Автореферат и диссертация по медицине (14.00.05) на тему:Роль и взаимосвязь гистамина и перекисного окисления липидов в патогенезе бронхиальной астмы и хронического астматического бронхита

УПЬРивт- ЧЪ4. ЬРЬЦЦЪЬ 'Пьви^иъ .РдС^ииии =ишш.иигиъ

«л ^

ъ® ьглвиъ ЦСПБ ^ПРЗПЬЪЬ

г

-фмаирър оь тн*пыч> ыроаимцютъ чь-рп, ьрцьз фпфмийь&зпьъъър!* фщишшъзчлбпьи&пьъа ргаъшзьъ аия-ипзр ъч. ¡ирлььтть пиютвм ррпьм'яь шививтшь иък'11ъю№ь1г

сЗ^П-. 00.03. - Ш^р^йЬрЦшй-рш]!!!!!!!!^

Р-ЭДшЦшй фшавдпхйШзр]! ра1]йш5гф

шиш^бшСф ЬихздишП штШифтшир.11Л1й

и & 1 1Г и Ч- Ь Г

р. ьрьчаъ - 1996

ЕРЕЗЛКСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МНД^ИНСКЯ'Л УНИЗЕРСИТ! им. N1X1ГГ АР А ГЕРАЦИ

ЕГО ЯН А Ш О I КОРЮНОВИЧ

роль и взаимосвязь гистамин.а и пергшсного 0кн01ения липщов в патогенезе бронхиальной астмы и хронического астматического бронхита

сНк 00.03. - Внутрс нние болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степей кандидата медищшских наук

ЕРЕВАН - 1996

и^шшшСрГ? Ь йЬрр^й Ь^ш&редтййЬр}! рЭД 3 шйр^Ошй ^шшЦшй г^шЦшрОЬр . _

р^-ц.дцрпфЬипр 1УГШ>ОЬЧЛ'

Ьр<Т1£Ц-]т ОЬдг^О ЬЭДшСирвд ш. ИСЬ^ рЭД 5 Ш11р1тЩ1 ФчФь

«Пип шпГилЪ ий с&рЙг^ш^ягиСГЬр'

р^711ш,4шйф!ШПйп:С1(1Ьр[г1р.11ШГ51, идшфЬипр РОРПЗЦЧ*

РсОДийций о{итздгиД11Ьр]а рЫ^йшйш, идтфЫтр РЦП-ПиЦРЗ 1Гь 1г.«к

Ипш21Л1иии1г ^ищ&иЦЬриродтй" « 0-1111 П-.Ьд.РшСфшищф шйф р^Ьфиц^

{гСиифштш __

к^шЛицшЛ " в" 199&>.

Ц^гфрир ^Ьр^'З331 щС'Д. ЪрЬииСЦа щЬшш^шй р^гш^шй Ьш^ш^иицииЩгй Щгд (375025, ЬрЬиий - 25,ф., 2) 028 ^ишйшфшш^шй {иарЬрф С^гишпи!:

ШлЫй-и^игадш^В киЦ^Ф t йшОпршОиц, Ьаи5и^ишрши5а сцш^шП-шСаи!:

_199|р.

Цашйшфши^чО {ицйрф

фиилкиШ риг^агЕцшр у / ЗПНЦГЬЗЦХг Ц.П-

Г : гс. г" ^¡-с. >■■<_-ч пе1--

Научные рукпводита\и:

д. м. н„ профессор АМА.ТУНИ Б.Г.

Заведующий кафедрой внутренних

болезней №3 ЕрГМУ

д. м. н., профессор НАЗАРЕТ ЯН Э.Е.

Официальна ссзоненты:

,'\о?.тор медицинских нарт., профессор БОГОЯН Р.Г.

Кандидат ме^ицгаских наук, профессор БАГДАСАРЯН Э.Г.

Ведущая организация: Институт биохимии им. Р.Х. Буниатяна НАН РА

Защита диссертации состоится ___^__199?г.

в часов нз. заседании Специализированного Совета 023 при Ереванском Госгдарстеешок Медицинском Университете им. Мхитара Гераци (375025. г.Ереван, ул.Г.орюна 2).

С диссертаций можно ознакомиться в библиотеке университета.

Автореферат разослан "__1_______199?г.

Ученый секретарь

гттпгт»али?*-17?занного соьета у' ЛД>гЛГАНЯН А.Р.

л

ОБЩАЯ X АР АКТ ЕР ИСТ И К А РАБОТЫ

Актуальность_проблемы. Бронхиальная астма(БА)

занимает своеобразное место в ряду хронических неспецифических заболеваний легких (XH3JI). Распростроненность, многобразие этиологических факторов, сложность патогенеза, полиморфизм течения делают проблему БА одной из важнейших проблем совре.меккой-медищпгсксй науки. ХНЗЛ и, в частности, БА в основе своей этиологии в развитии патогенетической цели достаточно наглядно отражают современные экологические проблемы. Это в частности,' касается загрязненной атмосферы. I

БА патогенетически имея иммунологическую и аллергическую основу, связана с такими, так называемыми, неспецифическими факторами, какими являются степень загрязненности воздуха» географическое расположение, климат, уровень солнечной радиации, а также адаптационные возможности макроорганизма [А.Д.Адо, 1961: П.К.Булатов, 1964: В.Г.Аматунк и др.. 1980: Г.Б.Федосеев и др.. 1984; М.Э.Гершвин, 1984: M.Bazaral et al.. 1974; P.Barnes. 1983: I.Ianuszkevic et ah. 1984; S.Meitzer et ai., 1991; J.Migueres, M.Drouct. 1995; P.Pirson.1995]:

Представленная работа посвящена изучению в патогенезе БА и хронического астматического бронхита (ХАБ) взаимосвязи к патогенетической значимости таких биохимических изменений, какими являются либерация гистамина, песекисное окисление лштидов (ПОЛ); антирадикальная защита организма с одной стороны, и значение этих изменений в механизме адаптации макроорганизма к болезни, с другой стороны. Несмотря на то, что обмен и механизм либерации гистамина в патогенезе БА давно находятся в центре внимания исследователей, до сих пор не потеряли свою актуальность. То обстоятельство, что гистамин, будучи одним из

важнейших аллергических медиаторов, является еще и важным биогенным амином, регулирующим воспалительные процессы, делают очень актуальным определение ' патогенетической роли и взаимосвязи гистамина в патогенезе БА, где определяющую роль играют аллергические и воспалительные механизмы [И.Л.Вайсфельд, 1974; 1981; Г.Б.Федосеев и др., 1984; А.Г.Чучалин, 1981; 1984; 1994,\J.Migueres, 1993]: ,

Гистамин принадлежит к ряду так называемых, первичных. медиаторов (первичными называются медиаторы, которые синтезируются в гранулях тучных клеток - в биологически активной форме). Гистамин составляет главную часть содержания гранул. Известно, что механизм либерации и' первичных, и' вторичных так называемых липидных факторов биогенных аминов -осуществляется двумя путями: классическим и альтернативным [И.Л.Вайсфельд, 1976; 1977; 1981; И.С.Гущин, 1977; Т.Ыигака. 1978; 1991; <7.\У.Со1е-тап а!., 1991; Р.СИете^еп et а1., 1989; \У.Ке11егта:т et а!., 1994; <1.Ното1ка, 1994]:

Классический механизм осуществляется оседанием 1дЕ+антиген комплекса на ^Е рецепторе тучной клетки и усилением либерации гистамина и других биогенных аминов.

Особенность альтернативного или неспецифического механизма состоит в том, что любые процессы на клеточной мембране," которые стимулируют вход Са+2 в клетку, способны усиливать, независимо от иммунологических механизмов, либерацию медиаторов [Г.Б.Федосеев 1984; К.Е.АгГогэ 1981; Н.\¥.Ваепк1ег е! а1., 1987]: В представленной работе из многочисленных биогенных аминов выбор гисмамина как объекта исследования, обосновывается тем фактом, что гистамин, наряду с другими медиаторами реакции гиперчувствительности, приводит при БА и ХАБ в бронхиальном дереве к известным - патофизиологическим изменениям

(отек, гипео-*?к"?тяя. спазм). Вместе с тем. при контакте гистамина _ с гистаминочувствительной. .. .субпопуляцией, лимфоцитов. вырабатывается гисташш индуцированный фактор супрессии (ГИФС), который угнетает клеточную реакцию гкперчузетзительности замедленного типа (ГЗТ) -никакой другой медиатор не обладает такой способностью [R.E.Eückliru Г- ..л].

Гистамин, являясь основным медиатором аллергического госп^ления, одновременно кгрэет очень важную роль при формировании патофизиологических изменений классического воспаления. Это еще раз подтверждает равноценное значение гистамина в патогенезе аллергической и инфекционно-зависимой БА (ИЗБА).

Биологическое воздействие гистамина исследовано довольно досконально. Известно, 'что гистамин угнетает выработку лимфокинов из лимфоцитов и лизосомальиых ферментов на макрофаг, усиливает пролиферацию фибробластов. участвует в приливе эозинофилоз к воспа лителъному очагу [К.F.Auster,. 19 78; L.Nagy 1981: C.D.May 1982; Y.Honda et al., 1993]:

Вышеотмечеяные и другие биологические свойства гистамина дают основание исследовать в патогенезе БА и ХАБ качественные стороны патогенетической роли гистамина. ставя в основу исследования взаимосвязь данного медиатора с некоторыми универсальными биохимическими процессами, действующими в патогенезе исследуемой болезни.

В процессе образования и усиления либерации медиаторов большое значение имеет липидяый обмен клеточной мембраны [F. L. Pearce et al.. 1982]. Известно, что вторичные медиаторы образуются только при обмене липидов, и предшественником являются фосфополиды [Н.-Р. Härtung 1986]. С этой точки зрения, при исследовании патогенеза БА и ХАБ, важное значение получает изучение свободно-радикального окисления, состояние ПОЛ, состояние антирадикальной защиты организма.

Изучение ХНЗЛ неизменно приводит к важным экологическим проблеам: все те внешние факторы, которые создают благоприятные условия при возникновении БА и ХАБ:, приводят к усилению свободно-радикальных процессов (химизация пищи, усиление радиационного фона, фотохимический смог и др.).

Роль ПОЛ и антиоксидантной активности (АОА) в патогенезе БА доказана в предыдущих работах [В. Г. Аматуни и др., 1980; 1982]. Доказаны закономерные изменения данной системы при различных степенях тяжести, разных формах БА, при разных фазах патологического процесса.

Роль системы ПОЛ-АОА в адаптационных механизмах организма значима в следующем аспекте во время патологического процесса через мембранно-рецепторный комплекс, под непрерывным воздействием агрессивных факторов адаптация клеток слизистой бронхов выражается изменением микроокружения клеток за счет секреции биогенных аминов, которая ограничивает "конфликт" при помощи клеточной инфильтрации [Г.Б.Федосеев, С.С.Жихарев и др., 1984].

Все вышеизложенное дает основание предположит наличие взаимной связи между системой ПОЛ-АОА и биогенными аминами (в особенности с гистамином) -учитывая его универсальную роль в формировании иммунологических сдвигов, имеющих определяющее значение в патогенезе Б А и ХАБ.

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучение в клинике, эксперименте и в условиях дозированной физической нагрузки, гистамина в крови, а также показателей системы ПОЛ-АОА с целью установленргя взаимосвязи -между ними и последовательность патохимических изменений в приступе астмы, астматическом состоянии, межприступном периоде и в фазе

рем":есг~т с учет - м -хормы и тяжести течения БА. а также при Х--"- Б.

Исходя тп пл;г.'ставятся следую яг у- ^¿я:аяи:

1. Определение колпчеетза гистамина в крови больных БА

и ХАБ (ф л уоресЕент;свкый метод с ортсфталевым альдегидом по методу Шора, модификация метода

С.А.Мещерякогои).

. 2. Определение ПОЛ в мембранах эритроцитов тех же больных (ко малпнозу дтталъдопггу в мембраяках

эритроцитов в НАДФ-Н зависимой системе в присутствии прооксидантов - Владимиров, Арчаков).

3.Определение в эритроцитах активности фермента с у п ерокс идд ис м утаза (СОД) по методу ^ябЫкиш.

4.Определение в плазме крови количества а-токоферола

(флуоресцентиЕный'кетод Би^ан).

5. Определен;!'? функции внешнего дыхания (спирография). '

6.Проведение корелляционного анализа между уровнем гистамина в крови, клняоко-функцлоналыгыми показателями заболевания, показателями активности ПОЛ, антиоксндантами.

7.Определение уровня гистамина и системы ПОЛ-АОА у

больных БА. ХАБ и в контрольной группе здоровых до и после стандартной мышечной нагрузки (велоэргометрия).

8. Изучение в эксперименте на крысах изменения содержания гистамина при курсовом введении в

брюшину пероксидированных некасьгщеяяых жирешх кислот (НЖК).

Практическая значимость проведенных исследований. В

результате проведенных исследований были сделаны следующие практические рекомендации:

1. Коэффициенты отношения избытка гистамина в крови (в %) к избыткуПОЛ (в %) 8нредлагается как показатель степени тяжести патологического процесса БА.

2. Дозированная физическая нагрузка (ДФН) предлагается как наиболее адекватная провокационная проба для. дифференциальной диагностики и ; выявлении патофизиологических сдвигов в патогенезе Б А и ХАБ.

3. Показатель соотношения гистамина ! к объему фарсированного выдоха за одну секунду (ОФВх)

■ предлагается как показатель, прогнозирующий чувствительность бронхов к ДФН (без провокационной пробы ДФН).

4. Степень бронхоспазма (ОФВ^ после ДФН, предлагается как показатель патохимических сдвигов при БА и ХАБ.

(

полученные данные, кроме того, что выявили в патогенезе БА и ХАБ определенную взаимосвязь в некоторых патохимических . сдвигах - позволили предложить практические рекомендации, которые значительно упрощают дифференциальную диагностику ХНЗЛ и помогают доступным методом (ДФН) объективно .определить степень тяжести БА и ХАБ.

Осповные положения, выдвигаемые па защиту

1. ПОЛ является одним из основных альтернативных механизмов либерации биогенных аминов (гистамина), играющие решающую роль в патогенезе Б А и ХАБ.

2. Изменения гистамина в крови и системы ПОЛ-АОА у больных БА и ХАБ имеют четко выраженную

взаимосвязь и являются показателями, отражающие степень тяжести; патологического процесса.

3. ДФН являемся наиболее адекватной моделью биохимических сдвигов в патогенезе БА и ХАБ.

4. В механизме вс тикновения АФУ и БФУ определяющая роль припал лг* .хат альтернативны:'! механизмам активации тучно клеточного аппарат:) (ПОЛ-АОА).

о. ДФН является- наиболее доступной и объективной провокационной пробой для определения степени тяжести БА и ХАБ.

Апробация работы

Диссертационная работа апробирована на заседании кафедры внутр^ших болезней N3 Ерезанскоги Гчсударстзегас-о Медигпгкскг-р Унлзеситета имен;' Мхитара Гераци '.П июня 1996г.

!

Пхбллкащпд

По материалам диссертации опубликованы 10 статьей.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 121 страницах машинописного текста, состоит из 4 глав:

1.Обзор литература.

2.Материалы и метолы исследования.

3.Тучыоклеточный механизм патогенеза БА и ПОЛ мо«бранных липидов.

4.Тучиоклеточные механизмы нарушения бронхиальной проходимости у больных БА и ХАБ, после ДФН, а также - обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка

использованной литературы. включающего '319 - ■ отечественных и ностранных источников. Работа иллюстрирована б таблицами, 10 рисунками.

Содержание работы Материал и методы собственных исследований

, Работа была выполнена на кафедре внутренних болезней N3 . ЕрГМУ: на базе Центральной - Научно-

исследовательской лаборатории ЕрГМУ,

пульманологическом отделении Республиканского

«»4 •»

медицинского центра Армения .

j Обследованы 144 больных с Б А и ХАБ. 18 больных БА обследованы во время астматического приступа, 16 в астматическом состоянии. Отдельно обследованы 39 больных с БА и ХАБ до и после ДФН. Проведен •эксперимент с внутрибрюшинным введением 10 белым крысам пероксидированной ликолезой кислоты. У больных одновременно определено содержание гистамина в крови флюориметрическим ¡методом Шора, с ортофталевым альдегидом в модификации Мещеряковой, ПОЛ в мембранах эритроцитов в НАДФ-Н зависимой системе по тесту с тиобарбитуровой кислотой и концентрации а-токоферола в плазме крови флюориметрическим методом D.D.Duggan. В эксперименте с внутрибрюшинным

• введением пероксидированной лкнолевой кислоты белым крысам .(перекисное число 350) в дозе 0.1мл ежедневно— определено содержание гистамина. в крови, подсчитано число тучных клеток в 10 окнах - брыжейки из области илиоцекального" угла (на 10 клеток в каждом препарате) при окраске ' толуидиновым синим (рН-3.8). Для определения содержания гистамина в тучных клетках был использован ф.ттоор«метрический метод с ортофталевым альдегидом фирмы "Serva" (ФРГ), Количественное определение гистамина произведено в 50 тучных клетках каждого препарата(с последующ,им пересчетом на одну

клетку) с помощью флюорэсцентного микроскопа "Люмам И-3" с. _ флюориметрической насадкой "ФМЭЛ-1' А. С помощью диска на флюориметрической насадке установлен светофильтр с длиной волны 334 нм, который соответствовал максимуму ф.тюорэсцэнцни гистамина. Количество гистамина при этом выражено в условных единицах флюорэсценции.

Все больные были подвергнуты углублённому клиническому, лабораторному, инструментальному. и аллергологическому исследованию. Инструментальные 'исследования включали в себя рентгенографию грудной клетки. электрокардиографию, фибробронхоскопию, спирографию аппаратом "Метатест-2". Применялась стандартная нагрузка на велосипедном эргометре КЕ-П (5 м 60 вт в 1 мин.).

Для оценки вентиляционной функции легких (ВФЛ) определяли должную и фактическую жизненную емкость легких (ДЖЕЛ и ЖЕЛ), отношение ЖЕЛ на ДЖЕЛ в процентах, /объем форсированного выдоха за первую секунду (ОфВ^. отношение ОФВ на ЖЕЛ в процентах (индекс тиффно). отношение на ДЖЕЛ в процентах.

Общеклинические лабораторные исследования проводились общепринятыми методами.

Обследованные 144 больных БА и ХАБ были в возрасте от 20 до 55 лет. Атоническая БА легкого течения (БАХ) - у 20, среднетяжелого (БА2) -у 34 и тяжелого (БА3) - у 28; 18 больных страдали ХАБ. Обследование проводили дважды: при поступлении в стационар в фазе обострения заболевания и после курса лечения в фазе ремиссии. 18 больных инфекционно-зависимой БА были обследованы на высоте астматического приступа. а 16 больны:-; инфекционно-зависимой БА3 - в астматическом состоянии. Контрольную группу составили 15 здоровых лиц в возрасте от 20 до 50 лет.

12 . -— — Результаты исследований д их обсуждение

Концентрация гистамина в крови всех больных БА и ХАБ в фазе обострения заболевания достоверно превышала контрольный уровень и соответствовала тяжести течения заболевания (табл.1). После курса лечения в фазе полной и

относительной ремиссии отмечалось ~ снижение

- ) *

концентрации гистамина в крови, достоверно при инфекционно-зависимой БА2>3.. При этом концентрация гистамина в крови у больных ХАБ полностью соответствовала инфекционно-зависимой БА^ ■ а при атопической БА2 она оказалась достоверно выше, чем при инфекционно-зависимой БА1. Определение ПОЛ в мембранах эритроцитов, а также коэффициента (К) сх-токоферол/ПОЛ, отражающего соответствие

антиокислительной активности крови (АОА) интенсивности ! ПОЛ. ггоказало, что изменения аналогичны таковым I гистамина. Корреляционный анализ между уровнем гистамина в крови и величиной К выявил наличие обратной связи между ними (колебался от 0.57 до 0.70; р<0.05) при инфекционно-зависимой БА и ХАБ.

С целью полнейшего изучения связи гипергистаминемии с ПОЛ проведен эксперимент с внутрибрюшинным введением 10 белым крысам пероксидированной линолевой кислоты в дозе 0.1мл ежедневно в течение 20 дней~ Контрольные исследования выполнены на 7 крысах. Было показано, что с усилением ПОЛ у. экспериментальных животных произошло достоверное, по сравнению с контролем, увеличение содержания гистамина в крови (0,17±0.02мкг/мл против 0.17±0.02мкг/мл. р<0.05).

КОНЦЕНТРАЦИЯ ГИСТЛМИНЛ Б КРОПИ И СОСТОЯНИЕ ПОЛ-ЛОЛ У БОЛЬНЫХ БЛ И ХЛГ» (М+т)

ДИАГНОЗ Н ГНСТЛМИН(мкг/мл) II 0 л а-токоферол(мг"'а) | К

обостр. ремиссия ооостр. : ремиссия 1 обостр. | ремиссия обостр. ремиссия

ХЛБ 18 0.10 | 0.07 ' ±0.0в 1 ±0.08 6.7! <>.65 1-±0.18 ±0.15 2.07 + ±0.03 2.21 г+ ±0.02 . „, 0.27 + 4 0.01 0.3« ! + ±0.02 4-4- П.1:~. ■ ±0 01. 4-40.35 4 >0.02: + +

ЛБА, 10 0.14 И ±0.01 О.И ±0.02 ±0.21 ±0.01 2.17 ( . 2Л 9 4 ±0.01 1 ±0.01 4-4- ¡.37 -4П.ООЯ 0.27 ±0.003

ИЗБА] 20 0.10 -г! 0.08 10.02 ! 1 ±0.01 0.03 ! 7.23 f ±0.01 10.51 2.10 + ±0.02 2.14 ±0.0!

ИЗБАо 34 0.17 1 0.11 4 •0.02 1 1.0.0] 9.13 ; 7.13 + '0.3-1 »0.13 + +- 1.92 + >0.05 2.04 + ±0.05 9.20 Ю.01 о.зо ; + <0.02 4-4

ИЗБАЯ 28 0.25 0.14 4-'0.02 | 1-0.0! +4- 11.12 ! 7.84 + 4 0.! 5 1 -0.П +4- 1.73 + 40.03 1.97 +| 0.16 ' ±0.0,? 4-+ I ±0.005 0.22 : 410.03 1 4-+

Астматнч. приступ 18 0.31 т0.01 + 12.5-: ±0.7? + 1.91 ±0.05 -)- 0.17 ±0.0! + 1

Астматнч. состояние 1Ь 0.29 ±0.07 4. М.(И 10.23 4- 1.70 ±0.02 + о.ы *о.оз ; +

Контроль 15 0.05 -0.01 З.Зв -0.2 ! 2.19 ±0.01 0.55 ±0.01

- различия с контролем достоперны

- различия между обострением и ремиссией лостопенны

Показатели состояния тучных клеток брнжейки белых крыс в условиях усиления ПОЛ (М±ш)

СРОК СТЕПЕНЬ ДЕГРАНУЛЯЦИИ,% СОДЕРЖАНИЕ ГИСТАМИНА УЕФ

I и III

через 1ч! 50.2±3.4 29.0x1.7 20.8x2.9 15.7 ± 0.4+

через 1 сут. 14.7±3.8 28.3±3.2 57.0±6.0 6.7+0.6"

через 3 сут. 51.0± 4.6 32,0±2.о 17.0+2.0 12.4 ± 0.5+

через 7 сут. 47.3=2.1 { 31.8±2.9 20.9x3.0 16.8 ± 0.4+

Контроль 75.0-2.0 1 15.8±1.7 | 9.2±1.1 1 22.2 ± 0.1

В другой серии исследований с однократным внутрибрюшинным введением белым крысам пероксидированной линолевой кислоты определена степень дегрануляции тучных клеток брижейки и количество гистамина в них через 1, 24ч., а также на 3-й и 7-е сутки эксперимента. Как видно из таблицы 2, первое внутрибрюшинное введение крысам пероксидированной линолевой кислоты сопровождалось выраженной дёгрануляцией тучных'клеток брижейки и понижением в них содержания гистамина. Наиболее существенные сдвиги имели место спустя 1 сутки после начала эксперимента, когда число резко дегранулированных клеток (3 степени) составляло 57% от общего количества клеток. Дегрануляция тучных клеток сопровождалась усиленным выбросом гистамина, который в виде мелких.

специфически флюоресцирующих гранул выявлялся экстрацелюлярно как в периваскулярных участках, так и в отдельных микрососудах брижейки. Содержание гистамина в тучных клетках при этом поершилось почти в 4 раза по сравнению с контролем. В последующие сутки эксперимента (на 3-й и 7-е сутки) при продолжающемся ежедневном введении пероксидированной линолезой кислоты изучаемые показатели, характер изирующие функциональное состояние тучных клеток, несмотря на теннденцию к восстановлению, достоверно отличалось от таковых в контрольной группе. Следует отметить, что в указанный период выход гистамина из тучных клеток осуществлялся преимущественно путем гранулолизиса.

В таб.3 приведены отношения избытка гистамина в крови (в %) к избытку ПОЛ (в %) при обострении и ремиссии атонической БА. инфекционно-зависимой БА и ХАБ. У больных ХАБ отношение степени гипеошстаминемии к степени увеличения ПОЛ

i

соответствует таковому при инфекционно-зависимой БА/ прирост же гистамина при переходе от инфекционно-зависимой БА! к БАд как в период обострения, как и в фазу ремиссии больше, чем прирост ПОЛ. Помимо этого, в фазе ремиссии при всех степенях тяжести инфекционно-зависимой БА это несоответствие меньше по сравнению с фазой обострения. Иначе говоря, чем тяжелее клинико-патофизиологические проявления заболевания и, следовательно, интенсивность инфекционно-аллергического воспаления при инфекционно-зависимой БА, тем больше разрыв между степенью увеличения содержания гистамина в крови и ПОЛ в мембранах эритроцитов. В группе больных АБА прирост гистамина относительно прироста ПОЛ значительно больше, чем при инфекционно-зависимой БА. В связи с изложенным можно предположить, что увеличение ПОЛ в мембранах тучных клеток бронхиальной стенки приводит к понижению порога их чувствительности по отношению к естественным либераторам гистамина.

Коэффициент отношения избытка гистамина в крови (в %) и избытку ПОЛ (в %) при АБА, ИЗБА и ХАБ.

диагноз п фаза заболевания

обострение ремиссия

ХАБ '1 18 1.0 0.6,

АБАг 1 10 . 3.7 4.1

ИЗБА! 20 1.1 0.8

изба* 34 1.7 1.4

ИЗБА3 28 2.0 1.7

Астматический приступ 18 2.3

Астматическое состояние 16 1.7

Концентрация гистамина в крови больных инфекционно-зависимой БА во время приступа удупгия и в астматическом состоянии в б раз превышала контрольный уровень и была в 1.2 -3 раза выше уровня гистамина в межприступном периоде при всех 3 степенях тяжести БА. В отличие от уровня гистамина. уровень ПОЛ при астматическом состоянии был выше, чем во время приступов удушья, а во время приступа от в 3,25 раз выше, чем в контроле, и в 1,64-1,14 раза выше, чем в межприступном периоде. Различие в уровне ПОЛ до и после лечения достоверно лишь при инфекционно-зависимой БА9 л, как это имело место и в отношении гистамина. .

При приступе удушья отмечено достоверное повышение уровня а - токоферола по сравнению с межприступньш. периодом при обострении инфекционно-зависимой БА3. В противоположность этому для астматического состояния характерным было существенное снижение концентрации а-токоферола в плазме по сравнению с приступом. Очевидно - вышедшее из-под контроля естественных антиоксидантов ПОЛ, а также истощение АОА крови играют существенную роль в развитии астматического состояния, обусловленного глубокой блокадой (3 адренорецепторов гладкомышечных клеток бронхиального дерева. При этом К достигает минимальных значений (в среднем 0,14±0,03, в контроле 0,55±0,01<0.01).

Во время приступа при инфекционно-зависимой БА степень увеличения уровня гистамина в крови превосходит усиление ПОЛ. Вопрос о том, каково при этом участие специфр'ческих и неспещгфпческнх либералов гистамина. иммунным и неиммунных механизмов активации тучных клеток, остается открытым. Правомерны оба допущения: участие в приросте гистамина неинфекционной -

зависимой аллергической реакции, не выявляемой при обычном обследовании больного инфекционно-зависимой БА. и значение неиммунных механизмов, включая резкое усиление ПОЛ при недостаточной антирадикальной защите.

Степень повышения уровня гистамина зо время астмы определяется и резервной способностью тучных клеток и

_базофилов . к .синтезу____и. . секреции - гистамина,- Эта

способность, по-видимому, ограничивается при затянувшемся притупе и в астматическом состоянии, поскольку изученное нами соотношение во время этого грозного осложнения БА становится заметно ниже. Более низкое содержание гистамина з астматическом, состоянии по сравнению с приступом удушья как при атонической, так и при инфекционно-зависимой БА может быть вызвано и применением больших доз стероидных, гормонов, которые подавляют синтез медиаторов и дегрануляцию тучных

клеток путем . инактивации фосфолипазы А2, метаболизируюгцей " фосфолипиды мембран" с высвобождением арахидоновой кислоты, увеличения внутриклеточного образования ЦАМФ и блокирования поступления в клетку ионов Са2+. --

Таким образом, полученные факты свидетельстуют о том, что акивация „ тучных клеток и усиление их дегрануляции свойственны не только атонической, но ' и инфекционно-зависимой БА. / -

Усиление ПОЛ мембран, более выраженное в фазе обострения и во время приступа астмы, является одним из важнейших альтернативных механизмов активации тучных клеток.

Исходя из вышеизложенного, у больных БА и ХАБ уровень гистамина в крови достаточно тесно связано с системой ПОЛ-АОА. Полученный результат требует своего логического подтверждения: изучать тучноклеточные механизмы бронохоспазма. вызванной дозированной физической |:агрузкой (как ' наиболее адекватным неспецифическим фактором, вызывающий бронхоспазм).

Бронохоспйлмическая реакция на физическую нагрузку, сопровождающаяся типичными клиническими и функциональными проявлениями, свойственными астматическому приступу, может быть единственным (или главным) проявлением БА, либо его синдромом. В первом случае, когда речь идет об особой - неиммунной форме БА, правомерно обозначение ее как астма физического" усилия (АФУ) [М.Э.Гершвин, 1984; А.ГЛучалин, Х.М.Ханаш, 1986]. Во втором же случае правильнее обозначать это явление как бронохоспазм физического усилия (БФУ) [Н.Р.Палеев, 1990], тем более, что далеко не всегда он достигает степени удушья (астмы). По мнению ряда исследователей, реакция бронихиального дерева на физическую нагрузку определяется особенностями патологического процесса, характером и интенсивностью нагрузки [С.Годфри, 1984; З.И.Бекенова и др., 1987;

А.Г.Чучалия и др., 1986], температурой и влажностью воздуха [E.C.Deal et al., 1979; S.D.Anderson, 1981; A.S.Banner et al., 1984], степенью гипервентиляции [P.J.Baners, 1981] и функциональным состоянием тучных клеток бронхиального дерева [W.Grabski et al., 1980; H.Y.Heijens et al., 1980; S.M.Walden et al., 1986]. Тем не менее, участие в механизме БФУ метаболических сдвигов, связанных с мышечной нагрузкой, и отличие их- от известных отклонений гуморальной фазы БА остаются малоизученными, что и послужило поводом для настоящего исследования.

Под нашим наблюдением находилось 39 больных (24 мужчин и 15 женщин), из которых у 10 больн'ых был диагностирован ХАБ, 29 больных страдали БА средней тяжести в фазе обострения.

Контрольная группа здоровых состояла из 10 человек (6 мужчин. 4 женщин) в возрасте от 24 до 40 лет.

Исходные спирографические показатели

соответствовали нарушению вентиляционной функции легких I (2 больных), II (22 больных) и III (5 больных) степени. Применялась стандартная нагрузка на велоэргометре в бОвт 1 мин. в течение о минут (360 кгм/мин) нагрузочных тестов (инструкция для врачей велосипедного эргометра КЕ-П. Медикор, 1985). До нагрузки и через 5-15мин после нее в состоянии наибольшего бронхоспазма определялись уровень гистамина ~в—крови "По "методу""" Шора," "гидроперекисей, активность каталазы и пероксидазы -по Ю.А.Владимирову и А.И.Арчакову, а также функция внешнего дыхания спирографически и пневмотахометрически.

Все больные по реакции на физическую нагрузку были распределены на 4 группы: у 5 больных БА 1-ой группы . после физической нагрузки развился приступ БА с уменьшением ОФВ, в среднем на 60,5%, у 9-и больных БА . наступил выраженный бронхоспазм с уменьшением ОФВ, на 36,1%, а у 11 больных БА III группы наблюдался

умеренный бр'онхоспазм с уменьшением ОФВ на 17,6%. В 4-ую группу вошли 14 больных (4 БА и 10 ХАБ) с отрицательной провокационной пробой. Из них у 11 больных после физической. нагрузки ОФВ практически не менялся, у 3-х наблюдалось увеличение его в среднем на 4,2%. По всем " спирографическим показателям в 4-х группах степень нарушения вентиляционной функции легких (ВФЛ) до физической нагрузки по средним величинам примерно одинаковая (табл.4). Изучение содержания гистамина в крови до нагрузки показало (табл.4), что оно наиболее высокое в 1 и 2 группах (140% и . 100%) от контроля и значительно ниже в 3-ей и 4-ой группах. После физической нагрузки увеличение гистамина от исходного уровня также наиболее значительное в 1 группе (124%). В контрольной группе уровень гистамина в крови также заметно увеличивается (на 40%). Из приведенного следует, что в 4-ой группе больных, у которых отсутствовала бронхоспастическая реакция на физическую нагрузку, прирост содержания гистамина в крови не отличается от такового у здоровых лиц. С другой

I ".

стороны, чем выраженнее оронохоспастйческая реакция на физическую нагрузку, тем больше прирост гистамина в крови. Иначе говоря, существенное увеличение содержания гистамина в крови от физической нагрузки свойственно не только больным, но и здорозым, однако прирост его у больных находится в прямой зависимости от интенсивности бронохоспастической реакции, отражающей степень гиперреактивкости бронхов составляющей, как известно, основу патогенеза БА.

Клинико-функциональный анализ больных 4 группы показал, что в ее состав входили четверо больных БА средней тяжести в фазе обострения инфекционно-зависимой формы без каких-либо аллергических эквивалентов, остальные же 10 были больными ХАБ. Отсутсвие БФУ у всех исследованных нами 10 больных ХАБ свидетельствует -в пользу точки зрения о том. что нагрузочная проба может

Та&шпа 4

УРОВЕНЬ ОВФ, И ГИСТЛМИНЛ КРОВИ У ВОЛЬНЫХ БЛ И ХЛБ ДО и ПОСЛЕ ДФН

ОВФ| ГНСТАМИН (мкг/мл)

Группы П до ДФН после ДФН до ДФН " после ДФН

Л Д ОВФ, Д ДОПФ, /0/ \ ;л Л ОВФ, Д ДОВФ, (%) ДДОПФ, откл. от мкг/м | контр. Л | (%) Г • 100 ДДОНФ,-АОВФ, ; откл. мкг/мл | ' ОТ | контр. I- (%) дг (%); ДОВФ 1 ДГ

I 5 1.90+ ±0.26 60.3 0.75± ±0.98 ■ 23.8 -60.5 0.12± ! г0.012| +140.0 * 9.6 0.21± ±0.13 +200.0 * * * 1 +75.0 0.8

II 9 1.80± ±0.19 58.0 1.15± 37.1 +0.09 | -36.1 — 0. Юг 1 .¿0.011 1 +100.0 » 1 7.7 0.17+ | ±0.012 ¡+142.8 * * * 1 +70.0 0.5

III 11 1.70 + ±0.20 58.6 1.40х +0.19 48.2 -17.6 0.08л 1 т0.013! +60.0 * 6.6 0.121 ±0.01 * ♦ * +71.4 +50.0 0.3

IV 14 1.80+ ±0.35 60.0 1 1.77+ | 59.0 ±0.31 | -1.7 0.07+ !--10.01 1 -40.0 5.8 0.10+ ±0.011 * * * +42.8 +42.8 0.03

Копт-роль 10 4.101: 10.25 1 4.141 1 1 ±0.20 ! | -0.9 0.05г >0.01 | т 140.0 1 0.07± I ±0.011 1 : * * +40.0 | 0.02

* - различил о контролем достоверны

* * - различия до и после ДФН достоверны

дать дополнительные основания для дифференциации ХАБ от БА [\V.Grabski et аГ., 1980]. Очевидно также, что, при примененной нами интенсивности и продолжительности нагрузки, существует группа больных БА, у которых бронхоспазм не возникает, а степень прироста гистамина в крови у них та же, что и у здоровых лиц. Это не исключает того, что при более интенсивной (бег) или возрастающей нагрузке бронхоспазм возникает и у этих больных, что вытекает как из данных литературы [У.ОгаГ:?-Ьошгеуед а1., 1980; А.ТоШ et а1., 1981], так и из нашего опыта.

Больные 2 и 3 групп были также средней тяжести в фазе обострения, но смешанной формы заболевания с ясно выраженными аллергическими реакциями. У больных I группы первый приступ астмы возник в связи с физической нагрузкой при наличии выраженного аллергического фона. Следовательно, в нашем материале больных астмой физического усилия (АФУ), у которых приступы возникали бы только в связи с физической нагрузкой, не было. Из приведенного описания следует, что, хотя БФУ по существу не обусловлен иммунными механизмами, повидимому. в патогенезе гиперреактивности бронхов по отношению к бронхоконстрикторным влиянием, обусловленным мышечной нагрузкой, участвует и аллергический процесс в бронхах. Это предположение вытекает из индивидуального анализа материала, показывающего, что группы больных с БФУ (1,2) и без "него (4), будучи однородными Но тяжести течения заболевания и фазе активности, отличаются друг от друга наличием или отсутстаием клинически выраженного аллергического компонента.

Склонность к бронхоспазму после нагрузки (ДОФВ^/о) находятся в прямой зависимости от содержания в крови гистамина до назрузки (г=0,40, Р<0,05., г=0,60, Р<0,05., г=0,6б, Р<0,05). Однако, ввиду того, что между степенью гипергистаминемии и нарушением бронхиальной проходимости, отражающих тяжесть заболевания, также

существует прямая связь, готовность бронхов к бропхоспазму "В" условиях провокации ее физической нагрузкой можно точнее прогнозировать по коэффициенту (Г-ЮО)/(ДОФВ1-ОФВ1), который выявляет гиперреактивность независимо от стеяени исходной обструкции бронхов. Об этом' свидетельствует высокий коеффициснт корреляции между этим показателем и АОФВ1(%), отражающим степень бронхоспазма после нагрузки (г-0,80, Р<0,001., г=0,75, Р<0,001., г=0,50, Р<0.01).

При мышечной нагрузке увеличение гистамина и гидроперекисей (ГП) в крови идет параллельно (табл.4). Между ними имеется достаточно высокая прямая корреляция (г=+0,62, Р<0,001„ г=+0,76, Р<0,001., ", г=+0,57, Р<0,01., г=+0,62, Р<0,001). Чем выше гиперреакивность бронхов ' на провакацию мышечной нагрузкой, тем значительное прирост ГП (ЛГП). В связи с этим, можно предположить, что оба компонента гипергистаминемии ' - мышечная работа и гиперреактивность тучных клеток. соответствующая степени готовности к спазму - реализуется механизмом усиления ПСЛ мембран. Помимо этого, несмотря на высокую корреляцию между ДГ и АГП, прирост ГП от 4-ой группы к 1-ой постепенно отстает от прироста гистамина. Это отражается в измерениях величины между ДГ/дГП от

0,7 в контрольной группе до 2,2 в 1 и 2 группах, что-----

может быть одним из проявлений снижения порога чувствительности тучной клетки к естественным их стимуляторам, включая продукты ПОЛ.

После нагрузки активность фермента СОД (ДСОД) увеличивается тем больше, чем выраженнее бронхоспастическая реакция (от 0,6 до 18.8). Увеличение активности СОД наблюдается при приступе бронхиальной астмы. Такая компенсация усиления ПОЛ со стороны СОД, очевидно, крайне необходима для гомеостаза клетки и

защиты ее от чрезвычайно агрессивных супероксидных радикалов.

Одновременно, наблюдается . закономерное 'снижение коэффициента СОД/{гидроперекись-100) от здоровой группы к 1-ой (от 7,2 до 2,6). Следовательно, чем выраженнее БФУ, тем относительно больше увеличивается содержание — ГП в крови в.сравнении с повышением активности СОД. После же нагрузки этот коэффициент, снижается вр всех ; группах исследованных, причем не только больных с БФУ, но и без него, а также у здоровых лиц. Очевидно сама физическая нагрузка, усиливая ПОЛ, вызывает некоторый физиологический дисбаланс в этой системе, а у больных с БФУ усиление ПОЛ превосходит компенсаторное увеличение активности фермента СОД.

Активность ферментов каталазы и пероксидазы во всех группах больных оказалась несколько сниженной по отношению к контролю. После же нагрузки, в отличие от СОД, происходит достоверное их снижение в первых 3-х " •группах, причем степень снижения пропорциональна степени бронхоспазма: она наибольшая в 1 и 2 группах, наименьшая в III группе и отсутствует в .!4-й группе. В контрольной группе изменения в уровне активности ферментов, как и в 4-й группе, практически не происходило. В связи с этим и при заметном увеличении. ГП, происходит резкое снижение катпалаза/(ГП-100), пероксидаза/( ГП-100), что свидетельствует о возникающей при нагрузке относительной недостаточности ферментов.

Таким образом, несмотря на разнонаправленное изменение СОД с одной стороны, и каталазы, пероксидазы с другой, соотношение их к ГП уменьшается во всех группах больных, как и у здоровых. Последнее свидетельствует о том, что при нагрузке, как в группе больных, так и у здоровых, возникает определенный дисбаланс в системе ПОЛ - АОА. Анализ материала показывает, что до нагрузки он значительно больше выражен в 1-2 группах. После же нагрузки он углубляется

в. наибольшей степени также в этих группах. Очевидно гиперреактивность бронхов при Б Л. выявляемая при физической нагрузке, находится в связи как с уровнем гистамина и ПОЛ, так и состоянием компенсированности системы ПОЛ - АОА. ■ В . связи с этим приведенные коэффициенты также могут быть использованы в качестве показателей реактивности тучной клетки, а, следовательно, и гладкых мышц бронхов. -

Приведенные выше данные указывают, с одной стороны на взаимосвязанность реактивности бронхов, тучных клеток и дисбаланса системы ПОЛ - АОА в патогенезе БФУ, а с другой - нй возможность определения степени гиперреактивности бронхов (ДОФВ^ без выполнения нагрузочЕЮЙ пробы по % отклонению .уровня гистамина и гидроперекисей в" крови от нормы и. в особенности, по коэффициенту Г/(ДОФВ} ОФВ,). Определение коэффициентов ДГ/ДГП. после нагрузки может дать дополнительную информацию о ^'пороге чувствительности тучньгх клеток и. косвенно, о состоянии гиперчувствительности бронхов. Описанные метаболические изменения при БФУ идентичны сдвигам, происходящим при приступе БА. Оки заключаются в увеличении гистамина в крови, усиления ПОЛ. компенсаторном повышении актизкости фермента СОД. Последнее указывает на то, что механизм БФУ связан, главным образом, не с местными процессами в бронхах, вызванными гипервентиляцией и охлаждением поверхности, а общими сдвигами, обусловленными самой мышечной работой, которая и у здоровых лиц, а также у части больных без БФУ. приводит к заметному усилению ПОЛ, дисбалансу его с антиоксидантной системой, активации тучных клеток и усиленному высвобождению медиаторов. При повышенной, в связи с этим, реактивности бронхов у больных БА становится возможным развитие БФУ.

26 " -

ВЫВОДЫ

1. Общим для инфекционно-аллергической и смешанной форм бронхиальной асмы является их зависимость от выраженности воспалительного процесса в бронхах. Это позволяет объединить их в одну форму - инфекционно-зависимую. .

! 2. Концентрация гистамина крови в системе ПОЛ-АОА при I БА и ХАБ взаимосвязана и является показателем тяжести течения заболевания.

3. Соотношение прироста гистамина в крови (в %) к приросту ПОЛ (в %) отражает тяжесть течения заболевания при Б А и ХАБ.

4. Активация клеток и их дегрануляция характерна не только для АБА, но и для ИЗБА.

о. Усиление ПОЛ мембран тучных клеток является важнейшим альтернативным механизмом активации тучных клеток.

6. Усиление ПОЛ в мембранах тучных клеток снижает порог чувствительности клеток в отношении их естественных активаторов.

7. Показатель . Дгистамин/ДПОЛ отражает чувствительность тучных клеток' в отношении естественных либераторов гистамина (ПОЛ).

8. Посредством вычисления ■ . коэффициента (Гистамин-100)/( {ДОФВуОФВвозможно определение готовности к БФУ, иными слонами, чувствительности больных к. физической нагрузке в виде бронхосназма.

9. Механизмы развития БФУ обусловлены не только мескыми процессами, но и. в основном, общими изменениями метаболизма, связанными с мышечной работой. .

Практические рекомендации

1. Коэффициент, полученный от соотношения прироста гистамина крови (в %) к приросту ПОЛ (в %) предлагается в качестве показателя тяжести течения-. БА.

г 2. Провокационная проба с дозирозанной физической нагрузкой рекомендуется в качестве адекватного метода диагностики Б А И ХАБ.

3. Коэффициент (Гистам1ш-ЮО) '{ДОФВгОФВ1) предлагается в качестве показателя,- прогнозирующего

■ повышенную чувствительность больных- БА . к физической нагрузке (без пробы ДФН).

4. Степень, бронхоспазма после ДФН (АОФВ:) предлагается з качестве косвенного показателя выраженное-;! патохимических изменений у сольных БА л ХАБ.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. К вопросу о связи иммунопатологии с. пёрекисным окислением лппидоз в патогенезе бронхиальной астмы.-Тезисы докладов второй конференции по проблемам физдао-химической __ биологии _и ' биотехнологии в медицине. 23-24 сентября 1986г. Ереван. 1986г. с:12 (в соавт. с Аматуни В.Г.. Наримановым М.З.. Погосян Е.Ш.).

2. Дис:гммуног.юбуликемия и гипергистаминемия при бронхиальной астме и хроническом астматическом бронхите.- Жури, эк спер, и клинич. медицины, т. XXVI, №1, 1986г.. с.40-45 (в соавт. с Наримановым М.З., Аматуни В.Г.).

3. К вопросу и влиянии физической нагрузки на бронхиальную проходимость у больных бронхиальной; астмой и хроническим астматическим бронхитом. -Журн. экспер. и клиннич. медицины, т. XXVI, 1986г., с.368-372 (в соавт. с Наримановым М.З., Аматуни В.Г.).

4. Взаимосвязь иммунопатологии с нарушениями в системе . перекисного окисления липидов - антиокислительная

активность в патогенезе бронхиальной астмы.- Сборникj научных трудов .- Перекисное окисление липидов в' норме и патогенезе различных заболеваний.- "Айастан",'. 1987г. (в соавт. с Аматуни В.Г., Наримановым М.З.. Погосян Е.Ш.).

i

о. Тучноклеточный механизм патогенеза бронхиальной астмы и перекисное окисление мембранйых липидов.-

. Тезисы 67-ой отчетной научной сессии ЕрМИ.- Декабрь

| 1988г.. с.23(на армянском языке).

[6. Иммуно-патохимические механизмы бронхоспазма от

I физической нагрузки у больных бронхиальной астмой.-; Тезисы 68-ой отчетной научной сессии ЕрМИ.- Декабрь^ 1988г.,с.62 (в соавт. с Аматуни В.Г., Наримановым "М.З., Захарян А.К.).

7. Тучноклеточный механизм патогенеза бронхиальной астмы и перекисное окисление мембранных липидов. -Тер", архив.- т.61, №3. 1989г.^~ с.34-37 (в соавт. с Аматуни В.Г.. Наримановьш М.З., Зильфяном A.B.).

8. Тучноклеточный механизм патогенеза бронхиальной астмы и перекисное окисление, мембранных липидов.-Тезисы 69-ой отчетной научной сессии ЕрМИ.- Декабрь 1991г., с.23 (на армянском языке).

9. Патохимические механизмы; бронхоспазма после физического усилия у больных бронхиальной астмой.-

Тер. архив.- т.64, Л7Я, 1992г., с.59-62 (в соавт. с Аматуни В.Г., ЗахарянА.К.. Акопян A.C.).' ~

Ю.Сравнителььные показатели гистамкла крови у больных с торакальной формой периодической болезни и атонической бронхиальной астмой во время рецидива, приступа и вне приступа.- Деп. в АрмНИИНТИ 1995г., №4, с.34 (в соазт. с Назаретяном Э.Е., Агаронян Ж.П., Мартиросяном Т.В.).

ШГФПФПМГ

ß-ngbpfi fupntifilpnïiuili n¿ uiqkgfijfili hfitlralixinLppiLUtibpfi infumiuôincjLluili Ii iqramâmnmqfimnLprm'u, {ili>qhu limli pnLcJuuili h{nTurahmpghp[i Jijihljrj IjmpImpnLpjniiíp lioifu Ii шпш? ftmtnifiuinlinLU - , hli ' ungfuiipiiljiiiti fipuimuiq fulirifip' hjn[ralir].nuppnti It hm^Imtuiuiiini.pjiii'li " qqnqli ршрЗр

• - Ъ£1[ш& hJuímtirpiLpfni.'u'Lihpfi ummliitantinl'i h"u

. ppnti^injji^ mupiímli (PU) Ii fupnlL{iI|mT4ral; ppntifufiuip, npiqbu -uiJI.- " n¿ ищЬд^гфЭД hfiT|ratiipLpjnLLiLihpïi (tuüjiqhum, хциМпи^Ьрпц, ppntijuntlp-niiruifilj ЬЭДшЪгргьррттЛх Ii шцЪ) ti •v.. .ti£t[uiö htitímlninLpTnLlilihpJi quipq-uigiiufu шргишЛф' pnpiu¡fiti upinfi рЬрпц_.ш]тцЬи tjn¿i[ui0 hpiiljhuiuijíüi uiJuinuihuipnLU"Uhp [H.H..Канаев 1980: H. P. Палеев 1982]:

Uju uituiiiil[bm.[iij ppnlijuaijfi'u uiupiíuiifi tí- {ирпЪ^ш^ши ' p[inli|ufiui{i шпшф[ бшЪр Ij^jT.liíiIjínlim'Li ЗЛф".:. {ирп"1ф1{ш1}шц ' uiupilaiuifili ppn1i|u[iuiTi(rjlIF) ui{uuiiii<?riiiquui<u ifinfuratiralimTfili ; jihjuin^qutibpfi nLunm"ümu{ipuiLili huipgn ¿fi Й í :Ij n ja g Ii n ¡_ и Jap íipmmraqnLpjnL'up Ii ш^и'Ьш^шЪпцзтпЛр:

IXjnLU ljnr[i-ffig, titrai} h^mliqnLpjnLVühpfi riLimLiIbinuJipiImli {uluj-fipp liuili ljmplinpinqnL¡'U

' ' апущщшЬщшЪпЖш'и {ulu^ip _t:_^txijui'ufi t. np PU-fi Ii t1 UP-fr

iqmuiámninqJitnnLppnb lifo huljiiijnilíin'u t ]uiiiipLiî

2p£uiuiimnfi ("il1 líuiopnLpjniAqi Ii рЪг^ш'иршцйи uijuiqha tjnyjuiö "tlinyiqfimkníi" {ipiiiiJjiiSuilin [W. W. .Holland, D. D. Reid .. 1965;G.M.Poluetal,,1980]: '

PU-nt{ ü fcUP-niJ hfi^uitiqnLpjni'u I}uiqt.[ni&nLpjnLl¡[i 2li2mu|mtnji oijJi ишррпт.ртш'й ii öjubprl hhxn ши}шдш_р}шй t pmqu'nipfu[ hhrjiliíiilj'uhpp ршц_ишитш hhrnimpimnLppiLlitthpnil

[В.Г. Аматунг: и др. 1977; 1979; 1980; D. P. Tashkin 1982; J. Е.

Hogkin et ab, 1984]: ----------------------- -

ЪЬрТрирпдфп? ш£]исппш1ф[т. tiiquimiuljti f hrLh¡_ nmnLiIliiULi|i¡ia[ ppr.lijiiiujfi'ü ширишф. 2ti¿rahbn¿inLp juili liniquijji, mupiiumifiíj rîuiiiin"uuil{ ü ^¿ишцшф'и ¿рэиЛнки upuigumli

Li ифнпшгртг^шр^г фпцЬрпш, filisiqhu Ъшй uiupiíuimfiíí ppnlifufiinji Ц-Ьицэпи! áuipiqbpfi qhpopujiqiiigiíuñi Ii

hnilinroguJiriTiilitninjfili ирт-тщпЛтгррп!: (á^-0-<0^hrauiní¡~pq[i gntgtulifi^ühpfi Ii mpjinli hfiuminiijitiji pmlitnljfi

^íniuIjunqralujxIra&nLpjnLlip ni. niJuminplvJJiniljiii'Li

фпфп[ш11ррть'и,иЬр|1 ImppinqjiijnLpjnLtip -qlimun{in]i3.ni.ií Ii ЗфцЭДш^пЛх

&mapinphnln[mönLpTmli ujrajuralilihpnLiî:

<hmrjqnmnLpjnLl.i'Lihi¡h ;{bpinLÍmLpniLtq] ЬштшЪшрЬрЬ[ t lïfi ¿шрр hhiniiijriplip ophuuwi!qi.r!Lpi!iL'iil;hp" nppiutí Ш1{Ь[р öinlip hli hfii[uiliipLpjjhti [}[(ilipl¡n-ra{iiinm.])j"iiijin[nqfiuil[rali

rapmmhu:juini-pj7u.ti'ühpp. Ii ' hhmlniipuip fili^WpjJin'h-uiLbpqf'iq

pnppnpüiali nu7qtmipjnLUp. rajlipuili mi[h[]i ouim t "Licilmö' fi{ii[m'Uri.'iihp{a aipiinli Ь[шшши{йф puitiinliJi aiîfi шииф£ш1ф Li iilO-fi líjivli hiptö Xjmiqfi fuqriLüp: Puigfi li^ijniöjig, hhmmq^nmnLpinL'Lilihpfi uiprj-jniAipnui upnpip{ni-ü t, np ppnlifulihpfi piplmpuiquiupíi и}шршриг p^iglibpfi p mqiu aplihpi i l и йЯ-Оф m.dhipigni.u[i phpnuí t hfiuuimiífriifi plmiljuiti Ihppmi^uimji^ihpfi titpjimilinifp tnjr| pghjlihpfi qq.uipiL'ünLpjTnTi fijhgu'mli:

4прЬ[!шдрпЪ ilhp^nLÖnLpmLlip gnqg t mi{h[. np Гфи:пшиф1ф ишТрир!].ш1{р гриц^ш^ uifiiqfi qbpqquijtmLpjiiiüp рЪршдпт], fu;pifUjf]l¡inlpuli Ji"u$hlpjfmti Ii frli$hlp.j]inli-iiiiiipqfil{ prqipnpnLuTihpfi cfuiuiutinil{, пшитщшшши^ииЛшх-и t nrquim -пшц.ЗДшрлф'и uqinghulihpfi utnuliuiIignLpjuiii inuuifiamltfili (plipmlmLU hli qnLquihhn), Ii np шгршл -ntrrqfiliuipiiifili

qhpogufiquignuí]! Ьи^шЪ Ъ^шЪш^гкрртЛ шЛф. fi"u¿ujtm pnppnpiujfiïi u|pnghüfi hhmuiqai frmi[mpíuñi, uijtuqhu ti ppntijiitilipfi iripS.rapjrariin'üplxhpIi iqrapuiptn pçfwlihpji n> uqhgfi^Jilj (n^fumili), mjipliinpuiliuiti dhJura^iiipfuhpnLiî:

<hmaiqin hhmm^nmnLpjnLliuhpii 2iimriLliuiIjL[ht_ hti , qfiuinnjinplnuî, npfi трщтЛфЪЬр^ ^hppiLdnLpjnLUp hmumrjphpitf limli РффцЪцЛЛр^ hhinniTpiinnuppiLlitibpIi unfjm^lxtipji hhin, gnLjg bli mijtii_, np upnpuipui pgjip'iihpîi raI{mJii['axTjriLiîp Ii hram|i^rat[hp&nLúp plmpri2 t n¿ ilfimjli UFlI-[itt uij[ tiinù MlPU-fiti:

Pjpinpunpitipfi ¿L^-O-li hui'i.tqfiimtlinLU t ирнршриг pg]i¿libp[i ш^иффидЛии mjtptiuipiiitimli, ns fuíriLti ^iimlinpmq.nLj'ü uhiumlifHpTLxtipJig íihbn: 1

<hmranninni.p¡TiL'u'uhpIi taj"[ ptuppntu M.IP-ni| Ii PU-ni[ h|i4ui1ii].'uhpji unin npqhu ppnlijuiuljülimlip rannwiEglinr^ tíni].h]_,

oqmmqnpÖL[h]_ t qnquiL[np[:[iiiö ^frqjílpiilíui'u

#

■дшЪршрЬп'цфд^гкррп'ц фпрдр: j •>

" итшдЦш& mtJjTiiílihpJig mljlihjili \ muplh^ . np PU-fi

draLÍuitiuiIj гририфф^шд £fn{]il]uiljmti &mbpmphnlit|ai5nLpjuiiíp

i

huijintiuiphpiJuiC' ррпЪрЛарр qbpqqiuilinLpjnLtip Ijuifuijiuö \ n£ iljiinjíi hfniiniiiufiljfi Ii ÁS-O-Ji иш1рирг[.ш1}{1д, шд limli <5Я-0-<0,Т1 hrailmlirapq{i IpuíiqhtmragJiiiijIitj: ЧшрЬф. t mulip, np грирпфлрфид 5>fiqfiljral{mli 0inüpaipfm"¡i:{iii0ni.pjiiili ppnlijuml{6"l{mlip{i

ühjumli[iqup Ijraqiiniö t n¿ ph ppnti¡utihp{i inhipmjjili tqpnghutihpfi h huí. npntip mnuBuilinLii hti о^шфп^ишЪш^т.ррн'и ш^иффпдй'иПГр nL ppnli]ulihpii uumhgiíraup, ui¡{_ plaqhuitmLp тЬцш^шрсГйрпф, u{injifuitiaii{npi[iii$ ñhltrj и^шЪшфЬ ш^ишшш bpni[: ^LbpçJjbu phpntu t d^O-Ji nLdhrprjutnli. Ixpui. ш11пш:[шишрш1{гпп1ртшЪ sO^l-Ji hhm. iqmpmpm pojiilibpfi raljmfn[nLpjuiii ршрЗршдишЪ Ii lihtmnipciliuiliuiti uil¡míii{ tipirphpfi Ihppmqinmumli nuihiiiiiguuiti: Ujuiq]ium[, I}inininpi[raö m^uinmralipfi uipqinLliptiLi! Ышршфпр t qmpitiL ranmprapljh[ hhinüjm¡_ qnp&bmlpnli hшЪitIшpшpшl¡щtI'ütipp,

1. Upjmli hJ-umraujilifi nn|b[giiLÎi}i Ii ¿M-O-Ji uri]b|_rjnLlijT; .. hmpmphpnupjuiu qnp¿uil[[ig'u _ шпщ^шрВДпш t ..npiqíiu PU-

fi йшЪрпьргшЪ; шиифлш'йр urpinuihinjmiin. gni_gfi¿:

2. ^пцшфлрфл? 5|ii{]iIjmI|m'Li бшЪрщрЬп'йфц&пцдтщ'й фпрлр

t oqmoiqnpdh^ npiqbu. PU-fi Ix I^UP-Ji ш]иь'1ш0шс[йш11 u|uipnp]iilfiuil{iii'ü tnhrpi^uiprîtipji

pniginhuijmnrL mnimjb[ hrauraiqminraujuralí тшррЬрш!||ъ mjumnpnouuiu uuiqpíis фпр.л:

3. <{шт1ф1ф Ii uipuiqmguiö raprnin^iíniu 0шфщ]1 (1 ilplj.) hmpmphpnLpjrati qnpöuiljfig'Li uniüKrapljifnLií . t oqmuiqnpöhL npqhu rpiipi^npt:[uiír фртф^ш^шЪ ^шЪршрЬпЪфлдпцагши Itljuimilmiíp pnntifu'Lihp{i qhpqqni¡linlf>[n lIi p IjmliJuuiüihuni]_gnLgra^Jio:

4. 0-nq;rai!npi|uiö ^ht^íjtnljiiñi ^шТфшршгифи^пьртпй-фц fihinn ppnli^unljOiiffiuoii uiuu:fi¿uilip шпиишрЩпш t прщЬи PU-m[ li .M.IF-ru[ hfiLfraliqlibpfi upnpngjiuiir-iljrali