Молекулярно-генетическая оценка роли системы интерферона в патогенезе хронического вирусного гепатита С

Бычков, Вячеслав Алексеевич

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Молекулярно-генетическая оценка роли системы интерферона в патогенезе хронического вирусного гепатита С

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Бычков, Вячеслав Алексеевич Томск 2011 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.03.03

Автореферат диссертации по медицине на тему Молекулярно-генетическая оценка роли системы интерферона в патогенезе хронического вирусного гепатита С

Бычков Вячеслав Алексеевич

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА РОЛИ СИСТЕМЫ ИНТЕРФЕРОНА В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА С

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации па соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 2 МАЙ 2011

Томск-2011

4846247

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Рязанцева Наталья Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Агафонов Владимир Иванович

доктор медицинский наук,

профессор Кологривова Елена Николаевна

Ведущая организация: Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера Сибирского отделения РАМН.

Защита состоится «27» 2011 года в часов 0о мин. на заседании

диссертационного совета Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 634050, г. Томск, ул. Московский тракт, д. 2

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета

Автореферат разослан « » ö-и. о 2011 г.

Учёный секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Вирусный гепатит С признан одной из серьезных медико-социальных проблем в связи с широким распространением среди трудоспособного населения, прогредиентным течением и высокой смертностью [Онищенко Г.Г., 2003]. До настоящего времени не разработана вакцина против вируса гепатита С (HCV - hepatitis С virus), а эффективность противовирусной терапии при распространенном генотипе lb HCV не превышает 55% [Ивашкин В.Т., 2008; Hoffman H.R., 2009]. Отличительной особенностью HCV-инфекции является латентное, малосимптомное течение. Вместе с тем заболевание постепенно прогрессирует с дальнейшим развитием цирроза печени и/или печепочноклеточной карцииомы.

Рассматривая проблему развития хронического вирусного гепатита С на молекулярном и клеточном уровнях, исследователи получили множество фактов в пользу ведущего значения иммуноопосредовапного повреждения печени. Было показано, что нормальное функционирование иммунной системы строится на балансе Thl- и ТЬ2-лимфоцитов, основанном, в первую очередь, на согласованной продукции их регуляторных цитокинов [Корочкина О.В., 2003; Хаитов P.M. и соавт, 2009]. Выявлено, что несбалансированность продукции цитокинов Th-1 и Th-2 типа играет значимую роль в иммунопатогенезс хронизации и прогрессирования HCV-инфекции [Рязанцева II.В. и соавт., 2005; Наслсдникова И.О. и соавт., 2006].

Развитие инфекционного процесса определяется как свойствами возбудителя, так и индивидуальными особенностями организма человека, являющихся, в свою очередь, отражением его генетической структуры. В настоящее время установлен факт влияния генетических особенностей индивида на восприимчивость и устойчивость к той или иной инфекции [Симбирцев A.C., Громова А.Ю., 2005; Пузырев В.П., 2006; Glass W.G. et al., 2006; Рязанцева H.B. и соавт., 2008; Vezali Е. et al., 2011]

Одну из ключевых ролей в регуляции противовирусного иммунного ответа играет система интерферона, в которую входят сами интерфероны (а, ß и у) и продукты индуцируемых ими генов (протеинкиназа R (PKR), 2',5-олигоаденилатсинтетаза (2',5'-OAS)). Интерфероны способны подавлять репродукцию вирусов, воздействуя на транскрипцию их геномов. Синтез интерферон-индуцируемых белков запускает каскад реакций, который приводит к разрушению одноцепочечных РНК и подавлению синтеза белка в зараженной клетке [Justesen J. et al., 2000; Silverman R.H. et al., 2007].

Современные методы исследования позволяют находить иммуногенетические маркеры заболевания и выявлять ассоциации между структурой определенных кластеров генов и развитием болезни. Так, к иммуногенетическим маркерам вирусного гепатита С относят гены интерлейкинов (TNFA, IL1B, 1L4RA, IL6, ILIO), хемокинов (CCR5, RANTES), системы интерферона (PKR, OAS1.3, IFNG) [Ortiz V. et al., 2002; Knapp S. et al., 2003]. Однако в настоящее время недостаточно изучено воздействие полиморфизма генов системы интерферона на характер течения заболевания, отсутствует единая точка зрения относительно влияния генетических факторов, детерминирующих функционирование иммунной системы, на степень воспалительного процесса и фиброзирования печени. Накопленные в указанном аспекте фактические данные носят весьма противоречивый характер: так, по

результатам одних авторов, у европеоидов показана ассоциация однонуклеотидного полиморфизма (ОНП) в З'-нетранслируемой области гена О ASI с исходом вирусного гепатита С [Knapp S. et al., 2003]. Согласно данным других исследователей, полиморфные варианты гена О ASI не ассоциированы с исходом гепатита С [Бархаш A.B. и соавт., 2006].

Кроме того, в настоящее время усилия исследователей сосредоточены на оценке комплексного влияния генов на предрасположенность организма человека к патологическим процессам. В случае мультифакториальных заболеваний наиболее опасным является именно сочетание неблагоприятных аллелей нескольких генов. Показано, что комбинированный эффект полиморфизмов существенно увеличивает риск развития осложнений, таких как фиброз печени при хронической HCV-инфекции [Richardson М.М. et al., 2005].

Таким образом, изучение роли интерферон-индуцируемых генов OAS1, OAS3 и PKR, а также генов интерферона IFNA17 и IFNG в иммунном ответе при хроническом вирусном гепатите С является весьма актуальным, поскольку полученные результаты могут служить основой для разработки новых методов прогнозирования клинического течения, а также способов профилактики и иммунокоррекции данной патологии.

Цель исследования: установить роль полиморфизма генов О ASI, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG в патогенезе хронического вирусного гепатита С у лиц, проживающих на территории Томской области; оценить совместное влияние полиморфных вариантов генов системы интерферона на предрасположенность к развитию хронического вирусного гепатита С.

Задачи исследования:

1. Дать сравнительный анализ характера распределения полиморфизных вариантов генов системы интерферона О ASI, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG у больных хроническим вирусным гепатитом С и здоровых доноров (европеоидов, проживающих на территории Томской области).

2. Оценить взаимосвязь полиморфизма генов О ASI, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG с выраженностью воспалительного процесса в печени при хроническом вирусном гепатите С.

3. Установить характер ассоциации полиморфных вариантов генов OASI, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG с особенностями прогрессирования фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

4. Провести анализ взаимодействий генов системы интерферона в формировании предрасположенности к развитию хронического вирусного гепатита С.

Научная новизна. Впервые изучена ассоциация распределения частот полиморфных аллелей комплекса генов системы интерферона (ОASI, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG) с активностью воспалительного процесса и прогрессированием фиброза печени при хроническом вирусном гепатите С.

Установлена связь между предрасположенностью к HCV-инфекции и носительством генотипов А/А гена О ASI, С/С гена OAS3, G/G гена PKR, G/G гена IFNA17 и Т/Т гена IFNG.

Посредством анализа особенностей клинико-морфологической картины болевания в зависимости от носительства полиморфных маркеров исследованных нов, впервые выявлены ассоциации между активностью воспалительного процесса печени и полиморфизмами OAS1, PKR и IFNA17. Впервые установлена аимосвязь между прогрессированием фиброза печени и носительством больными ^-инфекцией полиморфизма +1314С/Т гена OAS3 и +244A/G гена PKR.

Впервые составлена прогнозная модель предрасположенности к хроническому русному гепатиту С на основе полиморфных вариантов генов системы ггерферона и доказана целесообразность их комплексного исследования, вышагощего процент прогноза течения хронического вирусного гепатита С до ,8%.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенного следования позволили выявить ДНК-маркеры вовлеченности системы ггерферона в патогенез HCV-инфекции, что позволяет в дальнейшем дивидуализировать тактику ведения больных хроническим вирусным гепатитом . Идентификация полиморфизмов -1A/G гена OAS1, +1314С/Т гена OAS3, +244A/G на PKR, 551G/T гена IFNAI7 и +874А/Т гена IFNG позволяет судить о наличии у циентов предрасположенности к развитию хронического вирусного гепатита С и огнозировать характер течения заболевания.

Полученные фундаментальные знания могут быть использованы для зработки новых подходов к патогенетически обоснованной терапии и оеврсменной профилактики развития хронического вирусного гепатита С.

Внедрение. Основные положения и выводы диссертационной работы спользуются в учебном процессе кафедры фундаментальных основ клинической едицины (по дисциплине «Клиническая лабораторная диагностика» в разделе Диагностика инфекционных заболеваний», по дисциплине «Молекулярные основы атологии» в разделе «Молекулярно-генетические основы предрасположенности рганизма к инфекционным заболеваниям») и кафедры патофизиологии (в разделах Роль наследственности в патологии» и «Патофизиология печени») ГОУ ВПО ибГМУ Минздравсоцразвития России.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. У больных хроническим вирусным гепатитом С (европеоидов, роживающих на территории Томской области) частота встречаемости генотипа

А и аллеля А гена OAS1, генотипа С/С гена OAS3, генотипа G/G и аллеля G гена KR, генотипа G/G гена IFNA17, а также генотипа Т/Т и аллеля Т гена IFNG выше о сравнению с таковыми у здоровых доноров.

2. Выраженность активности воспаления в печени у больных хроническим епатитом С сопряжена с носительством генотипа А/А и аллеля А гена OAS1, енотипа G/G и аллеля G гена PKR, а также генотипа G/T гена IFNA17.

3. Степень выраженности фиброза печени у больных хроническим ирусным гепатитом С ассоциирована с увеличением частоты встречаемости енотипа С/С гена OAS3 и генотипа G/G и аллеля G гена PKR.

4. Учет совместного влияния полиморфизма генов OAS1, OAS3, PKR, FNA17 и IFNG на предрасположенность к хроническому вирусному гепатиту С лучшает качество прогнозирования развития и течения заболевания.

Апробация работы. Результаты исследования были доложены и обсуждены на IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2009), П Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Вопросы патогенеза типовых патологических процессов" (Новосибирск, 2010), XVI межгородской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 4 - в журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертаций на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Объем и структура диссертации. Текст диссертации изложен на 127 страницах и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы и список литературы, состоящий из 61 отечественных и 134 иностранных работ. Работа проиллюстрирована 4 рисунками и 18 таблицами.

Личный вклад автора. Анализ данных литературы по теме диссертации, планирование исследования, выделение ДНК, подбор праймеров, амплификация исследуемых генов, рестрикция амплификатов со спецефическими рестриктазами, детекция результатов, статистический анализ результатов, написание диссертации выполнены лично автором.

Исследование выполнено в рамках ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (проект «Разработка технологической платформы молекулярной диагностики и лечения социально значимых заболеваний и подготовка на ее основе научно-исследовательских кадров для молекулярной медицины», ГК № 02.740.11.0311; проект «Разработка и внедрение методов долгосрочного прогноза научно-технологического развития в области молекулярной медицины для аналитического обеспечения реализации государственной политики в сфере инновационного развития экономики, ГК № 16.740.11.0360).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика обследованных

Работа основана на клинико-лабораторном обследовании 98 пациентов с диагнозом хронический вирусный гепатит С в возрасте от 18 до 56 лет (56 мужчин и 42 женщины), а также сопоставимых по возрасту 171 здоровых донора (98 мужчин и 73 женщины). Все обследованные — европеоиды, проживающие на территории Томской области.

Пациенты находились на диспансерном учете или стационарном лечении в отделении гастроэнтерологии ОГУЗ «Областная клиническая больница» г. Томска (главный врач - М.Н. Заюков) и Клинической больницы № 81 ФГУЗ Федерального медико-биологического агентства г. Северска (главный врач - В.А. Воробьев). Группа здоровых доноров была набрана в донорском отделении ФГУП НПО «Микроген» Минздравсоцразвития РФ, филиал в г. Томск НПО «Вирион», (зав.

делением - О.Н. Веснина). Набор обследованных осуществлялся в период 200709 гг.

В анамнезе у большинства больных имели место донорство, гемотрансфузии, 1еративные вмешательства, работа с препаратами крови, сексуальные контакты с льными хроническим вирусным гепатитом С. Для всех пациентов установлен иблизительный срок инфицирования, составлявший на момент обследования от 2 16 лет. У 80% пациентов длительность заболевания составляла от 8 до 12 лет. икому из пациентов до обследования противовирусное лечение не проводилось.

Для сбора данных и их анализа была разработана «карта обследования льного», включавшая жалобы, анамнез пациента, результаты проведенных бораторного, инструментального и морфологического обследований.

Диагноз хронического вирусного гепатита С устанавливался на основании мплекса данных клинико-лабораторного и инструментального обследований. У ех пациентов были определены срок и источник инфицирования, оценивались бъективные (жалобы) и объективные признаки (осмотр, данные общего и юхимического анализа крови, анализ показателей иммунного статуса, ьтразвуковое исследование органов брюшной полости, а также интиграфическое исследование печени).

Этиологическая верификация диагноза проводилась качественным пределением в крови у пациентов РНК НСУ с помощью полимеразной цепной еакции, а также серологических маркеров НСУ (анти-НСУ ^М, анти-НСУ ^С, в к структурным белкам НСУ, к неструктурным белкам N8-3, N5-4, N8-5).

С целью морфологической верификации диагноза и определения степени гивности воспалительного процесса с использованием индекса гистологической тивности (ИГА) А. КпоскН (1981) и стадии фиброза по и. Безте! (1995) всем ациентам проводилась пункционная биопсия печени по в. MengЫш (1958). Данная анипуляция осуществлялась только по показаниям лечащим врачом в условиях ационара. По данным морфологического анализа полученного биопсийного атериала, выделяли слабую (4-8 баллов) и умеренную активность воспалительного роцесса (более 9 баллов), а также I стадию (слабовыраженный перипортальный иброз), II стадию (умеренный фиброз с портальными септами) и Ш стадию ыраженный) фиброза печени. В таблице 1 приведены данные об объеме сследования в соответствии с использованными методами.

Критериями исключения пациентов из исследования являлись: острые аболевания любой этиологии, обострения существующего хронического атологического процесса; гепатоцеллюлярная карцинома; сочетанная патология ечени (алкогольная болезнь печени, цирроз любой этиологии, токсическое и утоиммунное поражение печени и др.); наркомания и злоупотребление алкоголем а момент обследования и в анамнезе.

Все материалы по обследованию больных хроническим вирусным гепатитом С здоровых доноров (протокол исследования, информационное согласие, 1формационный листок испытуемого) и возможных последствиях методов бследования (взятие крови из локтевой вены утром натощак) были представлены в тический комитет ГОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России. По

представленной документации замечаний не было, работа соответствовала требованиям этической экспертизы.

Таблица 1

Распределение обследованных лиц по использованным методам исследования

Использованный метод исследования Количество больных HCV-нпфекцней Количество здоровых доноров

Выделение ДНК 98 171

Определение однонуклеотидных полиморфизмов генов системы интерферона: - OAS1 (-IA/G) - OAS3 (+1314С/Т) - PKR (+244A/G) -IFNA17( 551T/G) - IFNG (+874А/Т) 98 171

Морфологическое исследование печени. Определение ИГА воспаления по Knodell: - ИГА воспаления 4-8 баллов 53

- ИГА воспаления >9 баллов Определение стадии фиброза по Desmet: -1 стадия фиброза - II стадия фиброза - III стадия фиброза 45 31 27 40 Не проводилось

Методы исследования

Для определения полиморфизмов генов системы интерферона О ASI, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG проводилось выделение ДНК из цельной венозной крови, предварительно стабилизированной ЭДТА, у больных HCV-инфекцией и здоровых доноров с использованием фенол-хлороформного метода [Маниатис Т.И. с соавт. 1984; Chmczynski Р., Sacchi N., 1987]. Амплификацию генов осуществляли с помощью амшшфикатора «Терцик» с использованием соответствующих праймеров («СибЭнзим», Новосибирск) и при определенных температурных режимах (табл. 2).

Полиморфизм гена OASJ анализировали с помощью аллель-специфической ПЦР с использованием общего и двух аллель-специфических праймеров. ПЦР-продукт образовывался только в случае комплементарного соответствия 3'-концов праймеров к исследуемым аллелеям ДНК. Гомозиготные или гетерозиготный генотипы для данного образца определяли по наличию или отсутствию на дорожке 3% агарозного геля продукта амплификации соответствующего размера после электрофореза. Для детекции полиморфизмов в генах OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG использовали специфические эндонуклеазы рестрикции. По наличию или отсутствию рестрикции делали заключение о характере полиморфизма.

Таблица 2

Характеристика исследованных полиморфизмов генов _OAS1, OA S3, PKR, IFNA17 и IFNG___

Полиморфизм Структура праймера Температура отжига (°C) Фермент рестрикции

-1A/G гена OAS! Аллель A: 5'-atc-atg-tgt-ctc-acc-ctt-tcg-a-3' Аллель G: 5'-gat-cat-gtg-tct-cac-cct-ttc-tg-3' Общий: 5'-cac-tgg-agc-cct-ttc-ccc-3' 62 UCT

1314С/Т гена OAS3 5'-tgg-atg-ctc-agg-ttt-ggg-cc-3' 5'-cca-acc-tca-gct-cca-ttg-ctg-ta-3' 63 Taql

+244A/G гена PKR 5'-tta-aat-gct-gaa-gcc-atg-gaa-c3' 5'-gac-aaa-tac-ctg-gac-aaa-gag-ctc-3' 64 Bst F 51

51T/G гена IFNA17 5'-caa-tca-gga-tca-ttg-cca-tg-3' 5'-gct-t(g-gac-ttc-ccc-agg-3' 63 Sspl

+874А/Т гена 1FNG 5'-gct-aaa-gaa-agt-att-ttc-aag-cta-3' 5'-ctt-aca-aca-eaa-aat-cag-a-3' 55 BglII

Для определения полиморфных аллелей генов использовали анализ олиморфизма длины рестриктных фрагментов (ПДРФ). Амплификаты сследованных генов инкубировали при определенной температуре со пецефическими рестриктазами («СибЭнзим», Новосибирск) (табл. 2).

Фрагменты рестрикции разделяли с помощью электрофореза для разделения естрикционных фрагментов. Визуализация результатов ПЦР и ПДРФ существлялась с помощью системы гель-электрофореза в УФ-свете.

Результаты исследования обрабатывали с использованием стандартного макета рограмм SPSS v.11.5. Для сравнения частот аллелей и генотипов между азличными группами использовали критерий "i Пирсона с учетом поправки Йетиса в случае объема выборки менее 10 человек). Обработка результатов генетических сследований осуществлялась с использованием критерия отношения шансов (OR) с асчетом для него 95% доверительного интервала [Флейс Д., 1989; Боровиков В.В., 001]. Оценку межгенных взаимодействий проводили с помощью Log-егрессионного анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты анализа распространенности полиморфных вариантов гена OAS1 у больных хроническим вирусным гепатитом С

Одно из важных мест среди интерферон-индуцируемых генов занимают гены AS, отвечающие за синтез 2',5'-олигоаденилатсинтетазы - фермента, ндуцирующего образование олигоаденилатов, активирующих РНКазу L, что риводит к деструкции вирусной и клеточной РНК. Олигоаденилатсинтетаза шловека представлена тремя изоферментами, кодируемыми разными генами, но бладающими сходной ферментативной активностью: OAS-1, OAS-2 и OAS-3 fogensen Т.Н., Paludan S., 2001].

Результаты анализа встречаемости полиморфных аллелей гена ОА81 у здоровых доноров и больных хронической НСУ-инфекцией выявили достоверное (р<0,05) различие частот генотипов и аллелей. Так, у больных НСУ-иифекцией частота встречаемости генотипа А/А (70,4%) была статистически значимо выше, а генотипа АЛл (19,4%) - ниже, по сравнению с контролем (48,5% и 33,9%, соответственно). Аллель А у больных встречался достоверно чаще (79,6%), а аллель в -достоверно реже (20,4%) по сравнению с группой контроля (табл. 3). Было сделано заключение, что наибольшему риску развития гепатита С подвержены лица-носители гомозиготного варианта А/А полиморфизма -1АЛЗ гена ОАБ1 (СЖ=2,52) и аллеля А (011-2,12) (табл. 3).

Таблица 3

Распределение генотипов и аллелей полиморфизма -1А/С гена ОА81 (% (абс.)) среди здоровых доноров и больных НСУ-инфекцией

Показатель Здоровые доноры N=171 Больные HCV N=98 х2 Р OR знач. (95% CI)

А/А 48,5% (83) 70,4% (69) 11,25 0,0008 2,52 (1,49-4,27)

PJG 33,9% (58) 19,4% (19) 5,75 0,0165 0,47 (0,26-0,85)

G/G 17,6% (30) 10,2% (10) 0,88 0,3492 0,53 (0,25-1,15)

А 65,5% (112) 79,6% (78) 5,31 0,0213 2,12(1,40-3,21)

G 34,5% (59) 20,4% (20) 0,47(0,31-0,71)

Примечание: здесь и в табл. 4-7 у? — критерий Пирсона для сравнения частот генотипов и аллелей генов с учетом поправки Йетиса; р - достоверность различий показателей по сравнению с их значениями у здоровых доноров; OR - критерий отношения шансов с 95% доверительным интервалом

Исследованный полиморфизм -1A/G гена OAS] располагается в сайте альтернативного сплайсинга. Каждому генотипу соответствует свой вариант мРНК и свой белковый продукт. Различные по аминокислотной структуре варианты могут проявлять неодинаковую ферментативную активность и по-разному реализовывать свое противовирусное действие. Действительно, L.L. Field et al. [2005] показали, что генотип А/А данного полиморфизма ассоциирован со сниженной базалыюй активностью фермента OAS-1. Таким образом, подтверждено значение ОНП -1А/А гена OAS1 в патогенезе хронического вирусного гепатита С.

При изучении полиморфизма -1A/G гена OAS1 в зависимости от степени активности воспаления выявлено, что генотип А/А и аллель А достоверно чаще встречались у пациентов с ИГА воспаления более 9 баллов (А/А - 91,1% и А -95,6%) (р<0,05), чем у больных хроническим вирусным гепатитом С с ИГА 4-8 балла (А/А - 52,8% и А - 68,0%), поэтому генотип А/А (OR = 9,15) и аллель A (OR = 8,03) были определены как рисковые в отношении выраженного воспаления в ткани печени. Как известно, OAS-1 непосредственно не участвует в воспалительном процессе, а катализирует образование олигоаденилатов, активирующих два фермента: РНКазу L, направленную на деструкцию РНК вируса, и фосфодиэстеразу, регулирующую внутриклеточную концентрацию олигоаденилатов. Вероятно, существует иной функционально значимый полиморфизм среди генов человека, находящийся в неравновесии по сцеплению с ОНП -1A/G гена OAS 1 и оказывающий

ияние на степень воспаления. Отсутствие каких-либо научных данных говорит о м, что влияние OAS1 на течение и исход HCV инфекции нуждается в дальнейших следованиях. При оценке распределения аллелей и генотипов полиморфизма -/G гена О ASI у больных HCV-инфекцисй в зависимости от степени фиброза чени были получены статистически не достоверные различия (р>0,05).

Таким образом, у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С мозиготный генотип А/А и аллель А полиморфизма -1A/G гена OAS1 являются сковыми при данном заболевании и сопряжены с умеренным воспалительным роцессом в паренхиме печени.

Результаты анализа распространенности полиморфных вариантов гена OAS3 у больных хроническим вирусным гепатитом С

OAS-3 обладает сходным ферментативным действием, поскольку содержит три овторяющихся домена, гомологичных домену OAS-1.

В нашем исследовании анализ полиморфизма +1314С/Т гена OAS3 выявил, что нотип С/С встречался достоверно чаще у больных хронической HCV-инфекцией 0,6%), чем у здоровых доноров (65,5%) (OR=2,19), а генотип С/Т - достоверно еже (11,2% против 30,4%). Достоверных различий в распределении аллелей гена AS3 не обнаружено (табл. 4).

Исследованный полиморфизм локализован в кодирующей области гена OAS3, днако замена цитизина на тимин в экзоне не приводит к замене аминокислоты в ерменте вследствие такого свойства генетического кода как избыточность, одобные синонимичные замены в экзонах могут оказывать влияние на ранскрипцию, сплайсинг, транспорт мРНК, ее стабильность и трансляцию hamary J.V. et al., 2006; Goymer Р., 2007], что может нарушать контрансляционный олдинг белка и его дальнейшую работу. A.B. Бархаш и соавт. [2006] изучили лияние полиморфизма +1314С/Т гена OAS3 на восприимчивость человека к вирусу лещевого энцефалита, родственного HCV. Было обнаружено достоверное величение частоты гомозигот Т/Т по ОНП гена OAS3 у больных с поражением ентральной нервной системы по сравнению с больными лихорадочной формой, что юзволило рассматривать данный ОНП в качестве одного из генетических маркеров осприимчивости к вирусу клещевого энцефалита.

Таблица 4

Распределение генотипов и аллелей полиморфизма +1314С/Т гена ОАБЗ (% (абс.)) среди здоровых доноров и больных НСУ-инфекцией

оказатсль Здоровые доноры N=171 Больные HCV N=98 х2 Р OR знач. (95% CI)

С/С 65,5% (112) 80,6% (79) 6.20 0,0128 2,19(1,21-3,96)

С/Т 30,4% (52) 11,2% (11) 11,74 0,0006 0,29 (0,14-0,59)

Т/Т 4,1% (7) 8,2% (8) 1,26 0,2611 2,08 (0,73-5,93)

С 80,7% (138) 86,2% (84) 0,77 0,3815 1,50 (0,92-2,44)

т 19,3% (33) 13,8% (14) 0,67 (0,41-1,09)

Можно предположить, что при инфицировании вирусом гепатита С сниженный уровень олигоаденилатов приводит к недостаточный активации рибонуклеазы L, что влечет за собой неполную деградацию вирусной РНК в клетке и, как следствие, нарушение реализации противовирусного эффекта. Таким образом, подтверждена значимость полиморфизма +1314С/Т гена OAS3 в патогенезе хронического вирусного гепатита С.

В нашей работе не было выявлено статистически значимых различий частоты встречаемости генотипа С/С в зависимости от степени воспалительного процесса в печени, но показано увеличение частоты встречаемости генотипа Т/Т (15,6%) и снижение частоты встречаемости генотипа С/Т (2,2%) у пациентов с умеренным воспалением в печени по сравнению с низкой активностью (1,9% и 18,9%, соответственно). Частоты аллелей различались не значимо (р>0,05). При анализе частоты встречаемости полиморфных вариантов ОНП +1314С/Т гена OÂS3 пациенты со II и III стадиями фиброза печени из-за немногочисленности индивидов с аллелем Т в этих группах были объединены. При анализе данных нам не удалось выявить достоверных различий в распределении аллелей ОНП +1314С/Т. Исследование распространенности генотипов показало, что у больных с I стадией фиброза печени генотип С/С встречался в 61,3% случаев, С/Т - в 25,8% случаев, Т/Т - в 12,9% случаев; у больных со II и Ш стадиями фиброза генотипы встречались, соответственно, в 89,6; 4,5 и 5,9% случаев.

Таким образом, было обнаружено, что риск развития выраженного фиброза печени повышен в случае генотипа С/С (OR=5,41). При анализе литературы не было обнаружено работ об ассоциации полиморфизма +1314С/Т гена OAS3 с развитием фиброза печени. Вероятно, генотип С/С снижает противовирусную защиту, приводит к созданию благоприятных условий для размножения HCV, что, видимо, может сказываться на скорости развития фиброза.

Результаты анализа распространенности полиморфных вариантов гена PKR у больных хроническим вирусным гепатитом С

Другим механизмом противовирусного действия системы интерферона является активация фермента протеинкиназы R, являющимся триггерным ферментом и влияющим на проапоптотическую активность, контроль клеточного роста и дифференцировку [Garcia M.A. et al., 2006]. PKR фосфорилирует фактор инициации трансляции eIF2, что приводит к подавлению синтеза белка в клетке и нарушению сборки вирусных частиц.

При исследовании ОНП +244 A/G гена PKR показано, что у здоровых доноров аллель А встречался достоверно чаще (75,4% случаев), чем у больных (58,7%) (OR=0,46), а аллель G, наоборот, чаще у больных (41,3%), чем у здоровых (24,6%) (OR=2,16) (табл. 5). Выявлено, что частота встречаемости генотипа А/А у больных HCV-инфекцией (46,9%) была ниже, чем в группе контроля (64,9%), а встречаемость генотипов A/G и G/G, соответственно, выше (23,5% и 29,6% против 21,1% и 14,0%); при этом статистически значимые (р<0,05) различия были показаны для генотипов А/А и G/G. Полученные данные свидетельствуют о наличии рисковых свойств у генотипа G/G (OR=2,57) (табл. 5).

Таблица 5

аспрсделепис генотипов и аллелей полиморфизма +244А/С гена РКП (% (абс.)) среди здоровых доноров и больных НСУ-кнфскцней

Показатель Здоровые доноры N=171 Больные HCV N=98 х2 Р OR знач. (95% CI)

А/А 64,9% (111) 46,9% (46) 7,56 0,0060 0,48(0,29-0,79)

A/G 21,1% (36) 23,5 % (23) 0,09 0,7582 1,15(0,63-2,08)

G/G 14,0% (24) 29,6% (29) 8,57 0,0034 2,57(1,40-4,75)

А 75,4% (129) 58,7% (57,5) 7,34 0,0068 0,46 (0,32-0,67)

G 24,6% (42) 41,3% (40,5) 2,16(1,49-3,15)

В ходе изучения научной литературы нам не удалось найти работ, освященных изучению влияния полиморфизма +244A/G гена PKR на активность ермента и/или его продукцию. Данный полиморфизм находится во 2-м интроне ена PKR, а известно, что нуклеотидные замены, затрагивающие интронные оследовательности гена, могут приводить к изменению структуры энхансеров, ттешоаторов и/или сайленсеров [Bidwell J.P., 1998], что будет сказываться на родукции фермента. Можно предположить, что его недостаточное образование пособствует распространению вирусной инфекции. Интересно, что одним из еханизмов ускользания HCV из-под иммунного контроля является именно его оздействие на протеинкиназу R [Не Y. et al., 2001].

При изучении распределения аллелей и генотипов полиморфизма +244A/G гена KR в зависимости от активности воспаления в печени были получены достоверные азличия (р<0,05). Частоты встречаемости аллелей А и G у больных с ИГА оспаления 4-8 и более 9 баллов составили 70,8 и 29,2%; 44,5 и 55,5% оответственно. Распределение генотипов оказалось таковым: у больных с ИГА оспаления 4-8 генотип А/А выявлялся в 58,5% случаев, A/G - в 24,5%, G/G - в 7,0%; у больных с ИГА более 9 баллов -33,3; 22,2 и 44,5%, соответственно, оказана ассоциация аллеля G (OR=3,02) и генотипа G/G (OR=2,79) с умеренным оспалением паренхимы печени при хроническом вирусном гепатите С, а аллеля А R=0,33) и генотипа А/А (OR=0,35) - со слабым. Нами было предположено, что енотип G/G способен влиять на продукцию протеинкиназы R. При пониженном бразовании фермента гепатоцит не сможет препятствовать сборке вирусных частиц адекватно изменять экспрессию генов, следовательно, будет снижена ффективность других механизмов противовирусной защиты, что способствует ыстрому распространению инфекции и активации воспалительного процесса в ечени.

При оценке значения полиморфизма +244A/G гена PKR в развитии фиброза ечени были получены достоверные различия частот встречаемости вариантных лелей и генотипов у больных хроническим вирусным гепатитом С. Так, частоты стречаемости аллелей А и G у больных с I, II и III стадиями фиброза составили 75,8 24,2%; 85,2 и 14,8%; 27,5 и 72,5% соответственно. Распределение генотипов казалось следующим: у больных с I стадией фиброза генотип А/А выявлялся % 8,0% случаев, A/G - в 35,5%, G/G - в 6,5%; у больных со II стадией встречаемость енотипов составила 70,4; 29,6 и 0%, соответственно; у больных с III стадией - 22,5;

10,0 и 67,5%, соответственно. Было показано, что развитие фиброза при хроническом вирусном гепатите С ассоциировано с аллелем G (OR=10,11) и генотипом G/G (OR=58,2) исследуемого полиморфизма. Нами было обнаружено, что генотип G/G приводит к активации воспаления в паренхиме печени, а это, в свою очередь, является предпосылкой для развития фиброза. Кроме того, одним из вероятных механизмов воздействия PKR на процесс воспаления может быть активация ядерного фактора NF-кВ [De Lucca F.L. et al., 2002], обладающего антиапоптотическим действием и влияющего на процессы пролиферации. Таким образом, показано, что генотип G/G ОНП +244A/G гена PKR достоверно чаще встречался у больных по сравнению со здоровыми донорами и ассоциирован с активностью воспаления в печени и степенью фиброза, что говорит о несомненной значимости изучаемого ОНП в патогенезе хронического вирусного гепатита С.

Результаты анализа распространенности полиморфных вариантов гена IFNA17y больных хроническим вирусным гепатитом С

Интерферон-a является ключевым фактором противовирусной защиты организма при вирусной инфекции, запускающий внутриклеточные сигнальные пути. Препараты EFN-a лежат в основе всех современных схем лечения HCV-инфекции [Блохина Н.П., Цурикова Н.Н., 2002; Vezali Е. et al., 2011]. Таким образом, участие продукта гена IFNA17 в патогенезе хронического вирусного гепатита С не подлежит сомнению.

Оценка распределения частот аллелей и генотипов гена ОНП 551 T/G гена IFNA17 выявила достоверное различие частот генотипов G/G и G/T и аллелей в исследованных группах (р<0,05). Было показано, что наибольшему риску развития гепатита С подвержены лица-носители гомозиготного варианта G/G полиморфизма 551 T/G гена IFNA17 (OR-4,76) и аллеля G (OR=l,96), а наименьшему риску — лица, гетерозиготные по генотипу G/T (OR=0,29) и с аллелем Т (OR=0,21) (табл. 6).

Таблица 6

Распределение генотипов и аллелей полиморфизма 551 T/G гена IFNA17 (% (абс.)) среди здоровых доноров и больных НСУ-инфекцией

Показатель Здоровые доноры N=171 Больные HCV N=98 к2 Р OR знач. (95% CI)

G/G 14,6% (25) 44,9% (44) 28,38 0,0001 4,76(2.66-8.51)

G/T 49,7% (85) 22,4% (22) 18,2 0,0001 0,29 (0.17-0.51)

Т/Т 35,7% (61) 32,7% (32) 0,14 0,7130 0,87 (0.52-1.48)

G 39,2% (67) 56,1% (55) 6,55 0,0105 1,96(1.37-2.80)

Т 60,8% (104) 43,9% (43) 0,51 (0.36-0.73)

Н. ЫакаэЫта е1 а1. [2005] было показано, что полиморфизм 551 ТАЗ гена 1РЫА17 расположен в кодирующей части гена и приводит к замене изолейцина в 184 позиции на аргинин. По нашим данным, такая замена увеличивает риск развития заболевания практически в 5 раз (ОК=4,76). Это позволяет сделать предположение о том, что белок ШЯ-а с аргинином в 184 положении отличается сниженной

пособностью запускать внутриклеточные механизмы защиты от вирусной агрессии, нтересно, что в исследовании I. Golovleva et al. [1996] была показана ассоциация юлиморфизма IFN-a (I184R) с другим значимым полиморфизмом гена нтерферона-альфа - 60Т/А гена IFNA10, приводящего к образованию стоп-кодона С20Х), что также могло оказывать влияние на трансляцию или экспрессию гена FNA17.

При изучении распределения аллелей G и Т ОНП 551 T/G в зависимости от тепени активности воспаления не выявлено достоверных различий в частоте их стречаемости в сравниваемых группах больных. При исследовании генотипов бнаружено, что генотип G/G у пациентов со слабым воспалением встречался остоверно чаще (58,5%) по сравнению с пациентами с умеренным воспалением в ечени (28,9%) (OR=3,29). При оценке распределения аллелей и генотипов олиморфизма 551T/G гена IFNA17 у больных HCV-инфекцией в зависимости от тепени фиброза печени были получены статистически не значимые различия р>0,05).

Таким образом, рисковый по предрасположенности генотип G/G полиморфизма 51 T/G гена 1FNA17 оказался сопряжен со слабым воспалением печени. Нами было редположено, что генотип G/G способствует созданию благоприятных условий для азвития HCV. По данным литературы, с развитием выраженного воспаления ссоциированы полиморфизмы генов, таких как CCR5-delta32, RANTES, [Ilellier S. et 1., 2003], IL10 [Yee L.J. et al., 2001], IL18 [Bouzgarrou N. et al., 2008] и др., одирующих функциональные цитокины и ферменты. Генотип G/G, видимо, играет торостепенную роль в развитии воспалительного процесса, поскольку в нашем сследовании практически 60% носителей данного генотипа имели ИГА воспаления -8 баллов. Это может быть связано с тем, что основной функцией интерферонов вляется инициация неспецифической противовирусной защиты клеток, еализуемой через активацию транскрипции интерферон-индуцируемых генов.

Результаты анализа распространенности полиморфных вариантов гена ¡FNG у больных хроническим вирусным гепатитом С

Как известно, IFN-y обладает обширным иммуномодулирующим действием: аправляет развитие иммунного ответа по Thl-пути, усиливает экспрессию молекул НС II, способствует презентации вирусных антигенов Th-лимфоцитам, усиливает ктивность макрофагов и натуральных киллеров [Нестерова И.В., 2004].

При исследовании распределения аллелей и генотипов ОНП +874 А/Т гена NG в нашей работе (табл. 7) были выявлено, что аллель А достоверно чаще стречался у здоровых доноров (48,0% случаев), чем у больных (31,6%) (ÔR=0,5), а лель Т, наоборот, чаще у больных (68,4%), чем у здоровых (52,0%) (OR=l,99). астота встречаемости генотипа А/Т у больных HCV-инфекцией (53,1%) была ниже, генотипа Т/Т (41,8%) - выше (р<0,05) по сравнению с группой контроля (83,0 и 0,6%, соответственно).

Полученные данные выявили рисковые свойства аплеля Т (OR=l,99) и генотипа /Т (OR=6,ll), что подтверждается результатами других исследователей. Так, в аботе C.Y. Dai [2006] пациенты с Т-аллелем имели достоверно больший уровень

цирроза печени, чем пациенты с А-аллелем. Изучаемый нами полиморфизм +874 А/Т располагается в первом интроне гена IFNG. Возможное влияние ОНП интронов на продукцию белка было предложено выше: пациенты с генотипом Т/Т, предположительно, обладали сниженным уровнем продукции IFN-y. Известно, что сайт начала трансляции совпадает с предположительным сайтом связывания NF-kB, что также может сказываться на секреции IFN-y [Matos G.I. et al., 2007].

Таблица 7

Распределение генотипов и аллелей полиморфизма +874А/Т гена (% (абс.)) среди здоровых доноров и больных НСУ-инфекцией

Показатель Здоровые допоры N=171 Больные HCV N=98 х2 Р OR знач. (95% CI)

А/А 6,4% (11) 5,1% (5) 0,03 0,8601 0,78 (0,26-2,32)

А/Г 83,0% (142) 53,1% (52) 26,38 0,0001 0,23 (0,13-0,41)

Т/Т 10,6% (18) 41,8% (41) 33,86 0,0001 6,11(3,25-11,50)

А 48,0% (82) 31,6% (31) 6,16 0,0131 0,5 (0,35-0,73)

т 52,0% (89) 68,4% (67) 1,99 (1,38-2,88)

При оценке значения полиморфизма +874А/Т гена IFNG в развитии воспаления и фиброза в паренхиме печени не было получено статистически достоверных различий частот встречаемости вариантных аллелей и генотипов гена у больных НСУ-инфекцией (р>0,05). Возможно, это связано с тем, что эффекты IFN-y проявляются на первых этапах контакта с вирусом. Для каждого больного период времени, в течение которого развивается воспаление и фиброз печени, индивидуален, и, видимо, предопределен генетически. Так, фиброгенез -комплексный процесс, вызванный рядом параллельно действующих факторов, таких как окислительный стресс, воспаление, стеатоз. По данным литературы, генетические вариации, влияющие на развитие фиброза, как правило, возникают в различных точках именно этих процессов [Hellier S. et al., 2003; Richardson M.M. et al., 2005].

Анализ межгенных взаимодействий в формировании предрасположенности к развитию хронического вирусного гепатита С

Стоит отметить, что наиболее опасным для возникновения многих болезней является сочетание нескольких неблагоприятных аллелей генов с аддитивным эффектом. М.М. Richardson et al. [2005] на примере изучения профибротичсских полиморфизмов при хроническом вирусном гепатите С доказали, что комбинированный эффект полиморфизмов существенно увеличивает риск прогрессирования фиброза.

Для оценки совместного влияния полиморфизмов генов OAS], OAS3, PKR, IFNA17 и JFNG на предрасположенность к HCV-инфекции нами использовался метод логистической регрессии (табл. 8).

Анализ результатов исследования показал, что наибольший вклад в развитие предрасположенности вносит полиморфизм 551T/G гена IFNA17, видимо, потому,

о №N-0 является пусковым фактором, ответственным за включение всех оследующих внутриклеточных механизмов защиты от вируса. Второе, третье и етвертое места принадлежат ОНП генов ОАБ1, РКП и /ГМ?, чьи белковые родукты отвечают за непосредственную реализацию противовирусного действия и грают важную роль в патогенезе хронического вирусного гепатита С (рис. 1). 1аименыиий вклад в развитие предрасположенности принадлежит полиморфизму ена ОА83.

Таким образом, было показано, что гены системы интерферона 0А81, ОА83, КИ, ПТЧА17 и №N0 оказывают влияние на предрасположенность и характер ечения хронического вирусного гепатита С. Полиморфизмы в этих генов могут лужить ДНК-маркерами хронического вирусного гепатита С. Вместе с тем омплексное изучение генов улучшает качество прогнозирования редрасположенности.

Таблица 8

Анализ вклада изученных полиморфизмов генов системы интерферона в предрасположенность к хроническому вирусному гепатиту С

Шаг Включенные в модель гены х2 Р -2LL NRS, % ОРС, %

1 ¡FNG. 27,139 <0,001 325,713 13,1 72,1

2 IFNG; IFNA17. 110,616 <0,001 242,236 46,1 81,4

3 1FNG; 1FNA17; PKR. 151,937 <0,001 200,915 59,1 80,3

4 1FNG; IFNAI7; PKR; OASI. 216,502 <0,001 136,350 75,7 88,5

5 IFNG; IFNA17; PKR; OASI; OAS3. 221,566 <0,001 131,286 76,8 88,8

Примечание: i — критерий сравнения частоты встречаемости гена у больных вирусным патитом С и здоровых доноров; р - достоверность разлитой показателей между сравниваемыми уппами; -2LL(-2 Log Likelihood) - показатель качества приближения регрессионной модели;

.S (Nagelkerke R Square) - показатель, указывающий на ту часть дисперсии, которую можно бъяснить с помощью Log-регрессии; ОРС (Overall Percentage Correct) - процент верных рогнозов данной моделью.

Учитывая важную роль системы интерферона в иммунопатогенезе ерсистентных вирусных инфекций, дальнейшее углубленное изучение олекулярно-генетических механизмов функционирования системы интерферона озволит обнаружить новые подходы в предупреждении и коррекции ммунопатологических расстройств.

Рис. 1. Значение полиморфных вариантов генов OAS1, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG в патогенезе хронического вирусного гепатита С (по данным Bidwell J.P., 1998; Field L.L. et al., 2005; Nakashima H. et al., 2005; Dai C.Y. et al., 2006; Goymer P., 2007 и собственных исследований). Применение: <=> - предполагаемый механизм влияния генетической информации на уровень белкового продукта.

ВЫВОДЫ

1. Полиморфные варианты генов системы интерферона -1A/G гена О ASI, 1314С/Т гена OAS3, +244A/G гена PKR, 551G/T гена IFNA17 и +874А/Т гена IFNG грают роль в патогенезе хронического вирусного гепатита С, поскольку частоты стречаемости определенных аллельных вариантов у больных с HCV-инфекцией вропеоидов, проживающих на территории Томской области) статистически ачимо превышают таковые у здоровых доноров.

2. Среди больных хроническим вирусным гепатитом С гомозиготный нотип А/А и аллель А полиморфизма -1A/G гена OAS1 встречаются достоверно аще по сравнению со здоровыми донорами и сопряжены с умеренным оспалительным процессом в паренхиме печени у больных хроническим вирусным

патитом С.

3. Гомозиготный генотип С/С полиморфизма +1314 С/Т гена OAS3 стречается достоверно чаще у больных хроническим вирусным гепатитом С по равнению со здоровыми донорами и сопряжен с развитием фиброза печени.

4. Гомозиготный генотип G/G и аллель G полиморфизма +244 A/G гена KR встречаются чаще среди больных хроническим вирусным гепатитом С по равнению со здоровыми донорами, а также ассоциированы с умеренным оспалением и развитием фиброза печени.

5. Для больных хроническим вирусным гепатитом С характерна более ысокая встречаемость гомозиготного варианта G/G полиморфизма 551 T/G гена

NA 17 по сравнению со здоровыми донорами. Генотип G/T сопряжен с усилением ктивности воспаления в паренхиме печени среди больных HCV-инфекцией.

6. Среди пациентов с хроническим вирусным гепатитом С гомозиготный нотип Т/Т и аллель Т полиморфизма +874А/Т гена IFNG встречаются чаще по

равнению со здоровыми донорами.

7. Комплексное исследование полиморфизма генов системы интерферона ASI, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG) улучшает качество прогнозной модели и

величивает процент верных прогнозов течения хронического вирусного гепатита С 72,1% (при учете 1 гена) до 88,8% (при учете 5 генов).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Функциональная значимость полиморфизма генов АРОЕ н SOD2 в формировании CV-инфекцип / H.A. Семенова, II.B. Рязанцева, В.В. Новицкий, А.И. Дмитриева, O.E. ечина, В.А. Бычков, И.П. Моисеенко // Бюллетень сибирской медицины. - 2009. - №3. - С. -68.

2. Ассоциация полиморфизма интерферон-индуцируемых генов человека PKR, OAS1 и AS3 со структурными изменениями печени при хроническом вирусном гепатите С / В.А. ычков, H.A. Семенова, Л.А. Клепцова, В.Д. Якушина // Сборник тезисов

Всероссийской научно-практической конференции с международным участием ундаментапьные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов»,

-29 октября 2009 г, С. 41, Новосибирск, Россия.

3. Роль полиморфизма гена супероксиддисмутазы второго типа в развитии хронического русного гепатита С / H.A. Семенова, В.А. Бычков // Сборник тезисов IV международной

научной конференции молодых ученых-медиков 2010,25-26 февраля, Курск, Россия. - Т. 3, С. 146148.

4. Роль полиморфизма гена HFE в развитии хронического вирусного гепатита С / H.A. Семенова, Н.В. Рязанцева, В.А. Бычков // Сборник тезисов II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Вопросы патогепеза типовых патологических процессов", 18-19 марта 2010 г., С. 314-318, Новосибирск, Россия.

5. Влияние аллельного полиморфизма +244A/G гена PKR на структурные изменения печени при хронической HCV-инфекции / В.А. Бычков, H.A. Семенова, JI.A. Клепцова// Сборник тезисов XVI межгородской конференции молодых ученных «Актуальные проблемы патофизиологии», 2122 апреля 2010 г., С. 41-43, Санкт-Петербург, Россия.

6. Роль полиморфизма гена IL6-174C/G в развитии хронической HCV-инфекции / H.A. Семенова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, В.А. Бычков, O.E. Чечина // Бюллетень сибирской медицины. - 2010. - №5. - С. 93-97.

7. Роль полиморфизма генов Аро, SOD и HFE в развитии хронического вирусного гепатита С / H.A. Семенова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, В.Л. Бычков, А.И. Дмитриева, O.E. Чечииа И Молекулярная медицина. - 2010. - №5. - С. 56-62.

8. Ассоциация полиморфизмов генов системы интерферона OAS1, OAS3, PKR н хронического вирусного гепатита С / ВЛ. Бычков, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, H.A. Семенова, JI.A. Клепцова, В.Д. Якушина И Медицинская иммуиология. - 2011. - Т. 13, № 1. — С. 93-100.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АПК - антигенпрезентирующая клетка;

ИГА - индекс гистологической активности;

ПДРФ - анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов;

ПЦР - полимеразная цепная реакция;

ОНП — однонуклеотидный полиморфизм;

HCV - вирус гепатита С;

OAS - олигоаденилатсинтетаза;

PKR - протеинкиназа R;

IFN - интерферон.

Тираж - 100 экз. Изготовлено в ООО «НИП» г. Томск, ул. Советская, 47, тел.: 53-14-70

Оглавление диссертации Бычков, Вячеслав Алексеевич :: 2011 :: Томск

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Клинико-патогенетические особенности вирусного гепатита С.

1.2. Особенности вируса гепатита С как патогена.

1.3. Роль нарушений иммунной системы в патогенезе вирусного гепатита С.

1.4. Роль системы интерферона в патогенезе вирусной инфекции.

1.5. Ассоциация генетических особенностей индивида с реализацией противовирусного ответа.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика обследованных больных и здоровых доноров.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Выделение ДНК.

2.2.2. Исследование полиморфизма генов системы интерферона.

2.2.2.1. Определение однунуклеотидного полиморфизма

-ТАЛл гена 0457.

2.2.2.2. Определение однунуклеотидного полиморфизма

1314С/Т гена ОАБЗ.

2.2.2.3. Определение однунуклеотидного полиморфизма

244А/О гена РКЯ.

2.2.2.4. Определение однунуклеотидного полиморфизма

551Т/0 гена 1ЕИА17.

2.2.2.5. Определение однунуклеотидного полиморфизма +874А/Т гена Мб.

2.3. Статистический анализ результатов исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Анализ распространенности полиморфизмов генов системы интерферона ОА81, ОАБЗ, РКЯ, ШИАП и /^М? у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.1.1 Оценка распространенности полиморфных вариантов гена ОАБ1у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.1.2. Оценка распространенности полиморфных вариантов гена ОАБЗ у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.1.3. Оценка распространенности полиморфных вариантов гена РКП у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.1.4. Оценка распространенности полиморфных вариантов гена 7/<7У/417 у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.1.5. Оценка распространенности полиморфных вариантов гена 77*Ж7 у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.2. Характер распределения генотипов и аллелей генов системы интерферона ОАБ1, ОАЯЗ, РЖ, ШШ17 и Мб у больных хроническим вирусным гепатитом С в зависимости от степени активности воспалительного процесса в печени.

3.2.1. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена ОАБ1 у больных хроническим вирусным гепатитом С с активностью воспаления в печени.

•3.2.2. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена О А 53 у больных хроническим вирусным гепатитом С с активностью воспаления в печени.

3.2.3. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена РКЯ у больных хроническим вирусным гепатитом С с активностью воспаления в печени.

3.2.4. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена ШЫА17 у больных хроническим вирусным гепатитом С с активностью воспаления в печени.

3.2.5. Анализ ассоциации полиморфных вариантов генаIFNG у больных хроническим вирусным гепатитом С с активностью воспаления в печени.

3.3. Характер распределения генотипов и аллелей генов системы интерферона О ASI, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG в зависимости от степени фиброза печени.

3.3.1. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена OAS1 со степенью фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.3.2. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена OAS3 со степенью фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.3.3. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена PKR со степенью фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.3.4. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена IFNA17 со степенью фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.3.5. Анализ ассоциации полиморфных вариантов гена IFNG со степенью фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3.4. Анализ межгенных взаимодействий в формировании предрасположенности к развитию хронического вирусного гепатита С.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Бычков, Вячеслав Алексеевич, автореферат

Рассматривая проблему развития хронического вирусного гепатита С на молекулярном и клеточном уровнях, исследователи получили множество фактов в пользу ведущего значения иммуноопосредованного повреждения печени. Было показано, что нормальное функционирование иммунной системы строится на балансе Thl- и Th2-лимфоцитов, основанном, в первую очередь, на согласованной продукции их регуляторных цитокинов [Корочкина О.В., 2003; Хаитов P.M. и соавт, 2009]. Выявлено, что несбалансированность продукции цитокинов Th-1 и Th-2 типа играет значимую роль в иммунопатогенезе хронизации и прогрессирования HCV-инфекции [Рязанцева Н.В. и соавт., 2005; Наследникова И.О. и соавт., 2006].

Развитие инфекционного процесса определяется как свойствами возбудителя, так и индивидуальными особенностями организма человека, являющихся, в свою очередь, отражением его генетической структуры. В настоящее время установлен факт влияния генетических особенностей индивида на восприимчивость и устойчивость к той или иной инфекции [Симбирцев А.С., Громова А.Ю., 2005; Пузырев В.П., 2006; Glass W.G. et al., 2006; Рязанцева Н.В. и соавт., 2008; Vezali Е. et al., 2011]

Одну из ключевых ролей в регуляции противовирусного иммунного ответа играет система интерферона, в которую входят сами интерфероны (а, ß и у) и продукты индуцируемых ими генов (протеинкиназа R (PKR), 2',5'-олигоаденилатсинтетаза (2',5'-OAS)). Интерфероны способны подавлять репродукцию вирусов, воздействуя на транскрипцию их геномов. Синтез интерферон-индуцируемых белков запускает каскад реакций, который приводит к разрушению одноцепочечных РНК и подавлению синтеза белка в зараженной клетке [Justesen J. et al., 2000; Silverman R.H. et al., 2007].

Современные методы исследования позволяют находить иммуногенетические маркеры заболевания и выявлять ассоциации между структурой определенных кластеров генов и развитием болезни. Так, к иммуногенетическим маркерам вирусного гепатита С относят гены интерлейкинов {TNFA, IL IB, IL4RA, IL6, ILIO), хемокинов (CCR5, RANTES), системы интерферона {PKR, OAS 1,3, IFNG) [Ortiz V. et al., 2002; Knapp S. et al., 2003]. Однако в настоящее время недостаточно изучено воздействие полиморфизма генов системы интерферона на характер течения заболевания, отсутствует единая точка зрения относительно влияния генетических факторов, детерминирующих функционирование иммунной системы, на степень воспалительного процесса и фиброзирования печени. Накопленные в указанном аспекте фактические данные носят весьма противоречивый характер: так, по результатам одних авторов, у европеоидов показана ассоциация однонуклеотидного полиморфизма (ОНП) в З'-нетранслируемой области гена OAS1 с исходом вирусного гепатита С [Knapp S. et al., 2003]. Согласно данным других исследователей, полиморфные варианты гена OAS J не ассоциированы с исходом гепатита С [Бархаш A.B. и соавт., 2006].

Цель исследования: установить роль полиморфизма генов OAS1, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG в патогенезе хронического вирусного гепатита С у лиц, проживающих на территории Томской области; оценить совместное влияние полиморфных вариантов генов системы интерферона на предрасположенность к развитию хронического вирусного гепатита С.

Задачи исследования:

1. Дать сравнительный анализ характера распределения полиморфизных вариантов генов системы интерферона OAS1, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG у больных хроническим вирусным гепатитом С и здоровых доноров (европеоидов, проживающих на территории Томской области).

2. Оценить взаимосвязь полиморфизма генов OAS1, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG с выраженностью воспалительного процесса в печени при хроническом вирусном гепатите С.

3. Установить характер ассоциации полиморфных вариантов генов OAS1, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG с особенностями прогрессирования фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

Научная новизна. Впервые изучена ассоциация распределения частот полиморфных аллелей комплекса генов системы интерферона (OAS1, OAS3,

PKR, IFNA17 и IFNG) с активностью воспалительного процесса и прогрессированием фиброза печени при хроническом вирусном гепатите С.

Посредством анализа особенностей клинико-морфологической картины заболевания в зависимости от носительства полиморфных маркеров исследованных генов, впервые выявлены ассоциации между активностью воспалительного процесса в печени и полиморфизмами OAS1, PKR и IFNA17. Впервые установлена взаимосвязь между прогрессированием фиброза печени и носительством больными HCV-инфекцией полиморфизма +1314С/Т гена OAS3 и +244A/G гена PKR.

Впервые составлена прогнозная модель предрасположенности к хроническому вирусному гепатиту С на основе полиморфных вариантов генов системы интерферона и доказана целесообразность их комплексного исследования, повышающего процент прогноза течения хронического вирусного гепатита С до 88,8%.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенного исследования позволили выявить ДНК-маркеры вовлеченности системы интерферона в патогенез HCV-инфекции, что позволяет в дальнейшем индивидуализировать тактику ведения больных хроническим вирусным гепатитом С. Идентификация полиморфизмов -1A/G гена OAS1, +1314С/Т гена OAS3, +244A/G гена PKR, 551G/T гена IFNA17 и +874А/Т гена IFNG позволяет судить о наличии у пациентов предрасположенности к развитию хронического вирусного гепатита С и прогнозировать характер течения заболевания.

Полученные фундаментальные знания могут быть использованы для разработки новых подходов к патогенетически обоснованной терапии и своевременной профилактики развития хронического вирусного гепатита С.

Внедрение. Основные положения и выводы диссертационной работы используются в учебном процессе кафедры фундаментальных основ клинической медицины (по дисциплине «Клиническая лабораторная диагностика» в разделе «Диагностика инфекционных заболеваний», по дисциплине «Молекулярные основы патологии» в разделе «Молекулярно-генетические основы предрасположенности организма к инфекционным заболеваниям») и кафедры патофизиологии (в разделах «Роль наследственности в патологии» и «Патофизиология печени») ГОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. У больных хроническим вирусным гепатитом С (европеоидов, проживающих на территории Томской области) частота встречаемости генотипа А/А и аллеля А гена О ASI, генотипа С/С гена OAS3, генотипа G/G и аллеля G гена PKR, генотипа G/G гена IFNA17, а также генотипа Т/Т и аллеля Т гена IFNG выше по сравнению с таковыми у здоровых доноров.

2. Выраженность активности воспаления' в печени у больных хроническим гепатитом С сопряжена с носительством генотипа А/А и аллеля А гена О ASI, генотипа G/G и аллеля G гена PKR, а также генотипа G/T гена IFNA17.

3. Степень выраженности фиброза печени у больных хроническим вирусным гепатитом С ассоциирована с увеличением частоты встречаемости генотипа С/С гена OAS3 и генотипа G/G и аллеля G гена PKR.

4. Учет совместного влияния полиморфизма генов OAS1, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG на предрасположенность к хроническому вирусному гепатиту С улучшает качество прогнозирования развития и течения заболевания.

Заключение диссертационного исследования на тему "Молекулярно-генетическая оценка роли системы интерферона в патогенезе хронического вирусного гепатита С"

ВЫВОДЫ

1. Полиморфные варианты генов системы интерферона (-1A/G гена OAS1, +1314С/Т гена OAS3, +244A/G гена PKR, 551G/T гена IFNA17 и +874А/Т гена IFNG) играют роль в патогенезе хронического вирусного гепатита С, поскольку частоты встречаемости определенных аллельных вариантов у больных с HCV-инфекцией (европеоидов, проживающих на территории Томской области) статистически значимо превышают таковые у здоровых доноров

2. Среди больных хроническим вирусным гепатитом С гомозиготный генотип А/А и аллель А полиморфизма -1A/G гена OAS1 встречаются достоверно чаще по сравнению со здоровыми донорами и сопряжены с умеренным воспалительным процессом в паренхиме печени у больных хроническим вирусным гепатитом С.

3. Гомозиготный генотип С/С полиморфизма +1314 С/Т гена OAS3 встречается достоверно чаще у больных хроническим вирусным гепатитом С по сравнению со здоровыми донорами и сопряжен с развитием фиброза печени.

4. Гомозиготный генотип G/G и аллель G полиморфизма +244 A/G гена PKR встречаются чаще среди больных хроническим вирусным гепатитом С по сравнению со здоровыми донорами, а также ассоциированы с умеренным воспалением и развитием фиброза печени.

5. Для больных хроническим вирусным гепатитом С характерна более высокая встречаемость гомозиготного варианта G/G полиморфизма 551 T/G гена IFNA17 по сравнению со здоровыми донорами. Генотип G/T сопряжен с усилением активности воспаления в паренхиме печени среди больных HCV-инфекцией.

6. Среди пациентов с хроническим вирусным гепатитом С гомозиготный генотип Т/Т и аллель Т полиморфизма +874А/Т гена IFNG встречаются чаще по сравнению со здоровыми донорами.

7. Комплексное исследование полиморфизма генов системы интерферона (OAS1, OAS3, PKR, IFNA17 и IFNG) улучшает качество прогнозной модели и увеличивает процент верных прогнозов течения хронического вирусного гепатита С с 72,1% (при учете 1 гена) до 88,8% (при учете 5 генов).

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Бычков, Вячеслав Алексеевич

1. Александров О.В. Влияние социального статуса на качество жизни больных хроническим гепатитом С : дис. . канд. мед. наук / О.В. Александров. Волгоград, 2008. - 166 с.

2. Баранов B.C. Научные основы предиктивной медицины / B.C. Баранов, Е.В. Баранова, Т.Э. Иващенко // Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике / Под ред. А.Б. Масленникова. — Вып. 4. — Новосибирск : Альфа Виста, 2003. 252 с.

3. Белобородова Э.И. Диагностическая ценность определения сывороточных маркеров фиброза печени при хроническом вирусном гепатите / Э.И. Белобородова, Р.Ф. Абдрашитов, Е.В. Белобородова // Клиническая медицина. 2007. - Т. 85, № 9. - С. 61-64.

4. Блохина Н.П. Лечение острого гепатита С препаратами интерферонового ряда / Н.П. Блохина, H.H. Цурикова // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы: Информ. бюл. — 2002. — Т. 2, № 15.-С. 12-16.

5. Боровиков В.В. Statistica. Искусство анализа данных на компьютере / В.В. Боровиков М. : 2001. - 360 с.

6. Буеверов А.О. Апоптоз и вирусные гепатиты / А.О. Буеверов // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. — 2002. — № 2. С. 1214.

7. Булыгин Г.В. Современные иммунокорректоры и их свойства / Г.В. Булыгин, Н.И. Камзалакова, П.В. Capan // Сибирское медицинское обозрение: Ежеквартальный медицинский журнал. 2002. N 4 . - С. 6465.

8. Вирус гепатита С: антигены вируса и реакция на них иммунной системы макроорганизма: информационно-методическое пособие / Л.И. Николаева. Новосибирск : «Вектор-Бест», 2009. - 78 с.

9. Вирусные гепатиты / С. Н. Соринсон — СПб. : Теза, 1998. 20 с.

10. Вирусный гепатит: клиника, диагностика, лечение / Ю.В. Лобзин, К.В. Жданов, В.М. Волжанин, Д.А. Гусев // СПБ: ООО «Фолиант», 2003. -192 с.

11. Власова И.А. Свежесть — залог здоровья / И.А. Власова // Газета — Электрон, журн. — 2008. — Вып. 52. — Режим доступа к журн. : http://www.gzt.ru.

12. Геном человека и гены «предрасположенности» (Введение в предиктивную медицину) / B.C. Баранов, Е.В. Баранова, Т.Э. Иващенко СПб. : Интермедика, 2000. - 272 с.

13. Геномные основы подверженности к инфекционным заболеванием /И.А. Гончарова, М.Б. Фрейдин, В.П. Пузырев и др. // Вестник ВОГиС. -2006. Т. 10, № 3. - С. 540-549.

14. Диагностика болезней внутренних органов / А.Н. Окороков — М. : Мед. Лит., 2001.-512с.

15. Ерохин В.В. Современные представления о туберкулезном воспалении / В.В. Ерохин, З.С. Земскова // Проблемы туберкулеза и болезней лёгких. — 2003. — Т. 3. С. 11-21.

16. Железникова Г. Ф. Воздействие вируса на систему цитокинов хозяина / Г. Ф. Железникова // Вирусология. 2007. № 4. - С. 4-10.

17. Жукова О.Б. Изменение реакции лимфоцитов крови на апоптозмодулирующие факторы при вирусной- инфекции / О.Б. Жукова, Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий, Т.Т. Радзивил, JI.C. Литвинова, Н.Ю. Часовских // Бюллетень СО РАМН 2007. - № 6. - С. 44-48.

18. Зубов А.Д. Диагностическое значение пункционной биопсии печени при хроническом вирусном гепатите С. / А.Д. Зубов, O.A. Голубова. // Новости медицины и формации. — Электрон, журн. — 2009. — Вып. 279. -Режим доступа к журн. : http://novosti.mif-ua.com

19. Иванов A.B. Молекулярная биология вируса гепатита С. / A.B. Иванов,

20. A.О. Кузякин, С.Н. Кочетков. // Успехи биологической химии. — 2005. -Т.45.-С. 37-85.

21. Ивашкин В.Т. Иммунная система и повреждения печени при хронических гепатитах В и С. / В.Т. Ивашкин. // Росс. Журн. Гастроэнтерол. Гепатол. Колопроктол. 2009. - Т. 19, № 6. — С. 4-10.

22. Ивашкин В.Т. Клеточная и молекулярная биология воспаления печени /

23. B.Т. Ивашкин // Росс. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. — 1998.-№5.-С. 13-17.

24. Ивашкин В.Т. Механизмы устойчивости вируса гепатита С к противовирусным препаратам / В.Т. Ивашкин, А.О. Буеверов, А.Е. Грязин // Мол. медицина. 2004. - № 2. - С. 18-23.

25. Ивашкин В.Т. Система цитокинов у больных хроническим диффузным заболеваниями печени /В.Т. Ивашкин, С.Н. Мамаева, Е.А. Лукина // Иммунология. 2001. - №1. - С. 46-49.

26. Игнатова Т.М. Патогенез хронического гепатита С / Т.М. Игнатова, В.В. Серов // Арх. Пат. 2001. - № 3. - С. 54-59.

27. Иммунология: Учебник / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатов, И.Г. Сидорович. -М. : Медицина, 2000. 432 с.

28. Интерфероно- и иммунотерапия в практике лечения часто и длительно болеющих детей и взрослых / И.В. Нестерова, В.В. Малиновская, В.А. Тараканов, С.В. Ковалева — М. : Capricorn Pablishing, Inc., 2004. — 112 с.

29. Карпов В.В. Хронический гепатит С // В.В. Карпов / Иммунопатология.- 2000. № 2. - С. 55-74.

30. Коваленко A.JI. Имунный ответ при вирусных инфекциях: Руководство для врачей / A.JI. Коваленко, С.Ю. Голубев. Калининград : Изд-во КГУ, 1998.-67 с.

31. Лакин Г.Ф. Биометрия. / В.Г. Лакин // М: Высшая школа, 1980. 294 с.

32. Майер К.-П. Гепатит и последствия гепатита. Практическое рук. / К.-П. Майер. 2-е изд., перераб. и доп. (пер. с нем.) - М.: ГЭОТАРМЕД, 2004.- 720 с.

33. Маниатис Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук ; пер. с англ. М.: Мир, 1984.-480 с.

34. Маянский Д.Н. Клеточно-молекулярные механизмы формирования цирроза печени. /Д.Н. Маянский, A.A. Зубахин // Росс. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 1998. - № 6. - С. 6-13.

35. Михайлов М.И. Лабораторная диагностика гепатита С / М.И. Михайлов // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. — 2002. № 4. — С. 816.

36. Нетесов C.B. Вирусные гепатиты / C.B. Нетесов // Биология. — 1997. № 2.-С. 35-43.

37. Николаева Л.И. Иммунитет при разных формах гепатита С. / Л.И. Николаева, Л.В. Оленина, Е.Ф. Колесанова // Russian J. of immunology. -1999.-T. 4, №2.-С. 91-112.

38. Онищенко Г.Г. Распространение вирусных гепатитов как угроза национальной безопасности / Г.Г. Онищенко, Л.А. Дементьева // Журн. Микробиол. 2003. - Т. 4. - С. 93.99.

39. Патологическая анатомия генома человека / В.П. Пузырев, В.А. Степанов Новосибирск : Наука, 1997. — 224 с.

40. Патрушев Л.И. Новая система ДНК-диагностики, позволяющая обнаруживать и идентифицировать гомозиготные и гетерозиготные точковые мутации / Л.И. Патрушев, Е.С. Зыкова, А.Л. Каюшин // Биоорган, химия. -1998. Т. 24. № 3. - С. 194-200.

41. Покровский В.И. Хронический гепатит С: современные представления о пато- и мофогенезе. Концепция антивирусной стратегии гепатоцитов /

42. B.И. Покровский, Г.И. Непомнящих, Н.П. Толоконская // Бюл. Эксп. Биологии и медицины. 2003. - Т. 135. - С. 364-376.

43. Приймяги JI.C. Иммунорегуляторные Thl- и Т112-цитокины при хронических инфекциях, вызванных вирусами гепатитов В и С / JI.C. Приймяги, В.Т. Тефанова, Т.Г. Талло // Вопросы вирусологии. — 2003. — Т. 4. С. 37-40.

44. Пузырев В.П. Генетика мультифакториальных заболеваний: между прошлым и будущим // Медицинская генетика. 2003. - Т. 2, № 12. - С. 498-508.

45. Пузырев В.П. Генетический взгляд на феномен сочетанной патологии у человека. // Медицинская генетика. — 2008. — №9. — С.3-9.

46. Рязанцева Н.В., Жукова О.Б., Белобородова Э.И., Новицкий В.В., Ткаченко С.Б., Белобородова Е.В., Токарева Н.В., Чечина O.E., Михеев

47. C.JI. Изменения цитогенетического статуса лимфоцитов периферической крови при хронических HBV- и HCV-инфекциях / Росс, журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. — 2004. — Т. 14, № 1. — С. 37-40.

48. Симбирцев A.C. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления / A.C. Симбирцев, А.Ю. Громова // Цитокины и воспаление.-2005.-№ 1.-С. 3-11.

49. Скляр Л.Ф. Система цитокинов и показатели оксидативного стресса при хроническом гепатите С / Л.Ф. Скляр; Владивостокский мед. Универ. -Владивосток.: Б. И. 2006. 50с.

50. Соколова Т.М. Регуляция уровня генной активности 2',5'-олигоаденилатсинтетазы цитомегаловирусом в фибробластах человека / Т.М. Соколова, Н.Е. Федорова, М.Г. Меджидова // Вопр. вирусол. -2007.-№ 1.-С. 28-36.

51. Суслов А.П. Фундаментальная иммунобиология провоспалительных цитокинов и MIF / А.П. Суслов, М.В. Коноплева, О.Ю. Третьяков // Медицинская Иммунология. 2006. - Т. 8, № 1. - С. 5-22.

52. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Электрон, дан. - М., сор. 2006-2011. - Режим доступа: http://rospotrebnadzor.ru.

53. Флейс Дж. Статистические методы для изучения таблиц долей и пропорций / Дж. Флейс. М. : Финансы и статистика, 1989. — 319 с.

54. Фрейдин М.Б. Геномные основы подверженности инфекционным заболеваниям / М.Б. Фрейдин, И.А. Гончарова, А.А. Рудко, О.В. Напалкова, Э. А. Ондар, В.П. Пузырев // Молекулярная медицина. — 2006.-В. 6.-С. 39-46.

55. Хаитов Р.М. Руководство по клинической иммунологии. Диагностика заболеваний иммунной системы / Р.М. Хаитов, А.А. Ярилин, Б.В.Пинегин. М.: Гэотар-Медиа, 2009. - 352 с.

56. Хаитов Р.М. Оценка иммунного статуса человека в норме и патологии / Р. М. Хаитов // Иммунология. 2001. № 4. - С. 4-6.

57. Afdhal N.H. Evaluation of liver fibrosis: a concise review / N.H. Afdhal, D. Nunes // Am. J. Gastroenterol. 2004. - V. 99. - P. 1160-1174.

58. Agrawal S.K. The genetics of systemic sclerosis / S.K. Agrawal // Discovery medicine. Электрон, журн. — No. 051, Aug.2010. — Режим доступа к журн.: http://www.discovervmedicine.com

59. Alisi A. Physical and functional interaction between HCV core protein and the different p73 isoforms. / A. Alisi, S. Giambartolomei, F. Cupelli, P. Merlo, G. Fontemaggi, A. Spaziani, C. Balsano. // Oncogene. — 2003. V. 22. - P. 2573-2580.

60. Alter M.J. Epidemiology of hepatitis С virus infection / M.J. Alter. // World. J. Gastroenterol. 2007. - V.13, No. 17. -P. 2436-2441.

61. Bekisz J. Human interferons alpha, beta and omega / J. Bekisz, H. Schmeisser, J. Hernandez, N. Goldman, K. Zoon // Growth Factors. — 2004. -V. 22, No. 4.-P. 243-251.

62. Blanco P. Induction of dendric cell differentiation by IFN-a in systemic lupus erythematosus / P. Blanco, A.K. Palicka, M. Gill, V. Pascual, J. Banchereau // Science. -2001. -V. 294. P. 1540-1543.

63. Bradrick S.S. The hepatitis С virus 3'-untranslated region or a poly(A) tract promote efficient translation subsequent to the initiation phase /S.S. Bradrick, R.W. Walters, M. Gromeier // Nucl. Acids Res. 2006 V. 34. - P. 1293-1303.

64. Calvo J. Allelic frequencies of polymorphic variants of cytokine genes {ILIA, IL1B, IL1RN, IL6, IL10, IL12p40, and IFNG) in a Spanish population / J. Calvo, N. Martinez, A. Etxagibel I I Immunologia. 2002. - V. 21. - P. 76-86.

65. Carreño V. Hepatitis C virus replication in patients with occult hepatitis C virus infection / V. Carreño, J. Bartolomé, I. Castillo, J. A. Quiroga // Hepatology. 2009. - V. 49, No. 6. - P. 2128-2129.

66. Casanova J.-L. Genetics dissection of immunity to mycobacteria: the human model / J.-L. Casanova, L. Abel. // Ann. Rev. Immunol. 2002. - V. 20. - P. 581-620.

67. Chamary J.V. Hearing silence: non-neutral evolution at synonymous sites in mammals / J. V. Chamary, J. L. Parmley, L. D. Hurst // Nature Rev. Genet. -2006.-V. 7.-P. 98-108

68. Chen T.Y. Impact of serum levels and gene polymorphism of cytokines on chronic hepatitis C infection. / T.Y. Chen, Y.S. Hsieh, T.T. Wu, S.F. Yang, C.J. Wu, G.J. Tsay, H.L. Chiou // Transí. Res. 2007. -V. 150, No. 2. - P. 116-121.

69. Choo Q.L. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. / Q.L. Choo, G. Kuo, A.J. Weiner, L.R. Overby, D.W. Bradley, M. Houghton // Science. 1989. - V.244, No. 4902. -P. 359-362.

70. Clark P.J. IL28B genomic-based treatment paradigms for patients with chronic hepatitis C infection: the future of personalized HCV therapies / P.J. Clark, A.J. Thompson and J.G. McHutchison // Am. J. Gastroenterol. 2011. -V. 106.-P. 38-45

71. Dai C.Y. Polymorphism of interferon-gamma gene at position +874 and clinical characteristics of chronic hepatitis C / C.Y. Dai, W.L. Chuang, M.Y. Hsieh // Transl. Res. 2006. - V. 148, No. 3. - P. 128-133.

72. Das S. Activation of the RNA-dependent protein kinase PKR promoter in the absence of interferon is dependent upon SP proteins/ S. Das, S.V. Ward, R.S. Tacke, G. Suske, C.E. Samuel // J. Biol. Chem. 2006. - V. 281. - P. 32443253.

73. De Maeyer E. Type I interferons / E. De Maeyer, J. De Maeyer-Guignard // Int. Rev. Immunol. 1998. - V. 17. - P. 53-73.

74. Deleersnyder V. Formation of native hepatitis C virus glycoprotein ) complexes. / V. Deleersnyder, A. Pillez, C. Wychowski, K. Blight, J. Xu, Y.

75. S. Hahn, C.M. Rice, J. Dubuisson. // J. Virol. 1997. - V. 71. - P. 697-704.

76. Desmet V.J. Classification of chronic hepatitis: diagnosis, grading and staging / V.J. Desmet, M. Gerber, J.H. Hoofnagle, M. Manns, P.J. Scheuer // Hepatology. 1994. - V. 19, No. 6.-P. 1513-1520.

77. Dey M. Conserved intermolecular salt bridge required for activation of protein kinases PKR, GCN2, and PERK / M. Dey, C. Cao, F. Sicheri, T.E. Dever // J. Biol. Chem. 2007. - V. 282, No. 9. - P. 6653-6660.

78. Diaz M.O. Nomenclature of the human interferon genes / M.O. Diaz, S. Bohlander, G. Allen // J. Interferon Res. 1994. - V. 14. - P. 221-222.

79. Dubuisson J. Hepatitis C virus proteins. / J. Dubuisson // World J. Gastroenterol. 2007. - V. 13, No. 17. - P. 2406-2415.

80. Ernst J. Discovery and characterization of chromatin states for systematic annotation of the human genome / J. Ernst, M. Kellis // Nature Biotechnology. 2010. — V. 28.-P. 817-825.

81. Fan, X.G. Circulating Thl and Th2 cytokines in patients with hepatitis C vims infection / X.G. Fan, W.E. Liu, C.Z. Li // Mediators Inflamm. 1998. -V. 7.-P. 295-297.

82. Ferrari C. Immunopatogenesis of hepatitis C virus infection. / C. Ferrari, S. Urbani, A. Penna. // J. Hepatol. 1999. - V. 31, No. 1. - P. 31-38.

83. Field L.L. OAS1 splice site polymorphism controlling antiviral enzyme activity influences susceptibility to type 1 diabetes / L.L. Field, V. Bonnevie-Nielsen, F. Pociot, S. Lu, T.B. Nielsen, H. Beck-Nielsen // Diabetes. 2005. -V. 54,No 5.-P. 1588-1591.

84. Frodsham A.J. Genetic of infection disease. / A J. Frodsham, A.V.S. Hill. // Hum. Mol. Genet. 2004. - V. 13. - P. 187-194.

85. Garcia M.A. Impact of protein kinase PKR in cell biology: from antiviral to antiproliferative action / M.A. Garcia, J. Gil, I. Ventoso, S. Guerra, E. Domingo, C. Rivas, M. Esteban, // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2006. - V. 70, No. 4.-P. 1032-1060.

86. Gilmour KC. Interleukin 2 activates STAT5 transcription factor (mammary gland factor) and specific gene expression in T-lymphocytes / K.C. Gilmour, R. Pine, N.C. Reich // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 1995. - V. 92, No. 23. -P. 10772-10776.

87. Glass W.G. CCR5 deficiency increases risk of symptomatic West Nile virus infection / W.G. Glass, D.H. McDermott, J.K. Lim // J. Exptl. Med. 2006. -V. 203, No. l.-P. 35-40.

88. Goldstein D.B. Common genetic variation and human traits / D.B. Goldstein // N. Engl. J. Med. 2009. - V. 360. - P. 1696-1698.

89. Golovleva I. Polymorphism in the interferon-a gene family / I. Golovleva, M. Kandefer-Szerszen, L. Beckman, E. Lundgren // Am. J. Hum. Genet. -1996.-V. 59.-P. 570-578.

90. Gorbalenya A.E. Viral cysteine proteinases / A.E. Gorbalenya, E.J. Snijder. // Perspect. Drug Discovery Design. 1996. — V. 6. — P. 64-86.

91. Goyal A. Association of TNF-beta polymorphism with disease severity among patients infected with hepatitis C virus / A. Goyal, S.N. Kazim, P. Sakhuja, V. Malhotra, N. Arora, S.K. Sarin. // J. Med. Virol. 2004. - V. 72. -P. 60-65.

92. Goymer P. Genetic variation: Synonymous mutation break their silence / P. Goymer // Nature Rev. Genet. 2007. - V. 92. - P. 566-575

93. Guo J.T. Mechanism of the interferon alpha response against hepatitis C virus replicons. / J.T. Guo, J.A Sohn, Q. Zhu and C. Seeger. // Virology. -2004.-V.325.-P. 71-81.

94. Hahn C.S. The HCV core protein acts as a positive regulator of fas-mediated apoptosis in a human lymphoblastoid T-cell line. / C.S. Hahn, Y.G. Cho, B.S. Kang, I.M. Lester, Y.S. Hahn. // Virology. 2000. - V. 276. - P. 127-137.

95. Haller O. Interferon, Mx, and viral counter-measures. / O. Haller, G. Kochs, F. Weber. // Cytokine Growth Factor Rev. 2007. - V. 18. - P. 425-433.

96. He Y. Regulation of mRNA translation and cellular signaling by hepatitis C virus nonstructural protein NS5A. / Y. He, S.-L. Tan, S. U. Tareen, S. Vijaysri, J. O. Langland, B. L. Jacobs, M. G. Katze. // J. Virol. 2001. -V.75.-P. 5090-5098.

97. Hepatitis C Viruses. Genomes and Molecular Biology / ed. Seng-Lai Tan. -Norfolk (UK): Horizon Bioscience, 2006. 469 p.

98. Highleyman L. Hepatitis C treatment is more successful before progression to advanced liver damage / L. Highleyman // 44th Annual Meeting of the European Association for the Study of the Liver (EASL 2009). -Copenhagen, Denmark, 2009. P. 75-79.

99. Hii S.I. Loss of PKR activity in chronic lymphocytic leukemia. / S.I. Hii, L. Hardy, T. Crough, E.J. Payne, K. Grimmett, D. Gill, N.A. McMillan. // Int. J. Cancer. 2004. - V. 109. - P. 329-335.

100. Ishak K. Histological grading and staging of chronic hepatitis / K. Ishak , A Baptista, L. Bianchi, F. Callea, J. De Groote, F. Guda, H. Denk, V. Desmet, G. Korb, R.N. MacSween, et al. // J. Hepatol. 1995. - V. 22, No. 6. - P. 696-699.

101. Justesen J. Gene structure and function of the 2'-5'-oligoadenylate synthetase family / J. Justesen, R. Hartmann, N.O. Kjeldgaard // Cell, and Mol. Life Sci.-2000.-V. 57. No. 11.-P. 1593-1612.

102. Kau A. Treatment predictors of a sustained virologic response in hepatitis B and C / A. Kau, J. Vermehren, C. Sarrazin // J. Hepatol. 2008. - V. 49. - P. 634-651.

103. Kawai T. Innate immune recognition of viral infection / T. Kawai, S. Akira It Nat. Immunol. 2006. - V.7, No. 2. - P. 131-137.

104. Kelada S.N. The role of genetic polymorphisms in environmental health / S.N. Kelada, D.L. Eaton, S.S. Wang // Environmental Health Perspectives. -2003.-V. Ill, No. 8.-P. 1055-1064.

105. Kim M.-J. Inhibition of Hepatitis C Virus Replication by IFN-Mediated ISGylation of HCV-NS5A / M.-J. Kim, J.-Y. Yoo // The Journal of Immunology. 2010.-V. 185,No. 7.-P. 4311-4318.

106. Knodell R.G. Formulation and application of a numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis / R.G.

107. Knodell, K.G. Ishak, W.C. Black, T.S. Chen, R. Craig, N. Kaplowitz, T.W. Kiernan, J. Wollman // Hepatology. 1981. - V. 1. - P. 431-435.

108. Lan K.-H. HCV NS5A interacts with p53 and inhibits p53-mediated apoptosis / K.-H. Lan, M.-L. Sheu, S.-J. Hwang, S.-H. Yen, S.-Y. Chen, J.-C. Wu, Y.-J. Wang, N. Kato, M. Omata, F.-Y. Chang, S.-D. Lee. // Oncogene -2002.-V. 21.-P. 4801-4811.

109. Maher S.G. IFNalpha and IFNlambda differ in their antiproliferative effects and duration of JAK/STAT signaling activity / S.G. Maher, F. Sheikh, A.J. Scarzello // Cancer. Biol. Ther. 2008. - V. 7. - P. 1109-1115.

110. M. Tsipi, S. Kitsiou, A. Tsiamouri, M. Poulou, C. Roussos, E. Kanavakis // Genetic Testing and Molecular Biomarkers. 2010. - V. 14, No. 4. - P. 577584.

111. McHutchison J.G. Telaprevir with peginterferon and ribavirin for chronic HCV genotype 1 infection / J.G. McHutchison, G.T. Everson, S.C. Gordon // N. Engl. J. Med. 2009. - V. 360. - P. 1827-1838.

112. Meiqiang L. Association of interferon-gamma gene haplotype in the Chinese population with hepatitis B vims infection / L. Meiqiang, C. Bangwei, Z. Hongkun, D. Yue, L. Xiaolin, X. Changqing // Immunogenetics. 2006. - V. 58, No. 11. - P. 859-864.

113. Mogensen T.H. Molecular pathways in vims-induced cytokine production / T.H. Mogensen, S.R. Paludan // Microbiology and Molecular Biology Reviews.-2001.-V. 65, No. l.-P. 131-150.

114. Mondelli M.U. Is there a role for immune responses in the pathogenesis of hepatitis C? / M.U. Mondelli // J. Hepatol. 1996. - V. 25, No. 2. - P. 232238.

115. Morgan T.R. Chemoprevention of hepatocellular carcinoma in chronic hepatitis C / T.R. Morgan // Recent. Results Cancer Res. 2011. - V. 188. -P. 85-99.

116. Muffak-Granero K. Study of gene expression profile in liver transplant recipients with hepatitis C vims / Muffak-Granero K., Bueno P., Olmedo C., Comino A.M., Hassan L., Garcia-Alcalde F., Serradilla M., Garcia-Navarro

117. A., Mansilla A., Villar J.M., Garrote D., Blanco A., Ferrón J.A. // Transplantation proceeding. 2008. - V. 40, No 3. - P. 2971-2974.

118. Nanduri S. A dynamically tuned double-stranded RNA binding mechanism for the activation of antiviral kinase PKR. // S. Nanduri, F. Rahman, B.R. Williams, J. Qin. // EMBO J. 2000. - V. 19. - P. 5567-5574.

119. Nikolaeva L.I. Immunity during different courses of hepatitis C. / L.I. Nikolaeva, L.V. Olenina E.F. Kolesanova. // Russian Journal of Immunology 1999. - V. 4.-P. 91-112.

120. Nilsen T.W. Mechanism for discrimination between viral and host mRNA in interferon-treated cells / T.W. Nilsen, C. Baglioni. // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1979. - V. 76. - P. 2600-2604.

121. Ortiz V. Contribution of obesity to hepatitis C-related fibrosis progression / V. Ortiz, M. Berenguer, J.M. Rayon, D. Carrasco, J. Berenguer // Am. J. Gastroenterol. 2002 - V. 97. - P. 2408-2414.

122. Otsuka M. Hepatitis C virus core protein enhances P53 function through augmentation of DNA binding affinity and transcriptional ability. / M. Otsuka, N. Kato, K.H. Lan, H. Yoshida, J. Kato, T. Goto. // J. Biol. Chem. — 2000. V. 275. - P. 34122-34130.

123. Pereira F.A. Association of TGF-betal codon 25 (G915C) polymorphism with hepatitis C virus infection. / F.A. Pereira, N.N. Pinheiro da Silva, I.F. Rodart, T.M. Carmo, D.C. Lemaire, M.G. Reis // J. Med. Virol. 2008. - V. 80, No. 1-P. 58-64.

124. Platanias L.C. Mechanisms of type-I- and type-II-interferon-mediated signaling / L.C. Platanias // Nature reviews. Immunology. — 2005. — V. 5, No. 5.-P. 375-386.

125. Ramadori G. Portal tract fibrogenesis in the liver / G. Ramadori, B. Saile // Lab. Invest.-2004.-V. 84.-P. 153-159.

126. Ramana C.V. Regulation of c-myc expression by IFN-gamma through Statl-depedent and -independent pathway / C.V. Ramana, N. Grammatikakis, M. Chernov, H. Nguyen, K.C. Goh // EMBO J. 2000. - V. 19. - P. 263-272.

127. Randall R. E., Goodbourn S. Interferons and viruses: an interplay between induction, signaling, antiviral responces and virus countermeasures / R. E. Randall, S. Goodbourn // J. Gen. Virol. 2008. - V. 88. - P. 1-47.

128. Rehermann B. Hepatitis C virus versus innate and adaptive immune responses: a tale of coevolution and coexistence / B. Rehermann. // J. Clin. Invest. -2009. V. 119.-P. 1745-1754.

129. Richardson M.M. A combination of genetic polymorphisms increases the risk of progressive disease in chronic hepatitis C. / M.M. Richardson, E.E.

130. Powell, H.D. Barrie, A.D. Clouston, D.M. Purdie J.R. Jonsson // Journal of Medical Genetics 2005. - V. 42. - P. 45.

131. Rodes J. The textbook of hepatology: from basic science to clinical practice, third edition / J. Rodes, J.-P. Benhamou, A.T. Blei, J. Reichen, M. Rozetto. -Oxford (UK): Blackwell Publishing Ltd, 2008. 2360 p.

132. Rosen H.R. Hepatitis C virus: current understanding and prospects for future therapies. / H.R. Rosen, D.R. Gretch. // Mol. Med. Today. 1999. - V. 5. - P. 393-399.

133. Rossmann C. Expression and purification of recombinant, glycosylated human interferon alpha 2b in murine myeloma NSo cells / C. Rossmann, N. Sharp, G. Allen, D. Gewert // Protein Expr. Purif. 1996. - V. 7, No. 4. - P. 335-342.

134. Rowan A.G. Hepatitis C virus-specific Thl7 cells are suppressed by virus-induced TGF-p / A.G. Rowan, J.M. Fletcher, E.J. Ryan, B. Moran, J.E. Hegarty, C. O'Farrelly, K.H.G. Mills. // The Journal of Immunology. 2008. -V. 181.-P. 4485-4494

135. Ryder S.D. Progression of hepatic fibrosis in patients with hepatitis C: a prospective repeat liver biopsy study / S.D. Ryder // Gut. — 2004. — V. 53, No. 3.-P. 451-455.

136. Samson M. Resistance to HIV-1 infection in Caucasian individuals bearing mutant alleles of the CCR-5 chemokine receptor gene / M. Samson, F. Libert, B.J. Doranz //Nature. 1996. - V. 382. - P. 722-725.

137. Samuel C.E. Antiviral actions of interferons. / C.E. Samuel. // Clin. Microbiol. Rev. 2001. - V. 14. - P. 778-809.

138. Satio T. Innate immunity induced by composition-dependent RIG-1 recognition of hepatitis C virus RNA. / T. Satio, D.M. Owner, F. Jiang, J. Marcotrigiano, M.Jr. Gale. // Nature. 2008. - V. 454. - P. 523-527.

139. Schlaak J.F. Interleukin 12 enhances deficient HCV-antigen-induced Thl-type immune response of peripheral blood mononuclear cells / J. F. Schlaak, T. Pitz, H. F. Lohr, K.-H. Meyer zum Buschenfelde, G. Gerken. // J. Med. Virol. 1998.-V. 56.-P. 112-117.

140. Schroder K. Interferon-gamma: an overview of signals, mechanisms and functions / K. Schroder, P.J. Hertzog, T. Ravasi, D.A. Hume // J. Leukoc. Biol. 2004. - V. 75, No. 2. - P. 163-189.

141. Sharma O.K. Inhibition of vaccinia mRNA methylation by 2!,5'-linked oligo(adenylic acid) triphosphate / O.K. Sharma, B.B. Goswami. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1981. -V. 78, No. 4.-P. 2221.

142. Shepard C.W. Global epidemiology of hepatitis C virus infection / C.W. Shepard, L. Finelli, M.J. Alter // Lancet. Infect. Dis. 2005. - V. 5. - P. 558567.

143. Shustov A.V. Molecular epidemiology of the hepatitis C virus in Western Siberia / A.V. Shustov, G.V. Kochneva, G.F. Sivolobova // Journ. Med. Virol. 2005. - V. 77. - P. 382-389.

144. Silverman R. H. Viral encounters with 2',5'-oligoadenylate synthetase and RNAse L during the interferon antiviral response // J. Virol. 2007. - V. 81. -P. 12720-12729.

145. Szabo S.J. Molecular mechanisms regulating Thl immune responses / S.J. Szabo, B.M. Sullivan, S.L. Peng, L.H. Glimcher // Annual Reviews of Immunology. 2003. - V. 21. - P. 713-758.

146. Tai D.I. Activation of nuclear factor kappa B in hepatitis C virus infection. / D.I. Tai, S.L. Tsai, Y.M. Chen, Y.L. Chuang, C.Y. Peng, I.S. Sheen, C.T. Yeh, K.S. Chang, S.N. Huang, G.C. Kuo, Y.F. Liaw. // Hepatology. -2000.-V. 31.-P. 656-664.

147. Takizawa T. Possible involvement of double-stranded RNA-activated protein kinase in cell death by influenza virus infection / T. Takizawa, K. Ohashi, Y. Nakanishi // Virol. 1996. - V. 70, No. 11. - P. 8128-8132.

148. Taylor D.R. Hepatitis C virus and interferon resistance: It's more than just PKR / D. R. Taylor // Hepatology. 2001. - V. 33, No. 6. - P. 1547-1549.

149. Taylor D.R. Inhibition of the interferon-inducible protein kinase PKR by HCV E2 protein / D. R. Taylor, S. T. Shi, P. R. Romano, G. N. Barber, M. M. C. Lai. // Science. 1999. - V. 285, No. 5424. - P. 107-110.

150. Taylor D.R. New antiviral pathway that mediates hepatitis C virus replicon interferon sensitivity though ADAR1. / D.R. Taylor, M. Puig, M.E. Darnell, K. Mihalik, S.M. Feinstone // J. Virol. 2005. - V. 79. - P. 6291-6298.

151. Thomis D.C. Mechanism of interferon action: characterization of the intermolecular autophosphorylation of PKR, the interferon-inducible, RNA-dependent protein kinase. / D.C. Thomis, C.E. Samuel. // J. Virol. 1995. -V. 69,No. 8.-P. 5195-5198.

152. Tsuchihara K. Hepatitis C virus core protein regulates cell growth and signal transduction pathway transmitting growth stimuli / K. Tsuchihara, M. Hijikata, K. Fukuda, T. Kuroki, N. Yamamoto, K. Shimotohno. // Virology. 1999. - V. 258. - P. 100-107.

153. Verhaegen-Lewalle M. 2-5A synthetase activity induced by interferon a, P, and y in human cell lines differing in their sensitivity to the anticellular and antiviral activities of these interferons / M. Verhaegen-Lewalle, T. Kuwata,

154. Z.-X. Zhang, E. DeClercq, K. Cantell, J. Content // Virology.- 1982.-V.117.-N.2.-P.425.

155. Vezali E. Interferon in the treatment of chronic hepatitis C: a drug caught between past and future / E. Vezali, A. Aghemo, M. Colombo // Expert. Opin. Biol. Ther.-201 l.-V. 11, No. 3-P. 301-313.

156. Wallach D. Tumor necrosis factor receptor and Fas signaling mechanisms / D. Wallach, E.E. Varfolomeev, N.L. Malinin, Y.V. Goltsev, A.V. Kovalenko, M.P. Boldin. // Annual Reviews of Immunology. 1999. - V. 17. - P. 331— 367.

157. Williams B. R. PKR, a sentinel kinase for cellular stress. / B. R. Williams. // Oncogene. 1999. -V. 18. - P. 6112-6120.

158. Zhang P. Protein kinase PKR plays a stimulus- and virus-dependent role in apoptotic death and virus multiplication in human cells / P. Zhang, C.E Samuel//J. Virol.-2007.- V. 81.-P. 8192-8200.