Роль децидуальных естественных киллеров в регуляции инвазивных свойств трофобласта при неосложнённой беременности и самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации

Воронин, Дмитрий Николаевич

Диссертации по медицине → Клиническая иммунология, аллергология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Роль децидуальных естественных киллеров в регуляции инвазивных свойств трофобласта при неосложнённой беременности и самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации

ДИССЕРТАЦИЯ

Роль децидуальных естественных киллеров в регуляции инвазивных свойств трофобласта при неосложнённой беременности и самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Воронин, Дмитрий Николаевич Москва 2011 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.03.09

Автореферат диссертации по медицине на тему Роль децидуальных естественных киллеров в регуляции инвазивных свойств трофобласта при неосложнённой беременности и самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации

На правах рукописи

ВОРОНИН ДМИТРИЙ НИКОЛАЕВИЧ

РОЛЬ ДЕЦИДУАЛЬНЫХ ЕСТЕСТВЕННЫХ КИЛЛЕРОВ В РЕГУЛЯЦШ1 ИНВАЗИВНЫХ СВОЙСТВ ТРОФОБЛАСТА ПРИ НЕОСЛОЖНЁННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ И САМОПРОИЗВОЛЬНОМ ВЫКИДЫШЕ НА РАННИХ СРОКАХ ГЕСТАЦИИ

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 8 ИЮЛ 2011

Москва-2011

4851718

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Сотникова Наталья Юрьевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук,

профессор Захарова Людмила Алексеевна

доктор медицинских наук,

профессор Стенина Марина Александровна

Ведущая организация:

Федеральное государственное учреждение «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится ч.'/^ » 2011 года в 14.00 часов на

заседании диссертационного совета Д^ 208.072.05 при ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1

Автореферат разослан « » _2011 года

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат медицинских наук, доцент

Кузнецова Т. Е.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Известно, что нарушения материнского иммунного ответа могут приводить к досрочному прерыванию беременности, задержке развития плода, гестозу и другим осложнениям гестационного процесса [Hu Y., et al., 2006, Sargent I., et al., 2007, Сидельникова В. М, Сухих Г. Т. 2010]. Важную роль в развитии и поддержании беременности отводят популяции CD56+ естественных киллеров, которые составляют доминирующую часть лейкоцитарного инфильтрата децидуальной оболочки плаценты [Bulmer, 2009]. Однако биологический смысл резкого увеличения содержания ЕК в материнской части плаценты на ранних сроках гестации все еще остается до конца не понят. Ранее высказывалось предположение о том, что при физиологически протекающей беременности децидуальные ЕК находятся в неактивированном состоянии, что препятствует развитию ими цитотоксического ответа в отношении клеток плодового происхождения [King А. 2001, Kopcow H.D. 2005], однако данные последних лет не подтвердили эту гипотезу [Trundley, А. 2004., Trowsdale J. 2008]. Показано, что децидуальные ЕК обладают достаточно высоким уровнем цитотоксической активности, сравнимым с таковым у ЕК эндометрия [Jones R.K. 1997., King А. 2000., Mincheva-Nilsson L 2000]. Известно, что функциональное состояние CD56+ ЕК определяется характером поступающего через рецепторы сигнала [Ярилин A.A. 2010], а уровень активации ЕК определяется балансом экспрессируемых на мембране активирующих и ингибирующих рецепторов [Kusumi М„ 2006, Grzywacz, 2006]. Однако, особенности экспрессии рецепторов различного типа децидуапьными ЕК при физиологической и патологической беременности, а также возможные механизмы их регуляции в настоящее время практически не изучены.

При развитии тканей ранней плаценты клетки вневорсинчатого цитототрофобласта инвазируют децидуальную оболочку плаценты, формируя так называемые клеточные островки и клетки эндоваскулярного трофобласта [Bulmer 2010., Fontana VA 2010]. Успешная инвазия трофобласта обеспечивает нормальное развитие тканей плаценты и эмбриона [Chaouat G., е.а., 2002]. Процесс инвазии регулируется целым рядом факторов, таких как рецепторы к хемокинам [Hanna J, е.а., 2003], цитокины [Pang Z.J., е.а. 2008, Tapia А, е.а., 2008], матриксные металлопротеиназы [Jones А., е.а., 2006; Pang Z.J., е.а. 2008]. Существует предположение, что децидуальные ЕК регулируют инвазию трофобласта [King А., 2002; Hu Y., е.а., 2006]. Есть данные, что децидуальные ЕК способны угнетать миграцию клеток трофобласта и приводить к изменению экспрессии ингибитора-1 активатора плазминогена в клетках трофобласта [Hu Y., е.а., 2006]. Однако механизмы регуляции инвазивных свойств трофобласта децидуальными ЕК до настоящего времени остаются до конца не изученными. Нет данных о характере воздействия IFNy, продукция которого резко возрастает при невынашивании беременности [Chaouat G., е.а., 2006], на функциональное состояние ЕК.

Определение характера экспрессии активирующих и ингибирующих рецепторов децидуальными ЕК, а также направленности их влияния на инвазивные свойства трофобласта в ранние сроки неосложненной беременности и при самопроизвольном выкидыше в 1 триместре является актуальной задачей клинической иммунологии. Решение этой проблемы поможет уточнить характер иммунорегуляторных процессов, происходящих в интерфазе мать-плацента-плод и обеспечивающих нормальное течение беременности, глубже понять патогенетические механизмы самопроизвольного выкидыша.

Цель научного исследования

Установить особенности функционального состояния децидуальных CD56+ ЕК и их роль в регуляции инвазии трофобласта для уточнения иммунных механизмов патогенеза раннего самопроизвольного выкидыша.

Задачи исследования

1. Провести сравнительный анализ экспрессии активирующих (NKG2D, CD161) и ингибирующих (NKG2A) рецепторов децидуальными CD56+ ЕК, а также характера синтеза и продукции ими функциональных молекул при неосложненной беременности и раннем самопроизвольном выкидыше.

2. Определить особенности синтеза и продукции IFNy в ткани ранней плаценты при неосложненной беременности и раннем самопроизвольном выкидыше по сравнению с аналогичными показателями эндометрия, и оценить in vitro влияние IFNy на экспрессию активирующих и ингибирующих рецепторов децидуальными CD56+ ЕК.

3. В экспериментах in vitro установить особенности миграционной и инвазивной активности клеток трофобласта в норме и при раннем самопроизвольном выкидыше.

4. В эксперименте in vitro выявить особенности изменения функционального состояния децидуальных ЕК и инвазивной активности клеток трофобласта при их совместном культивировании у женщин с неосложненной беременностью и ранним самопроизвольным выкидышем.

Научная новизна исследования

Установлены новые иммунные механизмы патогенеза раннего самопроизвольного выкидыша, заключающиеся в . нарушении функционального состояния децидуальных CD56+ ЕК и регуляции ими инвазивной способности клеток трофобласта.

Впервые показано, что при раннем самопроизвольном выкидыше изменяется соотношение децидуальных CD56+ ЕК, экспрессирующих

активирующие и ингибирующие рецепторы в сторону преобладания цитотоксической активности, усиливается синтез и продукция и СгВ, а также рецепция децидуальными СЭ56+ лимфоцитами.

Выявлено, что на ранних сроках гестации повышается синтез и продукция ГИКу в тканях децидуальной оболочки плаценты, при самопроизвольном выкидыше дополнительно усиливается продукция №N7 децидуальными лимфоцитами.

Впервые показано, что ШИу угнетает экспрессию активирующих и ингибирующих рецепторов децидуальными ЕК женщин с неосложненной беременностью ранних сроков по дозо- и время-зависимому типу.

Впервые выявлены нарушения миграционной и инвазивной активности клеток трофобласта при раннем самопроизвольном выкидыше, сопровождающиеся снижением экспрессии мРНК ММР-2 и Т1МР-2 в ткани ворсинчатого трофобласта, угнетением экспрессии мРНК ММР-9 при усилении экспрессия мРНК Т1МР-1 в децидуальной оболочке плаценты, что сочетается с недостаточной инвазией эндоваскулярного трофобласта.

Впервые показано, что при раннем самопроизвольном выкидыше взаимодействие децидуальных СБ56+ ЕК с клетками аутологичного трофобласта ведет к неадекватной активации ЕК, сопровождающейся усилением синтеза ШИу и вгБ.

Установлено, что при неосложненной беременности децидуальные СБ56+ ЕК и 1Р№/ оказывают угнетающее действие на миграционные и инвазивные свойства клеток трофобласта, снижая синтез ММР-9 и повышая экспрессию мРНК Т1МР-2 в ткани трофобласта.

Основные положения, выносимые на защиту:

При физиологической беременности на поверхности децидуальных ЕК преобладает экспрессия ингибирующих рецепторов, отмечается умеренная активация ЕК при их взаимодействии с клетками трофобласта и происходит угнетение инвазивной активности клеток трофобласта под действием ЕК.

При самопроизвольном выкидыше усиливается продукция IFKy и гранзима В (GrB) децидуальными ЕК, нарушается экспрессия активирующих и ингибирующих рецепторов на их поверхности. Неадекватная активация ЕК при взаимодействии с клетками плодового происхождения ведет к усилению цитотоксического потенциала клеток, вызывая чрезмерное ограничение инвазивной активности клеток трофобласта, что определяет нарушение.

Практическая значимость результатов исследования

Установлены новые патогенетические механизмы развития раннего самопроизвольного выкидыша, обусловленные нарушением функциональной активности децидуальных CD56+ ЕК, заключающиеся в угнетении миграции и инвазии клеток трофобласта,

Разработаны нормативные значения показателей экспрессии рецепторов различного типа децидуальными CD56+ ЕК, которые можно использовать для оценки функциональной активности ЕК.

Внедрение результатов работы в практику

Результаты работы используются в учебном процессе на кафедре патофизиологии и иммунологии ГОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и на кафедре общей биологии и ботаники ГОУ ВПО «Ивановский государственный университет».

Апробация работы

Основные результаты исследований по теме диссертации докладывались и обсуждались на 12th International Symposium for Immunology of Reproduction- Varna, (Варна, Болгария, 10 мая 2009); Конференции молодых ученых, посвященной памяти В.Н. Городкова (Иваново, 16 марта 2009); Научно-практической конференции студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки - 2009» (Иваново, 20-25 апреля 2009); XIII Всероссийском научном форуме с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 8-11 июня 2009);

Конференции молодых ученых, посвященной памяти В.Н. Городкова (Иваново, И марта 2010); 90-й Юбилейной ежегодной итоговой научно-практической конференции студентов и молодых ученых, посвященной 80-летию Государственной медицинской академии «Неделя науки - 2010» (Иваново, 19-23 апреля 2010); VIII конференции иммунологов Урала (Сыктывкар, 28-30 июня 2010); Юбилейной научной конференции «Клиническая иммунология, иммуногенетика - междисциплинарные проблемы» (Ташкент, Узбекистан, 11-12 октября 2010); 4-й Всероссийской конференции «Иммунология репродукции» с элементами научной школы для молодежи (Пермь 5-8 декабря 2010).

Личное участие автора

Автором самостоятельно выполнялись иммунологические исследования. Была проведена систематизация полученных результатов, их статистическая обработка, описание полученных результатов.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ, из них 6 в рецензируемых журналах, включённых в перечень изданий, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ.

Структура и объём диссертации

Материалы диссертации изложены на 140 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», трёх глав собственных исследований, главы «Обсуждение результатов», выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 18 отечественных и 216 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 12 таблицами, И рисунками и 10 фотографиями.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Работа выполнена на базе Федерального государственного учреждения «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н.Городкова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (директор - д.м.н. Малышкина А.И.).

Исследования проводились в лаборатории клинической иммунологии -зав. лабораторией д.м.н., профессор Сотникова Н.Ю.

Всего было обследовано 82 пациентки, из них: 11 небеременных женщин фертильного возраста, 55 женщин с искусственным прерыванием неосложнённой беременности в сроке гестации 7-12 недель, 16 женщин с самопроизвольным прерыванием беременности в сроке гестации 7-12 недель.

Материалом для исследования служили: биоптаты эндометрия, образцы децидуальной оболочки и ворсинчатого трофобласта плаценты.

- Выделение клеток.

Популяцию децидуальных МНК выделяли стандартным безферментативным механическим методом [Chemyshov V.P., et. al., 1993], с последующим удалением фракции макрофагов с помощью стандартного метода двукратной адгезии на пластике [Фримель Г., 1987]. Обогащенную популяцию децидуальных ЕК получали из фракции децидуальных лимфоцитов путем негативной селекции CD3+ клеток методом непрямой магнитной сепарации использованием магнитных частиц Dynalbeads М-280 Sheep anti-Mouse IgG (Dynal Biotech ASA, Norway). Выделение обогащенной популяции клеток трофобласта из ткани ворсинчатого трофобласта проводили стандартным ферментативным методом [Clover L.M., et al., 2000].

- Проточная цитофлюориметрия

Поверхностный фенотип децидуальных CD56+ лимфоцитов и внутриклеточную экспрессию ими функциональных молекул (IFNy и GrB) определяли с помощью моноклональных антител (мАТ) методом проточной

цитофлюориметрии на приборе FACScan (Becton Dickinson, USA). Характеристика панели используемых моноклональных антител представлена в Таблице 1.

Процедуру окрашивания и фиксации клеток проводили стандартным способом в соответствии с указаниями фирмы-разработчика. Внутриклеточную продукцию IFNy и GrB оценивали в популяции CD56+ лимфоцитов (CD56+IFNy+ и CD56+GrB+), используя процедуру внутриклеточного окрашивания клеток с использованием коммерческого набора FIX & PERM cell permeabilization reagents (Invinrogen, Camarillo, CA, USA) для пермеабилизации клеточной мембраны.

Таблица 1.

Панель моноклональных антител, использованных в исследовании

№ п/п мАТ Клон Фирма-производитель Флюорохром ная метка

1. Human CD45 Immu 19.2 Beckman Coulter, France FITC

2. Human CD 14 RM052 Beckman Coulter, France РЕ

3. Human CD56 MEM-188 Invitrogen, USA FITC

4. Human CD56 N901 Beckman Coulter, France РЕ

5. Human CD56 LT56 Сорбент, Москва не меченные

6. Human CD161 191B8 Beckman Coulter, France РЕ

7. Human CD3 Сорбент, Москва не меченные

8. Human CD 119 92101 R&D Sysnems FITC

9. HumanNKG2Dj ON72 Beckman Coulter, France РЕ

10. Human CD159a (NKG2A) Z199 Beckman Coulter, France РЕ

11. Human IFNy 45.15 Immunotech, France FITC

12. Human GrB GB12 Invitrogen, USA РЕ

13. Cytockeratin-7 OV-TL 12/30 Invitrogen, USA не меченные

14 Mouse IgGl - Becton Dickinson, USA FITC

Mouse IgG2a - Becton Dickinson, USA РЕ

- Иммуноферментный анализ

Концентрацию IFNy в экстрактах децидуальной ткани плаценты, определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа на микропланшетном ридере Multiscan EX (Labsystems, Finland) с

использованием коммерческой тест-системы производства ООО «Цитокин» (С.-Петербург, Россия) с пределом чувствительности 20 пкг/мл.

-Полимеразная цепная реакция

Уровень экспрессии мРНК ММР-2, ММР-9, TIMP-2, TIMP-1 в образцах ткани ворсинчатого трофобласта, децидуальной оболочки плаценты и обогащенной популяции клеток цитотрофобласта, а также экспрессию мРНК IFNy и GrB в децидуальных CD56+ лимфоцитах определяли методом количественной полимеразной цепной реакции (RT-PCR) в реальном времени на амплификаторе с оптической насадкой ¡Cycler iQ (BIO-RAD, USA). При проведении RT-PCR использовались следующие наборы праймеров, зондов и реагентов: наборы «Онкоскрин» для количественного определения р2-микроглобулина, ММР-2 и TIMP-2 (ООО «ГеноТехнология», Москва); наборы для определения ММР-9, TIMP-1 (ООО «Фрактал Био», Санет-Питербург); наборы реагентов для определения количества фрагментов генов IFNy и GrB (ЗАО «Синтол», Москва).

- Культуральные исследования

Для определения влияния IFNy на экспрессию поверхностных рецепторов децидуальными CD56+ лимфоцитами обогащенную популяцию децидуальных лимфоцитов стимулировали препаратом IFNy (ООО «Цитокин», С. -Петербург) в концентрации 10, 100 или 1 ООО пг/мл в течение 2 и 24 часов при 37°С и 5% С02.

Проводили совместное культивирование обогащенной популяции децидуальных CD56+ лимфоцитов и клеток цитотрофобласта в течение 24 часов при 37°С и 5% COz- После окончания инкубации популяцию децидуальных CD56+ ЕК удаляли методом позитивной непрямой магнитной сепарации с использованием магнитных частиц Dynalbeads М-280 Sheep anti-Mouse IgG (Dynal Biotech ASA, Norway) и определяли уровень экспрессии мРНК IFNy и GrB в CD56+ лимфоцитах. В клетках цитотрофобласта после культивирования оценивали уровень экспрессии мРНК ММР-2, ММР-9, TIMP-2 TIMP-1.

Для оценки спонтанной и стимулированной децидуальными CD56+ лимфоцитами миграции клеток трофобласта использовали стандартную 2-D модель клеточной миграции в коллагеновом геле в модификации Ни Y. et al. (2006).

Для оценки спонтанного и стимулированного IFNy инвазивного потенциала клеток трофобласта использовали коммерческий набор BD BioCoat Matrigel Invasion Chamber (BD Biosciences, USA).

- Иммуногистохимия

Проводили иммуногистохимическое окрашивание на Cytokeratin-7 замороженных срезов децидуальной оболочки плацент.

Общее количество проведенных исследований составило 1372.

Статистическая обработка данных проводилась с расчетом среднего арифметического и ошибки среднего арифметического с использованием программы Microsoft Excel из комплекта Microsoft Office 2003. Достоверность различий показателей в группах определялась по t-критерию Стьюдента.

Результаты работы и их обсуждение

Нами было установлено, что популяция CD56+ ЕК являлась доминирующей среди клеток лейкоцитарного инфильтрата децидуальной оболочки как при неосложнённой беременности, так и при самопроизвольном выкидыше. Их уровень составлял около 80% в обеих клинических группах и достоверно не различался (р>0,05). Полученные результаты согласуются с литературными данными [Bulmer, 2009].

Однако при самопроизвольном выкидыше нами отмечались значительные изменения в экспрессии рецепторов и продукции эффекторных молекул децидуальными ЕК, которые проявлялись снижением количества CD56+ клеток, экспрессирующих ингибирующие рецепторы NKG2A (81,97±3,09% при неосложнённой беременности и 44,83±6,25% при самопроизвольном выкидыше, р<0,001) и увеличением количества клеток,

экспрессирующих активирующие рецепторы СБ161 (50,27±4,18% при неосложиёниой беременности и 63,31±0,38% при самопроизвольном выкидыше, р<0,01). Кроме того, при самопроизвольном выкидыше изменялся индекс соотношения С05б+ЫК020+ и СЭ56+МК02А+ лимфоцитов: при неосложнённой беременности этот индекс был меньше 1 (0,71±0,03), а при самопроизвольном выкидыше этот индекс существенно возрастал (1,64±0,34, р<0,05), что позволяет говорить об относительном преобладании С056+ естественных киллеров, экспрессирующих активирующие рецепторы ЫКС20, при данной акушерской патологии.

В группе женщин с самопроизвольным выкидышем в децидуальных ЕК значительно усиливалась экспрессия мРНК ШЫу (14,58±4,69*104 копий пар/мкл при неосложнённой беременности и 62,84±17,91*104 копий пар/мкл - при самопроизвольном выкидыше, р<0,05) и ОгВ (631,04±175,75*104 копий пар/мкл при неосложнённой беременности и 1651,44±76,46*104 копий пар/мкл при самопроизвольном выкидыше, р<0,001), по сравнению с таковыми при неосложнённой беременности. Кроме того, при самопроизвольном выкидыше в децидуальной оболочке плаценты повышалось относительное содержание ЕК, внутриклеточно продуцирующих (7,72±0,80% при неосложнённой беременности и

25,38±6,97% при самопроизвольном выкидыше, р<0,01) и ОгВ (15,11±0,75% при неосложнённой беременности и 27,68±1,45% при самопроизвольном выкидыше, р<0,001), и экспрессирующих рецепторы к 1БЫу - молекулы СВ119 (4,16±0,46% при неосложнённой беременности и 9,60±0,89% при самопроизвольном выкидыше, р<0,001).

Как известно, вгВ участвует в реализации цитотоксического действия ЕК, способствуя индукции апоптоза в клетках мишенях [ЫаказЫта А. с1 а1., 2008]. 1РНу является одним из основных цитокинов, приводящих к активации ЕК [Кетлинский С. А., Симбирцев А. С. 2008]. Выявленные изменения в синтезе, внутриклеточной продукции и рецепции №N7 и вгВ

свидетельствуют о высоком уровне активации децидуальных CD56+ ЕК при развитии раннего досрочного прерывания беременности.

Таким образом, самопроизвольный выкидыш на ранних сроках гестации ассоциировался со снижением в лейкоцитарном инфильтрате децидуальной оболочки плаценты количества CD56+NKG2A+ ЕК, повышением уровня CD56+CD161+ лимфоцитов и индекса соотношения экспрессии активирующих и ингибирующих рецепторов децидуальными CD56+ лимфоцитами при усилении продукции ими цитолитических молекул и эффекторных цитокинов.

Принято считать, что индукция ТЫ типа иммунного ответа в ранние сроки беременности вызывает активацию цитотоксических реакций, ведущих к отторжению плода [Wegmann Т. G., et al. 1993, Vigano P. et al. 2001]. Одним из цитокинов Thl типа является IFNy. По нашим данным синтез IFNy в децидуальной оболочке ранних плацент увеличивается независимо от характера беременности. Мы не выявили достоверных различий в синтезе и тканевом содержании данного цитокина в норме и при патологии. Усиление продукции IFNy при самопроизвольном выкидыше отмечалось нами только в пуле децидуальных CD56+ ЕК.

Учитывая данные литературы о важной роли IFNy в регуляции функционально активности ЕК, мы предположили, что данный цитокин может непосредственно влиять на экспрессию рецепторов различного типа децидуальными ЕК. В эксперименте in vitro было установлено, что при 2-х часовой инкубации IFNy в дозах 100 и 1000 пг/мл оказывал выраженное угнетающее действие на экспрессию ингибирующих рецепторов NKG2A (69,58±3,32% - контроль, 57,70*4,03% и 55,33±5,18% - IFNy в концентрации 100 и 1000 пг/мл соответственно, р<0,05 в обоих случаях). При 24-часовом воздействии IFNy в тех же дозах оказывал выраженное угнетающее действие на экспрессию децидуальными CD56+ как активирующих рецепторов -NKG2D (49,96±5,09% - контроль, 31Д1±4,02% и 27,13±3,60% - IFNy в

концентрации 100 и 1000 пг/мл соответственно, р<0,05 и р<0,01 соответственно), так и ингибирующих рецепторов NKG2A (63,бО±4,98% -контроль, 46,84±4,49% и 44,16±5,15% - IFNy в концентрации 100 и 1000 пг/мл соответственно, р<0,01 в обоих случаях).

Следует отметить, что в низких концентрациях IFNy существенно не влиял на экспрессию рецепторов. По-видимому, физиологическое увеличение продукции самого IFNy в ткани плаценты на ранних сроках гестации не сопровождается одновременной активацией CD56+ ЕК, инфильтрирующих децидуальную оболочку плаценты, что является необходимым условием пролонгации беременности. А усиление продукции IFNy самими децидуальными CD56+ ЕК может аутокринно приводить к нарушению функционирования рецепторов различного типа на поверхности ЕК, определяя тем самым их неадекватную активацию. Таким образом, IFNy, продуцируемый децидуальными ЕК, может являться фактором, поддерживающим высокий уровень их активности при самопроизвольном выкидыше.

Как известно, обязательным условием нормального развития тканей плаценты является инвазия клеток из ворсинчатого трофобласта в материнскую часть плаценты [Сидельникова В. М., Сухих Г. Т. 2010]. Конечным пунктом инвазии клеток трофобласта являются материнские спиральные артерии, модификация которых во время беременности ведет к их стойкому расширению, увеличивая приток крови к ворсинам хориона [Parham Р., 2008, Whitley G. S., Cartwright J. Е. 2010]. В процессе инвазии трофобласта важную роль отводят протеиназам из семейства матриксных металлопротеиназ (MMPs) и их тканевым ингибиторам (TIMPs), участвующим в деградации компонентов экстроцелюлярного матрикса [Staun-Ram Е. et al., 2004].

Нами было установлено, что при развитии раннего самопроизвольного выкидыша в ткани трофобласта снижалась экспрессия мРНК ММР-2

(73,23±25,00*104 копий пар/мкл при неосложнённой беременности и 17,14±5,31*Ю4 копий пар/мкл при самопроизвольном выкидыше, р<0,05) и Т1МР-2 (1399,07±237,65*104 копий пар/мкл при неосложнённой беременности и 401,67±111,01*104 копий пар/мкл при самопроизвольном выкидыше, р<0,001), по сравнению с аналогичными показателями при неосложнённой беременности.

Данные результаты позволяют говорить о значительном снижении инвазивного потенциала клеток трофобласта при самопроизвольном выкидыше. Это предположение подтверждается выявленным нами значительным снижением инвазии клеток трофобласта в матригеле (коэффициент инвазии 0,58±0,04 при неосложнённой беременности и 0,36±0,02 при самопроизвольном выкидыше, р<0,01) и миграции клеток трофобласта в коллагене (средняя дистанция миграции 152,84±9,07 мкм при неосложнённой беременности и 10,35±0,51 мкм при самопроизвольном выкидыше, р<0,001) при раннем самопроизвольном выкидыше по сравнению с неосложненной беременностью. Кроме того, в ткани децидуальной оболочки плацент, полученных после самопроизвольного выкидыша, отмечалось резкое снижение количества Сук>кега1т-7-позитивных клеток по сравнению с таковым в плацентах женщин с неосложненной беременностью.

Известно, что формирование вневорсинчатого трофобласта также определяется и особенностями микроокружения в децидуальной оболочке плаценты. Нами было установлено, что на ранних сроках гестации, вне зависимости от характера течения беременности, в ткани децидуальной оболочки плаценты усиливалась экспрессия мРНК ММР-2, ММР-9 Т1МР-1 и по сравнению с таковой в эндометрии небеременных женщин. Уровень экспрессии мРНК ММР-2 составил 22,99 ± 14,08 * 104 копий пар/мкл в ткани эндометрия, 1949,02±692,67*104 копий пар/мкл в децидуальной оболочке при неосложнённой беременности и 388,03±107,93*104 копий пар/мкл при самопроизвольном выкидыше (р<0,01 в обеих группах), ММР-9 -

0,06±0,034*104 копий пар/мкл в ткани эндометрия, 217,41±52,71*104 копий пар/мкл в децидуальной оболочке при неосложнённой беременности и 0,440±0,074*104 копий пар/мкл при самопроизвольном выкидыше (р<0,05 и р<0,001 соответственно) Т1МР-1 - 0,277±0,094*104 копий пар/мкл в ткани эндометрия, 19,14±6,15*104 копий пар/мкл в децидуальной оболочке при неосложнённой беременности и 335,51±89,27*104 копий пар/мкл при самопроизвольном выкидыше (р<0,05 и р<0,01 соответственно).

Сравнительный анализ показателей синтеза ММРз при физиологической беременности и при спонтанном выкидыше показал, что при досрочном прерывании беременности отмечался более низкий уровень экспрессии мРНК ММР-9 (р<0,05), но более высокий уровень экспрессии мРНК ее специфического ингибитора Т1МР-1 (р<0,01). Кроме того мы наблюдали снижение синтеза как ММР-2 (р<0,05), так и её специфического тканевого ингибитора - Т1МР-2 (60377,63±27868,30*101 копий пар/мкл в децидуальной оболочке при неосложнённой беременности и 111,91±39,49*104 копий пар/мкл при самопроизвольном выкидыше, р<0,05). Таким образом, при раннем самопроизвольном выкидыше происходит значительное угнетение миграционной и инвазивной активности клеток трофобласта, по-видимому, обусловленное снижением синтеза матриксных металлопротеиназ, что может приводить к нарушению нормального формирования вневорсинчатого трофобласта и определять патологический характер течения беременности.

Известно, что децидуальные ЕК вступают в непосредственный контакт с инвазирующим трофобластом в материнской части плаценты [Ви1тег .(. N.. е1 а1., 2008]. Этот контакт может привести к развитию цитотоксических реакций со стороны ЕК в отношении клеток трофобласта, однако в норме этого не происходит. Более того, существует мнение, что этот контакт необходим для нормального развития плаценты, так как децидуальные ЕК осуществляют непосредственный контроль инвазивной активности

вневорсинчатого цитотрофобласта [Hanna J., et al., 2006, Moffett A., et al 2006].

Мы оценили влияние децидуальных ЕК на инвазию клеток трофобласта в серии экспериментов in vitro. Было установлено, что при неосложненной беременности в клетках трофобласта после культивирования с децидуальными ЕК снижалась экспрессия мРНК ММР-9 (13,62±1,36*104 копий пар/мкл при спонтанном синтезе и 3,43±1,37*104 копий пар/мкл при взаимодействии децидуальными ЕК, р<0,001) и TIMP-2 (240,24±69,95*104 копий пар/мкл при спонтанном синтезе и 30,87 ± 9,64*104 копий пар/мкл при взаимодействии с децидуальными ЕК, р<0,05). Аналогичные изменения наблюдались при самопроизвольном выкидыше. Под действием децидуальных ЕК в клетках трофобласта снижался синтез ММР-9 (47,16±12,59*104 копий пар/мкл при спонтанном синтезе и 19,22±7,64*104 копий пар/мкл при взаимодействии с децидуальными ЕК, р<0,05) и TIMP-2 (184,99±37,59*104 копий пар/мкл при спонтанном синтезе и 90,79±12,88*104 копий пар/мкл при взаимодействии с децидуальными ЕК, р<0,05).

В эксперименте по изучению прямого влияния ЕК на миграцию клеток трофобласта в коллагене было установлено, что предварительная инкубация эксплантов ворсин хориона с децидуальными CD56+ ЕК приводила к существенному угнетению миграции меток из ворсин трофобласта в коллагене как в случае неосложненной беременности (152,84±9,07 мкм -спонтанная миграция, 74,87±4,36 мкм - миграция после воздейсвтия децидуальных ЕК, р<0,001), так и при самопроизвольном выкидыше (10,35±0,51 мкм - спонтанная миграция и 5,56±0,14 мкм миграция после воздейсвтия децидуальных ЕК, р<0,001).

Таким образом, ЕК ограничивают чрезмерную инвазивную активность трофобласта, сравнимую с таковой у опухолевых клеток. Это соответствует литературным данным [Bulmer J. N., et al., 2010]. А при самопроизвольном выкидыше ассоциирован с резким угнетением инвазивного потенциала

клеток трофобласта, что может являться причиной нарушения развития тканей плаценты на ранних сроках гестации.

Одним из факторов, участвующих в реализации ингибирующего действия ЕК на инвазию клеток трофобласта, по-видимому, является ШЫу. По нашим данным, 1РЫу резко угнетал инвазию клеток трофобласта в матригеле как при физиологической беременности (0,58±0,04 - инвазия в середе ЯРМ1 1640, и 0,17±0,07 - в присутствии 1РИу, р<0,01), так и при самопроизвольном выкидыше (0,36±0,02 - инвазия в середе ЛРМ1 1640, и 0,14±0,01 - в присутствии IFNy) р<0,001)

Нами было установлено, что не только децидуальные ЕК влияли на инвазию клеток трофобласта, но и сам трофобласт оказывал выраженное действие на функциональное состояние СЭ56+ клеток. Нами было установлено, что как при неосложнённой беременности, так и при самопроизвольном выкидыше в децидуальных СБ56+ лимфоцитах после их инкубации с клетками ворсинчатого трофобласта усиливалась экспрессия мРНК 1РИу и ОгВ. Однако только у женщин с самопроизвольным выкидышем данное увеличение было статистически достоверным (экспрессия мРНК 137,73±52,11*104 копий пар/мкл- контроль,

399,80±121,89*104 копий пар/мкл - после взаимодействия с клетками трофобласта, р<0,05; экспрессия мРНК ОгВ: 60,82±8,36*104 копий пар/мкл-контроль, 474,21±7б,85*104 копий пар/мкл - после взаимодействия с клетками трофобласта, р<0,01).

По-видимому, усиление экспрессии мРНК и СгВ децидуальными ЕК после их взаимодействия с клетками аугологичного трофобласта может приводить к несбалансированному локальному усилению продукции цитолитических молекул и цитокинов ТЫ типа и вызывать развитие цитотоксических реакций, направленных против семиаллогенного плода.

Суммируя полученные нами данные, можно заключить, что при физиологической беременности на поверхности децидуальных ЕК

преобладает экспрессия ингибирующих рецепторов, отмечается умеренная активация ЕК при их взаимодействии с клетками трофобласта и происходит угнетение инвазивной активности клеток трофобласта под действием ЕК.

При самопроизвольном выкидыше усиливается продукция IFNy и GrB децидуальными ЕК, что ведет к нарушению экспрессии активирующих и ингибирующих рецепторов на их поверхности. Неадекватная активация ЕК при взаимодействии с клетками плодового происхождения ведет к усилению цитотоксического потенциала ЕК, вызывая чрезмерное ограничение инвазивной активности клеток трофобласта.

ВЫВОДЫ

1. Развитие самопроизвольного выкидыша на ранних сроках гестации при отсутствии изменений в содержании децидуальных CD56+ ЕК ассоциируется со снижением уровня CD56+ лимфоцитов, экспрессирующих ингибирующие рецепторы NKG2A и увеличением количества клеток, экспрессирующих рецептор цитотоксичности CD161, по сравнению с показателями при неосложненной беременности ранних сроков.

2. При раннем самопроизвольном выкидыше отмечается усиление синтеза и внутриклеточной продукции IFNy и GrB децидуальными лимфоцитами с фенотипом CD56+, а также повышение уровня CD56+ ЕК, экспрессирующих рецепторы к IFNy - CD119, относительно показателей контрольной группы.

3. Как при физиологическом течении беременности, так и при самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации повышается синтез IFNy в тканях децидуальной оболочки плаценты. In vitro IFNy после 2-х часовой инкубации в концентрации 100 и 1000 пг/мл угнетает экспрессию ингибирующих рецепторов NKG2A децидуальными ЕК, после 24-часовой инкубации IFNy в тех же концентрациях снижает экспрессию как активирующих, так и ингибирующих рецепторов децидуальными CD56+

лимфоцитами у женщин с неосложненной беременностью ранних сроков. Степень угнетения экспрессии активирующих рецепторов после 24-часового культивирования с более выражена, чем после 2-х часовой инкубации.

4. В децидуальной оболочке плаценты ранних сроков как при неосложненной беременности, так и при её раннем прерывании усиливается экспрессия мРНК ММР-2, ММР-9, Т1МР-2 и Т1МР-1 по сравнению с таковой в эндометрии небеременных женщин. При раннем самопроизвольном выкидыше в отличие от ткани децидуальной оболочки плаценты женщин с медицинским абортом снижается экспрессия мРНК ММР-2 и Т1МР-2, угнетается синтез ММР-9, но повышается синтез ее специфического тканевого ингибитора Т1МР-1.

5. При раннем самопроизвольном выкидыше в отличие от неосложненной беременности отмечается сниженная миграционная и инвазивная активность клеток трофобласта и сниженная экспрессия мРНК ММР-2 и Т1МР-2 в ткани ворсинчатого трофобласта, что сочетается с уменьшением количества цитокератин-7-позитивных клеток вневорсинчатого цитотрофобласта в ткани децидуальной оболочки плаценты.

6. В децидуальных СИ56+ лимфоцитах, независимо от характера течения беременности, после инкубации с аутологичными клетками ворсинчатого трофобласта повышается экспрессия мРНК 1УЫу и СгВ, однако при раннем самопроизвольном выкидыше усиление экспрессии мРНК ШЫу и вгВ децидуальными ЕК более выражено, чем у женщин с неосложненным течением беременности.

7. ШЫу подавляет инвазию клеток ворсинчатого трофобласта в матригеле, а децидуальные естественные киллеры угнетают миграционную активность клеток ворсинчатого трофобласта в коллагене и снижают экспрессию мРНК Т1МР-2 и ММР-9 в клетках ворсинчатого трофобласта как у женщин с неосложненной беременностью, . так и с ранним самопроизвольным выкидышем.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется определять в децидуальной оболочке ранней плаценты относительное содержание CD56+ лимфоцитов, экспрессирующих ингибирующие и активирующие рецепторы, и при значениях показателя CD56+NKG2A+ клеток менее 61,5%, CD56+CD161+ лимфоцитов более 54,4%, а также коэффициента CD56+NKG2D+/CD56+NKG2A+ более 0,84 диагностировать самопроизвольный выкидыш для оптимизации тактики прегравидарной подготовки женщин при последующих беременностях.

Рекомендуется определять коэффициент инвазии клеток ворсинчатого трофобласта в матригеле и при его значениях менее 0,47 диагностировать нарушение инвазивности клеток трофобласта ранней плаценты для оптимизации прегравидарной подготовки женщин при последующих беременностях.

Рекомендуется использовать модель совместного культивирования децидуальных CD56+ ЕК с клетками ворсинчатого трофобласта для изучения функциональной активности децидуальных естественных киллеров.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Sotnikova N.Yu., Kroshkina N.V., Voronin D.N., Lepilova I.B. Local immune events in RS A.// Abstracts book of 12th International Symposium for Immunology of Reproduction- Varna, Bulgaria, 2009. - P. 46-47.

2. Воронин Д.Н., Крошкина H.B., Сотникова Н.Ю., Чухина С.И., Бойко E.JI. Взаимосвязь активации CD56+ естественных киллеров с уровнем регуляторных Т-лимфоцитов у женщин с угрозой невынашивания ранних сроков беременности // Вестник Военно-Медицинской академии. - 2009. -№1(25). - С.288-289.

3. Воронин Д.Н., Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Крошкина Н.В., Димитриенко Т.А. Характер экспрессии активирующих и ингибирующих рецепторов на поверхности CD56+ естественных киллеров периферической крови и децидуальной оболочки плаценты при физиологическом течении беременности и при спонтанном аборте на ранних сроках гестации // Медицинская иммунология. - 2009. - Т.11, №4-5. - С.405-406.

4. Воронин Д.Н., Крошкина Н.В., Сотникова Н.Ю. Особенности экспрессии рецепторов различного типа децидуальными CD56+ ЕК в ранние

сроки неосложненной беременности // Аллергология и иммунология. -2009. - Т. 10, №2. - С.243-244.

5. Воронин Д.Н., Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Малышкина А.И., Крошкина Н.В. Особенности экспрессии лектин-подобных рецепторов С-типа на поверхности CD56+ естественных киллеров периферической крови и децидуальной оболочки плаценты при физиологическом течении беременности и при спонтанном аборте на ранних сроках гестации // Сб. науч. тр. и материалов науч.-практ. конф. «Современные перинатальные медицинские технологии в решении проблем демографической безопасности». - 2009, г.Минск. - С.139-142.

6. Воронин Д.Н., Лазарева Ю.Ю., Панова И.А., Лукина Н.С., Чухина С.И. Изменение дифференцировки лимфоцитов в динамике неосложненной беременности // Материалы научно-практической конференции ЦФО РФ с международным участием «Инновации и информационные технологии в диагностической, лечебно-профилактической и учебной работе клиник» -Тверь.-2009.-С. 327-328.

7. Можаева Т.А. Малышкина А.И. Сотникова Н.Ю. Воронин Д.Н. Характеристика инфекционного фактора у женщин с угрозой прерывания беременности в первом триместре // Материалы научно-практической конференции «Ранние сроки беременности. Профилактика репродуктивных потерь». - 20 ноября 2009.

8. Воронин Д.Н. Особенности экспрессии активирующих и ингибирующих NKG2 рецепторов и CD161 на поверхности CD56+ естественных киллеров в децидуальной оболочке у беременных и женщин со спонтанным абортом на ранних сроках гестации // Материалы 89-й ежегодный научно-практической конференции студентов и молодых ученых ИвГМА «Неделя науки - 2009». - С. 178.

9. Воронин Д.Н., Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Букина Е.А., Крошкина Н.В. Особенности регуляции инвазивнных свойств клеток трофобласта при физиологической беременности и самопроизвольном выкидыше // Jurnali nazariy va klinik tibbiyot (Журнал теоретической и клинической медицины, Узбекистан). - 2010. - №5. - С. 77-79.

10. Воронин Д.Н., Можаева Т.А. Экспрессия ММР-2, ММР-9 и их тканевых ингибиторов в трофобласте и в децидуальной оболочке ранней плаценты при неосложненной беременности и самопроизвольном выкидыше // Ж. «Вестник Уральской медицинской академической науки. Тематический выпуск по аллергологии и иммунологии».-2010,- № 2/1 (29). - С.24.

11. Сотникова Н.Ю., Воронин Д.Н., Крошкина Н.В., Малышкина А.И., Анциферова Ю.С., Букина Е.А. Роль IFNy в регуляции функциональной активности децидуальных естественных киллеров при беременности // Ж. «Иммунология», - 2010. - №3 (31), - С.136-139.

12. Малышкина А.И., Можаева Т.А., Воронин Д.Н. Особенности реакций врождённого иммунитета у женщин с угрозой прерывания

беременности на ранних сроках // «Российский Иммунологический журнал», октябрь- декабрь 2010, Т.4(13), №4, -С.407-408.

13. Воронин Д.Н., Можаева Т.А. иммунные механизмы регуляции инвазивности трофобласта при неосложнённой беременности и при её спонтанном прерывании на ранних сроках гестации // «Российский Иммунологический журнал», - 2010, - Т.4(13), №4, -С.414.

14. Воронин Д.Н., Сотникова Н.Ю., Крошкина Н.В. Продукция IFNg в тканях децидуальной оболочки первого триместра при нормальной беременности и при спонтанном выкидыше // Сборник научных трудов «Репродуктивное Здоровье Нового Поколения». - 2010. - С. 151-155.

15. Воронин Д.Н. Особенности активации децидуальных CD56+ естественных киллеров в ранние сроки беременности // Сборник научных трудов «Репродуктивное Здоровье Нового Поколения». - 2010. - С. 351-352.

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ЕК - естественные киллеры

ИФА - иммуноферментный анализ

мАТ - моноклональные антитела

МНК - мононуклеарные клетки

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

CD - cluster of differentiation (кластер дифференцировки)

FITC - флюоресцеин изотиоционат

GrB - Granzyme В (гранзим В)

IFNy - интерферон-у

ММР - матриксная металлопротеиназа

РЕ - фикоэритрин

RSA - recurrent spontaneous abortions (повторяющийся самопроизвольный выкидыш)

RT-PCR- полимеразная цепная реакция в режиме реального времени TIMP - тканевой ингибитор матриксной металлопротеиназы

Подписано в печать 21.06.2011 г. Формат издания 60х84'/]б. Печ. л. 1,5. Усл. печ. л. 1,4. Тираж 80 экз. Заказ 695.

Типография ГОУСПО Ивановского энергоколледжа, 153025, г. Иваново, ул. Ермака, 41. Тел.: 37-52-44,32-50-89 E-mail: tipografl00@gmail.com, www.tipl.ru

Заключение диссертационного исследования на тему "Роль децидуальных естественных киллеров в регуляции инвазивных свойств трофобласта при неосложнённой беременности и самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации"

ВЫВОДЫ

1. Развитие самопроизвольного выкидыша на ранних сроках гестации при отсутствии изменений в содержании децидуальных CD56+ ЕК ассоциируется со снижением уровня CD56+ лимфоцитов, экспрёссирующих ингибирующие рецепторы NKG2A и увеличением количества клеток, экспрёссирующих рецептор цитотоксичности CD 161, по сравнению с показателями при неосложненной беременности ранних сроков.

2. При раннем самопроизвольном выкидыше отмечается усиление синтеза и внутриклеточной продукции IFNy и GrB децидуальными лимфоцитами с фенотипом CD56+, а также повышение уровня CD56+ ЕК, экспрёссирующих рецепторы к IFNy — CD 119, относительно показателей контрольной группы.

3. Как при -физиологическом течении беременности, так и при самопроизвольном выкидыше на ранних сроках гестации повышается синтез IFNy в тканях децидуапьной оболочки плаценты. In vitro IFNy после 2-х часовой инкубации в концентрации 100 и 1000' пг/мл угнетает экспрессию ингибирующих' рецепторов NKG2A децидуальными ЕК, после 24-часовой инкубации- IFNy в тех же концентрациях снижает экспрессию как активирующих, так и ингибирующих рецепторов децидуальными CD56+ лимфоцитами у женщин с неосложненной беременностью-ранних сроков. Степень угнетения экспрессии активирующих рецепторов после 24-часового культивирования с IFNy более выражена, чем после 2-х часовой инкубации.

4. В дёцидуальной оболочке плаценты ранних сроков как при неосложненной беременности, так и при, её раннем прерывании усиливается экспрессия мРНК ММР-2, ММР-9, TIMP-2 и TIMP-1 по сравнению с таковой в эндометрии небеременных женщин. При раннем самопроизвольном выкидыше в отличие от ткани децидуапьной оболочки плаценты женщин с медицинским абортом снижается экспрессия мРНК ММР-2 и TIMP-2, угнетается синтез ММР-9, но повышается синтез ее специфического тканевого ингибитора Т1МР-1.

6. В децидуальных СЭ56+ лимфоцитах, независимо от характера течения беременности, после инкубации с аутологичными клетками ворсинчатого трофобласта повышается экспрессия мРНК ШЫу и вгВ, однако при раннем самопроизвольном выкидыше усиление экспрессии мРНК №N7 и СгВ децидуальными ЕК более выражено, чем у женщин с неосложненным течением беременности.

7. ИТЧу подавляет инвазию клеток ворсинчатого трофобласта в матригеле, а децидуальные естественные киллеры угнетают миграционную активность клеток ворсинчатого трофобласта в коллагене и снижают экспрессию мРНК Т1МР-2 и ММР-9 в клетках ворсинчатого трофобласта как у женщин с неосложненной беременностью, так и с ранним самопроизвольным выкидышем.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется определять в децидуальной оболочке ранней плаценты относительное содержание СЭ56+ лимфоцитов, экспрессирующих ингибирующие и активирующие рецепторы, и при значениях показателя СВ56+№£С2А+ клеток менее 61,5%, СВ56+СБ161+ лимфоцитов более 54,4%, а также коэффициента СВ56+ЫК02Б+/СБ56+Ж02А+ более 0,84 диагностировать самопроизвольный выкидыш для оптимизации тактики прегравидарной подготовки женщин при последующих беременностях.

Рекомендуется использовать модель совместного культивирования децидуальных СЭ56+ ЕК с клетками ворсинчатого трофобласта для изучения функциональной активности децидуальных естественных киллеров.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Воронин, Дмитрий Николаевич

1. Генотип HLA-G и привычный выкидыш неясного генеза / К. А. Пфейфер и др. // Проблемы репродукции. — 2002. — № 1. — С. 36—37.

2. Иммунодефицитные состояния / под ред. В. С. Смирнов, И. С. Фрейдлин. — СПб. : ООО «Издательство Фолиант», 2000. — 568 с.

3. Иммунологическая загадка беременности / под ред. Н. Ю. Сотниковой. Иваново. : Издательство МИК, 2005. — 276 с.

4. Иммунология репродукции / Г. Т. Сухих и др. // Сборник научных трудов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иимунофармакологии. — М., 1998. — С. 645—654.

5. Кетлинский С. А., Симбирцев А. С. Цитокины. — СПб. : ООО «Издательство Фолиант», 2008. — 552 с.

6. Мэйл А., Бростофф Дж., Рот Д. Б. и Ройтт А. Иммунология : пер. с англ. Ковальчук JI. В., Певницкий Л. А., Хромова С. С., Ганковская Л. В. — М. : Логосфера, 2007. — 568 с.

7. Пинегин Б. В. и Дамбаева С. В. NK—клетки: свойства и функции // Иммунология. — 2007. —№ 2. — С. 105—113.

8. Применение нормальных (поливалентных) внутривенных иммуноглобулинов в клинике невынашивания беременности / Е. М. Демидова и др. // Акушерство и гинекология. — 2003. — N 12. — С. 44—-47.

9. Сидельникова В. М., Сухих Г. Т. Невынашивание беременности: Руководство для практикующих врачей. — М.: ООО «Медицинское информационное агенство», 2010. — 536 с.

10. Система цитокинов, коплемента и современные методы иммунного анализа / Л. В. Ковальчук и др. // Российский Государственный университет. —Москва, 2001. — 158 с.

11. Сотникова Н.Ю. Современные аспекты иммунологии беременности // Материалы IX Всероссийского научного форума «Мать и дитя», Москва, — 2007. — С. 246—247.

12. Сотникова Н.Ю. Современные иммунные аспекты беременности // Ж. Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. — 2008. — Приложение 1. — С. 69—74.

13. Трунова JI. А. Иммунология репродукции. — Новосибирск: Наука. 1994. —158 с.

14. Шилов Ю. И., Груздева Е. А. Влияние женских половых стероидных гормонов на функции фагоцитирующих клеток периферической крови // ДАН. — 2002. — Т. 384, № 4. — С. 550—552.

15. Ширшев С. В. Механизмы иммунного контроля процессов репродукции. — Екатеринбург, 1999. — 382 с.

16. Ширшев С. В. Механизмы иммуноэндокринного контроля процессов репродукции. — В 2 томах. — Т. 1. — Екатеринбург: УрО РАН, 2002. — 431 с.

17. Шмагель К. В., Черешнев Б. А. Иммунитет беременной женщины. — М.: Медицинская книга, 2003. — 226 с.

18. Ярилин А.А., Иммунология : учебник / Ярилин А.А. — М. : ГЭОТАР— Медиа, 2010.— 752 с.

19. A three-colour flow Cytometry technique for measuring trophoblast in tracellular antiqens the relative expression of TAP in human cytotrophoblast and decidual cells. / L. M. Clover et al. // Placenta. — 2000. — № 21. — P. 743— 753.

20. A View to a Kill Signals Triggering Cytotoxicity / J. Y. Djeu et al. // Clin. Cancer. Res. — 2002. — Vol. 8. — № 3. — P. 636—640.

21. Absence of natural killer cells during murine pregnancy is associated with reproductive compromise in TgE26 mice / M. J. Guimond et al. // Biology of Reproduction. — 1997. — Vol. 56. — № 1. 169-179.

22. Activating killer cell immunoglobulin—like receptor genes' association with recurrent miscarriage / R. G. Vargas et al. // Am. J. Reprod. Immunol. — 2009. — Vol. 62. — № 1. — P. 34—43

23. Activating receptors and coreceptors involved in human natural killer cell— mediated cytolysis / A. Moretta et al. // Annu. Rev. Immunol. — 2001. 19. 197— 223.

24. Altered decidual leucocyte populations in the placental bed in pre-eclampsia and foetal growth restriction: a comparison with late normal pregnancy / P. J. Williams et al. // Reproduction. — 2009. — Vol. 138. — № 1. — P. 177—184.

25. Angiogenic growth factor messenger ribonucleic acids in uterine natural killer cells / X. F. Li et al. // The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. —2001. —Vol. 86. —№4, —P. 1823-1834.

26. Angiopoietin-1 and angiopoietin-2 activate trophoblast Tie-2 to promote growth and migration during placental development / C. Dunk et al. // American Journal of Pathology. —2000. — Vol. 156. — № 6. —P. 2185—2199.

27. Attualita n tema di immunologia del rapporto materno-fetale / A. Fabbro et al. // Patol. e Clin. Ostet. e Ginecol. — 1988. — V. 16. — № 2. — P. 129—136.

28. Bansal-A. S. Joining the immunological dots in recurrent miscarriage. // Am J. Reprod. Immunol. — 2010. — Vol. 64, № 5. — P. 307—315.

29. Bidirectional cytokine interactions in the maternal-fetal relationship: is successful pregnancy a Th2 phenomenon? / T. G. Wegmann et al. // Immunol. Today. — 1993. — Vol. 6. — № 14. — P. 353-356.

30. Billington W. D. The naturand possible function of MHC antigens on the surface of human trophoblast. // Reproductive immunology. — 1999. — P. 71— 77.

31. Bischof P., Truong K., Campana A. Regulation of Trophoblastic Gelatinases by Proto—oncogenes. // Placenta. — 2003. — Vol. 24. — P. 155—163.

32. Bulmer J. N., Lash G. E. Human uterine natural killer cells: a reappraisal // Mol. Immunol. — 2005. — Vol. 42. — P. 511-521.

33. Bulmer J. N., Longfellow M., Ritson A. Leukocytes and resident blood cells in endometrium // Ann. N-Y Acad. Sci. — 1991. — Vol. 622. — P. 57—68.

34. Bulmer J. N., Williams P. J., Lash G. E. Immune cells in the placental bed // Int. J. Dev. Biol. — 2010. — Vol. 54. — P. 281—294.

35. Carrington M., Martin M. P. The impact of variation at the KIR gene cluster on human disease. // Curr. Top. Microbiol. Immunol. — 2006. — Vol. 298. P. 225—257.

36. CD161 (human NKR-P1A) signaling in NK cells involves the activation of acid sphingomyelinase / D. P020 et al. // J. Immunol. — 2006. — Vol. 176. — № 4. — P. 2397—406.

37. CD Id and invariant NKT cells at the human maternal—fetal interface. / J. E. Boyson et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. — 2002. — Vol. 99. — P. 13741-13746.

38. CD34+ hematopoietic precursors are present in human decidua and differentiate into natural killer cells upon interaction with stromal cells / P. Vaccaa et al. // PNAS. — 2011. — Vol. 108. — № 6. — P. 2402—2407.

39. CD94-NKG2A recognition of human leukocyte antigen (HLA)-E bound to an HLA class I leader sequence / E. J. Petrie et al. // JEM. The Rockefeller University Press. — 2008. — Vol.' 205. — № 3. — P. 725—735.

40. Cellular responses to interferon—gamma. / U. Boehm et al. // Annu. Rev. Immunol. — 1997. — Vol. 15. — P. 749-795.

41. Characteristics of perforin expressing lymphocytes within the first trimester decidua of human pregnancy / D. Rukavina et al. // Am. J. Reprod. Immunol. — 1995. — Vol. 33. —P. 394—404.

42. Characterization of a lymphocyte subset displaying a unique regulatory activity in human deciduas / H. Amsalem et al. // International Immunology. — 2008. —Vol. 20, № 9. — P. 1147—1154.

43. Characterization of human invariant natural killer T subsets in health and disease using a novel invariant natural killer T cell-clonotypic monoclonal antibody, 6B11 / C. J. Montoya et al. // Immunology. — 2007. — Vol. 122. — № 1.—P. 1-14.

44. Clark D. A., Chaouat G., Arck P. C. Cytokine—dependent abortion in CBA xDBA/2 mice is mediated the procoagulant fgl2 hrothrombinase. // Immunology.1998. — Vol. 5. — P. 545—549.

45. Clifford K., Flanagan A. M., Regan L. Endometrial CD56+ natural killer cells in women with recurrent miscarriage: a histomorphometric study // Hum. Reprod. —1999. — Vol. 14. — P. 2727—2730.

46. Cohen M., Meisser A., Bischof P. Metalloproteinases and human placental invasiveness // Placenta. —2005. —27. —P. 783-793.

47. Comparison of decidual leukocytes following spontaneous vaginal delivery and elective cesarean section in uncomplicated human term pregnancy / Sindram-A. P. Trujillo et al. // J. Reprod. Immunol. — 2004. 62. — P. 125-137.

48. Control of human trophoblast function. / L. Lunghi et al. // Repr. Biol. And Endocrin. — 2007. — Vol. 5. — P. 6—20.

49. Coordinated acquisition of inhibitory and activating receptors and functional properties by developing human natural killer cells / B. Grzywacz et al. // Blood.2006. — Vol. 108. — №12. — P. 3824—3833.

50. Craven C. M., Morgan T., Ward K. Decidual spiral artery remodelling begins before cellular interaction with cytotrophoblasts // Placenta. — 1998. — № 19.—P. 241-252.

51. Critical and differential roles of NKp46- and NKp30-activating receptors expressed by uterine NK cells in early pregnancy / H. El Costa et al. // J. Immunol.—2008. — Vol. 181.— №5. —P. 3009—3017.

52. Croy В. A., Xie X. In vivo models for studying homing and function of murine uterine natural killer cells // Methods Мої. Med. — 2006. — Vol. 122. — P. 77—92.

53. Curry T. E., Osteen J. G., Osteen K. G. The Matrix Metalloproteinase System: Changes, Regulation, and Impact throughout the Ovarian and Uterine Reproductive Cycle // Endocrine Reviews. — 2003. —24. — № 4. — P. 428^165.

54. DAP10 and DAP12 form distinct, but functionally cooperative, receptor complexes in natural killer cells / J. Wu et al. // J. Exp. Med. — 2000. — Vol. 192:—P. 1059—1068.

55. Decidual and peripheral blood CD4+CD25+ regulatory T cell in early pregnancy subjects and spontaneous abortion cases / Y. Sasaki et al. // Molecular Human Reproduction. — 2004. — Vol. 10. — № 5. — P. 347—353.

56. Decidual natural killer cells in recurrent spontaneous abortions / D. R. Janosevic et al. // Vojnosanit. Pregl. — 2011. — Vol. 68. — № 1. — P. 41—45.

57. Decidual NK Cells Alter In Vitro First Trimester Extravillous Cytotrophoblast Migration: A Role for IFN-yl / Y. Hu et al. // The Journal of Immunology. — 2006. — Vol. 177. — P. 8522-8530.

58. Decidual NK cells regulate key developmental processes at the human fetal-maternal interface / J. Hanna et al. // Nat. Med. — 2006. — Vol. 12. — P. 1065—1074

59. Defective trophoblast function in mice with a targeted mutation of Ets2 // H. Yamamoto //—1998. — № 12. — P. 1315-1326.

60. Detailed analysis of peripheral blood natural killer (NK) cells in women with recurrent miscarriage / A. King et al. // Hum. Reprod. — 2010. — Vol. 25. — № 1. — P. 52—58.

61. Di Santo J. P. Functionally distinct NK—cell subsets: developmental origins and biological implications //Eur. J. Immunol. — 2008. — Vol. 38. — P. 29482951.

62. Differential gene expression in endometrium, endometrial lymphocytes, and trophoblasts during successful and abortive embryo implantation / C. Tayade et al. // J. Immunol. — 2006. — Vol. 176. — № 1. — P. 148—156.

63. Differential glucocorticoid effects on proliferation and invasion of human trophoblast cell lines / M. Mandl et al. // Reproduction. — 2006. — Vol. 132. — P. 159-167.

64. Dosiou C., Giudice L. C. Natural killer cells in pregnancy and recurrent pregnancy loss: endocrine and immunologic perspectives // Endocrine Reviews. — 2005. ol. 26. — № 1. — P. 44-62.

65. Dustin M. L., Chan A. C. Signaling takes shape in the immune system //Cell. — 2000.—Vol. 103.—P. 283—294.

66. Everett C. Incidence and outcome of bleeding the 20th week of pregnancy: prospective study from general practice // British Medical Journal. —- 1997. — Vol. 315.—P. 32-34.

67. Evidence for immune cell involvement in decidual spiral arteriole. remodeling in early human pregnancy / S. D. Smith et al.-// Am. J. Pathol. 2009.1. Vol. 174.— P. 1959-1971.

68. Evidence: of a T(H) 1 type response associated with recurrent miscarriage / C. Jenkins et ai:. // Fertil. Steril. — 2000. — Vol. 13. — P. 1206-1208.

69. Expression and' activation of Matrix Metalloproteinase 2 and 9 in Human Trophoblasts / K. Isaka et al. // Placenta. — 2003. — Vol. 24. — P. 53—64.

70. Expression, and function of NKRP1A molecule on human monocytes and dendritic cells / A. Poggi et al. // Eur. J. Immunol. — 1997. — Vol. 27. — P.2965—2970.

71. Expression and importance of matrix metalloproteinase 2 and 9 (MMP-2 and-9) in human trophoblast invasion / E. Staun-Ram et al. // Reproductive Biology and Endocrinology. — 2004. — № 2. — P. 59—72.

72. Expression of activating and inhibitory receptors on peripheral blood natural killer cell subsets of women with reproductive failures. / D. Baltadzheiva et al..// Akush Ginekol (Sofiia). — 2010. — Vol. 49, № 4. — P. 12—17.

73. Expression of angiogenic growth factors by uterine natural killer cells during early pregnancy / G. E. Lash et al:. // J. Leuk. Biol. —2006. — Vol. 80. — № 3. — P. 572—580.

74. Expression of integrins and extracellular matrix proteins at the maternal-fetal interface during tubal' implantation / L. Qin et al. // Reproduction.— 2003.— Vol. 126.—P. 383—391.

75. Expression of killer immunoglobulin—like receptors on peripheral blood NK cell subsets of women with recurrent spontaneous abortions or implantation failures / E. I. Ntrivalas et al.;// Am. J. Reprod. Immunol.— 2005. —Vol; 53. — №5. —P. 215—221.

76. Expression of RCAS1 and FasL in human trophoblasts and uterine glands during pregnancy: the possible role in immune privilege / K. Ohshima // Clin: Exp. Immunol. — 2001. — Vol. 123. — № 3. — P. 481—486:

77. Expression, regulation and functional characterization of matrix metalloproteinase-3 of human trophoblast / H. Husslein et al. // Placenta. •—■ 2009. —Vol. 30. —№3.—P. 284—291.

78. Gestation stage—dependent mechanisms of invariant natural killer T cell— mediated pregnancy loss / J. E. Boyson et al. // PNAS. — 2006. — Vol. 6., № 12.—P. 4580-4585.

79. Gill Immunoregulatory molecules in human placentas: potential for diverse roles in pregnancy / S. Joan et al. // Int. J. Dev. Biol. — 2010. — Vol. 54. — P. 457 — 467.

80. Graham C. H., Lala P. K. Mechanism of control of trophoblast invasion in situ // J. Cell Physiol. — 1991. — Vol. 148. — № 2. — P. 228—234.

81. Granulysin produced by uterine natural killer cells induces apoptosis ofextravillous rophoblasts in spontaneous abortion / Nakashima A. et al. // The <

82. American Journal of Pathology. — 2008. — Vol. 173, № 3. — P. 653—664.

83. Guerin L. R., Prins J. R., Robertson S. A. Regulatory T-cells and immune tolerance in pregnancy: a new target for infertility treatment? // Human Reproduction Update. — 2009. — Vol.15. — № 5. — P. 517—535.

84. Hanna J., Mandelboim O. When killers become helpers // Trends Immunol. — 2007. — Vol. 28. — P. 201-206.

85. Heilmann L., Schorsch M., Hahn T. CD3-CD56+CD16+ natural killer cells and improvement of pregnancy outcome in IVF/ICSI failure after additional IVIG-treatment // Am. J. Reprod. Immunol. — 2010. —63. — № 3. — P. 263—265.

86. High expression of NKG2A/CD94 and low expression of granzyme B are associated with reduced cord blood NK cell activity / Y. Wang // Cell. Mol. Immunol. — 2007. — Vol. 4. — № 5. — P. 377—382.

87. HLA-C C1C2 heterozygosity may protect women bearing the killer immunoglobulin-like receptor AA genotype from spontaneous abortion /1. Nowak et al. // J. Reprod. Immunol. — 2011. — Vol. 88. — № 1. — P. 32—37.

88. HLA—E binds to natural killer cell receptors CD94/NKG2A, B and C. / V. M. Braud et al. // Nature. — 1998. — Vol. 391. — P. 795—799.

89. HLA-E is expressed on trophoblast and interacts with CD94:NKG2 receptors on decidual NK cells / A. King et al. // Eur. J. Immunol. — 2000. — P. 1623-1631.

90. HLA-G expression in extravillous trophoblasts is an intrinsic property of cell differentiation: a lesson learned from ectopic pregnancies / D. S. Goldman-Wohl et al. // Mol. Hum. Reprod. — 2000. — № 6. — P. 535-540.

91. HLA-G homodimer-induced cytokine secretion through HLA-G receptors on human decidual macrophages and natural killer cells / C. Li et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. — 2009. — Vol. 106. — № 14. — P. 5767—5772.

92. HLA-G. pre-eclampsia, immunity and vascular events. / L. J. Bouteiller et al. // Reprod. Immunol. — 2003. — Vol. 59. — P. 219-234.

93. How cells respond to interferons / G. R. Stark et al. // Annu. Rev. Biochem. — 1998. — Vol. 67. — P. 227—264.

94. Human decidual NK cells form immature activating synapses and are not cytotoxic / H. D. Kopcow et al. // PNAS. —2005. — Vol. 6. — № 43. — P. 15563—15568.

95. Human decidual NK cells: unique phenotype and functional properties / J. Tabiasco et al. // Placenta. — 2006. — Vol. 27. — P. 34-39.

96. Human uterine NK cells have a similar repertoire of killer inhibitory and activatory receptors to those found in blood, as demonstrated by RT—PCR and sequencing / S.E. Hiby et al. // Molecular Immunology. — 1997. —■ Vol. 34. — №5. —P. 419-430.

97. IFN—gamma promotes apoptosis of the uterus and placenta in pregnant rat and human cytotrophoblast cells / Q. H. Sun et al. // J. Interferon Cytokine Res. —2007. — Vol. 27. — № 7. — P. 567—578.

98. IFN-gamma-mediated extravillous trophoblast outgrowth inhibition in first trimester explant culture: a role for insulin-like growth factors / Y. Hu et al. // Mol. Hum. Reprod. — 2008. — Vol. 14. — № 5. — P. 281—289.

99. Immunological modes of pregnancy loss / J. Kwak-Kim et al. // Am. J. Reprod. Immunol. — 2010. — Vol. 63. —№ 6. — P. 611—623.

100. Immunological properties of human decidual macrophages a possible role in intrauterine immunity / U. Singh et al. // Reproduction. — 2005. — Vol. 129.1. P. 631—637.

101. Immunomorphologic studies of human deciduaassociated lymphoid cells in normal early pregnancy / L. Mincheva-Nilsson et al. // J. Immunol. — 1994. — Vol. 152. — P. 2020-2032.

102. Immunoregulatory molecules of trophoblast and decidual suppressor cell origin at the maternofetal interface / D.A. Clark et al. // Am.J.Reprod.Immunol.1986. — Vol. 10. — P. 100—104.

103. Incidence of early loss of pregnancy / A. L. Wilcox et al. //New England Journal of Medicine. — 1998. — Vol. 319. — P. 189-194.

104. Induction of murine spiral artery modification by recombinant human interferon-gamma / J. M. Monk et al. // Placenta. — 2005. — Vol. 26. — № 10.1. P. 835—838.

105. Influence of activating and inhibitory killer immunoglobulin—like receptors on predisposition to recurrent miscarriages / R. M. Faridi et al. // Hum. Reprod. — 2009. 24. — P. 1758—1764.

106. Influences of extracellular matrix and of conditioned media on differentiation and invasiveness of trophoblast stem cells / T. Lei et al. // Placenta. — 2007 — Vol. 28.—№ 1.—P. 14—21.

107. Inhibition of cytotrophoblastic (JEG-3) cell invasion by interleukin 12 involves an interferon gamma—mediated pathway / S. Karmakar. et al. // J. Biol. Chem. — 2004. — Vol. 279. — P. 55297-55307.

108. Inhibition of first trimester human extravillous trophoblast invasion by TNF-a and IFN-y / H. A. Otun // Placenta. — 2003. — Vol. 24. — P. 67.

109. Inhibition of trophoblast cell invasion by TGFB1, 2, and 3 is associated with a decrease in active proteases / G.E. Lash et al. // Biology of Reproduction. — 2005. — Vol. 73. 2. — P. 374—381.

110. Interferon Gamma in Successful Pregnancies / Murphy S. P. et al. // Biology Of Reproduction. — 2009. — Vol. 80. — P. 848-859.

111. Interferon-gamma inhibits metalloproteinase activity and cytotrophoblast cell migration / V. A. Fontana et al. // Am. J. Reprod. Immunol. — 2010. — Vol. 64. — № 71. — P. 20—26.

112. Interferons and the Maternal-Conceptus Dialog in Mammals / R. M. Roberts et al. // Semin. Cell. Dev. Biol. — 2008. — Vol. 19. — № 2. —P. 170-177.

113. Interferon-y inhibits extravillous trophoblast cell invasion by a mechanism that involves both changes in apoptosis and protease levels / G. E. Lash et al. // The FASEB Journal. — 2006. — Vol. 20. — P. 2512—2518.

114. Interleukin—10 is produced by human uterine natural killer cells but does not affect their production of interferon—y / P. Vigano et al. //Molecular Human Reproduction., — 2001. — Vol. 7. — № 10. — P. 971—977.

115. Involvement of MAPK pathway in TNF—alpha—induced MMP—9 expression in human trophoblastic cells / M. Cohen // Mol. Hum. Reprod. — 2006.1. Vol. 12. — P. 225—232.

116. J. E. Cartwright Remodelling at the maternal-fetal interface: relevance to human pregnancy disorders / J. E. Cartwright et al. // Reproduction. — 2010. — Vol. 140.— P. 803-813.

117. Jacobs R. CD56bright cells differ in their KIR repertoire and cytotoxic features from CD56dim NK cells // Eur. J. Immunol. — 2001. — Vol. 7. — № 3.1. P. 3121—3127.

118. Jokhi P. P., King A., Loke Y. W. Cytokine production and cytokine receptor expression by cells of the human first trimester placental—uterine interface // Cytokine. — 1997. — Vol. 9. — № 2. — P. 126-137.

119. Jokhi P. P., King A., Loke Y. W. Production of granulocyte-macrophage colony-stimulatmg factor by human trophoblast cells and by decidual large granular lymphocytes // Human Reproduction. — 1994. — Vol. 9. — № 9. — P. 1660-1669.

120. Jones R. K., Bulmer J. N., Searle R. F. Cytotoxic activity of endometrial granulated lymphocytes during the menstrual cycle in humans // Biol. Reprod. — 1997. —Vol. 57. —P. 1217—1222.

121. Khedmat H., Alavian S. M.", Taheri S. Pregnancy after renal transplantation: prospects and concerns // Ann. Transplant. — 2009. — Vol. 14. — № 2. — P. 55—60.

122. Killer immunoglobulin—like receptor repertoire on uterine natural killer cell subsets in women with recurrent spontaneous abortions / Y. Hong et al. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. — 2008. — Vol. 140. — № 2. — P. 218—23.

123. Kinetics and peptide dependency of the binding of the inhibitory NK receptor CD94/NKG2—A and the activating receptor CD94/NKG2-C to HLA-E / M. Vales-Gomez et al. // J. EMBO. — 1999. — Vol. 18. — № 15. — P. 4250— 4260.

124. King A. Uterine leukocytes and decidualization // Hum. Reprod.1 Update. —2000. — Vol. 6. — P. 28—36.

125. Kitaya K. Accumulation of uterine CD16(-) natural killer (NK) cells: friends, foes, or Jekyll-and-Hyde relationship for the conceptus? // lmmunollnvest. — 2008. —Vol. 37. —№5. —P. 467—81.

126. Knofler M. Critical growth factors and signalling pathways controlling human trophoblast invasion // International Journal of Developmental Biology. — 2010. — Vol. 54. — P. 269-280.

127. Koopman L. A. Human decidual natural killer cells are a unique NK cell subset with immunomodulatory potential // J. Exp. Med. — 2003. — Vol. 198. — P. 1202-1212.

128. Lanier L. L. On guard: activating NK cell receptors //Nat. Immunol. —2001. — № 2. — P. 23—27.

129. Lanier L. L., Chang C., Phillips J. H. Human NKR-P1A. A disulfidelinked homodimer of the C-type lectin superfamily expressed by a subset of NK and T lymphocytes // J. Immunol. — 1994. — Vol. 153. — P. 2417—2428.

130. Late sporadic miscarriage is associated with abnormalities in spiral artery transformation and trophoblast invasion / E. Ball. // J. Pathol. — 2006. — Vol. 208: —P. 535-542.

131. Lazetic S., Chahg C., Houshins J. P. Human natural killer cell receptors involved in MHC class I: recognition are disulfide—Linked heterodimers of CD94 and NKG2 subunit // J. Immunology. —1996. —Vol. 157. —P. 4741—4745.

132. Le Bouteiller P., Tabiasco L Killers become builders during pregnancy // Nat. Med. — 2006. —Vol. 12. — P. 1065—1074. ^

133. Localization of matrixmetalloproteinase (MMP)-2, MMP-9 and tissue inhibitors for MMPs (TIMPs) in uterine natural killer cells in early human pregnancy / K. Naruse et al. // Human Reproduction. — 2009. — Vol. 24; — № 3. — P. 553—561.

134. Loke Y. W., King A. Decidual natural-killer-cell interaction with trophoblast: cytolysis or cytokine production? // Biochem. Soc. Trans:—-2000. — Vol. 28 —№2, —P. 196—198.

135. Loregger T., Pollheimer J., Knofler M. Regulatory transcription factors controlling function and differentiation of human trophoblast a review // Placenta. — 2003. — Vol: 24. — P. 104-110.

136. Manaster I., Mandelboim O. The unique properties of human NK cells in the uterine mucosa // Placenta. — 2008. — Vol. 29. — P. 60-66.

137. Manaster I., Mandelboim O. The unique properties of uterine NK cells // Am. J. Reprod: Immunol. — 2010. — Vol. 63. — № 6. — P. 434—44.

138. Natural killer (NK) cell receptors' repertoire in couples with recurrent spontaneous abortions / M. Varla-Leftherioti et al. // Am. J. Reprod. Immunol. — 2003. —Vol.49.—№3.—P. 183—191.

139. Natural killer cells in human pregnancy / Male V. et al. // Methods. Mol. Biol. — 2010. — Vol. 612. — P. 447—63.

140. Natural killer cell—triggered vascular transformation: maternal care before birth? / J. Zhang et al. // Cell. Mol. Immunol. — 2010. — Vol. 8. — № 1. — P. 1—11.

141. Natural selection of human embryos: impaired, decidualization of endometrium disables embryo-maternal interactions and causes recurrent pregnancy loss / M. Salker et al. // PLoS ONE. — 2010. — Vol. 5. — № 4.

142. NK cell activity in recurrent miscarriage: what are we really measuring? / K. Shakhar et al. // Hum. Reprod. — 2006. — Vol: 21. — № 9. — P. 2421—2425.

143. NKG2A complexed with CD94 defines a novel inhibitory natyral killer cell receptor. / A. G. Brooks et al. // J. Exp. Med. — 1997. — Vol. 185. — P. 795— 800.

144. Noncatalytic domain of uPA stimulates human extravillous trophoblast migration by using phospholipase C, phosphatidylinositol 3-kinase and mitogen-activated protein kinase / J. Liu et al. // Experimental Cell Research. — 2003. — Vol. 286.—P. 138—151.

145. Normal human pregnantcy is associated with an elevation in the immime suppressive CD25+ CD4+ regulatory T-cell subset / D. A. Somerset et al. // Immunology. — 2004. — Vol. 112. 38—43.

146. Notch activation enhances IFNgamma secretion by human peripheral blood and decidual NK cells /1. Manaster et al. // J. Reprod. Immunol. — 2010. — Vol. 84.— №1.—P. 1—7.

147. O'Connor G. M., Hart O. M., Gardiner C. M. Putting the natural killer cell in its place // Immunology. — 2005. — Vol. 10. — P. 1—10.

148. Parham P. NK Cells and Trophoblasts: Partners in Pregnancy // J. Exp. Med. — 2004. — Vol. 200. — № 8. — P. 951—955.

149. Parham P., Guethlein L. A. Pregnancy immunogenetics: NK cell education in the womb?//J. Clin. Invest. — 2010. — Vol. 120.—№ 11. — P. 4102—4110.

150. Park D. W., Lee H. J. Peripheral blood NK cells reflect changes in decidual NK cells in women with recurrent miscarriages // Am. J. Reprod. Immunol. — 2010. — Vol. 63. — № 2. — P. 173—180.

151. Phenotype of NK cells and cytotoxic/apoptotic mediators expression in ectopic pregnancy / G. Laskarin et al. // Am. J. Reprod. Immunol. — 2010. — Vol. 64. — № 5. — P. 347—58.

152. Phenotypic characterization of human decidual macrophages / J. Heikkinen et al. // Clin. Exp. Immunol. — 2003: — Vol. 131. — P. 498—505.

153. Piccinni M. P. T cell tolerance towards the fetal allograft // J. Reprod. Immunol. —2010.— Vol. 85.— № 1.—P. 71—75.

154. Placental bed spiral arteries in the hypertensive disorders of pregnancy / R. Pijnenborg et al. // Br. J. Obstet. Gynaecol. — 1991. — Vol. 98. — P. 648-655

155. Placental expression of interferon—gamma (IFN—gamma) and its receptor IFN—gamma R2 fail to switch from early hypoxic to late normotensive

156. Renaud S. J., Macdonald-Goodfellow S.K., Graham C. H. Coordinated regulation of human trophoblast invasiveness by macrophages and interleukin 10 // Biology of Reproduction. — 2007. — № 76. — P. 448—454.

157. Resistance of malignant trophoblast cells to both the anti-proliferative and anti-invasive effects of transforming growth factor-p / C.H. Graham et al. // Experimental Cell Research. — 1994. — Vol. 214. — №>1. — P. 93-99.

158. Riley J. K., Yokoyama W. M. NK cell tolerance and the maternal-fetal interface // Am. J. Reprod. Immunol. — 2008. — Vol. 59. — № 5. —P. 371—387.

159. Ritson A., Bulmer J. N. Endometrial granulocytes in human decidua react with a natural—killer (NK) cell marker, NKH1 // Immunology. — 1987. — Vol. 62. —P. 329—331.

160. Robertson M. J., Ritz J. Biology and clinical relevance of human natural killer cells. // Blood. — 1990. — Vol. 76. — № 12. —P. 2421—2438.

161. Roda-Navarro P., Reyburn H. T. The Traffic of the NKG2D/DaplO Receptor Complex during Natural Killer (NK) Cell Activation // J. Biol. Chem. — 2009. — Vol. 284. — № 24. —P. 16463-16472.

162. Sanguansermsri D., Pongcharoen S. Pregnancy Immunology: Decidual Im— mune Cells // Asian Pacific Journal Of Allergy And Immunology. — 2008: — Vol. 26.—P. 171—181.

163. Sargent I. L., Borzychowski A. M., Redman C. W. Immunoregulation in normal pregnancy and pre-eclampsia: an overview // Reprod Biomed Online. — 2006. — Vol. 13.—P. 80-86.

164. Schmitt C., Ghazi B., Bensussan A. NK cells and surveillance in humans // Reprod Biomed Online. — 2008.—Vol. 16.—№2.—P. 192—201.

165. Seli E., Arici A. Sex steroids and immune system // Reproductive Immunology. — 2002. — Vol. 22. — № 3. — P. 407—433.

166. Seli E., Vergouw C. G., Morita H. Noninvasive metabolomic profiling as an adjunct to morphology for noninvasive embryo assessment in women undergoing single embryo transfer // Fértil Steril. —2010. — Vol. 94. — № 2. — P. 535—542.

167. Soluble HLA-G promotes Thl-type cytokine production by cytokine-activated uterine and peripheral natural killer cells / A.Van der Meer et al.// Mol. Hum. Reprod. — 2007. — V. 13, № 2. — P. 123—133.

168. Starkey P. M., Sargent I. L., Redman C. W. Cell populations in human early pregnancy decidua: characterization and isolation of large granular lymphocytes by flow cytometry // Immunology. — 1988. — Vol. 65. — P. 129—134.

169. Staun-Ram E., Goldman S., Shalev E. p53 Mediates epidermal growth factor (EGF) induction of MMP—2 transcription and trophoblast invasion // Placenta. — 2009. — Vol. 30. — P. 1029-1036.

170. Structure and function of major histocompatibility complex (MHC) class I specific receptors expressed on human natural killer (NK) cells. / F. Borrego et al. // Molecular immunology. — 2001. — Vol. 38. — P. 637—660.

171. Suppression of extravillous trophoblast invasion of uterine spiral arteries by estrogen during early baboon pregnancy / E.D. Albrecht et al. // Placenta. — 2006. — № 4—5. — P. 483—490.

172. Sustained NKG2D engagement induces cross—tolerance of multiple distinct NK cell activation pathways / J. D. Coudert et al. // Blood. — 2008. — Vol. 111.—№7. 3571—3578.

173. Systemic CD56+ cells can predict pregnancy outcome / Coulam C.B. et. al.//Am.J.Reprod.Immunol.—1995. Vol. 22. P. 40—46.

174. Szekeres-Bartho J. Immunological relationship between the mother and the fetus // Int Rev Immunol. — 2002. — Vol. 21. — № 6. — P. 471-^195.

175. Szekeres-Bartho J. Regulation of NK cell cytotoxicity during pregnancy // Reprod. Biomed. Online. —2008. — Vol. 16. — № 2. — P. 211—217.

176. The Crystal structure and ligand binding properties of the D1D2 region of the inhibitory receptor LIR—1 (ILT2). / T. L. Chapman et al. // Immunity. — 2000. — Vol. 13. — P. 727—736.

177. Thl- and Th2-like cytokine production by first trimester decidual large granular lymphocytes is influenced by HLA-G and HLA-E / L. Rieger et al. // Molecular Human Reproduction. — 2002. — Vol. 8. — № 3. —P. 255-261.

178. The CD94 and NKG2—A C—tipe lectins covalently assemble to form a natural killer cell inhibitory receptor for HLA class I molecules / M. Carretero et al. //Eur. J. immunol. — 1997. — Vol. 27. — P. 563— 567.

179. The CD94/NKG2 C—type lectin receptor complex: involvement in NK cell—mediated recognition of HLA class I molecules / M. López-Botet et al. // Immunol Res. — 1997. — Vol. 16.—№2.—P. 175—85.

180. The genomic context of Natural Killer receptor extended gene families / J. Trowsdale et al. // Immunol. — 2001. — Vol. 181. — P. 20-38.

181. The human natural cytotoxicity receptors (NCR) that induce HLA class I— independent NK cell triggering / C. Bottino et al. // Hum Immunol. — 2000. — Vol. 61, —№ 1. —P. 1—6.

182. The killer immunoglobulin like receptor gene cluster: Tuning the genome for defense. / A. Bashirova et al. // Annu. Rev. Genomics. Hum. Genet. — 2006. — № 7. — P. 277—300.

183. The role of trophoblast in the physiological change in decidual spiral arteries / P.Y. Kam et al. // Human Reproduction. — 1999. — Vol. 14. — № 8. — P. 2131—2138.

184. The supression of the natural killer activity by pregnancy / V. Toder et al. // Immun. Reprod. — 1982. — P. 445—448.

185. Three-dimensional growth of extravillous cytotrophoblasts promotes differentiation and invasion / H. L. LaMarca et al. // Placenta. — 2005. — Vol. 26. — P. 709-720.

186. Tolerance to the foetal allograft? / G. Chaouat et al. //Am. J. Reprod. Immunol. — 2010: — Vol. 63., № 6. — P. 624—636.

187. Trafficking of Peripheral Blood GD56Bright Cells to the Decidualizing

188. Uterus —New Tricks for Old Dogmas? / M. van den Heuvel et al. // J. Repro.1.munol. — 2005. — Vol. 67. — P: 21-34.

189. Trigering of effector functions on a CD 8* T cell clone upon the aggregation of an.activatory CD94/kp39 heterodimer / T. Bellon et al. ;// J.Immunology. — 1999. —Vol. 162. —P. 3996—4002.

190. Trophoblast apoptosis is increased in women with evidence of TH1 immunity / J. Lee et al. // Fertil.Steril: — 2005. —Vol. 83. — P. 1047—1049.

191. Trowsdale J., Moffett A. NK receptor interactions with MHC class I molecules in pregnancy //Semin. Immunol. —2008. — Vol. 20. — № 6. — P. 317—320.

192. Trundley A., Moffett A. Human uterine leukocytes and,pregnancy Tissue // Antigens. —2004. — Vol. 63. — P. 1—12:

193. Unique characteristics of NK cells throughout the human female reproductive tract / T. F. Mselle et al. // Clin. Immunol: — 2007. — Vol. 124. — P. 69-76.

194. Upshaw J; L., Leibson P. J. NKG2D-mediated activation of c^otoxic lymphocytes: unique signaling pathways and distinct functional outcomes // Semin. Immunol. — 2006. — Vol. 18. — № 3. — P. 167—175.

195. Uterine NK cells and trophoblast HLA class I molecules / A. King et al. // Am. J. Reprod. Immunol, — 1997. — Vol. 37. — № 6. — P. 459—462.

196. Varla-Leftherioti M. The significance of the women's repertoire of natural killer cell receptors in the maintenance of pregnancy // Chem. Immunol. Allergy. —2005. — Vol.89. — P. 84—95.

197. Vascular endothelial growth factor c facilitates immune tolerance and endovascular activity of human uterine NK cells at the maternal-fetal interface / S.S. Kalkunte et al. // J. Immunol. — 2009. — Vol. 182. — P. 4085—^092.

198. Vascular-leukocyte interactions: mechanisms of human decidual spiral artery remodeling in vitro / A. D. Hazan et al. // Am. J. Pathol. — 2010. — Vol. 177. — № 2. — P. 1017—1030.

199. Vilches C., Parham. P. KIR: diverse, rapidly evolving receptors of innate and adaptive immunity // Annu. Rev. Immunol. — 2002. — Vol. 20. — P. 217251.

200. Weetman A. P. Immunity, thyroid function and pregnancy: molecular mechanisms // Nat. Rev. Endocrinol. — 2010. — Vol. 6. — № 6. — P. 311—318.

201. Weetman A. P. The immunology of pregnancy // Thyroid. — 1999. — Vol. 9. — № 7. — P. 643—646.

202. Wenbin T., Bazer F. W., Brown W. C. Lymphokines // Encyclopedia of reproduction. — 1999. — Vol. 2. — P. 1102—1118.

203. Whitley G. S., Cartwright J. E. Cellular and molecular regulation of spiral artery remodelling: lessons from the cardiovascular field // Placenta. — 2010. — Vol. 31. —P. 465-474.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Воронин, Дмитрий Николаевич

Похожие научные работы

Каталог диссертаций