Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Реактивность организма и иммунопатологические эффекты при различных путях воздействия производных гексаметилентетрамина в условиях эксперимента

21 0 а 9 ;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННА МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукопной

ИШЬБАЕВА Эльвира Аркамовна

УДК 547.288.15:615.015

РЕАКТИВНОСТЬ ОРГАНИЗМА И ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТЫ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ПУТЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ ПРОИЗВОДНЫХ * ГЕКСАМЕТИЛЕНТЕТРАМИНА В УСЛОВИЯХ ЗКСПЕРШЕНТА

14.00,16 - патологическая физиология 14.00.36 - аллергология ж иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата диалогических наук

Челябинск - 1992

/ГР

Работа выполнена на кафедре патофизиологии и фармакологии лечебного и стоматологического факультетов с курсом иммунология Башкирского государственного медицинокого,института имени 15-летия ВЛКСМ.

Научные руководителя: доктор медицинских наук, профеооор В.В.Сперанский доктор медицинских наук, профессор Р.Г.Терегулов

Официальные оппоненты: лектор медицинских наук, профессор С.Н.Теплова доктор медициноких наук, профессор И.Ф.Еяышн

Ведущее учреждение - П Московский ордена Ленина госу-,царственный медицинский институт им.Н.И.Пирогова.

Защита диссертации состоится " " _1992 г.

в __ чао. на заседании специализированного ученого советы К.084.02. Челябинского государственного медицинского институте (454092, г.Челябинск, ул.Воровского, 64).

С диссертацией мояяо ознакомиться в библиотеке ЧМИ.

Автореферат разоалан " " _ 1992 г.

Ученый секретарь специализированного ученого совета кандидат медицинских наук, децент

Л.В.Кривохихина

РОССИРСЬАР 1 СТЙЗЯ [

'ОСУДАгсГС.^":,^ {дшдртацад}

gtlEJiilOrSKA ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время в промышленности применяется около 50 ООО различных химических веществ, которые обладают разнообразным воздействием на организм человека и могут существенным образом менять его реактивность (Халемин ЯД., Ма~ лишевская А.Г., 1988). Хлорпроизводные гексаметилентетрамина (ЮТА, уротропин) являются активными, технологичными и дешевыми соединениями отечественного производства, применяемыми в нефтедобывающей промышленности. Им свойственна высокая бактерицидная активность, подавляющая на 85-100 % рост бактерий нефтяных скважин и, таким образом, способствующая уменьшению процессов коррозии металла на буровых установках, что обеспечивает увеличение нефтеотдачи (Хазипов Р.Х., Избицкая Л.И., 1986). Однако широкому внедрению соединений ЮТА в промышленность препятствует отсутствие сведений о биологических эффектах втих веществ.

Опубликованные данные свидетельствуют о минимальном побочном действии вевдста, содержащих уротропиновое кольцо, на организм человека: токсическом, канцерогенном, эмбриотропном, не являющемся противопоказанием для их дальнейшего внедрения (БереЖкицкий М.П. с соавт., 1978; Baldeimaim r.h., 1967; Delia portu j. et ai.t 1970 и др.). Среди биологических ойоЙстЯ ЮТА и его производных наименее исследованным является lix влияние на реактивность специфического и неспецнфичеокого характера. Имеются сообщения о развитии у людей реакций гипер-чувстнительности нй воздействие препаратов ЮТА, используемых в медицине (Довжанский С.М. о соавт., 1987; axonln 1980; jarvhaia В., 1982; Jozaf j., 1971 и др.), однако данные по иммунотропным и сенсибилизирующим свойствам веществ, применяемых в нефтедобывающей промышленности, практически отсутствуют.

Принимая во внимание вышеизложенное, становится очевидной важность Изучения особенностей реагирования организма на действие соединений ЮТА с целью разработки методов диагностики и патогенетически обоснованной профилактики изменений реактивности от воздействия изучаемых веществ.

Цель исследования. Анализ «вменений реактивности-организма при воздействии производных гексаметилвнтетрамина разной хя-

мической структуры в различных путях поступления.

Задачи исследования.

1. Определить в эксперименте на животных влияние эпику-танных аппликаций производных ГОТА на реакции важнейших адаптивных систем организма (иммунной, детоксикационной, нейро-гуморальной, системы крови). Оценить раздражающие и цитотокси-ческие свойства соединений ШТА.

2. Выявить ранние признаки функциональных изменений кожи при эпикутанном воздействии больших и малых доз производных ПИТА.

3. Оценить связь между иммунопатологическими эффектами, путями введения и особенностями химической структуры производных ГМТА.

4. Провести отбор чувствительных методов выявления аллер-гизации организма к исследуемым веществам и разработать рекомендации по определению состояния сенсибилизации при их воздействии.

5. На основании экспериментальных данных представить практические рекомендации к применению производных ГМТА в промышленности.

Научная новизна. Впервые дана оценка раздражающие, цито-токсическим и аллергенным эффектам производных ГМТА, применяемых в нефтедобывающей промышленности. Проведены исследования реактивности и резистентности организма при экспериментальном сравнительном изучении эпикутанного и перорального воздействия соединений ГОТА с различными вариантами строения молекулы.

Впервые выявлены иммунопатологические эффекты соединений ШТА, проявляющиеся поздними реакциями местной анафилаксии, накоплением цитотоксических антител и развитием гиперчувстви-телыюсти замедленного типа (ГЗТ). Рекомендованы наиболее- чувствительные методы, выявляющие состояние сенсибилизации к изучаемым веществам.

Практическая ценность. В результате проведенных исследований издано информационно-методическое письмо "Методы специфической диагностики повышенной чувствительности организма к хлорпроизводным гексаметилентетроминя", в котором приведены рабочие концентрации соединений ШТА для лабораторных методов выявления сенсибилизации к ним ь эксперименте и у людей в условиях производства.

• »

Разработаны методичеокие рекомендации "Сиотема комплемента как неспецифический фактор реактивности организма при воздействии -химических соединений", на основании которых предлагается определение активности комплемента у рабочих производств, связанных с применением соединений IMTA.

Обоснована необходимость гигиенического нормирования исследованных веществ о учетом их аллергенного действия о введением в сертификат пометки "Аллерген". Представлены практические рекомендации по профилактике изменений реактивности организма при применении производных ИТА в промыаленноотя.

Для широкого внедрения в нефтедобывающую промышленность рекомендованы соединения ЮТА, обладавшие менее в'ыраженнгаа цитотоксическкми и аллергенными овойотвами (ЮТА и НУ ЮТА).' Выявленную зависимость развития иммунопатологических, цитоток-сических и аллергенных эффектов от химической структуры изучаемых вещеотв необходимо учитывать при направленном синтезе новых соединений IMTA промышленного назначения.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложена на Всесоюзной конференции "Проблемы хронобиологии, хронопатологии, хронофармакологии и хрономедицины" (Уфа, 1985); ХП-З (Пермь, 1985) и ХШ-й (Ижевск, 1987) конференциях патофизиологов Урала; научно-практических конференциях "Актуальные вопросы гигиены окружающей среды в связи о интенсивным развитзем нефтяной, газовой и нефтехимической промышленности" (Уфа, 1985), "Гигиенические вопросы охраны окружающей среды от загрязнений поверхноотно-активными веществами" (Уфа, 1986), "Актуальные проблемы охраны я рационального использования природных и растительных ресурсов" (Уфа, 1987), "Гигиепичесгае аспекты охраны окружающей среды" (Уфа, 1987), "Оздороалсгае окружающей среды и адаптация организма" (Уфа, IS37); Международной конференции медиков-эсперантистов" (Каунас, 1931); меяла-бораторно-кафедральной конференции ВДКЛ и профильных яафздр Башкирского медицинского института МЗ РСФСР (1992).

Объем я структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста, аллюстрзрояаяа 19 таблицами, 26 рисунками, фотографиями. Ска состоя? "э оглавления, введения, обзора литературы, 4 глав собственна! по-следованлЗ, заютчензя н выводов. Указатель литературы содержат IG7 псточк.'лол, а том числе 84 ш:оатрашшзс автора.

Публикация. По теме диооертации имеется 20 публикаций. С0ДЕР1АНИЕ ДИССЕРТАЦИИ I. Материал и методы исследования

Исоледуемые химические вещества являютоя солями 1МТА с алкилгалогенидами общей формулы [((Л^^Е^вЗ^СГ" (тайл.1).

Таблица Т

Алкилпроизводные гексаметилентетрамина, использованные для проведения исследований

Название вещества ] Структурная формула

Гекоаметвлентетрамин (ШТА, уротропин)

Хлористый аллил-гекоаметвлентетрамин (ХА ГЫТА)

Хлористый в-хлор-гексаметнлентетра-. мин (XX ЛЛТА)

и

Хлориотый А -хлор-гексаметилен-тетрамин (ХБХ ШТА)

Хлористый У -хлор-гексаметялентетра-мин (XX К ШТА)

Хлористый металлил-гексаметилен-тетрамин (ХМ ШТА)

Хлористый Ц -хлор-^-метилгёксаые-тилентетрашн (ХП ГМТА)

Хлористый трихлор-гексаметиленгет-рамин (ХТХ ШТА)

Они имеют порошкообразное состояние, в нефтедобывающей промышленности применяются в 0,1; 50-75$-ных водных растворах.

Общая характеристике, основные этапк, объект и объем ис-

ледовая*! приведены в таблице 2.

Тйблица 2

Общая характеристика проведенных исследований

7Т fi Этапы и задачи исследования | Обьем и объект ' 1 исследования ! Использованные {методы

i, I z I а 1 «

I. Оценка юздражаю-цего действия соединений ШТА при однократном нанесении ва кожу

На 171 краЙке,144 морских свинках изучено действие на кожу 011; I; 5; 10: 25} 50; 75 и IOOi-ныг растворов ГЫТА, ХА.П.ХЫ.

от.хтх.хех.ххй мтА

Баллы кожных реакций на участках аппликации веществ я аллергологического тестирования на 15-е сутки опыта; термометрия, измерение алкалонейтра-лиэующей способности кожи

2. Влияние на реактивность а резистентность организма эпикутанных аппликаций соединений ШТА

а) оценка сенсибилизирующей активности производных ШТА при длительном воздействии на кожу

б) влияние высоких концентраций производных ШТА на состояние адаптивных систем организма

на 144 морских свинках проведена оценка сенсибилизирующей активности ШТА.ХА.ХМ.ХХ, хгх.хыдтх, xii штА

На 24 морских свинках изучено влияние аппликаций на кожу 50%-ных концентраций ХМ ЛИТА

На 144 крысах изучено влияние ХА, ХМ,XX и ЦБ ЩТА

в дозах 1/10,1/100 и 1/100 ЛДсП (4 я ; 6 месяцев)^"

те же: дополнительно: РСАЛ, РСЛЛ, РСМП

те же; дополнительно: масса тела, весовые коэффициенты органов, активность комплемента и Ао и АлАТ в сыворотке крови, гематологические показатели, ци-тограыма органов иммунной сиотемы (ое-леэенка, лимфоузлы)

те же я титры проти-воорганных аутоантител в сыворотке крови, патоморфология

3. Исследование иммунопатологических, токсических аффектов производных ШТА при длительном внутрижелудоч--ном введении их животным

4. Оценка прямого ци- ЮТА,ХА,ХМ,XX,XXк. Испытание двойных тотоксического эф- ОТ.ШДТХ ШТА разведений веществ шекта соединений на сенсибилизирован-ШТА. Определение ных эритроцитах ба-

Окончание таблицы 2 —Г

ХГ

I

I

концентраций веществ, не оказывающих повреждающего действия на эритроциты

5. Внутрикожное введение изучаемых вещеотв:

а) оценка аллергенной активности;

б) определение по юга аллер-гизирующего действия соединений 1мТА;

в) выявление овязи аллерген. ных эффектов с химической

структурой соединенлй Л»!ТА;

г) определение наиболее чувствительных методов выявления сенсибилизации организма к производным 1М.ТА;

д) оценка специфичности аллергических реакций , к соединениям ШТА

280 морских РСАД, РСЛЛ, свинок, веще- РСМП, РНДБ, ства: 1МТА, ПАН, ППНГ ХА,1М,Г1ДХи кожные тесты, ГПСДБХДТХ гематологиче-1МТА . ские показа-

тели

4

В опытах использовано 800 морских свинок, 144 крысы, 171 кролик. Материал собственных исследований базируется на результатах постановки 1935 аллергопроб, 2240 серологических реакций, изучении 920 мазков-отпечатков и 432 гистологических сре-^ зов.

Основной путь поступления изучаемых веществ в организм в условиях производства - кожный контакт - в эксперименте на животных моделировали методом одно- и многократных (15-20) капельных аппликаций: 0,1; I; 5; 10; 25; 50; 75 и ВДОЁЧтх водных растворов веществ (Алексеева О.Г., Дуева Л.А., 1978). Реакцию кожи на опытном участке учитывали ежедневно по 5-балгь-ной системе по шкале -ОтВ.Суворова (1976). функциональные свойства-кожи как барьерного образования при контакте о химическим вещеотвом определяли термометрией участка контакта и измерением алкалонейтрализующей способности кожи (Федорович C.B., 1977).

Поступление соединений П4ТА в желудочно-кишечный тракт моделировали путем ежедневного внутрнжелудомного введения животным через зонд исследуегшх веществ в дозах 1/10, 1/100 я

1/1000 ДД50* в течение 4 и 6 меояцев.

О степени обще- к цитотоксического воздействия веществ при различных путях введения их животным судили по изменениям, массы тела, летальности, частоте дыхания и сердцебиения, активности аспартат- и алаиин-аминотрансфераз (Ас и АлАТ) в сыворотке крови ( ав^ь. 1-, 7гвпкв1 а.» 1954). Содержание эритроцитов, ретикулоцитов, полихроматофялов, гемоглобина, лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов, цитограммы селезенки и лимфоузлов ивучода по общепринятым методикам.

Для оценки состояния реактивности и резистентности тканей . в условиях воздействия химических веществ проводила определение весовых коэффициентов и показателей витального окрашивания - удельного индекса накопления через 30 мин и I чао после вну-трибршинного введения 0,1^-ного спиртового раствора нейтраль-рота; по полученным значениям этих показателей высчитывали индекс выведения и коэффициент очищения органа от красителя (Ажипа И.Я., 1954). При помощи витального окрашивания в условиях целого организма удается сопоставить представление о сравнительной чувствительности органов и тканей к воздействии химического вещества.

В гистологических срезах, окрашенных гематоксилин-эозином, изучали морфологические изменения органов: печени, почек, сердца, легких, селезенки, надпочечников, тимуса, лимфоузлов, головного мозга.

Для оценки состояния естественной неспецифической протя-зомзкробноЗ резистентности изучали показатели гуморальных и клеточшяс факторов защиты. Содержание и активность комплемента в сыворотке кроЕИ определяла турбиднметрическим методом (Ройтмая М.И., 1569). За титр ко.'лплемента принимали минимальную дозу сыворотки, вызнвавцуп 50£-ннй гемолиз. Еычисленпе показателей фагоцитоза - фагоцитарное число и индекс фагоцитоза (<5.Ч. и О.И.) - проводили в мазках крозя, ппкубированнсЗ в течение 30 г.пш о культурой 5гарЬу1оооссив аигоиа (Козлик Л.Я., 1537). J

КекбраноповреглавдиЙ эффект химических соединений оцени-

3 Значения ЛДсд псслвдусмих зецеств.опрэделеш! ншля совместно о кафедрой токсикологии ЕШИ.

вали в серии опытов ян внтро о испытанием двойных рвзведений производных IVта не цитотоксичность по методике л.а.Дуевой о ооавт. (1980). ■

Оценку аллергенно! активности наученных веществ проводили по методике О.Г.Алексеевой я А.И.Петкевич (1972). Дня »того сенсибилизирующую дозу аллергена вводили в 0,02 ил физиологического раотворр, приготовленного ex te*Pore в варужную поверхность кои уха морено! свинки. Разрешающую дозу вещества наносили капельяо на клтактныЭ участок кои doxa животного размером 2X3 ом через 14 суток после сеноибмизацм. Оценку кожной пробы проводив через 15 мин и далее 3, 6, 24 а 48 часов от момента тестирования. Дня определения частных механизмов юмунитета использовали реакции специфического лизиса а агломерации лейкоцитов (РСАЛ я РСЛЛ), серологическую реакцию специфической микропреципятаци (РСЫН) по Танье в присутстви П1ТА я его производных а модификации Л.А.Дуевой с соавт. <1980).

Титры аутоантител в сыворотке крови выявляли в реакции пассивной гемагглютивации (РПГА) (Шишкин В.Л., 1986).

Полученные результаты подвергали статистической обработке о применением вычислительной техники. Уровень значимости ^ вычисляли по таблице Стыщента. Сравнительный анализ проводили о помощью процентных соотношений. Различия считались достоверными при р^ 0.D5 (Каминский Л.С., 1964; в&Иу П.Н., 1962

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Изучение раздражающих аффектов при однократном эпикутан-вом воздействии производных ГИТА показало отсутствие выраженных изменений визуальных реакций, температуры и показателя" алкалонейтрализации кои на участках аппликаций веществ в кон центрациях 0,1; I; 5; 10; 25; 50; 75 и 100 %.

Следовательно, хлорпроизводные IMTA являются соединениями неопасными при однократном контакте с неповрежденной кожей, т.е. относятся к 0 классу веществ по классификации Н.И.Куидие ва с соавт. (1986). 105?-ная водная концентрация исследуемых соединений является предельной, не вызывающей видимых изменений на коже, что позволило использовать ее в качестве тестирующей дозы для капельного разрешения.

При длительном впикутанном воздействии большие дозы (10-

100 %) производите ГМТА вызывают у животных развитие контактного дерматита 1-2 типа по О.Г.Лдвксеевой а Л.А.Дуевой (1978) о максимально выраженными визуальными реакциями я умеренным лейкоцитозом на 7-8 сутки. Предельные значения этих показателей у опытных животных составляя: балл кожной реакция -2,4* 0,8 (р < 0,01); содержание лейкоцитов в единице объема кровл - 10,8*2,IxIOVji против 6,2±1,0хЮ9/л в контроле (р<0,05).

Длительные аппликация малых концентраций (0,1-5 %) производных ЮТА на протяжения всего эксперимента (20 оуток) не вызывают выраженных локальных язменений я токсичеоких реакций организма, характерных для воздействяя высоких доз веществ, но пря этом развиваются аллергические реакция замедленного типа, выявляемые по кожным тестам. Значения баллов кожных реакций при этом в опытных группах овянок достигали 2,2*0,4 (0,0 в контроле, р < 0,05). Интеноявнооть I3T у большинства подопытных животных была более выраженной сравнительно о таковой у свинок с аппликациями высоких концентраций соединений ЮТА я сохранялась на этом уровне до 20 суток опыта.

Исследование ранних проявлений функцлональной недостаточности кожи при воздействии на нее проиаводных ЮТА показало большую чувствительность теота алкалонейтралязацяя сравнительно с показателем термометрии. Так, снижение алкалонейтрализую-щей способности кожи на 100-160 % (р< 0,05) било выявлено уже на 3-й сутки воздействия различных разведений вещеотв, т.е. в период, когда отсутствовали изменения показателей термометрия и визуальные реакция.

Резюмируя результаты опытов по изучению раздражающего действия веществ, следует отметять, что кожный контакт как о высокими, так я с низкими концентрациями производных ГМТА, различающихся по химической структуре, приводят к стандартным ответным реакциям организма. Последние обусловлены одинаково хорошей растворимостью и выоокой резорбтивной способностью соединений исследуемой группы ( Allgen j.i., 1979; Bally r.h., 1965; Oben Т.н., 1962; cronborg £., 1973; Deila porta jr., 1970), что требует применения у ладей, контактирующих о производным! ЮТА,защитных средств.

Динамические изменения реактивности и резистентности организма пря эпикутанном воздействия 50(£-ннх растворов IM IUTA

изучали на,морских свинках,. Выбор данного вещества для экопе- •.. римента вызван более выраженной бактерицидностью. и большей перспективностью его для широкого применения в нефтедобывающей промышленности.

Полученные результаты показывают, что воздействие химического вещества типа ЮТА на кожу вызывает в ранние сроки опыта (до 6 суток) формирование общегогадаптационного .синдрома (Меерсон Ф.З., 1986; relye н.,. I95Ö). Так, у животных наблюдаются возино- и лейкопения в крови, уменьшение относительного веса тимуса, ликфоузлов, селезенки, снижение в последней содержания лимфоидных клеток (р<0,05), проявляется тенденция к увеличению весовых коэффициентов надпочечников. После 15 ежедневных аппликаций вещества на кожу в крови развивается умеренно выраженный лейкоцитоз, масса селезенки, лимфоузлов и надпочечников восстанавливается до уровня в контроле, однако весовые коэффициенты тимуса не достигают нормальных значений (Р <0,05). Наблюдающееоя напряжение периферических отделов иммунной системы, специфически ответственной за приспособление организма к воздействию антигена, приводит к развитию сенсибилизации, являющейся результатом адаптации и проявляющейся в этот срок в кожных тестах ГЗТ.

На поздних этапах эксперимента (30-е сутки) наблюдается ' выравнивание значений массы тимуса, селезенки и лимфоузлов с контрольными (р>0,05). Цитологический состав селезенки также близок к контролю, но весовые коэффициенты надпочечников имеют значения, достоверно более низкие, чем в контроле (р <0,05). Признаки ГЗТ угасают, одна ко в сыворотке крови у животных в этот срок поддерживается повышенный титр антигал-тенных антител (р < 0,05). Наступает фаза долговременной адаптации организма к воздействию химического вещества, включающая мобилизацию гуморального иммунного ответа. В то же время снижение весовых показателей надпочечников характеризует, очевидно, перенапряжение гормональной регуляции гомеостаза, что, в свою очередь, является признаком перехода организма из адаптированного состояния в фазу истощения механизмов адаптации (ГЬркави Л.Х., Уколова H.H., 1977; Солошенко Э.М., 1987; Со-сенков Л.В.. 1977; Меерсон Ф.З., I98G).

Следовательно, производные ПИТА, попздшиие т лоху мио-

гократно в раздражающих концентрациях (10-100 %), вызывают обязательную ответную местную воспалительную реакцию у всех животных, т.е. обладают облигатным эффектом. Сила вызываемого при этом раздражения на поздних этапах воздействия превышает компенсаторные приспособительные возможности организма. Если степень раздражения умеренная, незначительно превышающая пределы приспособляемости кожи к неоднократному воздействию вещества (5-10?-ные концентрации), возникает так называемый травматичесний контактный дерматит (дерматит от раздражения) (Цыркунов Л.П., 1987). Обладая аллергенными свойствами, производные ГМТА изменяют аллергологические показатели (РСАЛ, РСЛЛ, РСМП, кожные реакции) при воздействии на иожу даже в малых концентрациях (0,1-1 %), но это действие проявляется факультативно, т.е. лишь у чувствительных оообей.

Следующим этапом работы явилось изучение реактивности и резистентности организма при внутрижелудочном введении экспериментальным животным изучаемых соединений в дозах 1/10, 1/100 и 1/1000 Л%о. В опыте применяли вещества, различавшиеся по острой токсичности (ДДзд): ХА, ХМ, XX и XXV ШТА. Установлено, что резистентность организма к соединениям ШТА, оцениваемая по ДД^д, зависит от их химической структуры и может быть расположена в порядке возрастания следующим образом: XX, ХА, ХМ, XXV ШТА.

При введении крысам изучаемой группы веществ изменялась также противомикробная резистентность организма. Так, длительное пероральное поступление в организм производных ШТА, обладающих выраженными токсическими свойствами (XX ШТА -ДД50 для крыс составляет 840,0*42,3 мг/кг веса), вызывает статистически значимое угнетение неспецифических клеточных (фагоцитоз) факторов защиты. Применение веществ с менее выраженными токсическими свойствами (ХМ ШТА - ЛД50 для крыо - 2522,О* 265,0 мг/кг веса) не оказывает существенного влияния на показатели фагоцитарной активности клеток крови и комплемент. Подобные результаты ПОЛучеНЫ £.СашЬг1а (1969), Ц.КогиНо, 1.п.А,т1оо (1957) при исследовании действия малотоксичного уротропина на клетки ретикулоэндотелиальной системы у людей.

По полученным морфологическим и функциональным (витальное окрашивание органов, частота дыхания и сердечных сокра-

щени!, активность Ас я АлАТ в сыворотке крови) данным, изменения показателей реактивности органов и тканей у опытных животных носили системный характер о преимущественным поражением печени а почек, что свойственно для соединений общетоксичео-кого дейотвия (Трахтенберг U.M., 1968).

Морфологические признаки поражения печени в наших опытах характеризовались умеренно выраженной зерниотой дистрофией и гипертрофией купферовскнх клеток, особенно выявлявшиеся в группе крыс, получавших высокие доаы IX ТМТА. В почках гистологические изменения характеризовались поражением как клубоч-кового, так и канальцавого аппарата, наиболее выраженные у крыо, получавших ХА ГЫТА в высокой дозе.

Согласно литературным данным, повреждения в организме, вызываемые химическими соединениями, могут явиться результатом как прямого токсического, так и иммунологически опосредованного действия на органы-мишеви. Наши исследования, проведенные ин внтро на сенсибилизированных эритроцитах барана, показали наличие прямого мембраноповреждающего аффекта у всех анализируемых производных IXTA. Судя по максимальной концен-трацив-веществ, не вызывающей лизиса эритроцитов, ото свойство наиболее выражено у И ЮТА (0,05 %), минимальным цитоток-сическим действием обладают XXи/, ХМ и ХП ЮТА (3,12 %).

Полученные данные о цитотоксическом действии изучаемой группы веществ подтверждаются результатами исследований траяс-аминазной активности в сыворотке крови у крыс. Так, в 4- и 6-месячные сроки активность АяАТ у животных в группах о применением XX ШТА достоверно превышала уровень показателя как в контроле, так в в остальных опытных группах (максимально 1,58*0,4 против 0,44*0,2 в контроле, р<0,05),а коэффициент трансаминаз-ной активности (АсАТ/АлАТ) при атом снижался ниже I, что характеризует более выраженное, сравнительно с другими веществами, повреждающее действие на печеночную ткань у XX ЮТА.

Цитотоксические свойства изучаемых вегсести на поздних этапах воздействия, вероятно, в известной степени определяются и специфическими иммунопатологическими реакциям!. К проявления:-! последних можно отнести поншимше нефро- и гепатотоксических аутоантител у экспериментши-июс животных в сочетании с увеличением активности комплемента при пероральнсй затравке в течение 3-4 месяцев в дозах веществ l/IO, i/iuc и Г/кш ЛЛ5П, а так-

же наличием галтешшх свойств у самих соединений ГОТА. Так, максимальные титры противопечеиочвадс аутоантител наблюдались в сыворотке крови животных, получавших 1/10 ЛД50 XX ГМТД, которые достигали в 3-месячныЙ срок уровня 3,9*0,9 против 1,6* 0,2 в контроле (р<0,05). Полученные результаты согласуются о данными ряда исследователей, показавших повреждающее действие на печень у ШТА и его соединений, применяемых в медицин" (Бережницкий М.А. о соавт., 1978; Осинцева В.П., 196К).

Таким образом, наряду о изменением реактивности и резистентности организма неспецифического характера под влиянием соединений ГМТА в эксперименте имеют место достаточно яркие изменения специфической реактивности, характеризующиеся'признаками иммунопатологии 2 типп, я также пнпокой вероятности появления реакций 4 типа.

Анализ реакций ГЗТ, оценив«»мо1 с помощью методики П.Г. Алексеепой и А.Н.Петкевич (1972), пвипетельотвует о связи пл-лрргеиннх свойств производных ШТА о их химической структурой. эпниоящей п большей степени от положения метильной группы и атома хлгч<а и аллильной цепи.

Однократная внутриножная сенсибилиэшдая морских свинок 40 мкг веществ показала, что группу аллрргеиов умеренной сили составляют ХА, ХТХ и ХЕХ ГМТА. К сильным аллергенам относятся ХМ и ОТ П/ТА (табл.3).

Аллергенная активность производных гексаметилентатрпмина на 14-е сутки опыта при однократном внутрикожном введении морским свинкам

Таблица 3

Вещество

I Общее 1 число жи-

¡вотных'п |абс.

/V [ 1ГГГ~'П

2 25 0,25*0,1 6 75 0,4*0,1

5 62,5 0,32*0,1

3 37,5 0,3*0,1

6 75 0,45*0,10 6 75 0,9*0,2

С- 75 0,75*0,15

4 50 0,5*0.2

ШТА

8 8 8 8 8 8 8 8

ХА.ГМТА И ГМТА ХЕХ ГОТА П^ ГОТА ХМ ГМТА ХГХ П.1ТА ХТХ ГМТА

• üu¿ioiuu аллергенного действия ири внутрикожном введении различных t>ajЬедений веществ, т.е. минимальной концентрацией, вызывающей достоверно выраженную сравнительно с контролем сенсибилизацию, для ГОТА является разведение 1:500 (40 мкг), ХА, ХБХ а ХТХ ШТА - 1:1000 ( 20 мкг), для ХМ. XX и ХГХ ШТА -I:2U00 (10 мкг).

Изучение иммунопатологических эффектов производных ШТА при внутрикожной сенсибилизации животных показало развитие реакций ГЗТ и отсутствие"при этом гиперчувствительности немедленного типа (П!Т). Классические реакции I типа на 15-й минуте тестирования животных исследуемыми веществами не возникали; не удалось такж& смоделировать пассивный переноо ГИТ интакт-ним животным с помощью сыворотки и воспроизвести у них пассивный анафилактический шок. Однако признаки воспалительной реакции на место введения соединений ШТА появлялись не только на 24 чаоу, но и к 3-G часу от момента тестирования. Это послужило поводом для исследования РСАЛ и РСЛЛ, связанных с участием клеток на поздних этапах П1Т. С этой целью у свинок, сенсибилизированных внутрикожным введением производных ШТА, брали кровь путем пункции сердца до тестирования на 14-е сутки опыта. PCAJI и РСЛЛ, выявлявшие реакции немедленного типа, в этот срок были положительными у животных, получавших все производные ШТА, кроме ХТХ ШТА. Следовательно, внутрикожное применение производных ШТА вызывает в организме развитие изменений реактивности,характерных как для ГЗТ, так и поздних реакций ГНТ.

Наличие иммунопатологических реакций Ш типа может бить связано с гаитенными свойствами веществ, их способностью связываться с белками организма, вызывать антителообразование и формирование циркулирующих иммунных комплексов. Для проверки этого предположения нами проведено изучен»-' титров противогап-тенных антител в реакции Уанье. По задержке снижения оптической плотности сыворотки при добавлении в нее возрастающих концентраций гаптена било выявлено наличие достоверно более высо-v них, чем в контроле, титров антигаптенных антител в сыворотке • крови у жиротных, получавших производные ПИТА внутрикожно, пе-рорально и эпикутанно. Особенно выраженными были эти изменения при внутрикожном введении ХМ и XIX ШТА, т.е. ведеотя.

проявлявших 'большую', по ножным тестам, аллергенную активность— сравнительно о другими соединениями иоследуемого ряда (3,85* 0,1 и 4,0*0,7 соответственно, р<0,05),

"Пзким образом, изучение изменений показателей местной в общей реактивности организма при различных путях и уровнях воздействия производных ШТА свидетельствует о наличии иммуно-тропных и аллергенных свойств у изучаемых веществ. Порог общетоксического действия производных ГОТА ниже порога их аллер-генности ( Limoh ), что характерно для веществ о уме-

ренно выраженными аллергенными свойствами (2 класо по аллергенной опасности), поэтому гигиенические нормативы для производных ШТА следует разрабатывать по их общетоксическому действию с пометкой "Аллерген". Аллергизиругщие свойства у ГОТА и его производных проявляются реакциями ГЗТ при внутрикожной и накожной сенсибилизации и формированием иммунопатологических реакций 2 типа при пероральном применении.

Учитывая литературные данные (Алексеева О.Г., Дуева Л.А., 197Й; Петрус B.C., 1986), можно полагать, что сенсибилизирующая активность производных ГМТА обусловливается наличием уро-гропинового кольца, имеющего достаточно жесткую химичесную структуру и обладающего способностью связываться о белками организма. Сам ШТА имеет низкую аллергенную активность, очевид-10, в связи со сбалансированностью в молекуле электрических -шрядов. Присоединение аллильного радикала к уротропиновому -юльцу согласно химическим законам вызывает смещение зарядов i молекуле, что способствует увеличению ее реакционной способ-юсти и, как следствие, увеличивается аллергенная активность 1ещества rio сравнению с исходным соединением. Присоединение ютильного радикала ели атома хлора к аллильной цепи изменяет ллергенность производного ШТА. Причем смещение атома хлора »аллалыюм радикале в направлении, дпетельном по отношению к ротропиновому кольцу, вызывает увеличение аллергенной актив-ости вещества..Наиболее выраженное увеличение аллергических, войств наблюдается при включении метальной группы в бета-по-ожение в плллльном радикале молекулы алл ил-производного ШТА. ти результаты согласуются с данными г-D.Iговьгаяп et al. 1968), показавшими изменение аллергенной активности соедине-сй фенилпрсоната при сь-ещении метильной 1руппы в молекуле ве-

Следовательно, аллергенная активность ироиьвопних 1М1А ь пределах группы определяется химической структурой и зьвиоит как от включенных в молекулу группировок, так и от их положения в молекуле. Установленная зависимость биологической активности от химического строения •емств машет быть иопальзована в дальнейшем при целенаправленном оинтеэе соединений [МТА-ряда, а также позволяет рекомендовать к внедрению веществ, обладающих менее выраженными аллергенными и цитотоноичоскими свойствами; ХХА ШТА и ШТА.

в ив иди

1. Резиотентнооть организма к внииерименгьцыюиу введению соединений гексаметилентетрамина вавиоит от особенностей химичеокого строения ввчеоп ■ способа их введения. Максимальная резистентность установлена при пероральном введении по отношению к П^ ГМТА; ниже - к ХМ ШТА и далее в порядке убывания: ХА, XX ШТА.

2. Цитотокоические эффекты производных гексаметилентетрамина проявляются ин виво приростом активности аланин-амино-трансферазы, извращением коэффициента трансаминазной активности, появлением противопочечных и противопеченочных аутоанти-тел, нараотанием активности комплемента в процессе применения веществ. Ин витро цитотоксичнооть производных гексаметилентетрамина проявляется при добавлении их к специфически сенсибилизированным вритррцитам барана, приводящем к усилению гемолиза.

3. Исследуемые производные гексаметилентетрамина являются облигатными местными раздражителями, неопасными при однократном попадании на кожу. Многократные аппликации веществ уротропнновой группы приводят к развитии контактных дерматитов, снижению показателей неспецифической резистентности организма (фагоцитоз, алкалонейтрализация) и формированию реакции гиперчувотвительнооти замедленное типа.

4. Степень выраженноот» аллергенных свойств соединений, содержащих уротропиновое кольцо, усиливается при введении в молекулу аллильного радикала. Максимальный аллергизирующий эффект наблвдаетоя в прюутствии в аллильном радикале метальной группы, что следует учитывать при синтезе новых соединений гексаметилентетрамина. • Дистадьное по отношению к уротропиново-

му кольцу смещение атома хлора в, аллильном радикале уменьшает цитотоксичность и увеличивает аллергенные, с^ойотва вещеотва.

5. Изучаемые соединения гексаметвдентетрамина являются веществами о умеренно выраженными аллергенными свойствами (2 класс аллергенной опасности), гигиеническое нормирование их должно проводиться по общетоксическому дейотвию о пометкой "Аллерген".

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В сертификаты веществ группы гексамехклеятетрамкиа должна вноситься пометка "Аллерген". 7 рабочих, контактирующих с соединениями уротропина, для предупрежцения развития сенсибилизации следует применять защитные средства: пасты, мази, кремы, перчатки.

2. 7 лицей в производстве и в эксперименте на животных аллергиэацию организма следует выявлять капельными ножными тестами с использованием 1О0С-ной водной концентрации веществ. Среди изученных инвитровых теотов: РСАЛ, РСЛЛ, ПАН, ПГШ, РСМП, РЩШ - наиболее чувствительными методами обнаружения сенсибилизации организма.к исследуемым веществам являитоя клеточные реакции специфического лизиса и агломерации лейкоцитов (РСАЛ и РСЛЛ) в серологическая реакция специфической микропреципитации (РСЫП) по Уанье, При атом следует использовать рабочие дозы веществ, рекомендованные в информационно-методическом письме "Специфическая диагностика повышенной чувствительности организма к хлорпроизводным гексаметилентетрамина". -- _

3. При проведении профосыотров рабочих производств, свя- " занных с применением соединений гексаметилентетрамина, необходимо учитывать, что ранняя функциональна« недостаточность кожи при воздействии на нее изучаемых веществ проявляется снижением показателя алкалонейтрализации на 100-150 % по сравнению с нормой, что требует проведения соответствующих профилактических и корригирующих мероприятий.

4. Для широкого внедрения в промышленность рекомендуются ХХи^ ШТА и ШТА, обладающие минимальными цитотоксическими я аллергениили свойствами в ряду изученных соединений.

Список.работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Сезонные изменения гематологических показателей у крыс при введении им соединений уротропина // Тезисы докладов П Всесоюзной конференция "Проблемы хронобиологии и хронофармако-логии, хронопатологии и хрономеднцииы". - Уфа, 1985. - С.70-7] (в соавт. о Лязиной Л.В., Ыурзакаевым Ф.Г., Терегуловым Р.Г.),

2. Первичная оценка аллергизирующих свойств некоторых производных уротропина в хроническом эксперименте // Актуальные вопросы гигиены окружающей среды в связи с интенсивным развитием нефтяной, газовой ■ нефтехимической промышленности. - Уфа, 1985. - С.92-94 (в соавт. о Терегуловым Р.Г., Лязиной Д.В., Мурзакаевым Ф.Г.).

3. Морфологические изменения внутренних органов крыс под воздействием производных уротропина // Тезисы докладов ХП конференции патофизиологов Урала "Патологическая физиология экстремальных состояний. Патофизиологические аспекты гематологии

и иммунологии! - Пермь, I9S6. - С.38-40 (в соавт. с Цурзакае-вш Ф.Г., Гвзватуллиной A.A.. Терегуловым Р.Г., Ахиадеевым В.Ы.).

4. Экспериментальный аллергический контактный дерматит, вызванный соединениями уротропина // Тезисы докладов ХП конференции патофизиологов Урала "Патологическая физиология экстремальных состояний. Патофизиологические аспекты гематологии и иммунологии1! - Пзрмь, 1986. - С.74-75 (в соавт. с Ыурзакаевым Ф.Г., Терегуловым Р.Г.).

5. Материалы к обоснованию ЦДК хлористого аллил- и хлористого металдЕЛ-гексаметшентетрамина // Гигиенические вопросы охраны окружающей среды от загрязнений поверхностно-активными веществами. - Уфа, 1986. - С.30-33 (в соавт. с Ыурзакаевым Ф.Г., Ахмадеевыы В.Ы., СкачиловоЗ P.P., Булгаковым А.К.).

6. Материалы к токсичности хлористого W -аллил-гексаыэ-тилентетраыина // Гигиенические вопросы охраны окружающей среды от загрязнений поверхностно-активными веществами. - Уфа, 1986. - C.55-5S. (в соавт. с Цурзаксевш О.Г., Булгаковым А.К.).

7. Гигиеническое нормирование ЖЗ-Пб // Тезисы научно-практической конференции "Актуальные проблемы охраны и рационального использования природных в растительных ресурсов. -Уфа, 1387. - C.I4-I5 (в соавт. с ^/лгаковы:.! А.К.).

8. Изменения реактивности организма при воздействии бактерицида хлористого W -аллил-гексаметилентетрамина // Оздоровление окружающей среди и адаптация организма. - Уфа, 198?. -

С.20-21 (в соавт. о Мурзакаевым Ф.Г., Каюмовым Ф.А., Булгаковым А.К., Терегуловым Р.Г., Лязиной Л.В.).

9. Гематологические показатели у крыс при введении им мористого V-хлор-аллил-гексамэтилентетрамина // Тезисы док- . аадов ХШ научной конференции патофизиологов Урала "Патология цыхания, крови и регулирующих систем организма и принципы коррекции нарушений" - Ижевск. 1989. - С.30-31 (в соавт. о Терегуловым Р.Г.). '

10. Дерматозы у рабочих производства соединений уротропи-« // Тезисы докладов ХШ научной конференции патофизиологов Трала "Патология дыхания, крови и регулирующих систем органиэ-ла и принципы коррекции нарушений". - Ижевсн, 1989. - С.НОСИ (в соавт. с Терегуловым Р.Г.).

11. Влияние ЛПЗ-Пб на организм лабораторных животных в гсловиях подострого эксперимента // Вопросы гигиены и охраны |доровья населения в регионах о развитой нефтеперерабатывающей I нефтехимической промышленностью. - Уфе, 1989. - С.31-32 (в :оавт. с Мурзакаевьм Ф.Г,, Булгаковым А.К.).

12. Оценка аллергизирующих свойств некоторых производных •ексаметилентетрамина при пероральном поступлении в организм // ?езисы докладов Республиканской конференции стоматологов "Про-¡влактика и лечение основных стоматологических заболеваний". -'фа, 1989. - С.16 (в соавт. с Шайдулхиной Х.М.).

13. Биологические эффекты гексаметклентетрашша и его [роизводных (обзор), Деп. в ВИНИТИ 24.01.90 г. * 4949-90. -О о.

14. Об аллергенных свойствах некоторых производных гекса-щтилентетрамяна. Деп. в ВИНИТИ 13.12.90. Л 6262-1 В-90. - 17

. (в соавт. с Ройтман М.И.).

15. Материалы токсикологической характеристики некоторых лорпроизводных гексаметилентетрамина // Тезисы докладов науч-о-практической конференции "Гигиенические аспекты охрены здо-овья населения". - Уфа, 1990. - C.I6-I7 (в соавт. о Мурэакае-ым Ф.Г., Булгаковым А.К., Лхмацеевым В.М., Гилевым В.Г.).

16. Исследование влияния хлорпроизводных гексаметилентет-

gmrn Ш сердечно-сосудистую систему // Современные методы - диагностике, лечения, реабилитации больных о заболеваниями сердечно-сосудистой системы: Сб.научных работ БШ11. - Уфа, 1991. - С.8-14 (в соавт. о Терегуловым Р.Г., Гиззатуллино* A.A., Ляаяно! Л.В.).

17. All«r&ia efiko Hekttimatllaiiteti-amliuiJ durl»ut« // o-ai Xcteraatioml ti'diolnlt la gtperuuto coiiferenoo. -ьаиша. -1991. - C.I3 (в coaвт, с Медведевым Г).А,, Шигаевым Н.И.).

18. Изучение аллергенных свойств производных гекоамети-лентетрамина // Тезиоы докладов международного симпозиума "Проблемы токоикологичеоко! и прикладной иммунологии". - Д.:

- ВНИИГ, 2991,— C.I20-I2I ( в соавт. с Медведевым Ю.А.).