Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль кислородозависимых процессов в механизмах повреждения и защиты поджелудочной железы при остром панкреатите

РГ6 од

На правах рукописи

г 2 ЛВГ 18Ьо

УДК 616.37 - 002:576.31:577.15

ФИЛИПЕНКО ПАВЕЛ СЕМЕНОВИЧ

роль хислородозависимых процессов в механизмах

повреждения и защиты поджелудочной железы

при остром панкреатите

(экспериментально - клиническое исследование) 14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва

1996

На правах рукописи

УДК 616.37 - 002: 576. 31: 577,15 ФИЛИПЕНКО ПАВЕЛ СЕМЕНОВИЧ

роль шсл0р0д03ависшш процессов в механизмах повреждения и защиты поджелудочной железы при остром панкреатите

(экспериментально - клиническое исследование)

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат на соискание ученой степени " доктора медицинских наук

Москва 1996

Работа выполнена в Ставропольской государственной медицинской

академии.

Российском государственном медицинском университете.

Научный консультант - доктор медицинских наук, профессор Г.В. Поря,

Официальные оппонента: доктор медицинских наук, профессор Г. В. Неустроев;

доктор биологических наук, профессор В.М. Смирнов

доктор медицинских наук, профессор В.А. Фролов.

Ведущее учреждение - НИИ биологической и медицинской химии РАМИ.

Защита состоится "_"_1996 г в 14 часов на заседании

специализированного совета (Д 084.14.06) при Российском государственном медицинском университете (117869," Москва, ул. Островитянова, 1.

С диссертацией можно 'ознакомиться в библиотеке университета. Автореферат разослан "10" июня 1996г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук, доцент Т.Е. Кузнецова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Несмотря на достигнутые успехи в лечении и профилактике острого панкреатита, этиология и патогенез заболевания является предметом интенсивных клинических и экспериментальных исследований (Атанов Ю. П. .1993, Sand Hands. J.. 1990). В литературе в основном обсуждаются две концепции происхождения острого панкреатита: обструкция и рефлюкс (Веронский Г.И. с со-авт. .1993; Нестеренко Ю. А. с соавт.. 1993; Sandilands

D.et.al., 1990), вследствие чего развивается внутрипротоковая ги~ пертензия. снижается гидроэкболическая функция поджелудочной железы, формируются слизистые пробки и повышается давление в протоках. Секрет выделяется не в центроацинозный проток, а в паренхиму железы - развивается аутолиз (Vollmar В. et.al.,1989; Kort W.J., Tinga С. J., Wilson J.N., 1989). В указанных работах речь идет о повреждении поджелудочной железы на уровне органа за счет прямого цитотоксического действия метаболитами, образующимися при аутоли-зе. В железе -наблюдается нарушение оттока, но не выработки пищеварительных ферментов (Nonaka A. et.al..1989; Sporman Н. Scko-lovíski A.,Letko. 1989).

Ранние морфологические изменения в поджелудочной железе (ПК) в основном сводятся к отложению фибрина в просвете артериол. артерий (Филипенко П.С.. 1995: RabyJ С.,1993), и последующего повреждения сосудистого эндотелия активированными нейтрофилами (Fea-гоп D.Т..Wong W. .1994). Очевидно, стимуляция нейтрофилов в очаге воспаления сопровождается усиленным образованием супероксид-анионов (Webster R..et.al., 1992). которые резко снижают вазодилата-цию, развивающуюся в ответ на воздействие ацетилхолина, брадики-нина, эндотелиального фактора релаксации, простациклина (OnsteIn

E..Nichols А., 1989). Активированные нейтрофилы. мононуклеарные клетки освобождают при экзоцитозе лизосомальные ферменты (Vara-ni.J. et. al., 1989). высокотоксичные продукты кислорода, тромбок-сан Аг и лейкотриен С4 (Okusawa S. at. al.. 1988; Sehlrmer W.

et.al. 1988). Метаболиты кислорода инактивируют а-1-антитрипсин -основной ингибитор сериновых протеиназ лизосом, вследствие его окисления и протеолиза (Vlelss S.J., Gressler В., Mlzon С..1992). Резко возрастает мембраноповреждающее действие лизосомальных ферментов на клетки эндотелия капилляров (Маянская С.Л- с соавт. ,1994) - повышается сосудистая проницаемость, формируется отек поджелудочной железы (Weksler R et. al., 1989).

Тромбообразование и отек приводят к полной окклюзии просвета

капилляров (Tolins J.Р.,RoíJ L.,1991), резкому снижению концентрации кислорода, энергетически богатых фосфатов, внутриклеточному увеличению лактата (Смирнов Д.А..1994; Clozel М.,1989; Ando К. et.al.. 1991; Zat z R., Denulci G. 1991). Временная ишемизация значительно увеличивает патологические изменения в поджелудочной железе. Однако, , существенную роль.в развитии воспалительных реакций играет .не только м не столько абсолютное содержание в ткани 0г сколько соотношение между содержанием 0г и активностью (сохранностью) систем, ■ продуцирующих активные формы кислорода, а также систем, защищающих ткань от 0г. Именно от этого взаимоотношения зависит и запуск, и дальнейшее разветвление цепных свободноради-кальных реакций (Арчаков А.И. Мохосеева И.М., 1989; Бородин Е.А. с соавт. 1992). Следует подчеркнуть, что окислительные метаболиты кислорода выступают на кле,тонном уровне не. только.как повреждающий фактор, но и как контролирующий механизм синтеза лростаглан-динов. за счет стимуляции ими ингибирования метаболизма арахидоно-вой КИСЛОТЫ (Осипов А.Н., Азизова O.A., Владимиров Ю. А., 1.990; Herland J. et.al..1991; Jwamots J. et.al..1992).

Биосинтез, действие и разрушение простагландинов ограничено, главным образом, местом их образования. Это дает основание рассматривать их как "аутокоиды"-биорегуляторы ,,с разнонаправленным механизмом действия (Марков Х.М. ,1990).

Таким образом, логично было бы предположить, что ослабление этого "первого удара" метаболитами на клетки поджелудочной железы путем увеличения синтеза или экзогенного введения простагландинов с цитопротективным действием позволит уменьшить свободнорадикаль-ное окисление лилидов в клеточных мембранах за счет возможной активации внутриклеточных механизмов антиперекисной защиты.

■ В соответствии с этим целью настоящего исследования явилось обоснование гипотезы об участии ПЯЛ, активных метаболитов кислорода, энергетического обмена, процессов ПОЛ, лизосомально - ваку-олярного аппарата в едином механизме развития острого панкреатита и влиянии на эти патогенетические механизмы экзогенных простагландинов.

В соответствие с поставленной целью нами решались следующие задачи:

1. Разработка экспериментальной (цитотокмческой) модели острого (геморрагического) панкреатита.

2. Изучение влияния панкреацитотоксинов и активированных гранулоцитов крови на развитие воспалительного процесса в подже-

лудочной железе.

3. Определение роли ферментов лизосом клеток поджелудочной железы (0-гликозидазы, р-галактозидазы, кислой фосфатазы, ДНК-азы. РНК-азы) и миелопероксидазы ПЯЛ в морфогенезе экспериментального панкреатита.

4. Выявление изменений интенсивности свободнорадикального окисления липидов клеточных мембран поджелудочной железы на различных стадиях развития острого панкреатита.

, 5. Анализ механизмов активации лизосомально-вакуолярного аппарата. клеток поджелудочной железы продуктами свободнорадикального окисления митохондриальных мембран.

6. Определение влияния продуктов свободнорадикального окисления липидов на активность ферментов, сопряженных с окислением и восстановлением глутатиона.

7. Анализ антирадикальной защиты клеточных мембран поджелудочной железы каталазой. супероксиддисмутазой и ферментами окислительно - восстановительного перехода глутатиона.

8. Выявление зависимости свободнорадикального окисления липидов клеточных мембран поджелудочной железы от напряженности энергетического обмена. '

9. Изучение влияния простациклина и энзапростана' киелородо-зависимые механизмы повреждения и защиты клеточных мембран поджелудочной железы.

10. Анализ взаимосвязи между увеличение?.! активности лизосо-мальных ферментов в крови больных острым панкреатитом и структурными нарушениями в поджелудочной железе.

11. Выявление возможного участия лизосомальных ферментов сыворотки крлви больных острым панкреатитом в активации процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) эритроцитарных мембран.

12. Изучение зависимости активации процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах больных острым панкреатитом от напряженности энергетического обмена, природы связи с мембраной и стационарной активности антиокислительных ферментов.

Научная новизна. Разработана и апробирована в эксперименте цитотоксическая модель острого геморрагического панкреатита, на которой прослежены все стадии развития воспалительного процесса в поджелудочной железе.

Впервые в эксперименте показана роль цитотоксинов и активированное гранулоцитов крови в повреждении, регенерации и склерозировании поджелудочной железы при остром панкреатите (ОН). Дока-

зано прямое участие лизосомально - вакуолярного аппарата в морфогенезе острого панкреатита.

Впервые в эксперименте обнаружена причинно - следственная связь между активацией свободнорадикальных реакций в липидах клеточных мембран и развитием воспалительного процесса в поджелудочной железе. Доказано активирующее влияние различных продуктов пе-рекисного окисления липидов митохондриальных мембран на лизосомально - вакуолярный аппарат поджелудочной железы.

Установлена прямая зависимость процессов перекисного окисления липидов и антиперекисной защиты от напряженности энергетического обмена в клетках поджелудочной железы.

Впервые на модели ОП показано торможение процессов ПОЛ экзогенными лростагландинами различных серий за счет сохранения ан-тиоксидатного. резерва в клетке, препятствующего дезинтеграции мембранных структур.

Установлена взаимосвязь между увеличением активности лизосо-мальных ферментов в крови больных острым панкреатитом и структурными нарушениями в поджелудочной железе. Впервые доказано участие лизосомальных ферментов сыворотки крови больных острым панкреатитом в формировании интоксикационного синдрома и активации процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах. Показано, что на уровне мембраны эритроцита происходит более существенная активация процессов ПОЛ, чем в целой клетке, степень активности которых зависит от структуры мембраны и первоначальной активности связанных с мембраной ферментов.

Доказано, что степень устойчивости дегидрогеназ пентозо -фосфатного пути окисления глюкозы ШФП) эритроцитов к ингибирую-щему эффекту НАДФ • Н2 определяется способностью красных кровяных клеток участвовать в генерации НАДФ-Нг для поддержания необходимой концентрации восстановленного глутатиона. так как окисленный глутатион активирует дегидрогеназы ПФП, понижая уровень НАДФ+/НАДФ-Н2 и вызывая "деингибирование" этих ферментов.

Теоретическая и практическая значимость. Разработанная цито-токсическая модель геморрагического панкреатита позволяет изучить патогенез и морфогенез заболевания на органном, клеточном, субклеточном и молекулярном уровне. Основные положения работы расширяют и конкретизируют теоретические представления об участии кис-лородозависимых процессов в механизмах повреждения и защиты клеток поджелудочной железы при остром панкреатите. Полученные в ходе экспериментов данные указывают на приоритетную роль активации

свободнорадикальных реакций в липидах мембран клеток поджелудочной железы как патогенетического механизма острого панкреатита. Со всей очевидностью доказано, что на ранних этапах развития острого панкреатита повреждению клеток поджелудочной железы предшествует блокада аэробных путей гликолиза, некомпенсированная активация гликогенеза и последующая активация лизосомально - вакуо-лярного аппарата для обеспечения клеток энергетическим материалом за счет эндогенного питания. Прогрессирование анаэробиоза в более поздние сроки приводит к срыву "функционального напряжения" клеток и запуску цепного цитолитического процесса.

Экспериментально обосновано применение простациклина и эн-запроста при остром панкреатите. Доказано, чго оба простагландина активно влияют на1 кислородзависимьй механизм развития острого панкреатита, оказывая цитопротективный эффект, который выражен в большей степени у простациклина.

Исследование активности лизосомальных ферментов в крови больных острым панкреатитом показало, что в формирование .деструктивного процесса вовлекаются лизосомы, гидролазы которых оказывают повреждающее действие на клетки поджелудочной железы. Выявленная зависимость динамики активности ферментов от характера течения острого панкреатита позволяет прогнозировать неблагоприятное, рецидивирующее течение заболевание и появление осложнений.

Доказано, что лизосомальные ферменты, попавшие в кровь, участвуют в формировании интоксикационного синдрома и выступают в качестве триггерного механизма в активации процессов перекисного окисления липидов в эритроцитарных мембранах, интенсивность процессов перекисного окисления напрямую зависит от исходной- активности антиоксидантных ферментов и готовности мембран к переокислению.

Внедрения. По теме исследования защищена, одна и подготовлены к защите две кандидатские диссертации, в которых на основе, разработанной цитотоксической модели ОП проведены исследования по изучению патогенеза интоксикационного синдрома и..заидотк различных органов антиоксидантами и эйкозаноидами. Результаты исследований используются в лекциях на факультете последипломного образования врачей.

Разработан и внедрен в практику хирургических отделений Ставропольского края "комплексный метод диагностики острого, панкреатита".

1 4 ; Основные положения, выносимые на защиту:

'47^СвЙ'зь цитотоксинов; ПЯЛ с активацией кислородозависимых процессов в клетках поджелудочной железы при остром панкреатите.

Ц. Зависимость процессов перекисного окисления липидов от энергетического обмена в клетках поджелудочной железы.

' 3>. Трйггерный характер активации процессов перекисного окис-лешя :"шпидов митохондрий для активации лизосомально - вакуоляр-ногр аппарата'поджелудочной'железы.

4.'Взаимосвязь лизосомально - вакуолярного аппарата, энергетического обмена, цитолиза и регенераторных процессов в поджелудочной железе' при остром панкреатите.

б.' Связь ферментных реакций окислительно -.восстановительного перехода глутатиона с дегидрогеназным звеном пентозсфосфатного пути окисления глюкозы.

6. Цитопротективный механизм действия простациклина и энзап-роста на клетки поджелудочной железы при их повреждении активными метаболитами кислорода.

7. Лизосомальные ферменты сыворотки крови - причина активации процессов 'ПОЛ в эритроцитах больных острым панкреатитом.

8. Показатель резистентности эритроцитов и эритроцитарных мембран к "перекиснсод стрессу" у больных острым панкреатитом -

высокая активность каталазы.

9. Особенности активации антиокислительных ферментов в эритроцитах больных острым панкреатитом.

Апробация. Результаты исследований доложены на IV Всесоюзном съезде патофизиологов 3-6 октября 1989 г.,г. Кишинев; научно -практической конференции "Современные методы исследований в функциональной диагностике" - Ставрополь, 1992 г.; Научно - практической конференции, . посвященной 30-ти летию факультета усовершенствования врачей Ставропольского государственного медицинского института - Ставрополь. 1994 г.; 1-ой международной конференции "Последние достижения в области заболеваний пищеварительного тракта" - Кисловодск. 26-27 января 1995 г. и опубликованы в 20 работах.

Объем и структура работы. Материалы исследований изложены на '337 страницах. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы, включающего 358 отечественных и 458 иностранных источников литературы. Работа иллюстрирована 3 рисунками и 33 таблицами.

- 9 -Содержание работы.

Материалы и методы исследования.

Опыты поставлены на 176 собаках в возрасте от 2 до 5 лет. массой от 5 до 16 кг, которые были разделены на четыре группы. В первой группе (8 собак) были проведены контрольные лапаротомии (лоянооперированные животные), во второй, третьей и четвертой грушах (по 56 собак в каждой) моделировали острый панкреатит.

Лечение животных с острым панкреатитом (третья .и четвертая группы) проводили энзапростом (простагландин F2a) Венгерской фирмы "Гедеон Рихтер" в суточной дозе 0.1 мг и простациклином.(прос-тагландин J2) -Олайненского химфармзавода в суточной дозе 0.1 мг. Внутривенные инфузии простагландинов проводили дважды в сутки с интервалом 12 часов на 50 мл изотонического раствора хлорида натрия. Динамику воспалительного процесса. ПОЛ, энергетического обмена в поджелудочной железе леченых и контрольных животных изучали через 1, 8 и 24 часа, на 3, 6. 10, 20-е сутки после введения "разрешающих доз ПЦГС".

Воспалительные реакции в ПК исследовали в парафиновых срезах с окраской гематоксилин - эозином, пикрофуксином, по Маллори -Массой в модификации Н.З. Слинченко (1964) для выявления коллаге-новых волокон, фибрина и фибриноида. Полиморфкоядерные лейкоциты (ПЯЛ) выявляли окраской замороженных срезов а-.чафтол-сафранином на миелопероксидазу (КФ 1.11.1 Л). Элективное выявление эозинофи-лов проводили окраской бензидином с последующей обработкой цианидами (Jam L.F., LI С. J., Grosb W.К.,1971). Чатем подсчитывали среднее количество ПЯЛ на S=0.0064 мкм2 и вычисляли среднее процентное отношение эозинофилов к числу ПЯЛ. Субклеточные фракции из гомогенатов ГШ получали методом дифференциального центрифуги- . рования (De Duve,1955; Кондрашова М.Н. с соавт.,1987).

Активность кислой фосфатазы (КФ 3.1.3.2.) в гомогенатах ПЖ анализировали по методу De Duve с соавт. (1955) с дополнениями Barrett A. J. (1972), "^-галактозидазы (КФ 3.2.1.23), ß-глнжозидазы (КФ 3.2.1.21) по методу Barrett A.J. (1972) кислой рибонуклеазы (КФ 3.1.4.2.3), кислой дезоксирибонуклеазы (КФ 3.1.4.6) по методу A.A. Покровского, А.И. Арчакова (1958), белок - по Lowry О.Н. et. al. (1951).

Активность перекисного окисления липидов определяли по кон-

Консультант гистологического и гистохимического раздела исследования,- руководитель группы патогистологии Ставропольского НИ противочумного института. Заслуженный деятель науки и техники, доктор медицинских наук, профессор Н.А. Локтев.'

центравди диеновой конъюгации (ДК) (Стальная И.Д..1977; Волче-горский К.А. с соавт.. 1989), гидроперекисей лилидов (ГПЛ) (Романова Л.А., Стальная И.Д. 1977)и малонового диальдегида (МДА) Asa-kawa Т.,Matsushita S., 1979). Количество продуктов ПОЛ определяли в пересчете на содержащиеся в образцах общие липиды (Таранова

H.П.. Говорова Л.В., 1987).

Антиперекисную резистентность клеток ЛИ выявляли по концентрации глутатиона и его фракций (Paglla о.Е., Valentine W.N., 1967), активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ)(КФ

I.1.1.49) (Путилина Ф. Н., Зоидзе С. Д.,1982). глутатионредуктазы (ГР) (КФ 1.6.4.2.) (Путилина Ф.Е..1982). глутатионпероксидазы (ГЦ) (КФ 1.11.1.3) (Hochstein P. (Шеу Н., 1968), супероксиддисмутазы (СОД) (КФ 1.15.1.11) (Макаревич О.П. Голиков П.П. 1983), каталазы (КА) (КФ 1.11.1.6) (Королюк М.А. с соавт., 1988).

Определение активности дегидрогеназ, количества и интенсивности обновления субстратов энергетического обмена проводили по определению концентрации пировиноградной кислоты (ПВК) (Цок, Лямпрехт, 1970), молочной кислоты (МК) Warmer L. 1984; Clarke F., et. al. 1984),' активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) (КФ 1.1.1.27) (Bergmeyer Н. Bernt Е.,1970), НАД-зависимой малатдегид-рогеназы (МДГ) (КФ 1.1.1.37) (Ochoa, 1955; Кинг. 1965). Пиридиновые нуклеоиды определяли по Н. Слайтеру с соавт. (1965). используя Г-6-ФДГ реакцию для определения количества НАДФ и МДГ реакцию - для НАД.

Кроме того, нами обследовано 93 больных с различными формами острого панкреатита, у которых для исследований брали кровь в момент поступления в стационар и в день выписки - после нормализации клинических и лабораторных показателей. В эритроцитах и эрит-роцитарных мембранах исследовали активность КА, ГП, ГР, Г-6-ФДГ, ДК, МДА. Общую активность кислой фосфатазы. р-галактозидазы определяли в сыворотке крови.

Результаты полученных данных обработаны методом вариационного и корреляционного анализа с использованием критерия Стыодента. Разность средних величин считалась достоверной при р<0.05 (Сепет-лиев Д., 1968).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Свободнорадикальное окисление липидов и функциональная акт! ность ПЯЛ в патогенезе острого экспериментальное панкреатита.

Нередко в крови больных ОП находят циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК). Частота выявления ЦИК коррелирует с частотой обнаруженных в крови антипанкреатических антител (Вельори CK 1990' Жукова E.H.. 1990). Существующая лесная связь между фагоцитами и ЦИК (Cairns H.S. et.al. 1991) послужила основанием к совместному изучению их роли в патогенезе острого экспериментального панкреатита.

Моделирование острого панкреатита,

Под комбинированным калипсол-гексеналовым наркозом верхней сре динной лапаротомией вскрывали брюшную полость к вводили в артерию ПВ 2.5 мл панкреатоцитотоксической сыворотки (титр антител по ^ 1-6500) Брюшную полость орошали 150 ООО ЕД новокаинбензилпеки-циллина. рану ушивали кетгутом и шелком. Через 24 часа кивэтным внутривенно вводили "разрешающие" дозы ПЦТС из расчета 0 5 л ia кг массы животного. В тех случаях, когда животных забивали через 1 и 8 часов, ПЦТС внутривенно вводили через 1 и 8 часов поел, операции. Кроме того, были произведены контроль ^отмяту 8 собак с введением по вышеописанной методике 2 5 мл О 9Л ра.тво pa NaCL и 150 ООО ЕД новокаинбензилпенициллина (ложнооперированные

животные). пж ппсле

Исследование динамики воспалительного процесса в ПЖ после

введения ПЦТС показало, что пусковым Фактором в р«в«™^™.

ется повреждение сосудистого эндотелия цитотоксинами и активиро

ванными ИЛ. очевидно, деструкция эндотелия и суэндотелиалнао

матрикса симулирует выделение эндотелиа,ьни>, клетка .и

цитами ФУШ- в просвете капилляров и артериол появляются отлож нил

эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Единичные инфил

траты ПЯЛ (8.21,0.21. Э03ИН0ФИЛЫ 5%) вокруг сосудо«ваииноз

кой ткани дают резкоположительную реакцию на миелопероксидазу

(Ш>" Через 8 часов развития ОП в ПЖ наряду с P^J^6^-вания нарастает кровенаполнение сосудов и .Р^™' появляются обширные кровоизлияния и дистрофия клеток увеличивается инфильтрация ПЯЛ. В очагах скоплеииПЯЛэозинсфилы составляют 17% (табл. 1) Гранулы ПЯЛ содержат

Очевидно, миелопероксидаза нейтрофилов и пероксидаза зоз. кофилов катализируют ферментативную реакцию Нг02 с галоидами о °бразова нием^НОСЬ и НОВг (в случаях о эозинофилами). Гипогалоиды инакти

вируют а-1-антитрипсин - ингибитор сериновых протеиназ ПЖ. - переводят коллагеназу в активную форму, окисляют лейкотриены, цито-токсины и инициируют БОЛ. Это.способствует повреждению клеток и расширению зоны воспаления (Пучнина Е.А. с соавт.. 1992). Воспали-, тельный процесс к концу первых суток переходит с рыхлой соединительной ткани на паренхиму ПЖ. По - видимому, в условиях повреждения клеточных мембран секреторный материал выделяется .не в просвет центроацинозного протока, а в интерстициальное пространство с последующим аутолизом высокоактивными ферментами ПЖ. В очагах некроза, кровоизлияний (в сравнении с 8-м часом) увеличивается количество-ПЯЛ, причем, эозинофилы располагаются как на границе между дистрофически измененными клетками и участками некроза так и периваскулярно.

Таблица 1

Содержание лейкоцитов в ПЖ собак с острым панкреатитом (M±m), (S=o.0064т*2)

Исследуемый 1 • 8 24 3 6 10 20

показатель час часов часа суток суток суток суток

Ложнооперированные животные

- нейтрофилы 1-2

- эозинофилы " О

Собаки с ОП

- нейтрофилы 8.21± 20.61 + 40 ,51± 21 .42+ 7. 21± 3fi |.24±

0.21 0. 96 2. 621 1. 832 0. 27 0. <а со

Р< 0. 01 0. 001 0. 01 0. 05 0. 05

- эозинофилы 4. 32± 6. 97+ 2. 17+ 3. 16+

0. 525 0. 863 0. 327 0. 31

% от количества

нейтрофилов 5. 32 17 .20 10 . 13 43.82

Начиная с 3-х суток отмечается завершение острого деструктивного процесса, оно совпадает с изменением клеточного состава инфильтрата. .

Как было показано Г.И. Клебановым с соавт (1990), Denton M.D. et. al. (1991), в последовательности межклеточных взаимодействий (наряду с эндотелием и тучными клетками) нейтрофилу принадлежит первое место: вызывает реактивные изменения в тромбоцитах, тучных клетках, моноцитах, эозинофилах, фибробластах. Их стимуляция в очаге воспаления сопровождается выделением медиаторов, которые, действуя на нейтрофилы, способствуют трансформации воспалительного инфильтрата: количество нейтрофилов уменьшается, намечается преобладание мононуклеаров и эозинофчлов.

Спустя 10 дней после введения ПЦТС вновь сдвигается динамическое равновесие между циркулирующими и маргинальными ПЯЛ в сторону последних (перед выходом в экстравазальное пространство). Гиперадгезивные -нейтрофилы секретируют содержимое гранул и запускают новый каскад структурных изменений в поджелудочной железе. Но инфильтрация ГШ ПЯЛ выражена меньше, чем в конце первых суток. На б-е сутки среди клеточного детрита иного зозшофтав, по - видимому, это обстоятельство ускоряет клеточную трансформацию свежих очагов некроза. В эти сроки в ПЖ отмечается замещение свежих очагов некроза рубцовой соединительной тканью и в конце наблюдений формируется грубая деформация органа.

При исследовании перекисной резистентности к легочных мембран ПЖ нами изучены сезонные колебания процессов ПОЛ по покг.зателям ДК, ГПЛ, МДА у интактных собак. В период наблюдения за интактными собаками в клетках ПЖ отмечались сезонные колебания активации процессов ПОЛ, но они не достоверны (р=0.5).

Наблюдения за животными с острым панкреатитом показывают, что в первые часы развития ОП значительно повышается активность процессов ПОЛ. Этот процесс не обрывается на стадии зарождения цепей" (ДК,ГПЛ), а,принимает цепной, свободнорадикальный характер. Развитие к концу первых суток каскадного процесса пероксидации липидов многократно усиливает первичное повреждение цитотоксинов и продуктов миелопероксидазной реакции ПЯЛ в клеточных мембранах ПЖ. В условиях нарастающего снижения кровотока (гипоксия) железо разрушенных эритроцитов интенсифицирует разложение гидроперекисей липидов с образованием высокотоксичных продуктов ПОЛ.

Результаты наших исследований согласуются с данными М. В. Бн-

Таблица 2

Изменение активности ИДГ, 1ЩГ, концентрации ольстратов энергетического обмена и степени иссп-иолеиномн НАД и Ш в подхешдочной велезе собак с геиоррагичесхин панхреатимм (К*к)

Ьсследдеинй показатель Яоиооперирован- н№ Сроки наблюдения

1 час | 8 часов 24 часа 3 суток 6 сутох 18 с» 28 спох

Пировиноградная в.426

кислота. +0,612 Кв.Ю

Полочная 9.155

кислота. +8.11 Р{8.в5

Аактатдегидтогеназа. в. 221

Р<в.в5 »8.814

."алашщрогеназа. 8.336

Р<8.8§ . 18,016

<НЩ/1Щ)Х,Р<в.в5 29.73

(НАДМД№,Р<В.85 86.48

Г-6-Ш<0,05 7,532 ♦8.389

в.583 8.584 8.412 8.629 8.415 8.542 8.39? «8.814 +8.013 «8.822 <8.818 +6.616 48.813 48.822

8.726 8.845 8.799 8.675 48.818 48.814 40,821 40.818

8.938 8.825 8.883 48.817 48.814 48.812

8.583 8.732 8.161 8,286 8.488 8.347 8.313

48.815 48,812 48,888 48.818 +0,811 48,816 48.813

8.397 8.401 8.294 8.394 е.285 8.388 в.Звб

40,815 48.814 48.817 10.818 40.809 48.812 48.811

35.12 39.49 26.81 34.86 25.22 34.33 27.87

127.47 37.88 92.78 74.33 75.33 61.77 48.16

14.460 4.288 18.515 8.432 8.545 7.87 4.566

48.485 48.416 40,126 48.113 48.111 «8.832 48,899

I

ленко (1989). показавшей, что в условиях прогрессирующего анаэробиоза железо интенсифицирует процессы ПОЛ при разложении гидроперекисей липидов (R00H) с образованием элко.¡сильного радикала (R0),ведущего к разветвлению цепи. Прооксдантный эффект Fe2+ зависит от концентрации восстановленных форм пиридиновых нуклео-тидов (НАДФ-зависимые процессы ПОЛ) (Осипов А.Н.. Азизова O.A., Владимиров Ю.А.. 1990).

Наблюдаемое в первые часы развития ОП увеличение восстановленных форм пиридиновых нуклеотидов свидетельствует в пользу, указанного предположения (табл 2).

Ранная вспышка процессов ПОЛ в ЛЖ (первые часы) протекает на фоне сниженной активности КА и повышенной активности СОД. ГП, ГР. Очевидно, между этими событиями существует причинно - следственная связь, так как регуляцию уровня 02"« • в клетках осуществляет высокоспецифический фермент - антиоксидант СОД, ускоряющий реакцию дисмутации 0г-- • в Нг0г (Дубинина Е. Е.. 1992: Marklund S.L.,1988). Высокая активность СОД впервые часы развития ОП косвенно свидетельствует о значительном увеличении Нг02 в очагах воспаления.

Наблюдаемое в наших опытах избыточное накопление пирувата и лактата (табл.'2) сдвигает pH в кислую сторону. Ацидоз увеличивает в 5 раз скорость спонтанной дисмутации 0,•- с образованием реактивных; Форм 02 (Ward P.A..1991). Как было показано Marklund S.(1989), ацидоз и высокие концентрации Н2Ог ингибируют СОД (активность фермента резко снижена с 24 часов и до конца исследований). СОД и КА инактивируются в результате окислительной модификации определенных аминокислотных остатков (метионин. гистидин, цистеин) в присутствии восстановителей (тиолы. аскорбат, восстановленные пиридиновые нуклеотиды) и ионов переходных,металлов (Маринов Б. С. .Обидин Н.Б.,Гуляев Н. В., 1987; Januczklwicz R. et.al., 1986). Согласно гипотезы Stedman E.R.;(1986), внутриклеточные ферменты, подвергавшиеся окислительной модификаций, быстрее расщепляются протеазами лизосом, чем не модифицированные.

Снижение у животных с ОП активности антиокислительных ферментных систем защиты клетки от активных форм 02 и липидных перекисей, неравноценно для различных антиокислительных ферментов и зависит о длительности нарушения органного кровотока, еыраженнос-ти инфильтрации очагов воспаления ПЯЛ. наличия ионов железа, генерации ПЯЛ в ходе миелопероксидазной реакции Н20г. Н0С1: цито-токсическое действие нейтрофилов в очаге воспаления отчасти опое-

редуется индуцированной Н0С1 мобилизацией 2пг" из металлопротеи-нов (Fllss П., Menard М.,1991).-Однако, способность гипогалоидов непосредственно разрушать клетки мишени незначитёльна, а их деструктивное•действие опосредовано регуляцией активности протеи-наз, что выражается инактивацией ингибиторов последних (Weiss S. J.. 1991).

Повышение процессов пероксидации в клеточных мембранах ПЖ собак с ОП сопровождается значительным увеличением активности ГП с 0,373±0.007 нмоль ;НАДФНг/мин/мг белка (ложноопериршанные "животные) до 0.503 ± 0. 027 нмо'ль НАДФН2/мин/мг белка в первый час (Р<0.01). С 8-го часа и до 20-х суток фермент сохраняет свою высокую активность. . Обращает на себя внимание тот факт, что-' наибольшая активность, ГП зарегистрирована в сроки (24 часа. 10-е и 20-е сутки) максимально высоких-.коццентрааий первичных и промежуточных продуктов ПОЛ.'

При исследовании активности НАДФН2 глутатионредуктазы (ГР) в ПК собак обнаружено значительное увеличение активности фермента в первые трое суток развития ОП. В последующие сроки активность фермента ниже, чем у ложно о перир о ванных животных.

Таким образом, в связи со снижением активности СОД v КА в детоксикацию Н202 и продуктов ПОЛ включается система глутатионо-вых ферментов: глутатионпероксидаза. глутатконредуктаза.

Как было показано М.В. Биленко (1989). изоферментные формы GSH-пероксидазы участвуют на различных этапах ПОЛ: ГП-1 (селенсо-держащая) на этапе иницирования активных форм ог,ГП-2 (селеннесо-держащая) на этапе разложения ГПЛ. Учитывая высокие концентрации ГПЛ в очагах воспаления ПЖ, значительный прирост активности GSH-пероксидазы и снижение - КА в наших опытах, очевидно, мы имеем дело с обоими изоформами ГП.

Таким образом, активация ГП в первые часы развития панкреатита свидетельствует о повышенном накоплении перекиси водорода в клетках ПН, так как глутатион снижает стационарную концентрацию последней через глутатионпероксидазную реакцию (Владимиров Ю. А. ,1987; Кулинский В. И., Колесниченко Л.С.. 1990). Н202 инакти-вируется в указанной реакции с образованием окисленного глутатио-на (GSSG), снимающего ингибирование дегидрогеназ за счет утилизации НАДФН2 в глутатионредуктазной реакции (Арчаков А.И.. Мохосеев И.М.. 1989). .

Увеличение активности ГП в клетках ПЖ в течение первых суток развития ОП сопровождается значительным вовлечением глутатиона в

процесс детоксгасации продуктов ЛОЛ, в связи с чем среди общего пула глутатиона возрастает количество СЗБС. Так, если у ложноопе-рированных животных на долю С.^ приходиться 305?, то у животных с ОП через час его уже 46Я. через 8 часов - 64%. а к 24. часу - 5835. В эти же сроки на фоне кратковременного (первый час) увеличения общего пула глутатиона в клетках ПЖ намечается тенденция к снижению его концентрации. И только с 3-х суток начинается увеличение общего глутатиона и значительно уменьшается доля СББС. его меньше, чем СБН. На 20-е сутки, по-видимому, из-за увеличения синтеза общий пул глутатиона превышает показатели ложно оперированных животных (соотвествекно 57,53 и 51.21 мгЯ.Р<0.05). Однако, в отличие от предыдущих сроков наблюдений соотношение С53С и СБН одинаковое.

Наши наблюдения согласуются с результатами исследований Ю.М. Кожевникова (1985). показавшего, что при ишемии снижение уровня СБН связано не с потреблением в реакциях, а вызвано первичным нарушением его синтеза из - за дефицита энергии. Подобное суждение проверено нами при изучении энергетического обмена в клетках ПЖ (табл.2). Нами обнаружено резкое уменьшение утилизации экзогенной глюкозы в ЦТК и актийации гликогеколиза в первые часы развития ОП. В условиях срогрессирущего анаэробиоза отмечается несостоятельность гликолиза и гликогенеза в обеспечении клеток ГШ .энергией. В интеграции клеточного метаболизма увеличивается роль интер-иедиатов окислигельной стадии пентозного цикла, не требующего для своего функционирования кислорода. Другим существенным моментом активации пентозного цикла является участке Г-6-ФДГ и 6-ФГДГ в поддержании рэдокс-потенциала клетки. Образующиеся в этих реакциях восстановленные формы НАДФ+ используются ГР для восстановления ОББС, которкй снижает стационарную концентрацию Н202 через ГП реакцию. Активация ке ферментов окислительной ветви пентозного цикла при повышенной доступности СБЗС. вероятно, относится к одному из основных механизмов срочной и эффективной регуляции дегидроге-назами пентозного цикла редокс - потенциала клетки при ОП (Соколовский В. В.. 1988).

При изучении участия лизосомального аппарата в развитии ОП обнаружено, что увеличение удельной активности исследованных гидролитических ферментов, перераспределения этих ферментов из связанной фракши в свободную и неосаадаемую находится в прямой зависимости ст сроков развития ОП. Так. через час после введения 1ЩТС наблвдеется резкое увеличение прироста удельной (общей) и

свободной активности кислой фосфатазы. РНК-зы, ДНК-зы, ($-галакто-зидазы и ß-глюкозидазы. Незначительно снижается осмотическая устойчивость лизосом (ЛС). выявляемая по приросту свободной активности кислой фосфатазы, ß-глюкозидазы, ß-галактозидазы после инкубации гомогената в гипотоничной среде (0,125 M р-ре сахарозы). Неосаадаемая активность кислой фосфатазы и ß-глюкозидазы в надо-садочной фракции (105000 g) лизосом увеличивается незначительно. Это свидетельствует об увеличении числа вторичных лизосом аутофа-гическсго типа и начинающейся лабилизации органелл. Увеличение прироста удельной активности ферментов, резкое снижение осмотической устойчивости лизосом, одновременное увеличение неосаждае-мой активности кислой фосфатазы, ß -глкжозидазы через 8 часов развития ОП вызвано прогрессирующей лабилизации лизосом и начинающимся распадом их мембран. К концу первых суток этот процесс принимает лавинообразный характер.

Недостаточность экзогенной глюкозы клетки ПК компенсируют увеличением активности лизосомальных гликозидаз, расщепляющих гликоген и тем самым улучшающих энергообеспечение внутриклеточных процессов.

Сохранение повышенной активности лизосомально - вакуолярного аппарата на третьи сутки развитая ОП является необходимой предпосылкой для регенераторных процессов в ПЖ. Прирост свободной активности ферментов и уменьшение неседементируемой (в сравнении с 1-ми сутками) указывает на увеличение числа более крупных вторичных лизосом (гетеро- и аутофагического типа) (Короленко Т.А., Рукавишникова Е. В. . ПупышевА.Б.. 1990). Активация лизосомального аппарата на третьи сутки развития ОП направлена на обеспечение органа необходимым количеством энергетического, и в большей степени, пластического материала. В это время в очагах воспаления наблюдается смена клеточного пула: на смену нейтрофи'льным лейкоцитам приходят макрофаги, которые очищают очаги некроза от клеточного детрита и стимулируют фибропластические процессы (Понома-рева-П.Г., Тутельян В.А., 1987; Васильев A.B. с соавт., 1989).

Повторная волна активации лизосом на 6-е - 10-е"сутки вызывает повреждение лизосомальными ферментами клеточных структур ПЖ и препятствуют развитию репаративных процессов.

■•-! В -ходе.. исследований состояния лизосомально - вакуолярного аппарата.при ОП обнаружено, что изменение активности различных лизосомальных гидролаз отличается как по направленности, так и по степени выраженности.' Этот факт объясняется разной локализацией

ферментов в лизосомах (ферменты матрикса. связанные с органеллы и растворимые) и их определенной субстратной специфич

ностью ( Панин Л.Е.. Маянская H.H.. 1987). _

Некоторые авторы сообщают о лабилизирующем Леиствиинализо сонные мембраны супероксидрадикалов и липоперекисей аноксичных митохондрий (ИХ) (Болдырев A.A.. 1984: Джафаров

Для проверки этого предположения, мы инкубировали интактные

митохондрии ПЖ с интактными ллзосомами. интактные ^тохондриис лизосомами собак, больных ОП (табл.3), и. наоборот ЩриТОввдю изолированных митохондрий и лизосом в среду инкубации ^Креос^ш^ гер - бикарбонатный буфер) добавляли сывороточный альбушн и о л И ЭДТА. Альбумин связывает свободные жирные кислоты а ЭДТА инак тивирует иитохондриальную фосфолипазу Аг. , Такая постановка опьта позволяет замедлить нарушение Функции изолированных MX и лс ш

зиков В.Н.,1988). wv „о гоотояние

Так. при исследовании влияния продуктов ПОЛ ИХ на состояли

ЛС обнаружено: при инкубации интактных.ИХ и ин.-актаых ЛС среде

инкубации нет достоверного увеличения концентрации как ДК. так и

ВДА При инкубации ЛС собак, больных ОП. с интактнши MX мы обн^

рушли незначительный прирост в среде инкубации ДК^и

(р".05). В то же время инкубация MX собак• больн^О ^^

мами интактных животных сопровождается значительной акти^ и

процессов ПОЛ в мембранах и снижением 0СМ;™е^вн^т™бра-ЛС. определяемой по приросту неседементируемои активности Р

носвязанного фермента ß-глюкозидазы. „тяте процессов

В, последующих опытах нами --^^^^ / ^"„ально-ва-ПОЛ. развивающихся в Мх собак с ОП на состояние j куолярного аппарата в; -динамике- острого повреждения органа.

Обнаруженное нами нарушение микроциркуляции в ПЖ в 1 я м развития ОП. очевидно,'-; сопровождается POQ™^*f Ты

И И.Л990: Семенов В.П.ЛШУ J ™

Мх к 8-MV часу, увеличение ацидоза за счет и^имхиш Ш т^шиш и кисло,.

Их В качестве субстратов дыхания из - за снижения <и»

ТаЕлиш 3

Структурно - функциональная модшосация биологических мембран при осг рои панкреатите ,(Н+и).

Исспедзенмй показатель Кх И к Л Нх И Сроки наблюдения

Лс И КХ п Ас И контроль 1 час 8 часов 24 часа

Диеновая хоньнгация (ммоль/мг липидов) К 13.37 ♦9.511 15.11 ¿9.916 8.85 27.14 ¿8.961 8.81 13.88 ♦8.163 35.83 ¿8.162 8.881 13.49 ¿8.121 8.881 6.81 ¿8.256 8.81

Налоновш диальдегм (мколь/иг лилидов) р( 0.033 ^0» 006 8.186 8.284 ¿8.811 ¿8.816 8.85 6.881 8.898 ♦8.886 8.121 ¿8.817 8.85 8.335 ¿8.885 8.81 8.534 ¿8.887 8.881

Молочная хислота (кмль НАДЯ /мин/иг белка), р< 8.155 ♦9.811 8.655 ♦8.889 6.881 8.783 ¿9.818 8.81 8.738 ♦8.889 8.85

Иеседементюзека* шигкость а-гт-козидазы (оат. едии/мг (елка) в пиомничесхой среде. р< 6.729 ♦0.21 6.949 7.448 ¿0.841 19.837 8.5 8.85 6.729 ♦8.941 28.161 18.827 8.81 122.174 ¿1.272 8.881 136.761 ¿2.716 8.85

Примечание! йх К- ипохондрий ютактиме; Лс й - даосом» иитахтнме; их Л митохондрии собак с острки панкреатите«; Ле П - ¡тзсомм собах с острый пантатшм Продояытега>иость шхзвщиа 38 тл в К?е6с-Рннгер-6иш&оиинон 6з»ере с деьавленнем iv, альбяежа и ЭШ

активности убихинона Мх (восстановленная форма убихинола - 0Нг) (Сесоп! С. е^а1.,1988) приводит к прогрессирующей дестабилизации Лс мембран при контакте с аноксичными Мх. резкому усилению аутофагоцитоза дефектных Мх и образованию аутофагосом.

Избыточное накопление в мембранах Мх МДА к 24-му часу развития ОП. очевидно, инициирует в мембранах Лс изменения структурной целостности за счет химической модификации липидного и белкового компонентов, в связи с чем возрастает структурная жесткость мембранных белков. Появление в жирнокислотной цепи гидроперакисных группировок приводит к резкому уменьшению комплексообразования липида с белками (Бородин Е.А., Арчаков А.И.,1987; Пфаль В.П., Демченко А.П.,1988), нарушению структурной стабильности лизосо-мальной мембраны, возрастанию солюбилизации мембраносвязанных ферментов. Все это свидетельствует о начале цепного цитолитического процесса (Древаль В.И. .1991; Ггеиег I. еЬ.а1..1989).

При оценке результатов исследования активности дегидрогеназ. количества и интенсивности обновления некоторых субстратов энергетического обмена ПЖ- собак мы обнаружили, что в клетках органа увеличение энергетического обмена с 1-го часа развития ОП происходит преимущественно за счет гликолиза. Б аэробных условиях прирост концентрации пирувата происходит из 3-фосфоглицерофосфата с восстановлением НАД+ в НАДНг. Увеличение соотношения НАДНг/НАД+ увеличивает скорость генерации и одноэлектронное восстановление кислорода дегидрогеназой в дыхательной цепи митохондрий (Авраам Р.. Котляр А.Б..1991) - возрастает скорость дыхания. Увеличение скорости дыхания, усиление гликолиза сопровождается приростом концентрации пировиноградной кислоты (ПВК) в пируваткгрбокси-лазной реакции и ЦТК (Мельничук Д. А. .1989). Избыток в цитозоле НАДН2 способствует переходу из связанного в свободное состояние ЛДГ. Коферменг связывается с ЛДГ в коферментсвязываюцем центре и переводят ЛДГ из неактивного состояния в активное (Лущак В.И. ,1990; Гребенщиков О.Г. с соавт., 1992). Увеличение в цитозоле ПВК, лактата, НАДНг стимулирует активность чалат-аспартатного шунта и перенос редрокс-эквивалентов из цитоплазмы в митохондрии.

Выраженные нарушения внутриорганного кровотока и микроциркуляции к 2<-му часу резко уменьшают приток к клеткам;ПЖ не только глюкозы, но и молекулярного кислорода. В клетках ПЖ в избыточном количестве накапливается лактат. Ацидоз, дефицит НС0Э"\ уменьшение степени восстановленности НАД+ тормозит активность ЛДГ, МДГ вследствие распада высокоактивных агрегатов молекул' ферментов и

коферментов и диссоциации олигомерных ферментов на малоактивные мономеры. Последние становятся доступными для клеточных протеаз и легко деградируют под влиянием лизосомальных ферментов (островский D.M. с соавт..1992: Koplln R. et.al.,1990).

Избыток в клетках ПЖ лактата создает предпосылки для использования его для синтеза липидов или для окисления в ЦТК. Однако, как было показано В.И. Лущак (1990), Yamamoto S., Storey U. В.,(1989), в условиях прогрессирующей гипоксии дефицит карбонатов вызывает ингибирование ацетил-КОА-карбоксилазной реакции и, как следствие, всего -процесса липогенеза.

Наблюдаемая в наших опытах активация ПФП окисления глюкозы (табл.2) для покрытия дефицита энергии и активации липогенеза не приносит должного эффекта - развивается некроз клеточных структур.

На третьи сутки в ПЖ начинается врастание вновь образующихся сосудов в очаги некроза, уменьшается тромбообразование. восстанавливается микроциркуляция. В этих условиях увеличиватся приток глюкозы и молекулярного кислорода. В регенерирующих клетках ПЖ увеличивается 'энергитический обмен преимущественно за счет гликолиза, значително возрастает степень восстановленности НАД+. Избыточное количество НАДНг в цитоплазме реализуется- двумя путями: прямым путем окисления в дыхательной цепи. Причем, перенос НАДНг в этом случае через внутреннюю мтохондриальную мембрану осуществляет высокоактивная МДГ (табл.2). По второму пути НАДН2 использует высокоактивная ЛДГ в реакции восстановления пирувата в лактат с последующим вовлечением его в реакции неогликогенеза и трансдегидрогенизации, в ходе которой образуется НАДФНг. Последний используется для нужд липогенеза.

Усиленное восстановления пирувата в лактат, уменьшение степени восстановленности НАД+ в цитозоле клеток свидетельствует о том. что. начиная с 6-х суток, пируьат в регенирующих клетках в большей степени используется для синтеза липидов, чем для нужд энергообеспечения.

Влияние простагландина ГУ и J2 на кислородозависимыё механизмы повреждения и зашиты поджелудочной железы собак с острым панкреа-ШШ,

Важним звеном в механизмах регуляции клеточного метаболизма являются простагландины. Одни простагландины (ПГЕ, ПГЕг, nfJ2).

связьшаясь с клеточными рецепторами, повышают уровень цАМФ. это приводит к ингибированию функций, , имеющих отноление к воспалению (Марков Х.М. ,1990; Gr'esele Р. et.al. .1992). Другие простагландины активируют гуанилатциклазу, уменьшают внутриклеточное соотношение АТФ/ГТФ (Вальтер У..1989). При блокировании аэробного образования энергии в клетке происходит увеличение расхода АГФ на 86.9% (Слепнева Л.В. Ремизова М.М. Кочетыгов Н.И..1989). Резкое увеличение гуанилатциклазной активности, уменьшение концентрации цАМФ приводит к лабилизации мембран лизосом и активации воспалительных реакций (Петрович Ю. А. с соавт..1987; Tonatl Е., Danchlnl А. ,1990).

При изучении влияния простагландинов различных серий на морфогенез ОП выявлено, что введение nrFzoc через 60 минут после введения ПЦТС не обрывает развитие цитотоксического панкреатита. По существу характер морфологических изменений не отличается от таковых у животных, не получающих лростагландин. а через 8 часов патологический процесс в ПЖ носит характер тромб-васкулита. Наряду с ПЦТС и активированными ПЯЛ в его развитии определенную роль играет nTF2a, так как, с одной стороны, обладает тромбогенным действием, а с другой - увеличивает продукцию С3 Фракции комплемента (Прибытков D.H.-, Полтырев А. С.. Шилкика Н. П. ,1992). Стимулированные хемотаксическими факторами нейтрофилы (табл.4) запускают цепь каскадных реакций повреждения сосудов ПЖ.

В конце первых суток у собак на фона экзогенно вводимого nTF2a в ПЖ очагов некроза меньше, чем у животных, не получавших flTF2a. На наш взгляд, это обусловлено меньшей инфильрацией очага воспаления ПЯЛ (цитотоксические эффекты нейтрофилов). Другим существенным моментом цитопротективного эффекта ЛГГ2а на клетки ПЖ может быть "антигистаминовый эффект", проявляющийся констрикцией артериол и венул. уменьшением числа функционирующих капилляров и снижением их проницаемости для макромолекул к воды (Реутов М.И., Шинкаренко В.е..1989). Завершение острого деструктивного процесса (3-й сутки)начинается с изменения клеточного состава инфильтрата в ПЖ: намечается преобладание мононуклеаров и мало эозинофилов. Слабовыраженное повреждение ПЖ на 6-е сутки аутоантителами на фоне вводимого nTF2a, по-видимому, связано с незначительной выработкой иммуноглобулинов из-за низкой активности р-лимфоцитов (Па-павене Д.П. с соавт.,1992; Volimar В. et.al.,1989).

Наши наблюдения.показывают, что экзогенно вводимый простаг-

1а6лица 4 ~

Содепкнис лгйхоцигов ж подкладочной , мпезе собак с острим, ¡шкмати-- юн, печеиких про«агландииаииСК+и),< 8=8.0064 ихм-*)

Иослдосимй показатель 1 час 8 часов 24 часа 3 СУТОК 6 CÜ10X 10 СУТОК 20 сатох

Контгольнне ■интиме

- нейт?о*илм 8.21 +8.21 20.(1 +8.96 40.51 +0.621 21.42 +1.832 7.21 _+0,727 36.24 +0.864 2.ее +0.в31

Р< В. 01 0.BQ1 0.01 0.65 0.65

- эоаиноадлм 4.23 +0.525 6.97 +0.863 2.17 ♦В.327 3.16 +0.31

Р< Q.B5 0.01

X ÇT ХОЛИЧССТ&* неитготяов 5.32 17.20 1В.13 43.82

(Мнение п»ост»-гландинои Fj«^

- нейнгошлм ' 12.(1 ' 18.21 ¿0.813 +8,923 13.27 +0.641 10.18 +0.328 2.11 +В.В47 с

Р< 0.001 0.05 0.01 0.01

- эозино«илы 1.38 +0,421 2.16 +0.222

к 0.65

X от количества неитгоеилов г/. 20/.

Лечени» пгоста-глшдинон J2

- ИСИТРОМЛЫ • 5.47 +0.211 17.31 +0.648 22.16 +0.021 17.67 +0.324 S.20 +0,647 а

Р< 0.881 0.01 0.81 0.81

- ЭОЗИНОМ*ГШ 2.27 +0.321 448 +0.221

р< 0.05

ландин F2a оказывает влияние на все фазы репаративной регенерации соединительной ткани: ослабляет первую фазу за счет уменьшения экссудации и эмиграции клеток из сосудистого русла, уменьшает фибриллогенез коллагена и пролиферацию фибробластов и рост сосудов (2 фаза), замедляет фиброзное превращение грануляционной ткани (3 фаза), редукцию васкуляризации. Наиболее заметен цитопро тективный эффект ГЦТ2 на 3, 6 сутки.

Наличие васкулита в конце наблюдений, очевидно, связано с развившимся в клетках ПЖ дисбалансом в соотношениях циклических нуклеотидов, который поддерживает готовность клеток - мишеней, в том числе и тромбоцитов, к высвобождению медиаторов воспаления (Кузнецова Ю.А., 1992: Rustln M.N.et.al.,1988).

Введение nrJ2 собакам через час после введения ПЦТС значи тельно смягчает морфологические изменения в ПЖ. обусловленные ПЦТС и ПЯЛ. Несмотря на равитие сосудистых изменений (гемморагик, тромбоз), инфильтрация ПЯЛ ПЖ выражена незначительно. Начиная с восьмого часа на фоне незначительного повреждения сосудов ПЦТС и ПЯЛ в ПЖ происходит изменение клеточного состава инфильтрата: появляются мононуклеары. мало нейтрофилов и нет эозинофилов. Оче видно, в этом случае П1\12. связывась с рецепторами клеток, образует комплекс с ГТФ-зой и каталитической субьединицей аденилат циклазы и активирует последнюю, в клетках увеличивается концентрация цАМФ и САг+, ликвидируется дисбаланс в соотношении ЦАМФ/цш» (Федорова Н. А., 1990). Увеличение внутриклеточного цАМФ в значительной степени предотвращает высвобождения ферментов нейтрофилами и ингибирует их цитотоксические реакции (Оглобина О.Г., 1988). Восстановление физиолигического равновесия путем фармокологической коррекции простациклин -тромбоксанового дисба ланса уменьшает повреждение эндотелиальных клеток и тромбгобразо-вание (Савицкий С.Н., Гордеев А.В..1992; Ernst Е., 1989). В конце 1-х суток отмечается замещение очагов некроза грануляционной тканью с признаками ее зрелости к третьим суткам.

Повреждение же ПЖ на 6-е сутки выражено незначительно за счет большой концентрации ПП2 в крови, который выполняет роль эндогенного противовоспалительного фактора (Аляви А.Л.,1989; Акимов Е. В. 1992).

К 20-м суткам воспалительной процесс в ПЖ на фоне экзогенно вводимого ПГЛ2 разрешается полностью без морфологических признаков склероза в органе.

Результаты исследований по изучению влиянил простагландинов

на лизосомально - вакуолярный аппарат показали, что ШТга и nrJ2 оказывают существенное влияние на лизосомы ПЖ при ОП. Так, увеличение прироста удельной я свободной активности ДНК-азы и РНК-азы после введения начинается резко с 1 - го часа развития ОП и

сохраняётЬя на значительно высоком уровне по 20-е сутки.

Наблюдаемый после введения ШТ2а чрезмерный по силе ответ лизосомально - вакуолярного аппарата, избирательность в изменении активности'ферментов лизосом ПЖ с 1-го часа и по 6-е сутки развития ОП"'свидетельствуют о том. что наряду с повышенным синтезом лизосом de novo увеличивается лабилизация лизосомальных мембран и создаются предпосылки к истечению их содержимого в цитоплазму с последующим развитием в эти сроки цитолитического процесса. Однако, лабилизация лизосом после введения ШТга выражена в меньшей степени и менее продолжительно, чем у собак, не получающих nrF2a.

После введения rTJ2 цитолитический процесс в ранние сроки развития ОП выражен меньше, чем после введения nrF2a. Сохраняющийся в последующие сроки повышенным прирост удельной и свободной активности, увеличение осмотической устойчивости лизосом и снижение неседементируемой активности гидролаз указывает на повышенную активацию лизосомально - вакуолярного аппарата без признаков его повреждения. Усиленное образование частиц de novo, образование аутофагических вакуолей, стимулируется сниженным поступлением в клетку питательных веществ и гипоксией (Ginsman W..Erlsson J. L. .1989).

Однако, цитопротективный эффект Г1ГГ2 а не объясняется активацией аденилатциклазы■(Гончарова В.Н. с соавт.. 1989). В условиях целостного организма nrFza усиливает вазопрессорный эффект норад-реналина (Марков Х.М., Козлов А.В., Пинелис В.Г..1987). Катехола-мины уменьшают внутриклеточное соотношение цАМФ/цГМФ. Увеличение в клетках ЦГМФ и САг* под влиянием ШТ2(Г стабилизирует полимеризацию микротрубочек и подавляет освобождение лизосомальных гидролаз во внеклеточную среду путем экзоцитоза (Vollmar В. et.al.,1989).

При комплексном изучении влияния ШТга на активность МДГ, ЛДГ, Г-6-ФДГ, степень восстановленности пиридиновых нуклеотидов. а также на изменение концентрации пировиноградной и молочной кислот (табл. 5) отмечено, что в первые часы развития ОП наблюдается перестройка энергетического обмена. Активация дыхания увеличивает потребность клеток в восстановительных эквивалентах.однако, из -за формирующегося анаэробиоза и дефицита глюкозы в клетках ПЖ гликолиз переключается на глюконеогенез. В эти сроки

Таблица 5

вменение тивяони КДГ, ЩГ, Г-6-ЭДГ, концентрации са£ст?атов энергетического обмена и степени эдетанвмкнности НАД и Щ? в подкладочной илезе собак с острш панкреатитом,

печгкккх тстаглаидииаки (М+и)

йсспшеими Сроки иабгаадеиия

показатель пояноопеиг 1 час 8 часов 24 часа 3 шок 6 сник 18 суток 28 содх

рованнне

Просшлаидин Щ

Пировйиогра|иая кислота, 8.426 +0.812 8.865 ♦0.015, 8.836 +8.819 8.584 +9.818 8.759 +8.812 8.552 +0.015 8.835 +8.814 8.523 +8.813

йэпочиая кислота, р { 8.95 8.155 +0.811 8.655 +8.889 8.789 +0.818 8.735 +8.889 л 8.521 +8.011 8.832 +8.889 8.735 +8.815 8.811 +8.811

1Ьттдеги|р|геназа, 8.221 +8.814 8.582 +8.817 8.752 _+0.014 8.856 +8,082 8.334 +8.018 т 0.497 +9.814 8.414 +0.814 8.587 +8.812

Кттдегндгогейа:». ё < 8.05 е.ш +8.816 0.126 +0.812 8.892 +8.Ш 8.823 +8.884 8.844 +8.889 8.202 +0.818 8.348 +8.015 8.^43 8.812

СНАДН2/ИАД>"? ( 0.05 23.73 ЦД5 Ш 2.83 3.89 17.87 38.79 65.74

снйдтлши Иб.в5 86.40 452.42 349,60 338.46 234.77 471.632 745.27 782.35

Г-6-?«Г, г ( 8.85 7.532 +8.382 51.327 ♦В.947 38.636 +8.986 38.396 +8.782 26.631 +8.858 53.499 +1.241 86.887 +8.881 18.743 +8.891

(1еодо№нне хйщи 5

Исслгдзеиж - показатель Сроки наб/адения

шноопери-роваш 1 час 8 часов 24 часа 3 суток 6 суток 10 суток 20 суш

Прммшндин J 2 Пировиноградная кислота, р {0.Ю 8,426 +8,812 8.544 ♦0,812 8.613 ♦8,014 8,862 ♦8,088 m 0.764 ♦8,826 8.511 ♦8,011 8.496 ♦8,815 8.472 ♦8,016

Молочная кислота, р < 8.65 0,155 ♦0,814 0.271 ♦0.814 8.428 ♦0,014 0,422 ♦8,822 0,142 ♦0,813 8,831 ♦8.829 0.673 ♦8.822 8,667 ♦8,821

Наиатдегидрогеназа, р{ 0,85 0,221 ♦8,014 1.386 ♦8,895 0,928 ♦8,821 8,647 ♦8,822 0,721 ♦0,821 8.723 ♦0,020 J 0,413 ♦8.816 8,39? ♦0,065

Каяатдеги^рогеназа, 8.33o +Ш 8.261 ♦8,819 8,881 ♦8,813 1.152 ♦8,042 0,785 ♦01024 0.581 ♦0,824 8,627 ♦8,824 0.635 ♦8.865

(НА0Н2/НАД)Х. р < 0,85 { 0,85 29,73 86,48 7.532 ♦8,389 23.89 74.73 8.477 ♦8.389 77.95 662,26 75.123 ♦1.109 141.93 178.97 28,302 ♦0.557 69.46 242.91 27.555 ♦0.949 51.41 224.75 25.494 ♦0.404 55.48 145.25 16,477 ♦8,485 • 56.19 134,18 15,289 ♦8.545 »

резко возрастает активность ЛДГ и реокисление НАДНг не за счет 02, а за счет пирувата, восстанавливающегося при этом в лактат. Почти полное прекращение Функционирования малатного челнока из-за низкой активности МДГ (0.023±0.04 против 0.336+0.016 мкмоль НАДК2/мин/чг белка у ложнооперированных животных, р > 1001). обеспечивающего эффективный транспорт малата через митохондриаль-ные мембраны на начальном этапе глюконеогенеза делают этот путь покрытия дефицита энергии в клетках ПЖ неэффективным. Обнаруженное на фоне введения ПГ¥га уменьшение активности ЛДГ и МДГ и снижение активности ферментов ниже критической величины к 24-му часу развития ОП свидетельствует о том. что к этому времени в клетках ГОК угнетен как гликолиз, так и неоглкжогенез.

На 3-й сутки в регенерирующих клетках ПЖ 1ПТга повышает активность ЛДГ, как следствие увеличивается степень восстановленное™ НАД+, повышается скорость оборачиваемости малатного челнока (табл. 5). По мнению Г.И. Морозова, H.A. Онищенко (1991), комбинация несопряженного окисления НАДН2 и сопряженного с синтезом оксалоацетата - пирувата обеспечивает в регенерирующих клетках связь гликолитических процессов с дыханием митохондрий ( Самарцев В.Н., 1990). В результате удаления из цитоплазмы лактата и НАДН2 ликвидируется кислородная задолженность ПЖ (КимН.П., Ахмеров Р.Н., Махмудов Э.е., 1990) Наблюдаемая после введения ПГГ20 высокая активность ЛДГ и обратимость ЛДГ-реакции на 10-е, 20-е сутки увеличивает в цитоплазме клеток ПЖ не только наработку ПВК, но и степень восстановленное^ НАД+.

Частичное переключение гликолиза на пентозный путь окисления глюкозы (табл.5) проявляется увеличением активности Г-6-ФДГ (7.532±0.389 у ложнооперированных собак и 51.327+0.947 мкмоль НАДНг/мин/мг белка. 'р>0.001 в 1-й час развития ОП). Значительный прирост активности Г-6-ФДГ и концентрации НАДФНг наблюдается во все критические сроки развития ОП: l-24-й час, б-е-20е сутки. Образующийся в цитозоле НАДФН2 используется в цитозоле клеток ПЖ для реакций восстановительного биосинтеза и предотвращают ненасыщенные жирные кислоты от аномальных взаимодействий с АКМ.

Введение собакам с ОП nrj2 вызывает перестройку энергетического обмена с преобладанием в первые зосемь часов окислительных процессов (табл.5). Характер прироста лактата и активность ЛДГ свидетельствует о том, что гликолиз в клетках ЧЖ в эти часы осуществляется как с участием молекулярного кислорода, так и без него. Прирост ПВК идет не только за счет гликолиза, но и за счет

восстановления лактата в ЛДГ-ной реакции, в ходе которой восстанавливается НАД+., К 24-му часу из-за развившегося анаэробиоза ПВК в меньшей степени используется для синтеза ацетчл-КоА, а, восстанавливаясь высокоактивной ЛДГ до лактата, в большей степени используется в реакциях неогликогенеза. Этот процесс максимально выражен к- '¿4-му часу.

'Улучшение кровотока в ПЖ под влиянием ППг на 3-й сутки уве-личивает;каработку..ПВК ;<табл.5) за счет окисления глюкозы и лактата с восстановлением НАД+ . В последующие сроки энергообеспече- . ние клеток ПЖ осуществляется преимущественно за счет реакций глю-конеогенеза и- отражает цАМФ - зависимую стимуляцию указанных процессов nrj2 (Горбач 3.В. с соавт..1989). Развившееся"к концу первых суток развития ОН г-снижение скорости утилизации углеводов в ЦТК после введения T1Í'J2 сопровождается увеличением их утилизации через пентозо-фосфатный путь. Очевидно, в этих условиях частичное ингибирование ЦТК происходит через трансдепвдигеназную 'реакцию превращения НАДФН2 л? НАДН2 (Дынник В.В..1987). Система'характеризуется векторностъю, тесной интеграцией с пентозофосф'атным циклом и может быть-использована для преодоления энергетического дефицита. Как было-показано Д. Д.. Николе (1985)B.fr.;i ' Скулачевым (1989), М. Накачаки (1991). энергия, вырабатываемая дыхательной1и редокс-цепью. 'становиться при посредничестве' транедегидрогеназы движущей силой восстановительного биосинтеза.,. Ёещт исследования по изучению причастности ПФП окисления глюкозы в покрытии 'энергодефицита в клетках ПЖ при ОП согласуются выводами авторов.

Обмеклиническая характеристика больных с острым панкреатитом

Воспаление поджелудочной железы может протекать более или менее остро. Острота процесса определяется степенью морфологического поражения ПК (Тарасенко C.B., 1990]. Его эффекторами чаще всего являются ПЯЛ. .хотя описаны такие варианты ОП.'когда в очагах повреждения преобладают зозинофилы (Жукова E.H., 1990; Мог-land С . Roche W.R., 1990) и даже базофилы и тучные клетки.

Анализируя данные хирургических отделений за 1989-1991 гг.. мы обнарукили, что среди 8262 больных с хирургическими заболеваниями органов брюшной полости острый панкреатит был у 570 больных (6.9%)У Отек ПЖ был у 502 (81%). а деструктивная форма у 68 (19%) больных. Сопоставляя наши показатели, заболеваемости ОП с показателями 15-ти летней давности (ЛащеЕкер В. М.. 1979), мы обнаружили.

что произошло "омоложение" ОЛ и увеличение j 1.7 раза больных деструктивным панкреатитом в возрасте 40-50 лет. ■

Увеличение же заболеваемости ОП мужчин, на наш взгляд.'йызва-но ростом злоупотребления алкоголем-

Нами также обнаружено, что деструктивные формы панкреатита развиваются в основном на высоте первого приступа (84.2%) и только у 2.IX больных наблюдался последовательный переход отечной фазы в деструктивную. При тщательном анализе историй заболевания оказалось, что из - за внезапно возникшей и нарастающей во времени боли обратились за медицинской помощью 100%. Почти у половины больных основным методом верификации панкреонекроза явилось оперативное вмешательство. По мнению B.C. Савельева, В.А. Кубышкина (1993). присоединение ярких признаков интоксикации, полиорганных расстройств и перитонита при прогрессированки заболевания однозначно свидетельствует о панкреонекрозе, но локальная симптоматика при этом становится неотчетливой, а топическая диагностика объективно затруднена. Клинико - морфологические сопоставления у 93 больных верифицированного панкреатита показали, что многократную рвоту следует воспринимать как прогностический признак. В случаях с неблагоприятным исходом она начиналась с первых- часов болевого приступа. Наличие крови в рвотных массах у больных с .геморрагическим панкреатитом было связано с развитием острых эрозий слизистой желудка.

Наблюдаемая у больных желтушность кожных покровов б игл обусловлена закупоркой общего желчного протока камнями, сдавленней панкреатической части общего желчного протока увеличенной головкой ГШ (Лобода Д. И., 1991). В случаях деструктивного панкреатита причиной желтухи может быть токсическое поражение печеночных клеток (Моргунов Г.А.,1992). Признаки перитонита были обнаружены у 33% больных с геморрагическим панкреатитом.'Несоответствие между интенсивностью болевых ощущений и клиническими признаками перитонита наблюдалось у больных с формирующимся панкреонекрозом.

В течение первых суток не удавалось установить зависимости между активностью амилазы и степенью'выраженности морфологических изменений в ПЖ. У нескольких больных с прогрессирующим ухудшением общего состояния отмечалось снижение активности амилазы в крови и моче. При вскрытии брюшной полости отмечен разлитой панкреатоген-ный перитонит с явлениями панкреолйза. Уменьшение активности амилазы в крови и моче обусловлено истощением синтзза протеолитичес-ких ферментов поджелудочной железой из - за некроза паренхимы

(Деденко И.К. .1992). Нами также отмечена более высокая активность амилазы у лиц в возрасте 40-50 лет. чем 60-69 лет (512 против 256 единиц. р<0.05).

При изучении гематологических сдвигов обнаружено, что у 26,1% больных количество эритроцитов оказалось ниже нормы, у 71,А% в пределах нормы, у 1,9%-выше нормы. У больных с анемией, анизоцитозом отмечались признаки интоксикации, гиперкоагулящш, тромбоцитопении (ДВС-синдром). дыхательной недостаточности, развитие пневмоний.

Причиной анемии у этих больных было не только их механическое повреждение, но и окислительный гемолиз, связанный со снижением собственно эритроцнтарных антиоксидатных свойств (Шугаев А.И., 1987; Калмыкова Ю.А. с соавт.,1992).

Тромбоцитопения у этих больных не была связана с какими -либо тромбопоэтическими дефектами, вызванными токсемией, а обусловлена повышенным разрушением и потреблением тромбоцитов и их внутрисосудистой агрегацией (Баркаган З.С., Тамарин И.В.. 1988; Савицкий С.Н., Гордеев A.B., 1992; Головина О.Г. с соавт., 1996),

Наиболее чувствительным показателем у анализируемых больных была лейкоцитарная реакция: так, количество лейкоцитов было повышенным у всех больных, поступивших в первые часы развития ОП (11.65±0.78-109/л,р< 0.01). По мере прогрессирования заболевания у 44Ж больных отмечалось увеличение количества лейкоцитов до 18.72±1.04-109/л, (р<0.05). Нам не удалось выявить достоверной зависимости между формой панкреатита, активностью амилазы и количеством лейкоцитов. У больных с панкреонекрозом, ДВС-синдромом, дыхательной недостаточностью наряду с анемией отмечена лейкопения. Если удавалось отчетливо установить начало заболевания, тр значительное ускорение СОЭ отмечалось к исходу вторых суток. На наш взгляд, это обусловлено появлением грубодисперсных белков в сыворотке крови, отражающих острую фазу воспаления. На основании •проведенных исследований крови можно утверждать, что при ОП наступают значительные гематологические изменения, но они не являются патогномоничными для ОП, не объясняют причину и механизм развития заболевания.

Патогенетическое значение перекисного окисления липидов и Ферментов антцререкисной зашиты у больных острым панкреатитом.

Основным компонентом эндогенной интоксикации на стадии фер-

ментной токсемии многие авторы считали трипсин . токсический эффект которого был показан в ранних работах А. Г. Крючкова (1976), B.C. Маята с соавт. (1978). Однако, в связи с тем» что активный трипсин в крови у больных ОП и в ткани ПК экспериментальных животных обнаруживается только в первые трое суток развития заболевания. патогенетическую роль протеаз при ОП стали считать сомнительной (Шугаев А. И. ,1989).

Полученные нами в эксперименте данные о патогенетической роли активации каскада кислородозависимых реакций в динамике развития острого геморрагического панкреатита и лабилизирующего действия продуктов ПОЛ на лизосомально-вакуолярный аппарат ПЖ послужили основанием для изучения влияния указанных механизмов на, развитие ОП у 93 больных с различными формами заболевания.

Анализируемые больные были разделены на две группы. В первую группу вошли (39 человек) больные с низкой активностью исследованных лизосомальных ферментов (0-галактозидаза, кислая фосфата-^ за) (им соответствовала высокая активность каталазы и высокая резистентность эритроцитов к ПОЛ), во вторую (54 человека) ~v с вы-, сокой активностью кислой фосфатазы и f - галактозидазы;(им^¿ответствовала низкая активность КА и низкая резистентность^ эритроцитов к ПОЛ. В качестве контроля использована кровь 21 донора,, не страдающих заболеваниями желудочно - кишечного тракта и аллергией.

В первой группе больных при поступлении в стационар отмечалось увеличение активности кислой фосфатазы (0.401Ю.022 и 0.270+0.021 ммоль/мин/мг Pi у доноров, р>0.001) и ? - галактозидазы (1.070+0.046 и 0.180+0.029 ммоль/мин/мг белка у доноров. р<0.01). При выписке из стационара активность ферментов ниже, чем у доноров. У больных второй группы активность лизосомальных ферментов при поступлении в стационар была значительно выше, чем у больных первой группы и она оставалась повышенной при выписке из стационара.

Динамика активности лизосомальных ферментов достаточно точно отражала характер клинического течения ОП. При корреляционном анализе выявлена прямая высокостепенная (r= +0.807) достоверная связь (р<0.05> между величиной гиперферментемии, вариантами клинического течения ОП, степенью выраженности резорбционно - некротического синдрома. Следовательно, параллельное определение активности кислой фосфатазы и р-галактозидазы повышает точность морфологического диагноза.

' Исследуя отмытые эритроциты больных ОП, мы обнаружили (табл.6), что в них нет статистически достоверного увеличения МДА. Мы.предположили, что это могло быть связано с невыраженной активацией процессов ПОЛ и/или с утилизацией первичных продуктов ПОЛ на стадии образования промежуточных продуктов, что и было подтверждено обратной корреляционной зависимостью между МДА и ДК, (Г= -0.817, р<0.01).

'Изменение активности ферментов, сопряженных с окислением восстановленного глутатиона;. в фазу энзимной токсемии проявлялось увеличением.активности ГП.' ГР и снижением - Г-6-ФДГ. Максимальное увеличение активности среди исследованных ферментов отмечено для каталазы (4.6 раза). Ее активность прямо кореллировала с МДА (г=+0.942, р<0.01), ДК (г= +0.876, р<0.01), ГП (г=+0.976, р<0.001). ГР (г= +0.891, р<0.01) И обратно - с Г-6-ФДГ (г= -0.831. р<0. 05).

При исследовании образцов мембран эритроцитов обнаружено два максимума в распределении активности каталазы со средними значениями 74.121+4.276 и 17.715±0.972 ммоля Н202 на мг белка. Это послужило основанием для распределения больных по двум группам: с высокой (группа I) и низкой (группа II) активностью фермента. В мембранах эритроцитов больных I и II групп выявлено значительное различие как в накоплении ДК, так и МДА. Анализируя полученные результаты по активации'процессов ПОЛ и антиперекисной защиты в эритроцитах больных обеих групп, мы предположили, что это различие обусловлено неодинаковым расположением ферментов в мембранах эритроцитов, или различной готовностью мембран эритроцитов к переокислению. Изучение природы связи этих Ферментов с мембранами показало, что после обработки мембран эритроцитов доноров, больных I и II групп 0,6 М КСЬ в них остается 10-19% активности КА (р<0.01), 100% - ГП (р=5.0), 70-82% - ГР (р<0.0^) и 70-77% активности Г-6-ФДГ,(р<0.01). Почти полная солюбилизация ферментов наблюдается после разрушения мембран тритоном х-100 (р<0.01). В связи с этим мы с полным основанием можем отнести Г-6-ФДГ, КА, в отличие от ГП и ГР, к периферическим белкам эритроцитарных мембран, сорбирующихся и удерживаемых на поверхности мембран с помощью ионных взаимодействий. При проверке готовности мембран к активации свободнорадикальных процессов обнаружено, что инкубация эритроцитарных мембран с.трипсином приводила к статистически незначимому накоплению ДК и МДА. Контакт же мембран эритроцитов с сыво-

Таблица i

MoWHtHUt ШХЮМОТИ ШТИОКИбЛИТСЛЫМЖ МГМИТва ЭГИ1МЧИ1Н ЙАМК MtHM IMIMUHIM OH«)

m »«/п. Ш 1 КГ •бшх »гида» Р )*«Ш> 41 1 ИГ (((MX жпидп ГЛ «ноль НЙД#2/мк /1 ИГ бели ГП »моль/ Ийдмг /ш» /t иг 6«1ка им/^шдмг/ ww/1 иг млх* Гвтиим, м 199 иг пши

1 кг 6« гаи •6t*M •киегеи-ШЙ ксстш» -мимм

Доноры 6.22*9.87 85.72*1.721 16.57*1.88 79.52*1.547 84.145*2.217 6,945*9.977 43.385*2.257 5.995*9.919 38.59*2.462

Летя rwniu

иго посшлг- 6.33*9.99

Hl«

221.42046.711 75.78+2.93 152.495+2.346 122.895^8.218 2.795*0.101 72.«5*2.734 43.968*1.195 17.385*8.863

p Д8.В1 1-2

P >8.001

1-2

,>8.881

p¡_2>e,eai

p >8.881 1-2

P >8.981

1-2

t >a.wi

1-2

P >9.881

1-2

со сл

Г1ГИ МШСХ«

6.27*8.86

р2.3<в.<я

98.422*1.625 27.265*2.778 {7.755*2.389 68.155*7.33? 14.375*1.327 52.455*4.351 32.758*1.445 11.569*9.455

p>3<8.81

p-H<e.ei

2-3

; (8.081

2-3

p <8.861 2-3

P <8.001 2-3

t <8. Mil

2-3

I <8. Ml

2-3

îtom* rmm

irnt мсмпм- 7.71*8.88 и w

? . <8.81 1-4

104.í{*2.7«2 18.465*1.458 449.735*?,345 255,723*9.54? 36.416*2.437 42.598*2.214 32.435*2.442 12.655*8.411

P <8.81

H

P )8.M1

1-4

г

и

P >8.881 1-4

p >8.05

W

p >0.eei - >9.901

H H

«и* тгакг* 4.79*8.87 86.644*2.124 6.58*8.468 286.868*9.925 181.345*9.179 14.428*2.312 31.415*4,362 24.548*1.447 1.415*9.272

p. <8.85

<».85

4-5

t >9.eai

«i

p >9.8*1 4-5

» >s.eai

4-5

f >8.981 «

ï >9.81

4-5

V >9.991 » >9.991

4-Я 4-5

роткой крови больных ОП сопровождался увеличением концентрации ДК в мембранах больных I группы на 50% (р>0.001). МДА- на 11% (р=0.5), II группы - ДК - на 22% (рСО.Об). МДА - на 70% (р>0.001).

Таким образом, инкубация эритроцитарных мембран с трипсином не вызывает активации процессов ПОЛ и. по - видимому, трипсин не является причиной эндогенной интоксикации при ОП.

Описанные результаты опытов подтверждают известное положение И. Фридович (1979), что показателем резистентности эритроцитов к ПОЛ является высокая активность каталазы и низкая - ГП. В мембранах с высокой активностью каталазы антиокислительные свойства обеспечиваются в большей степени за счет системы окислительно -восстановительного перехода глутатиона, а в мембранах с низкой активностью КА - наоборот (Кочубей Г.А. с соавт.. 1989; Петухов В.И. с соавт.. 1992).

С помощью корреляционного анализа установлено, что при инициации процессов ПОЛ для мембран больных II группы имеет место высокая корреляционная зависимость между изменением всех показателей, для больных I группы отмечено снижение корреляционной связи между МДА -и антиокислительными ферментами. Степень активации процессов ПОЛ зависит от первоначальной активности связанных с мембраной ферментов, их способности переходить из связанного состояния в свободное с последующим переводом активных соединений в неактивные (Конев C.B..1987; Новгородоз С.А..1991).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании изложенного материала подтверждается гипотеза об участии всех пяти факторов (полиморфноядерные лейкоциты, активные метаболиты кислорода, энергетический обмен, перекисное окисление липидов, лизосомально - вакуолярный аппарат) в едином механизме развития острого панкреатита. Роль каждого фактора в отдельности и вместе как единого механизма, участвующего в развитии острого панкреатита нами представлена следующим'-образом (рис. 1).

Начало включения указанных механизмов у больных острым панкреатитом, по - видимому, обусловлено образованием антител к ткани поджелудочной железы, отложением их в сосудистом русле органа. Пусковым моментом в этом случае является повреждение сосудистого эндотелия цитотоксинами. Стимулированные цитотоксинами, продуктами активации системы комплемента нейтрофилы вызывают гибель эндо-телиоцитов. Стимуляция нейтрофилов сопровождается, с одной ст°ро-

ПЛАЗМА

Тромбоциты«ТхАл4»* (^Я^СЗ^с^г, ямстнмклин ^^ '^¿еУ

__________

^ ТК/|11Ь

I

ИШЕМИЯ ,

фагоцитирующие лейкоциты

«1 •

"СОД '"«О,

гепогалоадьа

»,О, \

Гк I. Пояииорфкоавермые леЯкемиты, мстнакие медиаторы ««спикмн! , ЦИК ■ мним механизме развития ОН (ги1нггетмч*ска* емма)

клетки 1ГЖ трапемм

.-—-■

ИХ

деямергвмрошнние

Г ПОЛ

ЛООН

/

лмзкиии -----7

КА ГП—' II,О,

Г-*-ФДГ-- НАД» Н

гаме. —

ны, усиленным образованием пероксид - анионов, в присутствии которых резко снижается вазодилатация в ответ на ацетилхолин. эндо-телиальный фактор релаксации, простациклин - уменьшается регионарный кровоток. ' с другой стороны, стимуляция лолиморфноядерных лейкоцитов определяет направленность хемотаксиса нейтрофилов и клеточную нейтрофильную инфильтрацию ткани поджелудочной железы, которая в наших опытах нарастает по мере прогрессирования воспалительного процесса в органе. Очевидно, освобождающийся из тучных клеток гистамин стимулирует миграцию эозикофилов в зону воспаления и вызывает активацию внутрисосудистого тромбообразования. Наблюдаемая у больных в остром периоде тромбоцитопения вызвана не тромбопоэтическими дефектами, обусловленными токсемией.-а связана с потреблением тромбоцитов и их внутрисосудистой агрегацией.

Эозикофилы располагаются вокруг сосудов на границе между дистрофическиЛ53менеяными клетками и очагами некроза. Эсзинофилы, выходя в места скопления базофилов, ингибируют вещества, выделяемые базофилами, предупреждают пролонгированое действие медиаторов воспаления, инактивируют лейкотриены. Факторы активации тромбоцитов, нейтрофильньй хемотаксический фактор (Клебанов Г.И. с со-авт.,1990; Сгезз1ег В. ,Иа11ае1 В.,М1гоп С.,1992).

Миелопероксидаза нейтрофилов и пероксидаза эозинофилов катализируют ферментные реакции с перекисью водорода и ' гипогалоидами с образованием высокотоксичных НОСЬ и НОВг (в случаях с эозинофи-лами). Образовавшиеся гипогалоиды инактивируют. в клетках органа ингибитор сериновых протеиназ а-1-антитрипсин и инициир;тот ПОЛ. Неконтролируемый характер данного процесса приводит не только к повреждению фосфолипидного каркаса мембран, но и к нецелесообразному расходу 0г в тканях, что в условиях прогрессирующего снижения внутриоргакного кровотока крайне нежелательно (Грек 0. Р., 1989).

Быстро прогрессирующее нарушение внутриорганного кровотока за счет блокады микроциркуляции активированными лейкоцитами, тромбоцитами приводит к уменьшению доставки глюкозы и 02 к клеткам ПЖ. Гипоксия клеток ПЖ сопровождается стимуляцией гликолиза, причиной же стимуляции является снижение концентрации АТФ, вследствие ограничения окислительного фосфорилирования с параллельным нарастанием отношения восстановленных и окислен.их Форм пиридиновых нуклеотидов. В условиях сниженного энергообеспечения клеток ПЖ за счет углеводов дефицит энергии покрывается активацией глю-конеогенеза через вовлечение пирувата и лактата з синтез глюкозы

и повышением активности и обратимости митохондриальной МДГ. Однако, в условиях дефицита кислорода работа переносчиков в режиме несопряженного окисления не сопровождается синтезом АТФ, а выделяемая энергия рассеивается в виде тепла. Очевидно, несостоятельность глюконеогенеза для покрытия энергодефицита клетками ПЖ способствует переходу клеток на эндогенное питании, что подтверждается усиленным синтезом кислых гидролаз, образованием первичных лизосом, резким повышением функциональной активности лизосом и аутофагоцитоза, избирательной активацией гликолитических лизосо-мальных ферментов, участвующих в деградации полисахаридов, гли-копротеидов. Активация лизосомальной ß - глюкозидазы и ß - галак-тозидазы приводит к гидролизу гликогена и галактозаминов с образованием L-D-глюкозы (Панин Л.Е. Маянская H.H., 1987).

На фоне кислородного и субстратного голодания, дефицита энергии изменяется структура и функция лизосом ПЖ. Одной из причин лабилизации лизосом в данном случае является избыточное накопление лактата в клетках ПЖ и смещение Рн в кислую сторону. Под влиянием лизосомальных фосфолипаз At и А2 происходит гидролиз 'лецитина, лизолецитина. насыщенных и ненасыщенных жирных кислот. Последние окисляются о образованием гидроперекисей.

Переключение энергетического обмена с углеводного типа на липидный характеризуется не только количественными изменениями в соотношении окисления углеводных и липидных субстратов, но и качественными сдвигами. Это касается прежде всего перестройки дыхательной цепи в митохондриях, где важную роль начинает играть пе-рекисное окисление жирных кислот и других субстратов, сопряженных с фосфорилированием .

АктинациЯ энергетического обмена в первые часы развитии ОП сопровождается повышенным образованием первичных продуктов ПОЛ и сопряжена с низким содержанием МДА, как продукта ПОЛ, отражающего деградацию клеток по сравнению с таковым в конце первых суток. Накопление в предлетальных и летальных для клеток ПЖ состояниях продуктов ПОЛ. связано, по - видимому, с переходом на клеточном уровне обмена энергии на энергетическое обеспечение функций для выживания органа и выполнения необходимой нагрузки, но в ущерб пластическим целям - восстановлению структуры, что сопровождается задержкой в клетке ряда продуктов обмена. Дл '.тельное снижение внугриорганного кровотока в условиях неполноценности метаболических реакций приводит к тому, что в клетке относительно быстро возрастает доля энергии, расходуемой на пластические цели и эта -то способствует сохранению клетки как единого целого, но преляте-Tsyci ликвидации повреждаюцдах факторов.

В условиях циркуляторной гипоксии митохондриальные мембраны подвержены повреждающему действию со стороны двух систем - фосфо-липазной и системы липидной пероксидации. Стимуляция пол в условиях гипоксии скорее всего начинается с активации фосфолипаз. Фосфолипазная .дезинтеграция мембран сопровождается снятием одного из сдерживающих механизмов окисления липидов, пространественной разобщенности центров радикалообразования и субстратов окисления липидов. что способствует стимуляции пероксидации липидов даже в условиях гипоксии (Владимиров Ю.А. с соавт.,1991). В свою очередь в результате активации ПОЛ нарастает протонная проницаемость. Повышение протонной проницаемости в митохондриях приводит к разобщению окислительного фосфолирирования (Ким Н. П. с соавт..1990).

Вторичность реакций ПОЛ, отражающих функциональную активность клетки, установлена нами при изучении процесса ПОЛ в клетках ПЖ. В первые часы развития ОП содержание перекисей липидов (ГШ в ПЖ минимально, с некоторым превышением в субклеточных фракциях. Антиокислительная же активность клеток возрастает большими темпами. . чем содержание ПЛ. и только при значительном нарушении микроциркуляции на фоне прогрессирующего снижения антиокислительной активности дальнейший рост ПЛ .сопровождается появлением продуктов окислительной деградации липидов мембран.

С появлением в митохондриальных мембранах малонового диаль-дегида в лизосомах изменяется структурная целостность за счет химической модификации липидного и белкового компонентов. Появление в жирнокислотной цепи гидроперекисных группировок вызывает резкое уменьшение комплексообразования липида с белкамч (Бордин Е.А. Ар-чаков А.И..1987). нарушение структурной стабильности лизосомаль-ной мембраны, возрастание солюбилизации мембраносвязанных ферментов и перераспределение гидролитической активности в надосадочную фракцию. В клетках ПК начинается цепной цитолитический процесс.

Из-за повышенной сосудистой проницаемости не только из крови попадают вещества в очаг повреждения, но и наоборот. Так, в результате попадания в кровь из поджелудочной железы активных метаболитов кислорода, лизосомальных и протеолитических ферментов формируется интоксикационный синдром, Сыворотка крови становится высокотоксичной для клеточных структур. При контакте эритроцитов

с сывороткой крови в эритроцигарных мембранах активируются-процессы ПОЛ. Степень активации процессов ПОЛ зависит от первоначальной активности связанных с мембраной антиокислительных ферментов, их способности переходить из связанног j состояния в свободное с последующим переводом активных соединений в неактивные (Конев C.B.,1987). В мембранах с высокой активностью каталазы ак-гиокислительные свойства обеспечиваются в большей степени за счет каталазной реакции и в меньшей - за счет системы окислительно -восстановительного перехода глутатиона. В мембранах же с низкой активностью каталазы - наоборот. Это подтверждает известное положение И. Фридович (1979), что показателем резистентности эритроцитов к ПОЛ является высокая активность каталазы и низкая - глу-татионпероксидазы.

Завершение острого деструктивного процесса в ГШ совпадает с изменением клеточного состава инфильтрата. На смену нейтрофилам приходят макрофаги. Нейтрофил в это время, очевидно, вызывает реактивные изменения в тромбоцитах, тучных клетках, моноцитах, фиб-робластах (Клебанов Г.И.. 1990; Denton M.D. et.al..1991). Макрофаги усиливают пролиферацию эндогелиальных клеток и регенерацию капилляров, повышают пролиферацию фибробластов (Маянский К.А.. Маянский Д. А.. 1989: Wagner D.D., Bonfantl R.,1991). Начинается пролиферация фибробластов и замещение очагов некроза пролифериру-ющей соединительной тканью, обширные пласты которой вызывают грубую деформацию органа. Наблюдаемое на этом фоне обострение воспалительного процесса, по - видимому, вызвано аутоантителами. образующимися в ответ на вводимые цитотоксины. .......

Изложенное нами положение является теоретическим обоснованием тактики фармакологической защиты простагландинами■мембран клеток поджелудочной железы при остром панкреатите так как циклоок-сигеназные метаболиты влияют на равновесие в системе "нейтрофил -эндотелий", контролируя такую стратегически важную функцию, как прилипание лейкоцитов к стенке сосудов. Это связано с тем, что простациклин (ПГМ2)и, возможно, простагландин Тга являются частью антиагрегационного и антиадгезивного потенциала эндотелия, который реализуется при столкновении зндотелиоцитов с активированными нейтрофилами.

Простагландин Fга в указанной дозе тормозит хемотаксис, направленную миграцию нейтрофилов. Уменьшает прочность адгезии, зависимую от цАМФ. который секретируется эндотелиоштами при их стимуляции через ß - адренорецепторы nrF£cc. Простагландины F2a и

(в большей степени) активируют дегидрогеназы ПФП. Учитывая преимущественную локализацию последних в цитозоле, мокно предположить. что в условиях эксперимента в ткани поджелудочной железы дегидрогеназное звено пентозного цикла, вовлекаясь в сопряжение через трансдегидрогеназу с гликолизом, восполняет таким образом энергетические ресурсы клетки, На такую возможность генерации мембранного потенциала без участия дыхательных ансамблей и АТФ в ходе следующих реакций указывал В.П. Скулачзв:

Глюкозо - 6 фосфат+НАДФ— 6-фосфоглюкошт+НАЖ Н;

НАДФН+НАД+---НАДО" +НЛЛ Н;

НАД ■Н+пируват — НАД*+ пакшат Обратимость же лактатдегидрогеназной реакции и .высокая активность фермента позволяют паре субстратов лактат-пируват контролировать в клетках ПЖ соотношение -НАД+/НАД-Н высокоактивная НАД -Н МДГ регулирует соотношение между степенью восстановленности пиридиновых нуклеотидов и оксалоацетаток, который в . клетках - ПЖ служит исходным субстратом для глюконеогенеза.

Образующаяся под влиянием экзогенных простагландинов комбинация несопряженного окисления НАДН2 и сопряженного с синтезом оксалоацетата окисления пирувата обеспечивает слязь с гликолитичес-кими процессами и дыханием митохондрий. И тем самым способствует быстрому удалению избытка лактата и цитоплазматического НАД -Н в клетках ГШ и ликвидирует кислородную задолженность.

Сохранение высокой активности дегидрогеназ ПФП и их высокая устойчивость к ингибирующему эффекту НАДФ -Н и АГФ сохраняет способность клеток ПК участвовать в генерации НАДФ -Н для поддержания необходимой концентрации восстановленного глутатиона. В то же время окисленный глутатион активирует дегидрогеназы ПФП и понижает уровень НАДФН2/НАДФ* и тем самым вызывает "деингибирование" этих Ферментов. НАДФ -Н же не подключается к дыхательной цепи, а используется в реакциях окислительно - Еосстаковительного перехода глутатиона (Скулачев В.П..1989; Накачаки м.. 1991) и это позволяет клеткам ЕЖ ликвидировать высокие концентрации активных метаболитов кислорода.

Таким образом, в концепции фармакологической защиты мембран клеток ПЖ при их цитотоксическом и ишемическом повреждении торможение процессов ПОЛ несомненно играет положительную роль. Прежде всего, сохранение антиоксидантного резерва в клетке препятствует дезинтеграции мембранных структур. Следствием этого является сохранение функциональной активности митохондриального аппарата, что

Скмягиж СТИДОЛИПИДОГ« влихния

ПЦС1< ЦИК на нейггоаил»

• Умеиьыение продукции Н(ЙТ|>11*МШ«1 А1К, М*АИИО-\ ив воспаления

т

Ослабление ахтивности процессов ПОЛ и их пвягекдадого лейспия на ткань ПЯ

. ^ .

Сниксии* сгииалигакиего вямяния ахтивных лгоиэводеых Сьиа процессм ПОП^^

Г1Г

Сохранность *н»тРиоргаи*огс кгввягожа, достики й, , субстрата* питания

4Г

Повммние активности И», ГР, СОД, увеличение концентрации С5Н

i

У

Стабилизация лиаосомальних мгнбран уиемыкнне поступает* *ерменгов I т»

Унемьисни» поступления тк»н«юо< антигенов в юсвь и образования

ЦИК

Ог»аиичечие пов»евд»кия ткали ПК-

Рис 2. Последовательность выкпмчення звеньев механизма повгекдени'я ПЖ

просгаг/ан динами лги перрхо де острой »азы панхматита в чаи и мисси (гтогетическа* схема)

служит одним из важяейыих условия поддержания жизнеспособности клеток в условиях жестких, деэнергезирующих воздействий.

Не менее важнда следствием торможения ПОЛ, . протекающего с интенсивным расходом кислорода, является высвобождение дополнительных его резервов, необходимых для поддержания нормальной работы митохондрисльных энергосинтёзирующих систем в условиях сниженной его доставки из - за нарушенного органного кровотока.

Таким, образом, процесс выключения механизма повреждения ПЖ с учетом приведенных данных может быть представлен следующим образом (Рис 2).

ВЫВОДЫ

1. При введении цитотоксической сыворотки развивается геморрагический панкреатит. Пусковым фактором развития ОП является повреждение сосудистого эндотелия цитотоксинами и активированными нейтрофилами. которые увеличивают прокоагуляционные свойства эндотелия сосудов и сыворотки крови.

2. Глубина повреждения ПЖ нарастает во времени и напрямую зависит от степени инфильтрации очагов воспаления ПЯЛ.

До восьмого часа воспалительный процесс в поджелудочной железе носит характер острого интерстициалького глнкреатита с выраженной морфологической картиной тромбоваскулита. К концу первых суток воспалительный процесс переходит с рыхлой соединительной ткани на паренхиму ПЖ.

3. Завершение острой фазы деструкции в поджелудочной железе начинается с третьих суток и проявляется сменой клеточного пула в очагах воспаления: намечается тенденция к преобладанию мононукле-аров и эозинофилов над ПЯЛ. уменьшается деструкция эндотелиальных клеток и тромбообразование.

4. Цитото'ксины и активированные ПЯЛ запускают кислородозави-симый механизм повреждения поджелудочной железы. Миелопероксидаза нейтрофилов и пероксидаза эозинофилов в очагах воспаления катализируют реакцию Нг02 с образованием гипохлорита. Метаболиты кислорода инициируют ПОЛ в клеточных мембранах неповрежденных клеток -расширяются зоны некроза.

5. В первые часы„развития ОП повреждению клеток предшествует блокада аэробных путей гликолиза, некомпенсированная активация гликогенеза и последующая активация лизосомально - вакуолярного аппарата для обеспечении клеток энергетическим материалом за счет эндогенного питания.

;6. Перекисное окисление липидое при остром панкреатите -энергозависимый процесс, который начинается в митохондриях с образованием первичных продуктов ПОЛ (ДК. ГПЛ), используемых в первые часы развития ОП в качестве субстратов дыхания. Значительное угнетение антиперекисной защиты и неконтролируемое с восьмого часа развития ОП увеличение конечных продуктов ПОЛ в деэнергезиро-ванных митохондриях является триггерным механизмом активации лизосомально - вакуолярного аппарата ПЖ.

7. Лизосомально - вакуолярный аппарат ПЖ в первые часы развития ОП выполняет адаптивную функцию, осуществляя неспецифический гидролиз гликогена (р-глюкозидаза, (3-га.лактозидаз^; с образо-

ванием глюкозы, затем переключает энергетический обмен с углеводного типа на липидный (дизадаптивная функция, цитолитический процесс), а с третьих суток выполняет пластическую функцию (регенерация очагов повреждения).

8. Рецидив цитолитического процесса в ПЖ на десятые сутки развития ОП связан с повторной волной повреждения клеточных мембран лизосомальными ферментами и активированными ПЯЛ.

9. Простациклин и энзапрост активно влияют на кислородозави-симый механизм развития ОП, оказывая цитопротек^ивный эффект, который выражен в большей степени у простациклина. ;а

10. Среди анализируемых больных острый панкреатит встречался чаще в возрастной группе 40-50 лет. отечная форма заболевания наблюдалась у 81%, а деструктивный - у 19% больных.

11. Увеличение активности лизосомальных ферментов в крови больных ОП зависело от характера морфологических изменений в1ПЖ. Наличие повышенной активности лизосомальных1' ферментов е. крови больных геморрагическим панкреатитом при выписке из стационара позволяло прогнозировать неблагоприятное, рецидивирующее течение заболевания и появление осложнений.

12. Лизосомальные ферменты и активные метаболиты кислорода, ПЯЛ выступают -в качестве триггерного механизма в формировании интоксикационного синдрома и активации процессов ПОЛ в эритроцитар-ных мембранах больных ОП.

13. Интенсивность процессов ПОЛ в эритроцитарных мембранах больных ОП напрямую зависит от активности связывания с базальной мембраной ферментов и скорости включения в процесс образования и детоксикации продуктов ПОЛ глутатиона и сопряженных с ним антиокислительных ферментов.

14. Показателем резистентности эритроцитов больных ОП к ПОЛ служит высокая активность КА, но не ГП. В мембранах с высокой активностью КА антиокислительные свойства эритроцитов обеспечиваются в основном за счет каталазной реакции, а в мембранах с низкой активностью КА за счет системы окислительно - восстановительного перехода глутатиона.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Современные представления об этиологии и патогенезе острого панкреатита //Хирургия. -1983-И8 - С.138-143.

2. Лечение острого панкреатита Хирургия - 1984 - N2 - С.

135-139.

3. Некоторые биохимические, .энзимогистохимические и гисто-морфологические показатели у собак с геморрагическим панкреатитом. //Нарушение механизмов регуляции и их коррекция /Тезисы докладов IV Всесоюзного съезда патофизиологов 3-6 октября 1989 г., г. Кишинев II том. - Москва, 1989. - С. 456,- Соавторы Л.Н. Оче-ленко. М.П. Филиппов.

4. Перекисное окисление липидов и состояние ангиокислигель-ной системы у больных с повреждением околоушной слюнной железы при остром панкреатите. Депонирована в ВНИИМИ N Д-2/300 от 06.05; 95. Соавтор С.Н. Долгов.11с.

5. Состояние перекисного окисления липидоь и антиокислительной системы клетки при остром послеоперационном панкреатите. Депонирована во ВИНИТИ N 3937-В 91 от 11.10.91. Соавтор С.Н. Долгов -8 с.

6. Влияние простациклина на аутоокислительную систему аци-нарных клеток при остром послеоперационном панкреатите. Депонирована в ВИНИТИ и 769-В 92 от ОЭ.03.92. Соавтор С.Н. Долгов. -9 с.

7. Влияние простагландина F2a на перекисные механизмы повреждения и антиперекисную защиту околоушной слюнной железы при остром панкреатите. Депонирована а ВИНИТИ N 770-В 92 от 09.03.92. Соавтор С.Н. Долгов.-12 с.

8. Молекулярные и клеточные механизмы повреждения и защиты поджелудочной железы при остром панкреатите // Современные методы исследования -функции органов и систем/материала научно - практической конференции "Современные методы исследования в Функциональной диагностике". -Ставрополь, 1992.-С.42-45.

9. Морфогенез острого панкреатита// Современные методы исследования функций органов и систем / материалы научно - практической конференции " Современные методы исследования в функциональной диагностике". - Ставрополь. 1092. - С.46-48.

10. Влияние ферментов системы глутатиона на перекисное окисление липидов эритроцитов больных острым панкреатитом. Депонирована в ВИНИТИ N Д-21327 от 07.08.93. Соавтор Н.П. Филипенко.-12с.

11. Действие сыворотки крови больных острым панкреатитом на антиоксидатную активность и перекисное окисление липидов эритроцитов In vitro. Депонирована в ВИНИТИ N Д-21328 от 07.06.93. Соавтор Н.П. Филипенко. - 14 С.

12. Глутатионпероксидаза и каталаза плазмы крови больных

острым панкреатитом// Актуальные вопросы клинической медицины / Сборник научных трудов, посвященных 30-летию ф \культета усовершенствования врачей. Ставрополь, 1994.-С.53-56

13. Действие сызоротки больных острым панкреатитом на анти-оксидантную активность и перекисное окисление липидов эритроци-тов//Актуальные вопросы клинической медицины/Сборник научных трудов. посвященных 30-летию факультета усовершенствования врачей.-Ставрополь. 1994.-С.63-66.

14. Влияние процессов ПОЛ митохондрий собак с острым панкреатитом на лизосомально - вакуолярный аппарат клеток поджелудочной железы//1-я международная конференция "Последние достижения в области заболеваний пищеварительного тракта". Кисловодск. 26-27 января, 1995 / Российский журнал гастроэнтерологии, гепатоло-гии.-1996.-N1 - С.52. Соавтор Н.П. Филипенко.

15. Антиоксидантная и прооксидантная система эритроцитов больных острым панкреатитом// 1-я международная конференция "Последние достижения в области заболеваний пищеварительного тракта", Кисловодск. 26-27 января. 1995 / Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии.-1396.-И1 - с.52. Соавтор Н.П. Филипенко.

16. Активность лизосомальных гидролаз в крови больных с воспалительными процесоами в околоушной слюнной железе при хирургической патологии органов брюшной полости // Стоматология. -1995. -N4. -С. 16- 18. Соавторе.Н. Долгов.

17. Механизмы цитопротективного действия простациклина при остром послеоперационном паротите// Стоматология.-1995. N2. С.27-46. Соавтор С.Н. Долгов.

18. Активность антиокислительной системы глутатиона в крови больных с острым неэпидемическим паротитом // Стоматология.-1995 N3. -С. 38-40. - -Соавтор С. Н. Долгов.

Рационализаторские предложения.

19. Цитотоксическая модель острого панкреатита // Удостоверение на рационализаторское предложение N 250. -Ставрополь,. 1983.

20. Комплексный биохимический метод диагностики острого панкргатита // Удостоверение на рационализаторское предложение N 251. Ставрополь, 1993.

СОКРАЩЕНИЯ И УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

АГ - антиген

"АО - антиоксидант

АОА - антиокислительная активность

АОС - антиокислительная система

АФК - активные формы кислорода

0г- - супероксидатный радикал

Н202 - перекись водорода

ОН- - гидроксильный радикал

НОСЬ - гипохлорная кислота

^г - синглентный кислород

ИК - иммунные комплексы

ЛС - лизосомы

■ МДА - малоновый диальдегид

ГПЛ - гидроперекиси липидов

ДК - диеновая конъюгация

ОЛ - общие липиды

СОД - супероксиддисмутаза

ПФП - пенгозофосфатный путь

ПЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты

ПОЛ - перекисное окисление липидов

КА - каталаэа

ГР - глугатионредуктаза

ГП - глутатионпероксидаза

йБН - глутатион восстановленный

СББС - глутатион окисленный Г-6-ФДГ ' - глюкоза - 6 - фосфатдегидрогеназа

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

МДГ - малатдегидрогеназа

МХ - митохондрии ЦИК циркулирующие иммунные комплексы ЦТК цикл трикарбоновых кислот

ПВК - пировиноградная кислота

МК - молочная кислота-