роль каждого из этих четырех бактериальных видов.

При сравнении частоты выделения четырех указанных видов микроорганизмов в группах детей с ВБИ и без ВБИ обращает на себя внимание значительно более частое обнаружение К.pneumoniae в первой группе (60,3% против 37,2%)(р< 0,05), тогда как существенных различий в частоте выделения Е.cloacae, S.epidermidis и S.haemolyticus не наблюдалось (табл.). У новорожденных с ВБИ клебсиеллы не только обнаруживали чаще, чем другие виды микроорганизмов, но они опреде-

Таблида

Сравнительные данные о частоте выделения К.pneumoniae, Е.cloacae, S.epideraidis и S.haemolyticus в группах новорожденных с.ВБИ и без ВБИ

Вид микроорганизмов Число новорожденных с ВБИ, выделявших бактерии (п=53) Число новорожденных без ВБИ, выделявших бактерии (п=78)

абс. % * m абс. % * m

К.pneumoniae: Е.cloacae: S.epidermidis: S.haemolyticus:

всего

в том числе без ассоциантов

всего

в том числе без ассоциантов

всего

в том числе без ассоциантов

всего

в том числе без ассоциантов

32 60,3± 6,84

16 30,2±11,47

23 45,2*10,37

5 9,6*13,17

21 40,4*10,70

7 13,5±12,91

15 28,2±11,61

1 2,0*14,0

29 37,2* 8,61

13 1б,7±10,34

40 51,9* 7,89

17 21,8±10,01

22 28,2*9,59

9 11,5±10,63

21 26,О* 9,57

12 15,4*10,41

лялись преимущественно в монокультуре.

При сопоставлении спектров маркеров штаммов тех же четырех бактериальных видов, выделенных у новорожденных с наличием и без ВБИ, установлено, что по этой характеристике штаммы E.cloacae, S.epidermidls и S.haemolyticus не различались. Независимо от присутствия или отсутствия ВБИ, от новорожденных выделены штаммы E.cloacae одного и того же биовара 62, как и оксациллинрезйстентные штаммы обоих видов стафилококков. Напротив, спектр К сероваров штаммов К.pneumoniae в группе детей с ВБИ отличался от такового в груше детей без ВБИ по числу и составу сероваров (соответственно 5 против 7 сероваров и спектр - К2, К13, К24, К25, К67 против спектра - К2, К13, К14, К24, К25, К48, К67), а также по более четкому доминированию сероваров К24 и К25 в группе детей с ВБИ.

Полученные данные указывают на вероятную этиологическую роль К. pneumoniae в развитии ВБИ среди наблюдавшихся детей и участие E.cloacae, S.epidermidis и S.haemolyticus лишь в колонизации детей. Широкому распространению этих микроорганизмов способствовала множественная лекарственная устойчивость к антибактериальным препаратам, что обусловило их селекционное преимущество в колонизации.

Это утверждение подкрепляют данные, полученные о частоте выделения конкретных К сероваров К.pneumoniae новорожденными, заболевшими пневмонией в период мониторинга. При обследовании 38 больных детей выделен серовар К25 в 56,3%.

Существенно, что этот серовар этиологически обусловливал пневмонии в октябре - декабре 1992 г., его этиологическое доминирование в этот период при пневмонии достигало 81,8%. На протяжении первого полугодия 1993 г. серовар К25 ни разу не выделяли.

С прекращением циркуляции серовара К25 совпадает снижение удельного веса случаев пневмоний в 1093 г. (до 29,8% против 52,3% в

1992 г.).

В группе новорожденных с ВЕИ, выделявших К. pneumoniae серовара К24, наблюдались менее тяжелые нозоформы (конъюнктивит, омфалит и другие инфекции кожи). При этих заболеваниях у детей, хотя и с меньшей частотой, определялись К.pneumoniae сероваров К2, К13 и К67.

Итак, испольвуя маркирование различными способами штаммов исследованных видов клебсиелл, энтеробактеров и стафилококков, была установлена роль К.pneumoniae как возбудителя неонатальных ВБИ, а роль Е.cloacae, S.epidermidis и S.haemolyticus - в колонизации новорожденных. Маркирование К.pneumoniae путем серотипирования позволило определить дифференцированное значение конкретных К сероваров этих клебсиелл в возникновении различных нозоформ ВБИ у новорожденных, а также ретроспективно обосновать эпидемиологическую значимость серовара К25 в формировании "вспышечных" случаев внутриболь-ничной пневмонии в июне 1992 г. в родильном доме.

выводы

1. Показано, что заболеваемость внутриболъными инфекциями новорожденных в родильном доме характеризовалась высоким уровнем, в 9 - 10 раз. превышавшим федеральные показатели. В нозологической структуре ВБИ преобладали пневмонии, удельный вес которых составил 45,2%.

2. Микробиологический мониторинг позволил определить спектр выделявшихся у новорожденных микроорганизмов и ведущие этиологические агенты: К.pneumoniae, Е.cloacae, S.epidermidis и S.haemolyticus. Данные микробиологического мониторинга способствовали расшифровке сложных эпидемиологических ситуаций.

3. Штаммы К.pneumoniae, Е.cloacae, S.epidermidis и S.haemoly-

ticus, выделенные от новорожденных, обладали биохимическими свойствами, соответствующими таксономическим характеристикам их видов, и были в 80,6 - 100% полирезистентны к антибактериальным препаратам.

4. Использованный для маркирования штаммов К.pneumoniae метод серотипирования по капсульным (К) антигенам оптимизирован в части отбора калсульных форм колоний и определения К сероваров у полиаг-глютинабельных штаммов клебсиелл. Обоснована рекомендация для практического использования оптимизированного метода в целях эпидемиологического анализа заболеваемости.

5. Апробирован метод маркирования штаммов Е.cloacae по биохимическим тестам по Олду, отобран его модифицированный вариант, который рекомендован для практического использования.

6. Показана возможность маркирования штаммов S.epidermidis и S.haeinolyticus по оксациллинустойчивости, с помощью которого выявлена высокая частота колонизации этими штаммами новорожденных.

7. Экспериментально обоснован и предложен для практического использования тест на фаголизис К.pneumoniae в целях ускоренной диагностики клебсиеллезной инфекции.

8. Эпидемиологическое маркирование К.pneumoniae, Е.cloacae, S.epidermidis и S.haemolyticus, доминировавших в составе выделявшейся микрофлоры у новорожденных, позволило дифференцировать внут-рибольничную инфекцию и колонизацию.

9. Установлена роль серовара К25 К.pneumoniae в этиологии внутрибольничных пневмоний, а сероваров К24, К2, К13 и К67 - в возникновении менее тяжелых нозоформ (конъюнктивит, омфаяит и другие инфекции кожи).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Characteristic bacteria play ал important role in marterni-ty hospital infections / N.V.Makarova, R.S.Cherkasskaya, L.N.Gad-ginskaya et al. //9 th Mediterranean congress of chemotherapy. -Milano, Italy. - 1994. - P.118.

2. Морозова O.T. Серотипирование Klebsiella pneumoniae и его использование в эпидемиологическом анализе внутрибольничной инфекции // Деп. в ВИНИТИ. - 30.12.94. - №3091 - В94. - Библиограф, указ. ВИНИТИ, 1995. - Ж. - Б/0 352.

3. Automated microbiological monitoring in the management of epidemic process of nosocomial infections among neona tes / N.Semi-na, A.Kornachev, S.Nesterova et al. //7 th European congress of clinical microbiology and infectious diseases. - Vienna, Austria. -

1995. - P.32.

4. Pryamukhina N.S., Morozova O.T. Klebsiella outbreaks in newborns // Ibid. - P. 272.

5. Морозова O.T., Прямухина H.C. Биохимическое титрование Enterobacter cloacae // Тез. докл. 5 Российск. съевда специалистов по лабораторной диагностике. - М., 1995. - Ч.П. - С. 197 - 198.

6. Прямухина Н.С., Морозова О.Т. Маркирование Klebsiella pneumoniae по К антигену и его использование в клиническом и эпидемиологическом анализе (обеор литературы) // Клин. лаб. диагностика. -

1996. - №2. - С. 47 - 49.

7. Внутрибольничные инфекции новорожденных / Н.С.Прямухина, Н.А.Семина, Г.С.Коршунова, О.Т.Морозова // Эпидемиол. и инфекц. болезни. - 1996. - №2. - С. 15 - 18.

8. Прямухина Н.С., Морозова О.Т. Методы внутривидовой дифференциации Enterobacter cloacae по биохимическим реакциям // Клин, лаб. диагностика. - 1996. - №5. - С. 43 - 45.

9. Прямухина Н.С., Морозова О.Т. Оценка внутрибольничной инфекции и микробной колонизации новорожденных с использовачием эпидемиологического маркирования причастных микроорганизмов // Эпиде-миол. и инфекц. болезни. - 1996. - №3. - С. 24 - 27.

10. Морозова 0.Т., Прямухина Н.С. Биовары и антибиотикорезис-тентность штаммов Enterobacter cloacae от колонизированных новорожденных // Клин. лаб. диагностика. - 1997. - №3. - С. 18-21.

И. Прямухина Н.С., Морозова О.Т. Об использовании теста на фа-гочувствительность Klebsiella pneumoniae в бактериологической диагностике инфекций этой этиологии // Эпидемиол. и инфекц. болезни. -1997. - №3. - С. (принято в печать)

12. Морозова О.Т., Прямухина Н.С. Методические аспекты сероти-пирования Klebsiella pneumoniae и его использование в характеристике клинических штаммов // Клин. лаб. диагностика. - 1997. - №8. - с. (принято в печать).

Напечатано фирмой "Авто-Граф »M" тел. 207-07-97