Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка технологии суппозиториев, содержащих активные компоненты облепихи крушиновидной и стальника полевого

ГАРАНИЧЕВА ОКСАНА ВАСИЛЬЕВНА

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ СУППОЗИТОРИЕВ, СОДЕРЖАЩИХ АКТИВНЫЕ КОМПОНЕНТЫ ОБЛЕПИХИ КРУШИНОВИДНОЙ И СТАЛЬНИКА

ПОЛЕВОГО

14.04.01 - ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

2 4 033 2311

ПЯТИГОРСК 2011

4856124

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: Кандидат фармацевтических наук, профессор

Погорелое Виктор Иванович Официальные оппоненты: Доктор фармацевтических наук, профессор

Кузякова Людмила Михайловна Доктор фармацевтических наук, профессор Оганесян Эдуард Тоникович Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская химико-фармацевтическая академия»

Защита состоится 16 марта 2011 года в " ^ часов на заседании Диссертационного совета Д 208.069.01 при ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава» (357532, Ставропольский край, Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава» (357532, Ставропольский край, Пятигорск, пр. Калинина, 11)

Общая характеристика работы

Актуальность темы

Одной из проблем медицины является лечение длительно текущих заболеваний, часто сопровождающихся рядом осложнений, приводящих к необходимости хирургического вмешательства. К таким заболеваниям относится геморрой - одно из самых распространенных колопроктологических заболеваний, которым страдают в среднем 120 человек из 1000, а его доля в общей структуре патологии прямой кишки составляет почти 40%.

Для курсового консервативного лечения нетяжелого и средней тяжести геморроя в основном применяют флеботропные лекарственные средства. Среди них следует отметить рецептурные лекарственные средства природного происхождения, содержащие диосмин или его комбинацию с гесперидином, которые уменьшают венозный застой, улучшают микроциркуляцию. Среди безрецептурных ангиопротекторов и венотоников наиболее широко применяются троксерутин, эсцин и настойка стальника.

Контент - анализ ассортимента лекарственных препаратов для лечения геморроя, представленного на фармацевтическом рынке России, показал, что при лечении данной патологии используют различные лекарственные формы - суппозитории (40%), мази и гели (9%), таблетки (22%), капсулы (6%), порошки (5%), масла (6%), капли (5%), суспензии и растворы (5%), а так же аэрозоли (2%). Из них для перорального применения используется 37% наименований, а 63% для ректального, при этом большая часть приходится на суппозитории. При этом на долю отечественных препаратов приходится всего 20%.

В консервативной терапии геморроя монотерапия часто не позволяет достичь необходимого эффекта. Как показывает медицинская практика, чаще всего приходится одновременно использовать несколько лекарственных средств. Это наблюдается в тех случаях, когда геморрой сочетается с заболеваниями аноректапьной области: криптитом, проктитом, анальной трещиной, так как применение только ангиопротекторов в данном случае не приводит к выздоровлению, что обуславливает необходимость комбинации ангиопротекторов с

репарантами - препаратами, содержащими масло печени акулы, масло плодов облепихи.

Таким образом, проблема поиска новых, отечественных, эффективных комплексных средств для лечения геморроя является актуальной. Перспективным направлением является комбинация ангиопротекторов и репарантов, в частности активных компонентов стальника полевого (комплекс биологически активных веществ обеспечивает капилляроукрепляющее действие) и облепихи крушиновидной (комплекс биологически активных веществ обладает репаративным действием), с целью получения препаратов в форме суппозиториев. Цели и задачи исследования

Целью диссертационной работы является разработка технологии, состава, а также стандартизация комбинированных и двухслойных суппозиториев, содержащих биологически активные вещества стальника полевого корней и облепихи крушиновидной плодов.

Для реализации поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить факторы, влияющие на процесс экстракции стальника полевого корней. Выбрать оптимальный метод экстрагирования данного вида сырья. Разработать технологию и нормы качества стальника полевого корней экстракта густого;

2. Разработать состав и технологию суппозиториев со стальника полевого корней экстрактом густым на основании технологических и биофармацевтических исследований. Провести стандартизацию полученных суппозиториев;

3. Изучить возможность использования суппозиторных основ для экстракции липофильных компонентов облепихи крушиновидной плодов. Разработать технологию экстракции суппозиторной основой облепихи крушиновидной плодов новым методом - репрессованием. Провести технологические исследования по получению суппозиториев с липофильным извлечением облепихи крушиновидной плодов;

4. Разработать оптимальный состав комбинированных суппозиториев, содержащих биологически активные вещества стальника полевого корней и

4

облепихи крушиновидной плодов. Провести биофармацевтические исследования разрабатываемой лекарственной формы в опытах in vitro. Провести оценку качества и исследовать стабильность комбинированных суппозиториев в процессе длительного хранения;

5. Провести технологические исследования по возможности создания двухслойных суппозиториев, содержащих активные компоненты стальника полевого корней и облепихи крушиновидной плодов;

6. Определить безопасность разработанных лекарственных форм: установить раздражающую активность суппозиториев методом биологического тестирования in situ и in vivo, провести исследования острой и хронической токсичности;

7. Провести фармакологические исследования разработанных суппозиториев: изучить их капилляроукрепляющее (местное и резорбтивное), регенеративное, противоотечное (местное и резорбтивное) действие;

8. Разработать проект нормативной документации на полученные комбинированные суппозитории.

Научная новизна

Научная новизна исследования заключается в следующем:

- решена актуальная для фармацевтической технологии проблема создания комбинированных суппозиториев, сочетающих в себе липофильные (извлечение облепихи крушиновидной плодов) и гидрофильные (стапьннка полевого корней экстракт густой) компоненты природного происхождения, за счет образования твердых эмульсионных композиций;

-предложено сочетание в одной лекарственной форме средств для лечения геморроя, обладающих как местным и резорбтивным ангиопротекторным, так и репаративным действием;

- показана возможность и технологически решена задача использования суппозиторных основ в качестве экстрагентов облепихи крушиновидной плодов - с целью получения извлечения, обогащенного биологически активными веществами, которое может являться как самостоятельным лекарственным препаратом, так и служить основой для получения комбинированных суппозиториев.

Практическая значимость

Изучены факторы, влияющие на процесс экстракции биологически активных веществ из стальника полевого корней, что позволило выбрать оптимальный метод экстрагирования для данного вида сырья и получить густой экстракт методом реперколяции в батарее из трех перколяторов, при соотношение сырье: экстрагент (1:5). На основании комплекса проведенных технологических, биофармацевтических исследований разработаны состав, технология и показатели качества для суппозиториев со стальника полевого корней экстрактом густым, что позволяет расширить ассортимент антигеммороидальных лекарственных средств. На основании изучения различных факторов, влияющих на процесс извлечения биологически активных веществ из облепихи крушиновидной плодов твердыми липофильными суппозиторными основами, разработана технология получения указанного извлечения методом репрессования, что позволяет обеспечить высокую эффективность экстракции и получить суппозиторную основу с заданным содержанием биологически активных веществ и хорошими технологическими свойствами.

Разработан оптимальный состав и технология комбинированных суппозиториев, содержащие активные компоненты стальника полевого корней и облепихи крушиновидной плодов. На основании результатов исследований разработаны двухслойные суппозитории с разделением активных компонентов стальника полевого корней (внутренний слой) и облепихи крушиновидной плодов (внешний слой), что позволяет расширить ассортимент лекарственных форм антигеммороидальных лекарственных средств.

Уровень внедрения результатов исследования

На основании проведенных исследований разработаны ТУ и ТИ, предложен проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) на лекарственный препарат «суппозитории с экстрактом стальника и маслом облепихи», получен акт апробации от ООО «Бивитекс» г.Нальчик. Акт внедрения от 16.04.10г.

Связь задач исследования с планом НИР учреждения, где выполнена диссертация

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на 64-ой и 65-ой региональных конференциях по фармации «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, январь 2009, 2010г.), и на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики» (г. Владикавказ, октябрь 2009 г.).

Публикации

По теме работы опубликовано 8 работ, в том числе 3 работы в изданиях, рекомендованных ВАК.

На защиту выносятся

1. Результаты исследований по выбору экстрагента и определению основных параметров экстракции для стальника полевого корней - при получении экстракта густого. Обоснование состава, технологии и стандартизации суппозиториев со стальника полевого корней экстрактом густым.

2. Результаты исследования процесса экстрагирования облепихи крушиновидной плодов суппозиторными основами.

3. Обоснование состава, технологии и стандартизации комбинированных суппозиториев с активными компонентами стальника полевого корней и облепихи крушиновидной плодов на эмульсионной основе.

4. Обоснование и разработка состава, технологии и стандартизации двухслойных суппозиториев с активными компонентами стальника полевого корней и облепихи крушиновидной плодов.

5. Результаты исследования противовоспалительной, ранозаживляющей и капилляроукрепляющей активности суппозиториев с активными компонентами стальника полевого корней и облепихи крушиновидной плодов на эмульсионной основе.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 154 страницах машинописного текста, одержит 39 таблиц, 21 рисунок, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), дной главы, посвященной материалам и методам исследований, трех глав обственных исследований, общих выводов, списка литературы и приложений.

7

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследований Лекарственное растительное сырье (стальника полевого корни, облепихи крушиновидной плоды), экстрагенты и вспомогательные вещества, использованные для получения суппозиториев, по показателям качества отвечали требованиям ГФ XII, ФС или соответствующей НД. В работе использованы различные методы и приборы для анализа лекарственного растительного сырья, полупродуктов (извлечение и экстракт густой стальника полевого корней, липофильное извлечение облепихи крушиновидной плодов), и суппозиториев на их основе. Обнаружение основных групп биологически активных веществ и изучение их качественного и количественного состава в лекарственном растительном сырье, а также в полученных извлечениях и разработанных на их основе суппозиториях проводили методами: спектрофотометрии (СФ), тонкослойной (ТСХ) и бумажной (БХ) хроматографии. Валидационную оценку методик количественного определения проводили в соответствии с ОФС «Вапидация фармакопейных методов».

В соответствии с требованиями ГФ XII были определены следующие показатели: для суппозиториев - время растворения, температурный интервал и

время полной деформации, для извлечения стальника полевого корней - плотность,

i

для экстракта густого - содержание влаги.

Для изучения высвобождения активных компонентов стальника полевого корней - изофлавоноидов, использовали метод диализа через полупроницаемую мембрану; для определения степени высвобождения каротиноидов использовали разработанный в ПГФА метод (Муравьев И.А., 1987), учитывающий особенности структуры живой клетки.

Фармакологические исследования проводили в соответствие с Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, 2000.

Статистическую обработку результатов экспериментов проводили с помощью программ Matead 13 Statistica 6.0 и в соответствии с требованиями НД.

Разработка технологии получения, показателей и норм качества стальника полевого корней экстракта густого и суппозиторпев на его основе Определение основных параметров экстракции стальника полевого корней

8

Одним из основных факторов, влияющих на полноту извлечения биологически активных веществ является правильно подобранный экстрагент. Нами был изучен процесс экстрагирования стальника полевого корней водой (№1), спиртом этиловым 20% (№2), 40% (№3), 70 (№4), 90% (№5), 96% (№6), а также водными (№7) и водно-спиртовыми (40% этиловый спирт +ПАВ - №8, 70% этиловый спирт +ПАВ - №9) растворами ионногенного поверхностно-активного вещества (0,5% раствор додецилсульфата натрия). В качестве параметра для сравнительной характеристики эффективности изучаемых экстрагентов, было выбрано количество извлекаемых изофлавоноидов (в пересчете на ононин), как основной группы биологически активных веществ. Анализ полученных извлечений проводили спектрофотометрическим методом при длине волны 260 нм (рисунок I).

Рисунок 1 - Количественное содержание изофлавоноидов в извлечениях, в пересчете на ононин в зависимости от экстрагента

Приведенные данные анализа свидетельствуют, что максимальное содержание изофлавоноидов наблюдается в извлечении полученном с использованием спирта этилового 70% и составляет 3,20%. Использование ионогенных поверхностно-активных веществ, а именно додецилсульфата натрия, не обеспечивает более

! высокую степень извлечения изофлавоноидов (3,15%, 3,09%), но снижает его

!

качество (извлечение становится мутным, что приводит к необходимости применения дополнительных технологических операций-длительного отстаивания, фильтрации), поэтому, применение ПАВ в данном случае нецелесообразно.

Оптимальный размер частиц сырья стальника полевого корней определяли по | количественному содержанию изофлавоноидов, в извлечении полученном путем экстракции 70% спиртом этиловым сырья с размером частиц проходящих сквозь сито с диаметром 1,2,3,4,5,6 мм.

Установлено, что максимальное содержание изофлавоноидов наблюдается в , извлечении из сырья с размером частиц, проходящих сквозь сито с диаметром 1мм

(3,20%). Но при таком чрезмерно тонком измельчении сырье слеживается, что затрудняет процесс продвижения экстрагента и как следствие экстракцию. Поэтому, в дальнейшей работе мы использовали корни стальника полевого с диаметром частиц 1мм — 2 мм.

Следующим важным фактором экстракции является время наступления динамического равновесия системы. Определение проводили в течение 32 часов, при этом отбирая пробы каждые 4 часа. В полученных извлечениях определяли количественное содержание изофлавоноидов (рис. 2).

Рисунок 2 - График зависимости выхода изофлавоноидов от времени экстракции (представлены средние результаты для шести серий)

Как видно на рисунке 2, оптимальным временем настаивания можно считать 20 часов, так как дальнейшее увеличение времени экспозиции не приводит к значительному приросту выхода изофлавоноидов.

На следующем этапе исследований были установлены основные технологические характеристики сырья (таблица 1) и рассчитана эффективность различных способов экстрагирования (таблица 2). Для мацерации оптимальным будет соотношение сырье : экстрагент (1:5), данное соотношение (1:5) оптимально и для ремацерации, при этом наиболее перспективным является проведение 3 ступеней экстракции. Для реперколяция как с завершенным, так и незавершенным циклом наибольшая эффективность метода достигается при использовании либо 9 -10 перколяторов при соотношении сырье : экстрагент 1:2, либо при использовании батареи из трех перколяторов, но соотношении сырье: экстрагент (1: 5).

Анализируя предельные возможности каждого метода, можно сделать вывод, что по результатам теоретических расчетов наиболее перспективным для практического применения является метод реперколяции (рисунок 3).

1Д2-—1-Д4------1Д6

4 8 12 16 20 24 28 32 Время настаивания, час

Таблица 1 - Результаты определения технологических характеристик стальника полевого корней

Коэффициент Обозначение, размерность Значение коэфффициента

Коэффициент поглощения сырья Кп, см^/г 1,65

Коэффициент образования внутреннего сока К, см3/г 2,01

Коэффициент увеличения объема при растворении экстрактивных веществ г, см'*/г 0,38

Насыпная масса у, г/см"1 0,32

Коэффициент наполнения сухого сырья /, см3/г 2,17

Коэффициент наполнения набухшего сырья ф, см /г 0,0343

Коэффициент вытеснения сырья Д, см^/г 0,9864

50

-е--е-

И

Мацерация Ремацерация Реперколяция с Реперколяция с

завершенным незавершенным циклом циклом

Рисунок 3 - Результаты теоретических расчетов предельных возможностей различных методов экстрагирования.

Далее было проведено изучение дополнительных технологических приемов влияющих на эффективность различных методов экстрагирования (таблица 3), в частности использовано ускорение процесса мацерации посредством перемешивания сырья и экстрагента (скорость вращения 120 об/мин.) и реперколяция с делением сырья на неравные части. Процесс мацерации занимал 24 часа, содержание изофлавоноидов в готовом извлечении составило 0,21%, | эффективность метода -41% , при использовании перемешивания, удалось сократить | время экстракции до 3 часов, но при этом эффективность метода составила - 43% [ ,при использовании метода реперколяции с завершенным циклом удалось получить | извлечение с содержанием изофлавоноидов 0,42%, и эффективность метода достигла - 82%.

I

11

Таблица 2 - Определение оптимальных параметров экстрагирования сырья

Способ экстракции Соотношение Эффективность экстракции в зависимости от числа диффузоров (или ступеней экстракции), %

фаз 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Мацерация 1 1 33,1

1 2 49,7

1 5 71,2

Ремацерация 1 1 33,1 36,2 37,1 38,0 38,3 38,5 38,8 39,0 39,2 39,4

1 2 49,7 55,3 58,2 59,5 60,3 60,8 61,4 61,9 62,5 63,0

! 5 71,2 81,8 74,1 84,8 86,1 86,8 87,2 87,4 87,7 87,9

Реперколяция с 1 1 47,4 49,2 50,1 50,5 50,7 51,1 51,2 51,2

незавершенным 1 2 75,7 80,7 84,1 86,5 88,3 89,7 90,8 91,7

циклом 1 5 96,1 98,5 99,4 99,7 99,9 99,9 99,9 99,9

Реперколяция с 1 1 47,8 53,7 58,3 62,0 65,2 67,9 70,7 72,5

завершенным 1 2 73,1 78,6 82,9 86,3 89,3 91,9 94,1 96,1

циклом 1 5 96,1 96,1 96,1 96,1 96,1 96,1 96,1 96,1

Таблица 3 - Результаты изучения влияния условий экстракции на выход изофлавоноидов

Способ экстракции Соотношение сырье: экстрагент Время, для получения извлечения Содержание изофлавоноидов, %

Мацерация 1:5 7 суток 0,21±0,02

Мацерация с перемешиванием сырья и экстрагента 1:5 3 часа 0,23±0,03

Дробная мацерация с перемешиванием сырья и экстрагента 1:5 6 часов 0,29±0,03

Реперколяция с завершенным циклом 1:5 6 суток 0,45±0,03

Реперколяция с делением сырья на неравные части 1:5 3 суток 0,33±0,03

По итогам проведенных теоретических расчетов, подтвержденных зультатами практических исследований установлено, что оптимальным способом страгирования для стальника полевого корней является реперколяция с вершенным циклом. Именно этот метод и был использован для получения влечения и экстракта густого стальника полевого корней. Экстрагирование оводили в батарее из 3-х перколяторов методом реперколяции с завершенным клом. В полученных извлечениях определяли содержание действующих веществ офлавоноидов (0,45±0,03), плотность - 0,8904±0,0022 г/см3, сухой остаток -7±0,2. Полученные извлечения сгущали до остаточной влажности 25%. В качестве казателя качества стальника полевого корней экстракта густого выбрано держание изофлавоноидов - не менее 7%.

Разработка технологии и определение качества суппозиториев со галышка полевого корчей экстрактом густым

С целью разработки суппозиториев со стальника полевого корней экстрактом стым нами были изучены основы различных типов. Состав основ представлен в блице 4.

Таблица 4 - Состав композиций суппозиторных основ

именование Количество компонентов в основе (г)

мпонента 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

тепсол Н15 50 45

тепсол \У 35 50 45

ассупол 90

вата 100 90

е здый жир типа А 90 95 95

ьмовое масло 60

кемал СВ-65 30

Г 400 5 10 20 10

Г 1500 95 90 80 70 20

Г 4000 20 20

Г 6000 60

) льгатор Т| 5

I льгатор Т2 5

1НОЛИН 10 10 10 10

Количество густого экстракта составило 0,4 г на один суппозиторий, что по

держанию действующих веществ соответствует суточной дозе при пероральном

иеме настойки стальника.

Приготовление суппозиториев проводили методом выливания. Оценку

чества полученных суппозиториев проводили по показателям: однородность,

13

отклонение от средней массы, температура плавления, время полной деформации (для суппозиториев, приготовленных с использованием дифильных и липофильных основ) и время растворения (в случае использования гидрофильных основ). Отклонение от средней массы не превышало допустимых значений. По показателю «однородность», суппозитории, приготовленные на основе №5 (пальмовое масло : рикемал СВ 65), имеют неудовлетворительные показатели, а для суппозиториев, приготовленных на основе №12, превышено время растворения (80 минут) поэтому дальнейшие исследования для них не проводились (табл. 4). Результаты исследований показали, что составы суппозиториев, приготовленных на основах №1,2,3,4,6,7,8,9,10,11,13,14, соответствуют основным показателям качества, предъявляемым для данной лекарственной формы.

Далее исследовали влияние основы на степень высвобождения изофлавоноидов. Определение проводили методом диализа через полупроницаемую мембрану. Концентрацию изофлавоноидов в пробах диализата каждые 15 минут определяли спектрофотометрическим методом, при длине волны 260 нм. На основе полученных значений были рассчитаны проценты высвобождения изофлавоноидов от вида основы и времени диализа (рисунок 4).

100

15 30 45 60 7Б 90 105 120 [ 1, мин

15 30 45 60 75 90 105 120 Ъ мин

Рисунок 4 - Графики зависимости высвобождения изофлавоноидов от вида суппозиторной основы (состав основы - табл.4)

Установлено, что максимальное количество изофлавоноидов высвобождается при использовании основ № 2 (массупол с добавлением ланолина) и №13 (смесь витепсолов с добавлением ланолина). Именно эти основы оптимальны для промышленного производства суппозиториев со стальника полевого корней экстрактом густым.

Для стандартизации полученных суппозиториев были выбраны следующие оказатели: внешний вид (суппозитории торпедообразной формы, коричневого вета, с характерным запахом стальника), средняя масса (2,20±0,01 г), температура давления не более 37°С, время полной деформации (не более 15 минут), одлинность (наблюдается голубая флуоресценция в УФ - свете раствора, анесенного на фильтровальную бумагу, полученного по методике «количественное пределение») и количественное содержание изофлавоноидов (не менее 0,029 г на дин суппозиторий). Срок хранения, определенный методом естественного ранения, составил 2 года.

Разработка технологии, показателей н норм качества суппозиториев, одержащих биологически активные компоненты облепихи крушиновидной лодов и стальника полевого корней

Экстракция липофильных компонентов плодов облепихи крушиновиднои ппозиторной основой

В качестве объектов исследования использовали высушенный шрот облепихи рушиновидной, полученный после отжима сока из плодов, высушивания олученной массы до остаточной влажности 5% и измельчения до размера частиц енее 1 мм (Погорелов В.И., 1980г.) (содержание суммы каротиноидов в пересчете а р-каротин - 32,25мг% ± 0,89, масла - 16,98% ± 0,28). В качестве экстрагентов пользовали различные суппозиторные основы: смесь витепсол V/ 35 и витепсол Н (1:1), массупол, твердый жир типа А, новата, масло какао (с добавлением 5% рафина), папьмоядровое масло. Порцию сырья смешивали с расплавленной ппозиторной основой (соотношение 2:1), подогревали до 50-55°С и настаивали в чение 30 минут. Далее шрот загружали в перфорированный стакан пресса и двергали прессованию. Оценку экстрагирующей способности основ проводили по личественному содержанию суммы каротиноидов (в пересчете на Р-каротин) в лученных липофильных извлечениях. Определение проводили ектрофотометрическим методом при длине волны 450 нм (рисунок 5).

Среди исследованных липофильных суппозиторных основ наибольшей страгирующей способностью обладает комбинация витепсол \У35 :Н15 (1:1). кже можно выделить масло какао, твердый жир типа А и папьмоядровое масло.

ВитепсолН15 Массупол Новата Тв. жир А Масло какао Пальмоядр. :\Л/35 (1:1) масло

Школичественное содержание каротиноидов, мг%

Рисунок 5 - Результаты определения количественного содержани каротиноидов в суппозиторных извлечениях после однократного прессования

На следующем этапе исследований была изучена степень и скорост. высвобождения каротиноидов из полученных суппозиториев. В качестве модельно! среды использована система, состоящая из равных частей эмульсий прямого 1 обратного типа. Оценку высвобождения проводили визуально. Зону высвобождени каротиноидов измеряли в миллиметрах по величине распространения окрашенное1 зоны от границ пробы лекарственной формы (рисунок 6). 10

1

К»» К

р 1 , 1 1 '

___Йвл&чЗк „1 . 1

6 часов

шщ

Щщ

-1«;___ •

24 часа

йВитепсол W35:H15 (1:1) Ш1 Массупол О Новата 32 Тв. жир А Ш Масло какао □ Пальмовое масло

Рисунок б - Размер распространения окрашенной зоны в зависимости от вида) суппозиторной основы

При этом установлено преимущество суппозиторной основы витепсол \V35l :Н15 (1:1), на протяжении всего времени экспозиции. Анализ полученных данных позволил выбрать данную основу для дальнейших исследований.

С целью повышения содержания биологически активных веществ (каротиноидов) в липофильном извлечении и установлении предельной экстрагирующей способности комбинации витепсол У/35:Н15 (1:1) использовали метод репрессования. Для этого новую порцию сырья смешивали с извлечением,

полученным после первого прессования, настаивали в приведенных выше условиях и подвергали прессованию. Процесс повторяли до момента приобретения уппозиторной массой мазеобразной консистенции (четыре прессования). После каждого этапа производили отбор проб для количественного определения суммы каротиноидов, в пересчете на ^-каротин. Определение проводили •пектрофотометрическим методом при длине волны 450 нм (рисунок 7).

мг%

50

150---дед-ГО6Д1-124/15

100 --64;89--------«к«— -- " 1 ■ __ ____.....I

1 прессование 2 прессование 3 прессование 4 прессование за Количественное содержание каротиноидов, мг%

рисунок 7 - Зависимость содержания суммы каротиноидов (в пересчете на (3-саротин) в суппозиторном извлечение от числа прессований

В результате проведенных исследований установлено, что оптимальным вляется двукратное прессование, в результате которого количественное одержание суммы каротиноидов (в пересчете на р-каротин) в полученном ипофильном извлечение составляет 96,90 ±0,92 мг%. При увеличении этапов рессования до трех, выход каротиноидов возрастает незначительно (с 96,90 ±0,92 1Г% до 106,21± 0,78 мг%), но снижается степень истощения сырья и значительно ¡величивается его расход. После четвертого прессования (содержание каротиноидов величивается до 124,45 мг%) суппозиторная масса приобретает мазеобразную ¡онсистенцию, что приводит к необходимости добавления тугоплавкого (эмпонента, что, как правило, отрицательно сказывается на биодоступности. ] Полученную суппозиторную массу, обогащенную компонентами плодов |5лепихи крушиновидной, мы использовали для дальнейших исследований и Ьлучения комбинированных суппозиториев с разработанным нами стальника ¡ левого корней экстрактом густым.

Разработка технологии суппозиториев, содержащих активные шпоненты стальника полевого и облепихи крушиновидной

Для определения оптимального состава была изучена возможность использования эмульсионных суппозиторных основ, состоящих из липофильных, гидрофильных компонентов, а также поверхностно - активных веществ (состав представлен в таблице 5).

Таблица 5 - Составы эмульсионных суппозиторных основ и результаты

! оценки качества

Основа Липофильная фаза (7 частей) Гидрофильная фаза (2 части) Эмульгатор (1 часть) Устойчивость Однородность

I Суппозиторное извлечение облепихи крушиновидной плодов Вода очищенная ланолин устойчива однородна

2 То же Вода очищенная эмульгатор№1 устойчива однородна

3 То же Вода очищенная эмульгатор Т| устойчива однородна

4 То же Вода очищенная эмульгатор Тт устойчива однородна

5 То же Вода очищенная :глицерин (1:1) ланолин устойчива однородна

6 То же Вода очищенная : глицерин (1:1) эмульгатор №1 устойчива однородна

7 То же Вода очищенная : глицерин (1:1) эмульгатор Т] устойчива однородна

8 То же Вода очищенная : глицерин (1:1) эмульгатор Т2 устойчива однородна

9 То же ПЭГ 400 ланолин не устойчива однородна

10 То же ПЭГ 400 эмульгатор №1 не устойчива однородна

11 То же ПЭГ 400 эмульгаторТ| не устойчива однородна

12 То же ПЭГ 400 эмульгаторТг не устойчива однородна

В качестве критериев оценки эмульсионных композиций были выбраны

однородность и устойчивость эмульсий. При оценке качества все дифильные основы после смешения представляли собой однородные массы. Суппозиторные основы№9 - 12 не устойчивы: наблюдали образование слоя жировой фазы 1см и более, что не позволяет использовать их в дальнейших исследованиях. Наилучшие показатели по критериям «однородность» и «устойчивость» были отмечены для композиций №1, 4, 5,6, 7,8.

На основании полученных композиций готовили комбинированные суппозитории с густым экстрактом стальника полевого корней. Для полученных суппозиториев определяли все основные показатели, а также степень высвобождения основных действующих веществ стальника полевого экстракта

",'стого (изофлавоноидов) и облепихи крушиновидной плодов (каротнноидов). В шестве объекта сравнения использовали суппозитории со стальника полевого ! рней экстрактом густым, приготовленные на основе, содержащей компоненты юдов облепихи крушиновидной без добавления эмульгаторов - композиция №13 исунок 8).

Высвабождениеизофлавоноидов

15 30 45 60 75 90 105 120 Время экспозиции, мин

—К—6

—ф— g

20

15

10

"ввсвобождениекаротиноидов-

1

л :

lili

"i

6 часов 24 часа 48 часов 72 часа Время, часы

Рисунок 8 - Графики высвобождения изофлавоноидов и каротнноидов в исимости от вида основы (состав основы - табл. 5)

Из приведенных данных следует, что использование дифильных основ лесообразно и оправдано при применении в качестве эмульгатора ланолина зводного (композиция №1 и №5), так как только в данном случае наблюдалось учшение высвобождения изофлавоноидов и каротнноидов из суппозиториев по гвнению с суппозиторной основой без добавления дополнительного эмульгатора, рактер гидрофильной фазы (вода очищенная в композиции №1 и смесь воды ищенной и глицерина (1:1) в композиции №5) значительного влияния на !свобождение изофлавоноидов не оказывали.

Для определения оптимальной концентрации эмульгатора были приготовлены дельные суппозитории с содержанием ланолина безводного в концентрации 5, 10, /а к массе суппозитория. В качестве гидрофильной фазы использовали 50% дный раствор глицерина. Провели оценку полученных эмульсионных композиций показателям «однородность» и «устойчивость» и исследовали влияние йцентрации эмульгатора на высвобождение изофлавоноидов и каротиноидов )сунок 9). Оценку качества модельных суппозиториев проводили по основным <азателям: отклонение от средней массы, время полной деформации, температура звления, качественное и количественное содержание изофлавоноидов и

19

каротиноидов. Характер диаграмм, позволяет сделать вывод, что добавлен! эмульгатора повышает высвобождение каротиноидов и изофлавоноидов, при это оптимальной является 10% концентрация ланолина безводного, так как дальнейик увеличение (до 15%) изменяет картину высвобождения незначительно.

Рисунок 9 - Влияние концентрации эмульгатора (ланолина безводного) I высвобождение изофлавоноидов и каротиноидов из модельных суппозиториев

Стандартизацию полученных комбинированных суппозиториев проводили г следующим показателям: внешний вид, средняя масса, температура плавлени время полной деформации, подлинность, количественное содержание каротиноидс (не менее 128 мг%) и изофлавоноидов (не менее 0,029г на один суппозиторий). Сро хранения 1,5 года.

Одним из вариантов в технологии суппозиториев является получение двух-многослойных суппозиториев. Разработаны двухслойные суппозитории внутренним слоем, содержащим стальника полевого корней экстракт густой наружным слоем, образованным основой, обогащенной компонентами плоде облепихи крушиновидной. В качестве основы для формирования стержн использовали ПЭО 400:ПЭО: 1500:ПЭО 4000 (10:70:20), так как данная комбинаци обеспечивает необходимую твердость стержня и оптимальную скорост высвобождения изофлавоноидов. Суппозитории, получали методом выливани Полученные комбинированные суппозитории были подвергнуты стандартизации п следующим показателям: внешний вид, средняя масса, температура плавления (дл оболочки), время растворения (для стержня), подлинность, количественно содержание каротиноидов (не менее 128 мг%) и изофлавоноидов (не менее 0,029 на один суппозиторий).

Фармакологические исследования комбинированных суппозиториев с ктмвными компонентами стальника полевого и облепихи крушиновидпон

Определение острой токсичности, раздражающей активности, ротивовоспалительного, капилляроукрепляющего и ранозаживляющего действия уппозиториев было проведено на кафедре фармакологии ГОУ ВПО ПятГФА осздрава совместно с д.б.н. A.B. Сергиенко. В результате проведенных юследований установлено: В опытах на куриных эмбрионах (in situ) и мышах (in vivo) показано, что суппозитории, содержащие активные компоненты стальника полевого и облепихи крушиновидной безопасны для млекопитающих, обладают слабым раздражающим действием и могут быть отнесены к практически нетоксичным средствам (LD50 > 5000 мг/кг).

В опытах на крысах (24 крысы, гп= 210±10г) установлен выраженный противоотечный эффект (снижение экссудативного воспаления), по динамике развития моделированного отека конечности (0,1 мл 1% раствор каолина, дорсовентрально);

На морских свинках (12 свинок, гп=320±20г) установлено регенеративное действие суппозиториев по уменьшению площади ожоговой поверхности, ускорению эпителизации ткани и отторжению струпа;

Установлен капилляроукрепляющий эффект суппозиториев при резорбтивном и местном применение по уменьшению времени капиллярного кровотечения по Duke (12 морских свинок (т=320±20г)).

Выводы

1. В результате изучения факторов, влияющие на процесс экстракции биологически активных веществ стальника полевого корней, установлен оптимальный способ экстракции - реперколяция с завершенным циклом в батарее из трех перколяторов при соотношении сырье - экстрагент 1:5. Разработаны технология и нормы качества стальника полевого корней извлечения и экстракта густого.

2. По итогам проведенных технологических и биофармацевтических исследований подобран оптимальный состав суппозиториев, содержащих стальника полевого корней экстракт густой.

3. Показана возможность использования суппозиторных основ в качестве экстрагента при извлечении липофильных компонентов облепихи крушиновидной плодов методом репрессования. Выбрана оптимальная основа и параметры экстрагирования, позволяющие обеспечить высокую эффективность экстракции и получить суппозиторную основу, обогащенную активными компонентами облепихи крушиновидной плодов, с хорошими технологическими свойствами.

4. В результате проведенных технологических исследований разработан оптимальный состав комбинированных суппозиториев, позволяющих сочетать биологически активные вещества стальника полевого и облепихи крушиновидной, за счет образования твердых эмульсионных композиций.

5. Разработаны состав и технология двухслойных суппозиториев, содержащих во внешнем слое - биологически активные вещества облепихи крушиновидной, а во внутреннем слое (стержне) - биологически активные вещества стальника полевого.

6. Установлено, что комбинированные суппозитории безопасны для млекопитающих, обладают слабым раздражающим действием. Согласно табуляции классов токсичности суппозитории по Hodge и Sterner и классификации К.К.Сидорова могут быть отнесены к практически нетоксичным средствам (LD5o > 5000 мг/кг).

7. Определен выраженный противоотечный эффект суппозиториев при местном и резорбтивном действии по сокращению времени и интенсивности развития моделированного отека конечности крыс. Установлено регенеративное действие суппозиториев по уменьшению площади ожоговой поверхности, ускорению эпителизации ткани и отторжению струпа. Установлено, что исследуемые суппозитории проявили выраженный капилляроукрепляющий эффект, достоверно уменьшая время капиллярного кровотечения по Duke.

8. Для разработанных суппозиториев предложены следующие показатели качества: внешний вид, средняя масса, температура плавления, время полной

деформации, подлинность, количественное содержание каротиноидов (не менее 128 мг%) и изофлавоноидов (не менее 0,029г на один суппозиторий). Срок годности монокомпонентных суппозиториев, содержащих стальника полевого корней экстракт густой, составил 24 месяца, для комбинированных и двухслойных - 18 месяцев. На суппозитории, содержащие активные компоненты стальника полевого корней и облепихи крушиновидной плодов, разработан проект ФСП.

Список опубликованных работ Гараничева, О.В. Исследование по выбору оптимального экстрагента для олучения извлечения стальника полевого корней / О.В. Гараничева, В.И. огорелов // Здоровье и образование в XXI веке: материалы IX Междунар. конгр. -., 2008. - С.242-243.

Гараничева, О.В. Фармакологическое обоснование исследования композитных ппозиториев с экстрактом стальника и облепихи как противогеморроидального редства / О.В. Гараничева, В.И. Погорелов, A.B. Сергиенко // Клиническая армакология и терапия. - 2009. -№6. - С.263-264.

Гараничева, О.В. Определение технологических характеристик и оптимальных араметров экстрагирования стальника полевого корней / О.В. Гараничева // азработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. уч. тр.- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2009.- Вып. 64. - С. 144-146.

Гараничева, О.В. Разработка технологии густого экстракта стальника полевого рней / О.В. Гараничева, В.И. Погорелов // Научное обозрение. - 2009.-№4. - С.ЗЗ-

Гараничева, О.В. Разработка технологии двухслойных суппозиториев с страктом стальника полевого корней и облепихи крушиновидной плодов ггигеморроидального действия / О.В. Гараничева, В.И. Погорелов // Актуальные облемы фармацевтической науки и практики: сб. науч. тр. - Владикавказ: СОГУ, 09. - С.81-83.

Гараничева, О.В. Исследования состава суппозиториев с экстрактом стальника .В. Гараничева, В.И. Погорелов, В.А. Карпенко // Фармация. - 2010,- №2. - С.40-

Гараничева, О.В. Экстрагирование липофильных компонентов облепихи ушиновидной плодов суппозиторными основами / О.В. Гараничева, В.И. горелов // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической одукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2010.- Вып. 65. - С. 1758.

Гараничева, О.В. Разработка технологии суппозиториев тигеморроидапьного действия, содержащих активные компоненты облепихи ушиновидной и стальника полевого / О.В. Гараничева, В.И. Погорелов // Курский учно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2010.- №4,- С. 121-125.

и.

)

ГАРАНИЧЕВА ОКСАНА ВАСИЛЬЕВНА

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ СУППОЗИТОРИЕВ, СОДЕРЖАЩИХ АКТИВНЫЕ КОМПОНЕНТЫ ОБЛЕПИХИ КРУШИНОВИДНОЙ И СТАЛЬНИК

ПОЛЕВОГО

14.04.01 - ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати О^^ъШ^ормат бумаги 60*84 1/16 Бумага книжно-журнальная. Печать ротапрннтная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ №. В

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорска* государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению н социальном развитию» (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).