Репродуктивная функция и состояние перитонеальных макрофагов белых крыс с экспериментальным эндометриозом

Шарабанова, Ирина Юрьевна

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Репродуктивная функция и состояние перитонеальных макрофагов белых крыс с экспериментальным эндометриозом

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Шарабанова, Ирина Юрьевна Москва 2005 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Репродуктивная функция и состояние перитонеальных макрофагов белых крыс с экспериментальным эндометриозом

На правах, рукописи

ШАРАБАНОВА ИРИНА ЮРЬЕВНА

РЕПРОДУКТИВНАЯ ФУНКЦИЯ И СОСТОЯНИЕ ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ МАКРОФАГОВ БЕЛЫХ КРЫС С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ЭНДОМЕТРИОЗОМ

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА -2005

Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии, физики, математики и информатики Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

С.Б.Назаров

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

А.А.Ярилин Л.В.Ванько

Ведущее учреждение:

Военно-Медицинская Академия им.С.М.Кирова

»о

Защита диссертации состоится » 2005 года в часов на

заседании Диссертационного совета Д 001.003.01 при ГУ Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии Российской академии медицинских наук по адресу: 125315, Москва, Балтийская ул., 8

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института

Автореферат разослан « ¿Р » ¿и 2005 года

Ученый секретарь Диссертационного совета,

кандидат медицинских наук Л.Н.Скуратовская

jum-Y

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Проблема эндометриоза в настоящее время стала предметом многочисленных научных исследований с использованием разнообразных методов: клинических, эпидемиологических, гормональных, иммунологических, морфологических и др. Тем не менее, патогенез эндометриоза остается, во многом неясен. Существует множество теорий возникновения эндометриоза, но ни одна из них не дает точного объяснения причины возникновения данного заболевания и механизма его развития. Решению этого вопроса могло бы способствовать исследование экспериментального эндометриоза у животных (Cummings A.M., Metealf J.L.. 1995: Ishikawa N.. 1995; Sakura Y. et al„ 1990; Vernon M.W.. Wilson E.A.,1985.).

Попытки хирургически индуцировать заболевание у крыс путем аутотрансплантации эндометриальной или маточной ткани на брюшину привели к созданию модели для изучения патофизиологических свойств эндометриоза (Vernon M.W., Wilson Е.А., 1985). Авторами описывается несколько хирургических технологий: подшивание 4-х участков матки в брюшной полости, маточный просветиый лаваж в брюшную полость, эндометриальные соскобы. свободно помещенные в брюшную полость.

Основным методом для подтверждения жизнеспособности эндометриоидных эктопий является морфологический. Имплантаты представляли собой элипсоидные пузырчатые структуры, состоящие из эндометриальных желез и стромы (Vernon M.W., Wilson Е.А., 1985) или кистозноподобные структуры, появляющиеся через 3 недели после хирургического вмешательства (Cummings A.M., Metealf J.L., 1995).

Одни авторы отмечали, что животные с экспериментально индуцированным эндометриозом были фертильны, и количество эмбрионов на 10 день беременности не отличалось от контрольной группы (Rajkuraar К. et а)., 1990). Другие исследователи обнаружили уменьшение количества эмбрионов на 14 день до 28%, а рожде " до 48%

(Vernon M.W., Wilson E.A.. 1985). В эксперименте фертильность была значительно ниже у крыс с эндометриоидными повреждениями, так же наблюдалось значительное снижение оплодотворяющей способности и эмбрионального развития (Furukubo М et al., 1998). В некоторых работах по изучению моделей эндометриоза у мышей указывается на отсутствие влияния заболевания на фертильность, количество и вес плодов, длительность гестации, однако выявлена тенденция к увеличению уродств эмбрионов (Cummings A.M., Metealf J.L.. 1996).

Данные литературы свидетельствуют о повышенной функциональной, прежде всего, фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов, полученных у крыс - самок с экспериментальным эндометриозом (Matsubayashi Т. et al.. 1995). Вместе с тем, использование разными авторами различных объектов фагоцитоза препятствует сопоставлению полученных ими данных и не позволяет сделать однозначное заключение. В доступной литературе отсутствуют данные о влиянии экспериментального эндометриоза и его лечения на здоровье потомства.

Проведение исследований в данном направлении позволит существенно дополнить представление об адекватности экспериментальной модели эндометриоза, механизмах нарушений фертильности, роли изменений фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов.

Цель исследования - установить закономерности нарушений репродуктивной функции, фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов и развития потомства у белых крыс с экспериментальным эндометриозом, определиib влияние экспериментального хирургического лечения.

Задачи исследования:

1. Дать функционально-морфологическую характеристику модели экспериментального эндометриоза у крыс.

2. Оценить репродуктивную функцию и развитие потомства белых крыс с экспериментальным эндометриозом.

3. Определить изменения фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов у крыс с экспериментальным эндометриозом.

4. Провести сравнительную характеристику различных методов хирургического лечения экспериментального эндометриоза Научная новизна.

- Впервые проведено исследование клеточного состава перитонеальной полости и фагоцитарной активности макрофагов у крыс с экспериментальным эндометриозом в разные фазы эстрального цикла. Отмечено увеличение общей клеточности перитонеальной жидкости и числа перитонеальных макрофагов, усиление их адгезивной и фагоцитарной активности. Установлено, что усиленная функциональная активность перитонеальных макрофагов при экспериментальном энлометриозе сохраняется во все фазы эстрального цикла.

- Выявлены особенности репродуктивной функции и состояния потомства у животных в различных экспериментальных группах. Установлено, что у крыс с экспериментальным эндометриозом нарушена фертильность, что проявляется увеличением длительности эстрального цикла за счет диэструса и увеличением латентного периода наступления беременности. При экспериментальном эндометриозе уменьшается число крысят в помете, снижается масса тела потомства, замедляется развитие нервно-мышечной системы, нарушаются показатели, характеризующие развитие системы крови.

Доказано, что наиболее эффективным хирургическим способом лечения эндометриоза является иссечение эндометриоидных очагов. Это подтверждается более полным восстановлением показателей клеточного состава и функциональной активности перитонеальных макрофагов.

Теоретическое и практическое значение работы заключается в доказательстве адекватности экспериментальной модели эндометриоза. Это подтверждается сходством морфологической картины, изменений репродуктивной функции, клеточного состава перитонеальной жидкости и функциональной активности перитонеальных макрофагов. Доказано сходство изменений функциональной активности макрофагов у женщин и крыс с экспериментальным эндометриозом. Изучены морфологические изменения имплантатов в динамике развития экспериментального эндометриоза. Обоснована возможность использования крыс с экспериментальным эндометриозом для разработки методов экспериментальной терапии этого заболевания.

Положения, выносимые на защиту:

1. Экспериментальный эндометриоз сопровождается повышением фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов, нарушениями эстрального цикла, зачатия и развития потомства.

2. Хирургическое иссечение эндометриоидных гетеротопий у крыс с экспериментальным эндометриозом приводит к восстановлению фертильности и предупреждает нарушения развития потомства.

Апробация и внедрение материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XIX Съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, сентябрь 2004); на итоговых конференциях научного общества студентов и молодых ученых ИГМА в рамках Недели науки - 1998, 1999, 2000, 2001, 2002, 2003, 2004.

По материалам исследования опубликовано 8 работ, пять из которых в центральной печати. Основные научные результаты полностью отражены в опубликованных работах.

Предложен алгоритм гистологического исследования передней брюшной стенки с хирургически индуцированным эндометриозом у крыс (рационализаторское предложение №2307 от 14.12.2000г. «Способ диагностики жизнеспособности трансплантата эндометриоидной ткани при хирургически индуцированном эндометриозе у крыс».)

Результаты работы внедрены в практику работы научно-исследовательского центра ГОУ ВГ10 ИвГМА Росздрава (Акт о внедрении предложений «Экспериментальная модель эндометриоза у крыс» от 17 апреля 2000г.; «Способ диагностики жизнеспособности трансплантата эндометриоидной ткани при хирургически индуцированном эндометриозе у крыс» от 22 апреля 2005г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация выполнена на 132 страницах машинописного текста, содержит введение, обзор литературы, 3 главы собственных исследований, заключение, выводы. Библиографический указатель включает 158 источников: 50 отечественных и 108 зарубежных. Работа иллюстрирована 21 таблицей и 22 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты выполнены на 174 крысах-самках и 178 крысятах в возрасте 2 и 15 дней жизни. Животные содержались в условиях вивария на стандартном рационе питания, имели свободный доступ к воде.

Для разработки и морфологического подтверждения адекватности модели эндометриоза использовано 30 крыс: у 24 из них воспроизведение заболевания осуществляли путем подшивания фрагментов маточного рога к внутренней поверхности брюшной стенки, у 6 - путем свободного помещения этих фрагментов в брюшную полость. Забор материала, его

макроскопическое и гистологическое исследование проводили через 3, 6, 9 или 12 недель после операции.

Для изучения показателей репродуктивной функции и фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов использовано 40 крыс, которые были разделены на 2 группы: контрольная - (п=20) и животные с экспериментальным эндометриозом (п=20). В каждой группе забор материала осуществляли в разные фазы эстрального цикла (по 5 животных на каждый срок наблюдения).

Для сравнительной оценки эффективности методов лечения при экспериментальном эндометриозе использовано 20 крыс, коюрые были разделены на 4 группы: контрольная - (п=5), животные с экспериментальным шдометриозом. пролеченные путем иссечения эндометриоидного фрагмента (п=5), животные с экспериментальным эндометриозом, пролеченные путем коагуляции эндометриоидного очага (п = 5) и крысы с эндометриозом без лечения (п~5). В каждой группе проводилась оценка клеточного состава перитонеальной полости и функционального состояния перитонеальных макрофагов до воспроизведения экспериментального эндометриоза, перед лечением (через 3 недели) и после лечения (через 3 недели).

При изучении продолжительности эстрального цикла у крыс-самок с экспериментальным эндометриозом было использовано 30 крыс, впоследствии проводилось изучение особенностей развития нервно -мышечной системы у крысят на2и 15дни жизни (п=41).

Для изучения эффективности хирургического лечения экспериментального эндометриоза использовано 24 крысы, которые были разделены на 2 группы: животные с экспериментальным эндометриозом, пролеченные путем иссечения эндометриоидного фрагмента (п=12). животные с экспериментальным эндометриозом без лечения (п=12). В каждой группе проводилась оценка клеточного состава перитонеальной полости и функционального состояния перитонеальных макрофагов до воспроизведения экспериментального эндометриоза и перед лечением (через

3 недели). Через 6 недель после начала эксперимента мьг изучали состояние репродуктивной функции у крыс: частоту наступления беременности, продолжительность беременности, количество крысят и состояние их нервно-мышечной системы на 2-й и 15-й дни жизни (п=66).

Для изучения состояния потомства белых крыс после лечения экспериментального эндометриоза было использовано 30 крыс-самок. Животные были разделены на 3 группы: крысы с экспериментальным эндометриозом без лечения (п=10); крысы с экспериментальным эндометриозом. пролеченные путем иссечения эндометриоидных очагов (п=10); и ложнооперированные животные (п=10). Через 6 недель после начала эксперимента была произведена подсадка самцов к крысам исследуемых групп в стандартном соотношении (1:6). В последующем мы проводили оценку состояния крысят на 2 и 15 дни жизни (п=71). В ходе опыта определялось: количество рожденных крысят, их масса и масса органов (селезенки, печени, сердца, головного мозга и почек). Изучались гематологические показатели крысят: концентрация эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, I емаюкрит. Оценивалась эффективность эритропоэза у животных, так же анализировали клеточный состав лейкоцитарной формулы. Были проведены тесты, оценивающие уровень нервно-мышечного развития: на 2-Й день жизни - переворот со спины, реакция на наклонной плоскости и вращающейся платформе; на 15-й день жизни - время удержания на перекладине турничка и реакция на наклонной плоскости (Серова Л.В. и др., 1988).

Перед оперативным вмешательством анестезия крыс проводилась подкожным введением этаминала натрия в дозе 50 мг/кг.

Ход операции: после обработки передней брюшной стенки производили послойный срединный разрез. Проводили ревизию брюшной полости. Далее выделяли левый рог матки, (Эакига, 1990), производили перевязку сосудов брыжейки маточного рога. Рог матки рассекали на фрагменты размером 2 мм. В одной группе крыс фрагмен! маточного рога

подшивали кетгутом на внутреннюю поверхность передней брюшной стенки таким образом, чтобы эндометрий был обращен в брюшную полость. В другой группе крыс фрагменты эндометрия свободно помещали в каудальные отделы брюшной полости. Ложнооперированным крысам производилось удаление левого маточного рога (контрольная группа).

При хирургическом вмешательстве использовались не рассасывающиеся кетгутовые нити PROLENE, фирмы ETHICON, содержащие Polyprophylene Monofilament, Non-Absobable Suture (Belgium '

Manufacturer, Jonson and Jonson).

Через 3, 6, 9 и 12 недель после операции у крыс под нембуталовым наркозом вскрывали брюшную полость. Выявляли, измеряли и описывали очаги экспериментального эндометриоза. Забор материала для гистологического исследования осуществляли путем иссечения фрагментов передней брюшной стенки с имплантатом. Материал фиксировали в нейтральном формалине, обезвоживали и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

Для оценки репродуктивной функции у крыс исследовали длительность эстрального цикла и его фаз. С этой целью у крыс в утренние часы при помощи пипетки и физиологического раствора получали влагалищные мазки, которые исследовали после окраски по Романовскому. О фазе цикла судили по соотношению различных типов клеток в мазке <Дыбан А.П. и др., 1975).

Для исследования клеточного состава перитонеальной полости крысам внугрибрюшинно вводили 10 мл стерильной среды 199. Через 3-5 минут под '

наркозом вскрывали брюшную полость и осуществляли забор содержимого. Мазки, готовили из клеточного осадка, полученного при центрифугировании 1 мл жидкости при 1500 оборотов в минуту. Мазки фиксировали в абсолютном метаноле и окрашивали азур-П-эозином по Романовскому. В препаратах подсчитывали количество макрофагов, мо.юцитополобных клеток, лимфоцитов, нейтрофильных и эозинофильных гранулоцитов. тучных клеток.

Общую клеточность перитонеальной жидкости определяли путем подсчета числа ядросодержащих клеток в камере Горяева.

Для оценки фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов осуществляли их кратковременное культивирование в присутствии аутологичных эригроцитов (МаШоуаш В., 1987). Культивирование макрофагов проводилось через 3 недели после операции как у крыс-самок с экспериментальным эндометриозом. так и у контрольных ложнооперированных. Процедура исследования включала следующие этапы:

1. Забор крови из подъязычной вены с использованием гепарина; приготавливали разведение 1:100 (0.1 мл крови и 10 мл среды 199);

2. Введение в брюшную полость 10 мл среды 199, через 2-3 минуты проведение лапаротомии и забор перитонеальной жидкости в пластиковую пробирку;

3. Инкубация макрофагов на стекле при температуре 37 в течение 15 мин.;

4. Промывание средой 199 для удаления неадгезированных макрофагов;

5. Внесение в культуру суспензии эритроцитов с последующей инкубацией в течение 60 минут:

6. Повторное промывание средой 199 для удаления неадгезированных эритроцитов;

Затем часть препаратов подвергали осмотическому шоку в гипотоническом растворе среды 199 для удаления нефагоцитированных эритроцитов. Препараты, после осмотического шока обрабатывали бензидиновым реактивом для выявления внутриклеточных гемоглобинсодержащих включений.

Препараты фиксировали в 1%-ном растворе глютарового альдегида (Пика, Швейцария) в среде 199 в течение 24 часов. Осуществляли окраску препаратов по Романовскому.

При исследовании препаратов осуществляли дифференцированный подсчет макрофагов с выделением следующих функциональных типов клеток:

• неадгезирующие макрофаги;

• макрофаги, адгезирующие 1-2 эритроцитов;

• макрофаги, адгезирующие 3-5 эритроцитов;

• макрофаги, адгезирующие 6-8 эритроцитов;

• макрофаги, адгезирующие 8 и более >ритроциюв;

В препаратах, подвергнутых осмотическому шоку и обработанных бензидиновым реактивом, выявляли:

• нефагоцитируюшие макрофаги;

• макрофаги с фагосомами;

• макрофаги с гемоглобинсодержащими включениями;

Крысам-самкам проводилось следующее лечение: иссечение эндометриоидного очага в пределах видимой здоровой ткани с последующим ушиванием дефекта узловыми кетгутовыми швами и диагермокоагуляция эндометриоидного очага в пределах видимой здоровой 1кани с помощью электроприбора ЭБД - 25/220 " Контур " при мощности 25 В г., температуре насадки 190°С в течение 5-10 секунд.

Для получения живожых с датированным сроком беременности использовался метод вагинальных мазков (Дыбан А.П. и др., 1975). Путем ежедневного исследования вагинальных мазков интактных крыс - самок из стада отбирались животные с фазой эстрального цикла проэструс или ранний эструс. Самок на данной фазе эстрального цикла помещали в одну клетку с самцами (4 самки и 1 самец). Каждое утро производился анализ микроскопического содержимого вагинальных мазков на наличие сперматозоидов. Сперматозоиды выявляли в неокрашенных препаратах с помощью светового микроскопа под малым увеличением. День обнаружения сперматозоидов в вагинальном мазке считался первым днем беременности.

Для оценки состояния эритроцитарной системы потомства использовались следующие группы методов.

1) Исследование эритроцитарного состава периферической крови:

- определение концентрации эритроцитов;

- определение концентрации гемоглобина;

- определение показателя гематокрита.

3) Оценка состояния эритропоэза:

- определение содержания ретикулоцитов в периферической крови;

- определение содержания оксифильных нормоцитов в периферической крови;

- определение содержания эритроидных клеток в органах кроветворения (печень, селезенка):

Концентрацию эритроцитов в крови определяли стандартным способом в камере Горяева: подсчитывали на малом увеличении количество эритроцитов в 5-ти больших квадратах. Определение концентрации гемоглобина производили унифицированным гемоглобинцианидным методом с использованием гемоглобинометра ГФ - Ц - 04. В качестве контроля использовали раствор гемоглобинцианида («Reanal», Hungary). Гематокрит измеряли путем центрифугирования крови в гепаринизированных капиллярах («Medata АВ», Sweden) на микроцентрифуге МЦГ - 8 при частоте вращения 8000 об/мин в течение 6 минут.

Для оценки состояния эритропоэза подсчитывали количество ретикулоцитов на 1000 эритроцитов в мазках крови, суправитально окрашенных бриллианткрезилблау.

Количество оксифильных нормоцитов определяли на 100 лейкоцитов в мазках крови, окрашенных азур-П-эозином по Романовскому.

Исследование эритроидного ростка кроветворных органов производили путем определения процентного содержания эритроидных клеток в мазках-отпечатках печени и селезенки. Мазки высушивали на воздухе и

фиксировали в абсолютном метаноле в течение 5 минут. После этого проводили бензидиновую реакцию на внутриклеточный гемоглобин с целью обнаружения эритроидных клеток (Хейхоу Ф.Г. Дж., Кваглино Д.. 1983). Мазки докрашивали по Романовскому. Подсчет эритроидных клеток производили на 200 ядросодержащих клеток и выражали в процентах.

Использование в эксперименте крысят в возрасте 2 и 15 дней после рождения связано с важностью этого периода жизни в становлении эритроцитарной системы. В этот период онтогенетического развития происходит смена мсста и типа кроветворения, изменяется интенсивность эритропоэза (Дыгай А.М. и др.. 1989; Горожанин J1.C., Назаров С.Б., 1993), наблюдаются критические периоды развития эритрона у крыс (Назаров С.Б., 1995). Физиологические особенности организма крысят в исследуемый период соответствуют таковым у детей первого года жизни (Махинько В.И.. Никитин В.Н., 1975).

Исследование уровня развития нервно-мышечной системы проводили у крысят в возрасте 2 и 15 дней после рождения. Для оценки состояния вестибулярной функции у крысят на 2-й день жизни использовали три теста: переворот со спины, способность совершать переворот против гравитационных сил на наклонной плоскости (-20°) и тест на вращающейся платформе (Серова Л.В. и др., 1988).

У крысят на 15-й день жизни оценка функционального состояния вестибулярного аппарата проводилась аналогичным образом, за исключением теста на вращающейся платформе. Отказ от использования этого теста обусловлен тем, что к этому времени у животных происходит открытие глаз, и их реакция на вращение может корректироваться зрением. Физическую работоспособность определяли по времени удержания на перекладине турничка (Серова J1.B. и др., 1988).

Все тесты проводились в инкубаторе, в котором поддерживалась температура 30 - 32°С.

Полученные экспериментальные данные накапливали, группировали и подвергали статистической обработке в электронных таблицах «Microsoft Excel 2000» с использованием методов вариационного анализа. Сравнение средних производилось с использованием встроенных функций «Microsoft Excel» для расчета t - критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведенного сравнительного анализа двух способов моделирования эндометриоза установлено, что свободно помещенные в брюшную полость фрагменты эндометриальной ткани подвергаются резорбции. Это связано с отсутствием врастания кровеносных сосудов из окружающей ткани по направлению к фрагментам эндометрия.

Доказано, что наиболее адекватной моделью экспериментального эндометриоза является аутотрансплантация фрагментов эндометрия на брюшину передней брюшной стенки с фиксацией шовным материалом. Изучены морфологические изменения имплантагов в динамике развития экспериментального эндометриоза. В результате проведенного г истологического исследования срезов ткани передней брюшной стенки был подтвержден диагноз наружного генитального эндометриоза по наличию жизнеспособных эндометриоидных клеток. Жизнеспособность клеток исследуемых объектов определялась по состоянию ядер: целостности кариолеммы, четкости определения хроматина и ядрышка, отсутствия признаков кариолизиса и кариопикноза. Кроме того, учитывалось состояние цитоплазмы и цитолеммы. Выделено 3 вида кист в зависимости от типа эпителия: стромальные, эпителиальные и смешанные. Обнаружено, что циклические изменения, происходящие в эндометриоидной кисте, зависят от фазы эстрального цикла. Так в фазу эструса и метэструса полость эндометриоидной кисты выстлана преимущественно цилиндрическим эпителием, а в фазу диэструса и проэструса доминирует плоский эпителий. Установлено, что чем больше срок существования кисты, тем более

выражена ее стенка и усиливается прорастание кровеносных сосудов в ее структуру, что также свидетельствует о ее жизнеспособности.

Для подтверждения адекватности модели экспериментального эндометриоза были сопоставлены изменения клеточного состава и фагоцитарной активности макрофагов перитонеальной жидкости у женщин с наружным генитальным эндометриозом и у крыс с экспериментальным эндометриозом. Установлено сходство изменений клеточного состава перитонеальной жидкости и функциональной активности макрофагов у женщин и крыс с эндометриозом.

При изучении продолжительности фаз эстрального цикла у крыс с экспериментальным эндометриозом выявлено увеличение

продолжительности диэструса за счет чего увеличивается продолжительность всего эстрального цикла. Это свидетельствует об уменьшении количества эстральньтх циклов, в том числе частоты эструса, во время которою происходит оплодотворение, что ведет к снижению репродуктивной функции у крыс.

При исследовании клеточного состава клеток в перитонеальной полости у крыс с экспериментальным эндометриозом отмечено увеличение числа макрофагов в 2 раза по сравнению с контрольной группой (р<0.001) за счет чего увеличивается общее количество клеток перитонеальной жидкости. Количество моноцитов: нейтрофилов и лимфоцитов достоверно не отличалось в исследуемых группах.

При исследовании функциональной активности перитонеальных макрофагов у крыс не удалось выявить каких-либо закономерных изменений по фазам эстрального цикла, что позволяет считать фагоцитарную функцию перитонеальных макрофагов относительно независимой от уровня половых гормонов и в дальнейших исследованиях изучать эти показатели без учета фаз эстрального цикла. При эндометриозе обнаружено достоверное увеличение числа макрофагов, способных к адгезии различного числа эритроцитов. Количество макрофагов с гемоглобинсодержащими

включениями было в 2 раза больше по сравнению с контролем (р<0,001), а макрофагов с фагосомами в 1,5 раза больше по сравнению с ложнооперированными животными (р<0,05). Установлено, что усиленная функциональная активность перитонеальных макрофагов у крыс с эндометриозом сохраняется во все фазы эстрального цикла.

Таким образом, в результате проведенного исследования установлено, что у крыс с экспериментальным эндометриозом прогрессивно увеличивается число клеток перитоне&чьной жидкости преимущественно за счет увеличения количества макрофагов. При данном заболевании отмечается усиление адгезивной способности и фагоци гарной активности перитонеальных макрофагов, что может являться одной из причин возникновения бесплодия при эндометриозе и сходно с изменениями, регистрируемыми у женщин, больных эндометриозом.

В результате проведенного нами исследования установлено, что у крыс с экспериментальным эндометриозом фертильность нарушена, что проявляется уменьшением частоты наступления эстральиых циклов и увеличения латентного периода наступления беременности.

Выявлено, что количество родивших крыс и среднее число крысят в помете у животных с экспериментальным эндометриозом ниже по сравнению с контрольной группой. Масса крысят на 2-й день жизни в обеих экспериментальных группах значительных отличий не имеет. К 15-му дню жизни отмечено снижение массы тела в группе потомства крыс с экспериментальным эндометриозом.

При оценке динамики изменения массы жизненно важных органов установлено, что у крысят 2-го дня жизни в обеих группах значительных изменений в массе исследуемых органов нет. Однако у крысят 15-го дня жизни в группе с экспериментальным эндометриозом наблюдается достоверное уменьшение массы селезенки (р<0.01), печени (р<0.001) и головного мозга (р<0.01) по сравнению с контрольной группой, что. возможно, является признаком задержки внутриутробного развития.

Обнаружено, что вестибулярная функция, мышечная сила и координация движений (на основании проведенных тестов) на 2-й и 15-й дни жизни у потомства крыс с экспериментальным эндометриозом снижены по сравнению с крысятами от здоровых самок.

При сравнении гематологических показателей периферической крови у потомства крыс с эксперимен гальным эндометриозом к 15-му дню жизни отмечается достоверное снижение концентрации эритроцитов и гематокрита. Выявлено торможение эритропоэза, проявляющееся снижением концен грации оксифильных нормоцитов ко 2-му дню жизни в данной группе животных. При изучении динамики изменений лейкоцитарного состава периферической крови выявлено достоверное увеличение концентрации лимфоцитов на 2-й и 15-й дни жизни - у крысят, рожденных от крыс с экспериментальным эндометриозом, что, возможно, является маркером активации иммунной системы.

Проведена сравнительная оценка двух способов лечения экспериментального эндометриоза: иссечение эндометриоидных гетерогопий и диатермокоагуляция. В результате проведенного исследования установлено, что после диатермокоагуляции эндометриоидных очагов общая клеточность перитонеальной полости увеличивалась, а содержание перитонеальных макрофагов уменьшалось. После иссечения гетеротопий общая клеточность перитонеальной полости и количество макрофагов в перитонеальной жидкости снижались, приближаясь к исходному уровню. При лечении экспериментального эндометриоза адгезивная способность и фагоцитарная активность перитонеальных макрофагов восстановились до исходного уровня как после коагуляции, так и после иссечения эндомегриоидных очаюв. Однако только после их иссечения наблюдается более полное восстановление показателей клешчного состава перитонеальной полости.

При оценке состояния крысят, рожденных матерями с хирургически пролеченным экспериментальным эндометриозом, обнаружено

восстановление фертильности, увеличение количества рожденных крысят в помете, нормализация показателей массы тела и жизненноважных органов по сравнению с потомством крыс без лечения. Установлено, что хирургическое иссечение эндометриоидных гетеротопий приводит к восстановлению показателей развития нервно-мышечной системы и системы крови у крысят на 2-й и 15-й дни жизни.

Результаты нашего исследования свидетельствуют о том, что гетеротопически расположенная ткапь эндометрия оказывает стимулирующее влияние на функциональную активность перитонеальных макрофагов, являющихся основным клеточным компонентом перитонеального микроокружения, обеспечивающего нормальную миграцию гамет и оплодотворение. Активация макрофагов влечет за собой нарушение эстрального цикла, зачатия и течения беременности. Так, при экспериментальном эндометриозе уменьшается число крысят в помете, снижается масса тела, нарушается развитие нервно-мышечной системы. Однако после хирургического иссечения эндометриоидных гетеротопий рождается здоровое потомство. Таким образом, полученные данные обосновывают целесообразность проведения хирургического лечения наружного эндометриоза перед планируемой беременностью.

ВЫВОДЫ

1. Ауто трансплантация фрагментов эндометрия на внутреннюю поверхность передней брюшной стенки является адекватной моделью экспериментального эндометриоза. Это подтверждается типичной морфологической картиной, нарушением репродуктивной функции, изменениями состава клеток в перитонеальной полости и функциональной активности перитонеальных макрофагов.

2. У крыс с экспериментальным эндометриозом нарушена фертильность, что проявляется увеличением продолжительности эстрального

цикла за счет диэструса и увеличением латентного периода наступления беременности. При экспериментальном эндометриоэе уменьшается число крысят в помете, снижается масса тела потомства, замедляется развитие нервно-мышечной системы, нарушаются показатели, характеризующие развитие системы крови.

3. У крыс с экспериментальным эндометриозом наблюдается увеличение числа перитонеальных макрофагов и усиление их адгезивной и фагоцитарной активности. Усиленная функциональная активность перишнеальных макрофагов при экспериментальном эндометриозе сохраняется во все фазы эстрального цикла.

4. Иссечение эндометриоидных очагов является более эффективным хирургическим способом лечения эндометриоза по сравнению с диатермокоагуляцией. Это подтверждается более полным восстановлением показателей клеточного состава перитонеальной полости и функциональной активности перитонеальных макрофагов.

5. После хирургического иссечения эндометриоидных гетеротопий у крыс с экспериментальным эндометриозом наблюдается восстановление фертильности и предупреждение нарушений развития потомства. Полученные экспериментальные данные обосновывают целесообразность проведения хирургического лечения наружного эндометриоза перед планируемой беременностью.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Посисеева Л.В., Назарова А.О., Шарабанова И.Ю., Падкин А.Л., Назаров С.Б. Эндометриоз: клинико-экспериментальные сопоставления // Проблемы репродукции. - 2001. - Т.7, №4. - С.27-30.

2. Шарабанова И.Ю.. Назарова А.О. Функциональное состояние перитонеальных макрофагов у белых крыс с экспериментальным эндометриозом // Здравоохранение Башкортостана. - 2001.- №8. - С.59-61.

3. Шарабанова И.Ю., Назарова А.О. Морфофункциональные изменения при экспериментальном эндометриозе // Материалы III региональной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов, посвященной 10-летию технического института (филиала) Якутского государственного университета им. М.К. Амосова в г. Нерюнгри. - 2002. -С.177-180.

4. Назарова А.О., Алексинская F..C.. Шарабанова И.Ю., Посисеева Л.В., Назаров С.Б. Функциональная активность перитонеальных макрофагов при разных способах хирургического лечения экспериментально!о эндометриоза у крыс // Проблемы репродукции. - 2003. - Т.9, №2. - С. 19-21.

5. Шарабанова И.Ю., Назарова А.О.. Палкин АЛ., Назаров С.Б. Показатели »стрального цикла и фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов у крыс с экспериментальным эндометриозом // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2003.-№ 2.- С.11-12.

6. Шарабанова И.Ю., Назарова А.О., Палкин А.Л., Назаров С.Б. Гистологическая характеристика моделей экспериментального эндометриоза у белых крыс // Вестник Ивановской Медицинской Академии. - Иваново, 2002.-Т.7, №1-2.-С.37-39.

7. Назарова А.О., Валькова A.B.. Шарабанова И.Ю., Посисеева Л.В., Назаров С.Б. Состояние клеточных компонентов перитонеального микроокружения у крыс с экспериментальным эндометриозом и эффективность хирургического лечения // Проблемы репродукции. - 2004,-Т.10, №3. - С.12-15.

8. Назаров С.Б., Назарова А.О., Шарабанова И.Ю. Оценка клеточных компонентов перитонеального микроокружения и фертильности крыс с эндометриозом // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. -2004. - Т. 90, №8. - С. 154-155.

Формат бумаги 90x84 1/16 Печать плоская

Тираж 100 экэ Заказ 0167

Опечатано в ООО «ПолиПринт» России, 153032, г Иваново, ул Станкостроителей 12, офис 3 Тел (0932)29-48-35

¡44469

РНБ Русский фонд

2006-4 10334

Оглавление диссертации Шарабанова, Ирина Юрьевна :: 2005 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ПАТОГЕНЕЗ НАРУШЕНИЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ

ПРИ НАРУЖНОМ ЭНДОМЕТРИОЗЕ (обзор литературы).

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА МОДЕЛИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА.

3.1. Состояние эндометриоидной ткани при хирургически индуцированном эндометриозе у крыс.

3.2. Показатели эстрального цикла.

3.3. Клеточный состав перитонеальной полости.

3.4. Фагоцитарная активность макрофагов in vitro.

3.5. Резюме.

ГЛАВА 4. ОЦЕНКА РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ И СОСТОЯНИЯ ПОТОМСТВА БЕЛЫХ КРЫС С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ЭНДОМЕТРИОЗОМ.

4.1. Оценка фертильности и продолжительности беременности у ложнооперированных крыс и крыс с экспериментальным эндометриозом.

4.2. Динамика массы тела и жизненно важных органов у крысят в различных экспериментальных группах.

4.3. Уровень развития нервно-мышечной системы у крысят.

4.4. Оценка гематологических показателей у новорожденных крысят.

4.5. Резюме.

ГЛАВА 5. ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ МАКРОФАГОВ И СОСТОЯНИЕ ЗДОРОВЬЯ ПОТОМСТВА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБАХ ЛЕЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА.

5.1. Клеточный состав перитонеальной жидкости и функциональная активность перитонеальных макрофагов у крыс при различных способах лечения экспериментального эндометриоза.

5.2.Оценка состояния крысят, рожденных матерями с экспериментальным эндометриозом после хирургического иссечения эндометриоидных очагов.

5.3. Резюме.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Шарабанова, Ирина Юрьевна, автореферат

Актуальность работы. Проблема эндометриоза в настоящее время стала предметом многочисленных научных исследований с использованием разнообразных методов: клинических, эпидемиологических, гормональных, иммунологических, морфологических и др. Тем не менее, патогенез эндометриоза остается, во многом неясен. Существует множество теорий возникновения эндометриоза, но пи одна из них не дает точного объяснения причины возникновения данного заболевания и механизма его развития. Решению этого вопроса могло бы способствовать исследование экспериментального эндометриоза у животных (Cummings A.M., Metcalf J.L., 1995; IshikawaN., 1995; Sakura Y. et al., 1990; Vernon M.W., Wilson E.A., 1985.).

Попытки хирургически индуцировать заболевание у крыс путем аутотрансплантации эндометриальпой или маточной ткани на брюшину привели к созданию модели для изучения патофизиологических свойств эндометриоза (Vernon M.W., Wilson Е.А., 1985). Авторами описывается несколько хирургических технологий: подшивание 4-х участков матки в брюшной полости, маточный просветный лаваж в брюшную полость, эндометриальные соскобы, свободно помещенные в брюшную полость.

Одни авторы отмечали, что животные с экспериментально индуцированным эндометриозом были фертильны, и количество эмбрионов на 10 день беременности не отличалось от контрольной группы (Rajkumar К. et al., 1990). Другие исследователи обнаружили уменьшение количества эмбрионов на 14 день до 28%, а рожденных в срок детенышей до 48% (Vernon

M.W., Wilson E.A., 1985). В эксперименте in vitro фертильность была значительно ниже у крыс с эндометриоидными повреждениями, при введении этим животным перитонеальной жидкости в низких концентрациях от крыс с такими же эктопическими очагами наблюдалось значительное снижение оплодотворяющей способности и эмбрионального развития (Furukubo М. et al., 1998). В некоторых работах по изучению моделей эндометриоза у мышей указывается на отсутствие влияния заболевания на фертильность, количество и вес плодов, длительность гестации, однако выявлена тенденция к увеличению уродств эмбрионов (Cummings A.M., Metcalf J.L., 1996).

Данные литературы свидетельствуют о повышенной функциональной, прежде всего, фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов, полученных у крыс — самок с экспериментальным эндометриозом (Matsubayashi Т. et al., 1995). Вместе с тем, использование разными авторами различных объектов фагоцитоза препятствует сопоставлению полученных ими данных и не позволяет сделать однозначное заключение. В доступной литературе отсутствуют данные о влиянии экспериментального эндометриоза и его лечения на здоровье потомства.

Цель исследования: установить закономерности нарушений репродуктивной функции, фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов и развития потомства у белых крыс с экспериментальным эндометриозом, определить влияние экспериментального хирургического лечения.

Задачи исследования

1. Дать функционально-морфологическую характеристику модели экспериментального эндометриоза у крыс.

2. Оценить репродуктивную функцию и развитие потомства белых крыс с экспериментальным эндометриозом.

4. Провести сравнительную характеристику различных методов хирургического лечения экспериментального эндометриоза.

Научная новизна.

- Впервые проведено исследование клеточного состава перитонеальной полости и фагоцитарной активности макрофагов у крыс с экспериментальным эндометриозом в разные фазы эстрального цикла. Отмечено увеличение общей клеточности перитонеальной жидкости и числа перитонеальных макрофагов, усиление их адгезивной и фагоцитарной активности. Установлено, что усиленная функциональная активность перитонеальных макрофагов при экспериментальном эндометриозе сохраняется во все фазы эстрального цикла.

- При сравнении различных методов лечения экспериментального эндометриоза установлено влияние лечения на клеточный состав перитонеальной полости и на репродуктивную функцию животных. Доказано, что наиболее эффективным хирургическим способом лечения эндометриоза является иссечение эндометриоидных очагов. Это подтверждается более полным восстановлением показателей клеточного состава и функциональной активности перитонеальных макрофагов.

Основные положения, выносимые на защиту:

Имеется 11 печатных работ. По материалам исследования опубликовано 8 работ, пять из которых в центральной печати. Основные научные результаты полностью отражены в опубликованных работах.

Результаты работы внедрены в практику работы научно-исследовательского центра ГОУ ВПО ИвГМА Росздрава (Акт о внедрении предложений «Экспериментальная модель эндометриоза у крыс» от 17 апреля 2000г.; «Способ диагностики жизнеспособности трансплантата эндометриоидной ткани при хирургически индуцированном эндометриозе у крыс» от 22 апреля 2005г.).

Заключение диссертационного исследования на тему "Репродуктивная функция и состояние перитонеальных макрофагов белых крыс с экспериментальным эндометриозом"

ВЫВОДЫ

1. Аутотрансплантация фрагментов эндометрия на внутреннюю поверхность передней брюшной стенки является адекватной моделью экспериментального эндометриоза. Это подтверждается типичной морфологической картиной, нарушением репродуктивной функции, изменениями состава клеток в перитонеальной полости и функциональной активности перитонеальных макрофагов.

2. У крыс с экспериментальным эндометриозом нарушена фертильность, что проявляется увеличением продолжительности эстрального цикла за счет диэструса и увеличением латентного периода наступления беременности. При экспериментальном эндометриозе уменьшается число крысят в помете, снижается масса тела потомства, замедляется развитие нервно-мышечной системы, нарушаются показатели, характеризующие развитие системы крови.

3. У крыс с экспериментальным эндометриозом наблюдается увеличение числа перитонеальных макрофагов и усиление их адгезивной и фагоцитарной активности. Усиленная функциональная активность перитонеальных макрофагов при экспериментальном эндометриозе сохраняется во все фазы эстрального цикла.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Этиология и патогенез эндометриоза до настоящего времени остаются, во многом неясными. На основании анализа современных взглядов на вопросы возникновения эндометриоза можно сделать заключение о полиэтиологичности данного заболевания, при котором в патологический процесс включаются многие системы организма. До настоящего времени исследования продолжаются, и мы пока можем согласиться с J. Chalmers, который еще в 1975 г. назвал эндометриоз таинственным заболеванием. Существуют различные теории возникновения эндометриоза, но ни одна из них не дает точного объяснения причины возникновения данного заболевания и механизма его развития. Вместе с тем, контролируемое изучение эндометриоза у женщин ограничено, так как невозможно многократно повторять инвазивные хирургические вмешательства для анализа динамики процесса. Перспективно изучение этого заболевания на модели у животных (Cummings A.M., Metcalf J.L., 1995; Ishikawa N., 1995; Sakura Y. et al., 1990; Vernon M.W., Wilson E.A.,1985.). Существует несколько способов экспериментального индуцирования эндометриоза.

Для подтверждения адекватности модели экспериментального эндометриоза мы провели сравнение двух методов моделирования эндометриоза у крыс. В результате проведенного эксперимента установлено, что свободно помещенные в брюшную полость фрагменты маточного рога не приживались и подвергались резорбции. Это связано с отсутствием врастания кровеносных сосудов из окружающей ткани по направлению к фрагментам эндометрия.

Доказано, что наиболее адекватной моделью экспериментального эндометриоза является аутотрансплантация фрагментов эндометрия на брюшину передней брюшной стенки. Изучены морфологические изменения имплантатов в динамике развития экспериментального эндометриоза. В результате проведенного гистологического исследования срезов ткани передней брюшной стенки был подтвержден диагноз наружного генитального эндометриоза при наличии жизнеспособных эндометриоидных клеток. Жизнеспособность клеток исследуемых объектов определялась по состоянию ядер: целостности кариолеммы, четкости определения хроматина и ядрышка, отсутствия признаков кариолизиса и кариопикноза. Кроме того, учитывалось состояние цитоплазмы и цитолеммы. Выделено 3 вида кист в зависимости от типа эпителия: стромальные, эпителиальные и смешанные. Обнаружено, что циклические изменения, происходящие в эндометриоидной кисте, зависят от фазы эстрального цикла. Так в фазу эструса и метэструса полость эндометриоидной кисты выстлана преимущественно цилиндрическим эпителием, а в фазу диэструса и проэструса доминирует плоский эпителий. Установлено, что чем больше срок существования кисты, тем более выражена ее стенка и усиливается прорастание кровеносных сосудов в ее структуру, что также свидетельствует о ее жизнеспособности.

Для подтверждения адекватности модели экспериментального эндометриоза были сопоставлены изменения клеточного состава и фагоцитарной активности макрофагов перитонеальной жидкости у женщин с наружным генитальным эндометриозом и у крыс с экспериментальным эндометриозом (Посисеева JI.B. и др., 2001). Установлено сходство изменений клеточного состава перитонеальной жидкости и функциональной активности макрофагов у женщин и крыс с эндометриозом.

Отмечено увеличение общего количества клеток в перитонеальной полости и числа макрофагов у крыс с экспериментальным эндометриозом по сравнению с контрольной группой. Эти результаты соответствуют данным, полученным при исследовании клеточного состава перитонеальной жидкости у женщин.

При исследовании фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов у крыс с экспериментальным эндометриозом выявлено значительное ее усиление. Обнаружено увеличение числа макрофагов, способных к адгезии различного числа эритроцитов и макрофагов, фагоцитирующих эритроциты. Установлено, что усиленная фагоцитарная активность перитонеальных макрофагов у крыс с эндометриозом сохраняется во все фазы эстрального цикла. Аналогичные данные были получены при изучении функциональной активности перитонеальных макрофагов у женщин с эндометриозом. Обнаружено усиление фагоцитарной активности по отношению к гетерологичным сперматозоидам и аутологичным эритроцитам.

До настоящего времени дискуссии о причинах бесплодия при эндометриозе продолжаются. Многие исследователи не могут установить основные причины бесплодия при эндометриозе. Однако многокомпонентность механизма развития бесплодия не вызывает сомнения. Большое внимание уделяется изменению состава, перитонеальной жидкости. Было доказано повышение количества активных макрофагов в перитонеальной жидкости, способных к поглощению сперматозоидов с последующей их деградацией (Muscato J.J. et al., 1982). Доказанное многими исследователями повышенное содержание биологически активных факторов в перитонеальной жидкости приводит к ингибированию репродуктивных процессов, включая: нарушение роста и созревание фолликула, функции желтого тела, подвижности сперматозоидов, процесса оплодотворения, функции маточных труб, имплантации и развития эмбриона (Pittway D.E., Fayez J.А., 1986).

Нами развита концепция роли клеточных компонентов перитонеального микроокружения в нарушении репродуктивной функции (Назарова А.О., 1998). При исследовании клеточного состава в перитонеальной полости у крыс с экспериментальным эндометриозом обращает на себя внимание увеличение количества макрофагов в 2,3 раза по сравнению с контролем. Также отмечается увеличение числа нейтрофилов в 2 раза. Общее количество клеток в перитонеальной жидкости у крыс с экспериментальным эндометриозом увеличивается в 1,5 раза, по сравнению с контролем. Увеличение числа макрофагов в перитонеальной жидкости у крыс с эндометриозом выявлено во все фазы эстрального цикла.

В результате проведения краткосрочного культивирования перитонеальных макрофагов изучалась их способность к адгезии эритроцитов, а также оценивалась фагоцитарная активность макрофагов. При изучении способности макрофагов адгезировать эритроциты выявлено увеличение числа макрофагов, адгезирующих различное число клеток. Исследование фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов у крыс с экспериментальным эндометриозом показало ее значительное усиление. Так, в группе крыс с эндометриозом в сравнении со здоровыми наблюдается увеличение числа макрофагов, фагоцитирующих эритроциты: число макрофагов с фагосомами в 1,2 раза больше по сравнению с контрольной группой (р<0,05), количество макрофагов с гемоглобинсодержащими включениями в 2 раза больше по сравнению со здоровыми крысами (р< 0,001). Усиленная функциональная активность перитонеальных макрофагов при экспериментальном эндометриозе сохраняется во все фазы эстрального цикла, что позволяет считать их функциональную активность относительно независимой от уровня половых гормонов.

Таким образом, в результате проведенного исследования установлено, что у крыс с экспериментальным эндометриозом прогрессивно увеличивается число клеток перитонеальной жидкости преимущественно за счет увеличения количества макрофагов. При данном заболевании отмечается усиление адгезивной способности и фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов, что может являться одной из причин возникновения бесплодия при эндометриозе и сходно с изменениями, регистрируемыми у женщин, больных эндометриозом.

Известно, что при эндометриозе возрастает частота бесплодия, а при наступлении беременности наблюдается уменьшение количества эмбрионов (Vernon M.W.,1990). Некоторые авторы отмечают отсутствие влияния заболевания на фертильность, количество и вес плодов, длительность гестации, но выявлена тенденция к увеличению уродств эмбрионов (Cummings A.M., Metcalf J.L.,1996). Другие исследователи выявили, что присутствие эктопической эндометриоидной ткани уменьшает количество рожденных детенышей в срок (Vernon M.W., Wilson Е.А.,1985). Таким образом, имеющиеся в литературе данные противоречивы и не дают достоверной информации о потомстве матерей с эндометриозом.

В результате проведенного нами исследования установлено, что у крыс с экспериментальным эндометриозом фертильность нарушена, что проявляется уменьшением частоты наступления эстральных циклов и увеличения латентного периода наступления беременности.

При оценке динамики изменения массы жизненно важных органов было установлено, что у крысят 2-го дня жизни в обеих группах значительных изменений в массе исследуемых органов нет. Однако у крысят 15-го дня жизни в группе с экспериментальным эндометриозом наблюдается достоверное уменьшение массы селезенки (р<0,01), печени (р<0,001) и головного мозга (р< 0,01) по сравнению с контрольной группой, что, возможно, является признаком задержки внутриутробного развития.

При сравнении гематологических показателей периферической крови у потомства крыс с экспериментальным эндометриозом к 15-му дню жизни отмечается достоверное снижение концентрации эритроцитов и гематокрита. Выявлено торможение эритропоэза, проявляющееся снижением концентрации оксифильных нормоцитов ко 2-му дню жизни в данной группе животных. При изучении динамики изменений лейкоцитарного состава периферической крови выявлено достоверное увеличение концентрации лимфоцитов на 2-й и 15-й дни жизни - у крысят, рожденных от крыс с экспериментальным эндометриозом, что, возможно, является маркером активации иммунной системы.

Относительно эффективности оперативных способов лечения эндометриоза данные литературы разноречивы. Одни авторы считают более оптимальным иссечение эндометриоидных очагов в пределах здоровых тканей (Краснопольский В.И. и др., 2000; Williams Т., Pratt J., 1977), другие полагают, что эндометриоидную ткань малого размера невозможно иссечь, и предлагают коагуляцию (Давыдов А.И., Стрижаков А.Н., 2002; Конде A.M. и др., 1987; Осадчев В.Б., 2000). При оценке эффективности различных способов лечения эндометриоза важно учитывать изменения состава и функциональной активности клеточных элементов перитонеальной жидкости. В предыдущих исследованиях была показана связь между активацией фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов и развитием бесплодия при эндометриозе у женщин (Посисеева JI.B. и др., 1999) и зависимость между этими изменениями и нарушениями эстрального цикла у крыс. Имеющиеся данные литературы не позволяют сделать однозначный вывод об эффективности оперативных способов лечения эндометриоза, учитывая изменения функциональной активности макрофагов в перитонеальной жидкости.

В результате проведенного исследования установлено, что после коагуляции эндометриоидных очагов общая клеточность перитонеальной жидкости увеличивается, а содержание перитонеальных макрофагов уменьшатся. После иссечения гетеротопий общая клеточность и количество макрофагов в перитонеальной жидкости снижаются, приближаясь к исходному уровню.

При лечении экспериментального эндометриоза адгезивная способность и фагоцитарная активность перитонеальных макрофагов восстановились до исходного уровня как после коагуляции, так и после иссечения эндометриоидных очагов.

Таким образом, клеточный состав перитонеальной жидкости изменяется как при иссечении, так и при коагуляции гетеротопий. Однако только после их иссечения наблюдается восстановление показателей перитонеальной жидкости. Полученные данные свидетельствуют, что наиболее эффективным хирургическим способом лечения эндометриоза является иссечение эндометриоидных очагов.

При исследовании эффективности хирургического лечения экспериментального эндометриоза установлено увеличение частоты наступления беременности при лечении заболевания на 20%, что можно связать с изменением функциональных свойств клеток брюшной полости, составляющих перитонеальное микроокружение, участвующее в процессах оплодотворения. Таким образом, после иссечения эндометриоидных гетерсэтопий происходит восстановление способности к зачатию.

При оценке состояния крысят, рожденных матерями с хирургически пролеченным экспериментальным эндометриозом, обнаружено восстановление фертильности, увеличение количества рожденных крысят в помете, нормализация показателей массы тела и жизненноважных органов по сравнению с потомством крыс без лечения. Установлено, что хирургическое иссечение эндометриоидных гетеротопий приводит к восстановлению показателей развития нервно-мышечной системы и системы крови у крысят на 2-й и 15-й дни жизни.

Результаты нашего исследования свидетельствуют о том, что гетеротопически расположенная ткань эндометрия оказывает стимулирующее влияние на функциональную активность перитонеальных макрофагов, являющихся основным клеточным компонентом перитонеального микроокружения, обеспечивающего нормальную миграцию гамет и оплодотворение. Активация макрофагов влечет за собой нарушение эстрального цикла, зачатия и течения беременности. Так, при экспериментальном эндометриозе уменьшается число крысят в помете, снижается масса тела, нарушается развитие нервно-мышечной системы. Однако после хирургического иссечения эндометриоидных гетеротопий рождается здоровое потомство.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об адекватности модели экспериментального эндометриоза и возможности ее использования для дальнейшего изучения морфо-функциональных нарушений при данном заболевании.

115

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Шарабанова, Ирина Юрьевна

1. Адамян Л.В. Клиника, диагностики и лечение генитального эндометриоза // Акушерство и гинекология. 1992. - № 3-7. - С.54-59.

2. Адамян Л.В. Бесплодие у больных с тяжелыми формами эндометриоза и тактика восстановительного лечения // Диагностика и лечение бесплодного брака. -М.: Медицина, 1988. С.105-111.

3. Адамян Л.В., Кулаков В.И. Эндометриозы: Руководство для врачей. М.: Медицина, 1998,- 380с.

4. Адамян Л.В., Кулаков В.И. Мынбаев О.А. Оперативная гинекология -хирургические энергии: Руководство. М.: Медицина, 2000. - 862с.

5. Адамян Л.В., Андреева Е.Н. Клинико-генетические аспекты аденомиоза // Акушерство и гинекология. 1999. - №3. - С.38-43.

6. Анциферова Ю.С. Иммунные механизмы формирования эндометриоидных гетеротопий различной локализации: Автореферат диссертации доктора медицинских наук. Иваново, 2005.- 44с.

7. Анциферова Ю.С., Сотникова Н.Ю., Посисеева Л.В., Богатова И.К. Регуляция экспрессии Fas и Fasl молекул эндометриальными стромальными клетками при эндометриозе // Медицинская иммунология. 2004. - Т.6, №35.- С.373.

8. Анциферова Ю.С., Сотникова Н.Ю., Посисеева Л.В., Брагин Б.И. Особенности системного и локального иммунного ответа у женщин с различными формами эндометриоза // Иммунология. 2003. - №4.- С.242-245.

9. Айлмазян Э.К., Селысов С.А., Ярмолинская М.И. Генитальный эндометриоз: новые подходы к терапии // Руководство для врачей. 28 с.

10. Ю.Баскаков В.П. Клиника и лечение эндометриоза. Л.: Медицина, 1990. -240с.

11. П.Баскаков В.П. Медикаментозное лечение эндометриоза // Вестник Рос. ассоц. акуш.-гинекол. 2000. - №3. - С. 121-122.

12. Бурлеев В.А., Лец Н.И. Роль брюшины в патогенезе наружно-генитального эндометриоза // Проблемы репродукции. 2001. - №1. - С.24-30.

13. Василевская JI.H., Грищенко В.И., Кобзева Н.В., Юровская В.П. Гинекология //М., Медицина, 1985. С.194-196.

14. Гаспаров А.С., Григорян К.В., Торгомян А.А., Меликян А.Г., Барабанова О.Э. и др. Использование декапептила депо в комплексной терапии эндометриоз-ассоциированного бесплодия // Гинекология. - 2001.- Т. 3, № 5.- С. 35-39.

15. Давыдов А.И., Стрижаков А.Н. Современные аспекты патогенеза генитального эндометриоза // Акушерство и гинекология. 1997. - №2.-С.44-47.

16. Давыдов А.И., Стрижаков А.Н. Эндохирургическое органосберегающее лечение больных внутренним эндометриозом тела матки в репродуктивном периоде // Акушерство и гинекология. 2002. - №.2. - С.35-38.

17. Дамиров М.М., Слюсарь Н.Н., Шабанов A.M., Сюч Н.И., Полетова Т.Н., Бабков К.В., Бойчук B.C. Применение низкоэнергетического лазерного излучения в комплексном лечении больных аденомиозом // Акушерство и гинекология. 2003. - №1. - С.34-37.

18. Дыбан А.П., Пучков В.Ф., Баранов B.C. и др. Лабораторные млекопитающие: мышь Mus musculus, крыса Rattus norvegicus, кролик Oryctolagys cuniculus, хомячок Cricetus griseous // Объекты биологического развития. М.: Наука, 1975. - С.505-566.

19. Дыгай A.M., Шахов В.П., Михленко А.В., Богдашин И.В. и др. Механизмы регуляции кроветворения при реакции стресс // Бюл. Том. науч. центра АМН СССР. Томск, 1989. - Вып.1. - С.26-35.

20. Железнов Б.И., Стрижаков А.Н. Генитальный эндометриоз. М.: Медицина, 1985. - 245с.

21. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А., Западнюк Б.В. Разведение, содержание, использование в эксперименте // Лабораторные животные. 3-е изд., перераб. и доп. - Киев: Вища школа, 1983. - 383с.

22. Ищенко А.И., Кудрина Е.А., Бороздина А.В. и др. Международный конгресс по эндометриозу с курсом эндоскопии // М., 1995. С.112-114.

23. Конде A.M., Волков Н.И., Пшеничникова Т.Я. Современные методы лечения бесплодия при малых формах эндометриоза // Акушерство и гинекология. 1987. - №.11. - С.6-9.

24. Кондриков Н.И., Адамян Л.В., Беляева Л.А. и др. Морфологические и ультраструктурные особенности эндометриоидных кист яичников // Матер, межд. конгресса. М., 1996. - С. 162-166.

25. Краснопольский В.И., Ищенко А.И., Кудрина Е.А. Принципы хирургического лечения распространенных форм генитального эндометриоза с поражением соседних органов // Акушерство и гинекология. 2000. - №.3. - С.31-35.

26. Кудрина Е.А., Ищенко А.И., Гадаева И.В., Шадыев А.Х., Коган Е.А. Молекулярно-биологические характеристики наружного генитального эндометриоза // Акушерство и гинекология. 2000. - №6 - С.24 - 27.

27. Кулаков В.И., Гаспаров А.С., Волков Н.И. Агонисты гонадолиберина: теория и практика. Материалы международного симпозиума // М., 1994. -С.62-65.

28. Кулаков В.И., Овсянникова Т.В., Шилова М.Н., Волков Н.И. Восстановление репродуктивной функции после комбинированного лечения с использованием золадекса у больных с бесплодием и миомой матки // Проблемы репродукции. 1997. - №3. - С. 34-37.

29. Лесков В.П., Гаврилова Е.Ф., Пищулин А.А. Изменения иммунной системы при внутреннем эндометриозе. Эндокринологический научный центр РАМН, Институт иммунологии Минздрава РФ, Москва. // Проблемы репродукции. М., 2002. - С.32-35.

30. Манухин И.Б., Геворкян М.А., Минкина Г.Н., и соавт. Генитальный эндометриоз. Медицинские рекомендации по гинекологии для врачей и субординаторов // М., 1996. С.3-37.

31. Махинько В.И., Никитин В.Н. Константы роста и функциональные периоды развития в постнатальной жизни белых крыс // Молекулярные и физиологические механизмы возрастного развития: Сб. научн. Работ.-Киев: Наукова Дума, 1975. С.308-326.

32. Назаров С.Б. Закономерности развития эритрона белых крыс в пренатальном и раннем постнатальном онтогенезе: Автореф. дис. на соиск. уч. степ. докт. мед. наук. М., 1995. - 42с.

33. Назарова А.О. Плацентарные белки, показатели перекисного окисления липидов и макрофагов перитонеальной жидкости у женщин с нормальной репродуктивной функцией и бесплодием в супружеских парах: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Иваново, 1998. - 24с.

34. Осадчев В.Б. Клиническое значение электрохирургической электродеструкции и электродиссекции миометрия у больных миомой матки и аденомиозом: Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 2000. 23с.

35. Пальцев М.А., Иванов А.А. Межклеточные взаимодействия. М.: Медицина, 1995. - 224с.

36. Поморцев А.В., Гудков Г.В. Гормональный профиль больных наружным генитальным эндометриозом в различные фазы менструального цикла // Акушерство и гинекология. 2002. -№1. - С.35-40.

37. Посисеева JI.B., Назарова А.О., Шарабанова И.Ю., Панкин A.JL, Назаров С.Б. Эндометриоз: клинико-экспериментальные сопоставления // Проблемы репродукции. 2001. - Т.8, № 4. - С.27-31.

38. Серова Л.В., Денисова А.А., Чельина Н.А. и др. Онтогенез млекопитающих в невесомости // Отв. ред. Газенко О.Г. М.: Наука, 1988. - 180с.

39. Сидорова И.С., Коган Е.А.,Зайратьянц О.В., Унанян А.Л., Леваков С.А. Новый взгляд на природу эндометриоза (аденомиоза) // Акушерство и гинекология. 2002. - №3. - С.32-38.

40. Сметаник В.П., Тумилович Л.Г. Неопертивная гинекология // Руководство для врачей. СПб.: СОТИС. - 1995. - 224с.

41. Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Посисеева Л.В., Соловьева Т.А., Букина Е.А. Фенотипический профиль лимфоидных клеток на системном и локальном уровне у женщин с внутренним эндометриозом // Акушерство и гинекология. 2001. - №2. - С.28 - 32.

42. Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Посисеева Л.В., Шор А.Л. Роль цитокинов перитонеальной жидкости в развитии наружного генитального эндометриоза и бесплодии, ассоциированном с эндометриозом // Акушерство и гинекология. 2003. - №5. - С.41 - 43.

43. Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Брагин Б.И. Роль иммунных факторов в формировании эндометриоидных гетеротопий различной локализации у женщин с генитальным эндометриозом // Медицинская иммунология. -2002. -Т.4,№2. -С.271.

44. Стрижаков Л.Н., Давыдов A.M. Эндометриоз // Клинические и теоретические аспекты. М., 1996. - С.206-207.

45. Томас Э. Результаты сравнительного анализа применения гестринона и даназола. Гормональная терапия эндометриоза. М., 1993. - С.70-72.

46. Филонова Л.В., Александрова Н.Н., Бруницина В.Ю., Чистякова Г.Н., Мазуров А.Д. Способ доклинической диагностики генитального эндометриоза // Российский вестник акушера-гинеколога. 2003. - №1. - С. 69-72.

47. Филонова Л.В., Александрова Н.Н., Брусницина В.Ю., Чистякова Г.Н., Мазуров А.Д. Способ доклинической диагностики генитальногоэндометриоза // Российский вестник акушера- гинеколога. 2003. - №1 -С.69 - 72.

48. Фриденштейн А.Я., Лурия Е.А. Клеточные основы кроветворного микроокружения. -М.: Медицина, 1980.- 216с.

49. Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия: Пер. с англ.-М.: Медицина, 1983. 320 с.

50. Badawy Sh.Z.A., Cuenca V., Marshal L. et al. Cellular components in peritoneal fluid in infertile patients with and without endomtnriosis // Fertil Steril. 1984. -Vol. 42, №5-6. - P. 704-708.

51. Barragan J.C., Brotons J., Ruiz J.A., Acien P. Experimentally induced endometriosis in rats: effect on fertility and the effects of pregnancy and lactation on the ectopic endometrial tissue // Fertil Steril. 1992. - Vol. 58, №6. - P. 12151219.

52. Bergqvist A., Ferno M. Oestrogen and progesterone receptors in endometriotic tissue and endometrium: Comparison of different cycle phases and ages // Hum. Reprod. 1993. - №8. - P.2211-2217.

53. Berkley K.J., Angie Cason, Heather Jacobs, Heather Bradshaw, Elizabeth Wood. Vaginal hyperalgesia in a rat model of endometriosis // Neuroscience Letter. -2001.-Vol. 306.-P.185-188.

54. Berkley K.J., Wood E., Scofield S.L., Little M. Behavioral responses to uterine or vaginal distention in the rat // Pain. 1995. - Vol.61. - P.121-131.

55. Bergquist A. Receptor mechanisms in endometriotic and endometrical tissue. Endometriosis // Advances in Reproductive Medicine. Ed. R.Schaw. 1993. - P. 53- 65.

56. Bischof P., Planas-Basset D., Meisser A., Campana A. Investigations on the cell type responsible for the endometrial secretion of complement component 3 (C3) //Hum. Reprod. 1994. - Vol.9, №9. - P. 1652-1659.

57. Birnbaum L.S., Cumming A.M. Dioxins and endometriosis: a plausible hypothesis // Environ Health Perspect. 2002 Jan.- Vol.110, №1. - P. 15-21.

58. Bradshaw H.B., Temple J.L., Wood E., Berkley K.J. Estrous variations in behavioral responses to vaginal and uterine distention in the rat // Pain. 1999. -Vol.82.-P.187-197.

59. Chegini N., Gold L.I., Williams R.S. Localization of transforming growth factor beta isoforms TGF-beta 1, TGF-beta 2, and TGF-beta 3 in surgically induced endometriosis in the rat // Obstet. Gynecol. 1994. - Vol.83, №3. - P.455-461.

60. Cummings A.M., Metcalf J.L. Effects of estrogen, progesterone, and methoxychlor on surgically induced endometriosis in rats // Fundam. Appl. Toxicol. 1995. - Vol.27, №2. - P.287-290.

61. Cummings A.M., Metcalf J.L. Effect of surgically induced endometriosis on pregnancy and effect of pregnancy and lactation on endometriosis in mice // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1996. - Vol.212, №4. - P.332-337.

62. Cummings A.M., Metcalf J.L. Induction of endometriosis in mice: a new model sensitive to estrogen // Reprod. Toxicol. 1995. - Vol.9, №3. - P.233-238.

63. Cummings A.M., Metcalf J.L., Birnbaum L. Promotion of endometriosis by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in rats and mice: time-dose dependence and species comparison // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1996. - Vol.138, №1. - P.131-139.

64. Dargenio R., Corbycci M.G., Lamanna M.A., Garcea N. Indomethacini and fertility in experimental endometriosis // Acta Eur Fertil. 1992 Mar-Apr.- Vol. 23, №2. - P.85-88.

65. Dargenio R., Golan A., Winston R.M. Experimental endometriosis and fertility: compared effects of an antigonadotropin (danazol) and an antiprostaglandin (indometacin) // Acta Eur Fertil. 1984 Jul-Aug.- Vol.15, №4. - P.257-259.

66. Demetri G.D., Zenzie B.W., Rheinwald J.G., et. al. Expression of colony-stimulating factor genes by normal human mesothelian cells and human malignant mesothelioma cell lines in vitro // Blood. 1989. -Vol. 74. - P.940-946.

67. Drake T.S., Obrein W.F., Ramwell R.W. Peritoneal fluid prostanoids in unexplained infertility // Am J Obstet Gynecol. 1983. - Vol.147, №1. - P.63-64.

68. Drudy L., Lewis SEM., Barry-Kinsella C., et. al. The influence of peritoneal fluid from patients with minimal stages or treated endometriosis on sperm motility parameters // Hum Reprod. 1994. - Vol.9. - P.2418-2423.

69. Dubuisson J.B., Chapron C., Fauconnier A., et al. Laparoscopic myomectomy fertility results // Acad. Sci. 2001. - Vol. 943. - P.269-275.

70. Furukubo M., Fujino Y., Umesaki N., Ogita S. Effects of endometrial stromal cells and peritoneal fluid on fertility associated with endometriosis // Osaka City Med. J. 1998. - Vol.44, №1. - P.43-54.

71. Garry R., Clauton R., Hawe J. The effect of endometriosis and its radical laparoscopic excision on quality of life indicators // Br. J. Obstet Gynecol. -2000.- Vol.107 (1).-P.44-54.

72. Giamberardino M.A., Devor M., Rowbotham M.C., Wiesenfeld-Halin Z. Visceral hyperalgesia, Proceeddings of the 9th World Congress on Pain, Progress in Pain Research and Management, IASP Press, Seattle. 2000. - Vol.16. -P.523-550.

73. Golan A., Dargenio R., Winston R.M. The effect of treatment on experimentally produced endometrial peritoneal implants // Fertil Steril. 1986.- Vol.46, №5.-P.954-958.

74. Halme J., Basker S., Haskill S. Altered maturation and function of peritoneal macrophages: Possible role in pathogenesis of endometriosis // Amer. J. Obstet Gynecol. 1987. - Vol.156, № 4. - P.783-789.

75. Halme J., Hammond M.G., Hulka J.F. et al. Retrograde menstruation in healthy women and in patients with endometriosis // Obstetr. Gynecol. 1984. - Vol.64, № 2. - P.151-154.

76. Hammond M.G., Oh S. -T, Anners e.a. The effect of growth factors on the proliferation of human endometrial stromal cells in culture // Am J Obstet Gynecol. 1993. - Vol.168. - P.1131-1136.

77. Huang J., Yeh J. Quantitative anaiysis of epidermal growth factor receptor gene expression in endometriosis // J Clin Endocrinol Metab. 1994. - Vol.79. -P. 1097-1101.

78. Hughes E., Fedorkow D., Collins J., et al. Ovulation suppression for endometriosis // Cochrane Database Syst. Rev. 2000. - №2. - P.175-178.

79. Ingelmo J.M., Quereda F., Acien P. Intraperitoneal and subcutaneous treatment of experimental endometriosis with recombinant human interferon-alpha-2b in a murine model // Fertil. Steril. 1999. - Vol.71, № 5. - P.907-911.

80. Isaacson K.B., Xu Q., Lyttle C.R. The effect of estradiol on the production and secretion of complement component 3 by the rat uterus and surgically induced endometriotic tissue // Fertil. Steril. 1991. - Vol.55, №2. - P.395-402.

81. Ishikawa N. Changes in natural killer (NK) activity and fertility during the establishment of experimental endometriosis in the rat. Article in Japanese // Nippon. Sanka. Fujinka. Gakkai. Zasshi. 1995. - Vol.47, №5. - P.457-464.

82. Ishimura Т., Masuzaki H. Peritoneal endometriosis: endometrial tissue implantation as its primary etiologic mechanism // Am. J. Obstet. Gynecol. -1991. Vol.165, №1. - P.210-214.

83. Jacobson T.Z., Barlow D.H., Garry R. et al. Laparoscopic surgery for pelvic pain associated with endometriosis (Cochrane Review) // In: The Cochrane Library. Oxford: Update Software. 2001. - № 4. - P. 123-130.

84. Kato K., Buhler K., Schindler A.E. Computer based, temperature controlled bipolar electrocoagulation system. III. Effect on pregnancy rate in the rat // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1999. - Vol.82, № 2. - P.223-226.

85. Kato K., Buhler K., Schindler A.E. Electrocauterization in rats of experimentally induced endometriosis at a low temperature // Hum. Reprod. 1995. - Vol.10, №9. - P.2423-2426.

86. Katsuki Y., Sasagawa S., Talcano Y., Shibutani Y., Aoki D., Udagawa Y., Nozawa S. Animal studies on the endocrinological profile of dienogest, a novel synthetic steroid // Drugs. Exp. Clin. Res. 1997. - Vol.23, №2. - P.45-62.

87. Katsuki Y., Takano Y., Futamura Y., Shibutani Y., Aoki D., Udagawa Y., Nozawa S. Effects of dienogest, a synthetic steroid, on experimental endometriosis in rats // Eur. J. Endocrinol. 1998. - Vol.138, №2. - P.216-226.

88. Koninckx P.R., Oosterlynck D.J., Meluleman C., Waer M. Transforming growth factor-beta activity is increased in peritoneal fluid from women with endometriosis // Obstet Gynecol. 1994. - Vol.83. - P.287-292.

89. Koninckx P.R., Rittinen L., Seppala M., et. al: CA-125 and placental protein 14 concentrations in plasma and peritoneal fluid of women with deeply infiltrating pelvic endometriosis //Fertil Steril. 1992. - Vol.57. - P.523-530.

90. Kuo T.M., Taketany Y., Ayabe Т., et. al. Influence of peritoneal fluid with endometriosis on the development of mouse embryos // Acta Obstet Gyntcol Japonica. 1990. - Vol.42. - P.1284-1290.

91. Khamsi F., Yavas Y., Lacanna I.C., Robergo S., Endman M., WongJ.C. Exposure of human oocytes to endometrioma fluid does not alter fertilization or early embryo development // J Assist Reprod Genet. 2001 Feb.-Vol.18, №2. -P.106-109.

92. Kruitwagen K.O., Poels L.G., Willemsen W.N.P., et al. Immunocytochemical marker profile of endometriotic epithelial, endometrial epithelial, and mesothelial cells: A comparative study // Eur J Obstet Gynaecol Reprod Biol. 1991. -Vol.41. -P.215-223.

93. Lim Y.T., Schenken R. S. Interleulcin-6 in experimental endometriosis // Fertil. Steril. 1993. - Vol.59. - P.912-916.

94. Liu D.T.Y., Hinchcock A. Endometriosis: Its association with retrograde menstruation, dysmenorrhoea and tubal pathology // Brit. J. Obstetr. Gynaecol. -1986. Vol.93, № 8. - P.859-862.

95. Mann P.C, Selected lesions of dioxin in laboratory rodents // Toxicol. Pathol. 1997. - Vol.25, №1. - P.72-79.

96. Mantovani B. Phagocytosis of in vitro-aged erythrocytes a sharp distinction between activated and normal macrophages // Exp. Cell. Res. - 1987. - Vol.173, №1. -P.282-286.

97. Martin D.C., Hubert G.D., Vander Zwaag R.,et. al.: Laparoscopic appearances of peritoneal endometriosis // Fertil Steril. 1989. - Vol.51. - P.63-67.

98. Matthews CJ, Redfern CPF, Hirts BH, et al. Characterisation of human purified epithelian and stromal cells from endometrium and endometriosis in tissue culture. Fertil. Steril. 1992. - Vol.57. - P.990-997.

99. Meana M., Binik Y.M., Khalife S., Bergeron S., Pagidas K., Berkley K.J. Dyspareunia: more than bad sex // Pain. 1997. -Vol.71. - P.211-212.

100. Metzger D.A., Haney A.F. Endometriosis: Etiology and pathophysiology of infertility// Clin. Obstetr. Gynecol. 1988. - Vol.31, № 4. - P.801-812.

101. Minh H.N., Smadja A., de Siganoly H., Orcel L. L'adenomyose. Une hypothese histogenetique fondee sur la notion de blasteme mullerien // Gynecologie. 1986. - Vol.37, № 4. - P.276-280.

102. Mizumoto Y. Changes in NK activities and TGF- beta concentrations in the peritoneal cavity in endometriosis and their interaction related with infertility // Nippon. Sanka. Fujinka. Gakkai. Zasshi. 1996. - Vol.48, №6. - P.379-385.

103. Mizutani Т., Sakata M., Terakawa N. Effect of gonadotropin-releasing hormone agonists, nafarelin, buserelin, and leuprolide, on experimentally induced endometriosis in the rat // Int. J. Fertil. Menopausal. Stud. 1995. - Vol.40, №2. -P.106-111.

104. Momoeda M. Strategy of treatment for infertile women with endometriosis // Nippon Rinsho. 2001. - Vol.59, № 1. - 172-176.

105. Muscato J.J., Haney A.F., Weinberg J.B. Sperm phagocytosis by human peritoneal macrophages: A possible cause for infertility in endometriosis // Am J Obstet Gynecol. 1982. -Vol.144. - P.503-510.

106. Nisolle M., Casanas-Roux F., Wyns C., et.al. Immunohistochemical analysis of estrogen and progesterone receptors in endometrium and peritoneal endpmetriosis: A new quantitative method // Fertil. Steril. 1994. - Vol.62. -P.751-759.

107. Nothnick W.B., Curry Т.Е. Jr., Muse K.N., London S.N., Vernon M.W. Detection of a unique 32-kd protein in the peritoneal fluid of women with endometriosis//Fertil. Steril. 1994. - Vol.61, №2. - P.288-293.

108. Oosterlynck D.J., Meluleman C., Waer M., et al: Transforming growth factor-beta activity is increased in peritoneal fluid from women with endometriosis // Obstet Gynecol. 1994. - Vol.83. -P.287-292.

109. Ory S.J. Pelvic endometriosis // Obstet Gynecol.Clin. J. Amer. 1987. -Vol.14, №4 - P.999-1014.

110. Osuga Y. Laparoscopy in the treatment of endometriosis-associated infertility //Nippon Rinsho. -2001. Vol. 59, № l.-P. 177-181.

111. Ortega-Moreno J. Receptor concentrations for estradiol and progesterone in surgically induced endometriosis in the rat // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1994. - Vol.54, №2. - P. 123-126.

112. Quereda F., Barroso J., Acien P. Individual and combined effects of triptoreline and gestrinone on experimental endometriosis in rats // Eur. J. Obstet, Gynecol. Reprod. Biol. 1996. - Vol.67, №1. - P.35-40.

113. Pittway D.E., Fayez J.A. The use of CA-125 in the diagnosis and management of endometriosis. //Fertil. Steril. 1986. - Vol.46. - P.790-795.

114. Piva M., Sharpe-Timms K.L. Peritoneal endometriotic lesions differentially express a haptoglobin-like gene // Mol. Hum. Reprod. 1999. - Vol.5, №1. -P.71-78.

115. Pritts E.A. Fibroids and infertility: a systematic review of the evidence // Obstet. Gynecol. Surv. 2001. - Vol. 56, № 8. - P.483-491.

116. Prough S.G., Gilmore S.M., et.al. Peritoneal fluid fractions patients with endometriosis do not promout two-cell mouse embryo growth // Fertil. Steril. -1990.-Vol.54.-P.927-930.

117. Rajkumar K., Schott P.W., Simpson C.W. The rat as an animal model for endometriosis to examine recurrence of ectopic endometrial tissue after regression//Fertil. Steril. 1990. - Vol.53, №5. - P.921-925.

118. Redwine D.B. Peritoneal pockets and endometriosis. Confirmation of an important relationship, with further observations // J. Reprod. Med. 1989. -Vol.34, № 4. - P.270-272.

119. Ryan IP, Schriock ED, Taylor RN. Isolation, characterisation, and comparison of human endometrial and endometriosis cells in vitro // J Clin Endocrinol Metab. 1994. - Vol.78, №4. - P.642-649.

120. Sampson J.A. The development of the implantation theory for the opigin of peritoneal endometriosis // Am J Obstet Gynecol. 1940. - Vol.30, №3. - P.549-557.

121. Schenken R.S., Scott J.R., Di Saia P.J., Hammond C.B., Spellasy W.N. Endometriosis // Danforth Obstetric and Gynecology, 8th Edition, Lippiincott, Williams and Wilkins. Philadelphia, 1999. - P. 669-675.

122. Schweppe К. Current medical therapies for endometriosis // Advances in reproductive medicine. 1993. - Vol.10, №2. - P.67 - 85.

123. Sharpe K.L., Bertero M.C., Vernon M.W. Detection of a progesterone-induced secretory protein synthesized by the uteri but not the endometriotic implants of rats with induced endometriosis // Fertil. Steril. 1991. - Vol.55, №2.- P.403-410.

124. Sharpe K.L., Zimmer R.L., Khan R.S., Penney L.L. Proliferative and morphogenic changes induced by the co-culture of rat uterine and peritoneal cells: a cell culture model for endometriosis // Fertil. Steril. 1992. - Vol. 58, №6. - P.1220-1229.

125. Sharpe K.L., Bertero M.C., Muse K.N., Vernon M.W. Spontaneous and steroid-induced recurrence of endometriosis after suppression by a gonadotropin-releasing hormone antagonist in the rat // Am. J. Obstet. Gynecol. 1991. -Vol.164, №1. - P. 187-94.

126. Sharpe K.L., Vernon M.W. Polypeptides synthesized and released by rat ectopic uterine implants differ from those of the uterus in culture // Biol. Reprod.- 1993. Vol.48. - P.1334-1340.

127. Sharpe-Timms K.L., Bruno P.L., Penney L.L., et. al.: Immunohistochemical localization of granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) in matched endometriosis and endometrial tissues // Am J Obstet. Gynecol. 1994.-Vol.171.- P.450-455.

128. Sharpe-Timms K.L., Piva M., Ricke E.A., Surewicz K., Zhang Y.L., Zimmer R.L. Endometriotic lesions synthesize and secrete a haptoglobin-like protein // Biol. Reprod. 1998. - Vol.58, №4. - P.988-994.

129. Sharpe-Timms K.L. IN vitro models of endometriosis. In Diamond M, Osteen К (eds): Endometrium and endometriosis. Cambridge, MA, Blackwell Science, 1996. -21 lp.

130. Shor A., Nagaeva O., Mincheva-Nillson L., Sotnicova N. Different cytokine profiles at the systemic and local level of patients with endometriosis // Reproductive immunology. 2003. - V.58, №2. - P. 168.

131. Syrop C.H.,Halme J. Peritoneal fluid environment and infertility // Fertil Steril. 1987.- Vol.48. -P. 1-9.

132. Skowron J. The effect of iron on peritoneal macrophage activity and sperm phagocytosis in rat // Ann Acad Med Stetin. 2000. - Vol.46. - P.63-75.

133. Stoeckemann K., Hegele-Hartung C., Chwalisz K. Effects of the progesterone antagonists onapristone (ZK 98 299) and ZK 136 799 on surgically induced endometriosis in intact rats // Hum. Reprod. 1995. - Vol.10, №12. - P.3264-3271.

134. Sueldo C.E., Steinleitner A., et. al. The effect of peritoneal fluid from pations with endometriosis on murine sperm-oocyte interaction // Fertil. Steril. 1988. -Vol.48. - P.697-699.

135. Surrey E.S., Halme J. Effect of peritoneal fluid from endometriosis patients on endometrial stromal cell proliferation in vitro // Obstet Gynecol. 1990. - Vol.76. - P.792-797.

136. Taketani Y., Mizumo M. Hormonal regulation of endometriotic cell growth in primary cell culture system // Arch Gynecol Obstet. 1992. - Vol.251. - P. 127132.

137. Vernon M.W., Wilson E.A. Studies on the surgical induction of endometriosis in the rat // Fertil. Steril. 1985. - Vol.44, №5. - P.684-694.

138. Vernon M.W., Wilson E.A. Classification of endometriotic implants by morphologic appearance and capacity to synthesize prostaglandin F // Fertil. Steril. 1986. -P.801-806.7

139. Vernon M.W. Experimental endometriosis m laboratory animals as a research model. In Chada DR, ButtramVC(eds):Current Concepts in Endometriosis. New York, Alan R Liss, 1990. P. 49-60.

140. Whitworth C.M., Mulholland J., Dunn R.C., Glasser S.R. Growth factor effects on endometrial epithelial cell differentiation and protein synthesis in vitro // Fertil. Steril. 1994. - V0I.-6I, №1. - P.91-96.

141. Wild R.A., Wilson E.A. Clinical presentation and diagnosis // Endometriosis. New York: Alan R Liss, 1987. - P.53-77.

142. Wilson E.A., Liss A.R. Natural killer cells // Endometriosis. New York: Alan R Liss, 1987.-233 p.

143. Wilson T.I., Munnery L., Hertzog P.S. e.a. Decreased activity in endometriosis patients: relationship to disease pathogenesis // Fertil Steril. -1994. Vol.62. - P.1086-1088.

144. Yano S., Ikegami Y., Nakao K. Studies on the effect of the new non-steroidal aromatase inhibitor fadrozole hydrochloride in an endometriosis model in rats // Arzneimittelforschung. 1996. - Vol.46, №2. - P. 192-195.

145. Zhang R., Wild R.A., Ojago J.M. Effect of tumor necrosis factor- on adhesion of human endometrial stromal cells to peritoneal mesothelial cells: An in vitro system//Fertil Steril. 1993. - Vol.59. - P.l 196-1201.