Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Реактивность нейтрофильных гранулоцитов крови при аутоиммунных тиреопатиях

На правах рукописи

с//

Бешагина Валерия Николаевна

РЕАКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ КРОВИ ПРИ АУТОИММУННЫХ ТИРЕОПАТИЯХ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск-2010

003492246

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук

доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «_» _ 2010 г. в _ часов на заседании

диссертационного совета Д 001.031.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3) -1 Автореферат разослан « » февраля 2010 г.

Уразова

Ольга Ивановна

Кравец

Елена Борисовна

Першииа

Ольга Викторовна Потапов

Алексеи Валерьевич

Ученый секретарь диссертационного совета, -

доктор биологических наук ^sfjCi^"—' Амосова E.H.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. В настоящее время в связи с неблагоприятной экологической обстановкой и дефицитом йода в окружающей среде отмечается неуклонный рост числа больных с патологией щитовидной железы. По данным ВОЗ, только за последние 5 лет абсолютный прирост числа вновь выявленных больных с разного рода тиреопатиями в экономически развитых странах составил 51,8% среди женщин и 16,7% среди мужчин. Заметно увеличилось количество пациентов не только с эндемическим зобом, но и с аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы, в частности с аутоиммунным тиреоидитом и болезнью Грейвса (диффузным токсическим зобом). Актуальность проблемы аутоиммунных тиреопатий определяется не только высоким уровнем заболеваемости, но и многочисленностью органов и систем, вовлекаемых в патологический процесс. Однако остаются нерешенными вопросы, касающиеся причин их возникновения, объективных и надежных методов ранней диагностики и профилактики [Петунина H.A., 2003; Аппельганс Т.В., Маклакова Т.П., 2006; Кияев A.B. и соавт., 2007; Фадеев В.В. и соавт., 2007; Кандрор В.И., 2008].

Интерес для современной эндокринологии представляют этиопатогенетические факторы формирования аутоагрессии на антигены тиреоцитов и образования антитиреоидных антител при аутоиммунных тиреопатиях (АИТП). При этом обращает на себя внимание факт чрезмерной «увлеченности» современных исследователей ролью в формировании АИТП сугубо факторов специфического иммунитета вне их взаимосвязи с состоянием механизмов неспецифической резистентности. В то же время считается, что нейтрофильные гранулоциты (НГ) являются одним из ключевых эффекторов реакций доиммунного воспаления. Нейтрофилы занимают активную позицию в системе кооперации клеток иммунной системы, определяют инициацию и характер течения воспалительного процесса. Показано, что вовлечение НГ в процесс деструкции щитовидной железы сопровождается усилением потребления клетками кислорода и продукцией токсичных его метаболитов, что в условиях дефекта механизмов антиоксидантной защиты может служить причиной включения летальной программы тиреоидных, равно как и иммунокомпетентных клеток

[Маянский А.Н., 1995; Кияев A.B. и соавт., 2007; Кандрор В.И., 2008].

Известно также, что НГ оказывают иммунорегуляторное действие посредством цитокинов, избыточная продукция которых является фактором гиперактивации интратиреоидного воспалительного процесса. Доказано, что дисбаланс цитокинов опосредует развитие иммунодефицита и инфекционных заболеваний, осложняющих течение АИТП. С другой стороны, цитокины могут поддерживать жизнеспособность и контролировать апоптоз нейтрофилов [Маянский А.Н. и соавт., 1997; Ashkenazi A., Dixit V.M., 1998; Fern K.F., Kroemer G., 2001; Hanna, N. et al., 2005].

Актуальность проблемы апоптоза, благодаря которому поддерживается постоянство клеточного состава тканей, осуществляется элиминация «отработавших» или поврежденных клеток, определяется ролью его дизрегуляции в патогенезе целого ряда заболеваний, в том числе и АИТП. Сама щитовидная железа, а точнее ее продукты - гормоны, также могут влиять на процессы программированной гибели клеток и апоптоз-опосредованной регуляции клеточного гомеостаза [Ferri K.F., Kroemer G., 2001; Москалева Е.Ю., Северин С.Е., 2006]. Между тем, патогенетические факторы и механизмы дизрегуляции апоптоза в условиях реализации аутоиммунитета еще недостаточно исследованы.

Кроме того, изучение реакций нейтрофилов при патологии представляется важным еще и с той точки зрения, что изменения их морфофункциональных свойств (как факторов доиммунной защиты) могут выявляться задолго до клинической манифестации болезни и предрешать характер и тяжесть ее течения [Фрейдлин И.С., 1998]. Это позволяет утверждать, что изучение реактивности нейтрофилов при АИТП, ее взаимосвязи с активностью аутоиммунного повреждения щитовидной железы и выраженностью клинических проявлений заболевания может оказаться основой для разработки новых подходов к диагностике, прогнозированию исходов и, что особенно важно, патогенетически обоснованной терапии АИТП.

Цель работы: выявить общие закономерности, особенности и патогенетические факторы нарушений секреторной активности и функциональных свойств нейтрофильных гранулоцитов периферической крови при аутоиммунных тиреопатиях.

Задачи исследования:

1. Установить общие закономерности и особенности нарушений СИ-субпопуляциондаго состава, секреторной функции, фагоцитоза и апоптоза нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с аутоиммунным тиреоидитом и болезнью Грейвса.

2. Определить зависимость параметров секреторной активности, фагоцитоза и апоптоза нейтрофильных гранулоцитов от содержания иммуноглобулина Е, цитокинов (интерлейкины 4, 8, фактора некроза опухоли а) в крови, функционального состояния щитовидной железы и выраженности аутоиммунного процесса при аутоиммунных тиреопатиях

3. Выявить патогенетические факторы секреторного и функционального дисбаланса нейтрофилов крови при аутоиммунном тиреоидите и болезни Грейвса.

Научная новизна. Проведена комплексная оценка секреторной активности и функционального статуса нейтрофилов периферической крови у пациентов с аутоиммунным тиреоидитом (АИТ) и болезнью Грейвса (БГ)- По результатам исследования получены новые данные, свидетельствующие о том, что течение АИТ и БГ сопровождается нарушениями антигенного состава, секреторной функции нейтрофильных гранулоцитов, параметров фагоцитоза и дисбалансом в системе цитокинов, характер которых зависит от функционального состояния щитовидной железы (эу-, гипо-, гипертиреоз). Установлено, что в основе нарушений фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов крови при аутоиммунных тиреопатиях лежат уменьшение числа их активных форм, угнетение поглотительной способности в связи с дефицитом рецепторов, связывающих опсонины - иммуноглобулины (Рсу-Ш[1/С016) и комплемент (С018). Показано, что данные изменения наиболее выражены при БГ, чем при АИТ, и сочетаются с усилением переваривающей способности клеток и гиперэкспрессией на их поверхности адгезивных молекул С031, СБ62Ь, ответственных за трансэндотелиальную миграцию нейтрофилов. Выявлено, что дисбаланс секреторной активности нейтрофилов периферический крови при аутоиммунных тиреопатиях проявляется пониженной секрецией лактоферрина, дефицитом активности щелочной фосфатазы в клетках и гиперпродукцией активных форм

кислорода, наиболее значимой при тиреотоксикозе. При этом уровень образования оксида азота в нейтрофильных гранулоцитах претерпевает разнонаправленные изменения - увеличивается при гиперфункции щитовидной железы и, напротив, снижается при эу- и гипотиреозе, что может быть положено в основу дифференциальной патогенетической оценки данных состояний. Продемонстрировано, что показатели секреторного и функционального дисбаланса нейтрофилов при аутоиммунных тиреопатиях сопряжены с гипер^Еемией и гиперцитокинемией, характеризующейся увеличением концентрации интерлейкинов 4, 8 и фактора некроза опухолей а. Выявлена взаимосвязь между количеством предрасположенных к апоптозу СЭ95+ нейтрофильных гранулоцитов периферической крови и уровнем антител к тиреопероксидазе в сыворотке крови, что может служить одним из факторов несостоятельности реакций доиммунного воспаления и формирования инфекционных осложнений, сопровождающих аутоиммунную патологию щитовидной железы.

Практическое значение работы. Результаты исследования дополняют имеющиеся представления о патогенезе аутоиммунных тиреопатий и природе сопровождающих их течение инфекционных осложнений, которые могут быть опосредованы нарушениями иммунофенотипической структуры, секреторной активности, функций и апоптоза нейтрофильных гранулоцитов, зависящими от параметров тиреоидного статуса, содержания в крови ^Е, про- и противовоспалительных цитокинов. Выявленные закономерности обусловливают необходимость дальнейшего изучения роли нейтрофилов в формировании антитиреоидного аутоиммунитета. Установленные данные могут служить основой для коррекции программы лечебно-реабилитационных мероприятий у больных с аутоиммунной патологией щитовидной железы, в том числе с использованием модуляторов программированной гибели клеток, антиоксидантов, цитокинов и их антагонистов.

Положения, выносимые на защиту: 1. Нарушения секреторной активности и фагоцитоза нейтрофильных гранулоцитов при аутоиммунных тиреопатиях сопряжены с функциональным состоянием щитовидной железы (эу-, гипо-, гипертиреоз), увеличением концентрации ^Е, интерлейкинов 4, 8 и фактора некроза опухолей а в крови, а повышенная

готовность нейтрофилов к Раз-зависимому апоптозу - с активностью антитиреоидного аутоиммунитета.

2. Дисфункция нейтрофильных гранулоцитов крови наиболее выражена при болезни Грейвса, чем при аутоиммунном тиреоидите и обусловлена уменьшением числа способных к фагоцитозу клеток, их поглотительной и СО 16-, СБ 18-прсзснтирующей активности (в связи с гипер^Еемией при эу- и гипотиреозе) на фоне компенсаторного усиления переваривающей способности клеток и гиперэкспрессии на их поверхности молекул адгезии СБ31 и С062Ь.

3. Секреторный дисбаланс нейтрофилов крови при эу-, гипо- и гипертиреозе определяется дефицитом в клетках кислороднезависимых факторов бактерицидное™ (щелочная фосфатаза) в сочетании с повышением суммарной продукции активных форм кислорода, наиболее выраженной при тиреотоксикозе. При этом уровень нитритов в нейтрофильных гранулоцитах претерпевает разнонаправленные изменения при болезни Грейвса (увеличивается) и аутоиммунном тиреоидите (снижается).

Реализация и апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на межвузовской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2006, 2007), VII Конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2006), а также на научно-образовательных семинарах «Патофизиология системы крови и иммунитета» при Центре компетенции по проблеме инфекционных болезней им. И.И. Мечникова и Р. Коха ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (Томск, 2008, 2009). Основные положения и выводы диссертации используются в учебном процессе в Сибирском государственном медицинском университете на кафедре патофизиологии в тематических разделах «Патофизиология клетки», «Патофизиология иммунитета», «Патофизиология системы крови» и на кафедре эндокринологии и диабетологии в лекционных и практических курсах по теме «Аутоиммунные тиреопатии».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ, 4 из которых в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4-х глав, выводов, списка

литературы. Работа иллюстрирована 4 рисунками и 8 таблицами. Библиографический указатель включает 234 источника, из них 173 отечественных и 61 зарубежных авторов.

ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу работы положены результаты комплексного клинико-лабораторного обследования 175 пациентов, страдающих АИТП. Все обследованные пациенты находились на диспансерном учете и стационарном лечении в Томском областном эндокринологическом диспансере и в муниципальных лечебно-профилактических учреждениях г. Томска: МЛПМУ Поликлиника №8 и поликлиническое отделение МКЛПМУ Городская больница №3.

Основной контингент обследованных лиц с АИТП составили пациенты в возрасте от 30 до 45 лет - 72,6% (средний возраст 38,92±2,09 лет). Больных в возрасте от 18 до 30 было 14,8% от общего числа всех заболевших, в возрасте от 45 до 50 лет - 12,6%. Удельная доля мужчин и женщин в группе обследованных лиц до 30 лет была практически равной (6,8% и 8,0% соответственно), в группе старше 30 лет значительно преобладали женщины (75,4%).

Критериями включения больных с АИТП в исследование были: возраст 18-50 лет, верифицированный диагноз АИТ или болезни Грейвса (БГ), информированное согласие пациента на участие в исследовании.

Основанием для исключения больных с АИТП из исследования были аутоиммунные заболевания другой этиологии, обострение хронических воспалительных процессов, аллергические, наследственные и психические заболевания, выявленный в процессе обследования онкологический процесс в щитовидной железе, вакцинация в течение 6 месяцев, предшествующих исследованию, прием иммуномодулирующих препаратов, беременность и лактация, а также злоупотребление алкоголем и наркотическая зависимость.

Больные были разделены на 3 группы с учетом диагноза и функционального состояния щитовидной железы (ЩЖ).

Первую группу составили 78 пациентов, больных АИТ, с эутиреоидным

состоянием ЩЖ (11 мужчин и 67 женщин, стаж заболевания 7,3±1,3 года), не получавшие Ь-тироксин. Вторую группу - 51 больной АИТ (13 мужчин и 38 женщин) в фазе субклинического гипотиреоза (уровень тиреотропного гормона (ТТГ) повышен, свободного Т4 - в норме), на фоне приема ¡--тироксина (продолжительность заболевания с момента выявления 4,2±1,8 года).

Диагноз АИТ устанавливали на основании характерных клинических данных, результатов ультразвукового обследования, показателей функционального состояния ЩЖ, анализа содержания ТТГ, свободного Т4 и наличия в сыворотке крови больных антител к тиреопероксидазе - АТ-ТПО.

В третью группу вошли 46 человек (5 мужчин и 41 женщина, длительность заболевания 5,6+1,4 года), страдающих болезнью Грейвса. Пациенты были обследованы на фоне тиреотоксикоза.

Диагноз БГ устанавливали на основании характерных жалоб и клинической картины тиреотоксикоза, данных физикального обследования, наличия характерных ультрасонографических признаков и показателей гормонального статуса (низкий уровень ТТГ в сочетании с повышенной концентрацией свободной фракции Т4). При необходимости использовалась изотопная сцинтиография.

Для сравнения была сформирована группа, в которую вошли 50 практически здоровых доноров с аналогичными характеристиками по полу и возрасту. Обязательным условием включения в группу контроля было отсутствие заболеваний ЩЖ, аллергических и аутоиммунных болезней в анамнезе.

Материалом для исследования являлась периферическая кровь. Забор крови проводили из локтевой вены утром натощак в количестве 5 мл.

Относительное и абсолютное содержание незрелых и зрелых форм нейтрофилов в периферической крови определяли общепринятыми гематологическими методами [Меньшиков В.В., 1987]. На основе полученных результатов вычисляли лейкоцитарный индекс интоксикации по В.В. Чаленко [1998]. Цитохимическое исследование нейтрофилов проводили в мазках лейконцентрата цельной крови. Определение активности щелочной фосфатазы осуществляли по методу А.Г. Михеева с расчетом среднего цитохимического коэффициента (СЦК) [Меньшиков В.В., 1987]. Фагоцитарную активность нейтрофилов (процент активных нейтрофилов (ПАН), фагоцитарное число (ФЧ),

показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ)) оценивали по способности клеток поглощать и разрушать суточную культуру Staphylococcus aureus Н-209 [Меньшиков В.В., 1987].. Генерацию активных форм кислорода в нейтрофилах измеряли в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) методом спектрофотометрии [Пастушенков B.JI. и соавт., 1989]. Содержание нитритов в нейтрофилах определяли на основе цветной реакции с реактивом Грисса спектрофотометрическим способом [Green L.C. et al., 1982]. Для определения количества CD16+, CD18\ CD31+, CD62+, CD95+ нейтрофилов применяли метод непрямой поверхностной иммунофлуоресценции с использованием набора «Клоноспектр» («МедБиоСпектр», г. Москва). Выделение нейтрофилов из периферической крови проводили из стабилизированной венозной крови на двойном градиенте с плотностью 1,102 и 1,080 г/см3 фиколл-урографина (фиколл «Pharmacia Fine Chemical», Швеция; верографин «Шеринг АО», Германия) [Новиков Д.К., Новикова В.И., 1979]. Концентрацию жизнеспособных клеток подсчитывали в камере Горяева с помощью 0,5% раствора трипанового синего [Гольдберг Е.Д. и соавт., 1992]. Определение концентрации щелочной фосфатазы в сыворотке крови проводили кинетическим методом, основанным на взаимодействии 4-нитрофенилфосфата с НО и образованием фосфата и 4-нитрофеноксида. Определение аутоантител к тиреопероксидазе (АТ-ТПО), тиреотропного гормона (ТТГ), концентрации свободной фракции тироксина, лактоферрина, цитокинов (фактора некроза опухолей а (ФНО-а), интерлейкинов (ИЛ) 4, 8) и IgE в сыворотке крови осуществляли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью стандартных тест-ситем ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск), ООО «Протеиновый контур» (г. Санкт-Петербург) и «Хема-Медика» (г. Москва) в соответствии с инструкциями, предлагаемыми фирмами-производителями.

Результаты исследования обрабатывали с использованием стандартного пакета программ Statistica for Windows (2000, версия 6.0) фирмы Statsoft Inc. и пакета программ Microsoft Excel (2003) корпорации Microsoft. Для проверки гипотезы о нормальном законе распределения использовали тест Колмогорова-Смирнова. При нормальном распределении выборочных показателей для оценки статистической достоверности различий применяли тест Стьюдента для несвязанных выборок. Для

оценки статистической значимости различий между независимыми выборками с неподчиняющимся законам норм распределением использовали непараметрический критерий - Mann-Whitney U test. Для анализируемых показателей вычисляли среднее (X) и стандартную ошибку среднего (т). Результаты представляли также в виде медианы, верхнего (75%-го) и нижнего (25%-го) квартилей (Me (Q1-Q2)). Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05. Зависимость параметров в группах оценивали с помощью ранговой корреляции Спирмена. Корреляцию считали значимой при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ структуры болезней щитовидной железы за последние десятилетия свидетельствует об устойчивой тенденции к увеличению доли АИТ и диффузного токсического зоба (ДТЗ или болезнь Грейвса) среди тиреопатий, ведущим патогенетическим звеном которых является дисбаланс иммунной системы [Старкова Н.Т., 2002]. Известно, что клиническая картина АИТП, независимо от гормонального статуса, сопровождается признаками иммунологической недостаточности, такими как заболеваемость острыми респираторными вирусными инфекциями (ОРВИ) более 6 раз в год, рецидивы герпетической инфекции, в основе которых лежит патология врожденного и адаптивного иммунитета. Изучение морфофункциональных свойств нейтрофильных гранулоцитов, как компонента реакций доиммунного воспаления, представляется важным не только с точки зрения формирования инфекционных осложнений, но еще и в связи с тем, что изменение их свойств может выявляться задолго до клинической манифестации болезни и предрешать характер и тяжесть ее течения. При этом реакция нейтрофила, направленная на локализацию и элиминацию антигена, во многом зависит от силы и времени антигенного воздействия на иммунную систему и исходного уровня функциональной активности клеток [Тотолян A.A., Фрейдлин И.С., 2000; Пинегин Б.В., Маянский А.Н., 2007].

Структурно-метаболический статус полиморфно-ядерных гранулоцитов неразрывно связан с выполнением их профессиональных задач и складывается из активации, адгезии, хемотаксиса клеток, поглощения флогогена, его киллинга и расщепления [Потапнев М.П., 2002; Глазанова Т.В. и соавт., 2004].

Провоспалительная функция НГ обеспечивается функционированием сложной микробицидной системы, которая состоит из суммы ферментных и неферментных молекул, преформированных в гранулах (гидролитические ферменты, неферментные катионные белки), а также компонентов, вновь образуемых стимулированными клетками (оксиданты, возникающие в ходе респираторного взрыва) [Маянский А.Н., 1989; Пинегин Б.В., Маянский А.Н., 2007].

Известно, что непосредственному поглощению ряда антигенов предшествует их взаимодействие с опсонинами, ведущими из которых являются СЗЬ- и iC3b-компоненты комплемента и иммуноглобулины. На поверхности нейтрофилов они связываются с соответствующими рецепторами. Таким образом, снижение числа активно фагоцитирующих нейтрофилов и их поглотительной способности может быть результатом дефицита опсониновых рецепторов или факторов опсонизации [Маянский А.Н. и соавт., 1995; Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1995; Фрейдлин И.С., 2001].

Проведенное нами иммунофенотипирование полинуклеаров выявило гипоэкспрессию опсониновых рецепторов CD16 и CD18 на нейтрофилах у больных АИТП. При этом у больных с болезнью Грейвса снижение количества CD18-несущих НГ было менее выраженным, чем при АИТ в фазе гипотиреоза. Однако содержание в крови CD 16-позитивных гранулоцитов при болезни Грейвса было существенно ниже, чем при АИТ в фазе эутиреоза (табл. 1).

Установлено, что нейтрофильные рецепторы CR3 (CDlib/CD 18) и CR4 (CD1 lc/CD18) имеют значение в реализации не только фагоцитарных реакций, но и выполняют функцию адгезии. Вместе с LFA-1 (CD1 la/CD 18) молекулы CR3 и CR4 составляют семейство ßi-интегринов, без которых выход нейтрофилов из циркуляции и достижение ими очагов инфекции или воспаления невозможны [Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1995; Тотолян A.A., Фрейдлин И.С., 2000].

CD16 - низкоаффинный рецептор для Fc-комплексов, но не для мономерных IgG-антител, опосредующий элиминацию малых иммунных комплексов, обладающих высокой повреждающей активностью в виду их способности к длительной циркуляции в организме. Трансмембранная форма CD 16 связывает комплекс IgG с антигеном и опосредует IgG-зависимый фагоцитоз и антителозависимую клеточную цитотоксичность и, наряду с этим, дегрануляцию

НГ. При дефиците CD16 данные процессы нарушаются. Кроме того, установлено, что мембрана нейтрофилов освобождается от рецептора CD 16 в процессе апоптоза [Homburg С. et al., 1995]. Поскольку в процессе апоптоза уменьшается экспрессия данного рецептора, то определение последнего может служить критерием для установления числа апоптозных (с низкой экспрессией CD 16) нейтрофилов [Dransfield I. et al., 1994, Алексеев H.A., 2002].

Таблица 1

Субпопуляционный состав нейтрофилов периферической крови у здоровых доноров и больных аутоиммунными тиреопатиями, Х±т_

Группы обследованных лиц Количество нейтрофилов, экспрессирующих соответствующие CD-маркеры (в числителе — в в знаменателе - в абсолютных числах (х 109/л))

CD16 CD18 CD31 CD62L CD95

Здоровые доноры, п=25 43,85±4,09 84,71 ±6,75 20,50±1,50 17,50±2,26 18,50±3,42

1,38±0,12 2,67±0,16 0,64±0,17 0,55±0,24 0,58±0,24

Больные с болезнью Грейвса, п=25 34,46±3,56 рк<0,05 76,57±2,8б Рк<0,05 27,50±1,Е5 Рк<0,01 32,00±3,58 рк<0,05 36,53±4,56 Рк<0,01

1,10±0,22 Рк<0,05 2,44±0,21 Рк<0,05 0.88ЮД9 Рк<0,01 1,02±0,15 Рк<0,05 1,18±0,27 Рк<0,01

Больные с аутоиммунным тиреоидкгом В состоянии эутиреоза, п=43 38,54±3,14 Рк<0,05 pi<0.05 78,21±2,18 Рк<0,05 27,00±2,10 Рк<0,01 30,00±2,64 рк<0,001 29,85±3,43 Рк<0,01 р,<0,05

1,22±0,22 рк<0,05 Pi<0,05 2,48±0,18 Рк<0,05 0,87±0,13 Рк<0,01 0,95±0,19 рк<0,001 0,98±0,18 Рк<0,01 Pi<0,05

В состоянии гипотиреоза, п=24 35,76±438 Рк<0,05 73,64±3,45 Рк<0,05 Р2<0,05 25,00±1,95 Рк<0,05 27,00±3,12 рк<0,05 pi<0,05 28,95±2,В4 PiccO.OI Pi<0,05

1,12±0,18 рк<0,05 2.31 ±0,23 р,<0,05 Рз<0,05 0,78±0,16 pi<0,05 0,85±0,17 pi<0,05 Рз<0,05 0,91 ±0,21 Рк<0,01 Pi <0,05

Примечание. Здесь и далее: рк - уровень статистической значимости различий по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров, Р1 - у больных с аутоиммунным тиреоидитом (АИТ) и болезнью Грейвса, р2-у больных с АИТ в фазе эутиреоза и гипотиреоза.

В целом, гипоэкспрессия CD18 и CD16 на НГ, учитывая их важную роль в реализации фагоцитоза и элиминации иммунных комплексов, является негативным фактором, способствующим как формированию инфекционных осложнений, так и иммунокомплексному повреждению собственных тканевых структур организма.

Вместе с тем было показано, что у данной категории пациентов (с АИТ и болезнью Грейвса) обнаруживается повышенная концентрация ФНО-а и ИЛ-8 в крови, которые, как известно, способны индуцировать синтез адгезивных молекул на поверхности гранулоцитов [Потапнев М.П., Печковский Д.В., 1994; Славинский А.А., 2002]. В частности у всех пациентов с АИТП при проведении исследования

была определена гиперэкспрессия CD31 и CD62L на нейтрофилах (табл. 1).

CD31 (РЕСАМ-1) является молекулой интегринов, облегчающих трансмиграцию лейкоцитов после прочной адгезии через эндотелий. CD62L (L-селектин) взаимодействует с соответствующими лигандами и Е-селектином эндотелиальных клеток, вследствие чего происходит адгезия нейтрофилов к эндотелию сосудов [Караулов A.B. и соавт., 2007].

Существует мнение, что одним из дефектов фагоцитирующих клеток может являться не явное снижение количества того или иного фермента, участвующего в бактериальном киллинге, а нарушение синтеза его активных форм при раздражении клеток и связанная с этим функциональная их недостаточность [Бурая T.JI. и соавт., 1991]. При проведении цитохимического исследования НГ периферической крови обращало на себя внимание снижение внутриклеточной активности щелочной фосфатазы у пациентов с АИТП по сравнению с группой здоровых доноров. Вместе с тем, у больных с болезнью Грейвса уменьшение данного показателя было более выраженным, чем при АИТ. Сывороточная активность ЩФ положительно коррелировала с повышенной концентрацией ФНО-а в крови у больных с болезнью Грейвса (г=0,64; р=0,01) и пониженным количеством CD18-позитивных НГ при АИТ в фазе эутиреоза (г=0,66; р=0,01). Данное обстоятельство может служить проявлением компенсаторной функции ФНО-а, направленной на стимуляцию не только адгезии нейтрофилов, но и бактерицидных свойств сыворотки крови, и (что также вероятно) фактором, свидетельствующим о цитокинопосредованном замещении дефицита гранулоцитов, мигрировавших в зону аутоиммунного воспаления, морфологически зрелыми, но функционально неактивными клетками резервного пула. Объяснением этому может служить тот факт, что хотя уровень активности ЩФ и является одним из маркеров зрелости НГ (она наиболее значительна в зрелых клетках), на фоне снижения его в нейтрофилах в сочетании с дефицитом С018+-клеток (что можно было бы расценить как показатель «омоложения» популяции полимофноядерных лейкоцитов) лейкоцитарная формула (равно как и лейкоцитарный индекс интоксикации) не претерпевала выраженных отклонений от нормы.

Как известно, выраженными бактерицидными свойствами обладает лактоферрин, благодаря своей способности создавать среду, дефицитную по ионам

железа, которые необходимы для жизнедеятельности микроорганизмов, а также широкому набору других биологических качеств - бактериостатический, про- и антиоксидантный эффекты, активация синтеза белков, ДНК [Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993; Baveye S. et al., 1999; Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000; Zimekki J. et al., 2002; Samuelsen О et al., 2004]. В частности, лактоферрин индуцирует экспрессию эндотелиальными клетками Е-селектина, межклеточного адгезирующего фактора 1 ((1САМ-1) и синтез IL-8, конкурирует с хемокинами за их связывание с протеогликанами и последующее взаимодействие с лейкоцитами [Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2001; Ward S. et al., 2004].

При определении концентрации лактоферрина в сыворотке крови было выявлено значительное снижение (сравнительно с нормой) данного показателя у всех пациентов с АИТП, более значимое при АИТ (в 3-3,8 раза), чем при болезни Грейвса (в 2,7 раза). Вероятно, столь выраженное снижение концентрации лактоферрина в крови, в виду его модулирующей фагоцитоз функции, имеет определенное прогностическое значение, что подтверждается прямой корреляцией между концентрацией лактоферрина в крови и уровнем показателя завершенности фагоцитоза нейтрофилов (г=0,55; р=0,01) у всех больных с АИТ независимо от гормонального статуса.

Мощный биоагрессивной системой нейтрофилов является респираторный взрыв. Показано, что генерация активных форм кислорода (АФК) нейтрофилами происходит исключительно в активированном состоянии [Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993; Рябиченко Е.В. и соавт., 2000; Пак В.Г. и соавт., 2007]. Обнаруженные нами высокие показатели спонтанного и индуцированного НСТ-теста у больных АИТП свидетельствуют о гиперпродукции АФК, что соответствует данным литературы и служит показателем стимуляции кислородзависимой системы киллинга НГ, которая может быть направлена как против чужеродных объектов, так и собственных организменных структур при аутоиммунной патологии [Маянская С.Д., 1999; Мааск С. et al., 2003; Лутай М.И., 2004; Филиппов А.Е. и соавт., 2004].

По данным литературы, нейтрофилы экспрессируют индуцируемую-NO-синтазу, появляющуюся в первичных гранулах, в присутствии ИЛ-1 и ФНО-а [Проскуряков С.Я., Бикетов С.И., 2000; Ратникова Л.И. и соавт., 2002].

При оценке продукции оксида азота (по уровню нитритов) у пациентов с

АИТ и у пациентов с болезнью Грейвеа определялись разнонаправленные ее значения. Так, при болезни Грейвеа происходило увеличение данного показателя относительно группы здоровых лиц, а у пациентов с АИТ - наоборот, снижение. При этом у больных с болезнью Грейвеа определялась положительная корреляционная связь между содержанием нитритов и поглотительной способностью нейтрофилов (1=0,55; р=0,01) и, напротив, отрицательная - между содержанием нитритов и процентом активных нейтрофилов (г=-0,60; р=0,01).

Снижение концентрации нитритов в НГ при АИТ можно считать признаком истощения бактерицидного потенциала клеток. Кроме того, известно, что оксид азота выступает в роли ингибитора радикалов и таким образом оказывает протективное действие на клетки и ткани в условиях окислительного стресса. В этом аспекте в отношении контроля реакций свободнорадикального окисления низкое содержание нитритов в нейтрофилах, обусловленное, возможно, истощением Ж)-продукции на фоне длительно текущего патологического процесса (в среднем 6,5 лет), является отрицательным фактором. Вместе с тем, продукт взаимодействия супероксид-аниона с оксидом азота (в случае повышенного его образования) - пероксинитрит обладает высокой токсичностью (сильный окислитель, инактиватор ингибиторов протеиназ, супероксиддисмутазы, индуктор липопероксидации, разрывов ДНК и др.) [Меныцикова Е.Б. и соавт., 2006]. Таким образом, нарушение продукции N0 в нейтрофилах может быть фактором развития и прогрессирования аутоиммунного процесса как при АИТ (в случае ее снижения), так и при болезни Грейвеа (при ее активации).

Проведенное нами исследование фагоцитарного статуса НГ периферической крови у больных АИТП позволило выявить резкое снижение его параметров сравнительно с группой здоровых доноров, а именно процента активных (т.е. фагоцитирующих) нейтрофилов и поглотительной способности клеток, в большей степени выраженное при болезни Грейвеа. Любопытно, что переваривающая функция нейтрофилов при этом возрастала (табл. 2). Вероятной причиной этому могла служить активация кислородзависимой системы клеток (по данным НСТ-теста) и, возможно, щелочной фосфатазы (ЩФ) с расходованием фермента, что отчасти подтверждается обратной корреляционной связью (г=—0,81; р=0,01) между активностью ЩФ и ПЗФ в нейтрофилах в группе пациентов с болезнью Грейвеа.

Таблица 2

Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови у здоровых доноров и больных аутоиммунными тиреопатиями, Х±т

Группы обследованных лиц Показатели

Количество активных нейтрофилов Фагоцитарное число Показатель завершенности фагоцитоза, %

% х10у/л

Здоровые доноры, п=25 58,45+1,85 1,85+0,15 5,10±0,20 62,35±1,88

Больные с болезнью Грейвса, п=27 39,40±2,26 Рк<0,001 1,26+0,45 Рк<0,001 3,90±0,35 рк<0,01 74,56±0,47 рк<0,01

Больные с аутоиммунным тиреоидитом В состоянии эутиреоза, п=35 44,00±2,64 Рк<0,001 Pi<0,05 1,41 ±0,36 рк<0,001 pi<0,05 4,84+0,34 Рк<0,05 Pi <0,001 69,93+1,12 Рк<0,01 pi<0,05

В состоянии гипотиреоза, п=25 43,25+2,78 рк<0,001 1,36+0,35 рк<0,001 4,78±0,45 Рк<0,05 Pi<0,01 71,35±0,68 Рк<0,05 Pi <0,05

Известно, что активность фагоцитоза в первую очередь определяется адгезивными свойствами клеток, которые зависят от наличия на поверхности последних специфических рецепторов (Fey-, СЗЬ-рецепторов и др.) [Козлов И.Г. и соавт., 1995; Фрейдлин И.С., Назаров П.Г., 1999; Нагоев Б.С., Цагова М.Х., 2008]. В связи с этим выявленный в результате проведенного нами исследования факт угнетения фагоцитоза является вполне закономерным, поскольку у больных АИТП отмечалось сочетанное снижение числа CD16- и CDlS-позитивных клеток (табл. 1). Зависимость такого рода подтверждают выявленные отрицательные корреляции количества CD 16-позитивных нейтрофилов с ПЗФ при АИТ в фазе эутиреоза (г=-0,57; р=0,01), а также с ПАН при болезни Грейвса (г=-0,56; р=0,01).

Несмотря на четкую функциональную специализацию, модулировать активность полинуклеарных фагоцитов могут не только вещества микробного происхождения, иммунные комплексы, продукты распада клеточного и тканевого происхождения, гормоны, но также ряд секретируемых иммунокомпетентными клетками биологически активных веществ - цитокины и иммуноглобулин (Ig) Е [Маянский А.Н., 1993; Васильева Г.И. и соавт., 2000; Глазанова Т.В. и соавт., 2004].

При определении концентрации общего IgE было выявлено увеличение данного показателя у пациентов с АИТП. Известно, что IgE может индуцировать

дегрануляцию тучных клеток с выделением из них гистамина, мононуклеарных фагоцитов с выделением из них фактора, ингибирующего хемотаксис нейтрофилов, т.е. медиаторов воспаления, угнетающих миграционную и фагоцитарную активность нейтрофилов [Алексеев H.A., 2002]. Негативное влияние гипер1{*Еемии на функциональную активность НГ при АИТ фаза эутиреоза подтверждается наличием отрицательной корреляции между уровнем общего IgE в сыворотке крови и поглотительной способностью нейтрофилов (ФЧ) (г=-0,47; р=0,01) и между уровнем общего IgE в сыворотке крови и количеством С018-презентирующих клеток (г=-0,56; р=0,01).

Наряду с этим, было обнаружено, что концентрация в сыворотке как провоспалительных цитокинов (ИЛ-8 и ФНО-а), так и противовоспалительного ИЛ-4 у больных АИТП повышалась (табл. 3). При этом у больных АИТ уровни ИЛ-4 (при эу- и гипотиреозе) и ФНО-а (при эутиреозе) в сыворотке крови были выше, а концентрация ИЛ-8, напротив, ниже, чем у больных с болезнью Грейвса (табл. 3).

Таблица 3

Содержание цитокинов в сыворотке крови у здоровых доноров и больных аутоиммунными тиреопатиями, Ме (01-02)

Цитокины Больные аутоиммунным тиреоидитом Больные с болезнью Грейвса, п=20 Здоровые доноры, п=20

В состоянии эутиреоза, п=35 В состоянии гипотиреоза, п=15

Ме Q1-Q2 Ме Q1-Q2 Ме Q1-Q2 Ме Q1-Q2

ИЛ-4, пг/мл 21,77 Рк<0,001 р,<0,05 13,6227,72 23,45 Рк<0,001 Pi<0,05 15,6425,12 18,38 Рк<0,001 11,1421,27 2,47 2,102,74

ИЛ-8, пг/мл 55,35 Рк<0,001 Pi<0,001 49,8763,07 52,41 Рк<0,001 р,<0,001 49,4358,34 69,70 Рк<0,001 66,7373,60 2,80 2,103,20

ФНО-а, пг/мл 8,59 Рк<0,001 р,<0,01 8,2212,25 8,43 Рк<0,001 8,0211,37 7,76 Рк<0,001 1,0611,87 1,50 1,052,20

Примечание. ИЛ - интерлейкин, ФНО - фактор некроза опухолей.

Продукция ФНО-а непосредственно взаимосвязана с выраженностью аутоиммунного процесса и уровнем тиреоидных гормонов, которые, в свою очередь, находятся под влиянием синтеза ФНО-а. Трийодтиронин (Тз) способствует увеличению уровня ФНО-а в сыворотке крови [Fernandez V. et al., 2006]. Этот факт, по-видимому, и объясняет несколько более высокое содержание исследуемого цитокина у пациентов с эутиреоидным состоянием щитовидной железы по сравнению с показателем у пациентов в состоянии гипотиреоза, при котором

содержание Т3 понижается. ФНО-а способствует запуску аутоиммунного процесса в щитовидной железе, так как обладает способностью усиливать и (или) вызывать аберрантную экспрессию молекул адгезии и антигенов гистосовместимости (НЬА) II класса на поверхности тиреоцитов, что может приводить к нарушению процессов антигенного распознавания [Глазанова Т.В. и соавт., 2004]. Показано, что при АИТП происходит контакт с собственными антигенами тиреоцита антигенраспознающих Т-лимфоцитов, что ведет к их активации с последующей выработкой ими ФНО-а, который способен влиять на тиреоидный метаболизм [Каэтивзеп А.К. Й а1„ 1993].

ИЛ-4, как показано, является функциональным антагонистом ИЛ-2 и обладает рядом противовоспалительных эффектов: усиливает опосредованный ТЪ2-клетками гуморальный иммунный ответ, синтез и секрецию активированными В-лимфоцитами, подавляет освобождение цитокинов воспаления (ФНО-а, ИЛ-1, ИЛ-8) [Глазнова Т.В., Бубнова Л.Н., 2004]. В свете этого увеличение концентрации ИЛ-4 в сыворотке крови у больных АИТП может расцениваться в качестве фактора контроля активности клеточно- и цитокинопосредованного аутоиммунного повреждения щитовидной железы и функциональной активности НГ, как основных эффекторов воспаления. В настоящем исследовании это подтверждалось обратной корреляционной связью средней силы (г=-0,62; р=0,01) между уровнем ИЛ-4 и ПЗФ НГ в группе пациентов с болезнью Грейвса.

В литературе ИЛ-8 и ФНО-а обозначены как основные индукторы респираторного ответа и дегрануляторы нейтрофилов [Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1995; Тотолян А.А., 2001; Сенников С.В. и соавт., 2004]. Известно, что ИЛ-8 (подобно ФНО-а) в 10 раз увеличивает экспрессию на поверхности нейтрофилов адгезивных молекул семейства Рз-инте гринов, главным образом С011Ь/СО18, и повышает в 200 раз их аффинитет к связываемым лигандам (1САМ-1,2), усиливает адгезивность НГ, их хемотаксис и облегчает тем самым миграцию клеток в очаг повреждения. Кроме того, он стимулирует бактерицидность нейтрофилов, респираторный взрыв, синтез лейкотриенов [Глазнова Т.В., Трунин Е.М., 2004, ЕдисЫ К., 2001]. Вероятно, этим объясняется зафиксированная в настоящей работе положительная корреляция (г=0,50; р=0,01) между концентрацией ИЛ-8 и процентом активных нейтрофилов в группе пациентов с АИТ фаза эутиреоза.

В настоящее время патогенез большинства аутоиммунных расстройств интерпретируется в контексте нарушений апоптотической регуляции иммунокомпетентных клеток. Дефекты апоптоза, в основном Fas-зависимых его механизмов, выявлены при многих аутоиммунных заболеваниях, в том числе при аутоиммунной патологии щитовидной железы [Капулер О.М. и соавт., 2006; Рогалева A.B., 2009].

Процесс апоптоза выполняет ключевую роль на различных этапах функционирования иммунной системы, а также в процессе пролиферации и созревания НГ [Andricuola М., 2001; Владимирская Е.Б., 2002; Мушкамбаров H.H., 2003; Danial N.N., 2004].

Как известно, Fas-антиген (CD95) является мембранным клеточным рецептором, индуцирующим апоптоз лейкоцитов и клеток ряда других линий при контакте с соответствующим лигандом (Fas-L). По результатам проведенного исследования, обнаружено увеличение содержания числа С095-рецепторнесущих НГ у больных АИТП. У пациентов с АИТ этот показатель в среднем составлял 29,85±3,43% при эутиреозе и 28,95±2,84% при гипотиреозе, при гиперфункции щитовидной железы - 36,53±4,56%, что было достоверно выше, чем у здоровых доноров (табл. 1). Это позволяет утверждать, что у больных АИТП отмечается повышенная предрасположенность НГ к апоптозу, что, на наш взгляд, с одной стороны, может быть проявлением защитной реакции, направленной на устранение «излишка» активных нейтрофилов, формирование которого усиливает повреждение тканей, с другой - причиной инфекций, осложняющих течение АИТП. Кроме этого, в виду того, что при взаимодействии Fas-R с Fas-L (уровень экспрессии которого, по данным литературы, при АИТП многократно увеличивается) «предуготовленность» лейкоцитов к апоптозу реализуется в гибель клетки, увеличение числа CD95+ НГ при АИТП вполне обоснованно можно расценивать в качестве косвенного признака активации программированной гибели клеток [Долгушин И.И., 2001].

Также повышение НГ, экспрессирующих CD95, является закономерным проявлением активации иммунной системы, характерным для иммунновоспалительного процесса [Бойчук С.В., Мустафин И.Г., 2001]. Это подтверждается прямой корреляцией между количеством С095-экспрессирующих

нейтрофилов и уровнем антител к тиреопероксидазе (АТ-ТПО) в крови (г=0,67; р=0,01) при АИТ в фазе эутиреоза.

Ведущую роль в регуляции апоптоза клеток иммунной системы играют цитокины (интерлейкины, интерфероны). Цитокининдуцированный апоптоз, проявляющийся индукцией экспрессии на поверхности клеток маркерных апоптозных молекул, является достаточно сложным механизмом.

Предполагается, что ФНО-а вызывает апоптоз НГ только при определенных условиях и только определенных их фракций. Воздействуя на нейтрофилы человека, ФНО-а способен индуцировать «классический» каспазозависимый апоптоз и каспазонезависимую смерть клетки [Потапнев М.П., 2002; Рыжов С.В., Новиков В.В.; 2002; Маянский H.A. и соавт., 2004]. Таким образом, представленные данные позволяют рассматривать повышение содержания ФНО-а в крови у больных АИТП в качестве фактора модуляции численности НГ и критерия оценки активности аутоиммунного воспаления.

Поскольку при болезни Грейвса содержание ИЛ-8 в сыворотке крови было выше, чем при АИТ, это позволяет думать о том, что активность нейтрофилов и уровень восприятия ими разного рода (в том числе апоптогенных) стимулов у данной категории больных также могли быть более выраженными, чем, вероятно, и объясняется тот факт, что степень «предуготовленности» НГ к апоптозу (число С095+-клеток) при гипертиреозе превышала таковую при АИТ (табл. 1).

Таким образом, по результатам исследования выявлены существенные изменения метаболического статуса нейтрофилов, проявляющие зависимость по отношению к функциональному состоянию щитовидной железы, а также к содержанию в крови IgE и цитокинов с про- и противовоспалительной активностью (рис. 1). Показана также зависимость апоптоза нейтрофилов от активности аутоиммунного процесса при АИТ.

Рис. 1. Патогенетические факторы дисфункции нейтрофилов при аутоиммунных тиреопатиях по данным литературы и результатам

собственных исследований (полужирный курсив). Примечание. ФИО - фактор некроза опухолей, ИЛ - интерлейкин, ПАН - процент активных (фагоцитирующих) нейтрофилов, ФЧ - фагоцитарное число, ЩФ - щелочная фосфатаза, CD - claster of differentiation (кластеры дифференцировки)

ВЫВОДЫ:

1. Течение аутоиммунного тиреоидита и болезни Грейвса у больных в возрасте 18-50 лет сопровождается сходными изменениями экспрессии поверхностных CD-антигенов, секреторной (за исключением продукции оксида азота) и фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов крови, степень выраженности которых зависит от функционального состояния щитовидной железы (эу-, гипо-, гипертиреоз).

2. Уровень нитритов в нейтрофильных гранулоцитах при аутоиммунных тиреопатиях претерпевает разнонаправленные изменения - повышается на фоне гиперфункции щитовидной железы при болезни Грейвса и, напротив, снижается при аутоиммунном тиреоидите в фазе эу- и гипотиреоза.

3. Показатели адгезивной, поглотительной, переваривающей и ферментативной активности нейтрофилов при аутоиммунных тиреопатиях сопряжены с увеличением содержания в крови иммуноглобулина Е, про- (интерлейкин 8, фактор некроза опухолей а) и противовоспалительных цитокинов (интерлейкин 4).

4. Гиперэкспрессия CD95-airmrena на нейтрофилах при аутоиммунных тиреопатиях, характеризующая повышенную предрасположенность клеток к апоптозу, в большей степени выражена при болезни Грейвса и коррелирует с высоким уровнем антител к тиреопероксидазе в сыворотке крови при аутоиммунном тиреоидите в фазе эутиреоза.

5. Нарушения фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов крови при аутоиммунных тиреопатиях определяются уменьшением числа способных к фагоцитозу клеток и угнетением их поглотительной активности в связи с дефицитом поверхностных рецепторов к опсонинам (CD 16, CD 18). Они более значительны при болезни Грейвса, чем при аутоиммунном тиреоидите и сочетаются с компенсаторным усилением переваривающей способности клеток и гиперэкспрессией адгезивных молекул CD31, CD62L.

6. Секреторный дисбаланс нейтрофилов периферический крови при аутоиммунных тиреопатиях проявляется снижением концентрации лактоферрина (минимальной при эутиреозе), дефицитом активности щелочной фосфатазы в клетках (при увеличении активности фермента в сыворотке

крови) и гиперпродукцией активных форм кислорода, более значимой при тиреотоксикозе.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Популяционный состав лимфоцитов и уровень инфицированное™ вирусами группы герпеса у больных аутоиммунным тиреоидитом / Е.Б. Кравец, О.И. Уразова,

B.В. Новицкий, A.B. Рогалева, Ю.В. Недосекова, В.Н. Кузнецова, O.A. Васильева, Е.А. Мифтофутдинова // Клиническая и экспериментальная тиреоидология. - 2006. -Т. 2,№4.-С. 43-46.

2. Степень инфицированности вирусами группы герпеса больных с аутоиммунным тиреоидитом / Ю.В. Недосекова, A.B. Рогалева, О.И. Уразова, В.Н. Кузнецова // Материалы межвузовской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 19-20 апреля 2006). - СПб., 2006. -

C. 80-82.

3. Апоптоз нейтрофилов и иммунорегуляторные цитокины при аутоиммунных тирепатиях / Е.Б. Кравец, О.И. Уразова, В.В. Новицкий, В.Н. Кузнецова, A.B. Рогалева // Клиническая и экспериментальная тиреоидология. - 2007. - Т. 2, №4. -С. 49-53.

4. Функциональный статус нейтрофилов крови при аутоиммунном тиреоидите / О.И. Уразова, Е.Б. Кравец, В.В. Новицкий, В.Н. Кузнецова, A.B. Рогалева // Клиническая лабораторная диагностика. - 2007. - №8. - С. 46-47.

5. Оценка уровня ИЛ-2 у пациентов с различными формами аутоиммунного тиреоидита / Ю.В. Недосекова, A.B. Рогалева, В.Н. Кузнецова и др. // Материалы межвузовской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 24-25 апреля 2007). - СПб., 2007. - С. 102-103.

6. Апоптоз лимфоцитов крови у больных аутоиммунными тиреопатиями / О.И. Уразова, Е.Б. Кравец, В.В. Новицкий, A.B. Рогалева, Т.Е. Будкина, O.A. Синюкова, Ю.В. Недосекова, В.Н. Кузнецова // Медицинская иммунология. - 2008. - Т. 10, №2/3. - С. 187-192.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АИТ - аутоиммунный тиреоидит

АИТП - аутоиммунные тиреопатии

АТ-ТПО - антитела к тиреопероксидазе

БГ - болезнь Грейвса

ИЛ - интерлейкин

НГ - нейтрофильные гранулоциты

ПАН - процент активных нейтрофилов

СОД - супероксиддисмутаза

Т3 - трийодтиронин

Т4 - тироксин, тетрайодтиронин

ТТГ - тиреотропный гормон

ФНО - фактор некроза опухолей

ФЧ - фагоцитарное число

ЩЖ - щитовидная железа

ЩФ - щелочная фосфотаза

1}гЕ - иммуноглобулин Е общий

s(

V,

Заказ 71. Тираж 100 экз. Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники. 634050, г. Томск, пр. Ленина, 40. Тел. (3822)533018.