Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Роль полиморфизма генов APOE, HFE, SOD2 и IL6 в патогенезе хронического вирусного гепатита C

. На правах рукописи

Семенова Надежда Андреевна @04618ЭЫИ

РОЛЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ АРОЕ, НЕЕ, Б002 и Н6 В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА С

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

7 6 ЛЕИ ?п?9

Томск-2010

004618588

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН, заслуженный деятель науки РФ

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинский наук, профессор

Ведущая организация: Учреждение Российской академии медицинских наук НИИ медицинской генетики Сибирского отделения РАМН.

Защита состоится «о!%>> /с4 2010 года в часов ¿^мин. на заседании диссертационного Совета ГОУ ВПО «Сибирский Государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 634050, г. Томск, ул. Московский тракт, д. 2

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», г. Томск, пр. Ленина, 107.

Автореферат разослан <р^5» У/ 2010 г.

Новицкий Вячеслав Викторович

Агафонов Владимир Иванович

Белобородова Екатерина Витальевна

Учёный секретарь диссертационного совета ,^ Петрова Ирина Викторовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Хронический вирусный гепатит С представляет собой медленную инфекцию, исходом которой является развитие латентного хронического воспаления печени с дальнейшим прогрессированием в цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному. В 85% случаев острой HCV-инфекции наступает хроиизация, лишь у 15% инфицированных HCV возможно спонтанное выздоровление [Su A.I. et al., 2002; Berkes J. et al., 2005; Santos C. et al., 2010]. Лечение хронического вирусного гепатита С является одной из наиболее актуальных проблем современной медицины. Однако, несмотря на то, что постоянно разрабатываются новые и совершенствуются хорошо известные схемы применения основных противовирусных препаратов (интерфероны, аналоги нуклеозидов и др.), эффективность данной терапии составляет не более 75 % [Конусова В.Г. и соавт., 2003; McHutchison J.G. et al., 2009].

Высокая антигенная изменчивость вируса гепатита С - одно из основных препятствий к созданию эффективных вакцин на основе живых культур или полноразмерных рекомбинантных белков, что связано, в первую очередь, с изменчивостью аминокислотной последовательности вирусных протеинов [Richardson М.М. et al., 2005; Железникова Г.В. и соавт., 2007]. Естественное течение хронической HCV-инфекции подвержено значительным межиндивидуальным вариациям. Известно, что у части больных имеет место медленный темп прогрессирования фиброза. В то же время существует группа пациентов, у которых формирование цирроза печени происходит быстро (через 10-15 лет после инфицирования) [Friedman S.L. et al., 2003; Зайцев И.А. и соавт., 2009].

В последние годы особое внимание уделяется изучению генетических факторов, способных модифицировать скорость фиброгенеза при хронической HCV-инфекции [Абдуллаев С.М. и соавт., 2006; Morgan T.R. et al., 2008; Thomas D.L. et al., 2009]. Среди этих факторов особая роль принадлежит полиморфизму генов-регуляторов метаболизма - АРОЕ (аполипопротеин Е), HFE (белок наследственного гемохроматоза), SOD2 (супероксиддисмутаза-2) и гену IL6 (интерлейкин 6) [Richardson М.М. et al., 2005].

Известно, что HCV циркулирует в плазме в комплексе с вырабатываемыми печенью липопротеинами очень низкой плотности (ЛПОНП) в мембранных везикулах, в которых идет репликация вируса. Помимо всех основных компонентов репликативного комплекса, везикулы содержат белки, необходимые для сборки ЛПНП, включая аполипопротеин Е [Huang H. et al., 2007].

Прогрессивное развитие фиброза с исходом в цирроз печени наблюдается у 20-30% больных с хронической HCV-инфекцией. Помимо внешних факторов, модифицирующих естественное течение хронического гепатита С (например, злоупотребление алкоголем) определенную роль в ускорении фиброгенеза играет полиморфизм гена HFE [Maher J.J. et al., 2001; Hellier S. et al., 2003; Richardson M.M. et al., 2005]. Известно, что гетерозиготы по гену HFE характеризуются умеренным повышением уровня железа в организме [Абдуллаев С.М. и соавт., 2006].

Активация процессов свободнорадикального окисления является патогенетическим звеном развития многих вирусных заболеваний печени, при этом избыточное образование активных форм кислорода проявляется на самых ранних стадиях процесса [Нагоев Б.С. и соавт, 2003; Loguercio С. et al., 2003; Elchuri S. et al., 2005]. Среди антиоксидантов, нормализующих уровень АФК и продуктов ПОЛ, особое место принадлежит супероксидцисмутазе 2 типа, которая катализирует реакцию дисмутации - взаимодействия двух супероксидных радикалов друг с другом, превращая токсичный кислород в менее токсичную перекись водорода [Чурилова И.В. и соавт., 2002].

Излишняя продукция IL-6 ведет к увеличению экспрессии рецептора ЛПОНП [Hashizume М. et al., 2010], тем самым повышая проникновение вируса гепатита С в комплексе с ЛПОНП внутрь клетки. Кроме того, IL-6 участвует в обострении хронических, так и в переходе острых воспалительных процессов в хронические [Thornton A. et al., 1991; Decker К. et al., 1993].

Исходя из недостаточности фундаментальных знаний о механизмах генетической предрасположенности организма человека к воздействию вируса гепатита С в настоящее время не разработана система индивидуального прогнозирования характера течения, вероятности развития осложнений и эффективности лечения хронического вирусного гепатита С.

Цель исследования - установить роль полиморфизма генов HFE, АРОЕ, SOD2 и IL6 в патогенезе хронического вирусного гепатита С у представителей европеоидной популяции, проживающих на территории Томской области.

Задачи исследования:

1. Проанализировать характер распределения аллельных вариантов генов LIFE, АРОЕ, SOD2 и IL6 у больных хроническим вирусным гепатитом С и здоровых доноров, принадлежащих к европеоидной популяции Томской области.

2. Оценить взаимосвязь полиморфизма генов НЕЕ, АРОЕ, SOD2 и IL6 с активностью воспалительного процесса в печени при хроническом вирусном гепатите С.

3. Установить характер ассоциации аллельных вариантов генов HFE, АРОЕ, SOD2 и IL6 с тяжестью фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное клинико-лабораторное и морфологическое обследование больных хроническим вирусным гепатитом С, имеющих различные темп прогрессирования фиброза и степень активности воспалительного процесса в печени, с определением у них частоты генотипов и аллелей полиморфных маркеров комплекса генов (HFE, АРОЕ, SOD2 и IL6), белковые продукты которых принимают участие в различных этапах патогенеза хронической HCV-инфекции. На большой группе здоровых доноров изучена распространенность генотипов и аллелей полиморфизма вышеуказанных генов в российской популяции.

Показана ассоциация хронической HCV-инфекции и носитсльством генотипов ЕЗ/ЕЗ гена АРОЕ, Val/Val гена SOD2 и D/D гена HFE. Определены «профибротические» (SOD2 Val/Val; HFE 63H/D и 63D/D) и «протективные» (SOD2 Ala/Ala и Ala/Val; HFE 63Н/Н) генотипы, ассоциированные, соответственно, с быстрым и медленным темпами прогрессирования фиброза печени. Кроме того, установлена связь наличия аллеля G полиморфного варианта G174C промотерного региона гена IL6 с активностью воспалительного процесса в печени при HCV-инфекции.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенного исследования, позволившие выделить генетические факторы, влияющие па особенности течения HCV-инфекции, степень фиброза и активность воспаления печени, имеют значение для оценки прогноза хронического вирусного гепатита С. Установлены гены, носительство полиморфных вариантов которых, влияет на особенности клинико-морфологической картины хронической HCV-инфекции. Проведенное исследование позволит индивидуализировать тактику ведения больных ХВГС, учитывая данные клинического и генетического обследования.

Положения исследования могут служить основанием для разработки стратегии изучения молекулярных и клеточных механизмов формирования длительной персистенции HCV в организме. Полученные фундаментальные знания представляют основу для разработки новых подходов к патогенетически обоснованной терапии и своевременной профилактики развития хронической HCV-инфекции, а также осложнений, возникающих при длительной вирусной персистенции.

Основные положения и выводы диссертационной работы используются в учебном процессе кафедры фундаментальных основ клинической медицины (по дисциплине «Клиническая лабораторная диагностика» в разделе

5

«Диагностика инфекционных заболеваний», по дисциплине «Молекулярные основы патологии» в разделе «Молекулярно-генетические основы предрасположенности организма к инфекционным заболеваниям») ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. У HCV-инфицированных пациентов европеоидной популяции, проживающих на территории Томской области, частота встречаемости аллеля ЕЗ и генотипа ЕЗ/ЕЗ гена АРОЕ выше по сравнению с таковыми у здоровых доноров. При этом у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С не выявлено взаимосвязи аллельного полиморфизма гена АРОЕ со степенью фиброза и активностью воспаления печени.

2. Частота встречаемости аллеля Val гена SOD2 и гомозигот с генотипом Val/'Val достоверно выше у больных HCV-инфекцией по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров. Степень фиброза печеночной ткани у больных хроническим гепатитом С сопряжена с увеличением частоты встречаемости аллеля Val и генотипа Val/Val гена SOD2. При этом не было выявлено взаимосвязи между носительством полиморфизма гена SOD2 и степенью воспалительного процесса в печени.

3. При исследовании полиморфизма H63D гена II FE установлено, что частоты встречаемости аллеля D и генотипа D/D достоверно выше у больных хроническим вирусным гепатитом С, существенны различия частот встречаемости полиморфизма H63D гена HFE у больных ХГВС с различной выраженностью фиброза печени, наряду с отсутствием различий частот встречаемости полиморфных вариантов гена HFE у больных с различной степенью активности воспалительного процесса в печени.

4. Анализ полиморфизма C282Y гена HFE у здоровых людей и больных гепатитом С не выявил достоверных различий в частотах распределения генотипов и аллелей. Кроме того, не было обнаружено различий частот встречаемости данных полиморфных аллелей и генотипов гена HFE у больных гепатитом С в зависимости от степени фиброза и активности воспаления печени.

5. В результате проведенного анализа полиморфизма C174G в промотерной области гена IL6 не выявлено статистически достоверных различий в исследованных группах (здоровые и больные HCV-инфекцией). При оценке значения полиморфизма C174G гена IL6 в развитии фиброза также были получены не достоверные различия частот встречаемости вариантных аллелей и генотипов гена у больных HCV-инфекцией с различной степенью фиброза печени. При изучении распределения аллелей и генотипов полиморфизма C174G гена IL6 в зависимости от степени активности воспаления выявлено, что

6

аллель G и генотип G/G ассоциированы с выраженной степенью воспалительного процесса печени.

Апробация работы. Результаты исследования были доложены и обсуждены на IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2009), IV международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Вопросы патогенеза типовых патологических процессов" (Новосибирск, 2010), XVI межгородской конференции молодых ученных «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано б печатных работ, в том числе 2 - в журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертаций на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Объем и структура диссертации. Текст диссертации изложен на 119 страницах и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические рекомендации и список литературы, состоящий из 77 отечественных и 154 иностранных работ. Работа проиллюстрирована 1 рисунком и 17 таблицами.

Личный вклад автора. Анализ литературных данных по теме диссертации, планирование исследования, выделение ДНК, подбор праймеров, амплификация исследуемых генов, рестрикция амплификатов со спецефическими рестриктазами, детекция результатов, статистический анализ результатов, написание диссертации выполнены лично автором.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика обследованных

Работа основана на комплексном клинико-лабораторном обследовании 98 пациентов с диагнозом хронический вирусный гепатит С, в возрасте от 18 до 56 лет (30,4±10,6) (из них 56 мужчин и 42 женщины). Также в исследовании участвовал 171 здоровый донор европеоидной популяции, сопоставимые по возрасту и расе (из них 98 мужчин и 73 женщины).

Пациенты находились на диспансерном учете или стационарном лечении в отделении гастроэнтерологии ОГУЗ «Областная клиническая больница» г. Томска (главный врач - М.Н. Заюков) и Клинической больницы № 81 ФГУЗ Федерального медико-биологического агентства г. Северска (главный врач -канд. мед. наук, заслуженный врач РФ А.И. Маслюк). Группа здоровых

7

доноров была набрана в донорском отделении ФГУГТ НПО «Микроген» МЗ РФ, филиал в г. Томск НПО «Вирион» (зав. отделением - О.Н. Веснина). Набор обследованных осуществлялся в период 2007-2009 гг.

Все больные составляли группу риска по инфицированию вирусами гепатита С (в анамнезе - донорство, гемотрансфузии, стоматологические и прочие инвазивные медицинские процедуры, в том числе оперативные вмешательства, сексуальные контакты с больными хроническим вирусным гепатитом С, работа с препаратами крови и больными у медицинских работников). Для всех пациентов установлен приблизительный срок инфицирования, составлявший на момент обследования от 2 до 16 лет. У 80% пациентов длительность заболевания составляла от 8 до 12 лет. Никому из пациентов до обследования противовирусное лечение не проводилось.

Для сбора данных и их последующего анализа была разработана «карта обследования больного», включавшая жалобы, данные анамнеза заболевания и жизни, результаты проведенного лабораторного, инструментального и морфологического обследования.

Диагноз хронического вирусного гепатита устанавливался на основании комплекса данных клинико-лабораторного и инструментального обследования. Анамнестически у всех пациентов были определены срок и источник инфицирования, оценивались жалобы, характер течения заболевания и объективные признаки. Проводился широкий спектр обследований, включая общий и биохимический анализ крови, анализ показателей иммунного статуса. В клинике все пациенты проходили ультр„сонографическое исследование органов брюшной полости для исключения сопутствующей патологии, а также сцинтиграфическое исследование печени, выявлявшее умеренное диффузно-неравномерное накопление радиофармпрепарата в паренхиме органа, характерное для воспалительного процесса.

Этиологическая верификация диагноза проводилась качественным определением в крови у пациентов РНК HCV (Hepatitis С virus) с помощью полимеразной цепной реакции, а также серологических маркеров HCV (анти-HCV IgM, анти-HCV IgG, IgG к структурным белкам HCV, IgG к неструктурным белкам NS-3, NS-4, NS-5).

С целью морфологической верификации диагноза и определения степени активности воспалительного процесса с использованием гистологического индекса активности A. Knodell (1981) и стадии фиброза по U. Desmet (1995) всем пациентам проводилась пункционная биопсия печени по G. Menghini (1958). По данным морфологического анализа полученного биопсийного материала выделяли слабую активность (4-8 баллов), умеренную активность (912 баллов) и высокую активность воспалительного процесса (более 13 баллов)

8

печени. А также, I стадию (слабовыраженный перипортальный фиброз), II стадию (умеренный фиброз с порто-портальными септами) и III стадию (выраженный фиброз) фиброза печени.

С учетом биохимических показателей крови у пациентов выявляли синдром цитолиза, который характеризовался увеличением активности аланин-аминотрансферазы (АлАТ) и аспарагин-амииотрансферазы (АсАТ) в сыворотке крови, мезенхимально-воспалительный синдром (увеличение СОЭ, тимоловой пробы, повышение уровня у-глобулинов) и синдром холестаза (гипербилирубинемия, повышение активности щелочной фосфатазы, гамма-глутамштгранспептидазы).

Критериями исключения пациентов из исследования являлись острые заболевания любой этиологии, обострения хронического патологического процесса (заболевания желудочно-кишечного тракта, эндокринной, мочеполовой, сердечно-сосудистой системы, ревматические болезни и др.); наличие стадии цирроза печени или гепатоцеллюлярной карциномы; сочетанная патология печени (алкогольная болезнь печени, цирроз любой этиологии, синдром Жильбера, токсическое и аутоиммунное поражение печени и др.); манифестное течение хронических вирусных заболеваний другой этиологии; инъекционная наркомания и злоупотребление алкоголем на момент обследования и в анамнезе.

Все материалы по обследованию больных хроническим вирусным гепатитом С и здоровых доноров (протокол исследования, информационное согласие, информационный листок испытуемого) и возможных последствиях методов обследования (взятие крови из локтевой вены утром натощак) были представлены в этический комитет ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава. По представленной документации замечаний не было, работа соответствовала требованиям этической экспертизы.

Методы исследования 1. Молекулярно-генетические методы исследования

У пациентов с хроническим вирусным гепатитом С и здоровых доноров определяли наличие полиморфизмов генов-регуляторов метаболизма £0£>2, НЕЕ, АРОЕ и гена И6 в ДНК клеток периферической крови.

Для определения генотипов указанных генов проводилось выделение ДНК из цельной венозной крови, предварительно стабилизированной ЭДТА, у больных НСУ-инфекцией и здоровых доноров (контрольная группа) с использованием фенол-хлороформного метода [Маниатис Т.Н. с соавт. 1984; СЬтсгупБк! Р., ЗассЫ М., 1987]. Амплификацию участков генов, содержащих полиморфные зоны, осуществляли с помощью прибора для проведения

9

полимеразной цепной реакции «Терцик» с использованием соответствующих праймеров («СибЭнзим», Новосибирск) и при определенных температурных режимах (табл. 1).

Исследованные аллельные варианты генов являются SNP-полиморфизмами (single-nucleotide polymorphism) и характеризуются заменой одного нуклеотида. Для их детекции использовали специфические эндонуклеазы рестрикции. По наличию или отсутствию рестрикции делали заключение о характере полиморфизма.

Для определения полиморфных аллелей генов использовали метод полиморфизма длины рестриктных фрагментов (ПДРФ). Амплификаты исследованных генов инкубировали при определенной температуре со спецефическими рестриктазами («СибЭнзим», Новосибирск) (табл. 1).

Таблица 1

Характеристика исследованных полиморфизмов генов АРОЕ, SOD2, HFE иНб

Ген Полиморфизм Структура праймера Температура отжига (°C) Фермент рестрикции

HFE C282Y 5'-tggcaagggtaaacagatcc-3' 5'-ctcaggcactcctctcaacc-3' 60 Rsal

H63D 5'-acatggttaaggcctgttgc-3' 5'-gccacatctggcttgaaatt-3' 60 Ksp221

АРОЕ Е2/ЕЗ/Е4 5'-acagaattcgccccggcctggtacac-3' 5 '-taagcttggcacggctgtccaagga-3' 60 BstHH I

SOD2 Ala(-9)Val 5'-ctgaccgggctgtgctttctcg-3' 5 '-ctcccgccgctcagcctggacc-3' 60 AsiGI

IL6 Q-576R 5'-ttgtcaagacatgccaaagtc-3' 5'-tcagacatctccagtcctata -3' 60 Fae I

Фрагменты рестрикции разделяли с помощью электрофореза для разделения рестрикционных фрагментов. Визуализация результатов ПЦР и ПДРФ осуществлялась с помощью системы гель-электрофореза в УФ-свете.

2.Статистнческий анализ результатов исследования

Результаты исследования обрабатывали с использованием стандартного пакета программ SPSS v. 11.5. Имеющиеся данные типа «случай - контроль» являются качественными, а выборки - независимыми.

Распределение генотипов по исследуемым полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий у2 Пирсона, с достоверностью 95%. Обработка

результатов генетических исследований осуществлялась с использованием критерия отношения шансов (OR) с расчетом для него 95% доверительного интервала.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Объектом нашего исследования стали гены-регуляторы метаболизма (ЛРОЕ, SOD2, HFE) и ген 1L6. Интерес к ним был вызван прежде всего тем, что белковые продукты данных генов принимают участие в патогенезе хронической HCV-инфекции на различных этапах её развития (рис. 1), а именно: в процессах проникновения HCV в клетки печени при инфицировании, воспаления, фиброгенеза и прогрессирования течения хронического вирусного гепатита С.

В настоящем исследовании на первом этане был осуществлен сравнительный анализ распространенности полиморфных вариантов исследуемых генов у здоровых доноров и больных хроническим вирусным гепатитом С с целью выявления ассоциации носительства полиморфизма с резистентностью/предрасположенностью к HCV-инфекции.

На втором этапе исследования была проведена оценка частоты встречаемости полиморфных вариантов генов АРОЕ, SOD2, HFE и IL6 у пациентов с хронической HCV-инфекцией с разной активностью воспаления и выраженностью фиброза печени.

1. Результаты анализа распространенности полиморфных вариантов гена АРОЕ у больных хронической íICV-инфекцисй

Роль АроЕ в патогенезе хронического вирусного гепатита С определяется циркуляцией HCV в плазме в комплексе с вырабатываемыми печенью липопротеинами очень низкой плотности. Данный факт был доказан исследователями с использованием клеток гепатомы человека, из которых удалось выделить особые мембранные везикулы. В везикулах происходит репликация вируса и содержатся основные компоненты репликативного комплекса и комплекс белков, необходимых для сборки ЛПОНП, включая АроВ, АроЕ и микросомальный белок, переносящий триглицериды. При введении в культуру клеток гепатомы ингибиторов сборки ЛПОНП разной природы происходило подавление продукции вирусов. Таким образом, было установлено, что вирус может проникать в клетки через рецептор к ЛПОНП [Pileri Р. et al., 1998; Petracca R. et al., 2000; Arrieta J.J. et al., 2001; Crotta S. et al., 2002; Bataller R. et al., 2004; Дунаева, H.B., Есауленко, E.B., 2006; Есауленко E.B. и соавт., 2007]. Кроме того, в исследованиях, направленных на выявление связи между носительством полиморфных вариантов гена АРОЕ и

11

Проникновение НСУ внутрь гепатоцита

Острое воспаление пече.ни при НСУ-янфекцид

Поражение гепат оцитов )

Тканевая г ипоксия

! <«, шийшеньог

К^МИ 1041. '

| экспрессии генг

Апопротеин-В.Ё-

Нарушение окислительного фосфор илирования

рецептор

4 синтеза АТФ а гепатоцитах

Активация стеллатных клеток Ито

Т гипоксантина

Активация ксантинокеидазы

| экспрессии апопотеин-В,Е-рецептора

Избыточная продукция соеленительной ткани

.1 продукция АФК

£1 \|Н 1111« I 1ИЧ

в< 1 на 11-1 ин П'ычп1 и 1ф05 рССПфОМ ю С фи оро 1411 ч!" 11

Регуляция пролиферации

эпителиальных клеток, желчных протоков, клеток 1ечени, образование гранулем

Т расход антиоксидантов

Окислительный стресс, поражение гепатоцитов

Воспаление и нарушение функции внутриклеточных структур и митохондрий

Гибель гепатоцитов

Развитие во гпалнтельно-деструктивного

Наследственный

процесса

емохроматоз, избыточное накопление железа .

Рисунок 1. Схема участия белковых продуктов генов АРОЕ, НРЕ, 5002 и 1Ь6 в 'патогенезе хронического вирусного гепатита С

персистенции НСУ-инфекции было обосновано, что у лиц, имеющих в генотипе аллель АроЕ4, предрасположенность к хронизации НСУ-инфекции ниже, чем у носителей других аллелей гена АРОЕ [\Vozniak М.А. й а1., 2002]. Установлено также, что аллель АроЕЗ является рисковым в развитии неалкогольного стеатогепатита печени [БагЫ Л. е! а!., 2008].

Руководствуясь положением о способности НСУ циркулировать в плазме в комплексе с ЛПОНП и проникать в клетки через их рецептор, нами была проведена оценка взаимосвязи носительства полиморфных вариантов гена АРОЕ с наличием хронического вирусного гепатита С. Затем мы оценивали какой из полиморфных вариантов гена АРОЕ определяет наиболее высокую активность воспаления и процесс фиброгенеза в печени.

Результаты проведенного нами анализа распределения частоты ЕСТречаемости полиморфизма гена АроЕ у здоровых доноров и больных НСУ-инфекцией подтвердили достоверные различия частоты генотипов и аллелей в сравниваемых группах обследованных лиц. При этом у больных НСУ-инфекцией реже в 2 раза, по сравнению с группой контроля, встречался аллель АроЕ4 (табл.2), что позволяет рассматривать аллель АроЕ4 в качестве протектора персистенции вируса в организме.

Распределение часто ты аллелей и генотипов гена АРОЕ (%(абс.)) среди здоровых доноров и больных хронической НС У-инфекцией

Таблица 2

Генотипы и аллели_ '"" Е2/Е2

ЕЗ/ЕЗ

Е4/Е4

Е2/ЕЗ

Е2/Е4

ЕЗ/Е4

Е2

ЕЗ

Е4

Контроль % (п)

0,6% (1)

68,4% (117)

1,2% (2)

(20)

1,7% (3)

16,4% (28)

7,3% (12)

82,5% (142)

10,2% (17)

Больные ХГС % (п)

270% (2)

84,5% (84) 2,0% (2) "

4,1% (4)

4,1% (4)

2,0% (2)

6,1% (6)

87,6 % (87) 5,1%" (5)""

р<0,05

Примечание:

р - достоверность различий показателей по сравнению с их значениями у здоровых доноров

Предположение о том, что аллель АроЕ4 проявляет протективные свойства при HCV-инфекции, возможно, связано с аминокислотной последовательностью аполипопротеина Е: АроЕЗ в положении 112 имеет аминокислоту цистеин, у АроЕ4 в этом положении находится аргинин. Данное замещение нейтральной аминокислоты на основную является причиной различий в заряде, который у АроЕ2 равен нулю, у АроЕЗ - плюс единице и у АроЕ4 - плюс двум [Коровайцева Г.И. и соавт., 2001]. Таким образом, можно предположить, что именно изоформа АроЕЗ легче проникает через мембрану

13

клеток, имея более высокое сродство к рецепторам гепатоцитов, облегчая, тем самым, проникновение вируса внутрь клеток.

При изучении распределения полиморфных вариантов гена ЛРОЕ у больных гепатитом С в зависимости от степени активности воспаления печени и фиброза печеночной ткани достоверных различий в распределении частоты встречаемости изученных аллелей и генотипов среди пациентов с различными степенью воспалительного процесса и стадией фиброза печени выявлено не было (р>0,05). Это, по всей видимости, объясняется участием АроЕ в механизмах развития HCV-инфекции лишь на начальных этапах инфицирования, исключая дальнейшее влияние данного протеина на молекулярные механизмы развития осложнений хронического вирусного гепатита С.

2. Результаты анализа распространенности полиморфизмов II63D и C282Y гена HFE у больных хронической HCV-инфекцией

Хроническая инфекция, вызванная HCV, часто сопровождается увеличением значений маркеров, характеризующих накопление железа. Рецессивные наследственные мутации в гене HFE ответственны за накопление железа в большинстве случаев гематохроматоза и могут играть роль при HCV-инфекции. Существуют противоречивые данные о связи этих мутаций с прогрессирующим фиброзом печени [Thornburn D., Curry G., 2002]. Установлена роль полиморфизма гена HFE в модификации естественного течения хронического вирусного гепатита С. Известно, что гетерозиготы по гену HFE характеризуются умеренным повышением уровня железа в организме. Таким образом, предполагается, что полиморфизм в гене HFE может быть ассоциирован с формированием цирроза печени, что определяется негативным влиянием высокого уровня железа на течение HCV-инфекции.

В работе А. Erhardt et al. (2003) был проведен анализ частоты встречаемости полиморфных вариантов C282Y и H63D гена HFE в значительных группах здоровых доноров и у пациентов с хронической HCV-инфекцией. В результате проведенного нами исследования не было выявлено различий в частоте встречаемости мутантных аллелей гена HFE между пациентами сравниваемых групп. Однако среди больных хроническим вирусным гепатитом С была выявлена взаимосвязь между наличием указанных полиморфизмов и наличием перегрузки железом организма, а также с прогрессией фиброза печени. Кроме того, были определены доверительные интервалы в отношении каждого из полиморфизмов, которые указывали на полиморфные варианты C282Y и H63D гена HFE как на статистически значимые предикторы в развитии прогрессирующего течения хронической

14

HCV-инфекции. Аналогичные результаты получены при отдельном изучении полиморфизма C282Y гена HFE у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С [Gehrke S. et al., 2003; Smith В. et al., 2003].

Существующие данные об ассоциации полиморфизмов гена НЕЕ с прогрессивным течением HCV-инфекции определяют целесообразность рассмотрения их в качестве дополнительного фактора риска развития цирроза печени. Принимая во внимание высокую распространенность данного полиморфизма в российской популяции, для нас представилось актуальным комплексное генотипирование больных с HCV-инфекцией на наличие вариантных C282Y и H63D аллелей наряду с анализом присутствия полиморфных вариантов других генов-регуляторов метаболизма с целью выявления групп риска для развития хронической формы HCV-инфекции.

В нашем исследовании анализ полиморфизма C282Y гена HFE у здоровых людей и больных хроническим вирусным гепатитом С не выявил достоверных различий в частоте распределения генотипов и аллелей (р>0,05). Также не было обнаружено достоверных различий частоты встречаемости данных полиморфных аллелей и генотипов гена HFE у больных гепатитом С с различными степенями активности воспалительного процесса и фиброза печени (р>0,05).

В то же время в результате оценки аллельного полиморфизма H63D гена HFE были установлены достоверные различия в частоте встречающихся аллелей и генотипов среди здоровых людей и больных гепатитом С. Так, у больных хроническим вирусным гепатитом С наиболее часто встречались аллель D и генотип D/D по сравнению с таковыми показателями у здоровых доноров. Кроме того, при оценке критериев отношения шансов с достоверностью 95% было показано, что наибольшему риску развития гепатита подвержены лица - носители аллеля D гена HFE. Напротив, было выявлено, что аллель Н и генотип Н/Н являются протективными (табл. 3).

Таблица 3

Распределение частоты аллелей и генотипов полиморфизма Н630 гена НЕЕ (% (абс.)) у здоровых доноров и больных хронической НСУ-инфекцией

Генотипы и аллели Контроль %(П) Больные ХВГС %(п) Р OR

ШН 72,5% (124) 59,2% (58) р<0,05 0,55 (0.33 - 0.93)

НЮ 25,2% (43) 27,6% (27) 1,13 (0.65- 1.99)

D/D 2,3% (4) 13,2% (13) 6.39(2.02-20.18)

Н 85,1% (146) 73,0% (72) р<0,05 0,47 (0.31 -0.73)

D 14,9% (25) 27,0 % (26) 2.11 (1.37-3.26)

Примечание:

р - достоверность различий показателей по сравнению с их значениями у здоровых

доноров;

OR - отношение шансов

При оценке частоты встречаемости полиморфных генотипов и аллелей H63D гена HFE в зависимости от активности воспаления печени у больных HCV-инфекцией оказалось, что генотипы Н/Н и D/D встречались чаще у пациентов с высокой степенью активности воспалительного процесса (Н/Н -72,2%, D/D - 16,7%), однако частота встречаемости генотипа H/D (11,1%) была ниже, чем у пациентов со слабой активностью воспаления печени (Н/Н - 60,4%, D/D - 13,2% и H/D - 26,4%) и умеренной активностью воспалительного процесса (Н/Н - 48,1%, D/D - 11,1% и H/D - 40,8%). Вместе с тем, распределение частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма H63D гена HFE показал отсутствие достоверности сравниваемых показателей у больных HCV-инфекцией с различной степенью активности воспалительного процесса в печени.

При изучении распределения аллелей и генотипов полиморфизма H63D гена HFE с различной стадией фиброза печени получены статистически достоверные различия (р<0,05). Причем достоверность различий в частотах распределения аллелей и генотипов была выявлена только между подгруппой с III стадией фиброза печени и двумя другими подгруппами (пациенты с I и II стадиями фиброза печени); достоверные различия первых двух подгрупп пациентов не обнаружены (табл. 4). При этом у пациентов с III стадией фиброза печени чаще встречались аллель D и генотипы D/D и H/D гена HFE по сравнению с аналогичными показателями у больных с I и II стадиями (табл. 4).

Таблица 4

Частота полиморфных генотипов и аллелей НбЗй гена/й-Е (% (абс.)) в зависимости от стадии фиброза печени у больных НСУ-инфекцией

Генотипы и аллели Стадия фиброза Х2 Р

I стадия II стадия III стадия

Н/Н 73,3% (33) 90,6% (29) 23,8% (5)* ** 19,447 0,001

H/D 20,0% (9) 9,4% (3) 47,6% (10)* **

D/D 6,7% (3) 0% (0) 28,6% (6)* **

Н 83,3% 95,3% 47,6% * **

D 16,7% 4,7% 52,4% * **

Примечание:

р - уровень статистической значимости различий параметров между подгруппами больных НСУ-инфекцией с различной стадией фиброза;

Х2 - стандартный критерий Пирсона для сравнения частот генотипов и аллелей генов;

* - достоверность различий по сравнению с пациентами с I стадией фиброза печени (р<0,05);

** - достоверность различий по сравнению с пациентами со II стадией фиброза печени (р<0,05)

Механизмы возникновения перегрузки железом при ГО^-инфекции остаются до конца не изученными. Однако известно, что мутантные генотипы

16

гена HFE сопровождаются избыточным накоплением железа в печени, что способствует развитию воспалительно-деструктивного процесса, ускоряя прогрессирование патологического процесса до стадии цирроза и рака печени [Bacon B.R. etal., 2001].

3. Результаты анализа распространенности полиморфизма Ala(-9)Val гена SOD2 у больных хронической HCV-инфекцией

Персистенция HCV в организме представляет собой процесс, в основе которого лежат типовые патологические процессы, одним из которых является воспаление. Существует ряд механизмов реализации воспалительной реакции, которые направлены на элиминацию инфекта (повышение проницаемости сосудистой стенки, продукция цитокинов, образование активных форм кислорода (АФК) и т.д.).

Так, образование АФК проявляется на самых ранних стадиях инфекционного процесса, вызванного HCV, и включает в себя активацию процессов свободнорадикального окисления [Нагоев Б.С. и соавт., 2003; Loguercio С. et al., 2003], что ведёт к чрезмерной пероксидации мембранных структур гепатоцитов, последующему повреждению и гибели клеток печени [Логинов А.С. и соавт., 1998]. Повышение уровня продуктов липопероксидации в органах и тканях при HCV-инфекции оказывает неблагоприятное влияние на структурно-функциональное состояние клеток, в том числе гепатоцитов, вызывая в них процессы аутолиза и самоокисления [Elchuri S. et al., 2005]. Цитолиз гепатоцитов, инициирующий процесс прогрессирующего некробиоза печеночных клеток, лежит в основе морфологических изменений, развивающихся в печени при HCV-инфекции, что в последующем сопровождается развитием фиброза [КонусоваВ.Г. и соавт., 2003].

Фермент супероксиддисмутаза второго типа относится к группе антиоксидантных ферментов, которые защищают организм человека от постоянно образующихся высокотоксичных кислородных радикалов, включая активные формы кислорода, нарабатывающиеся в процессе воспаления [Hernandez-SaavedraD. et al., 2005].

Исследования, проведенные в клинике и в эксперименте, свидетельствовуют о том, что при HCV-инфекции у больных существенно усиливались процессы ПОЛ и повышалась активность SOD2, коррелирующие со степенью интоксикации и тяжестью болезни [Нагоев Б.С. и соавт., 2003]. По данным других исследователей, достоверное повышение активности SOD2 в эритроцитах у больных острой HCV-инфекцией отмечалось в начале желтушного периода с последующим снижением активности фермента в разгар

заболевания, особенно значимо - при тяжелых и «злокачественных» формах болезни.

Полиморфизм Ala(-9)Val гена SOD2 расположен в последовательности сигнального пептида и влияет на синтез супероксиддисмутазы второго типа, которая состоит из субъединиц и двух доменов. Один домен содержит альфа-спирали, второй - альфа-спирали и бета-слои, между которыми расположен металлосвязывающий центр. Показано, что изучаемый полиморфизм оказывает влияние на вторичную структуру сигнального пептида и приводит к дестабилизации его альфа-спирального участка, что влияет на перенос фермента из цитоплазмы в митохондриальный матрикс - SOD2 задерживается во внутренней митохондриальной мембране [Sobkowiak A. et al., 2008; Zotova E.V. et al., 2003]. В результате данный полиморфизм, по мнению ряда авторов, приводит к абсолютному или относительному локальному дефициту фермента и снижению его активности [Ergen, Н.А. et al., 2007].

Оценка распределения частоты аллелей и генотипов гена SOD2 у больных HCV-инфекцией и здоровых доноров выявила существенные различия. Частота встречаемости генотипа Ala/Ala в группе больных HCV-инфекцией была статистически значимо ниже, чем в группе контроля. Выявлено, что аллель Val встречался чаще у больных HCV-инфекцией, чем у здоровых доноров, и имел рисковую значимость для развития данной патологии. Частота встречаемости аллеля Ala, напротив, была выше у представителей контрольной группы, что говорит о протективных свойствах данного аллеля в отношении развития HCV-инфекции (табл. 5).

Таблица 5

Распределение частоты аллелей и генотипов гена Я002 (% (абс.)) у здоровых доноров и больных хронической НСУ-инфекцией

Генотипы и аллели Контроль % (n) I Больные ХГС % (n) P OR

Ala/Ala 32,8% (56) 12,2%(12) p<0,05 0,29 (0,14-0,57)

Ala/Val 50,3% (86) 64,3% (63) 1,78(1,07-2,96)

Val/Val 16,9% (29) I 23,5% (23) 1,5(0,81 -2,78)

Ala 57,9% (99) 44,4% (44) p<0,05 0,58(0,41-0,83)

Val 42,1% (72) 55,6% (54) 1,72(1,21-2,45)

Примечание:

р - достоверность различий показателей по сравнению с их значениями у здоровых

доноров;

О К - отношение шансов

Полученные в ходе исследования различия в распределении частоты генотипов и аллелей гена 501)2 у пациентов с хронической НСУ-инфекцией в зависимости от степени активности воспаления печени оказались статистически не значимы (р>0,05).

При оценке значения полиморфизма Ala(-9)Val гена SOD2 в развитии фиброза печени были получены достоверные различия частоты встречаемости вариантных аллелей и генотипов гена у больных гепатитом в зависимости от степени выраженности фиброзного процесса. У пациентов с III стадией фиброза печени было выявлено достоверное увеличение частоты встречаемости аллеля Val и генотипа Val/Val по сравнению с таковой у больных с I и II стадией фиброза (табл. 6).

Таблица 6

Частота встречаемости полиморфных генотипов и аллелей Ala(-9)VaI гена SOD2 (% (абс.)) в

зависимости от стадии фиброза печени

Генотипы и аллели Стадия фиброза Х2 Р

1 стадия II стадия III стадия

Ala/Ala 20,0% (9) 15,6% (5) 4,8% (1)*** 24,439 0,0001

Ala/Val 66,7% (30) 84,4% (27) 47,6% (10)***

Val/Val 13.3% (6) 0% (0) 47,6% (10) * **

Ala 53,4% 57.8% 28,6% * **

Val 46,6% 42,2% 71,2% 4 **

Примечание:

р - уровень статистической значимости различий параметров между подгруппами больных НСУ-инфекцией с различной стадией фиброза;

Х2 - стандартный критерий Пирсона для сравнения частот генотипов и аллелей генов;

* - достоверность различий по сравнению с пациентами с I стадией фиброза печени (Р<0,05);

** - достоверность различий по сравнению с пациентами со II стадией фиброза печени (р<0,05)

Таким образом, установлено, что полиморфизм гена 501)2 играет патогенетическую роль в развитии фиброза печени при НСУ-инфекции. Хотя механизмы повреждающего действия НС^ на гепатоциты продолжают изучаться, начало поражения клеток связывают с развитием тканевой гипоксии и нарушением окислительного фосфорилирования в митохондриях. Снижение или прекращение синтеза АТФ в гепатоцитах ведет к усиленной выработке гипоксантина с последующей активацией ксантиноксидазы и сопряженных с нею усиленной продукцией супероксидных радикалов и Н202) повышенному расходу тканевых антиоксидантов и стимуляции пероксидации мембранных и внутриклеточных структур.

4. Результаты анализа распространенности полиморфизма С174С в нромотерной области гена 1Ь6 у больных хронической НСУ-инфекцией

1Ь-6 является фактором дифференцировки В-клеток, способствуя созреванию В-лимфоцитов в антителопродуцирующие клетки. Он индуцирует синтез белков острой фазы, в связи с чем (также как и интерлейкин I (1Ь-1) и

фактор некроза опухоли альфа (TNF-a)) может быть отнесен к цитокинам воспаления [Лейдерман И.Н. и соавт., 1997].

Повышение уровня IL-6 выявлено при многих патологических состояниях, в том числе при HCV-инфекции. В исследованиях С.Ю. Миловановой и соавт. (2007) было обнаружено увеличение содержания 1L-6 в сыворотке крови у больных хронической HCV-инфекдией. Гиперпродукция IL-6 с повышением его уровня в сыворотке крови достоверно чаше сочеталась с носительством аллеля G гена IL6, чем аллеля С IL6 (р<0,05). Кроме того, была обнаружена ассоциация наличия криоглобулинемии и связанных с ней системных проявлений, включая прогрессирование фиброза и поражение почек, среди больных с повышенным уровнем сывороточного IL-6 по сравнению с больными без его усиления [Милованова С.Ю. и соавт., 2007]. В исследованиях A. Antonelli et al. (2009) у пациентов с хронической HCV-инфекцией также был зарегистрирован повышенный уровень IL-6 по сравнению с таковым у здоровых доноров.

IL-6 участвует в регуляции процессов пролиферации эпителиальных клеток желчных протоков, клеток печени, образования гранулем и развития фиброза печени. Повышение продукции IL-6 отмечено при обострениях вирусного гепатита, первичного билиарного цирроза, язвенной болезни, панкреатита, глютеновой энтеропатии, болезни Крона, неспецифического язвенного колита. Наряду с другими провоспалительными цитокинами (TNF-a и IL-1), IL-6 секретируется клетками Купфера при действии различных стимулов, индуцирующих развитие гепатита. Этот эффект сопряжен с синтезом белков острой фазы и повышением адгезии нейтрофилов в синусоидах. Считается, что TNF-a и IL-1 определяют механизмы некроза и нарушения функции транспортных систем, а IL-6 стимулирует синтез белков острой фазы [Thornton A.et al., 1991; Decker К., 1993].

Доминирование провоспалительных цитокинов ассоциировано с быстрым прогрессированием фиброза печени и лучшим ответом на противовирусную терапию, тогда как преобладание противовоспалительных цитокинов - с медленным развитием фиброза и более низкой эффективностью противовирусной терапии [Cecere A. et al., 2004; Neuman М. et al., 2008].

На сегодняшний день не существует однозначных данных о влиянии полиморфизма в промотерной области гена IL6 на патогенез хронической HCV-инфекции и развитие осложнений.

Оценка распределения частоты аллелей и генотипов гена IL6 (полиморфизм - G174C в промотерной области) выявила, что частоты встречаемости генотипа G/G (39,8%) и аллеля G (62,6%) у здоровых доноров была ниже, чем у больных HCV-инфекцией (48,0 и 68,4%, соответственно).

20

Напротив, у больных хроническим вирусным гепатитом С генотипы в/С (40,8%), С/С (11,2%) и аллель С (31,4%) встречались реже, нежели в группе контроля (45,6; 14,6 и 37,4%, соответственно). Хотя выявленные различия у обследованных пациентов не были статистически значимы (р>0,05).

При оценке значения полиморфизма в174С в промотерной области гена Иб в развитии фиброза были получены статистически не значимые различия частоты встречаемости вариантных аллелей и генотипов гена у больных НСУ-инфекцией в зависимости от степени фиброза печени (р>0,05).

При изучении распределения полиморфизма Б! 74С гена Иб в зависимости от степени активности воспаления печени получены следующие различия распределения аллелей и генотипов (табл. 7). Полученные нами результаты являются подтверждением роли 1Ь-б в патогенезе поражения печени при хронической НСУ-инфекции.

Таблица 7

Распределение генотипов и аллелей гена 116 (% (абс.)) в зависимости от активности воспаления печени у больных хронической НСУ-инфекцией

Генотипы и аллели Гистологический индекс активности воспаления (баллы) Х2 Р

4-8 9-12 13-18

ею 37,7% (20) 40,8% (11) 88,8%* ** (16) 15,464 0,004

О/С 51,0% (27) 44,4% (12) 5,6%*** (1)

С/С 11,3% (6) 14,8% (4) 5,6% ***(!)

в 63,2% 63,0% 91,6% * **

С 36,8% 37,0% 8,4% * **

Примечание:

р - уровень статистической значимости различий параметров между подгруппами больных НСУ-инфекцией с различной степень активности воспаления печени;

х2 - стандартный критерий Пирсона для сравнения частот генотипов и аллелей генов;

* - достоверность различий по сравнению с пациентами с активностью воспаления 4-8 балла (р<0,05);

** - достоверность различий по сравнению с пациентами с активностью воспаления 912 балла (р<0,05)

Таким образом, существующие на сегодня данные позволяют предположить, что индивидуальный набор аллельных полиморфизмов оказывает существенное влияние на течение инфекционного процесса, развитие угрожающих осложнений и вариабельность ответа на лекарственную терапию. При этом решающее значение имеет не отдельный полиморфизм, даже влияющий на аминокислотную последовательность исходного белкового продукта; наиболее значим комбинированный эффект воздействия всех генетических вариаций.

выводы

1. Частота встречаемости аллеля ЕЗ и генотипа ЕЗ/ЕЗ гена АРОЕ у HCV-инфицированных пациентов европеоидной популяции, проживающих на территории Томской области, превышает таковую у здоровых доноров. Аллель Е4 и генотип Е4/Е4, напротив, встречаются в два раза чаще в группе здоровых доноров.

2. Распространенность аллеля Val и генотипа Val/Val гена SOD2 у больных HCV-инфекцией выше, чем в популяции. Выраженный фиброз печеночной ткани у больных хроническим гепатитом С сопряжен с носительством аллеля Val и генотипа Val/Val гена SOD2. .

3. Аллель D и генотип D/D полиморфизма H63D гена HFE у больных хроническим вирусным гепатитом С встречаются чаще, чем у здоровых доноров, и ассоциированы с выраженным фиброзом печени у HCV-инфицированных пациентов. Полиморфизм C282Y гена НЕЕ у здоровых людей и больных гепатитом С распространен одинаково и не сопряжен с фиброзом и активностью воспаления печени.

4. Аллель G и генотип G/G полиморфного варианта C174G в промотерной области гена IL6 у HCV-инфицированных пациентов ассоциирован с высокой степенью активности воспалительного процесса печени.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Функциональная значимость полиморфизма генов АРОЕ и SOD2 в формировании HCV-инфекции / H.A. Семенова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, А.И. Дмитриева, O.E. Чечина, В.А. Бычков, И.П. Моиссенко // Бюллетень сибирской медицины. -2009.-№3,-С. 64-68.

2. Ассоциация полиморфизма интерферон-индуцируемых генов человека PK.R, OAS1 и OAS3 со структурными изменениями печени при хроническом вирусном гепатите С / В.А. Бычков, H.A. Семенова, Л.А. Клепцова, В.Д. Якушина // Сборник тезисов IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов», 27-29 октября 2009 г, С. 41, Новосибирск, Россия.

3. Роль полиморфизма гена супероксиддисмутазы второго типа в развитии хронического вирусного гепатита С / H.A. Семенова, В.А. Бычков // Сборник тезисов IV международной научной конференции молодых ученых-медиков 2010, 25-26 февраля, Т. 3, С. 146-148, Курск, Россия.

4. Роль полиморфизма гена HFE в развитии хронического вирусного гепатита С I H.A. Семенова, Н.В. Рязанцева, В.А. Бычков // Сборник тезисов II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Вопросы патогенеза типовых патологических процессов", 18-19 марта 2010 г., С. 314-318, Новосибирск, Россия.

5. Влияние аллельного полиморфизма +244A/G гена PKR на структурные изменения печени при хронической HCV-инфекции / В.А. Бычков, Н.А.Семенова, Л.А. Клепцова //

22

Сборник тезисов XVI межгородской конференции молодых ученных « Актуальные проблемы патофизиологии», 21-22 апреля 2010 г., С. 41-43, Санкт-Петербург, Россия.

б. Роль полиморфизма гена IL6-174C/G в развитии хронической HCV-инфекции / Н А. Семенова, Н.В. Рязанцева, В В. Новицкий, В.А. Бычков, О.Е. Чечина//Бюллетень сибирской медицины. - 2010. - №5. - С. 93-97.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГИА - гистологический индекс активности

ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности

ПДРФ - анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ХВГС - хронический вирусный гепатит С

Аро - аполипопротеин (apolipoprotein)

HCV - вирус гепатита С (hepatitis С virus)

HFE - ген наследственного гемохроматоза (hemochromatosis gene)

IL - интерлейкин (interleukin)

SOD - супероксиддисмутаза (superoxide dismutase)

Подписано в печать 23.11.2010 г. Усл. печ. листов 0,65. Печать на ризографе. Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии СибГМУ 634050, г. Томск, Московский тракт, 2, тел. 53-04-08 Заказ № 298. Тираж 100 экземпляров.