Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Роль эстрогенов в индукции сарком матки у мышей 1,2-диметилгидразином

актуальность темы. Изучение механизмов индивидуальном (линейной, ,овой) чувствительности к канцерогенам - важная задача экспериментальной :ологии, которая требует создания моделей, адекватных для ее решения, тобные модели должны отвечать ряду требований (высокая частота опухолей егкая индукция опухолей) - наличие выраженных различий между разными [иями (видами). Наличие инбредных линий мышей дает широкие можности для изучения различий в чувствительности к канцерогенам. Давно чествующие линии мышей с известным генотипом и генетически репленными реакциями на внешние воздействия могут рассматриваться как ельные индивидуумы, хотя и внутри линий имеют место количественные ебания в ответных реакциях.

5 лаборатории канцерогенных веществ НИИ канцерогенеза РОНЦ им. 1.Блохина РАМН получена экспериментальная модель саркомы матки шей, отвечающая этим 'требованиям - значительные различия между линиями шей в индукции опухолей 1,2-диметилгидразипом (ДМГ) (высокая частота [.уцированных сарком матки у одних линий и полное или почти полное утствие у других), а также проверенная многолетними опытами производимость модели. Так, у мышей линий СВА и СЗН эта опухоль никает в высоком проценте случаев, а при тех же условиях у мышей линий 1А, С57В1/6 не развивается вообще или развивается очень редко [Turusov V.S. I., 1982J. При комбинированном действии ДМ Г с эстрогеном отмечено резкое ление индукции этой опухоли, а при комбинации с прогестероном резкое м ожени е [Ирд Е.А. и соавт., 1979]. Указанные факты позволили дположить, что имеющиеся выраженные линейные различия в частоте !укции сарком матки ДМГ могут быть обусловлены особенностями монального статуса у мышей различных линий.

Морфологическая характеристика этой опухоли была дана ранее [Turusov V.S. il., 1993]. В большинстве случаев речь идет о 'злокачественной фиброзной гиоцитоме, реже встречаются стромальная или недифференцированная сома [Turusov V.S. et al., 1993; Turusov V.S., Kondalenko V.F., 1993; chanova L.S. et al., 1998]. л я анализа результатов не только экспериментальных, но и цемиологических исследований в настоящее время используется гипотеза гостадийного канцерогенеза, в частности, о двухстадийном развитии холей. В течение первой стадии (инициации) происходит индукция реждения ДНК и трансформация нормальной клетки в опухолевую. На тяжении второй стадии (промоции) происходит пролиферация сформированных клеток, приводящая к образованию опухоли. Далее исходит развитие индуцированных генотипических и феногипических енепий, то есть дальнейшая прогрессия опухоли. Агенты, реализующие эту щю, называют промоторами. Очевидно, концепцию двухстадийного церогенеза следует рассматривать лишь как рабочую схему, позволяющую делить индукторы и модификаторы развития опухолей по механизмам их зтвия: инициаторы являются генотоксическими агентами, а промоторы ^токсическими свойствами, как правило, не обладают [Cairns J., 1982; Faber 1984; Slaga Т.J., 1980]. Данная концепция подтверждена на клеточных ьтурах [Barrett J.С., 1985]. Термины инициация и промоция были предложены ее 50 лет назад, но они продолжают широко использоваться в специальной гратуре до настоящего времени [Ruttemann G.R., 1995; Shibata М.-А. et al., 7], поскольку позволяют разграничить разные стадии канцерогенеза и дерогены различного механизма действия. вухстадийная гипотеза многократно продемонстрирована на моделях гелиальных опухолей: опухоли кожи - ДМ Б А (инициатор) и ТФА (промотор) Л we 11 R.K., 1984; DiGiovanni J. et al., 1992]; печени - ДЭНА и ФБ [Witschi , 1983]; легких - уретан и ТФА [Witschi Н.Р., 1983]; кишечника - ДМГ и чные кислоты [Турусов B.C., 1985]; мочевой пузырь - НММ и сахарин ien S.M. et al., 1987], но на соединительно-тканных опухолях практически не тлась. эгласно гипотезе многостадийного канцерогенеза гормоны могут аудировать пролиферацию клеток, чувствительных к повреждению ДНК, и гок уже подвергшихся этому повреждению [Ruttemann G.R., 1995]. Однако не о уделено достаточного внимания промоторным свойствам гормонов, хотя и ются данные но их влиянию на эпителиальные опухоли молочной железы и ки [Картавова II.С. и соавт., 1986; Niwa К. et al., 1991]. Недостаточно чсны и механизмы действия половых гормонов на химический канцерогенез, [висимость индукции саркомы матки у мышей от гормонов позволяет ользовать эту модель не только для изучения механизмов их .ифицирующего действия, но и факторов, определяющих линейные различия индукции опухолей. читывая выраженные линейные различия в частоте индукции сарком матки и -юимость ее от половых гормонов, представляется актуальным изучение: 1) и гормонального статуса в чувствительности различных линий мышей к ствию канцерогенов и 2) механизмов действия эстрогенов на опухолевый г. ель работы - исследование влияния экзогенных и эндогенных эстрогенов на уцируемый химическим канцерогеном саркомогенез матки у мышей шчных линий; изучение уровня рецепторов эстрогенов в процессе номогенеза с целью выявления механизмов линейных различий в частоте укции этой опухоли, работе поставлены следующие задачи: выявление действия эстрогенов на стадию инициации и стадию промоции •сомогенеза матки у мышей. Роль дозы эстрогена и ее фракционирования. 1опытка индукции сарком матки у резистентной линии мышей СЗНА при ощи комбинированного воздействия ДМГ и эстрогена.

Гзучение чувствительности матки мышей к эстрогенам и сопоставление ее с ейными различиями в индукции сарком.

Изучение изменения уровня рецепторов эстрогенов в матке мышей линий, шчающихся по своей чувствительности к индукции сарком в этом органе.

Изучение пренатального воздействия эстрогена па саркомогенез, 1,уцированный ДМГ у мышей-потомков.

Научная новизна работы зучение биологических свойств новой экспериментальной модели 1уцированной ДМГ саркомы матки у мышей. В работе впервые был изучен моторный эффект эстрадиола дипропионата на индуцированные ДМГ комы матки у мышей. Впервые удалось индуцировать опухоли матки у истентной линии мышей СЗНА. Показано, что матка чувствительной линии шей СБА намного восприимчивее к действию физиологических доз рогена, чем матка резистентных к индукции сарком линий мышей (СЗНА, /В1/6). Использование этой модели позволило впервые определить уровень ^плазматических рецепторов эстрогенов в матке в процессе саркомогенеза у шей. Показано, что уровень рецепторов эстрогенов в цитозоле матки у ;ствительной линии мышей выше, чем у резистентной. Впервые показано, что -шческий канцероген (ДМГ) обладает способностью повышать уровень ^плазматических рецепторов эстрогенов в матке у мышей. Модель была юльзована для изучения пренатального воздействия синтетического гормона •тилстильбэстрола. Впервые показано, что пренатальное воздействие ДЭС зывает значительное влияние на чувствительность мышей к ДМГ: у мышей (ии СВА существенно повышена частота развития сарком матки, у мышей ши СЗНА наблюдалось значительное торможение развития геморрагических >ажений яичников. Показано, что пренатальное воздействие ДЭС вызывает чительные нарушения эстрального цикла, что выражается длительной фазой руса или персистирующим эструсом. работе также исследовали влияние гормонов на другие опухоли, (уцированные ДМГ. Обнаружены новые гормонозависимые опухоли, ;ываемые ДМГ (ангиомы яичников и опухоли добавочных половых желез).

Научно-практическая значимость Впервые показана роль уровня рецепторов эстрогенов в генетически словленной чувствительности организма к индукции опухолей химическими

10 церогенами в гормонозависимых органах (в данном случае в матке), что кет послужить основанием для изучения механизмов линейной ствительности к индукции других опухолей. iBa 1. швыс стероидные гормоны и саркома магки у экспериментальных io I пых и человека (обзор данных литературы).

Саркома матки у женщин.

Гаркомы матки - редкие опухоли, составляющие 1-1,8% от всех качественных опухолей этого органа у человека [Hoovis M.L., 1970; Wollch Д al., 1999]. Этиология в большинстве случаев неизвестна. Повышенный риск ечен после терапевтического применения ионизирующей радиации по оду рака шейки матки [Бехтерева Е.И. и соавт., 1986; Czesnin К. et al., 1978]. гистологической структуре эти новообразования разделяются на эмальные саркомы, лейомиосаркомы и смешанные мюллеровские опухоли щиносаркомы) [Shimm D.S. et al., 1984].

Эпидемиологические исследования показали, что риск возникновения комы матки выше у нерожавших женщин и уменьшается с увеличением ичества детей, родившихся у женщины. Повышенный риск отмечен у щин с частыми спонтанными выкидышами, при позднем наступлении архе и ранней менопаузе [Shcwartz S.M. et al., 1990]. Хотя результаты этих тедований не всегда совпадают в деталях, они, тем не менее, свидетельствует юли гормонального статуса организма в возникновении сарком матки, зрые, таким образом, ведут себя скорее как гормонозависимые опухоли, а не обычные саркомы мягких тканей. асхождения в оценке роли репродуктивного статуса выражаются в том, что данным одних исследователей наиболее гормоночувствительной является эмиосаркома, по другим - все три вышеуказанных гистологических типа тфуют одинаково на перечисленные факторы. В наиболее крупном цемиологическом исследовании [Shcwartz S.M. et al., 1991] наименьшую 1симость от гормонального статуса проявили смешанные мюллеровские сомы матки. Однако другие авторы [Lantta М. et al., 1984] утверждают, что не саркомы матки человека являются гормоночувствигельными. При пределении рецепторов эстрадиола (РЭ) и рецепторов прогестерона (РП) зказано, что высокодифференцированная лсйомиосаркома матки содержала оба ша рецепторов, а низкодифференцированная лейомиосаркома не имела РЭ и Л. РЭ обнаруживали также в лейомиомах [Benassayag С. et al., 1999].

2. Саркомы матки у мышей.

Впервые спонтанные саркомы матки у мышей были описаны Slye в 1917 году lye М. et al., 1917; Slye М. et al., 1924]. Автор обнаружил 7 мышей с саркомой ггки среди 39000 обследованных животных. О случаях развития сарком матки кже сообщали [Gardner W.V. et al., 1948; Guerin M., 1954; Strong L.S., 1938; alinin G.J., Malinin 1.М., 1972; Dawson P.J. et al., 1974; Stewart H.L. et al., 1974].

Описано 130 опухолей матки, происходящих из стромы эндометрия у старых лшей. В основном эти опухоли локализовались либо в теле, либо в рогах >гана [Chouroulinkov 1. et al., 1969].

В доступной нам литературе удалось найти всего несколько сообщений об щукции сарком матки у экспериментальных животных. При этом известны 3 особа индукции этих опухолей: а) введение гормонов, б) местное и в) стемное воздействие химических канцерогенов. Введение гормонов.

Саркома возникла у одной из 32 мышей, получавших прогестерон в течение 13 :сяцев. В другом опыте эти же авторы нашли саркомы у 15 из 142 мышей, лучавших прогестерон в течение 18 месяцев [Lipshcutz A. et.al., 1966]. У 26 из 42 мышей-гибридов (С57В1 х DBA)F1 через 10 месяцев после начала едсния тестостерона пропионата [ Van Nie R. et al., 1961] обнаружили опухоли тки. Авторы указывают, что ранние изменения выражались в появлении глков в стромс эндометрия.

Homburger F. et al. (1957) сообщили, что у 5 мышей Swiss и 1 мыши Balb/c зникли саркомы в результате комбинирования введения тестостерона и ложения лигатуры на шейку матки, приводившее к развитию гидрометры. понтанная саркома матки была найдена ими только в одном случае из 25000 ышей этих линий. астрированным самкам мышей линии GR вводили подкожно пилюли с эогестероном и давали с питьевой водой эстроген. Через 14 недель были знаружены саркомы матки [Briand P. et al., 1981]. | Местное воздействие канцерогенами.

Baba and E.von Haam (1967) имплантировали 20-mci илхолантрен в малку и элучили лейомиосаркомы и несколько карцином у мышей линии B6D2, у )торых была высокая частота спонтанных сарком матки. При аутотрасплантации ткани шейки матки в подкожную клетчатку мыши 4есте с желатиновой пилюлей, содержащей метилхолантрен, наряду с юскоклеточпым раком, была индуцирована полиморфноклеточная саркома ^моджолов С., 1972]. Системное действие канцерогенов.

Terracini V.S. el al. (1976) обнаружили фибромиомы и фибросаркомы у 21 из старых самок C3Hf/Dp, которым вводили однократно 25 или 50 мг/кг НММ в '-дневном возрасте. Введение НММ в возрасте до 70 дней и в дозе 50 мг/кг (ухолей матки не вызывало.

Как показывают данные литературы, спонтанные саркомы матки у мышей тречаются довольно редко, а способов индукции этих опухолей в высоком юценте случаев в ранние сроки Tie существует.

Легкая воспроизводимость индукции сарком матки была продемонстрирована линии мышей СВА в нашей лаборатории. Саркома матки была впервые наружена в эксперименте, поставленном в лаборатории канцерогенных ществ с целью изучения опухолей толстой кишки, вызываемых ДМГ. У самок ■цлей линии СВА, получивших 25 еженедельных подкожных инъекций ДМГ в зе 8 мг/кг массы тела, к 30-й неделе опыта, помимо ожидаемых опухолей петой кишки, выявлялись и опухоли матки. Они возникали в 40-50% случаев, отологическое исследование показало, что эти опухоли имеют зенхимальное происхождение [Turusov V.S. et al., 1977]. В последующем было жазано, что часть мезенхимальных опухолей матки морфологически весьма одна с эндометриальными стромальными саркомами женщин [Turusov V.S. et ., 1993], тогда как другие опухоли имею г черты злокачественных фиброзных стиоцитом, встречающихся у человека в различных органах [Turusov V.S., 3ndalenko V.F., 1993], но не в матке.

Схема введения ДМГ (8 мг/кг еженедельно), при использовании которой рвоначально обнаружили саркомы матки, оказалась весьма эффективной и югократно использовалась для индукции этих опухолей у мышей СВА. ДМГ' ляется канцерогеном непрямого действия и метаболмзируется в основном в чени и почках. K.M.Pozharisski et al. [1976] предложили схему возможных "гей метаболизма ДМГ. ДМГ дегидрогенирируется с образованием азометана. юметан в дальнейшем может подвергаться трем путям превращения: 1-й путь -молитический распад до азота и метального радикала; 2-й путь — окисление с разованием азоксиметана, конечный продукт карбониевый ион (СН3Т); 3-й ть - а-С-гидроксилирование азометана с конечным образованием метального дикала (СН3). Авторы полагают, что последние два пути наиболее вероятны, юкольку эти продукты образуются в результате метаболизма ДМГ в печени, зедполагается, что в печени образуются коньюгаты метаболитов ДМГ, которые ювобождаются в тронном органе. Возможно, что в тканях тропных органов 1еются ферменты, необходимые для образования метаболита ДМГ, тилирующего ДНК этих органов. Основными алкилированными продуктами -Ж после воздействия ДМГ являются 7-метилгуанин и 06-метилгуанин ихачев А.Я., 1980]. Известно, что 06-метилгуанин образует комплементарную пару с тимином вместо цитозина в процессе репликации IK [Tawley P.D., 1974, Bartsch Н., et al., 1983]. В результате этого такое тилированное основание ДНК приводит к традиционной мутации G:C—»А:Т orsfall M.J., et al., 1990], а, следовательно, к измененному генотипу. ДМГ пользован в данной работе.

3. Генетические факторы в развитии опухолей и линейные различия в щукции опухолей у мышей.

В настоящее время не вызывает сомнений важная роль генетических 1кторов в возникновении опухолей человека и животных. Однако эта роль в ношении разных опухолей значительно отличается. В возникновении ряда ухо леи человека (ретинобластома, нефроблас тома, семейный полипоз толстой лики и др.) генетическим факторам принадлежи т решающее значение [Fleiszer et al., 1988]. В отношении других опухолей вопрос более труден, и не всегда но, является ли возникновение опухоли результатом действия больших доз нцерогена (например, производственного), повышенной генетической вствительности к действию данного канцерогена или делом случая. )зможности для изучения генетических механизмов, определяющих [дивидуальные различия в чувствительности к возникновению опухолей, юдсгавляют опухоли лабораторных животных - спонтанные и индуцированные гмическими канцерогенами. Большие различия в частоте спонтанных опухолей ;жду инбредными линиями хорошо известны. 'Гак, у самцов мышей линии А стота аденом легких, а у линии СЗН опухолей печени достигает 100%, тогда к у некоторых других линий частота этих опухолей низка или вообще сутствует (например, С57В1/6) [Drinkwater N.R., Ginsler J.J., 1986; Malkinson M. et al., 1985]. Высокая частота опухолей толстого кишечника, [дуцированных ДМГ, наблюдается у мышей линии STS/A, тогда как линия \LB/cHeA резистентна к развитию этих опухолей [Moen C.J.A. et al., 1996]. веется параллелизм между частотой спонтанных опухолей и вствительностью к индуцированному канцерогенезу [Drinkwater N.R., Ginsler .,1986].

Человеческая популяция гетерогенна, и, в отличие от названных инбредных ний мышей, частота опухолей отдельных локализаций низка, обычно не выше, как правило, ниже 1%. Поэтому идентификация факторов и механизмов, ветственных за наследуемую предрасположенность к возникновению льшинства опухолей у человека, бывает трудна. Однако имеются спериментальные возможности для изучения проблемы индивидуальной 'вствительности к возникновению опухолей, как уже указывалось выше, при шользовании ипбредных линий мышей.

Опухоли толстой кишки у лабораторных животных встречаются редко, но гко индуцируются ДМГ [league С.A. et al., 1981; Moen C.J.A. et ai., 1996]. А'чение частоты этих опухолей v линий чувствительных и резистентных к их щукции, их гибридов F1 и F2 позволило сделать вывод о том, что ■вствительность к индукции опухолей толстой кишки контролируется одним тосомнодоминантным локусом [Evans et al., 1977]. Показано, что на мышиной юмосоме 12 существует локус Ccsl, который влияет на чувствительность ппечного канцерогенеза [Jacoby R.F. et al., 1994]. У мышей, чувствительных к щукции опухолей толстой кишки, выше индекс метки и шире юлиферативный компонент кишечных крипт, чем у контрольных мышей. гщако в дальнейшем было показано, что не один ген участвует в регуляции [шечного ДМГ-канцерогенеза [Fleiszer D. et al., 1988]. Кинетика слизистой Ешечника является комплексным процессом, регулируемым взаимодействием да клеточных систем, каждая из которых, в свою очередь, регулируется уппой генов. Е1редполагается, что различия в метаболизме веществ является (ичиной линейных различий в чувствительности к развитию опухолей толстой тики у мышей. Степень алкилирования ДИК ДМГ коррелирует с вствительностыо или резистентностью к развитию опухолей. Метаболизм VIГ в его непосредственный канцерогенный метаболит является также мплексным процессом, который регулируется несколькими энзимными стемами, которые, в свою очередь, контролируются комплексом определенных нов [Fleiszer D. et al., 1988; Delker D.A. et al., 1996]. Степень повреждения -IK, вызванная ДМГ, также коррелирует с линейной чувствительностью к \4Г-индуцировапным опухолям кишечника. Очевидно, что эти сложные •ханнзмы контролируются не одним, а несколькими или многими генами.

Jacoby R.F. et al. [1994) показали, что локус Ccsl, контролирующий вствительность кишечного канцерогенеза у мышей, влияет на прогрессию

1звития опухоли, а не на стадию инициации. Причиной линейных различий в >зникновении опухолей толстой кишки является супрессия прогрессии шциированных колоноцитов в кишечную неоплазию у мышей линии 57В1/6На. в то время как генетические факторы у линии ICR/Ha промотируют in недостаточно супреесируют эту прогрессию [Jacoby R.F. et al., 1994]. Путем получения гибридов от скрещивания чувствительных и резистентных к патоканцерогенезу линий мышей выявлен локус Hcs (Hepatocarcinogen nsitivity), контролирующий чувствительность к возникновению опухолей ■чени. Этот контроль осуществляется путем регуляции скорости роста )енеопластических узелков [Poole Т.М. et al., 1996]. Путем анализа южественности аденом легких у мышей, чувствительных и резистентных к ■точному канцерогенезу и их гибридов, выявлен локус ptr (pulmonary tumour sistance), ответственный за резистентность. Выявлены 'также три локуса, >нтролирующих чувствительность к легочному канцерогенезу - Pas-1,2 и 3 ulmonary adenoma sensitivity) [Malkinson A.M. et al., 198:5]. Следует упомянуть о двух экспериментальных моделях генетической вствительности: крысиная модель Eker и мышиная модель Min. Eker & ossige в 1961г. [Eker R., Mossige J., 1961] описали спонтанную мутацию у блинии крыс Wistar, которая предрасполагала животных к развитию рака >чки и передавалась как аутосомный доминантный признак. У гетерозиготных ыс, несущих эту мутацию, уже в 10-12 месячном возрасте обнаруживается рак 'чки и, кроме того, лейомиосаркомы матки и гемангиосаркомы селезенки, ляснено, что мутация локализуется на 8-й хромосоме [Everitt J. et al., 1992; naki К. et al., 1991]. Крысы с указанной мутацией в десятки раз чувствительнее индукции рака почки диметилгидразином, чем обычные крысы [Walker С. et , 1992].

Модель Min - искусственно выведенная линия мышей с высокой частотой онтанных опухолей толстой кишки /Mouse Intestinal Neoplasia/. Еен, ветственный за развитие опухолей, локализован на мышиной хромосоме 18 и гтяется гомологом человеческого гена супрессора при семейном полипозе шстой кишки [Moer et al., 1992]. Мыши Min и крысы Eker гетерозиготны по >ответствующим генам, в случае же гомозиготности животные погибают.

Гетерозиготность характерна и для наследственной предрасположенности к феделенным опухолям человека, за что ответственны гены, подавляющие рост 1ухолей. При таких наследственных опухолях первое повреждение в локусе на-супрессора является наследуемым, а последующие соматические )вреждения нормального аллеля ведет к подавлению функции гена и клеточной 'ансформации. Гетерозиготность в экспериментальных моделях делает •зможным изучение процессов, ведущих к инактивации нормальной аллели. Генетические факторы могут участвовать в злокачественной трансформации етки не напрямую, а влиять опосредованно через систему метаболизма нцерогенов. Локус Ah на мышиной хромосоме 12 контролирует [дуцибельность энзимов, метаболизирующих канцерогены [Nebert D.W. et al., '91]. У инбредных линий мышей с легко индуцибельной системой канцерогены тстро превращаются в реактивные формы, взаимодействующие с ДНК клеток-пненей. В противоположность этому у резистентных мышей активация нцерогенов подавлена, и опухоли при тех же условиях развиваются редко или развиваются вообще. Гены, контролирующие метаболизм канцерогенов, носятся к группе генов-модификаторов. Использование гибридов между :бредными линиями позволяет идентифицировать эти гены у мышей, шкретные механизмы генетического контроля тканевой и клеточной вствительности к развитию опухолей является вопросом, мало изученным в стоящее время. У мышей линии A/J с высокой частотой спонтанных опухолей гких большинство их возникает из альвеолярных клеток 2-го типа, тогда как у :шстентных мышей ВАГВ/с - из клеток Клара [Wanget et al., 1990].

I. Зависимость индукции сарком матки и опухолей других локализации половых гормонов.

Другая область, где проявляет себя генетический контроль - это опухоли, шикновение и развитие которых в той или иной степени связано с действием рмонов. Известны половые различия в частоте опухолей, как человека, так и

1вотных.

У человека опухоли большинства локализаций чаще встречаются у мужчин, тя всегда следует учитывать возможную поправку на производственные нцерогены и вредные привычки, которые в возникновении опухолей у мужчин рают большую роль, чем у женщин. Приводятся следующие коэффициенты ношения частоты опухолей у мужчин и таковой у женщин: носоглотка и совые пазухи - 2,8 и 2,0, желудок - 2,1, кости - 1.7, глаз - 2,4, болезнь )джкина и миелоидные лейкозы - 1,8 и т.д. Только в отношении опухолей тговидной железы и желчного пузыря этот коэффицент меньше 1 (0,5 и 0,7, ответственно) [ Armstrong В., 1982].

Сходные закономерности имеются и у лабораторных животных, у которых стога опухолей у самцов, как правило, выше, чем у самок, например, аденомы эак печени, а также эпителиальные опухоли почек у мышей, опухоли толстого шечника [Teague С.A., et al., 1981]. Но опухоли гипофиза у некоторых линий ыс значительно чаще встречаются у самок.

ДМГ - канцероген, известный своей избирательной способностью дуцировать опухоли толстой кишки [Turusov V.S. et al., 1982]. В спериментах, проведенных Турусовым и соавт. [Turusov V.S. et al., 1982], казаны линейные различия в частоте индуцированных ДМГ опухолей толстой шки у мышей, однако, эти различия никак не были связаны с таковыми в ношении опухолей матки и яичников, то есть, возможно, последние были условлены действием какого-то единого фактора (вероятнее всего, рмонального), не действовавшего на опухоли кишечника.

Легкая воспроизводимость индукции сарком матки введением ДМГ была одемонстрирована на линии мышей СВА, у которых их частота достигала 40% [Turusov V.S. et al., 1982]. Введение ДМГ по той же схеме мышам других ний выявило значительные различия в частоте индукции сарком матки и уюррагических поражений яичников. Из данных таблицы 1 следует, что у ний мышей с высокой частотой индуцированных сарком матки уюррагические поражения яичников (ГПЯ) возникают редко или не возникают все. И наоборот, линии мышей с высокой частотой индуцированных ДМГ 1Я имеют низкую частоту возникновения сарком матки. Подобной обратной язи в частоте опухолей других локализаций не обнаружено (табл. 1).

Е.А.Ирд и И.О.Смирнова (1979) показали, что эстроген усиливает, а огестерон тормозит индукцию сарком матки у мышей линии СБА. В этом ыте ДМГ вводили еженедельно в дозе 8 мг/кг, a ja сутки до введения нцерогена - эстрадиола дипропионата в дозах 10 мкг/мышь и 2 мг/мышь 1 7-а огестерона канроната. Мыши были разделены на 8 групп: 1-я получала ДМГ, т - ДМГ+эстроген, 3-я - ДМГ+прогестерон, 4-я - ДМГ+форсированное змножение, 5-я - ДМГ+нормальное размножение, 6-я - контроль -размножавшиеся, 7-я - эстроген, 8-я - прогестерон. Мышей забили через 37 дель после начала опы та. Частота возникновения сарком матки была наиболее сокой 97% в группе, получавшей ДМГ в сочетании с эстрогеном, тогда как в уппе, получавшей только ДМГ, опухоли возникли у 56%.

Прогестерон снижал их развитие до 15%, а при многократных беременностях [вотных опухоли вообще не возникали. Кроме того, эстрадиол значительно корял развитие сарком матки (первые саркомы обнаружены через 20 недель и комбинированном воздействии и через 30 недель после введения одного ЛГ) и темп роста опухолей был в 2 раза выше.

В другом эксперименте, поставленным В.С.Турусовым и соавт. (1979), учали влияние беременности и возраста мышей на индукцию сарком матки, ем группам мышей в течение 30 недель вводили ДМГ в дозе 8 мг/кг. В 1-й /ппе использовались 3-х месячные мыши, во 2-й - 12-и месячные, а в 3-й /ппе самки, постоянно находившиеся с самцами в течение 30 недель. Первые жомы матки у старых мышей были найдены при вскрытии на 8 недель ньше, чем у молодых. Через 31 неделю, когда в группе старых мышей уже ло найдено 7 опухолей, у молодых они еще отсутствовали. Таким образом, ело место значительное ускорение развития сарком матки у старых мышей, 'нечная частота сарком матки у молодых и старых мышей была одинаковой

21 из 29 - 48,3%, и 21 из 46 - 45,6%, соответственно). Беременность значительно ижала число сарком матки до 10,3% (3 из 29) по сравнению с группами лодых, старых и кастрированных животных (48,3%, 45,6% и 41,4%, ответственно). Эти опыты описаны подробно, так как их результаты имели льшое значение для нашей работы.

Таблица 1. Частота сарком матки и сосудистых поражений яичников, индуцируемых у мышей различных линий 1,2-диметилгидразином (Turusov V.S. et al., 1982) шин мышей Частота поражений, %

Матки Яичников толстой кишки сзн 37,5 6,0 75,0

СВА 40,7 3,7 70,4

C57BL/6 2,7 35,1 59,4 xC57BL/6)Fl 20,7 17,2 79,3

СЗНА 0 85,7 30,9

BALB/C 0 46,7 93,3

Данные о влиянии половых гормонов на канцерогенез кишечника ногочисленны и несколько противоречивы. По данным К.М.Пожарисского и .Анисимова (1975) у беспородных крыс и крыс BD-1X опухоли прямой кишки действием ДМГ в 2,8-3,1 раза чаще, возникали у самок, чем у самцов, а грация сглаживала эти различия. Другие авторы [Barbolt Т.A., Abraham R., Э], наоборот, находили опухоли толстой кишки (без указания точной ализации) значительно чаще у крыс самцов линии Spraque-Dowley, чем у □к.

В опытах Moon R.C. et al. (1977) кастрация не влияла на частоту шкновения опухолей толстой кишки, вызванных ДМГ у крыс самок, но жала ее у самцов, а введение эстрогенов кастрированным самцам :танавливало частоту возникновения опухолей до исходного уровня. ГМихеев (1987) показал, что беременность и лактация стимулировали шкновение опухолей толстого кишечника у самок крыс, индуцированных илнитрозомочевиной. McMichael A.J. et al. (1980) обнаружили, что эндогенные кзогенные половые гормоны влияют на риск возникновения рака толстой 1ки, но не непосредственно: эстрогены могут повышать, а прогестины ижать продукцию желчных кислот, являющихся промоторами ообразований толстой кишки. гзличные эетрогенные препараты лишь иногда вызывают развитие аденом ени у мышей: так, при введении смеси норэтистерона с этинилэстрадиолом 1) они возникали в 10% случаев [Poel W.E., 1966]. Вместе с тем у женщин при еме контрацептивов, содержащих эстрогены, отмечено много случаев штия доброкачественных аденом печени [IARC, 1979; Van Nie R. et al., 1961].

Канцерогенная активность 1,2-диметнлгидразина у экспериментальных штных.

Известно, что эпителиальные опухоли печени у мышей и крыс под действием Г, как правило, не развиваются, хотя ДМГ активно алкилирует ДНК ттоцитов [Swenberg I.A. et al., 1979; Лихачев Ф.Я., 1980]. При сочетании ДМГ щобарбиталом, вызывающему пролиферацию гепатоци гов, у крыс наблюдали азование иреиеопластических узелков в печени, не возникавших при действии ого ДМГ [Columbano A. et al., 1980]. При ежедневном введении крысам ДМГ, ываютцем, в отличие от еженедельного введения, резкие дистрофические енения в печени, найдено небольшое количество эпителиальных опухолей :ни [Пожарисский К.М. и соавт., 1978]. Единичные холангиокарциномы гподались иод действием ДМГ у мышей С57В1/6, у которых некротические и шераторные изменения сильнее, чем у мышей других линий [Крутовских

1980]. Isume Keisuke et al. (1980) наблюдали высокую частоту (около 100%) 'дистых опухолей печени у мышей после воздействия ДМГ. Кроме этих <олей, ДМГ способен индуцировать опухоли других локализаций: опухоли ж и почечных капсул у мышей [Turusov V.S. et al., 1985], опухоли почек у с [Sunter J.P., Senior P.V., 1983], опухоли анальной области, нрепуциальных и горальных желез у мышей [Turusov V.S., 1980], а также саркомы матки у 5ьян [Beniashvili D.Sh. et al., 1992].

5 ходе экспериментов, проведенных в лаборатории канцерогенных веществ 4 канцерогенеза РОМЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, были установлены тующие факты, послужившие основанием для проведения настоящей работы: 1висимость индукции сарком матки от половых гормонов; выраженные различия в частоте индукции опухолей, вызываемых ДМГ у ией различных линий.

Общие представления о связывании стероидных гормонов с белками-епторами.

Известно, что эстрогены обладают широким спектром физиологических ектов [Алешин Б.В. и соавт., 1973; Lindzey J., Korach K.S., 1997]. Эстрогены $ывают специфическое действие на половой аппарат и вторичные половые знаки женских особей. Эстрогены вызывают пролиферацию и ороговение гелия слизистой влагалища у грызунов. На этом свойстве основано гделение активности эстрогенов. Эстрогены способствуют росту матки в тод полового созревания. Под влиянием эстрогенов происходят пролиферация эметрия и гиперимия матки. Эстрогены оказывают значительное влияние на шчные ферментные системы матки и синтез белков в органах-мишенях, рогены способствуют росту фолликулов, стимулируют клеточное деление в ликуле, удлиняют жизнь желтого тела. Кроме этого, эстрогены влияют на /жные гениталии, молочные железы, центральную нервную систему, адают антимаскулиновым действием и многое другое. Наиболее общим ствием эстрогенов является способность вызывать эструс у животных, гивность различных эстрогенов определяется их способностью индуцировать у трированных мышей эструс [Алешин Б.В. и соавт., 1973]. Известно, что в организме животных и человека основным природным рогеном, вызывающим биологический эффект и запуск механизма ответа на действия во всех тканях-мишенях, является эстрадиол 17(3 (1 ■). Н2 )абатывается в основном половыми железами. Необходимо отметить, что I. \ цов и самок может вырабатываться в других тканях из тестостерона и ростен-3,17диона под действием ароматазы (эстрогенеинтетазы) [Lindzey J., "ach K.S., 1997|. Из места своего образования эстрогены поступают в кровь, где [ абсорбируются рядом белков. В органы и ткани они поступают после обождения их связи с белками. Многие исследователи считают, что (логически активными могут стать именно свободные стероиды, так как они собны проникать в клетки-мишени путем прямой диффузии [Сергеев П.В. и вт., 1995; Farnworth W.S., 1996; Wheeler M.J., 1995]. Эстрогены легко •никают внутрь клетки через мембрану и не требуют на первых этапах своего ствия специального медиатора (посредника), то есть плазматическая мембрана ает пассивную роль в передаче гормонального сигнала. Однако до сих пор звестен способ проникновения стероидов в клетку. Возможно, плазматическая тбрана играет не пассивную, а активную роль в проникновении стероидных монов в клетку [Rao G. et al., 1976]. В настоящее время существует гипотеза, в орой мембранный этап рассматривается как отдельная стадия реализации мональной и фармакологической активности стероидов, то есть существуют ^бранные рецепторы, способные связывать стероиды [Сергеев П.В. и соавт., 5; Rao G. et al., 1976].

Исследования последних лет показали, что на этапах реализации монального эффекта в клетке необходимым и ключевым этапом является /шодействие гормона со специфическим рецепторным белком. Рецептор - это клеточная белковая структура, выполняющая 2 функции: связывание гормона ием гормонального сигнала) и инициация специфического для данного лона эффекта, который запускает цепь биохимических реакций, приводящих к ггу клетки. Рецепторы стероидных гормонов, в частности эстрогенов, ыизованы в цитоплазме и ядре клеток. Связывание гормонов с белками-лтторами представляет собой спонтанный, обратимый! процесс образования Зой структуры - гормон-рецепторного комплекса, при этом только форилированный рецептор может связывать гормон [Beato М., 1986]. В гаком плексе рецепторный белок и гормон объеденены нековалентными связями, роид-рецегтторный комплекс переходит из цитоплазмы в ядро. В ядре плекс эстроген-рецептор эстрогена также претерпевает конформационные гнения и связывается акцепторными участками хроматина и инициируется тез специфических мРНК и белков [Farnworth W.S., 1996; CTMally B.W., 1984]. зывание конформационно-измененного комплекса эстроген-РЭ с зделенными участками связывания ДНК инициирует запуск механизма ответа :ок на действие стероида. В отсутствии эстрогена РЭ июлируются в пределах i и сохраняются в неактивной форме в ассоциации с белком теплового шока do K.W. et al., 1999]. Это так называемая классическая схема действия югена и клеток мишеней, основной принцип которой - в цитоплазме здятся свободные РЭ, и механизм запуска ответа на действие стероида ложен только после образования комплекса свободного РЭ с эстрогеном в эплазме с последующей транслокацией в ядро [Farnworth W.S., 1996]. Так как н эстрадиол не связывается с изолированными ядрами, очевидна роль эплазматических рецепторных белков: 1) образуют комплекс с гормоном, :печивая первичную аккумуляцию, 2) обеспечивают их транспорт из зплазмы в ядро [Розен В.Б., 1971].

Эсновным отличием рецепторных белков от других неспецифических лоносвязывающих белков является высокое сродство к определенному лону (или группе гормонов), избирательность сродства и ограниченная ывающая емкость в пределах физиологических концентраций. Связывание югена или сходного лиганда индуцирует конформационные изменения в РЭ, способствует гомодимеризации РЭ и высокую способность связывания РЭ со цифическими местами ДНК [Gaido K.W. et al., 1999]. Высокое сродство спечивает высокую чувствительность клетки к гормону и обеспечивает швание физиологических доз гормона. Избирательность сродства заключается >м, что реценгорные белки могут связывать только определенный стероид или лгормон. Ограниченная связывающая емкость обусловлена низкой центрацией связывающих мест, поэтому рецепторы легко насыщаются viohom, защищая таким образом клетку от их избытка [Ельцина И.В., 1982; 2н В.Б., 1981].

В процессе злокачественной трансформации клетка может сохранить все бывающие места рецептора нормальной клетки, либо их часть, либо утратить или, возможно образовать новые. Если клетка сохраняет рецепториые места илвания, то, в большинстве случаев, ее рост и функционирование могут /лироваться гормонами также как и в нормальной клетке. При утрате зпторных мест связывания эндокринный контроль прекращается. Наличие дифических рецепторов в опухоли указывает на ее зависимость от гормонов, т факт является существенным в назначении онкологическим больным экринной терапии, например, при опухолях молочной железы [Бассалык JI.C. >авт., 1982; Macfarlane J.К. et al., 1980; Mason B.H. et al., 1983], матки [Kelner . et al., 1995], яичников [Wurtz I I. et al., 1983]. По мнению некоторых авторов эльзование данных об уровне РЭ и РП (рецепторов прогестерона) в опухоли : возможность более 'точно предсказывать выживаемость больных [Robertson et al., 1996]. Определение РЭ в тканях-мишенях половых стероидов юте я общепринятым показателем их гормональной чувствительности [Gaido et al., 1999; Lantta M. et al., 1984]. эольшое количество работ посвящено изучению связывания стероидных донов в опухолях экспериментальных животных [Asselin J. et al., 1980; Funaki t al., 1991; Li J.J. et al., 1979]. Однако исследований связывания стероидных лонов в тканях-мишенях гормонозависимых органов в процессе канцерогенеза ib мало. Blankenstein М.А. et al. (1981) показали, что после действия изирующей радиации повышался уровень РЭ в ткани молочной железы у с. Через 5 месяцев после обработки метилхолантреном гортани крыс было аружено более высокое содержание РА по сравнению с интактными ютными [Бассалык JI.C. и соавт., 1985]. В процессе канцерогенеза почек, уцированного диэтилстильбэстролом у сирийских золотистых хомячков, людалось повышение уровня РЭ [Cortes-Vizcaino V., Llombart-Bosch А., 1993]. ышей-самцов, подвергшихся действию /[Ml , были обнаружены РА в толстом ]ечнике и в опухолях толстого кишечника, в то время как в интактном 1ечнике рецепторы не обнаружены. Авторы полагают, что половые зоидные гормоны участвуют в процессе возникновения опухолей, уцированных канцерогенами, и их участие опосредуется взаимодействием со цифическими рецепторами стероидных гормонов [Mehta R.G. et al., 1980].

Перинатальное действие половых гормонов.

В 70-х годах в литературе появились сообщения о развитии светлоклеточной нокарциномы влагалища у девочек и молодых женщин в возрасте от 7 до 29 подвергшихся действию ДЭС внутриутробно [Herbst A.L. et al., 1971; Hideko 1999]. В мировой литературе до начала использования ДЭС описаны лишь ничные случаи этой опухоли в данной возрастной группе [Kurman R.J., 1979]. тилстильбэстрол - синтетичесикй эстроген, широко применявшийся для лшя осложнений беременности в терапевтических (высоких дозах) с 40-х до < годов во многих странах мира. Помимо светлоклеточной аденокарциномы галища описаны также случаи плоскоклеточного рака влагалища, шейки ки, молочной железы, аномалии репродуктивного тракта у обоего пола, ушение репродукции, изменение полового поведения, нарушение струалыюго цикла, дисфункцию иммуной системы [Турусов B.C., 1998; Cunha . et al., 1999]. Таким образом, развитие светлоклеточной аденокарциномы ^алища, вызванное пренатальным воздействием ДЭС, является азательством трансплацентарного действия полового гормона у человека. 3 настоящее время имеется довольно много экспериментальных данных о церогенных эффектах, вызываемых перинатальным воздействием ДЭС и щх половых гормонов [Forsberg J.G. et al., 1981; Nomura Т., Kanzaki Т., 1977; ischild Tova C. et al., 1987; Walker B.E., 1983].

Как указывалось выше, введение половых гормонов взрослым животным штельно влияет на развитие опухолей, индуцированных химическими дерогенами. Воздействие половых гормонов в перинатальный период может вести к существенному изменению гормонального статуса организма, эаняющегося в течение всей последующей жизни. Известно, что в процессе ивидуального развития человека и животных в период раннего онтогенеза исходит становление нейроэндокринной системы размножения, так лваемая половая дифференциация мозга. В этом процессе гормоны играют зделяющую роль в половых особенностях дальнейшей секреции и аболизме половых гормонов (гонадотропинов и стероидных гормонов) и мирования сексуального поведения. Неадекватные гормональные воздействия штический период половой дифференциации мозга могут изменить половой функции гипоталамуса, причем степень интенсивности (количество) лъуюгцего на незрелый мозг гормона предопределяет качественные гнения нейроэндокринной системы в течение всей жизни. Эти изменения потея реактивности нервных механизмов, порога их чувствительности к лонам и нейромедиаторам. Кроме количества (дозы) гормона большую роль 1ет время его воздействия в период раннего онтогенеза. Так, введение половых лонов на разных этапах эмбриогенеза оказывает различное действие [Розен , 1984]. Введение половых гормонов в середине и последней трети сменности можно привести к развитию различных аномалий полового тракта у цей и крыс [Newbold R.R., J.A.McLachlan., 1982; Nomura Т., Kanzaki Т., 1977]. естио, что дифференцировка гипоталамических центров по женскому или сскому типу у мышей и крыс детерминируется половыми гормонами в татальном и неонатальном периодах. Ряд авторов сообщают, что введение эвых гормонов (андрогенов или эстрогенов) на самку в этот период приводит )тдаленным последствиям, обнаруживаемых на всех уровнях системы эталамус-гипофиз-яичники-акцессорные половые органы [Gorski R.A. et al.,

5; Lerner L.J., Vitale A., 1975]. Эти последствия выражаются в основном в мировании ановуляторного синдрома, основной причиной которого является чтение функции циклического центра гипоталамуса. Угнетение циклического зного механизма, отсутствие высвобождения лютеипизирующего гормона ) в ответ на однократное введение эстрогена [Резников А.Г., 1982], детельствует о том, у неонатально андрогенизированных крыс система эжительной обратной связи между яичниками и гипоталумс-гипофизной ^емой не функционирует. После полового созревания гипоталамус таких самок ;т функционировать по мужскому типу, что выражается в персистирующем >усе, при котором не происходит овуляции [Dorner G. et al., 1971; Korenbrot . et al., 1975; R.A.Nomura Т., Kanzaki Т., 1977; Smirnova I.O., Turusov V.S., 3]. Так, неонатальная эстрогенизация самок-крыс вызывает увеличение числа грстициальных клеток и развитие фолликулярных кист, но желтые тела не аруживаются. Эти данные указывают на повышенную секрецию эстрадиола и 'тствие секреции прогестерона. Такие самки имеют ановуляторный фэстрогенный цикл [Nicolic Z. et al., 1999]. Таким образом, перинатальное 1ение гормонов, в том числе и эстрогенов, самкам крыс не способствуют некой организации». Dorner G. et al. [1971] характеризуют этот феномен как щоксальиый эффект эстрогенов по отношению половой дифференциации ^а.

Гаким образом, воздействие половых гормонов в перинатальном периоде ывает необратимые изменения в системе гипоталамус-гипофиз-гонады, эаняющееся па протяжении всей жизни. Последствием этого может явиться :ое нарушение чувствительности будущего взрослого организма к химическим дерогенам, проявляющееся в значительном усилении или торможении дерогенза. Показано, что неонатальная андрогенизация значительно повысила т>ту индуцированных ДМГ сарком матки у мышей линии СВА [Smirnova 1.О., isov V.S., 1988]. По данным литературы неонатальная андрогенизация то )ряла, то замедляла канцерогенез молочной железы у крыс, 7,12-ДМБА nell D.M., 1989; Yoshida Н. et al., 198 1; Yoshida H. et al., 1980].

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Общие условия проведения опытов. Линии мышей. Канцероген 1,2-четилгидразин, дозы, условия введения. Эстрадиола дипропионат, дозы, ювия введения.

В опытах использовали 3-х месячных мышей-самок линий СВА, сублинию lA/Ca Eac, С57В1/6 и F1 из питомника "Столбовая". СЗНА из питомника рюково". Мышей содержали в стандартных условиях вивария РОНЦ РАМН, его было использовано 1448 взрослых мышей, и в опытах по изучению -натального действия ДЭС на канцерогенез было получено потомков 439 лок линии СВА и 422 самки линии СЗНА.

1,2-димсгилгидразин-2НС1 (ДМГ) (фирма "Fluka") растворяли в сггиллированной воде, доводили рН раствора до 6-7 NaHCO^, использовали медленно в дозе 8 мг/основания/кг массы тела животного и вводили 1 раз в целю подкожно (0,1 мл раствора/10 г массы тела). Доза и режим введения 4Г основывался на ранее поставленных в лаборатории канцерогенных веществ зпериментах [Турусов B.C. и соавт., 1983]. LD50 для СВА равнялось 25,4 мг/кг ссы тела, для С57В1/6 - 32,0 мг/кг [Turusov V.S. et al., 1982]. LD50 определяли тодом Вайля (Weil). В экспериментах учитывались данные о том, что таболизм ДМЕ прекращается через 24 часа, а через 48 часов в организме не гается ДМГ [Лихачев А.Я., 1980]. В экспериментах использовали эстрадиола дипропионат (эстратриен-,5( 10)-диола-3,1 7]3 дипропионат) (ЭП), который, как известно, оказывает пьное, замедленное и продолжительное эстрогенное действие [Машковский Д., 2000]. Выбор используемых доз и режимов введения ЭП для хронических ытов основывался на данных о том, что при действии природных (эстрадиол, "рон) и синтетических (ДЭС) эстрогенов максимальный эффект наблюдался и дозах 10-1000 мкг/мышь [Епифанова О.П., 1965]. В наших экспериментах

I использовался в дозах 2,5-30 мкг/мышь в зависимости от режима введения, зы и режим введения указаны в разделах «Собственные исследования». Для :периментов по изучению чувствительности порловых органов самок-мышей юльзовались физиологические дозы эстрогена. Физиологическими дозами рогенов считаются дозы 0,00025-1мкг [Епифанова О.И., 1965; Tice, 1961]. 0,1% раствор ЭП в оливковом масле (Харьковское производственное химико-рмацевтическое объединение "Здоровье") разбавляли оливковым маслом до обходимой концентрации и вводили животным подкожно. В случае мбинированного, попеременного применения ЭП и ДМГ, ЭП вводили раз в целю за день до введения ДМГ.

5 мг диэтилстильбэстрола (ДЭС) («Sigma», США) растворяли в 0,1 мл ;олютного этанола. Полученный раствор смешивали с 5,0 мл оливкового ела и вводили на 17-й день беременности внутрибрюшинно однократно в зах 0,1, 0,3 и 1 мкг/г массы тела беременной самки. Полученному потомству, шная с 3-х месячного возраста, ввели 20 раз ДМГ по обычной схеме. Схема ытов описана в главе 7. Статистическая обработка результатов

Статистический анализ результатов на различие канцерогенного эффекта эводили с помощью критерия Х^. Частота возникновения холей определялась путем деления количества животных с опухолями на птчество животных, доживших до обнаружения первой саркомы матки )фективное число). При малочисленных экспериментальных группах 1борках) (меньше 30-ти животных) применялась поправка Йейтса.

В главе 3.3 использовали статистический анализ на различие канцерогенного >фекта с помощью попарного сравнения данных возникновения опухолей в уппах, используя life-table-метод комбинирования таблиц контингентное™ по окам возникновения опухолей, обеспечивающий поправку на [теркуррентную смертность [Tarone R.E., 1975].

Анализ эффекта введения ЭП проводили с помощью отношения блюдаемого (О) и ожидаемого числа (Е) животных с опухолями, т.е. указателя О/'Е, называемого относительным риском. При сравнении 2-х групп (идаемое число животных с опухолями рассчитывают следующим образом:

0,+0о

-х N.

О.+О х N,

Достоверность различий в сроках обнаружения прижизненно наблюдаемых ухолей оценивали с помощью непараметрического теста Вилкоксона-Манна-ггни [Гублер Е.В., 1978; Gart J.J. et al., 1986]. главе 4.1. применяли метод Каплана-Мейера [Gart J.J. et al., 1986; Kaplan L. et al., 1958] с корректировкой на интеркуррентную смертность как к ижизненно выявляемым опухолям, так и посмертно выявляемым вобразованиям.

Кривые кумулятивной частоты сравнивали попарно, статистическую ачимость различий оценивали по критерию Wilcoxon-Gehan [Gart J.J. et al., 86]. Данный непараметрический критерий является высоко чувствительным, и именим даже при небольшом числе наблюдений.

В работе использовался также статистический тест на тренд и метод Peto 2to R. et al., 1980] с помощью составных интервальных таблиц. ава 3. имуляция еаркомогенеза матки эстрадиола дипропионагом (ЭП) с точки еиия двухстадийной гипотезы канцерогенеза.

Стимуляторы канцерогенеза обычно разделяют на коканцерогены и омоторы. Коканцерогены - агенты, которые способны влиять на метаболизм нцерогена и/или па взаимодействие его или его метаболитов с клетками-[шенями. Очевидно, что для проявления своего стимулирующего эффекта канцероген должен действовать в присутствии канцерогена пока он находится •кани, т.е. одновременно с ним. Промоторы обладают способностью усиливать олиферацию инициированных клеток. О промоторном эффекте можно ворить с уверенностью только в том случае, когда канцерогена и его таболитов нет в тканях, т.е. после окончания воздействия канцерогена. Как азывалось выше, Е.А.Ирд и И.О.Смирнова (1979) в своих опытах применяли ИТ и ЭП попеременно, т.е. ЭП каждый раз вводился за сутки до введения ИТ. Поскольку действие ЭП продолжительно (7-14 дней), а ДМГ разлагается в чение суток [Лихачев А.Я., 1980], ЭП в этих условиях мог влиять и на таболизм ДМГ и на взаимодействие его (или его метаболитов) с клетками-[шенями и, возможно, па пролиферацию. Таким образом, действие ЭП могло ализоваться за счет его влияния на метаболизм ДМГ или на взаимодействие таболитов канцерогена с клетками-мишенями. Выли поставлены три опыта, чтобы выявить промоторный эффект. В первом них (3.1.) ДМГ и ЭП применялись также вместе, но в двух группах после повременного применения введение ЭП продолжалось, то есть при наличии омоторного эффекта последующее применение ЭП должно было еще более илить саркомогенный эффект ДМГ. Для разделения этих эффектов в опытах I. и 3.3. ЭП применяли после окончания введений ДМГ (через 2 педели после следнего введения ДМГ), т.е. раздельно. В этом случае промоторный эффект >г быть выявлен в чистом виде. В опыте 3.2. попытались также выявить роль зы ЭП.

В опыте 3.3 кроме этого изучались влияние режима и времени применения [ как промотора. Последний вводился 20 либо 40 недель, менялась и его ювая доза и интервалы между введениями. В обзоре литературы была указана ть режима применения промотора (частота введений, размер интервалов жду введениями) в его влиянии на частоту опухолей кожи. Влияние этих кторов мы изучали на примере двухетадийного саркомогенсза матки.

3.1. Попеременное применение ЭП и канцерогена.

ДМГ вводили на протяжении 10 недель. ЭП в дозе 10 мкг раз в неделю за ib до введения ДМГ' и продолжали 10 недель (2-я группа), 20 недель (3-/ппа) и 25 недель (4-я группа). Каждая группа состояла из 30 мышей линии >А. Схема опыта, который был закончен через 50 недель после начала рдения ДМГ, приведена на рис.1 и в табл.2.

На протяжении первых недель опыта в группах, в которых мыши получали I, погибло несколько животных (табл.2). После 20-й недели эксперимента ертность мышей во 2, 3 и 4-й группах была связана в основном с развитием /холевого процесса.

Первые саркомы матки были обнаружены через 17-18 недель после начала ыта в 3-й и 4-й группах. Увеличение их частоты во времени показано на рис.2, ix конечная частота - в табл.2. В 1-й группе (ДМГ) на протяжении периода 5людения обнаружена всего одна саркома матки из 30 мышей (3,3%) на 49-й деле опыта. У животных обнаружена всего одна саркома матки из 30 мышей 3%) на 49-й неделе опыта. У животных 2, 3 и 4-й групп, получавших ДМГ и I, частота сарком матки была значительно выше: 25, 65, 73% соответственно; шичия по сравнению с 1-й группой статистически достоверны (табл.2). У [шей 5-й группы, получавших только ЭП, опухоли матки на протяжении ыта не возникли. Гистологически саркомы матки, развившиеся в результате у[бинированного воздействия ДМГ и ЭП, не отличались от аналогичных /холей, вызванных одним ДМГ и описанных ранее [Turusov V.S. et al., 1977].

Рис.1. Схема опыта по изучению эффектов комбинированного действия ДМГ и ЭП у мышей линии СВА. эуппа Воздействие

-1-1-1-1-1

О 5 10 15 20 25

Время (недели)

Габлица 2. Влияние продолжительности введения ЭП на частоту сарком матки, вызываемых ДМГ у мышей линии СВА.

Группа Воздействие t* Количество мышей 2 X Р с саркомами матки всего абс. %

1 Дмг - 30 1 3,3

2 ДМГ+ЭП 10 28 7 25,0 4,04 <0,05

3 дмг+эп 20 26 17 65,4 22,0 <0,001

4 ДМГ+ЭП 25 26 19 73,0 23,0 <0,001

5 ЭП 25 27 - - продолжительность введения ЭП (недели).

37

У животных всех групп, получавших ДМГ, отмечено небольшое количество ухолей других локализаций (анальной области, кишечника), а при комбинации и ЭП - также единичные лейкозы, но различия между группами в частоте шикновения этих опухолей не обнаружено.

Таким образом, в группах 3 и 4, в которых ЭП продолжал применяться после гкращения введения ДМГ, отмечено значительное усиление саркомогенеза по шнению не только с группой 1 (ДМГ), но и по сравнению с группой 2 [новременное применение ДМГ и ЭП) (рис.2, табл.2). Поскольку в этих ювиях ЭП применялся в отсутствие ДМГ, уже в этом опыте можно говорить о шчии выраженного промоторного эффекта ЭП.

Время после начала введения ДМГ (недели)

Влияние дозы ЭП на его промоторный эффект.

ДМГ вводили на протяжении 10 недель, а ЭП вводили в дозе 10 мкг в течение недель (2-я группа), 20 недель (3 и 4-я группы) и в дозе 5 мкг в течение 20-ти цель (5, 6 и 7-я группы). Всего в опыте использовано 300 мышей СВА. Схема ыта приведена на рис. 3, из которого следует, что в группах 4 и 6 ЭП именялся после прекращения введения ДМГ, то есть в условиях, когда канцерогенный эффект был полностью исключен. Опыт закончен через 75-80 цель после начала введения ДМГ.

Результаты приведены на рис.4 и в табл.3, из которых видно, что в группах 4 3, где имел место только промоторный эффект ЭП, частота сарком матки (60,6 66,7% соответственно) была существенно (р<0,01) выше, чем при действии ного ДМГ (группа 1, 20%). Введение ЭП одновременно с воздействием ДМГ >уппа 2, 3 и 5) обусловливает несколько большую частоту сарком матки (77,8, ,0 и 82,2%, соответственно) по сравнению с чисто промоторным эффектом Э11 )уппы 4 и 6, частота 60,6 и 66,1%, соответственно). Однако эти различия большие, и они не достоверны (р>0,1). При одинаковой конечной частоте ухолей в этих группах саркомы матки при дозе ЭП 10 мкг (группа 4) звивались значительно быстрее, чем при дозе ЭП 5 мкг (группа 6), что хорошо дно из сравнения кривых кумулятивной частоты опухолей, приведенных на с. 4; разница особенно четко видна в ранний период - через 40 недель после чала опыта частота сарком при дозе ЭП 10 мкг была 60%о, тогда как при дозе 5 г - менее 10%.

В целом ЭП, независимо от его дозы и схемы введения, в 3-4 раза увеличил :тоту сарком матки.

Влияние дозы и временных условий введения Э11 сказалось, главным разом, на сроках обнаружения опухолей, то есть на скорости их разви тия. ic.3. Схема опыта по изучению промоторного эффекта и дозы ЭП i capivovioi енез магки у мышей линии СВА. lyiina Воздействие

ДМГ

ЭП

10 мкг

Контроль

0 10 20 30 Время (недели)

РСССИЙСКА» елмотви^ с.4. Вероятность возникновения сарком магки у животных зных групп при действии ДМГ и ЭП. ь абсцисс - время после начала введения ДМГ (недели), ь ординат - кумулятивная вероятность возникновения сарком матки.

-ш— 2

-А— 4 -в— 5 -о— 6 уппы:

ДМГ;

ДМГ+ЭП (доза - 10 мкг, продолжительность введения - 10 недель, ^бинированное введение с ДМГ);

ДМГ+ЭП (доза 10 мкг, продолжительность введения 20 недель, мбинированное введение с ДМГ в первые 10 недель); ДМГ+ЭП (доза 10 мкг, продолжительность введения 20 недель после ;дения ДМГ);

ДМГ+ЭП (доза 5 мкг, продолжительность введения 20 недель, у1бинированное введение с ДМГ в первые 10 недель);

ДМГ+ЭП (доза 5 мкг, продолжительность введения 20 недель после введения ТГ);

Таблица 3. Частота и среднее время обнаружения сарком магки при комбинированном и раздельном воздействии ДМГ и ЭП.

Группа 'Эффективное число Число мышей с саркомой магки Средний срок обнаружения, недели (М±т) абсолютное %

1 30 6 20.0±7.3 56,8 ± 8.4

2 27 21 77.8 ± 8.0 * 55.1 ± 12.4 э 52 39 75,0 ± 6.0 * 37.7 ± 1 1.5

4 о -> j j 20 60,6 ± 8,5 * 34.7 ± 10.9

5 45 37 82,2 ± 7,3 * 46,4 ± 12.8

6 42 28 66,7 ± 7,3 * 56,8 ± 14.7

7 27 0

8 43 0 различия достоверны

Так, в группах 3 и 5, отличавшихся друг от друга только дозой ЭП, инаковая конечная кумулятивная частота была достигнута при дозе ЭП 10 мкг )уппа 3) на 20 нед раньше, чем при дозе ЭП 5 мкг (группа 5) (рис.4). Равным разом, группа 2, где ЭП в дозе 10 мкг вводился в течение более короткого емени, чем в других группах, отличалась от этих групп лишь в отставании растания частоты опухолей по сравнению с группами 3, 4 и 5. Более раннее чало введения ЭП вело и к более быстрому развитию сарком, что особенно гко видно из сравнения группы 5 с группой 6 (рис.4). На скорость развития ухоли влияет не только время воздействия ЭП, но и доза ЭП. Увеличение дозы I с 5 до 10 мкг существенно сокращает среднее время обнаружения сарком тки: при введении одновременно с ДМГ и после прекращения введения ДМГ с

4 + 12,8 нед (группа 5) до 37,7 + 11,5 нед (группа 3), при применении только :ле прекращения введения ДМГ с 56,8 + 14,7 нед (группа 6) до 34,7 + 10,9 нед упна 4) (табл.3).

Достоверных различий в среднем времени обнаружения саркомы матки при знаковой дозе ЭП между группами, в которых ЭП применяли одновременно с 4Г и после его прекращения (для дозы 10 мкт 3 и 4-я группы, для дозы 5 мкг 5 '-я группы соответственно), не обнаружено.

Полученные данные показывают, что ЭП обладает отчетливым промоторным лствием, что подтверждается более высокой частотой и большей скоростью шития в группах, где ЭП применялся после прекращения ДМГ, по сравнению руппой, в которой мыши получали только ДМГ. Показано также, что ЭП зсобен ускорять процесс развития саркомы матки, вызываемых ДМГ, только в л случае, когда ЭП вводится в более поздний период канцерогенеза, при этом :пень ускорения зависит от дозы ЭП. Роль фракционирования дозы ЭП.

В настоящем опыте изучали зависимость промоторного эффекта эстрогена от •кима его введения мышам сублинии СВА/СаГас. В отличие от опытов, в горых использовали сублинию CBA/CaLacSto (260 самок). Результаты шрования аллелей различных генов у мышей линии CBA/Sto и СВА/Гас, пученные Н.Н.Клепиковым, показали, что мыши этих сублиний не отличаются изученным маркерам. Кроме того, мыши сублинии CBA/Sto оказались :тосовместимыми с мышами СВА/Гас, что свидетельствует об их античности по различным генам тканевой совместимости [Морозова О.В. и ibt., 1989].

Схема опыта, поставленного на сублинии СВА/Гас, приведена на рис.5. ДМГ' эдил и на протяжении 9 недель мышам 1-й - 4-й групп. Мышам в группах 2-5 здили ЭП в одинаковой суммарной дозе 200 мкг/мышь через 2 недели после гкращения введения канцерогена: в 2-й группе 20 раз 1 раз в 2 недели по 10 г/мышь, в 3-й группе 40 раз еженедельно по 5 мкг/мышь, в 4-й группе 80 раз 2 ■а в неделю по 2,5 мкг/мышь. В группе 5 ЭП давали так же, как и в группе 4, без ДМГ. Контролем являлись интактные мыши (6-я группа). За мышами хлюдали до их естественной гибели. Прижизненно регистрировали сроки ларужения сарком матки, опухолей анальной области и молочной железы, гальные опухоли обнаруживали при вскрытии.

Смертность в группах, в которых животные получали ЭП, была лблизительно одинаковой (р>0,01) и более высокой (средняя здолжительность жизни 49,4-59,5 недель), чем у мышей, получавших только 1Г, и интактных мышей (средняя продолжительность жизни 73,7 и 87,8 ггветственно). В период 40-50 недель причинами смерти являлись гнойные щессы яичников и матки, а также гнойные пиелонефриты и циститы в 4 и 5-й дшах, и в меньшей степени в 3-й группе.

Как видно из табл.4 и рис.6, значительное и статистически достоверное шичение частоты сарком матки и сокращение сроков их обнаружения лечено в группах 2, 3, 4, которым ЭП вводили в различных режимах на тгяжение 40 нед. Частота сарком в этих группах была 44,7-51,3% против 2% при введении одного ДМГ (группа 1). Статистический тест на тренд для дбинированного введения ДМГ и ЭП при общей суммарной дозе и )должительности введения ЭП, но с различными интервалами между ;дениями и различными разовыми дозами (2,5-10,0 мкг/мышь), не показал ;товерных различий в частоте возникновения сарком матки. ic.5. Схема опыта по влиянию фракционирования лозы ЭП на саркомогенез матки у мышей сублинии СВА/Са Lac.

ДМГ 1 раз/нед.

ЭП

1 раз/2нед. по 10 мкг

1 раз/нед. по 5 мкг

2 раз/нед. по 2,5 мкг

2 раз/нед. по 2,5 мкг контроль

1 I I I N I I I I 1 I I I I I 1 I I I I I I I I I I I I I I I И I I I I И I И I I I I I I I 1

0 10 20 30 40 50 недели

Средний срок обнаружения составлял 42-52 недели против 73 недель в группе Частота сарком была практически одинаковой при всех формах дробления ;ы, но средний срок обнаружения оказался самым коротким (42 нед, р<0,01) 1 максимальном фракционировании суммарной дозы - 2,5 мкг х 80, два раза в {(группа 4).

Сак видно из табл.4 и рис.6, значительное и статистически достоверное личение частоты сарком матки и сокращение сроков их обнаружения

4Т лечено в группах 2, 3, 4, которым ЭП вводили в различных режимах на угяжение 40 нед. Частота сарком в этих группах была 44,7-51,3% против 2% при введении одного ДМГ (группа 1). Статистический тест на тренд для лбинированного введения ДМГ и ЭП при общей суммарной дозе и эдолжительности введения ЭП, но с различными интервалами между чтениями и различными разовыми дозами (2,5-10,0 мкг/мышь), не показал :товерных различий в частоте возникновения сарком матки. Средний срок таружения составлял 42 - 52 недели против 73 недель в группе 1. Частота жом была практически одинаковой при всех формач дробления дозы, но :дний срок обнаружения оказался самым коротким (42 нед, р<0,01) при <симальном фракционировании суммарной дозы - 2,5 мкг х 80, два раза в нед уппа 4).

Данный опыт продолжали до естественной гибели мышей, вследствие чего шодалось значительное количество опухолей разных органов, которые угствовали в опытах, изложенных в 3.1 и 3.2, которые заканчивали к 52 1,еле. Среди этих опухолей представляют интерес новообразования молочной тезы (28,6%о в контроле, группа 6) (рис.7), отсутствующие у базовой линии А. Частота этих опухолей была выше, чем в контроле во всех группах, 1учавших ЭП (29,8-46,2%о) и значительно ниже при введении только ДМГ 5%о, группа 1), который, таким образом, оказал профилактическое действие, гдеиие одного ЭП и введение ЭП комбинированно с канцерогеном сократило :0,()01) латентный период возникновения рака молочных желез по сравнению онтрольной группой (табл.4). Поскольку в группе 1 (ДМГ) возникло малое шчество опухолей молочных желез (всего 2), различия в сроках никновения выявить не удалось.

Таблица 4. Часлота прижизненно наблюдаемых опухолей при фракционировании дозы ЭП, вводимого после применения ДМГ у мышей сублииии СВА/Са Lac.

Средни и срок Отношение () гношение

1 р\ IHKI Часнча ' обнаружения Н/О но 11 О но опухолей, пел. сравнению с сравнению с коитро. !СМ ДМГ

С аркома матки

•1Г 5/38 (I 3.2%) 73.4 2.19*

1Г%)11 IОмк-г 20/39 (51,3%) 51.8 2.38* 2.00*

1П')П 5м кг 22/49 (44.9%) 46,0 2,17* 2.03*

11 "г')11 2,5 мкг 21/41 (44.7%) 42,2 2.16* 2,05*

I 2.5мкг 0/45 - 0 0 ггроль 2/35 (5.7%) 134

Рак молочной железы

1Г 2/38 (5,3%) 48.8 0,45:* 1

1Г+ЭП Юмкг 18/39 (46.2%) 50,1 1,83* 2,30*

1Г+ЭП 5мкг 16/49 (32,7%) 47,2 1,70* 2,14*

ПЧ')П 2.5мкг 14/47 (29,8%) 44,0 1,69* 2,09* 2,5 мкг 17/45 (37,8%) 42,3 1,55* 1.83* ггроль 10/35 (28.6%) 76,2

Опухоли ю пггоралыюй железы

И 16/38 (42.1%) 58.4 2,10* iron Юмкг 9/39 (23.1%) 47,4 2,30* 0,88

ПОП 5мкг 6/49 (12.2%) 51.4 2.43* 0.75

П ОП 2.5мкг 10/47 (2 1.3%) 42.0 2,12 1.03

2.5мкт 0/45 0 0 ггроль 1/35 (2.9%) 133.8 м с Mamie:1 - числи гель - число животных с опухолью; знаменатель - эффекл ивное число: в 2 * <нх - частота; - отношение наолюдаемое-ожидаемое число, - различие достоверно.

4S

Рис.6. Частота сарком матки у мышей сублинии СВА/Са Lac при различных режимах введения ЭП недели

По оси абсцисс - кумулятивная частота возникновения сарком матки (%). По оси ординат - время после начала введеня ДМГ.

Рис.7. Частота опухолей молочной железы у мышей сублинии СВА/Са Lac в различных экспериментальных группах. штшпззззшшшгсоэ ■ I—I I I I I I I I

30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 112 122 132 недели

-ДМГ

-е— дмг+эп юмкг

ДМГ+ЭП 5мкг -А—ДМГ+ЭП 2,5мкг -0—ЭП 2,5мкг -•— контроль

По оси абсцисс - время после начала введения ДМГ.

По оси ординат - кумулятивная частота возникновения опухолей молочных желез

Сроки обнаружения опухолей молочных желез в группе 5, в которой мыши пучали только ЭП, и в группе 4, в которой при том же режиме введения ЭП эдварительно вводили канцероген, не отличались (р=0,5) (табл.4). В группах, в горых вводили ДМГ и ЭП, самый короткий латентный период возникновения са молочной железы наблюдался в группе 5 (ЭП 2 раза в неделю по 2,5 г/мышь), а самый продолжительный - в 3-й группе, где ЭП вводили 1 раз в 2 дели по 10 мкг (табл.3). Таким образом, применение различных режимов рдения ЭП при комбинированном действии с ДМГ, не оказало влияния на гготу возникновения опухолей молочных желез, но дробление дозы и сращение интервала между введениями ЭП сократило латентный период.

На эпителиальные опухоли анальной области введение ЭП не оказало [ствия. Возникновение этих опухолей в группах с 1-й по 5-ю было шаковым и статистически достоверно (р<0,001) отличалось от контрольной 'ппы и группы, получавшей только ЭП (табл.4). Однако латентные периоды никновения опухолей анальной области с введением ЭП в группах 2 и 4 гговерно сократились по сравнению с группой 1 (ДМГ) (табл.4). Введение одного ДМГ или введение одного ЭП достоверно (р=Ю,006, р=0,008) сличило возникновение эпителиальных опухолей почек по сравнению с ггролем. Между собой эти группы не отличались (р=0,077) (табл.5), мбинированное применение ДМГ и ЭП усилило индукцию эпителиальных /■холей почек по сравнению с эффектом для каждого из них в отдельности 0,001, р=0,004) (табл.5).

Частота опухолей других органов была примерно одинаковой во всех группах риведена в табл.5. утверждены первые наблюдения Е.А.Ирд и И.О.Смирновой (1979) о сильном мулирующем влиянии ЭП на индуцированный саркомогенез матки у мышей А.

Это стимулирующее действие проявляется как при одновременном переменном) применении ДМГ и ЭП, так и в тех случаях, когда ЭП начинали дить после прекращения применения ДМГ. В этом случае ЭП не мог влиять взаимодействие ДМГ или его метаболитов с клетками-мишенями и ствовал только как промотор.

Стимулирующее влияние ЭП проявилось в повышении частоты опухолей, ;ываемых ДМГ, но еще больше - в сокращении латентного периода их вления.

3 случае промоторного эффекта ЭП частое применение его в малых дозах зывало более сильный стимулирующий эффект, чем редкое в больших дозах.

Таблица 5. Частота посмертно обнаруженных опухолей при фракционировании дозы ЭП, вводимого после применения ДМГ у мышей сублинии СВА/Са Lac. группы Частота опухолей *

Эпителиальные опухоли почек Опухоли печени Аденомы легких Опухоли кишечника

Аденома гепатоцеллюляр-ный рак сосудистые опухоли

1 ДМГ 3/36 (8,5%) 4/37 (10,8%) 5/37 (13,5%) 8/37 (21,6%) 6/36 (16,7%) 1/36 (2,8%)

2 ДМГ+:-Ш 10мкг 9/38 (23,7%) 7/38 (18,4%) 1/38 (2,6%) 8/38 (21,1%) 2/38 (5,3%) 3/37(8,1%)

3 ДМГ+ЭП 5мкг 6/44 (13,6%) 1/45 (2,2%) 4/45 (8,9%) 4/45 (8,9%) 2.44 (4,5%) 3/44 (6,8%)

4 ДМГ+ 311 2,5мкг 11/46 (23,9) 5/46 (10,9%) 0/46 4/46 (8,7%) 2/46 (4,3%) 2/46 (4,3%)

5 ЭП 2.5мкг 5/45 (11.1%) 2/45 (4.4%) 2/45 (4.4%) 0/45 0/45 0/45

6 контроль 1/35 (2,9%) 1/35 (2,9%) 1/35 (2,9%) 0/35 1/35 (2,9%) 3/35 (8,6%) - Числитель - число животных с опухолью; знаменатель - эффективное число; в скобках - частота возникновения опухолей. ава 4. щукция сарком матки комбинированным действием ДМГ и )П )езистентных мышей.

На основании приведенных в главе 3 данных о стимулирующем действии грогена на саркомы матки у мышей линии СВЛ, чувствительной к индукции -IX опухолей, мы попытались индуцировать саркомы у линии мышей СЗНА и у Зридов (CBAxC57BI/6)l: 1, матери которых являются чувствительной линией штей, а отцы резистентной линией.

4.1. Индукция сарком магки у мышей линии СЗНА.

Исследование проводили на 2-3-х месячных мышах линии СЗНА, которые ли разделены на 4 группы, всего использовано 193 мыши. Животные 1-й и 2-й пп получили 20 еженедельных инъекций ДМГ. 2-я группа за 1 сутки до эдения ДМГ' получала ЭП в дозе 10 мкг/мышь до 20-й недели с начала опыта, с

-й по 25-ю неделю мыши не получали ЭП, введение которого потом юбновили с 26-й по 35-ю неделю. В 3-й группе мыши получали ЭП по той же зме, что и во 2-й группе. Животные 4-й группы получали подкожные ьекции дистиллированной воды и служили контролем. Оставшихся в живых цопытных мышей 1-й и 2-й групп забили через 50 недель после начала дения ДМГ, мышей 3-й и 4-й групп забили на 3-5 недели позже. Выживаемость. В первые 20 недель опыта гибель животных была шачительна. В период с 20 по 30 неделю после начала опыта отмечена сокая смертность в группах 1-3 (рис.8). В 1-й группе причиной смерти вотных послужили различные поражения органов: геморрагические кисты тников, опухоли анальной области, значительные поражения печени. У шей 2-й группы в этот период часто обнаруживались явления гнойного тита и пиелонефрита - проявление действия эстрогена. С 30-й недели до знчания опыта во всех опытных группах, где применялся ДМГ (группы 1,2) товной причиной смерти явилось возникновение опухолей. Этим объясняется кая выживаемость в этих группах. Группы 1 и 2 существенно отличается от группы (рис.8). В группе 3, где применялся один ЭП, выживаемость была :окой - значимо выше, чем в группах, в которых животные получали [цероген. Однако выживаемость в этой группе была все же ниже атисгически значимо) по сравнению с контрольной группой 4 (рис.8) и зано это было с возникновением нефрита, лейкозов, гепатомы и рака печника, наблюдаемых с 30 по 50 неделю опыта. Таким образом, введение 1Г снижает выживаемость животных по сравнению с интактными и гучавшими ЭГ1. Введение ЭП также снижает выживаемость по сравнению с дгктными мышами, но в значительно меньшей степени, чем ДМГ. Данные по частоте обнаружения опухолей различной локализации (грубый сазатель) приводятся в табл.6.

Саркомы матки наблюдались только при сочетанном (попеременном) действии ДМГ и ЭП (группа 2). Первая саркома обнаружена через 18 недель :ле начала опыта, остальные через 28-48 недель. Кумулятивная частота 'холи представлена на рис.9. Как и следовало ожидать, кумулятивная частота, считанная по Kaplan-Meier, значительно выше частоты, определяемой по [зективному числу (см. главу 2). Опухоли имели диаметр 1-3 см, нередко были >тно сращены с окружающими тканями, локализовались в теле и шейке матки гличие от сарком у мышей СВА, для которых характерна локализация в теле и ах матки. Гистологически они представляли собой чаще всего Зробластические опухоли, в некоторых случаях имелись участки строения омиосарком или ангиосарком, иногда весьма полиморфные участки с антскими многоядерными клетками. Отмечен инфильтрирующий рост 'холей в ткани таза и стенку толстой кишки, иногда ешлоть до ее слизистой »лочки. Метастазы, которые были отмечены у мышей СВА, здесь не [аружены. Одна саркома успешно трансплантирована и прошла три ледовательные генерации.

Таблица 6. Частота возникновения опухолей при комбинированном воздействии ДМГ и ЭП у мышей линии СЗНА.

Группа Воздействие Саркомы матки Геморрагические поражения яичников Опухоли клиторальиой железы Эпителиальные опухоли печени Опухоли толстой кишки

1 ДМГ 0/361} 20/34 (59%) 23/36 (61%) 1/8 (13%.) 3/29 (10%)

2 дмг+эп 11/40 (28%) *■ ** 0/31 ** 7/37 (19%) *•** 9/17 (53%) *■** 12/27 (44%) *

3 ЭП 0/25 0/25 0/25 1/18 (6%) 1/25 (4%)

4 контроль 0/29 0/29 0/29 1/28 (4%) 0/29

1) - числи гель - количество животных с опухолью: знаменатель - эффективное число; в скобках частота возникновения опухолей; - различия достоверны по метод) X2; - различия достоверны по Вилкоксону-Гехану.

По оси абсцисс - время после начала введения ДМГ. По оси ординат - количество выживших мышей (%).

Рис.9. Частота сарком магки у мышей линии СЗНА при комбинированном действии ДМГ и ЭГ1. время (недели) после начала введения ДМГ

1и в одной из групп, кроме 2-й, саркомы матки не наблюдались. При этом г Вилкоксона-Гехана показал значимость различий частоты опухоли с nnaxfw 1, 3 и 4 (р=0,012, р=0,001, р=0,000).

Геморрагические поражения яичников наблюдали только в 1-й группе с.10,11). В большинстве случаев их диаметр достигал 1-1,5 см, часто они ш двусторонними, и в двух случаях с разрывом в брюшную полость. В двух чаях в стенках кист гистологически обнаружены опухоли (ангиома и иосаркома). При одновременном применении ДМГ и ЭП (2-я группа), а также 1 введении одного ЭП (3-я группа) и у контрольных животных (4-я группа) оррагические поражения яичников не развивались.

Рис.11. Частота сарком матки и геморрагических поражений яичников у мышей линии СЗНА при комбинированном действии

Д М Г и ЭП.

50-Л

50'

Ю1 ЮЮ

10

Z7I

1Саркомы матки Геморрагические поражения яичников / / дм Г дмг+эп оси ординат - частота возникновения опухолей в %.

Развитие опухолей клиторальной железы легко наблюдать прижизненно, ггому кривые, показанные на рис.12 рассчитаны на основании сроков тружения (контекст не зависит от смертности).

Введение ЭП привело к существенному снижению (р=0,001) кумулятивной тоты опухолей анальной области. В группах 3 (ЭП) и 4 (контроль) эти /холи отсутствовали. В 1-й группе гистологически определялись еноакантомы клиторальной железы (у 2 животных имелись одновременно и .еноакантома и плоскоклеточная кистозная эпителиома). Опухоли анальной >ласти были одной из главных причин смерти в 1-й группе. ис.12. Вероятность возникновения опухолей клиторальных желез у 1ышсй линии СЗНА при комбинированном воздействии ДМГ и ЭП. недели

-о-ДМГ ДМГ+ЭП

По оси абсцисс - время после начала введения ДМГ.

По оси ординат - вероятность возникновения опухолей клиторальных желе! у выживших мышей (%).

Введение ЭП не оказало влияния на частоту возникновения индуцированных АГ опухолей толстой кишки (р=0,342).

По локализации опухоли распределялись следующим образом: у 2 мышей 1-й /гшы опухоли кишечника располагались в 2 см от заднего прохода, у одной - в той кишке; у 6 мышей 2-й группы опухоли находились непосредственно у него прохода, у 5 - в 1-2 см от него и у одной - в слепой кишке; у одной мыши : группы - в слепой кишке. Таким образом, наиболее частой локализацией [х опухолей был самый нижний отдел толстой кишки. Гистологическое следование показало, что опухоли кишечника представляли собой большей лью полипы без инвазии, в группе 1-й у одной мыши развился рак с гастазами в брыжеечные лимфатические узлы; во 2-й группе имелось 3 случая нвазией; в 3-й группе обнаружен рак слепой кишки.

3 печени мышей, получавших один ДМГ (1-я группа), отмечены умеренные строфические и воспалительные изменения, не резко выраженная хлиферация эпителия желчных протоков и иногда образование мелких, личимых лишь при гистологическом исследовании многокамерных кист, ителиальные опухоли печени у животных этой группы не возникали. При :етанном действии ДМГ и ЭП (2-я группа) все указанные изменения были эажены в значительно большей степени. Кисты иногда различались сроскопически в виде мелких губчатых студенистых участков. У 9 мышей [дены гепатоцеллюлярные опухоли печени: у 7 - аденомы, у 2 -атоцеллюлярнй рак. В 3 случаях, помимо гепатоцеллюлярпых опухолей, [аружены новообразования, имевшие структуру холангиокарциномы (в одном них с метастазом в легкое). Указанные опухоли состояли из атипичных юзистых структур с высоким цилиндрическим эпителием, не имели четких ниц с окружающей тканью печени и содержали очаги некроза и фиброза. 11ри рытии животных опухоли во всех случаях найдены в виде узлов диаметром ■I см, в случае холангиокарцином узлы были белого цвела и не имели четких ниц с тканью печени. реди мышей, получавших ЭП (3-я группа), и в контрольной группе (4) аружены по одному случаю развития аденомы печени. фоме указанных опухолей, наблюдались случаи генерализованного лейкоза, 1фомы тимуса, ангиоэндотелиома печени, ангиома почечной капсулы, нома почки, ангиосаркома забрюшинной кле тчатки, геморрагические кисты в тчатке.

Лроведенное исследование показало, что у мышей линии СЗНА при введении ЛГ и эстрогена возникают саркомы матки с относительно высокой частотой, развивающиеся при раздельном применении этих агентов. Таким образом, явлен феномен преодоления резистентности мышей линии СЗНА к индукции эком матки ДМГ. Следовательно, усиление саркомогенеза матки эстрогеном, казанное ранее на мышах линии СВА, подтверждено на другой линии мышей ic.\ 1).

Томимо этого, мы обнаружили тормозящий эффект ЭП на индуцированные ЛГ геморрагические кисты яичников и опухоли клиторальных желез.

4.2. Индукция сарком матки у мышей-гибридов Fl(CBAxC57Bl/6).

Мышам F1 вводили ДМГ 25 раз еженедельно в 1-4-й группах (табл.7). Кроме >го, 2-я группа мышей еженедельно получала ЭП в дозе 2 мкг/мышь в течение недель, 3-я группа 10 мкг/мышь и 4-я и 5-я группы 30 мкг/мышь в одинаковом киме. Мыши 6-й группы получили 25 инъекций оливкого масла. Всего в ыте использовано 125 мышей.

Введение ЭП в любой дозе достоверно (Р>0,97) увеличивало частоту шикновения сарком матки, индуцированных ДМГ, с 20,0% при введении того ДМГ до 46,9%; 62,5 и 50,0% при введении ЭП в дозах 2, 10 и 30 мкг ггветственно (табл.7, рис.13). У мышей, получавших только ЭП, и у тгрольных животных опухоли не возникли. Хотя наибольший эффект сличения частоты возникновения сарком матки наблюдался при введении ЭП юзе 10 мкг, достоверного различия между показателями у животных 2-4-й 'пп не было.

Введение ЭП в любой из использованных доз достоверно (Р>0,95) сокращало >ки гибели мышей с саркомами матки (42,3 недели при введении только ДМГ сравнению с 36,7; 38,4 и 30,5 неделями при введении ДМГ с ЭП в дозах 2, 10 0 мкг, соответственно).

Зроки гибели мышей с саркомами матки при введении ЭП в дозах 2 и 10 мкг цественно не различались. С увеличением дозы ЭП до 30 мкг средний срок

62 ели мышей с саркомами матки достоверно уменьшался (Р>0,99) по шнению с этим показателем у мышей, получавших ЭП в дозах 2 и 10 мкг бл.7, рис.13). Несмотря на указанные значительные различия в сроках гибели шей с саркомами матки, отчетливой разницы в размерах опухолей не явлено - опухоли имели, как правило, большие размеры (2 см и более в шетре). Это свидетельствует о более раннем возникновении опухолей или об более быстром росте при введении ДМГ в сочетании с ЭП, особенно в дозе 30

63

Таблица 7. Частота сарком матки и средние сроки гибели животных с опухолями у мышей-гибридов F1 при комбинированном действии ДМГ и ЭП.

Группы Воздействие Саркомы матки Сроки гибели мышей с саркомами матки (недели)

1 ДМГ 6/30 (20,0+7,30%)' 42,3±3,8

2 ДМГ+ЭГ1 2 мкг 15/32 (46,9±8,8%)* 36,7±5,0*

3 ДМГ+ЭГ1 10 мкг 20/32 (62,5±8,6%)* 38,4±6,4*

4 ДМГ+ЭП 30 мкг 12/24 (50,0±10,2%)* 30,5±6,2*

1 - числитель - количество животных с саркомой матки, знаменатель - эффективное число, в скобках - частота возникновения; *- различия достоверны.

64 ыши F1 (СВАхС57В1/6) являются третьей линией, на которой показано улирующее действие ЭП на индуцированный саркомогенез матки. 1зано, что частота сарком матки, индуцированных у мышей 14, не зависит от ЭП (в пределах 2-30 мкг/мышь), но средний срок гибели достоверно сался при увеличении дозы ЭП до 30 мкг/мышь. юки гибели мышей с саркомами матки при введении ЭП в дозах 2 и 10 мкг хтвснно не различались. С увеличением дозы ЭП до 30 мкг средний срок ли мышей с саркомами матки достоверно уменьшался (Р>0,99) по нению с этим показателем у мышей, получавших ЭП в дозах 2 и 10 мкг 1.7, рис.14). Несмотря на указанные значительные различия в сроках гибели ей с саркомами матки, отчетливой разницы в размерах опухолей не лено - опухоли имели, как правило, большие размеры (2 см и более в [етре). Это свидетельствует о более раннем возникновении опухолей или об злее быстром росте при введении ДМГ в сочетании с ЭП, особенно в дозе 30 ыши Fl(CBAxC57Bl/6) являются третьей линией, на которой показано улирующее действие ЭП на индуцированный саркомогенез матки, гзано, что частота сарком матки, индуцированных у мышей F1, не зависит от ЭГ1 (в пределах 2-30 мкг/мышь), но средний срок гибели достоверно сался при увеличении дозы ЭП до 30 мкг/мышь. ва 5. яние эстрогена на массу матки и реакцию слизистой влагалища мышей шчных линий. ак было показано ранее, существуют определенные линейные различия в /кции сарком матки ДМГ: высокая частота у мышей линии СВА, в то время у мышей линий СЗНА и С57В1/6 эти опухоли при тех же условиях возникают циничных случаях или не возникают вообще. Эти опухоли являются юнозависимыми: введение ЭП ускоряет саркомогенез матки у мышей линии а беременность и прогестерон тормозит. В предыдущей главе мы показали, совместным применением канцерогена и эстрогена можно индуцировать ;омы матки у резистентной линии мышей. В нашей лаборатории1 было тзано, что ДМГ вызывает нарушения эстрального цикла у чувствительной т СВА, что выражалось в удлинении фаз эструса и диэструса, причем у гих самок наблюдался персистирующий эструс. В то же время у [стентных линий СЗНА и С57В1/6 преобладает фаза диэструса [Труханова , 1986]. ice эти данные позволяют предполагать о линейных различиях в реакции (ей половых органов на эстроген. В настоящей главе приводятся данные и их [из по изучению реакции на ЭП ткани матки и слизистой влагалища мышей :твительной к индукции сарком матки линии СВА и резистентных к этой /кции мышей линий СЗНА и С57В1/6. опыте использовали 12-недельных самок-мышей линий СВА, СЗНА и В1/6 (всего 300 животных), которым была сделана двухсторонняя 1иэкт0.мия, после чего проводили кольпоцитологические исследования в ние 2-х недель. В опыт включали животных, у которых циклы прекратились, ни каждой линии были разбиты на группы по 6-10 мышей в каждой. 1-я та была контрольной, 2, 3 и 4-я группы получали в течение 3-х дней ЭГ1 сожно по 0,002, 0,01 и 0,05 мкг на 10 г массы тела, соответственно. У всех этных с первого дня введения исследовали влагалищные мазки, которые и утром в одно и то же время. Мышей умерщвляли эфиром в сроки имальной реакции слизистой оболочки влагалища на введение ЭП; ляли матку, очищали от жира, промывали от крови 0,9% NaCl и ливали. Определяли относительную массу матки (ОММ), последнюю 1жали в виде относительных чисел по отношению к своему контролю щяя масса) по формуле для каждой линии мышей: О

Л = — К, m 1 о т2о

--ь - +

0= М1о М2о п m 1 k т2к +

К= Mlk M2k n

ЭММ средняя относительная масса матки по отношению к контролю; О -няя относительная масса матки в опытной группе, ml о, т2о и т.д. - масса и каждой мыши в опытной группе, Ml о, М2о и т.д. масса тела каждой мыши лтной группе; К - средняя относительная масса в контрольной группе, mlk, и т.д. - масса матки каждой мыши в контрольной группе, Mlk, M2k и т.д. а тела каждой мыши в контрольной группе, п - количество мышей в группе, атистическую обработку проводили по методу Вилкоксона-Уитни-Манна. 1 в дозе 0,05 мкг уже через 3-е суток вызвал появление обильных чешуек во шище у 100% мышей линий СВА и С57В1/6 и 89% мышей линии СЗНА 14). ОММ в опыте оказалась выше (р<0,01) по сравнению с контролем у ей всех линий. Однако степень этого увеличения у мышей СВА была стельно (р<0,01) больше (0,4389), чем у мышей С57В1/6 (0,2570) и СЗНА 98) (табл.8, рис.15).

14. Влияние ЭП на возникновение исевдоэструса риэктомированных мышей различных линий.

0.002

0.01

0.05

По оси абсцисс - доза эстрадиола дипропионата (мкг/10 г м.т.). По оси ординат - количество мышей с пссвдоэструсом (%). ри дозе 0,01 мкг максимальное появление чешуек наблюдалось на 4-е сутки ie начала опыта у 100% мышей СВА, у 89%> мышей С57В1/6, а у мышей А. псевдоэструс возник только у 25%о животных (рис.14). ЭП в этой дозе шл также достоверное (р<0,01) увеличение ОММ у всех исследуемых линий юй. Так же, как и в случае с дозой 0,05 мкг, ОММ у мышей линии СВА была оверно выше (р<0,01), чем у резистентных линий (0,3984 против 0,1578 и 57) (рис.15, табл.8). и абсцисс - доза эстрадиола дипропионага (мкг/10г м.т.). :и ординат - относительная масса матки (%).

69

Таблица 8. Влияние ЭП на относительную массу матки (%) у овариэктомированных мышей различных линий.

Ли н и я Контроль ЭП 0,002 мкг ЭП 0,01 мкг ЭП 0,05 мкг

СВА 0,1096 ± 0,0244 0,1705 ± 0,0302' 0,3984 ± 0,0773*1 0,4389 ± 0,1219*'

C57BI/6 0,0904 ±0,0148 0,0711 ± 0,0084 0,1578 ± 0,0339* 0,2570 ±0,05 14*

СЗНА 0,0829 ±0,0198 0,0989 ± 0,0260 0,1657 ± 0,0264* 0,2698 ± 0,0615* - различие достоверно по сравнению с контролем; 1 - различие достоверно по сравнению с линиями С57В1/6 и СЗНА.

70 ри введении 0,002 мкг появление влагалищных чешуек на 3-й 4-е сутки не подалось. Они появились лишь на 6-е сутки у 90% мышей СВА, в то время, ни у одной самки С57В1/6 и СЗНА влагалищные чешуйки в исследуемые :и не были обнаружены (рис.14). Такая же картина наблюдалась с ОММ: ко у мышей линии СВА эстроген вызвал достоверное (р<0,01) увеличение vl по сравнению с интактными мышами СВА (0,1705 и 0,1906) и гю нению с подопытными самками С57В1/6 (0,0711) и СЗНА (0,0989). У мышей 31/6 и СЗНА ОММ не отличалась от своего контроля (табл.8, рис. 1 5). элученные данные свидетельствуют о существовании значительных ичий в реакции матки мышей линий СВА, С57В1/6 и СЗНА на введение ЭП. различия проявились в большей реактивности матки мышей чувствительной ш СВА по сравнению с двумя другими резистентными линиями, что вилось, во-первых, в более низком пороге чувствительности к ЭП у СВА, е резком увеличении массы матки при равных дозах и, во-вторых, в более ом пороге наступления ложного эструса при дейс твии ЭП. ва 6. внительная характеристика специфического связывания эстрадиола-с белками-рецепторами в цитозольной фракции маток мышей ггвительной и резистентной линий в процессе саркомогенеза, у'цированного ДМГ.

Исследование астрального цикла показало, что под действием ДМГ возникает юстирующий эструс у чувствительной к индукции сарком матки линии юй СБА и длительный диэструс у большей части исследуемых резистентных юй линий С57В1/6 и СЗНА [Труханова Л.С., 1986]. предыдущей главе показано, что введение физиологических доз эстрогена .пзает резкое увеличение массы матки и более быстрое появление чешуек во алище у кастрированных самок чувствительной к индукции сарком матки юй линии СВА по сравнению с резистентными линиями С57В1/6 и СЗНА. 1м образом, существуют линейные различия не только в чувствительности к ^ерогену, но и к эстрогенам. опытах на крысах было показано, что однократное введение ДМГ оказывает твие па нейроэндокринную систему, повышая порог чувствительности к огенам [Пожарисский К.М., Анисимов В.Н., 1975]. ыше представленные данные позволяют предполагать, что в индукции омы матки ДМГ определенную роль играют гормональные нарушения, шаемые этим канцерогеном. Однако разные линии мышей проявляют инаковую чувствительность к ДМГ, что, вероятно, связано с особенностями еза и секреции гормонов у исследуемых линий мышей, тем более, что ~п>ный уровень гормонов крови генетически детерминирован, строгены, как известно, оказывают свое действие через специфические пторы в клетках матки, поэтому сравнительное изучение линейных тчий в уровне специфического связывания эстрадиола-17(3 с рецепторами и в различных возрастных группах животных, сродства лиганда к пторным белкам в цитозоле матки, а также влияние неоднократных гний ДМГ на уровень рецепторов эстрогенов у чувствительной (СВА) и стентной (С57В1/6) линий мышей к эстрогенам представляют теоретический рес. опыте использовали 3-х месячных мышей-самок линий СВА и С57В1/6 ю 120 животных). Проведено 4 серии опытов, в каждой из которых едовали группы мышей обеих линий, получавших канцероген и группы ктных мышей того же возраста, служивших контролем. Опытные мыши 'чали ДМГ еженедельно по следующей схеме: I серия - однократно, II серия нъекций, III серия - 11 инъекций, IV серия - 31 инъекция. фазе эструса эстрального цикла, определяемой по влагалищным мазкам, вали под эфирным наркозом по 6-12 мышей каждой группы через двое суток е последнего введения ДМГ. Рецепторы эстрогенов определяли методом ;урентного связывания. Выделяли матку, отмывали от крови 0,9% раствором 1, освобождали от жира, взвешивали, измельчали, растирали в фарфоровой ке с жидким азотом, смешивали с 6-кратным объемом охлажденного ?ра, содержащего 10 мМ трис-HCL ("E.Merk", Германия), 1,5 мМ ЭДТА щта", США), 0,5 мМ дитиотрийол ("Koch Light Laboratories", жобритания), 0,3% азид натрия ("E.Merk", Германия) рН 7,4 при 20° С, 10% ,ирин (марка о.с.ч.) по объему. После размораживания центрифугировали 10 при 2500-3000xg. Из надосадочной жидкости получали цитозоль, рифугируя пробы при 105000xg 1 час на ультрацентрифуге "К-32М". 1ентрацию белка в цитозоле определяли по методу Loury [Loury O.N. et al., ]. Для работы использовали цитозоль с общей концентрацией белка 1,0-2,0 л. Пробы 100 мкл цигозоля инкубировали 14-16 час при 4-8° С с [1,2,6,7-эстрадиолом-17Р (рН]-Е2), ("Amersham", Великобритания). Чистота 'льзуемого [Зн]-Е2 равнялась не менее 98%. [^Н]-Е2 очищали по ранее :анному методу [Кушлинский Н.Е. и соавт., 1985]. Рецепторы эстрадиола деляли при насыщающей концентрации лиганда - 5 нМ с учетом ецифического связывания в присутсвии 100-кратного избытка илстильбэстрола ("Sigma", США), разделяя свободный и связанный птором гормон углем, покрытым декстраном. Пробы встряхивали,

1вляли в течение 10 мин при 0 С, затем центрифугировали с охлаждением 2500xg в течение 10 мин. 200 мкл супернатанта переносили во флаконы, ;ржащие 10 мл сцинтилляционной жидкости СЖ-8. Радиометрию проб водили на счетчике "Traucor Europa" (Голландия). Эффективность счета по гию равнялась около 40%. Равновесные константы диссоциации (К) и ячество специфических мест связывания (N) определяли по методу гчарда при концентрациях [^Н]-Е2 Ю-' 1-10& молей л~1. 1дя каждой группы мышей параметры прямой линии графика Скэтчарда зделяли методом наименьших квадратов. Адекватность описания юриментальных точек графика Скэтчарда определяли с помощью [)фициента детерминации (R/-). График считали адекватным при R2>0,8. На зве полученных параметров уравнения определяли общую концентрацию ывающих мест (теоретическое число свободных мест связывания) как точку течения прямой оси абсцисс, и константу диссоциации как параметр юна линии (коэффициент регрессии). В некоторых случаях свободные места ывания эстрогена с рецепторами определяли по одной точке при .пцающей концентрации лиганда 5 нМ и рассчитывали среднее значение щфического связывания. лк видно из данных табл.9 не обнаружено различий в равновесных ггантах диссоциации [ЗН]-Е2 с рецепторным белком в цигозольной фракции и матки между 15-недельными самками чувствительной линии мышей СВА дистентной линии С57В1/6 (0,120 и 0,158x10"^ моль л~'). В дальнейших подениях у контрольных 19-, 25-, 45-недельных мышей чувствительной in СВА отмечалась тенденция к повышению равновесной константы оциации: 0,181, 0,322, 1,110х10~9 моль л~1, соответственно (табл.9). Ш

Таблица 9. Влияние ДМГ и возраста на равновесные константы диссоциации [3Н]-Е2с рецепторным белком в матке (10~9 моль/л) мышей линии СВА и С57В1/6.

Количество введений ДМГ 1 5 11 31

Возраст (недели) 15 19 25 45

СВА контроль 0,120 ±0,026 0,181 ±0,046 0,322 ± 0,047 1,110 ± 0,142

СВА опыт 0,148 ±0,016 0,433 ± 0,052 0,588 ±0,067 1,510 ±0,159

С57В1/6 контроль 0,158 ±0,042 0,149 ±0,026 0,399 ± 0,093 0,353 ± 0,075

С57В1/6 опыт 0,093 ±0,015 0,192 ±0,047 0,250 ± 0,046 0,694 ± 0,029 ведение ДМГ не привело к изменению связывающей способности рН]-Е2 с пторным белком ни у чувствительной линии мышей СВЛ ни у резистентной 31/6. Равновесные константы диссоциации имели одинаковые значение, как в гных группах, получавших ДМГ, так и в контрольных (табл.9). У опытных иных с увеличением возраста отмечалась та же тенденция к снижению о ывающей способности рН]-Е2 с рецепторным белком в цитозоле ткани и, как и у интактных самок. Причем, также как и в случае с контрольными памп, у опытных мышей СВА отмечалась более ярко выраженная тенденция ижению связывающей способности, чем у резистентной линии С57В1/6 1.9), что выражалось в увеличении константы диссоциации у 45 недельных получивших ДМГ, до 1,510х10~9моль/л~1, в то время как у мышей С57В1/6 начение равнялось 0,694х10"9мольл~1. лица 10. Влияние ДМГ и возраста на уровень рецепторов югенов (свободные места)(фмоль/мг белка) в матке мышей ий СВА и C57BI/6. отчество ведений ДМГ 1 5 11 31

1озраст 1едели) 15 19 25 45

СВА ттроль 660 ± 25 777 ± 11 503 ± 8 252 ± 7

JА опыт 770 ± 10 859 ±5 792 ± 8 364 ± 7

57BI/6 нтроль 347 ± 43 424 ± 19 296 ± 22 162 ±4

151/6 опыт 504 ±6 613 ±2 486 ± 13 274 ± 8

Таблица 11. Влияние ДМГ и возраста на теоретическое число мест связывания эстрадиола с рецепторным (фмоль/мг белка) белком в матке мышей линий СВА и С57В1/6.

Количество введений ДМГ 1 5 11 31

Возраст (недели) 15 19 25 45

СВА контроль 988 ± 152 888 + 268 612 ± 112 384 + 60

СВА опыт 1452 ± 192 1064 ± 152 952 ±336 520 +168

С57В1/6 контроль 592 ± 164 496± 104 358± 100 192 ± 48

C57BI/6 опыт 744 ± 140 688 ± 196 568 ± 132 308 +148 еретическое число мест связывания лиганда с рецепторпым белком у твительной линии мышей СВА в 15 недельном возрасте было выше, чем у стентной линии С57В1/6 (988 и 592 фмоль/мг белка, соответственно) i.ll). Вместе с тем, при определении свободных рецепторов эстрогенов в золе ткани матки мышей при насыщающей концентрации лиганда было лено также их более высокое значение у линии СВА чем у линии С57В1/6 и 347 фмоль/мг белка, соответственно) (табл.10). С увеличением возраста юдалось снижение N как у чувствительной линии СВА, так и у рентной линии С57В1/6 (табл.11). Однако линейные различия сохранялись кончания эксперимента: у чувствительной линии СВА N было выше по тению с резистентной С57В1/6 (рис.17). Небольшое возрастное снижение одных рецепторов эстрогенов у обеих линий наблюдалось лишь на 25 пе жизни животных и только к 45 неделе их число снизилось более, чем в 2 по сравнению с 15 недельным возрастом (табл.10, рис.16). с. 16. Влияние ДМГ и возраста на уровень рецепторов эстрогенов (свободные места) в матке мышей линий СВА и С57В1/6.

1000 800 600 Н 400 200 0

0 ■СВА опыт

- <- - СВА контроль

C57BI/6 опыт

- -ш - C57BI/6 контроль т—I—I—г

I » гр гр # 4

-I—I—I—

ДМГ 1 недели 5 11

31 (количество введении)

По оси абсцисс - возраст.

По оси ординат - уровень рецепторов эстрогенов (фмоль/мг белка). л не менее, на протяжении всего опыта число свободных рецепторов было у чувствительной линии СВА, чем у резистентной С57В1/6 (рис.16). зкратное введение ДМГ вызвало повышение как теоретического числа мест лвания у линии СВА до 1452 фмоль/мг белка (контроль 988 фмоль/мг белка) линии С57В1/6 до 744 фмоль/мг белка (контроль 592 фмоль/мг белка) i.ll). После 5-ти, 11 -ти и 31-го введений ДМГ N было выше у мышей, чавших ДМГ по сравнению с контролем (табл.11, рис.17). Вместе с тем, отря на повышение уровня РЭ у резистентной линии С57В1/6 после ействия ДМГ, этот уровень оставался более низким, чем у чувствительной ш СВА, в течение всего опыта (табл.11, рис.17). ic.17. Влияние ДМГ и возраста на рецепторы эстрогенов в матке мышей линий СВА и С57В1/6.

15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 возраст, недели т т т т

15 11 31 введение ДМГ мышей обеих линий, получавших ДМГ, как и в контрольных группах, юдалось постепенное снижение теоретического числа мест связывания с астом, но его значение оставалось выше в опьпных группах (рис.17, 11).

79 осле первого введения ДМГ наблюдалось увеличение числа свободных шторов эстрогенов в цитозоле ткани матки мышей чувствительной линии (770 фмоль/мг белка) по сравнению с контролем (660 фмоль/мг белка) и )стентной линией C57BI/6 (504 фмоль/мг белка - в опыте, 340 фмоль/мг белка контроле) (рис.16, табл.10). Уровень свободных мест связывания оставался шенно высоким в опытных группах обеих линий после 5-го и 25-го введений Г и снижался после 3 1-го введения канцерогена. Однако на протяжении всего та число свободных рецепторов в цитозоле ткани маток мышей СВА, /чавших ДМГ, было выше, чем у мышей С57В1/6, получавших такую же дозу Г. Кроме того, уровень свободных рецепторов эстрогенов у интактных СВА выше, чем у С57В1/6, получавших ДМГ (рис. 1 6, табл. 10). аким образом, нами было установлено, что чувствительная к индукции ДМГ :ом матки линия мышей СВА имеет более высокий уровень РЭ в матке по шению с резистентной линией С57В1/6. По всей видимости, этот факт меняет более высокую чувствительность матки мышей линии СВА к ггвию эстрогена по сравнению с резистентными линиями мышей. Кроме >, нами было показано, что ДМГ способен повышать уровень РЭ в матке, как ггвительной, так и резистентной линий мышей, но различия в уровне РЭ при 1 сохраняются (более высокий уровень у чувствительной линии СВА). ва 7. яние пренатального воздействия диэтилстильбэстрола на канцерогенез, уцируемый ДМГ у мышей-самок резистентной и чувствительной линий. оздействие стероидных гормонов в перинатальный период оказывает юкое влияние на гормональный статус организма, сохраняющееся в течение i последующей жизни. Неонатальная андрогенизация, т.е. введение больших андрогена новорожденным мышам, вызывая персистирующий эструс, .ывает существенное воздействие на развитие опухолей, вызываемых (ением ДМГ взрослым мышам линии СВА, в частности сопровождается им стимулированием развития сарком матки [Smirnova I.O., Turusov V.S.,

ЭС - синтетический эстроген, применявшийся в свое время для сохранения :менности и вызывавший у части молодых женщин, которые подвергались действию в утробе матери, развитие рака влагалища и шейки матки. Другой кт действия ДЭС - возможное влияние его на чувствительность организма, ииего в контакте с ДЭС в перинатальном периоде, к химическим 1,ерогенам. О реальности такого влияния свидетельствуют эксперименты 1 W.E., 1966; Smirnova I.O., Turusov V.S., 1988; Yoshida Н., Fukunishci R„ ], показавшие, что перинатальное воздействие половых гормонов вызывает »бораторных грызунов персистирующий эструс, который сохраняется на яжении всей жизни и может влиять на индукцию и рост гормонозависимых :олей. В данном исследовании была использована комбинация сплацентарного действия ДЭС с последующим введением канцерогена слым потомкам.

3-х месячные самки СВА и СЗНА находились с самцами, начало менности определяли по влагалищным мазкам и появлению влагалищных юк. На 17-й день беременности внутрибрюшинно однократно вводили ДЭС. ютовление препарата: 5 мг ДЭС растворяли в 0,1 мл абсолютного этанола, /ченный раствор смешивали с 5,0 мл оливкового масла.

81 оставлено 3 опыта. Схема опытов представлена на рис. 18. В 1 и 2-м были эльзованы самки СВА, в 3-м - СЗНА. В 1-м и 3-м опыте ДЭС вводили в дозе или 0,3 мкг/г соответственно массы тела беременной самки. Полученному )мству, начиная с 3-х месячного возраста, ввели 20 раз ДМГ по обычной ie. Опыт был закончен через 50-52 недели после начала введения ДМГ. трольные и получившие только ДЭС самки СЗНА были оставлены на ивание. о 2-м опыте ДЭС вводили в дозе 1 мкг/г мышам линии СВА, количество (ений ДМГ 15. Мыши жили до естественной смерти (за исключением ощвленных в агоналыюм состоянии или при обнаружении опухоли). Всего в шх опытах было получено потомков-самок 439 линии СВА и 422 линии [А. На протяжении опыта исследовали влагалищные мазки для определения ального цикла. схема опыта влияние пренатального действия ДЭС на канцерогенез, индуцированный ДМГ у мышей линий СВА и СЗНА

СВА

ДЭС )

II

ДМГ

•-У /*

СЗНА

ДЭС ) v

ДМГ а

Рисунок 18. Схема опыта

7.1. Влияние пренаталыюго воздействия диэтилстильбэстрола на орогенез, вызываемый 1,2-диметил гидразином у чувствительной к кции сарком матки линии мышей СНА. пыт 1-й. Из данных, приведенных в табл. 12 следует, что выживаемость ей, получивших ДЭС, а затем ДМГ, к концу опыта была несколько выше Зенно во 2-й группе), чем мышей, получавших только ДМГ; различие, однако, стоверно (х2 = 2.48; р>0,05). табл. 13 приведена частота опухолей в различных экспериментальных группах, ота сарком матки при малой дозе ДЭС (53,7%, 2-я группа) была несколько J, а при большой - несколько выше (59,3%, 3-я группа), чем при действии только (56,3%, 1-я группа), но различия недостоверны. Не было различий между пами и в сроках обнаружения опухоли. обеих группах, получавших ДМГ после пренатального введения ДЭС, алась ниже общая частота опухолей толстой кишки (21,1; 46,3 и 40,7% в 1, 2 и руппах соответственно). Это понижение существенно при сравнении 1-й и 2-й п (х2 = 6,17; р<0,03) и несущественно при сравнении 1-й и 3-й групп (х2 = 2,9; 35). Частота злокачественных опухолей толстой кишки в 3-й группе была хтвенно выше (х^ = 10,5; р<0,01), чем в 1-й, а во 2-й группе повышение было олько ниже уровня значимости (х2 = 3,45; р=0,06).

Ьменение частоты опухолей клиторальной железы и аденом почек щественны и незакономерны - некоторое повышение при малой дозе ДЭС и сение - при более высокой дозе эстрогена. контрольной группе и у мышей, получавших только ДЭС, опухоли, ставленные в табл.13, не обнаружены.

Таблица 12. Выживаемость мышей-самок линии СВА, получавших ДМГ в сочетании с пренатальным воздействием ДЭС в дозе 0,1 или 0,3 мкг/г массы тела.

Группа Воздействие Продолжительность опыта / и е д е л и /

0я 20 25 30 35 40 45 50 (%)в

1 Дмг 416 40 39 38 34 30 19 16 (39,0)

2 0,1 мкг/г ДЭС + ДМГ 60 56 54 54 48 46 42 33 (55,0)

3 0,3 мкг/г ДЭС + ДМГ 33 28 28 27 23 21 18 14 (42,4)

4 0,1 мкг/г ДЭС 45 45 45 43 43 43 42 41 (91,1)

5 0,3 мкг/г ДЭС 35 35 35 35 35 35 34 34 (97,1)

6 Контроль 84 84 84 80 78 77 77 77 (91,7) а - начало введении ДМГ; б - здесь и далее - количество мышей, оставшихся в живых к указанному сроку; в - по отношению к начальному числу мышей. ныт 2-й. В табл.14 приведены данные о выживаемости мышей линии СВА, чивших пренатально ДЭС в дозе 1мкг/г массы тела. Пренатальное введение в указанной дозе значительно сократило выживаемость мышей, чавших ДМГ: во 2-й группе (ДЭС в сочетании ДМГ) все животные погибли )-й неделе, тогда как при одном введении ДМГ (1-я группа) выжили к этому у 30% мышей. У мышей, получавших только ДЭС (3-я группа), -шаемость была значительно ниже, чем в чистом контроле: в первом случае в 120 педель живы 2 (6%) из 31 мыши, тогда как в контроле выжили более вины мышей (24 из 45). табл.15 приведены данные о частоте опухолей в различных группах у ей линии СВА при пренатальном воздействии ДЭС в дозе 1 мкг/г. Частота ом матки при комбинированном действии ДЭС и ДМГ (73,3%, 2-я группа) игельно выше, чем в 1-й группе, получавшей только ДМГ (42,8%). Различия высокодостоверны (Х^ = 6,12; р<0,02). Различий в сроках обнаружения олей матки между 1-й и 2-й группами не отмечено. В небольшом честве наблюдений (9,1%) саркомы матки возникли в поздние сроки и у [ей 3-й группы, получавших только ДЭС. пухоли матки достигали большого размера, занимали большую часть иной полости и часто служили причиной смерти мышей. Средняя масса олей магки была равна 2,43+0,26 и 3,23+0,28 г в 1-й и 2-й группах ветсгвенно (различия значимы: t=2,05, р<0,05), притом, что при шнированном воздействии они появлялись раньше и росли быстрее: до 50-й ли в 1-й группе обнаружено 27%о (4/15), тогда как во 2-й - 68%о (15/22) всех олей матки. Среднее время обнаружения опухолей матки составляло М,91, 48,8+2,33 и 78,0+3,61 нед в 1, 2 и 3-й группах соответственно шчия между 1-й и 2-й группами значимы: t=2,38, р<0.05). 'азличия между 1-й и 2-й группами в частоте опухолей толстой кишки, оральной железы и других органов незначительны. пухоли прочих органов характерны для данной линии мышей (лимфомы, оли молочной железы, аденомы и гемангиоэндотелиомы печени). Чаще

86 о они наблюдались в контрольной группе с максимальной для этой линии лей продолжительностью жизни и у мышей 3-й группы, получавших только ^ и проживших достаточно долго (табл.14).

Таблица 13. Частота опухолей у мышей-самок линии СВА, получавших ДМГ в сочетании с пренатальным воздействием 0,1 или 0,3 мкг/г ДЭС и забитых через 52 недели.

Группа Воздействие Эффективное число Мыши С 0 п у X 0 л я м и матки толстой кишки клиторальной железы почек прочих органов абс. %а Всего Рак абс. %а абс. %а абс. %а абс. %а

1 Дмг 38 21 55,3 8 21,1 2 5,3 5 13,2 12 31.6 Т

2 0,1 мкг/г ДЭС +ДМГ 54 29 53,7 25 46,3 10 18.5 10 18,5 19 35,2 13' л J 0,3 мкг/г ДЭС +ДМГ 27 16 59,3°' 11 40.7 10 37,0 J 11,1 7 25.9 5Л а - по отношению к эффективному числу; б - в 1-ом случае с метастазом в желудок; в - 1 ангиосаркома почки, 3 гемангиоэндотелиомы (ГАЭ) и 1 рак печени, 1 полип желудка. 1 аденома легкого; г - 9 ГАЭ и 2 аденомы печени. 2 лимфомы; д - 3 ГАЭ и 1 аденома печени, 1 ангиома почки.

8S

Таблица 14. Выживаемость мышей-самок линии СВА, получавших ДМГ в сочетании с пренатальным воздействием ДЭС в дозе 1 мкг/г.

Группа Воздействие Продолжительность опыта (недел и)

0а 40 60 80 100 120 140 160

1 Дмг 35°' 35 23 13 12 1 0 0

2 ДЭС + ДМГ 30 30 22 о J 0 0 0 0 о J ДЭС 31 31 29 21 15 2 0 0

4 Контроль 45 45 44 44 43 24 11 0 а - начало введения ДМГ; б - здесь и далее - количество мышей, оставшихся в живых к указанному сроку

Таблица 15. Частота опухолей у мышей-самок СВА, получавших ДМГ в сочетании с пренатальным воздействием

ДЭС в дозе 1 мкг/г и оставленных на доживание.

Группы Воздействие Эффективное число Мыши с о п у холя м и матки Толстой кишки клиторальной железы Печени почки (аденомы) прочих органов абс. %а всего %а рак абс. %а всего Аденомы рак абс. %а

1 ДМГ 35 15 42,8 -*> j 8,5 1 2,7 7 20.0 5 4 1 1 1 об j>

2 ДЭС + ДМГ 30 22 / 5Д 16,7 0 0 5 16,3 1 в J 1 0 9 5' л ДЭС 31 л J 9,7 0 0 0 0 0 0 2е 0 0 j 8Ж 19й

4 Контроль 45 0 0 0 0 0 0 0 0 12' 1 1 0 1 а - по отношению к эффективному числу; б - 1 рак молочной железы (РМЖ); в - 2 ГАЭ печени; г - 1 (РМЖ), 1 ангиома селезенки, 3 аденомы легкого; д - 5 железистых полипов кишечника; е - 2 ГАЭ печени; ж - 2 лимфомы. 2 РМЖ. 3 аденомы легкого. 1 гранулезоклеточная опухоль яичника (Г 050; з - 1 ГАЭ печени, и - б лимфом, 6 аденом легкого, 3 ангиомы брыжеечного лимфоузла. 4 ГОЯ. то касается, неопухолевой паталогии следует указать на частое обнаружение й группе и особенно во 2-й творожистых масс и конкрементов во влагалище путствующими воспалительными ^изменениями в мочевом пузыре и почках, всех группах отмечены кисты яичников - серозные (частота их была Зольшей в контрольной группе) и геморрагические (4/35, 1/30, 0/31, 4/45 в 1, и 4-й группах, соответственно). сследование влагалищных мазков показало, что у мышей, получавших ттально ДЭС, имел место персистентный эструс. риведенные результаты свидетельствуют о том, что пренаталыюе 1,ействие ДЭС у мышей линии СВА, вероятно, приводит к фэстрогенизации и оказывает существенное влияние на чувствительность ней к ДМГ, выразившееся в повышенной частоте образования опухолей <и. Частично это было проявлением аддитивного эффекта, поскольку и при :твии одного ДЭС также возникло небольшое число этих опухолей. Но и с Юм аддитивного эффекта различия в частоте опухолей матки у животных, /чавших комбинированное воздействие, и у мышей, получавших только Г, остаются весьма значительными. Эти результаты совпадают с /ченными данными в опытах комбинированным воздействием ДМГ и генного эстрогена ЭП, а также при неонатальной андрогенизации периментальный прием в виде введения андрогена новорожденным *унам с целью получения персистирующего эсгруса) на мышах той же линии irnova ГО., Turusov V.S., 1988]. Отличие заключается в большей аженности эффекта эстрогена в упомянутых опытах, проявившейся в ительно большей частоте опухолей в группах с комбинированным ействием. Однако при комбинации ДМГ с экзогенным ЭП (последний .или взрослым мышам повторно в течение многих недель), а при [атальной андрогенизации андроген был введен новорожденным в большой (0,5 мг на новорожденного), что повлекло за собой высокую смертность, симость эффекта эстрогена от его дозы проявилось и в представленных гах: 0,1 и 0,3 мг/г ДЭС, примененные в 1-м опыте, влияния на твительность мышей к утеротропному действию ДМГ не оказали, оно явилось лишь при дозе 1мг/г, которая сколько-нибудь выраженной стальной смертности не вызвала. ругим проявлением гиперэстрогенизации, вызванным пренатальным ;твием ДЭС, было образование конкрементов во влагалище из слущенных ювевших эпителиальных клеток. Этот эффект эстрогенов хорошо известен и зовождается часто гнойным циститом и пиелонефритом. Высокая частота шьных опухолей матки и воспалительные процессы мочевых путей были линой повышенной смертности в группе с комбинированным воздействием Г и ДЭС. лияние трансплацентарного действия ДЭС на развитие других опухолей, этаемых ДМГ неопределенно. В 1-м опыте оно проявилось в отношении -солей толстой кишки, но не было воспроизведено в 2-м опыте, в котором а использована большая доза ДЭС, но мыши были оставлены на доживание. натальная андрогенизация также не повлияла на частоту вызываемых ДМГ <олей толстой кишки у мышей-самок той же линии |Smirnova I.O., Turusov 1988]. чевидно, что экстраполяция полученных экспериментальных данных на >века трудна. Нельзя, однако, исключить ситуации, когда по каким-то -шнам плод или новорожденный подвергнется действию достаточно высоких андрогенов или эстрогенов, влияющих в перинатальном периоде на систему гголамус-гипофиз-гонады. В этом случае можно ожидать их влияние на жринную систему и, возможно, на развитие опухолей в гормонозависимых нах. Не всегда новые факты, полученные в экспериментах на лабораторных этных, подтверждаются на человеке. Однако иногда это может иметь место. произошло при использовании ДЭС: первоначально его способность .шать опухоли матки была продемонстрирована на мышах, чему не придали ения и продолжали применять его в клинике с известным трагическим льтатом.

2. Влияние пренатального воздействия диэтилстильбэстрола на орогенез, вызываемый 1,2-диметилгидразином у резистентной к кции сарком матки линии мышей СЗНА. з данных табл.16 видно, что выживаемость мышей линии СЗНА, чавших ДМ.Г после пренатального воздействия ДЭС (58,3% и 45,7% в пах 2 и 3, соответственно) была значительно лучше, чем при действии го ДМГ (28,2% - группа 1). Смертность в контрольных группах была шальной. табл.17 приведена частота опухолей и геморрагических кист яичников, анных ДМГ в различных экспериментальных группах. Очевидно сильное озящее действие пренатального введения ДЭС на индукцию ДМГ опухолей оральной железы и, особенно, на развитие геморрагических кист яичников, пьшение частоты опухолей клиторальной железы статистически значимо = 6,36; р=0,02). Различия в частоте рака толстой кишки не существенны (х~ ; р>0,05), а различия в суммарной частоте полипов и рака этого органа или остью отсутствуют (группа 1 против группы 3 - 3,38% и 37,0%, зетственно) или незначительны (28,0% в группе 2). енатальное воздействие ДЭС не оказало влияния на частоту аденокарцином и, но привело к возникновению ранних сарком магки при меньшей дозе (4/45 против 0/37 при действии одного ДМГ, X" = 3,45; р=0,06). Саркомы [ обнаружены при гистологическом исследовании: в 2-х случаях они элагались в шейке матки и в 2-х - в параметрии. стота опухолей в других органах не претерпела существенных изменений в лах, получивших ДМГ в сочетании с ДЭС. Эти опухоли были представлены эмами почки, гемангиоэндотелиомами печени и единичными эбразованиями в других органах (см. примечание к табл. 17).

Таблица 16. Выживаемость мышей самок линии СЗНА, получавших ДМГ в сочетании с пренатальным воздействием ДЭС в дозе 0.1 или 0.3 мкг/г и доживших до 50 недель после начала введения ДМГ.

Группы Воздействие Продолжительность эксперимента (недели)

0а 20 25 30 35 40 45 50 (%)

1 ДМГ 396 38 37 32 28 21 16 11 (28.2)в

2 0.1 мкг/г ДЭС+ДМГ 48 48 48 47 43 29 29 28 (58.3) j 0.3 мкг/г ДЭС+ДМГ 35 31 31 27 24 21 20 16(45.7)

4 0.1 мкг/г ДЭС 49 49 49 49 49 49 49 49 (100.0)

5 0.3 мкг/г ДЭС 50 50 50 49 49 48 46 46 (88.0)

6 Контроль 101 101 101 101 99 98 95 95 (94.1) а - начало введения ДМГ; б - здесь и далее - количество мышей, доживших до указанного срока; в - относительно количества мышей к началу введения ДМГ.

9 it

Группы Воздействие Эффективно е число Мыши с опухолями Геморрагические поражения яичников

Толстой кишки клитораль-ных желез матки другие органы мыши с поражениями всего всего рак N %а рак саркома N %а N на мышь

N %а

1 ДМГ 37 16 9 24.3 19 51.4 1 0 14" 29 78.4 416 1.4

2 0.1 мкг/г ДЭС+ДМГ 45 13 6 13.3 12 26.6 0 4 15' 24 г л 5 J. J 30 1.25

3 0.3 мкг/г ДЭС+ДМГ 32 14 4 12.5 9 28.1 2 0 12Л 14 43.7 14 6 1.0 a - относительно эффективного числа. N - абсолютное количество мышей; б - ангиосаркома в стенке кисты в одном случае; в - 4 гемагиоэндотелиомы печени (ГАЭ). 4 аденомы и 2 ангиосаркомы почек, 1 лимфома, 1 аденома и 1 карцинома печени. 1 аденома легкого; г - 3 ГАЭ печени, 1 ангиома селезенки. 5 аденом и 1 ангиосаркома почек, 3 лимфомы, 1 аденома печени. 1 аденома легкого: л - 3 ГАЭ печени. 1 ангиосаркома селезенки, 3 аденомы почек, 1 забрюшинная ангиосаркома,! аденома и 2 карциномы печени, 1 аденома легкого. ньшение частоты геморрагических поражений яичников при ттальном действии ДЭС (см. табл.16) было не только статистически имым при сравнении группы 1 с группами 2 и 3 (р<0,05 и р<0,01 ветственно), но, кроме того, выявлен отчетливый отрицательный дозовый [д (р<0,004). Из данных табл.17 также следует, что при действии одного " (группа 1) кисты яичников у 40% мышей были двусторонними, тогда как меньшей дозе ДЭС (группа 2) двусторонние кисты встретились у 25% отных, а при большей дозе ДЭС (группа 3) они не были обнаружены >ще. И в данном случае имел место отрицательный дозовый тренд.

Кисты яичников у мышей, получивших ДМГ после трансплацентарного ггвия ДЭС, были, как правило, меньшего размера, чем у мышей при угвии одного ДМГ. Однако зависимости от дозы ДЭС здесь отмечено не о: при действии одного ДМГ 56% всех геморрагических кист яичников пи диаметр более 5 мм, процент таких кист при меньшей дозе ДЭС был ш 23, а при большей дозе - 40.

Геморрагические кисты яичников нередко были причиной смерти отных из-за их разрыва. Уменьшение их числа и размеров у мышей, /чавших ДМГ после трансплацентарного действия ДЭС, было, очивидно, эй из причин значительно лучшей выживаемости этих мышей по тению с таковыми, получавшими только ДМГ.

В контрольных группах (ДЭС или интактные животные) у мышей, рших до 52-й недели, ни опухолей, ни кист яичников найдено не было. В ?е поздние сроки обнаруживались гемобластозы, аденомы печени и легких, шчные геморрагические кисты яичников диаметром до 3 мм.

Кольпоцитологическое исследование мышей линии СЗНА показало, что катальное воздействие ДЭС приводит к значительному удлинению фазы >уса и сокращению фазы диэструса.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что пренатальное [ействие ДЭС, вызывая ановуляторный ацикличный синдром, зовождающийся персистирующим эструсом, оказывает значительное лфицирующее действие на канцерогенез, индуцируемый ДМГ у взрослых •мков, матери которых получили ДЭС во время беременности, катальное введение ДЭС оказало стимулирующее действие на омогенез матки у мышей линии СВА. Этот эффект у линии СЗНА был ажен намного слабее (особенно по сравнению с действием ЭП в -пубертатном периоде) и проявился лишь при введении дозы 0,1 мг/кг Наиболее сильное влияние претерпели геморрагические поражения тиков: их частота у линии СЗНА снизилась с 78,4% (ДМГ) до 53,3 и 43,7%о [0,1 и 0,3 мг/кг ДЭС соответственно). Пренатальное введение ДЭС ало тормозящее влияние и на другие характерные для ДМГ опухоли, а нпо новообразования клиторальных желез у мышей линии СЗНА, снизив астоту с 54,4% (ДМГ) до 28,1% (ДМГ+ДЭС 0,1 мг/кг) и 26,6% (ДМГ+ДЭС мг/кг). Подобный, но более выраженный эффект был получен при мгнии ЭП взрослым мышам линии СЗНА, получавшим ДМГ (с 61%> в те ДМГ до 19% в группе ДМГ+ЭП) (см.гл.4).

Менее определенно проявилось действие вызванной пренатальным (ением ДЭС гиперэстрогенизации на индукцию ДМГ опухолей толстой :ки: отмечено некоторое снижение частоты аденокарцином при отсутствии екта на общую частоту опухолей. Неопределенный результат был получен комбинированном действии ДМГ и ЭП (глава 4.Г). Неонатальная эогенизация мышей-самок линии СВА не повлияла на частоту опухолей ггой кишки, вызванных ДМГ [Smirnova I.O., Turusov Y.S.,1988]. 1о данным литературы перинатальное воздействие половых гормонов то зряло, то замедляло канцерогенез молочной железы у крыс, вызванный -диметилбенз[а]антраценом [Purnell D.M., 1989; Yoshida Н., Fukunishi RR., 1; Yoshida H. et al., 1980], однако, эффект был значительно слабее, чем в гоящем исследовании и цитированных выше [Smirnova I.O., Turusov V.S., 3] опытах с гормонозависимыми новообразованиями, вызванными ДМГ. гзультаты опыта в целом совпадают с полученными ранее результатами на иах той же линии, получавших комбинированное воздействие ДМГ и

97 энного ЭП (глава 4.1.). Введение ДМГ и ЭП взрослым мышам привело, с й стороны, к снижению частоты геморрагических кист яичников с 59% до с другой стороны - к значительному повышению частоты сарком шейки и (с 0 до 28%). Хотя эффект пренатального действия ДЭС был ттельно слабее эффекта ЭП (особенно в части, касающейся стимуляции эмогенеза матки). Важно подчеркнуть, что он получен после кратного введения ДЭС и исключительно за счет эндогенных (а не хнных, как в случае ЭП) эстрогенов.

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

На основании вышеизложенных результатов в данном разделе будут лотрены следующие вопросы:

1. Механизмы стимулирующего действия эстрогенов на индукцию ДМГ эм матки у мышей.

2. Возможные механизмы линейных различий в индукции ДМГ сарком и у мышей.

3. Модификация канцерогенеза пренатальным введением ДЭС.

Новая экспериментальная модель - саркома матки у мышей, цированная ДМГ, характеризуется 2 особенностями: 1) гвительностью индуцированных сарком матки к действию эстрогена и 2) .женными линейными различиями в индукции (СВА - чувствительная я, СЗНА, С57В1/6 - резистентные).

Основным результатом настоящего исследования была демонстрация щмости индукции сарком матки, вызванных ДМГ, от эстрогенов. Было зано, что эстроген (эстрадиола дипропионат) сокращает латентный од появления сарком матки и повышает их частоту.

По данным лаборатории канцерогенных веществ введение одного ДМГ [ение 30-40 недель вызывало развитие сарком матки у мышей линии СВА -65% случаев. При этом первые опухоли были обнаружены через 29-35 ль от начала опыта [Ирд Е.А. и Смирнова И.О., 1979; Турусов B.C. и г., 1979; Turusov V.S. et al., 1977].

При 10-кратном введении одного ДМГ и длительном наблюдении (80-1едель) саркомы возникают только к концу периода наблюдения у 15-20% ей линии СВА. При сочетании 10-кратного введения ДМГ с ЭП частота пцается до 60-80%о, при этом резко сокращается латентный период, (овательно, при введении только ДМГ опухоли возникают лишь из какой-тсти инициированных клеток, неопластическая потенция остальных щированных клеток выявляется только при действии ЭП.

Таким образом, 10-иедельное применение ДМГ в сочетании с введением : течение 20-25 недель вызвало более выеокую частоту возникновения )м матки, что и при 30-40 недельном применении одного ДМГ. Кроме латентный период сократился не менее, чем на 10 недель.

Стимулирующее действие ЭП на развитие сарком матки проявилось как эдиовременном введении с ДМГ (коканцерогенное действие, см.гл.3.Г), i при введении ЭП после прекращения введения ДМГ (промоторное гвие, см.гл.3.3.).

Полученные результаты выраженного стимулирую)него эффекта ЭП на эмогенез матки, индуцируемый ДМГ, сопоставимы с результатами гвия на кожу канцерогенов и кротонового масла (или его действующего онента - ТФА). В обоих случаях наблюдается возникновение под гвием только одного канцерогена сравнительно небольшого количества олей с длительным латентным периодом, а в результате сочетанного гвия стимулирующего агента (ЭП в наших опытах или ТФА в опытах на ) и канцерогена существенно повышается частота развития опухолей и стельно сокращается латентный период. Учитывая, что ЭП в наших ах не вызывал сарком матки, эту новую модель можно признать удобной «учения стимулирующего (коканцерогенного и промоторного) действия )генов на химический канцерогенез. Особенностью данной модели 2тся стимуляция роста индуцированной соединительнотканной ачественной опухоли, в то время как ранее объектом действия эстрогенов тромоторов вообще), как правило, были опухоли эпителиального схождения.

Самой важной особенностью действия ЭП является его способность ивать пролиферацию стромальных элементов матки мышей как ктной, так и после воздействия ДМГ [Меркулова И.Б., 1986]. Этим ством ЭП можно объяснить его стимулирующее действие на эмогенез матки как при одновременном введении с ДМГ, так и при его ении после воздействия ДМГ. И.Б.Меркуловой (1986) было показано, что нис эстрогена (ЭП) контрольным самкам существенно увеличивает иферативный пул стромальных клеток эндометрия (с 6 до 12-13% в ше первых 10 недель). Пролиферативный пул клеток мышечной ткани и увеличивался с 3,5 до 10-11% в течение первых 5 недель. Позже при естном применении ДМГ и ЭП пролиферативный пул снижается за ючением очагов гиперплазии, где высокий пул сохраняется вплоть до пения очагов опухолевого роста. Этого не происходит при применении го ДМГ: пролиферативный пул, увеличившийся в течение первых 5 ль, затем снижается до контрольного уровня, на котором и сохраняется в тие 25 недель, несмотря на продолжающееся введение ДМГ. Показано, 'же после 5 недель введения ДМГ у 50% мышей линии СВА наблюдается истирующий эструс, а у остальных - нарушенные эстралытые циклы канова Л.С., 1986]. Эти данные позволяют объяснить существенное ащение эстрогеном латентного периода появления сарком. При введении го ДМГ первые саркомы матки появляются через 30-35 недель, при Минированном воздействии ДМГ и ЭП появились па 10-15 недель раньше, одновременном введении ДМГ и ЭП очаги усиленной пролиферации чальных клеток являются, по-видимому, мишенью для ДМГ. В работах in на линии клеток Т47Д рака молочной железы человека показано, что 1диол регулирует пролиферацию клеток при участии опухолевого белка-ессора р53 (ChiIT П. et al., 1995). Кроме того, известно, что этот белок ;т ключевую роль в развитии ряда спонтанных и индуцированных олей (Marshall С.J., 1991). Мутированный ген-супрессор р53 с высокой )той был обнаружен в индуцированных ДМГ саркомах матки у мышей и СВА (Trukhanova L.S. et al., 1998). Таким образом, стимуляция роста зм матки эстрадиолом может быть обусловлена с одной стороны додействием эстрадиола с белком р53, с другой стороны, наличием рованного гена р53, обнаруживаемого в индуцированных саркомах, обность ЭП повышать пролиферацию инициированных ДМГ лальных клеток, очевидно, объясняет его промоторный эффект.

Повышением пролиферации на введение ЭП реагируют и елиальные клетки эндометрия, но они не являются мишенью для действия и это повышение пролиферации не ведет к развитию опухоли экулова И.Б., 1986].

Как указывалось в обзоре литературных данных, ДМГ быстро (в течение к) выводится из организма и его канцерогенные метаболиты являются >ткоживугцими соединениями [Лихачев А.Я., 1980]. Таким образом, ЭП, леняемый через неделю после окончания введения ДМГ, не может влиять взаимодействие метаболитов ДМГ с клетками-мишенями. Учитывая ительное повышение частоты и сокращение латентного периода развития ом матки у мышей, которым продолжали давать эстроген после :ращения введений ДМГ, по сравнению с группой, в которой ДМГ и ЭП ли попеременно, в основе стимулирующего действия эстрогена на омогенез матки, вероятнее всего, лежит его влияние на усиление шферации мезенхимных элементов матки.

В экспериментах с одновременным применением ДМГ и ЭП, ДМГ двовал на стромальные элементы, пролиферация которых была 1улирована ЭП, то есть на стадии, предшествующей инициации. При )временном введении ДМГ и ЭП возможно влияние последнего на [болизм ДМГ, хотя конкретный механизм этого влияния неизвестен.

Таким образом, следует выделить 2 возможных механизма 1улирующего действия ЭП на саркомогенез матки:

1) при применении ЭП перед введением ДМГ вызываемая ЭП жферация стромальных клеток повышает число клеток-мишеней для тирующего действия ДМГ, то есть имеет место влияние ЭП на стадии шициации;

2) при применении ЭП после прекращения действия ДМГ происходит [ение пролиферации инициированных клеток.

Теоретически влияние эстрогенов на индуцированный химическими тами канцерогенез можно свести к следующему:

1) влияние на метаболизм канцерогена в печени или органе-мишени;

2) изменение состояния клеток-мишеней, на которые действует ероген или его метаболиты, а именно: усиление пролиферации лальных клеток перед введением канцерогена, т.е. увеличение числа ж-мишеней на стадии преинициации;

3) влияние на пролиферацию инициированных клеток;

4) возможное торможение межклеточных взаимодействий, свойственное оторам [Krutovskikh V., Yamasaki Н., 1997];

5) возможное торможение апоптоза, подобное вызываемому барбиталом в печени [Burch W. et al., 1985].

В двух первых случаях канцероген и эстроген должны применяться или временно, или эстроген должен предшествовать действию канцерогена, двух последних вариантах эстроген может применяться одновременно шцерогенное действие) или после воздействия канцерогена (промоторное гвие). Третий вариант имеет отношение только к промоции.

Одной из основных задач настоящей работы было выявление ожных механизмов линейных различий в индукции саркомы матки у ей. Известно, что передача через половые клетки мутации опухолевого супрессора является причиной чувствительности к возникновению олей и определяет развитие множества видов спонтанных опухолей как у >тных, так и человека [Marshall С.J., 1991; Weinberg R.A., 1991]. Участие олевого гена-супрессора в индуцируемых канцерогеном опухолях :тно в меньшей степени, чем для спонтанных опухолей. В частности, зано значение инактивации канцерогеном опухолевого гена-супрессора развития гепатоцеллюлярной карциномы у человека, которое связано с гвием афлатоксина и существующем при этом гепатите. В приведенном iepe индуцированная афлатоксином мутация в р53 опухолевом гене-ессоре играет критическую роль в развитии опухоли [Walker С., 1996]. стно, что большое число мутаций р53 обнаружено в саркоме матки у века [Andreassen A. et al., 1993; Greeman D.G. et al., 1977]. L.S.Trukhanova (1998) обнаружила мутации р53 (транзиция С-А) с высокой частотой в /цированиых ДМГ саркомах матки у мышей линии СВА. Примечательно, указанная транзиция характерна для действия химических канцерогенов, илирующие соединения такие как ДМГ с высокой частотой вызывают щии-транзиции G:C —> А:Т. Предполагается, что они являются льтатом 06-аЮ повреждения [L.S.Trukhanova et al., 1998].

Для лабораторных животных характерны существенные различия между эедными линиями в возникновении спонтанных опухолей. Кроме того, -отся данные о положительной корреляции между частотой спонтанных солей и чувствительностью к индуцированному канцерогенезу [Drinkwater ., Ginsler J.J., 1986]. Как указывалось в литературном обзоре, у ггвительных и резистентных к легочному канцерогенезу линий мышей злены локусы, контролирующие чувствительность к легочному орогенезу [Malkinson A.M. et al., 1985]. Следует отметить, что дические факторы могут участвовать в злокачественной трансформации только путем непосредственного действия на ДНК, но и влиять ;редовано через систему метаболизма канцерогенов. Локус Ah на линой хромосоме 12 контролирует индуцибильность энзимов, 1болизирующих канцерогены [Nebert D.W. et al., 1991]. У инбредных лй мышей с легко индуцибельной системой метаболизма канцерогены :о превращаются в реактивные формы, взаимодействующие с ДНК клеток-юней. Напротив, у резистентных мышей активация канцерогенов явлена, и опухоли при тех же условиях развиваются редко или не ллваются вообще [Fleiszer D. et al., 1988; Delker D.A. et al., 1996].

С целью исследования линейных различий в индуцированном ДМГ лерогенезе мы использовали несколько линий мышей: чувствительную к /кции сарком матки СВА и резистентные - СЗНА и С57В1/6. Учитывая симость индукции этих опухолей от эстрогенов, можно было щоложить, что они вероятнее всего, связаны с различным гормональным усом мышей чувствительной и резистентных линий. Как было указано г, чувствительная линия СВА характеризуется значительными нениями астрального цикла в ответ на введение ДМГ [Труханова J1.C., ]. Изменения проявляются в развитии постоянного эструса у половины гриментальных животных и у части животных удлиненной фазы эструса. ;зистентных линий введение ДМГ в течение определенного периода [вает эструс лишь у части животных, а у некоторых мышей развивается эянный диэструс. Постоянный эструс в ответ на введение ДМГ, юдавшийся у большинства мышей чувствительных линий, является гнным показателем повышенного уровня эндогенных эстрогенов, что по себе создает оптимальные условия для индукции сарком матки. Таким юм, различное изменение гормонального статуса под лействием ДМГ частично объясняет различную чувствительность мышей линии СВА с й стороны и линий СЗНА и С57В1/6, с другой стороны, к индукции )м матки.

Эти данные позволили предположить о существовании линейных 1чиях в реакции тканей половых органов на воздействие эстрогеном, ение эстрадиола дипропиоиата двусторонне овариэктомированным ам чувствительной линии СВА и резистентным линиям СЗНА и С57В1/6 ало различную реакцию матки и слизистой влагалища. Так, введение ЭП е 0,002 мкг/10г м.т. вызвало статистически значимое увеличение массы л и появление псевдоэструса почти у всех самок чувствительной линии аерез 3 суток после воздействия, в то время как у резистентных линий юэструс не наблюдался, и масса матки не изменилась (гл.5). У самок ■тентных линий такой эффект (увеличение массы матки и появление юэструса) достигался только при увеличении дозы ЭГ1 до 0,05 мкг/Юг го есть в 25 раз и лишь на 6 сутки после воздействия. Полученные данные •ят о существовании значительных различий в реакции матки мышей вительной и резистентных линий, что выразилось в более низком пороге вительности к ЭП ткани матки и более низком пороге наступления оэструса у чувствительной линии мышей. Таким образом, ткань матки ей линии СВА более чувствительна к действию эстрогена, чем матки \ и С57В1/6, и это может быть одной из причин: (1) индукции )гепзависимой саркомы матки у линии СВА, (2) резистентности линий \ и С57В1/6 к индукции этой опухоли и (3) значительному улируюгцему действию ЭП на индукцию саркомы матки.

Как указывалось выше, существуют линейные различия как в лкновении саркомы матки, индуцированной ДМГ у мышей, так и в гвительности матки к эстрогену. Возможно, одной из важных причин гвительности линии мышей СВА и резистентности линии С57В1/6 к кции этой опухоли является значительно более высокий уровень числа связывания рецепторов эстрогенов в матке у мышей СВА. Так как эма матки является гормонозависимой и введение экзогенного эс трогена лтельно стимулируют ее развитие [Ирд Е.А., Смиронова И.О., 1979], гние уровня РЭ и их связывающей способности является важным для нения причин линейных различий в индукции саркомы матки.

Как видно из представленных данных в главе 6 равновесная константа эциации [Зн]-Е2 с рецепторным белком в цитозоле ткани матки, а, эвательно и связывающая способность ["Н]-Е2 с рецепторными белками, гличалась группах, получавших ДМГ, и в контрольных группах как у гвительной линии СВА, так и у резистентной линии С57В1/6. Таким зом, введение ДМГ не оказало влияния на связывающую способность пторных белков с эстрогенами. Однако мы наблюдали значительные 1чия в уровне РЭ у чувствительной и резистентной линий мышей. ;ень РЭ у 3-х месячных интактных самок чувствительной линии СВА был •цельно выше, чем у резистентной линии С57В1/6. Эти различия издались в течение всего эксперимента, включая период введения ДМГ. астное снижение уровня РЭ в цитозоле ткани матки самок обеих линий ей как интактных, так и опытных, подтверждаются литературными ыми о возрастном изменении уровня рецепторов к эстрогенам у крыс рнов А.Н. и соавт., 1975]. Под действием ДМГ наблюдали повышение ня РЭ как у чувствительной линии, так и у резистентной, однако характер 1чий между линиями сохранялся.

По данным некоторых авторов существует обратная корреляционная гимость между концентрацией эстрогенов в крови и уровнем рецепторов >генов в цитозоле ткани матки крыс. Так, с повышением уровня >генов в крови крыс-самок при половом созревании, у старых животных с юстирующим эструсом, а также при введении эстрогенов снижается гнь цитоплазматических рецепторов эстрогенов в матке [Смирнова О.В. и 1974; Смирнов А.Н. и соавт., 1975; Орлов М.М., Савченко О.Н., 1983; son Н.А., 1982]. При снижении уровня эстрогенов в крови животных, имер, после овариэктомии, уровень рецепторов эстрогенов, наоборот, шается [Смирнов А.Н. и соавт., 1975; Орлов М.М., Савченко О.П., 1983]. Обнаружено, что у самок мышей линии СВА уже после 5-го введения наблюдается персистирующий эструс и нарушенные циклы с ненной фазой эструса, тогда как у самок С57В1/6 персистирующий эструс ждался только после 15-го введения ДМГ [Труханова Л.С., 1986]. Также показано снижение уровня цитоплазматических рецепторов эстрогенов у .ix крыс с персистирующим эструсом [Смирнова О.В. и соавт., 1974]. В :рименте на самках крыс было выявлено повышение порога ъителыюсти гипоталамо-гипофизарной системы к гомеостатическому :вию эстрогенов при введении ДМГ [Пожарисский К.М. и соавт., 1978]. овагельно, вправе было ожидать, что введение ДМГ, хотя бы экратное, должно вызвать снижение как уровня свободных рецепторов >генов, так и теоретического числа общих мест связывания по сравнению ггролем. Однако, этого не произошло и в течение всего опыта и эти ния, наблюдаемые после 1-го, 5-го, 25-го, 45-го введения ДМГ, были чем соответственно у контроля. Повышение уровня рецепторов генов под действием ДМГ происходит, по-видимому, не только в ьтате нарушения эстрального цикла. Возможно, ДМГ стимулирует гез реценторных белков в клетке, и ткань матки становится более ггвительной к действию эстрогенов.

Изменение уровня рецепторов половых стероидных гормонов в тканях-1енях гормоиозависимых органов в процессе канцерогенеза наблюдали и лте авторы, но таких работ мало. Так, после действия ионизирующего 'чения повышался уровень рецепторов эстрогенов в ткани молочной езы крыс [Blankcnstein М.А. et al., 1981]. Через 5 месяцев после местной 1ботки метилхолантреном гортани крыс было обнаружено более высокое ;ржание рецепторов к андрогенам в ткани гортани по сравнению с жтными животными [Бассалык JI.C. и соавт., 1982].

Лзвестно, что эстроген в цитоплазме клетки специфически связывается с сом-рецептором, а затем в виде эстроген-рецепторного комлекса проникает tpo и связывается с хроматином ядра. В результате этого связывания тсходит транскрипция - считывание информации с определенных ;тков генома. Результатом этого является синтез соответствующего белка в зеомах клетки. При этом процессе не происходит нарушения структуры С и он является естественным для организма. Как известно, многие 1ерогены вступают в реакцию с основаниями нуклеиновых кислот, что зодит к нарушеню структуры ДНК и, соответственно, процессов фования. Эти повреждения могут привести к малигнизации клетки, зогены таким свойством не обладают или обладают в некоторой степени )усов B.C., 20001. Я.С.Вишневский и А.В.Бохман показали, что при гельном приеме больной эстрогенов, в ее эндометрии кроме гиперплазии зляются фокусы атипии в эпителии желез (carcinoma in situ). Вместе с тем, отмене эстрогенной терапии через некоторое время все проявления шчной гиперплапзии исчезают [Вишневский А.С. и Бохман Я.В., 1980]. ако, если в клетке имеют место какое-либо повреждение - "дефект" ДНК если уже произошла опухолевая трансформация, то эстрогены способны 1улировать синтез информационной и рибосомной РНК, соответственно ез белка и как результат этого пролиферацию, таким образом усиливая ' трансформированных клеток.

4ами было продемонстрирована способность ДМГ влиять на эстральные ты и вызывать персистирующий эструс у чувствительной линии СВА, что ывает на повышенный эстрогепный уровень в организме этих животных, кно предположить, что ДМГ, действуя на ДМ К ткани матки, повреждает ее самым создавая определенный пул инициированных клеток. Кроме этого, действием ДМГ' эти клетки имеют значительно более высокий уровень реализующих действие эстрогена.

У резистентных к индукции сарком матки линий мышей (СЗНА, С57В1/6) опухоли невозможно вызвать увеличением дозы канцерогена. В нашей )ратории используется максимально переносимая разовая доза ДМГ (8 :г массы тела), которая вводится животному еженедельно на протяжении Ю недель. Повышение этой дозы или увеличение продолжительности ее 1ения влечет за собой гибель животных в ранние сроки - мыши не ивают до развития опухолей матки. У чувствительной линии бинированное применение ДМГ и эстрогена позволяет значительно шть дозу ДМГ, необходимую для индукции сарком матки и резко эатить сроки их появления.

Комбинированным действием ДМГ и Э11 удалось индуцировать саркомы <и у резистентной к возникновению этой опухоли линии мышей СЗНА. ши СЗНА в отношении ДМГ-индуцированного саркомогенеза матки ируют на введение эстрогена в принципе так же, как и мыши СВА, т.е. тением саркомогенеза. Однако частота возникновения сарком при этом у □ей СЗНА (28,9%) остается значительно ниже, чем у мышей линии СВА 9%) [Ирд Г.А., Смирнова И.О., 1979]. Морфологически и биологически сомы матки у обеих линий мышей оказались весьма сходными качественные фиброзные гистиоцитомы с инфильтрирующим ростом). Интересным и в настоящее время трудно объяснимым эффектом ЭП 1ется изменение локализации сарком матки, происходящее при минированном (попеременном) действии ДМГ и ЭП у резистентной линии ей (гл.4. Г). Если у чувствительных мышей линии СВА саркома всегда икает или в стенках общего канала матки (тело) или в рогах, то при гвии ДМГ в сочетании с ЭГ1 у резистентных мышей СЗНА саркомы икают преимущественно в шейке матки. ак указывалось выше (глава 2) ДМГ, помимо сарком матки, вызывает у ей также геморрагические поражения яичников и опухоли клиторальных з. Имеются выраженные линейные различия в развитии индуцированных геморрагических поражений яичников: в 85,7% случаев у СЗНА ;омы матки не развиваются), у С57В1/6 в 35,1% (сарком матки - 2,7%), а у ей СВА только в 3,7% (в то время как саркомы матки возникают в 40,7%), равных условиях эксперимента. Геморрагические поражения яичников, цированные ДМГ у линии мышей СЗНА, были одной из основных ин смерти из-за разрыва кисты. Таким образом, чувствительные к цированному саркомогенезу линии мышей, являются резистентными к 1тию геморрагических поражений яичников, и наоборот. Кроме того, шмость от введения эстрогенов этих опухолей у мышей линии СЗНА е оказалась противоположной зависимости мышей линии СВА: при инированном действии ДМГ и ЭП развиваются саркомы матки, а !тие геморрагических поражений яичников полностью тормозится, аким образом, введение эстрогена влияет, но противоположным образом, [дукцию сарком матки и геморрагические поражения яичников, роведенные нами эксперименты по изучению чувствительности матки к :нию эстрогена и изучению рецепторов эстрогенов чувствительной и тентной линий мышей дают возможность объяснить линейные различия ствительности к индукции ДМГ сарком матки и возможность индукции опухолей у резистентной линии. Нами показано, что одной из возможных щ линейных различий может быть различный уровень РЭ в матке вигельной и резистентной линий мышей. проведенных опытах впервые была обнаружена высокая гвительность к эстрогену опухолей клиторальных желез у мышей, ощихся частью акцессорного аппарата половых органов, езультаты, полученные в экспериментах по влиянию пренатального ействия половых гормонов, указывают на значительные изменения гвительности к индукции ДМГ опухолей у мышей, пренатально чивших ДЭС. Эти изменения касаются в основном развития цированных ДМГ сарком матки у мышей линии СВА и геморрагических жений яичников у линии СЗНА. г мышей линии СВА эффект пренатального воздействия ДЭС выражался в [шенной частоте развития сарком матки и более быстром их росте. Этот -кт частично можно объяснить следствием аддитивного эффекта ДМГ и , так как сам по себе ДЭС, введенный пренатально, также вызвал саркому и у нескольких мышей (9,7%). Однако, разница в частоте сарком матки iy группой, получавшей пренатально ДЭС, а затем ДМГ, с одной стороны /ппами, получавшими только ДМГ или только ДЭС, с другой стороны, ь существенна (73,3, 42,8 и 9,7%, соответственно). Эти результаты, в м, совпадают полученными результатами в экспериментах, в которых ;лые мыши СВА получали ДМГ и ЭП (см. главу 3) и с таковыми, в эых неонатально андрогенезированным мышам вводили ДМГ [Smirnova Turusov V.S., 1988]. При совместном применении ДМГ (вводился 10 пь) и ЭП (вводился 20 недель) частота сарком матки достигла 65,4%, 1 как один ДМГ вызвал 3,3% сарком. При 20-ти недельном введении ДМГ атильно андрогенизированным самкам частота сарком матки достигла при одном ДМГ лишь 9,9%. В этих двух исследованиях эффект опального воздействия был намного более выражен, чем в экспериментах шатальным воздействием ДЭС, продемонстрированных нами в главе 7. о также действие экзогенного эстрогена - ЭП на индукцию ДМГ сарком и у мышей линии СЗНА был более сильным (с 0 до 28%), чем 1чительное повышение частоты сарком матки у мышей СЗНА, чивших ДМГ после пренатального воздействия ДЭС (с 0 до 8,9%). По введение высоких доз эстрогена взрослым мышам и действие половых энов в перинатальном периоде вызывают одинаковые нарушения в :ме гипоталамус-гипофиз-гонады, а именно: стойкий ацикличный лляторный синдром с выраженным персистирующим эструсом, который звождается гиперэстрогенизацией, изменяющей чувствительность к дированному ДМГ канцерогенезу матки. Способность ДЭС вызывать 'ляторный синдром показана на крысах [Zimmerman S.A. et al., 1991]. : значительный эффект при экзогенном введении эстрогена (ЭП), анный в главе 3, создается еще за счет постоянного поступления них доз эстрогена в организм, которые не сравнимы с 'эстрогенизацией, вызванной ацикличной функцией яичников. Высокую ту сарком матки, полученную в экспериментах с неонатальной •гепизацией [Smirnova I.O., Turusov V.S., 1988]. можно объяснить :ой дозой андрогена (0,5 мг/новорожденный ТП), который индуцировал у пых самок персистирующий эструс в 100%) случаев, и, следовательно, ;ой степенью изменения гормонального имнринтинга, определяющего сой или женский тип функционирования гипоталамуса. В норме в период го онтогенеза необходимо присутствие минимальных количеств енов для полноценного роста нейронов гипоталамуса и их структурной зренциации у самки. Андрогены или большие количества эстрогенов линизируют нейроны. В обсуждаемых опытах с неонатальной генизацией ТП, введенный в критический момент половой фенциации мозга, формирует затем у самки мужской тип гипоталамуса, 1Я циклический центр. Предполагается, что маскулинизацию шамуса в данном случае вызывают не сами андрогены, а продукты их злитической ароматизации, то есть эстрогены [Резников А.Г., 1982]. В х с пренатальным применением ДЭС этот препарат применялся гнным самкам в небольших дозах (0,1 и 0,3 мг/кг м.т.). В наших опытах показана четко выраженная зависимость пренатального воздействия от его дозы, ко'1'орая влияла как на степень изменения астрального цикла, [ на индукцию сарком матки. Низкие дозы ДЭС (0,1 и 0,3 мг/кг м.т.), )ые вызвали персистирующий эструс и удлиненную фазу эструса только •ли исследуемых животных, оказались неэффективными во влиянии на шновение сарком матки у линии мышей СВА. Частота и скорость роста >м матки у этой линии была изменена действием ДЭС в дозе 1 мг/кг м.т., )ая вызвала персистирующий эструс почти у 100% мышей, ючательно, что при этой дозе у мышей СВА наблюдались влагалищные -пг', представляющие собой конгломераты слущенного ороговевшего :лия. Кроме того, возникали и пиелонефриты, которые в совокупности с кой частотой возникновения фатальных сарком матки явились причиной кой смертности у мышей СВА, получивших после пренатального :йствия ДЭС ДМГ. олученные данные определенно указывают на важную роль эстрогенов в :тии индуцированных ДМГ сарком матки у мышей и в изменении 'вительности к индукции этой опухоли. Эта роль выражается в зтвенном стимулирующем действии на индукцию сарком матки нием эстрогенов взрослым мышам с одной стороны, и смоделированной ггальным введением эстрогена гиперэстрогенизации, с другой стороны, цую роль играют генетические различия линий мышей в вительности к эстрогенам. Но является ли эстроген единственным шальным фактором, определяющим развитие сарком матки у мышей? змея к модели ановуляторного ацикличного синдрома. Показано, что нь эстрогенов при таком состоянии постоянно поддерживается за счет фолликул и кист без внутренней атрофии теки, то есть структур, ственных за выработку эстрогенов. Все это создает морфологическую у для секреции эстрогенных гормонов. Так, при персистирующем се, вызванном у крыс неонатальной андрогенеизацией ТП (1,25 мг, 3-4-й , концентрация эстрадиола в плазме соответствовала второму дню руса у нормально циклирующих крыс, то есть стабильно слегка шена [Lobl R.T., Maenza R.M., 1975]. Однако эстрогенный фон организма этом отличается от нормального. Главным отличительным признаком >генного баланса при ановуляторном состоянии у взрослых животных ;тся отсутствие проэструсного подъема уровня эстрадиола в плазме крови olin F. et al., 1972]. Таким образом, концентрация эстрогенов у таких к невелика. Кроме того, имеются данные, что неонатальная эгенизация оказывает угнетающее влияние на чувствительность матки к онам [ГоЫ R.T. et al., 1974]. У неонатально андрогенезированных крыс а менее зависима от уровня овариальных гормонов в организме, чем у зольных. При влиянии экзогенных эстрогенов масса матки у нормальных к крыс достоверно увеличивается, а у неонатально андрогенезированных изменяется. В первом варианте эстрогены индуцируют синтез лфических белков, во втором — нет, но после овариэктомии матка атально андрогенезированных крыс вновь приобретает способность фовать усилением синтеза белка и увеличением массы матки в ответ на >гены. Авторы полагают, что при ановуляторном ациклическом синдроме а тонически постоянно стимулирована эстрогенами и вследствие этого г чувствительна к их действию. Снижение реакции матки на эстрогены [суется с установленным фактом уменьшения ее способности поглощать з,ерживать эстрадиол. У неонатально андрогенезированных крыс TI-диолсвязывающая способность цитоплазматических РЭ значительно ена [Tuohimaa P., Johansson R. 1971, Lerner Г.J., Vitale А., 1975]. Эти ле указывают на то, что гиперэстрогенизация при ановуляторном зоме может и не быть единственным стимулирующим фактором роста цированных сарком матки у мышей. Для оценки полученных нами лх большое значение имеют результаты опытов, проведенных И.А.Ирд и Гмирновой (1979). Ими было показано,что введение прогестерона и ценности значительно тормозят развитии сарком матки у мышей. Как тно, при персистирующем эструсе происходит выпадение лютеальной овариального цикла, в яичниках не обнаруживают желтых тел [Резников

1982; Rcsnikov A.G. et al., 1979; Cortes V. et al., 1971]. Yoshinada K. et al. )] показали, что у 3-х месячных неонатально андрогенезированных крыс >верно снижен уровень прогестерона. Введение TII в первые сутки жизни ам линии СВА достоверно снизило уровень прогестерона в плазме крови ослых самок. Введение ДМГ этим самкам вызвало дальнейшее снижение ля прогестерона. При этом наблюдалось отсутствие желтых тел в иках [Смирнова И.О., Морозова О.В., Турусов B.C., неопубл. данные], м образом, низкий уровень прогестерона при ановуляторном синдроме ier оптимальные условия для развития индуцированных ДМГ сарком и у мышей. звестно, что у самок крыс и мышей с персистирующим эструсом юдается снижение лютеинизирующего гормона (ЛГ) в гипофизе и плазме и [Резников А.Г., 1982, Савченко О.Н., 1967], а также и других дотропных гормонов [Korenbrot С.С., 1975]. По-видимому, в результате шствия половых гормонов в перинатальный период ослабляются дотропные функции гипофиза, понижается его чувствительность к зинг-факторам гипоталамуса [Варга С.В., Резников А.Г., 1978]. ожно, нарушение или отсутствие циклического выделения дотропинов при введении высоких доз эстрогенов в перинатальный од или постпубертатный период может оказывать стимулирующее ние на рост сарком матки, индуцированных ДМГ у мышей.

Нами было показано, что пренатальное введение ДЭС оказывает озящее действие на развитие индуцированных ДМГ ГПЯ у мышей СЗНА, :ая их частоту (78,4% - ДМГ, 53,3% - 0,1 мг/кг ДЭС+ДМГ, 43,7% 0,3 мг/кг +ДМГ). Подобный эффект мы получили при комбинированном действии и ЭП (гл.6), хотя при воздействии экзогенным гормоном эффект был пельно сильнее (59% - ДМГ, 0% - ДМГ+ЭП). Как указывалось в нашей ге, ГПЯ погут достигать больших размеров и являться причиной смерти гствие их разрыва. Более высокая выживаемость мышей СЗНА в группах енатальным воздействием ДЭС по сравнению с группой, получавшей <о ДМГ, связана со снижением частоты ГГ1Я и уменьшением их размеров.

Линейные различия между СВА и СЗНА проявились также во влиянии аталыюго введения ДЭС на индукцию ДМГ опухолей клиторальной зы. Персистирующий эструс, вызванный ДЭС у мышей линии СЗНА, бировал индукцию ДМГ опухолей клиторальной железы. Такой же ■кг мы получили при комбинированном действии /ДМГ и ЭП (гл.4.1.). но было предположить, что опухоли клиторальной железы, цированные ДМГ у СЗНА, могут быть моделью, чувствительной к :фицирующему действию эстрогенов, как экзогенных, так и эндогенных. 1ко, этот эффект мы не наблюдали у мышей линии СВА.

Из данных литературы [Greeman D.G. et al., 1977] известно, что :ствуют линейные различия в иммунном ответе на воздействие ДЭС. едованы линии мышей ВАГВ/С и С57В1, а также их гибриды. Наиболее гвительной к ДЭС оказалась линия С57В1, а гибриды оказались в ежуточном положении относительно родительских линий по гвительности тимуса и матки к ДЭС. Отмечается, что стероид цированная регрессия тимуса может быть вызвана не только эстрогенами, другими стероидными гормонами. Реакция тимуса на ДЭС с точки зрения тза канцерогенносги ДЭС связываются со снижением иммунитета, :нь этого снижения имеет линейную зависимость [Greeman D.G. et al., ]. Это может быть одним из факторов, влияющих на линейные различия в цированном ДМГ канцерогенезе у мышей, пренатально получивших

Таким образом, пренатальное воздействие ДЭС на самок-мышей пелыю изменяет индукцию ДМГ сарком матки у линии СВА и эрагических поражений яичников у линии СЗНА. Это выражается в [стически значимом повышении частоты и скорости роста сарком матки у ей СВА, получивших высокую дозу 1 мг/кг ДЭС. Персистирующий 'с наблюдался почти у всех животных, получивших эту дозу.

116 атальпое воздействие ДЭС оказывает сильное ингибирующее действие на кцию ДМГ ГПЯ у мышей линии СЗНА и этот эффект имеет дозовую шмость.

11а основании полученных результатов можно высказать предположение vi, что одним из факторов, обуславливающих различия между линиями ей в индукции сарком матки, вероятнее всего, является разница в уровне пторов эстрогенов в матке, как у интактных мышей, так и подвергшихся гйствию ДМГ, и, как следствие, различие в ее чувствительности к згенам. Кроме того, линейные различия в индукции опухолей ерогеном могут быть значительно изменены - уменьшены или увеличены атальпым воздействием эстрогена. Показано, что эстроген действует как нцероген и как промотор в ускорении развития сарком матки у мышей.

Введение эстрогенов мышам пренатально или в постпубертатный од, а также линейные различия в гормональном статусе значительно ют на индукцию сарком матки химическим канцерогеном и оказывают то улирующее, то тормозящее действие на развитие опухолей других пизаций.

ВЫВОДЫ строген (эстрадиола дипропионат) повышает частоту 1,2-иметилгидразин-индуцированных сарком матки у мышей и ускоряет их азвитие. тимулирующее влияние эстрадиола дипропионата на развитие сарком атки проявляется как при одновременном его воздействии с анцерогеном, так и при последовательном их введении, что может казывать как на коканцерогенный, так и на промоторный эффект лрогена. ысокий уровень рецепторов к эстрадиолу-17(3 в цитозольной фракции атки мышей чувствительной линии СВА и низкий их уровень у езистентной С57В1/6 является возможным объяснением выраженных инейных различий в индукции сарком матки. дя развитиея псевдоэструса и увеличения массы матки у чувствительной инии мышей (СВА) требуются существенно меньшие дозы эстрадиола ипропионата, чем у резистентных (СЗНА и С57В1/6). г резистентной к ДМГ-саркомогенезу линии мышей СЗНА саркомы матки ожно индуцировать только комбинированным действием 1,2-иметилгидразина и эстрадиола дипропионата.

2-диметилгидразин вызывает повышение уровня рецепторов к :традиолу-17Р в матке у мышей не только чувствительной (СВА), но резистентной линии (С57В1/6) с низким исходным уровнем рецепторов :трогенов, что объясняет возможность индукции сарком матки у

1 18 зистентных линий мышей при одновременном воздействии на них 1,2-шетилгидразином и эстрадиола дипронионатом. ренатальное воздействие диэтилстильбэстрола приводит к выраженному ;менению чувствительности мышей линий СВА и СЗНА к канцерогену 2-диметилгидразину, проявляющемуся в изменении частоты выявления и ■ектра опухолей, характерных для той или иной линии мышей, в ютности, в резком повышении частоты сарком матки у обеих линий. становлено ингибирующее влияние эстрадиола дипропионата и эенатального воздействия диэтилстильбэстрола на частоту возникновения моррагических поражений яичников и опухолей клиторальных желез, щуцированпых 1,2-диметилгидразином у мышей.

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ Л ИТЕРАТУРЫ

Амоджолов. Гормонозависимость индуцированных и перевиваемых тухолей шейки матки мышей. Автореферат, Москва, ! 972. лешин Б.В., Генес С.Г., Вогралик В.Г. Руководство по эндокринологии, [осква, Медицина, 1973. нисимов В.Н., Азарова М.А., Дмитриевсая АЛО. и др. Распределение 1алкилгидразинов-П3 в нейроэндокринной системе и их ггигонадотропный эффект у крыс. БЭБиМ, т.83, N 12, с.1473-1475. 1ссалык Л.С., Муравьева Н.И., Смирнова К.Д., Кузьмина З.В., Вишнякова .В., Ермилова В.Д. Цитоплазматические рецепторы стероидных гормонов первичной опухоли молочной железы. Вопросы онкологии, 1982, N 4, с.6-). гссалык Л.С., Яглинский В. А., Кузнецова И.М., Муравьева Н.И., ушлипский Н.Е., Кузьмина З.В. Половые стероидные гормоны, рецепторы ним и местные иммунологические процессы при экспериментальном шцерогепезе в гортани. Вопр.онкологии, 1985, t.XXXI, N 9, с.71-77. зхтерева Е.И., Анищенко И.С., Важенин А.В., Санникова Р.Г., Клепиков .Г. Саркома в зоне облучения после лучевой терапии рака шейки матки. эв.Мед. 1986, (1), с. 104-106. шндова З.К., Душкин В.А., Малашенко A.M., Шмидт Е.Ф. Линии [бораторных животных для медико-биологических исследований. Москва, аука, 1983, с. 192. ipra С.В., Резников А.Г. Эстрадиол-связывающая и эстрадиол-держивающая способность органов-мишеней самок крыс с нарушенной >ловой дифференциацией мозга. Физиол.журнал АН УССР, 1978, т.24, № с.3-6.

-шшевский А.С., Бохман Я.В. Лечение эстрогенами и рак эндометрия, чушерство и гинекология, 1980, N 6, с. 11-15. ублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания дологических процессов. Л: Медицина, 1978. льцина II.В. О лечении злокачественных опухолей молочной железы, держащей рецепторы эстрогенов. Вопр.онкол., 1982, N 3, с.95-102. пифанова О.И. Гормоны и размножение клеток. Москва, Наука, 1965, Э1-92. рд Е.А., Смирнова И.О. Значение половых гормонов в развитии сарком пжи, вызываемых у мышей 1,2-диметилгидразином. Эксперим.онкол. •79, т. 1, N, 1, с.68-69. артавова Н.С., Гутник II.С., Бурлака Д.П., Дасюкевич О.И. Влияние [тамина А и гормонов на гормопочувствительность опухолей молочной глезы, индуцированных ДМБА у крыс. Эксперим.онкология, 1986, т.8, N с.28-31. рутовских В.А. О чувствительности мышей различных линий к нцерогенному действию 1,2-диметилгидразина. Вопр.онкологии, 1980, 16, N 4, с.93-98. ушлинский Н.Е., Дегтярь В.Г., Бассалык J1.C. [- Н]-эстрадиол-17|3 в бораторной диагностике. Медицинская радиология, 1985, т.30, N 3, с.60ихачев А.Я. Молекулярно-биологические основы тканеспецифического пцерогенного действия диметилгидразина. Эксперим. онкология, 1980, N 6, с.3-7. ашковский М.Д. Лекарственные средства. Москва, Новая волна, 2000, >, с.41. еркулова И.Б. Пролиферативная активность эпителия и мезенхимы ементов матки мышей линии СВА при введении 1,2-диметилгидразина и традиола дипропионата. Эксперим. онкол. 1986, т.8, N 1, с.47-51. [ихеев A.M. Влияние беременности на проявление канцерогенного йствия 1\1-метил-М-нитрозомочевины у крыс. Вопр.онкол. 1987, т.33, N , с.55-60. орозова О.В. Влияние эстрогена на матку мышей различных линий. Бюл. :перим.биологии и медицины, 1991, т.СХП, N 12, с.631-633.

Морозова О.В., Труханова JI.C., Парфенов Ю.Д., Клепиков Н.Н., Турусов .С. Влияние эстрадиола дипропионата на развитие сарком матки, ызываемых 1,2-диметилгидразином у мышей. Вопр.онкол. 1989, t.XXXV, I 1, с.52-57. рлов М.М., Савченко О.Н. Рецепторы эстрадиола в матке крыс при лительном введении гормона в различных дозах. БЭБиМ, 1983, t.95,N 4, .5-7.

1ожарисский К.М., Анисимов В.Н. О роли эндокринной системы в, азвитии экспериментальных опухолей кишечника. Патол. физиология и кспер.терапия, 1975, т. 16, N 1, с.47-50.

1ожарисский К.М., Вохмянин В.Н., Кулаков Н.А. и соавт. Влияние ритма ведения 1,2-диметилгидразина на его канцерогенный эффект. Бюл. ксперим. биологии и медицины, 1978, т.35, N 3, с.257-384. Узников А.Г. Половые гормоны и дифференциация мозга. Киев, «Наукова умка», 1982. озен В.Б. Основы эндокринологии. М., "Высшая школа", 1984, с.239-246. 'озен В.Б., Смирнова О.В., Волчек А.Г. О комплексировании стероидных зрмонов с клеточными рецепторными белками. Проблемы -щокринологии, 1971, N 5, с. 109-120.

Чззен В.Б., Смирнов А.Н. Рецепторы и стероидные гормоны. Москва, 1981. Савченко О.Н. Гормоны яичников и гонадотропные гормоны. Ленинград, Медицина", 1967, 270с.

Сергеев П.В., Духанин А.С., Шимановский Н.Л. Плазматическая мембрана аетки-мишени и стероидные гормоны: начало спора или его завершение, юл. Экспер. Биол. и Мед., 1995, N 10, с.342-348.

Смирнов А.Н., Смирнова О.В., Сенаторова Т.А., Розен В.Б. Влияние :трогенов на концентрацию рецепторов к эстрадиолу. Проблемы гдокринологии-1975, т. 18, N2, с.73-78. мирнова О.В., Смирнов Л.Н., Розен В.Б. Связывание эстрадиола в ггоилазме и ядрах различных тканей неполовозрелых и половозрелых >ыс. Биохимия-1974, т.39, N 3, с.648-655. руханова Л.С. Влияние 1,2-диметилгидразина на эстральный цикл у лшей разных линий. Экспер. онкология, 1986, т.8, N 6, с.21-24. урусов B.C. Экспериментальные модели двухстадийного канцерогенеза. <сперим. онкология, 1985, т.7, N 3, с.5-12. урусов B.C., Базлова Л.С., Крутовских В.А. Влияние возраста, кастрации беременности на канцерогенез, индуцируемый 1,2-диметилгидразином у лшей линии СВА. БЭБиМ, t.LXXXVII, N 5, 1979, с.458-460. /русов B.C., Ланко Н.С. Особенности канцерогенного действия 1,2-1метилгидразина на мышей-самок различных инбредных линий. <сперим.онкология, 1980, т.2, N 6, с.21-25. русов B.C., Линник А.Б., Морозова О.В. Стимулирующее действие традиолдипропионата на саркомогенез матки, индуцируемый 1,2-шетилгидразином.-Бюл.эксперим.биологии и медицины, 1980, т.88, N11, 599-600. русов B.C., Линник А.Б., Морозова О.В., Парфенов Ю.Д. Анализ щуцировапия саркомы матки у мышей с точки зрения гипотезы о (ухстадийном развитии опухолей. Экспер.онкология, 1984, т.6, N 2, с.20русов B.C., Мурованный А.Н., Морозова О.В. Влияние эстрадиола шропионата и беременности на канцерогенез, индуцируемый 1,2-(метилгидразином у мышей линии СЗНА. Экспер. онкология, 1982, т.4, N , с.20-23. фусов B.C., Ланко Н.С., Мурованный A.M., Базлова Л.С., Карамышева Ф. Влияние ритма и пути введения 1,2-диметилгидразина на его нцерогенный эффект у мышей. Вопросы онкологии, 1983, т.29, N 5, с.59русов B.C. Канцерогенные эффекты перинатального воздействия шовых гормонов. Вестник ОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН, 1998, N3, с.38

I. rmstrong В. Endocrine factors in human carcinogenesis. In: Host factors in iman carcinogenesis, (eds): H.Bartsch and B.Armstrong, IARC-Lyon, N 39, >82, pp. 177-221. sselin J., Melancon R., Moachon G., Belanger A. Characteristics of binding to trogen, androgen, progestin and glucocorticoid receptors in 7,12-methybenz(a)anthraceneinduced mammary tumors and their hormonal control, mcer Res., 1980, v.40, N 5, p. 1612-1622. iba and E.von Haam. Experimental carcinoma of the endometrium, ogr.exp.Tumor Res. (Basel) 9: 192-260, 1967.

DUtwell R.K. On the role of tumour promotion in chemical carcinogenesis. ARC Sci.Publ.", 1984, N 56, p.3-11. irrett J.C. Cell culture models of multistep carcinogenesis. "IARC Sci.Publ.", >85, N 58, p.l 81-202. irtsch H., Terrachini В., Malaveille C., Tomatis L., Wahrendorf J., Brun G., d Dodet B. Quantitative comparison of carcinogenicity, mutagenicity and ^ctrophilicity of 10 direct-acting alkylating agents and of the initial 06:7-«cylguanine ratio in DNA with carcinogenic potency in rodents. Mutation Res., '83, v.l 10, p.181-219. ato M. Steroid hormone receptors as gene regulators. Short reports proc. 18th iami winter Sympos. internat. Cambridge Sci Univ. 1986, 4. Miami, 250. massayag C., Leroy M.J., Rigourd V., Robert В., Honore J.C., Mignot T.M., icher-Lavenu M.C., Chapron C., Ferre F. Estrogen receptors (ERa/ER|3) in rmal and pathological growth of the human miometrium: Pregnancy and omyoma. Amer. J. Phisiol., 1999, 276, N 6, Pt 1, C. El 1 12-E1118. :niashvili D.Sh., V.S.Turusov, V.A. Krutovskikh and M.S.Sartania. Tumor duction in Monkeys after Administration of Dimethylhydrazine. Jpn. Cancer ;s., 1992, v.83, p.584-587. iand P., Hou-Jenscn K., Thorpe S.M., Rose C. Hormone-dependent uterine rcomas in GR mice. Eur.J. Cancer, 1981, v. 17, N 6, p.p. 635-641. lankenstein M.A., Mulder E., Broerse J.J., van der Molen H.J. Oestrogen ceptors in rat mammary tissue and plasma concentrations of prolactin during ammary carcinogenesis induced by oestrogen and ionizing radiation. Endocrin., 1981, v.88, N 2, p.233-241. arbolt T.A., Abraham R. Dose-response, sex difference and the effect of brain dimethylhydrazine-induced intestinal tumourigenesis in rats.-Toxicol, and mrmacol., 1980, v.55, N 3, p.417-422. arch W., Taper H.S., Lauer В., Schulte-Hermann R. Quantitative histological id histochemical studies on the occurrence and stages of controlled cell death poptosos) during regression of rat liver hyperplasia. Virchows Arch. Cell ithol., 1985, v.50, p.153-166. aims J. Conclusions and perspectives. "Cocarcinog. and Biol.Eff.Tumor ■omoters. Selec.Pap.Symp.,Schloss Elmau, Oct. 13-16,1980". New York, 1982, 17-651. ahen S.M., Ellwein L.B., Johansson S.L. Bladder tumor promotion. Jongenotoxic Mech.Carcinogenesis". Cold Spring Harbor, N.Y., 1987, p.55-65. ortes V., Mc Cracken J., Lloyd C.W., Weisz J. Progestin priduction by the 'ary of the testosterone sterilized rat treated with an ovulatory dose of LH, and e normal proestrous rat. Endocrinology, 1971, v.89, N 3, p. 878-885. ortes-Vizcaino V. and Llombart-Bosch A. Estrogen and progesterone receptors the diethylstilbestrol-induced kidney neoplassms of the Syrian golden hamster: irrelation with histopathology and tumoral stages. Carcinogenesis, 1993, v. 14, 6, p.1215-1219. esnin K., Wronkovski Z. Second malignancies of the irradiated area in tients treated for uterine cervix cancer. Gynecol.0ncol.6:309-315, 1978. louroulinkov I., Guilion J.C., Guerin M. Endometrial sarcomas in mice a rvey of 130 cases. J.Natl.Cancer Inst. 42, 4, 1969, 593-603. olumbano A., Pajalakshmi S., Sarma D.S.R. Requirement of cell proliferation >r the induction of presumptive preneoplastic lesions in rat liver by a single dose f 1,2-dimethylhydrazine. Chem.-Biol.Interactions, 1980, v.32, N 2, p.347-35 1. unha Gerald R., Forsberg John-Gunnar, Golden Robert, Haney Arthur, Iguchi aisen, Newbold Retha, Swan Shanna, Welshens Wade. New approaches for ?timating risk from exposure to diethylstilbestrol. Environ. Health Perspect., 999, v. 107, Suppl. 4., p.625-630.

•iGiovanni J., Imamoto A., Naito M., Walker S.E., Beltran L., Chenicek K.J. id Skow L. Further genetic analyses of skin tumor promoter susceptibility using ibred and recombinant inbred mice. Carcinogenesis, 1992, v. 13, N 4, p.525-31.

•awson P.J., Brooks R.E., Fieldsteel A.H. Unusual occurrence of endometrial ircomas in hybrid mice. J.Natl.Cancer Inst. 52: 207-214,1974. •elker D.A., Bammber Т.К., Rosenberg D.W. A comparative study of hepatic id colonic metabolic enzymes in inbred mouse lines before and after treatment 'ith the colon carcinigen 1,2-dimethylhydrazine. Drug Metab. Dispos., 1996, .24, N4, p.408-413. dnkwater N.R. and Ginsler J.J. Genetic control of hepatocarcinogenesis in 57BL/6J and C3H/HeJ inbred mice. Carcinogenesis 1986, v.7, N 10, pp. 1701707 ao Т.Е. Studies on mechanism of carcinogenesis in the mammary gland. Progr. xp.Tumor Res., 1969, 1 1, p.235-261. orner G., Docke F., Ilinz G. Paradoxial effects of estrogen on brain ifferentiation. Neuroendocrinology, 1971, N 7, p. 146-1 55. ker R., Mossige J. A dominant gene for renal adenomas in the rat. Nature 1961, 39, pp.858-859. veritt J., Goldsworth t., Wolf D., and Walker C. Hereditary renal cell carcinoma i the Erker rat: A rodent familial cancer syndrome. J.Urology, 1992, 148, э. 1932-1936

-iksson M.A. Different regulation of the concentration of estrogen receptors in e rat liver and uterus following ovariectomy. FEBS Lett.-1982-v. 149-1 .p.91 iber E. Chemical carcinogenesis: a current biological perspective, arcinogenesis, 1984, v.5, N 1, p. 1-5. irnworth W.S. Roles of estrogen and SHBG in prostate physiology. The •ostate, 1996, v.28, p. 17-23. eiszer D., J. Hilgers and E. Skamene. Multigenic Control of Colon arcinogenesis in Mice Treated with 1,2-dimethylhydrazine. Neoplasia, 1988, 137, p.243-249. rsberg J-G. and Kalland T. Neonatal Estrogen Treatment and Epithelial bnormalities in the Cervicovaginal Epithelium of Adult Mice. Cancer Res., >81, v.41, Feb., p.p.721-734. anaki K., Everitt J., Oshimura M., Freed J.J., Knudson A.G., Walker C. ereditary renal cell carcinoma in the rat associated with non-random loss of iromosomes 5 and 6. Cancer Res., 1991, 51, pp.4415-4422. abriel B.W., Sahai G., Anderson W.A. Effect of high dose estrogen on growth id steroid receptor activity in DMBA-indeced mammary tumors and uteri of ts. J.Toxicol, and Environ.Health. 1983, v.l 1, N 3, p.437-454. aido K.W., Maness S.C. and Waters K.M. Exploring the Biology and xicology of Estrogen Receptor (3. Chemical Industry Institut of Toxicology.

99, v. 19,N 11, p. 1-6. atistical methods in cancer research. Vol III - The design and analysis of long-rm animal experiments. / J. J.Gart, D.Krewski, P.N.Lee et al. //1 ARC scientific iblications No. 79, International Agency for Research of Cancer, Lyon, 1986. ardner W.V. and Pan S.C. Malignant tumors of the uterus and vagina in treasted mice of the P.M.Stock. Cancer Res., 8: 241-256, 1948. jrski K.A., Harlan R.E., Christensen L.W. Perinatal hormonal exposure and velopment of neuroendocrine regulatory processes. J. Toxicol. And Environ, ialth. 1973, v.3, N '/2, p.97-121. aerin M. Tumours spontaneous des animaux de Iaboratoire. Paris, A.Legrand, >54, p.36. srbst A.L., Ulfelder H., Poskanzer D.C. Adenocarcinoma of the vagina: ssociation of maternal stilbestrol therapy with tumor apperance in young omen. N.Engl.J.Med., 1971, v.284, p.p.878-881. ideko Sonc. Does enviromental hormone induce endocrine and reproductive sorders in human females? Asian Med. J., 1999, v.42, N 11< p.487-492. oovis M.L. Response of endometrial stroma sarcoma to cyclophosphamide, m J Obstet Gynecol 108: 11 17, 1970 omburger F., Borges P., Fregier A. The production of uterine sarcomas in dro-uteri mice receiving testosterone. Proc. Am.Ass.Cancer Res. 1957,v.2, 215. orsfall, M.J., Gordon A.J.E., Burns P.A., Zielenska M., van der Viet G.M.E. lickman B.W. Mutational specificity alkylating agents and influence of DNA pair. Environ. Mol. Mutagen, 1990, v. 15, p. 107-122. ume Keisuke, Elisashi Otsuka and Keiso Furuya. Carcinogenicity of 1,2-methylhydrazine dihydrochloride in mice. Tokushima J. exp Med., 1980, v.27, 5-13.

RC Monographs on the evalution of the carcinogenic risk of chemical to amans.-Sex hormons (II), 1979, 21, p.562. tcoby R.F., C. Hohman, D.J.Marshall, T.J.Frick, S.Schlack, M.Broda, Smutko, and R.W.Elliott. Genetic Analisis of Colon Cancer Susceptibility in lice. Genomics, 1994, v.22, p.381-387. apian E.L. & Meier P. Nonparametric estimation from incomplete observation. Am.stat.Assoc., 1958, v.53, p.457-481. elner K.L., Kirchick H.J., Peck E.J. Differential sensiyivity of estrogen target ssues: the role of the receptor. Endocrinology, 1982, 111, N 6, p.1986-1995. "orenbrot C.C., Paup D.C., Gorski R.A. Effects of testosterone propionate or hydrosterone propionate on plasma FSH and LH levels. Endocrinology, 1975, 97, N 3, p.709-717. rutovskikh V. and Yamasaki H. The role of gap junctional intercellular unmunication (GJIC) disorders in experimental and human cancirogenesis. istology Histopathology, 1997, N 12, p.p. 761-768.

Airman R.J. Carcinogenic hormones.// Ed. E.H.Lingeman, Berlin, 1979, p. 151-174. antta M., Karkkainen J., Wahlstorm Т., Widholm O. Estradiol and ogesterone receptors in gynecologic sarcomas. Acta obstet. et gynecol. scad., >84, v.63,N 6, p.505-508. awley P.D. Some chemical aspects of dose-response relationships in alkylation utagenesis. Mutation Res., 1974, v.23, p.283-295. erner L.J., Vitale A. Response of the immature rat to androgen and estrogen llowing treatment on day one life with estrogen, testosterone or an estrogen itogonist. J. Steroid Biochem., 1975, v.6, N 11/12, p.iv.Abstr.

Li J.]., Li S.A., Cuthbertson T.L. Nuclear retention of all steroid hormone ceptor classes in the hamsyer ranal carcinoma. Cancer Res., 1979, v.39, N 7, irt 1, p.2647-2651.

Lindzey J. and Korach K.S. Steroid hormones. In Endocrinology: Basic and inical Principles (Cann P.M. and Melmed S., eds.) Human Press, Totowa NJ, >97, p.47-62.

Lipschutz A., Iglesias R., Salinas S., Panasevich V.J. Experimental conditions ider wich contreceptive steroids may become toxic. Nature, 1966, 212, 686

8.

Lobl R.T., Maenza R.M. Androgenization: Alterations in uterine growth and orphology. Biol.Reprod., 1975, v. 13, N 3, p.255-268.

Lobl R.T., Trotta P., Brumberger B. Oestrogen-induced proteins and uterine owth in the androgenized female rat. J.Endocrinol., 1974. v.60, N 2, p.371-372. Loury O.N., Rosenbwugh N.J., Farr A.L. et al. Protein measurement with the >lin phenol reagent. J.Biol.Chem.-1951, v.193, N 1, p.265-275. Macfaiiane J.K., Fleizer d.,Fasekas A. Studies on estrogen receptors and session in human breast cancer. Cancer, 1980, v.45, N 12, p.2998-3003.

Mason B.H., Holdaway I.M., Mullins P.R., Yee Lye H., Kay R.G. Cancer ;s„ 1983, v.43, N 6, p. 2985-2990.

Malinin G.J., Malinin I.M. Age-related spontaneous uterine lesions in mice. Terontol., 27:193-196, 1972. Malkinson A.M., Nessbitt M.N. and Skamene E. Susceptbility to Urethan-duced Pulmonary Adenomas Between A/J and C57B1/6J Mice: Use of AXB id BXA Recombinant Inbred Lines Indicating a Three-Locus Genetic Model. 4CI, v.75, N 5, 1985 November, 971 -974. Mc Michael A.J. and Potter J.D. Reproduction, endogenous and exogenous x hormones and colon cancer: a review and hypothesis. J.Natl.Cancer Inst. >80, v.65, p. 1201-1207.

Mehta R.G., Pricks C.M., Moon R.C. Androgen receptors in chemically -duced colon carcinigenesis. Cancer 1980, v.45, N 5, Suppl, p. 1085-1089.

Moen C.J.A., M.A. van der Valk, R.P.Bird, A.A.M.Hart and P.Demant. ifferent Genetic Susceptibility to Abberant Crypts and Colon Adenomas in ice. Cancer Research, 1996, v.56, N 5, p.2382-2386.

Moon R.C., Fricks C.M. Influence of gonadal hormones and age on 1,2-methylhydrazine-induced colon carcinogenesis.-Cancer, 1977, v.40, N 5, 2502-2508.

Naftolin F., Brown G.K., Corkes C.S. Plasma and pituitary luteinizing >rmone and peripheral plasma oestradiol concentrations in the normal oestrous cle of the rat and experimental manipulation of the cycle. J.Endocrinol., 1972, 53, N 1, p. 17-30.

Nebert D.W., Petersen D.D., Puga A. Human Ah locus polymorphism and ncer: inducibility of CYP1A1 and other genes by combusition products and oxin. Pharmacogenetics, 1991, 1, pp.68-78.

Newbold R.R. and J.A.McLachlan. Vaginal Adenosis and Adenocarcinoma in ice Exposed Prenatally or Neonatally to Diethylstilbestrol. Cancer Res., 1982, 42, May, p.p.2003-2011.

Nicolic Z., Blagojevic Z., Mrvic V., Ivanov I. Effect on neonatal oestrogen d hCG treatment on the genital organs of adult female rats. Acta Vet. Hung., '99, v.47, N 1, p.p. 109-115.

Niwa К., Tanaka Т., Mori H.,Yokoyama Т., Furni 'Г., Tamaya T. Rapid duction of endometrial carcinoma in ICR mice treated with N-methyl-N-trosourea and 17b-estradiol. Jpn. J. Cancer Res., 1991, v.82, pp.1391-1396. Nomura T. and Kanzaki T. Induction of Urogenital Anomalies and Some imors in the Progeny of Mice Receiving Diethylstilbestrol during Pregnancy, incer Res., 1977, v.37, 4, p.p. 1099-1104.

СУМаПу B.W. Steroid hormone action in eukariotic cells.- J.Clin.Investig., >84, v. 74, p.307.

Poole T.M., T.A.Chiaverotti, R.A.Carabeo, and N.R.Drinkwater. Genetic nalysis of Multistage Hepatocarcinogenesis. In: Genetics and cancer sceptibility: Implications for risk assessment, pp. 33-45, 1996 Wiley-Eiss, Inc. Guidelines for simple sensitive significance tests for carcinigenic effects in ng-term animal experiments. R.Peto, M.C.Pike, N.E.Day et al. IARC onographs on evaluation of the carcinogenic risk of chemicals to humans. ippl.2. Long-term and short-term screening assays for carcinogens: a critical ipraisal. Lion, 1980, p.311-426. Poel W.E. Pituitary tumours in mice after prolonged feeding of synthetic ogestins.-Science, 1966, v. 154, N 3747, p.402-403.

Pozharisski K.M., Shaposhnikov J.D., Petrov A.S., Likhachev A.J. istribution and carcinigenic action of 1,2-dimethylhydrazine (SDMH) in rats. Krebs-forsch., 1976, v.87, N 1, p.67-80.

Purnell D.M. The effects of neonatal androgenization on mammary gland itotic rate and susceptibility to cancirogen-induced mammary dysplastigenesis d tumorigenesis in LEW/Mai rats. Arner.J.Pathol., v.99, p.463-474, 1989. Rao G., Schulre-Hagen K., Rao M.L. e.a. Kinetics of steroid transport rough cell membranes: comparison of the uptake of Cortisol by isolated rat ег cells with binding of Cortisol to rat liver cytosol. J.Steroid Biochem. 1976, 7, p. 1123.

Resnikov A.G., Nosenko N.D., Demkiv L.P. New evidences for participation biogenic monoamines in androgen-dependent sexual differantion of /pothalamic control of gonadotropin secretion in rats. Endocrinologie, 1979, 73, N 1, p.l 1-19.

Robertson J.F.R., Cannon P.M., Nicholson R.I., Blarney R.W. Oestrogen and ogesterone receptors as prognostic variables in hormonally treated breast ncer. Int.J.Biol.Markers. 1996, v.l 1, N 1, p.p.29-35.

Rothschild Tova C., Boylan E.S., Calhoon R.E. , Vonderhaar B.K. •ansplacental effects of diethystilbestrol on mammary development and morigenesis in female ACI rats. Cancer Rec., 1987, v.47, N 16, p.p.4508-4516. Ruttemarm G.R. Hormones in tumorigenesis. Iм World Conference on ontaneous Animal Tumors. Genoa, Italy-April 28-30, 1995, p.31. Slaga T.J. Cancer: etiology, mechanisms and prevention. In: Carcinogenesis. 3l.5/Ed. by T.J.Slaga. Raven Press, 1980, p.243-262.

Shimm David S., Bell Debra A., Fuller Arlan F., Bowling Marcia C., Orlow ica L., Munzenrider John E., Nelson James IE, Ingerstoll Jr.Francis M., Nikrui ijmosama and Donovan Julia. Sarcomas of the uterine corpus: Prognostic :tors and treatment. Radiotherapy and Oncology, 2 (1984) N 3, 201-207 Schwartz SM & Weis NS. Marital status and the incidence of sarcomas of the 2i'us. Cancer Res 50:1886-1889, 1990.

Schwartz S.M., et all. Incidence of histologic types of uterine sarcoma in ation to menstrual and reproductive history. Int.J.Cancer, 1991, v.49, p.362-7.

Shibata M-A., Ward J.M., Green J.E. and Merlino G. Enhanced sensitivity to nor growthand development in multistage skin carcinogenesis by •ansforming growth factor-a-induced epidermal growth factor receptor tivation butnotp53 inactivation. Molecular carcinogenesis, 1997, v.l 8, p.l60-0.

Slye M., Holmes H.F., Wells H.G. Primary spontaneous tumours of the uterus mice, with a review of the comparative pathology of uterine neoplasms, udies on the incidence and inheritability of spontaneous tumours in mice. Cancer Res., 8: 96-1 18, 1924.

Slye M., Holmes H.F., Wells H.G. Primary spontaneous sacoma in mice. Cancer Res., 2: 1-28, 1917.

Smirnova I.O., Turusov V.S. 1,2-dimethylhydrazine carcinogenesis in lonatally androgenized CBA mice. Carcinogenesis, v.9, p. 1927-1929, 1988.

Strong L.S. The incedence of spontaneous tumours of mice of the CBA strain ter a change of diet. Amer.J.Cancer 32: 80-84, 1938.,

Stewart H.L. et al. Malignant schwannjmas of nerve roots, uterus and lididymis in mice. J.Natl.Cancer Inst., 53: 1749-1758, 1974.

Staats J. Standardized nomenclature for inbred strains of mice third listing. mccrRes, 1964, vol.24, p. 147-148.

Sunter J.P. and P. V. Senior. Induction of renal tumors in rats by administration '1,2-dimethylhydrazine. Pathology, 1983, v.140, p.69-76.

Swenberg I. A., Cooper H.K., Buecheler J., Kleinhues P. 1,2-methylhydrazine induced methylation of DNA in various rat organs and the feet of pretreatment with disulfiram. Cancer Res., 1979, v.39, N 2, p.465-468.

Tarone R.E. Tests for trend in life table analysis. Biometrica, 1975, v.62, 672-682.

Teague C.A., Gavin I.В., and Herdson P.B. The response of three inbred -ains of rat to the carcinogen 1,2-dimethylhydrazine. Pathology, 1981, v. 13, 473-485.

Trukhanova L.S., H-H.L. Hong, R.C. Sills, A.D. Bowser, B. Gaul, G.A. )orman, V.S.Turusov, T.R. Devereux, and D.Dixon. Predominant p53G - A ansition Mutation and Enchaced Cell Proliferation in Uterine Sarcomas of ЗА Mice Treated with 1,2-Dimethylhydrazine. Toxicologic Pathology, 1998, 26, N3, p.367-374.

Tuohimaa P., Johansson R. Decreased estradiol binding in the uterus idanteriorhypothalamus of androgenized female rats. Endocrinology, 1971, 88, N 5, p. 1159-1164. Turusov V.S. Morphology and Histogenesis of Anal Region and Clitoral land Tumors induced in Mice by 1,2-Dimethylhydrazine. J.N.C.I., 1980, v.64, 5, p. 1161-1167.

Turusov V.S., Bazlova L.S., Lanko N.S. Non-epithelial uterine tumors duced in CBA mice by 1,2-dimethylhydrazine. Cancer letters, 1977, vol. 3, No p. 37-44.

Turusov V.S., Lanko N.S., Krutovskikh V.A., Parfenov Y.D. Strain fferences in susceptibility of female mice to 1,2-dimethylhydrazine. arcinogenesis, 1982, vol.3, No 5, p. 603-608. Turusov V.S., Raikhlin N.T., Smirnova E.A., Trukhanova L.S. Uterine rcomas in CBA mice induced by combined treatment with 1,2-methylhydrazine and estradiol dipropionate: light and electron microscopy. <p. Toxic Pathology, 1993, v.45, N 2, p. 161-166. Turusov V.S., Kondalenko Y.F., Trukhanova L.S. Mouse uterine tumour sembling malignant fibrous histiocytoma: light and electron microscopie study, ф.Oncol. 1993, T.15, N 4, c.41-46.

Turusov V.S., Chemeris G.Y. and Parfenov Y.D. Pararenal angiosarcoma duced in male mice by 1,2-dimethylhydrazine - a model for stading the role of dtrogens in chemical carcinogenesis. Carcinogenesis, 1985, v.6, N 3, p.325-1.

Terracini В., Testa M.C., Cabral I.R., Rossi L. The roles of age at treatmenmt d dose in carcinogenesis in C3Hf/Dp mice with a single administration of N-troso-N-methilurea. Brit. J. Cancer. 33, 4, 427-439,1976. Van Nie R., Beneditti E., Muhlbock O. A carcinogenic action of testosterone, ovoking uterine tumours in mice. Nature, 1961, 192, 1303-1903.

Walker С., Goldsworth Т., Wolf D., and Everitt J. Predisposition to renal cell arcinoma due toalteration of a cancer suseptibility gene. Science, 1992, 255, p.1693-1695.

Walker B.E. Uterine Tumors in Old Mice Exposed Prenatally to Jiethylstilbestrol. J.N.C.I., 1983, v.70, N 3, p.p.477-482.

Wheeler M.J. The determination of bio-available testosterone. mn.Clin.Biochem., 1995, v.32, p.245-257.

Witschi H.P. Promotion of lung tumors in mice. Environ.Health Perspect. 983, v.50, p.267-273.

Wollch M., Schmitt J., Weise W., Olbrischt S., Roessner A. Uterussarcome -ine retrospective Analyse von 78 Fallen. Zbl. Gynakol., 1999, v. 121, N 6, .274-280.

Wurtz H., Wassner E., Citoler P., Schulz K.-D., Kaiser R. Multiple ytoplasmatic steroid hormone receptors in benign and malignant ovarian tumors nd in disease - free ovaries. Tumor Diagn. und Theraph., 1983, v.4, N 1, p. 150.

Yoshida H., Fukunishi R. Effects of sex steroids on the development of 7,12-imethylbenz[a]antracene-induced mammary dysplasia in neonatally ndrogenized female rats. GANN, 1881, v.726 p.315-317.

Yoshida H., Kadota A., Fukunishi R., Matsumoto K. Induction of mammary ysplasia and mammary carcinoma in neonatally androgenized female rats by ,12-dimethylbenz[a]antracene. J.Nat.Cancer Inst., 1980, v.64, p. 1105-1 1 12.

Yoshinada K., Gueves S.A., Short R.V. Steroidogenic effcts of luteinizing ormone and prolactin on the rat in vitro. J.Endocrinol., 1967, v.38, N 4, p.423-30.