Разработка сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев и перспективы их использования

Малинина, Инна Викторовна

Диссертации по медицине → Технология получения лекарств

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев и перспективы их использования

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Малинина, Инна Викторовна Пятигорск 2011 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.01

Автореферат диссертации по медицине на тему Разработка сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев и перспективы их использования

На правах рукописи

4840183

МАЛИНИНА ИННА ВИКТОРОВНА

РАЗРАБОТКА СУХОГО И МАСЛЯНОГО ЭКСТРАКТОВ ЦВЕТКОВ БАРХАТЦЕВ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

1 '< идр 20П

¿й/Шшм^

Пятигорск 2011

4840183

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего

профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: кандидат фармацевтических наук,

профессор Погорелов Виктор Иванович

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,

профессор Челомбитько Вячеслав Александрович

доктор фармацевтических наук, профессор Молчанов Геннадий Иванович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава».

Защита состоится «27» апреля 2011 года в 9°° часов на заседании Диссертационного совета Д 208.069.01 при ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» (357532, Ставропольский край, Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава».

Автореферат разослан 01 2011 г.

Учёный секретарь Диссертационного совета ^

Е.В. Компанцева

Актуальность темы

Растительные средства, широко зарекомендовавшие себя в народной медицине, всегда привлекали большое внимание ученых. Это связано с тем, что многие растения содержат значительное число биологически активных соединений. Кроме того растительные лекарственные средства, как правило, не проявляют побочного действие и могут использоваться как в детской, так и гериатрической практике.

Одним из таких растительных объектов являются бархатцы распростертые, которые широко культивируются на Кавказе, характеризуются высоким содержанием биологически активных соединений и издавна применяются в народной медицине в качестве водного настоя цветков бархатцев, как мочегонное, потогонное и противоглистное средство. Эфирное масло из бархатцев распростертых избавляет от неврозов, циститах, уретрите, задержке мочеиспускания, глистах. В народной медицине настой цветков бархатцев применяют при «куриной слепоте», мочекаменной болезни.

Все эти особенности явились обоснованием для проведения химических и биохимических исследований суммарных фракций и индивидуальных соединений, осуществленных на кафедрах биологической химии и микробиологии, а также органической химии ПятГФА (А.Ю. Терехов, Ж.В. Подгорная). Полученные ими результаты свидетельствуют о перспективности использования бархатцев распростертых в качестве источника суммарных биологически активных фракций, обладающих разносторонней фармакологической активностью.

эффективности. Однако, одной из главных проблем, касающихся технологии

и применения препаратов из цветков бархатцев распростертых является то, что в различных фракциях извлечений (гидрофильной и гидрофобной) содержатся различные группы биологически активных соединений (флавоноидов и каротиноидов). Каждая из указанных фракций не может проявить полный фармакологический потенциал всего растения. Разработка такого препарата, который объединил бы биологически активные вещества гидрофильного и гидрофобного характера, позволила бы объединить весь фитокомплекс цветков бархатцев распростертых в одной лекарственной форме.

До настоящего времени таких исследований не проводилось. Это связано с тем, что не разработан метод технологического решения вопроса получения комплекса, включающего гидрофильную и гидрофобную часть, так как эти компоненты извлекаются из растения различными экстрагентами и несовместимы по своим физическим свойствам.

В то же время в ПятГФА разработан метод получения липофильных веществ в виде сухих порошков за счет образования соединений включения. Это позволяет получить возможность технологического совмещения гидрофильной и липофильной фракций в одном комплексе и получения на его основе лекарственной формы. Для решения такой задачи необходимо, в первую очередь разработать оптимальную технологию получения гидрофильной и гидрофобной фракций из цветков бархатцев распростертых.

Поэтому исследования по комплексной малоотходной технологии получения отдельных фракций из цветков бархатцев распростертых, позволяющей извлечь в одном технологическом цикле как липофильную, так и гидрофильную фракцию с последующей разработкой на их основе твердой лекарственной формы является актуальной проблемой для фармацевтической технологии.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационной работы является разработка технологии

получения комбинированной лекарственной формы (гранул), содержащей

гидрофильную (сухой экстракт) и липофильную (масляный экстракт) фракции цветков бархатцев распростертых, на основе малоотходной технологии.

Поставленная цель была достигнута путем решения следующих задач:

1. Обосновать технологию получения сухого экстракта (гидрофильая фракция) и масляного экстракта (липофильная фракция) цветков бархатцев распростертых.

2. Обосновать методики и провести анализ сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев распростертых.

3. Разработать методику получения соединения включения масляного экстракта цветков бархатцев распростертых с р-циклодекстрном.

4. Обосновать состав и разработать технологию гранул, включающих сухой и масляный экстракты цветков бархатцев распростертых.

5. Разработать и предложить нормы и методики оценки качества гранул.

6. Провести фармакологические исследования гепатопротекторного и противоязвенного действия гранул.

7. Разработать ТУ и ТИ на сухой экстракт и масляный экстракт цветков бархатцев распростертых и ТУ и ТИ на гранулы, полученные на основе экстрактов цветков бархатцев распростертых. Научная новизна работы

Теоретически обоснована и экспериментально разработана технология экстрагирования цветков бархатцев распростертых, позволяющая извлечь широкий спектр биологически активных соединений.

Изучены процессы экстракции гидрофильной и липофильной фракций и найдены условия, позволяющие достичь максимального выхода биологически активных веществ (флавоноидов до 89%, каротиноидов до 94%).

Разработана методика перевода липофильной фракции в сухую субстанцию путем получения соединения включения. Изучена и

экспериментально показана возможность совмещения полученных гидрофильной и липофильной фракции в одной лекарственной форме. Предложена технология гранул, включающих сухой экстракт цветков бархатцев распростертых и масляный экстракт в виде комплекса включения с Р-циклодекстрином.

Проведены предварительные фармакологические исследования предлагаемых гранул, установлено их гепатопротекторное и противоязвенное действие.

Практическая значимость работы

Разработана ресурсосберегающая технология переработки цветков бархатцев распростертых.

Осуществлен подбор вспомогательных веществ, обеспечивающих оптимальные технологические характеристики и стабильность масляного и сухого экстрактов цветков бархатцев распростертых с целью их введения в твердые лекарственные формы.

Разработана технология лекарственной формы в виде гранул, содержащая как гидрофобную, так и гидрофильную фракцию фитокомплекса цветков бархатцев распростертых.

Составлены ТИ на гранулы с фитокомплексом цветков бархатцев распростертых, а также на промежуточные продукты - сухой и масляный экстракты цветков бархатцев распростертых.

Установлены и включены в нормативную документацию нормы качества предлагаемых гранул, сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев распростертых.

Уровень внедрення полученных результатов

На разработанные сухой, масляный экстракты и гранулы составлены и зарегистрированы ТУ и ТИ, прошедшие апробацию в ООО «Фармацевт».

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертация выполнена в соответствии с планом научно -исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава на кафедре технологии лекарств.

Апробация работы

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на: 62 - 63 Межрегиональных конференциях по фармации и фармакологии: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», Пятигорск 2007-2008;

Материалы I Международной научно-практической конференции по инновационным технологиям в пищевой промышленности, Пятигорск 2008.

На защиту выносятся

1. Обоснование выбора экстрагента с целью получения сухого экстракта цветков бархатцев распростертых.

2. Экспериментальные данные по установлению оптимальных параметров получения сухого экстракта цветков бархатцев распростертых методом реперколяции.

3. Сравнительная оценка технологических схем получения масляного экстракта цветков бархатцев распростертых диффузионным методом и методом репрессования.

4. Разработанная схема малоотходной непрерывной технологии получения сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев распростертых из одного и того же сырья.

5. Характеристики масляного и сухого экстрактов по основным -БАВ (флавоноидам и каротиноидам), микроэлиментому составу, эфирному маслу.

6. Результаты исследований по созданию гранул, включающих комплекс масляного экстракта цветков бархатцев распростертых с р-ци кл о де кстр и но м.

Объём и структура диссертации

Работа выполнена на 131 страницах текста компьютерного набора, содержит 30 таблиц, 20 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 162 источника, из которых 22 иностранных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Разработка технологии сухого экстракта и масляного извлечения цветков бархатцев распростертых

Для стандартизации цветков бархатцев распростертых сорта Orange как исходного сырья в соответствии с требованиями НД было проведено определение товароведческих показателей и основных групп фармакологически активных веществ цветков. Исследования проводили с партиями цветков бархатцев распростертых, собранных в условиях культивирования Пятигорского ботанического сада, Ставропольского ботанического сада, а также с сырьем собственного сбора в районе Кавказских Минеральных Вод. Данные о проведенных исследованиях представлены в таблице 1.

Из данных таблицы следует, что содержание влаги в сырье составляет от 4,67°/о до 4,86%; содержание флавоноидов в пересчете на патулетин от 9,52% до 9,66%, содержание каротиноидоа от 92,80 мг% до 92,99 мг%.

Ранее совместно с аспирантом кафедры органической химии Подгорной Ж.В. был проведен фармакологический скрининг извлечений из цветков бархатцев распростертых (полученных с помощью спирта этилового в концентрации от 40 до 96%), в результате установлено, что наибольшей гепатопротекторной и желчегонной активностью характеризуется извлечение, полученное на 70% спирте этиловом.

В продолжение этих исследований в результате фотохимического скрининга извлечений из цветков бархатцев распростертых, полученных с помощью спирта этилового в концентрации от 40 до 96%, установлено, что

70% спирт этиловый позволяет получать извлечения, содержащие наибольшее количество флавоноидов (8,3%).

Таблица 1 - Товароведческие показатели сырья и содержание БАВ в цветках

бархатцев распростертых

Место сбора, год Влага, % Сумма флавоноидов в пересчете на патулетин Каротиноиды в пересчете на (3-каротин, мг%

Пятигорский ботанический сад, 2005 г. 4,67±0,25 9,62±0,45 92,80±0,12

Ставропольский ботанический сад, 2006г. 4,8б±0,12 9,58±0,48 92,92±0,17

г. Пятигорск, 2005г. 4,72±0,28 9,60±0,31 92,98±0,29

г. Ессентуки, 2006г. 4,84±0,24 9,52±0,25 92,85±0,23

г. Кисловодск, 2006г. 4,70±0,39 9,бб±0,41 92,99±0,25

г. Пятигорск, 2006г. 4,81±0,27 9,57±0,33 92,83±0,31

Для решения последующих задач по разработке технологии сухого

экстракта были определены технологические характеристики сырья при использовании 70% спирта этилового в качестве эктрагента.

На 6 исследуемых партиях сырья по известным методам определены показатели насыпной массы, коэффициент поглощения сухого и набухшего сырья, коэффициент вытеснения сырья, необходимые для определения параметров диффузора.

В результате исследований установлены следующие технологические показатели сырья: коэффициент поглощения (К„); коэффициент образования внутреннего сока (КОВС) и коэффициент увеличения объема (КУО) при растворении экстрактивных веществ, которые использованы при теоретическом расчете параметров экстракции.

Анализ полученных данных показывает, что сырье - цветки бархатцев распростертых имеет малую насыпную массу ' и поэтому добиться образования «зеркала» в диффузоре возможно лишь при увеличении объема

внешнего сока у = от 3,5 до 4,0 объемов.

Кроме того, процесс необходимо проводить многоступенчато, так как одноступенчатая экстракция позволит истощить сырье лишь на 65 %.

Далее, проведя расчеты с помощью программы «Galen» по разработанному ранее на кафедре технологии методу, который предусматривает определение эффективности экстракции в зависимости от числа ступеней экстракции -пи коэффициента съема готовой продукции - у, мы пришли к выводу, что при Кп =2,47 см3/г и КОВС=2,68 см3/г необходимо проведение процесса экстракции в батарее из 4 перколяторов при у=3,8.

Таблица 2 - Зависимость эффективности процесса экстракции цветков бархатцев распростертых от количества диффузоров и технологических параметров сырья

Количество диффузоров (п) 1 2 3 4 5 6

Эффективность экстракции (%) 65,0 75,5 81,5 86,3 89,4 92,1

Прирост эффективности (%) - 10,0 5,9 4,8 3,1 2,8

При следующих технологических параметрах сырья:

Экстрактивные вещества (х) = 29,63±0,15%;

Коэффициент поглощения (Кп) = 2,47 см3/г;

Коэффициент образования внутреннего сока (К) = 2,68 см3/г;

Коэффициент съема готовой продукции (у) = 3,8;

Коэффициент распределения веществ между внутренним и внешним соком

(Л) = 1,418;

Коэффициент увеличения объема при растворении экстрактивных веществ

_(Т) - 0,787 см3/г_

Эффективность экстракции при данных параметрах составила 86,3% при

использовании четырех диффузоров. Дальнейшее увеличение ступеней

экстракции п (числа диффузоров) приводит к незначительному приросту

степени истощения сырья.

На основании проведенных теоретических расчетов нами получено

извлечение из цветков бархатцев распростертых методом реперколяции в

батарее из 4 диффузоров завершенным циклом. Время настаивания по

ступеням экстракции как при вводе батареи диффузоров, так и в период

съема готовой продукции составило 8, 16 часов.

Результаты анализа спиртового извлечения представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Качество спиртового извлечения цветков бархатцев распростертых, полученного методом реперколяции

Показатель качества Найдено, % Эффективность экстракции, %

Сухой остаток 6,28±0,61 -

Содержание флавоноидов (в пересчете на патулетин) 2,07±0,03 81,60

Данные таблицы показывают, что фактическая эффективность спиртового извлечения из цветков бархатцев распростертых по действующим веществам составляет 81,6%, что приближается к теоретическим расчетам.

Далее спиртовое извлечение упаривали под вакуумом до консистенции густого экстракта и высушивали при 1=50°С.

Полученный сухой экстракт представлял собой коричневую очень гигроскопичную массу, которая не отвечала требованиям сыпучести. Для уменьшения гигроскопичности и обеспечения сыпучести нами осуществлен выбор вспомагательных веществ, которые являлись бы наполнителями сухого экстракта. В качестве наполнителей исследованы карбонат кальция, крахмал, аэросил, оксид магния, карбонат магния, лактоза в различных соотношениях. При определении количества наполнителя мы учитывали, что такие наполнители как карбонат кальция, аэросил, карбонат магния имеют согласно ГФ XI издания ограничения в применении внутрь, являются пылящими и легкими веществами, а так же были взяты во внимание их органолептические свойства и экономическая целесообразность. Установлено, что удовлетворительными органолептическими свойствами (по методике Тенцовой) обладает наполнитель - лактоза, кроме того, этот наполнитель экономически более выгоден, чем магния оксид. Другие наполнители не обеспечивали удовлетворительной сыпучести в нормируемых пределах или не отвечали .органолептическим требованиям (крахмал). В результате найдено соотношение наполнителя - лактозы и экстракта 1:2,5, при измельчении, смешивании и просеивании которых

образуется сухой экстракт из цветков бархатцев распростертых в виде светло-коричневого порошка. Выход экстракта составил 23,15% по отношению к сырью.

Установлено качество полученного сухого экстракта.

Содержание влаги в сухом экстракте - 3,9%±0,04%;

Содержание флавоноидов в сухом экстракте (в пересчете на патулетин) -11,84%±0,02%.

Анализ шрота, полученного после экстракции спиртом, показал что в нем содержится достаточно большое количество каротиноидов (90,8 мг%). Поэтому дальнейшей задачей наших исследований явилась разработка технологии масляного экстракта цветков бархатцев распростертых с целью получения липофильной фракции непосредственно после стадии получения сухого экстракта.

Разработка технологии масляного извлечения

Для получения масляных извлечений из цветков бархатцев распростертых нами были использованы метод репрессования и диффузионный метод - метод реперколяции.

При этом были апробированы два варианта: 1 вариант - экстрагирование шрота маслом непосредственно после завершения процесса реперколяции спиртом и 2 вариант - экстрагирование шрота, предварительно прошедшего отжим от избытка спирта с помощью ручного пресса.

Метод реперколяции осуществляли по классической схеме в батарее из 4 диффузоров при соотношении сырье-экстрагент 1:1. В качестве экстрагента использовали подогретое до 50°С соевое масло. Результаты представлены в таблице 4.

Анализ результатов по масляной экстракции шрота цветков бархатцев распростертых методом реперколяции показал, что содержание каротиноидов в извлечении, полученном после экстрагирования шрота, предварительно отжатого от экстрагента составило 8,4 мг%, а при экстракции без отжима - 5,6 мг%.

Таблица 4 - Сравнительная характеристика масляных экстрактов цветков бархатцев распростертых, полученных диффузионным методом и методом

репрессования

Показатели Способ экстракции

Реперколяция 1:1 (после получения спиртового извлечения, без отжима сырья) Реперколяция 1:1(после получения спиртового извлечения,с предварительно отжатым сырьем) Репрсссовапие1:1 (после получения спиртового извлечения, без отжима сырья) РепрессованнеЫ (после получения спиртового извлечения,с предварительно отжатым сырьем)

Масса сырья, г 160 160 160 160

Масса полученного масляного извлечения, г 538 276 372 108

Содержание каротиноидов, мг% 5,6 8,4 7,7 124,5

Выход, % (по каротиноидам) 20,7 16,0 19,7 93,4

Как следует из таблицы, диффузионный метод реперколяции позволяет получить невысокий выход каротиноидов от 16,0 % до 20,7%.

Поэтому с целью максимального извлечения каротиноидов, нами был использован метод репрессования сырья, оставшегося после получения спиртового извлечения.

Экстракцию методом репрессования проводили также в 2-х вариантах, используя сырье после спиртовой экстракции, в первом варианте без отжатия сырья, а во втором варианте с предварительным отжимом сырья.

Соевым маслом равномерно замачивали сырьё и настаивали смесь в массообменнике на каждой ступени экстракции при температуре 50°С, в течение 1 часа с периодическим перемешиванием.

После настаивания сырьё из массообменника переносили в перфорированный цилиндр, подогретый до 70°С, для принудительного отделения жидкой фазы из сырья и приступали к прессованию.

Извлечение, полученное при отжиме сырья, собирали в сборник и использовали для очередной ступени экстракции или отбирали в качестве готового продукта, если оно было получено из головного массообменника.

Отжатое сырьё, выпрессовывали из перфорированного цилиндра и направляли на очередную ступень экстракции. Результаты представлены в таблице 4.

Как следует из данных таблицы 4 при получении масляного экстракта методом репрессования содержание каротиноидов в извлечении и выход их выше в случае использования предварительно отжатого от избытка спирта сырья.

Экстракты, полученные диффузионным методом и репрессованием, представляли собой маслянистые жидкости с характерным запахом, оранжевого цвета, причём экстракт, полученный репрессованием, имел более интенсивную окраску.

Результаты сравнительной оценки методов получения масляных экстрактов цветков бархатцев распростертых представлены в таблице 5.

Таблица 5 - Сравнительная оценка методов получения масляных экстрактов из цветков бархатцев распростертых (предварительно отжатых от спирта)

Параметры Репрессование Реперколяция

Расход сырья (на одну ступень экстракции) 40,0 г 40,0 г

Расход экстрагента (на одну ступень экстракции) 40 г 76 г

Время, затраченное на процесс экстракции 2 суток 4 суток

Выход экстракта, г 108 г 276 г

Содержание каротиноидов в экстракте 124,5 мг%±0,9 8,4 мг%±0,2

Степень истощения сырья 93,4% 16,0%

В результате проведённого сравнительного анализа методов получения масляного экстракта из цветков бархатцев распростертых, нами было установлено, что метод репрессования позволяет наиболее полно извлечь липофильную фракцию ■ из цветков бархатцев распростертых и получить препарат с высоким содержанием каротиноидов.

Кроме того, варьируя количеством проведенных ступеней прессования, можно получить извлечения с заданным содержанием каротиноидов, проводя лроцесс с незавершенным циклом.

Так же использование метода репрессования, снижает расход экстрагента (соевого масла), а также время, затраченное, на процесс получение готового продукта. Оценку качества полученного масляного экстракта из цветков бархатцев распростертых проводили по показателям, представленым в таблице 6.

Далее методом ВЭЖХ было изучено содержание каротиноидов и токоферолов в масляном извлечении цветком бархатцев распростертых.

Исследования показали, что используя в качестве экстрагента соевое масло (при содержании в нем витамина Е - 170,59 мг/г), в масляных извлечениях содержится значительное количество витамина Е (до 223,9 мг/г) при содержании суммы каротиноидов 124,5 мг%, а в спиртовых извлечениях указанные витамины отсутствовали.

Изучен микроэлементный состав цветков бархатцев распростертых и спиртового извлечения цветков бархатцев распростертых. Показано высокое содержание в спиртовом извлечении бархатцев распростертых никеля, фосфора, меди, ванадия, титана, хрома, бария.

Изучены спиртовое и масляное извлечения цветков бархатцев распростертых на наличие компонентов эфирного масла цветков бархатцев распростертых. Из полученных данных следует, что в спиртовом и масляном извлечениях цветков бархатцев распростертых присутствуют компоненты эфирного масла цветков бархатцев распростертых, причем большее

количество компонентов извлекается 70% спиртом.

Таблица 6 - Оценка качества масляного экстракта из цветков бархатцев

распростертых

Показатель Масляный экстракт, полученный методом репрессования

Органолептические свойства Маслянистая жидкость, темно-оранжевого цвета, с характерным запахом

Подлинность каротиноидов - с конц. азотной кислотой образуется сине-зеленое окрашивание, переходящее в красно-фиолетовое; - спектр поглощения в диапазоне длин волн от 240 нм до 640 нм имеет 2 максимума поглощения при длинах волн 440±2нм и 470±2нм

Плотность г/см3 0,922-0,930

Кислотное число Не выше 5

Число омыления 108-120

Йодное число 100,6-102,8

Показатель преломления 1,4748- 1,4751

Индекс окисленности Не более 6,5

Содержание суммы каротиноидов Не менее 120,0 мг%

Растворимость Практически нерастворимо в воде, растворимо в диэтиловом эфире, пеггролейном эфире, хлороформе, гексане.

Разработка технологии гранул с фитокомплексом цветков бархатцев

распростертых

В дополнение к установленным на кафедре биологической химии гепатопротекторному действию БАВ цветков бархатцев распростертых нами проведена сравнительная эффективность гастропротекторного действия сухого экстракта, которая показала, что сухой экстракт по сумме исследуемых показателей примерно в равной степени с плантаглюцидом препятствует образованию очагов деструкции слизистой оболочки желудка.

Учитывая физико-химические свойства и фармакологическое действие полученных экстрактов мы пришли к выводу о необходимости разработки удобной для применения твердой лекарственной формы гранул,

включающих в себя гидрофильную и липофильную фракции.

Из существующих методов получения гранул нами был выбран метод влажного гранулирования, как наиболее приемлемый для полученных экстрактов. Однако необходимо было решить вопрос о переводе масляного экстракта в сыпучее состояние.

В целях разработки стабильного, устойчивого к окислению суммарного фитопрепарата и возможности создания на его базе удобной для применения формы гранул необходимо было провести дальнейшие исследования по возможности перевода масляного экстракта в сыпучее состояние, способом заключения в циклодекстриновый комплекс.

Из существующих способов получения соединений включений (СВ), основываясь на данных литературы и на исследованиях, проведенных на кафедре фармацевтической химии ПятГФА для получения соединений включений нами выбран метод растирания. Методика получения СВ методом растирания заключается в механическом смешивании под давлением Д-циклодекстрина и второго компонента.

Для получения соединения включения, представляющего собой однородную сыпучую массу нами: во-первых, проведен предварительно подбор соотношения Р-циклодекстрина и масляного экстракта бархатцев распростертых. Это соотношение оказалось равным 1:6.

При помощи ИК-спектрофотометрии подтверждено наличие взаимодействия компонентов масляного экстракта цветков бархатцев распростертых с р-циклодекстрином. Можно предположить, что связывание Р-циклодекстрина с компонентами масляного экстракта осуществляется посредством водородных связей между карбонильными группами жирных кислот и гидроксильными группами Р-циклодекстрина.

Для получения гранул методом влажного гранулирования в качестве увлажнителей были изучены: спирт этиловый 95%, 75%, 50%, раствор метилцеллюлозы 5%, раствор поливинилпирролидона 10%, раствор крахмала 10%. В гранулируемую массу вводили в увеличивающемся количестве (через

2%) вышеперечисленные растворы увлажнителя, определяя при этом реологические характеристики увлажненных масс на коническом пластомере КП-3. Результаты исследования представлены на рисунке 1 и 2.

. Рисунок 1 • Поглощающая способность гранулируемой массы при увлажнении спиртом различной концентрации

ч \

У *

10 12 14

«• го

Колтктю рламмитвля (*)

-Раствор МЦ1Ч —■ - - — Раствор П6П 10*---Раствор а|

Рисунок 2 - Поглощающая способность гранулируемой массы при увлажнении водными расворами ВМВ

Как следует из данных, представленных на рисунках 1,2, оптимальным увлажнителем для гранул является спирт этиловый 50%, взятый в количестве 20% от увлажняемой массы.

В итоге всех проведенных исследований по созданию твердой лекарственной формы в виде гранул, содержащей гидрофильный и липофильный комплекс из цветков бархатцев распростертых, нами предлагается следующий состав гранул: сухого экстракта цветков бархатцев

распростертых ЗОг; соединения включения масляного экстракта цветков бархатцев распростертых с р-циклодекстрином 70г

Разработана технологическая схема производства гранул (рисунок 3), позволяющая получать гранулы, отвечающие требованиям общей статьи на «гранулы» ГФ XI издания. Показатели, нормы качества и результаты анализа полученных гранул представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Показатели и нормы качества гранул фитокомплекса цветков

бархатцев распростертых

Наименование показателя Норма качества Фактическое значение

Внешний вид Гранулы желто-коричневого цвета, имеющие цилиндрическую или неправильную форму, без механических включений Гранулы желто-коричневого цвета, имеющие цилиндрическую или неправильную форму, без механических включений

Определение истираемости Гранулы должны истираться после 5 минут не более чем на 1,5%(ГФ XI изд.) Не превышают норм, допустимых в ГФ XI изд.

Определение распадаемости Не более 15 мин. Не более 8 мин.

Определение сыпучести Не нормируется. 5,9 г/с

Определение насыпной массы Не нормируется. 0,88 г/см''

Растворение Через 45 минут эксперимента в раствор должно перейти не менее 80% действующего вещества За 45 минут из гранул высвобождается флавоноидов в количестве 85%

Влажность Не более 5% 4,3%±0,08%

Качественный анализ в УФ-спектре наблюдаются 2 максимума при длинах волн 260 ± 2нм и 360 ± 2нм (флавоноиды)и 2 максимума при длинах волн 440 ± 2 нм и 470 ± 2 нм (каротиноиды)

Количественное определение флавоноидов Не менее 2,8% (в пересчете на патулетин) 2,90%±0,1%

Количественное определение каротиноидов Не менее 8,9 мг/% 13,01 мг/%±0,13 мг/%

Рисунок 3 - Технологическая схема производства гранул

Исследования по установлению сроков хранения проводили в естественных условиях при температуре не выше 20°С в течение 2,5 лет. Показатели качества гранул соответствовали разработанным нормам на протяжении указанного времени. Однако, мы считаем необходимым установить срок годности гранул 2 года, что позволяет гарантировать сохранение их качества в течение указанного срока.

Данные таблицы 7 показывают, что гранулы предложенного состава удовлетворяют требованиям общей статьи на гранулы ГФ XI изд., по таким показателям как истираемость, распадаемость, расворение, влажность,

Установлено, что гранулы, полученные на основе сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев распростертых, обладают гепатопротекторной активностью и по эффективности действия по большинству изученных биохимических показателей сыворотки крови и печени не уступают референтному средству карсилу, используемому в эквивалентной дозе 100м г/кг.

ВЫВОДЫ

1. Проведено фитохимическое исследование извлечений из цветков бархатцев распростертых, полученных с использованием спирта этилового различной концентрации (от 40% до 96%) и установлено, что 70% спирт этиловый позволяет получать извлечения, содержащие наибольшее количество флавоноидов (8,3%).

Определены основные технологические характеристики цветков бархатцев распростертых: коэффициент поглощения сырья - 2,47 см3/г, коэффициент образования внутреннего сока - 2,68 см3/г, коэффициент увеличения объема - 0,787 см3/г.

2. Разработана технология спиртового извлечения цветков бархатцев в качестве полупродукта, и определены оптимальные условия экстрагирования методом реперколяции, позволяющие истощить сырье на 81,60% (по содержанию флавоноидов). Получен и стандартизирован сухой экстракт цветков бархатцев распростертых и установлены нормы качества по следующим показателям: содержание флавоноидов - не менее 11,8% в пересчете на патулетин; содержание тяжелых металлов - менее 0,01%; потеря в массе при высушивании - не более 5%.

3. Проведена сравнительная оценка получения масляного экстракта методом реперколяции и методом репрессования. Показано, что при использовании метода репрессования уменьшается расход экстрагента, сокращается время экстракции (с 4 суток до 2 суток), увеличивается содержание каротиноидов в готовом продукте с 8,4 мг% до 124,5 мг%

4. Установлены показатели и нормы качества масляного экстракта цветков бархатцев: органолептические свойства, подлинность, плотность г/см3 (0,9220,930), кислотное число (не выше 5), число омыления (108-120), йодное число (100,6-102,8), показатель преломления (1,4748 - 1,4751), индекс окисленности (не более 6,5), содержание суммы каротиноидов (не менее 120,0мг%), растворимость.

5. Обоснован состав гранул, содержащих сухой экстракт цветков бархатцев распростертых и соединения включения масляного экстракта цветков бархатцев распростертых с |3-циклодекстрином в соотношении 3:7 и разработана технология их получения методом влажного гранулирования. Установлено, что оптимальным увлажнителем для гранул является 50% спирт этиловый, взятый в количестве 20% от увлажняемой массы. Установлено, что гранулы стабильны в течении 2 лет.

6. Установлены нормы качества для гранул: влажность не более 5%, содержание флавоноидов в пересчете на патулетин - не менее 2,8%, содержание каротиноидов - не менее 8,9 мг%.

7. В результате проведенных фармакологических исследований установлено, что гранулы, полученные на основе сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев распростертых, обладают гепатозащитной активностью. Установлено, что сухой экстракт цветков бархатцев распростертых, обладает гастропротекторной активностью.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гранкина, И.В. Изучение микроэлементного состава цветков бархатцев и травы душицы обыкновенной /И.В. Гранкина, Е.В. Ковтун// Научное обозрение. - 2007. - № 2. - С. 24-26.

2. Гранкина, И.В. Аминокислотный и витаминный состав цветков бархатцев Tagetes Patula L. /И.В. Гранкина, Ж.В. Подгорная// Научное обозрение. - 2008. - № 2. - С. 7-8.

3. Возможность использования извлечений из цветков бархатцев в пищевой промышленности /И.В. Гранкина, [и др.]// Инновационные

технологии в пищевой промышленности: материалы Междунар. 1-й науч.-практ. конф. 1-2 июля 2008г. - Пятигорск: РИА-КМВ, 2008. - С. 181-183.

4. Гранкина, И.В. Определение технологических характеристик цветков бархатцев /И.В. Гранкина// Научная жизнь. -2009. - № 5. -С. 13-14.

5. Гранкина, И.В. Технология получения сухого экстракта цветков бархатцев /И.В. Гранкина, В.И. Погорелов // Вестник развития науки и образования. - 2009. - № 5. - С. 10-13.

6. Гранкина, И.В. Технология получения масляного экстракта цветков бархатцев /И.В. Гранкина, В.И. Погорелов// Журнал научных публикаций аспирантов и докторантов (г. Курск). -2009. - № 9. - С. 89-90.

7. Гранкина, И.В. Разработка технологии гранул с экстрактами цветков бархатцев /И.В. Гранкина, В.И. Погорелов // Фармация. -2010. - № 1. - С. 3032.

МАЛИНИНА ИННА ВИКТОРОВНА

РАЗРАБОТКА СУХОГО И МАСЛЯНОГО ЭКСТРАКТОВ ЦВЕТКОВ БАРХАТЦЕВ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

14.04.01 - технология получения лекарств АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати _.2011 г. Формат бумаги 60x84 1/16

Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл.печ.л.1,0. Тираж 100 экз. Заказ №

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина,! 1)

Оглавление диссертации Малинина, Инна Викторовна :: 2011 :: Пятигорск

Введение.

Глава 1. Обзор литературы. Сведения о фитопрепаратах.

1.1 .Классификация фитопрепаратов.

1.2.Теоретические основы экстрагирования лекарственного растительного сырья.

1.3. Масла как экстрагенты. Масляные экстракты.

1.4.Методы экстрагирования лекарственного растительного сырья.

1.5. Применение циклодекстрина в фармации.

1.6. Гранулы, как лекарственная форма.

ВЫВОДЫ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ:.

Глава 2. Разработка технологии сухого экстракта и масляного извлечения цветков бархатцев.

2.1. Разработка технологии сухого экстракта цветков бархатцев.

2.1.1. Выбор концентрации спирта этилового для получения сухого экстракта цветков бархатцев.

2.1.2. Технологические характеристики цветков бархатцев и выбор метода экстрагирования при получении сухого экстракта цветков бархатцев.

2.1.3. Установление времени наступления равновесия в системе экстрагент — сырье.

2.1.4. Получение спиртового извлечения для получении сухого экстракта цветков бархатцев.

2.1.5. Анализ спиртового извлечения.

2.1.6. Изучение микроэлементного состава цветков бархатцев и спиртового извлечения цветков бархатцев.

2.1.7. Разработка технологии сухого экстракта цветков бархатцев.

2.1.8. Стандартизация сухого экстракта цветков бархатцев.

2.2. Разработка технологии масляного экстракта цветков бархатцев.

2.2.1. Получение масляного экстракта цветков бархатцев диффузионным методом.

2.2.2. Получение масляного экстракта из цветков бархатцев прессованием.

2.2.3. Сравнительная оценка масляных экстрактов, полученных диффузионным методом и репрессованием.

2.3. Витаминный состав извлечений цветков бархатцев.

2.4. Изучение извлечений цветков бархатцев на наличие эфирного масла цветков бархатцев.

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ:.

Глава 3. Разработка технологии гранул с фитокомплексом цветков бархатцев.

3.1. Получение и исследование соединений включения масляного экстракта цветков бархатцев с Р-циклодекстрином.

3.2. Исследования соединения включения.

3.2.1. Исследования внешнего вида соединения включения.

3.2.2. Исследование соединения включения при помощи ИК спектрофотометрии.

3.3. Получение гранул.

3.4. Оценка технологических характеристик и норм качества предлагаемых гранул.

3.5. Стандартизация гранул и установление норм качества.

3.5.1. Идентификация основных биологически активных веществ гранул.

3.5.2. Количественное определение флавоноидов в гранулах.

3.5.3. Количественное определение каротиноидов в исследуемых гранулах

3.6. Определение сроков годности гранул, содержащих сухой и масляный экстракты цветков бархатцев.

3.7. Валидационная оценка предлагаемых методик определения флавоноидов и каротиноидов в гранулах, содержащих сухой и масляный экстракты цветков бархатцев.

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ:.

Глава 4. Изучение фармакологической активности сухих экстрактов цветков бархатцев и гранул, полученных на основе сухого и масляного экстрактов из цветков бархатцев.

4.1. Материалы и методы исследования.

4.2. Результаты и их обсуждение.

4.2.1. Изучение гепатозащитной активности сухих экстрактов, полученных на основе цветков бархатцев.

4.2.2. Изучение гепатозащитной активности гранул, полученных на основе сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев.

4.2.3. Изучение гастропротекторной активности сухого экстракта цветков бархатцев.

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ.

ОБЩИЕ

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Технология получения лекарств", Малинина, Инна Викторовна, автореферат

Актуальность темы

Одним из таких растительных объектов являются бархатцы распростертые, которые широко культивируются на Кавказе, характеризуются высоким содержанием биологически активных соединений и издавна применяются в народной медицине в качестве водного настоя цветков бархатцев, как мочегонное, потогонное и противоглистное средство. Эфирное масло из бархатцев избавляет от неврозов, циститах, уретрите, задержке мочеиспускания, глистах. В народной медицине настой цветков бархатцев распростертых применяют при «куриной слепоте», мочекаменной болезни.

Все эти особенности явились обоснованием для, проведения химических и биохимических исследований суммарных фракций и индивидуальных соединений, осуществленных на кафедрах биологической химии и микробиологии, а также органической химии ПятГФА (А.Ю. Терехов, Ж.В. Подгорная). Полученные ими результаты свидетельствуют о перспективности использования бархатцев распростертых в качестве источника суммарных биологически активных фракций, обладающих разносторонней фармакологической активностью.

В настоящее время в официальной медицинской практике лекарственные препараты из цветков бархатцев распростертых не нашли широкого применения по ряду причин. Одной из них можно считать несовершенство технологии получения лекарственных препаратов, а именно недостаточным изучением параметров методов экстракции и их эффективности. Однако, одной из главных проблем, касающихся технологии и применения препаратов из цветков бархатцев распростертых является то, что в различных фракциях извлечений (гидрофильной и гидрофобной) содержатся различные группы биологически активных соединений (флавоноидов и каротиноидов). Каждая из указанных фракций не может проявить полный фармакологический потенциал всего растения. Разработка такого препарата, который объединил бы биологически активные вещества гидрофильного и гидрофобного характера, позволила бы объединить весь фитокомплекс цветков бархатцев распростертых в одной лекарственной форме.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационной работы является разработка технологии получения комбинированной лекарственной формы (гранул), содержащей гидрофильную (сухой экстракт) и липофильную (масляный экстракт) фракции цветков бархатцев распростертых, на основе малоотходной технологии.

Поставленная цель была достигнута путем решения следующих задач:

2. Обосновать методики и провести анализ сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев распростертых.

3. Разработать методику получения соединения включения масляного экстракта цветков бархатцев распростертых с Р-циклодекстрном.

5. Разработать и предложить нормы и методики оценки качества гранул.

6. Провести фармакологические исследования гепатопротекторного и противоязвенного действия гранул.

Научная новизна работы

Разработана методика перевода липофильной фракции в сухую субстанцию путем получения соединения включения. Изучена и экспериментально показана возможность совмещения полученных гидрофильной и липофильной фракции в одной лекарственной форме. Предложена технология гранул, включающих сухой экстракт цветков бархатцев распростертых и масляный экстракт в виде комплекса включения с (3-циклодекстрином.

Практическая значимость работы

Разработана ресурсосберегающая технология переработки цветков бархатцев распростертых.

Уровень внедрения полученных результатов

На разработанные гранулы составлены и зарегистрированы:

- ТУ 9360-02-53550769-08 и

- ТИ 9369-02-53550769-08 утверждённые ООО «Фармацевт».

На разработанный сухой экстракт составлены и зарегистрированы:

- ТУ 9360-03-53550769-08;

- ТИ 9369-03-53550769-08 и 9369-04-53550769-08 утверждённые ООО «Фармацевт».

На разработанный масляный экстракт составлены и зарегистрированы:

- ТУ 9360-04-53550769-08;

- ТИ 9369-03-53550769-08 и 9369-04-53550769-08 утверждённые ООО «Фармацевт» (акты апробации от 21.05.08).

Апробация работы

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 работ, в том числе 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертация выполнена в соответствии с планом научно -исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской Государственной Фармацевтической Академии Росздрава на кафедре технологии лекарств.

Объём и структура диссертации

Работа выполнена на 131 страницах текста компьютерного набора, содержит 30 таблиц, 20 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 162 источника, из которых 22 иностранных.

На защиту выносятся

1. Обоснование выбора экстрагента с целью получения сухого экстракта цветков бархатцев распростертых.

5. Характеристики масляного и сухого экстрактов по основным БАВ (флавоноидам и каротиноидам), микроэлиментому составу, эфирному маслу.

6. Результаты исследований по созданию гранул, включающих комплекс масляного экстракта цветков бархатцев распростертых с |3-циклодекстрином.

Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев и перспективы их использования"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведен фитохимический анализ извлечений из цветков бархатцев распростертых, полученных с использованием спирта этилового различной концентрации (от 40% до 96%) и установлено, что 70% спирт этиловый позволяет получать извлечения, содержащие наибольшее количество флавоноидов (8,3%) и обладающие максимальным гепатопротекторным действием.

Определены основные технологические характеристики цветков бархатцев распростертых: коэффициент поглощения сырья — 2,47 см3/г, коэффициент образования внутреннего сока - 2,68 см /г, коэффициент увеличения объема - 0,787 см /г.

2. Разработана технология спиртового извлечения цветков бархатцев распростертых в качестве полупродукта, и определены оптимальные условия экстрагирования методом реперколяции, позволяющие истощить сырье на 81,60% (по содержанию флавоноидов). Получен и стандартизирован сухой экстракт цветков бархатцев распростертых и установлены нормы качества по следующим показателям: содержание флавоноидов - не менее 11,8% в пересчете на патулетин; содержание тяжелых металлов - менее 0,01%; потеря в массе при высушивании - не более 5%.

3. Проведены исследования по оптимизации получения масляного экстракта и разработке совместной технологической схемы получения гидрофильной и липофильной фракции из цветков бархатцев распростертых.

Установлено, что предварительное смачивание сухого сырья цветков бархатцев распростертых 70% спиртом этиловым повышает выход каротиноидов в масляное извлечение с 68 мг% до 81 мг%, что позволяет в одном технологическом цикле использовать шрот после спиртовой экстракции для получения масляных извлечений.

4. Проведена сравнительная оценка получения масляного экстракта методом реперколяции и методом репрессования. Показано, что при использовании метода репрессования уменьшается расход экстрагента, сокращается время экстракции (с 4 суток до 2 суток), увеличивается содержание каротиноидов в готовом продукте с 8,4 мг% до 124,5 мг%.

5. Установлены показатели и нормы качества масляного экстракта цветков бархатцев распростертых: органолептические свойства, подлинность, плотность г/см3 (0,922-0,930), кислотное число (не выше 5), число омыления (108-120), йодное число (100,6-102,8), показатель преломления (1,4748 - 1,4751), индекс окислённости (не более 6,5), содержание суммы каротиноидов (не менее 120,0мг%), растворимость.

6. Изучен витаминный состав масляного и сухого экстрактов цветков бархатцев распростертых. Исследования показали, что используя в качестве экстрагента соевое масло (при содержании в нем витамина Е — 170,59 мг/г), в масляных извлечениях содержится значительное количество витамина Е (до 223,9 мг/г) при содержании суммы каротиноидов 124,5 мг%, а в спиртовых извлечениях указанные витамины отсутствовали.

7. Обоснован состав гранул, содержащих сухой экстракт цветков бархатцев распростертых и соединения включения масляного экстракта цветков бархатцев распростертых с (3-циклодекстрином в соотношении 3:7 и разработана технология их получения методом влажного гранулирования. Установлено, что оптимальным увлажнителем для гранул является 50% спирт этиловый, взятый в количестве 20% от увлажняемой массы. Установлено, что гранулы стабильны в течении 2 лет.

8. Установлены нормы качества для гранул: сыпучесть - не менее 5,9 г/с, 7 насыпная масса - 0,88 г/см , влажность - не более 5%, содержание флавоноидов в пересчете на патулетин - не менее 2,8%, содержание каротиноидов - не менее 8,9 мг%. Методики количественного определения флавоноидов и каротиноидов валидированны, а также не отягощены систематической ошибкой, являются правильными, точными.

9. В результате проведенных фармакологических исследований установлено, что гранулы, полученные на основе сухого и масляного экстрактов цветков бархатцев распростертых обладают гепатозащитной активностью. А также установлено, что сухой экстракт цветков бархатцев распростертых, обладает гастропротекторной активностью.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Малинина, Инна Викторовна

1. Азарян, РА. Способ расчета расходных и загрузочных норм на растительное сырьё и экстрагент при производстве суммарных экстракционных препаратов / P.A. Азарян, И.А. Муравьёв // Фармация. -1985. Т. 34, № 2. - С. 44-46.

2. Аксельруд, Г.А. Массообмен в системе твердое тело жидкость / Г.А. Аксельруд. - Львов: Изд. Львовск ун-та, 1970. - 188 с.

3. Аксельруд, Г.А. Экстрагирование. Система твёрдое тело жидкость / Г.А. Аксельруд, В.М. Лысянский.- Л.: Химия, 1974. - 254 с.

4. Андрианов, Е.И. Методы определения структурно-механических характеристик порошкообразных материалов / Е.И. Андрианов. М.: Химия, 1982.-256 с.

5. Астахова, A.B. Современные технологии лекарственных форм: получение, исследование и применение комплексов включения лекарственных веществ с циклодекстринами (обзор) / A.B. Астахова, Н.Б, Демина // Хим.-фармац. журн. 2004. - Т. 38, № 2. - С. 46-49.

6. Бандюкова, В.А. Гелениен из прямостоячих бархатцев, выращенных на Северном Кавказе / В.А. Бандюкова, Н.В. Бондаренко // Биолог, науки. -1965. -№ 1.-С. 168-171.

7. Беликов, В.Г. Валидационная оценка методики количественного определения триазопирима / В.Г. Беликов, A.B. Бережной // Фармация. -2005.-№5.-С. 10-12.

8. Беликов, В.Г. Состояние и перспективы применения математических методов в фармации / В.Г. Беликов, В.Д. Пономарёв, Н.И. Коковкин-Щербак //Всесоюз. съезд фармацевтов (4; 1981; Воронеж): тез. докл.- Воронеж, 1981. -С. 196-197.

9. Березовский, В.М. Химия витаминов. / В.М. Березовский- М.: Пищепромиздат, 1973. 631 с.

10. Берштейн, О .Я. Спектрофотометрический анализ в органической химии / О.Я. Берштейн, Ю.Л. Каминский. Л.: Химия, 1986. - 200 с.

11. Биохимия фенольных соединений / под общ. ред. Дж. Харбона.- М.: Мир, 1968. 452 с.

12. Богданова, JI.C. Исследования по технологии и стандартизации масляного экстракта, мазей и линиментов сушеницы топяной: автореф. дис. канд. фармац. наук: 15.00.01 / Богданова Людмила Степановна. Харьков, 1984.- 15 с.

13. Бодруг, М.В. Биологические особенности, урожайность и химический состав эфирного масла Tagetes signata Bartl. при выращивании в Молдавии / М.В. Бодруг, И.П. Драгалин, П.Ф. Влад // Раст. ресурсы. 1983. - Т. 19, № 3. -С. 323-327.

14. Булатов, М.И. Практическое руководство по фотометрическим и спектрофотометрическим методам анализа / М.И. Булатов, И.П. Калинкин. — Л.: Химия, 1986.- 432 с.

15. Бунин, В.Н. Биохимия витаминов/ В.Н. Бунин. М.: Наука, 1982. - С. 119-121.

16. Венгеровский, А.И. Механизм действия гепатопротекторов при токсических поражениях печени / А.И. Венгеровский, A.C. Саратиков // Фармакология и токсикология 1988. - Т. 51, № 1. - С. 89 - 92.

17. Вергейчик, E.H. Получение соединения включения облепихового масла / E.H. Вергейчик, A.C. Саушкина, В.Н. Купянская // Человек и лекарство: тез. докл. 9 Рос. нац. конгр. 8-12 апр. 2001 г. -М., 2001. С. 687.

18. Верещагина, B.B. Программно- алгоритмический комплекс решения задач производства жидких экстрактов / В.В. Верещагина, Л.З. Шауцукова,

19. A.A. Чудягина // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (53; 1998; Пятигорск): материалы.- Пятигорск, 1998. С. 42.

20. Верещагина, В.В. Разработка ресурсосберегающей технологии и норм качества экстракта аралии жидкого: автореф. дис. канд. фармац. наук: 15.00.01 / Верещагина Виктория Владимировна. Пятигорск, 2000. -21с.

21. Верещагина, В.В. Разработка технологии экстракта аралии жидкого /

22. B.В. Верещагина, В.И. Погорелов // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск): материалы.-Пятигорск, 1999. С. 42.

23. Ветров, П.П. Определение содержания липофильных веществ и суммы каротиноидов в растительном сырье / П.П. Ветров, C.B. Гарная, Л.Г. Долганенко // Хим. фармац. журн. - 1989. - Т. 23, № 3. - С. 23.

24. Влияние легалона и лохеина на эффекты преднизолона при экспериментальном токсическом гепатите / А.И. Венгеровский и др. // Хим.-фармац. журн. 1998. - Т. 32, № 9. - С. 12-14.

25. Влияние растительных экстрактов на течение экспериментального гепатита / З.Г. Самбуева и др. // Фармация. 1987. - № 2. - С. 40 - 45.

26. Выделение гесперидина и суммарной флавоноидной фракции из отходов цитрусовых и экспериментальное изучение их использования в качестве гапатозащитных средств / Е.Г. Доркина и др.. Пятигорск, 2002. -31с-Деп. ВНИИТИРАН 11.07.2002, № 1308 -В 2002.117

27. Георгиевский, В.П. Физико-химические методы анализа биологически активных веществ растительного происхождения / В.П. Георгиевский, H.A. Казаринов, М.О. Каррыев. Ашхабад, 1976. - 238 с.

28. Гепатозащитное действие гранул сухого экстракта горечавника бородатого / С.М. Николаев и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. — 2001. Т. 64, № 1. - С. 49- 52.

29. Гепатозащитное действие флавоноидов вики изменчивой и вики обрубленной /Э.Т. Оганесян и др. // Фармация. 2004. - № 4. - С. 41 - 42.

30. Гепатозащитное действие цветков бархатцев распростертых /Е.Г.Доркина и др. // Фармация. 2004. - № 2. - С. 33-35.

31. Гепатозащитные свойства полифенолов Maackia amurensis Rupr. Et Maxim, при экспериментальной токсической патологии печени / А.И. Венгеровский и др. // Раст. ресурсы 1993. - Т. 29, вып. 3 - С. 95-99.

32. Гепатозащитные свойства препаратов из бархатцев распростертых/ Ю.К. Василенко и др.// Хим.-фарм. журн. 1990. - Т. 24, № 1. - С. 53-56.

33. Гепатозащитные свойства солянки холмовой / A.C. Саратиков и др. // Хим.-фармац. журн. 1990. - Т. 24, № 6. - С. 38 - 40.

34. Гепатозащитные свойства экстракта из надземной части Salsola collina Pall. / А.И. Венгеровский и др. // Раст. ресурсы. 1989. - Т. 25, вып. 4 - С. 575-579.

35. Гончаренко, Г.К. Кинетика экстрагирования растительного материала / Г.К. Гончаренко, Е.И. Орлова // Мед. пром-сть СССР. 1966. - № 3. - С. 3032.

36. ГОСТ 4220-75 Качество продукции. Калия дихромат. М.: Изд.-во стандартов, 1975. - 12 с.

37. ГОСТ 5478-90 Масла растительные и натуральные жирные кислоты. Метод определения числа омыления. М.: Изд.-во стандартов, 1990. - 15 с.

38. ГОСТ 5482-90 Масла растительные. Метод определения показателя преломления. -М.: Изд.-во стандартов, 1990. 15 с.

39. Государственная фармакопея СССР: в 2 т. 11-е изд.- М.: Медицина, 1987-1990.-Т. 1,2.

40. Государственная фармакопея СССР 10-е изд. - М.: Медицина, 1968. -1079 с.

41. Грешных, Р.Д. Вопросы стандартизации фитопрепаратов / Р.Д. Грешных, И.М. Рябцев, З.С. Дубинина // Науч.-технич. информ. сб.-1989. Вып. 8. - С. 54-57.

42. Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений / Н.И. Гринкевич.- М: Высш. шк., 1983. 8 с.

43. Гусаков, С.Д. Липофильные экстракты в фитотерапии и фитокосметике: получение и биологические свойства / С.Д. Гусаков, Ш.Ш. Сагдуллаев, З.А. Хушбакатова // Химия природ, соединений. 1998. - № 4. - С. 437-446.

44. Дороднева, В.И. Идентификация каротиноидов грецкого ореха методами спектрометрии и тонкослойной хроматографии / В.И. Дороднева // Раст. ресурсы. 1967. - Т. 3, вып. 2. - С. 266-268.

45. Завражнов, В.И. Лекарственные растения / В.И. Завражнов, Р.И. Китаева, К.Ф. Хмелев Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1994. - С. 279.

46. Иванова, С.А. Особенности массопереноса липофильных БАВ при экстрагировании сырья двухфазной системой экстрагентов / С.А. Иванова,

47. B.А. Вайнштейн, И.Е. Каухова // Хим.-фармац. журн. 2003. - Т. 37, N° 8.1. C. 30-33.

48. Иванова, Т.Н. Лесная кладовая / Т.Н. Иванова, Л.Ф. Путинцева. Тула: Приок. кн. изд-во, 1993. -351 с.

49. Изучение гепатозащитного действия различных субстанций из цветков бархатцев распростертых / Е.Г. Доркина и др. Пятигорск, 2003. - 8с. Деп. в ВИНИТИ РАН 24.06.03.№ 1209 - В 2003.

50. Изучение процесса экстракции антигепатотоксического средства растительного происхождения / Г.И. Российская и др. // Фармация. 1988. -№ 4. - С. 27-29.

51. Искандаров, P.C. Особенности экстракции эфирных масел из растительного сырья в присутствии поверхностно-активных веществ / P.C. Искандаров, С.Н. Аминов, Х.Т. Авезов // Химия природ, соединений. 1998. -№5. С. 649-652.

52. Искандаров, P.C. Экстракция рутина из бутонов Sophora japónica с использованием поверхностно-активных веществ / P.C. Искандаров, Х.М. Камилов // Фармация. 1997. - № 1. - С. 17.

53. Исследование цветков TAGETES SP. как источника лютеина /В.И. Дейнека и др. // Хим.-фармац. журн. 2007. - Т. 41, № 10. - С. 30-32.

54. Кабата-Пендиас, А. Микроэлементы в почвах и растениях / А. Кабата-Пендиас, X. Пендиас. М., 1989. - 350 с.

55. Калошин, Ю.А. Технология и оборудование масложировых предприятий: уч. для начал, проф. образования. / Ю.А. Калошин.- М.: Академия, 2002. С. 3 - 8.

56. Калошина, H.A. Новые источники биологически активных веществ представителей сем. Asteraceaee / H.A. Калошина. Кишинев, 1980. - С. 183120

57. Капелев, И.Г. Бархатцы — эфиромасличные растения / И.Г. Капелев // Раст. ресурсы. 1971. - Т. 7, вып. 4. - С. 571 - 574.

58. Касаткин, А.Г. Основные процессы и аппараты химической технологии / А.Г. Касаткин. М: Химия, 1971. - 784 с.

59. Клышев, JI.K. Флавоноиды растений / JI.K. Клышев, В.А. Бандюкова, JI.C. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978. - 220 с.

60. Колб, В.Г. Справочник по клинической химии / В.Г. Колб, B.C. Камышников Минск: Беларусь, 1982. - 336 с.

61. Компанцева, Е.В. Получение и исследование комплексов включения ß-циклодекстрина с некоторыми синтетическими и природными лекарственными веществами: автореф. дис. д-ра фармац. наук: 15. 00. 02 / Компанцева Евгения Владимировна. Пятигорск, 1992. - 35с.

62. Компанцева, Е.В. Получение и исследование соединения включения рыбьего жира с ß-циклодекстрином / Е.В. Компанцева, М.В. Гаврилин, A.M. Куянцева // Фармация. 1992. - № 5. - С. 29-32.

63. Компанцева, Е.В. Производные ß-циклодекстрина и перспективы их использования в фармации. / ЕВ. Компанцева, М.В. Гаврилин, JI.C. Ушакова // Хим.- фармац. журн. 1996. - Т. 30, № 4. - С. 43-46.

64. Комплексная переработка сырья ноготков и зверобоя / И.Е. Каухова и др. // Человек и лекарство: тез. докл. 6 Рос. нац. конг. 19-23 апр. 1999г. М., 1999.-С. 417.

65. Кондратьева, Т.С. Технология лекарственных форм: в 2 Т./ под ред. Т.С. Кондратьевой, JI.A. Ивановой. М.: Медицина, 1991. - Т. 1. - 495 е., Т. 2. -435 с.

66. Либинтов, М.А. Здоровье без лекарств / М.А. Либинтов. Минск, 1996. -348 с.

67. Логазидзе, Д.С. Жирнокислотный состав цветков Tagetes patula L., культивируемых в Грузии/Д.С. Логазидзе// Приоритеты фармац. науки и практики: материалы заочн. междунар. конф. М., 2006. - С. 312-313.

68. Максютина, Н.П. Терпеноиды //Растительные лекарственные средства. -Киев, 1985.-С. 52-68.

69. Масло облепиховое: фармакоп. ст. 42-1730-95. -М., 1995. 5 с.

70. Махлаюк,»В.П. Лекарственные растения в народной медицине / В.П. Махлаюк. Саратов: Приволжское кн. изд., 1993. — 385 с.

71. Машанов, В.И. Пряно-ароматические растения / В.И. Машанов. М.: Агропромиздат, 1991 г. - 223 с.

72. Мешковский, А.П. Испытания стабильности и установление сроков годности лекарственных препаратов / А.П. Мешковский // Аптека 2000. - № 15. — С. 15.

73. Минина, С.А. Оптимизация процесса экстрагирования корня женьшеня / С.А. Минина, Л.В. Шигарова, В.А. Вайнштейн // Хим. фармац. журн. 1998. -Т. 32, №7.-С. 42-45.

74. Минина, С.А. Совершенствование технологии настойки «Биоженьшень» методом перколяции / С.А. Минина, А.Н. Шиков, Л.В. Полякова // Химия и технология лекарственных веществ: материалы Всерос. научн. конф.: СПб, 1994.-С. 49.

75. Минина, С.А. Теория и аппаратурное оформление процесса экстракции / С.А. Минина, H.A. Громова. Л.: ЛХФИ, 1985. - 40 с.

76. Минина, С.А. Химия и технология фитопрепаратов: учеб. пособие / С.А. Минина, И.Е. Каухова. СПб, 2004. - 558 с.122

77. Молчанов, Г.И. Интенсивная обработка лекарственного сырья /Г.И. Молчанов. М: Медицина, 1981. - 208 с.

78. Муравьёв, И.А. Лабораторный регламент производства. / И.А. Муравьёв, В.И. Погорелов, В.А Пинчук. Пятигорск, 1980. — 32 с.

79. Муравьев, И.А. Теоретические основы производства жидких экстрактов методом реперколяции с законченным циклом: метод, рекомендации / И.А. Муравьев, Ю.Г. Пшуков Пятигорск, 1985. - 48 с.

80. Муравьева, Д.А. Фармакогнозия: учеб. для студ. фармац. вузов / Д.А. Муравьёва, И.А. Самылина, Г.П. Яковлев. 4-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2002. - 654 с.

81. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / под ред. Багировой В.А., Северцева В.А. СПб.: СпецЛит, 2001. - 223 с.

82. Никитина, Т.И. Изучение масляного экстракта, полученного из сбора «Экзофит» / Т.И. Никитина, К.А. Пупыкина // Решение актуальных задач фармации на современном этапе: тез. докл. научн. конф., посвящ. 50-летию НИИ фармации. -М., 1994. С. 253-254.

83. Новые каротиноидсодержащие фитопрепараты / П.П. Ветров и др. // Провизор. 2000. - № 16. - С. 19-20.

84. Новые подходы к комплексной переработке сухой травы зверобоя / В.А. Мельникова и др. // Хим.-фармац. журн. 1999. - Т. 33, № 12. - С. 27-30.

85. Оганесян, Э.Т. Использование цианидиновой реакции в анализе флавоноидов: метод, рекомендации / Э.Т. Оганесян, А.В. Симонян, А.Л. Шинкаренко Пятигорск, 1975. - 23 с.

86. Особенности влияния степени измельчения растительного сырья на процесс экстракции БАВ / О.М. Баев и др. // Человек и лекарство: тез. докл. 6 Рос. нац. конгр. 19-23 апр. 1999г. -М., 1999. С. 384.

87. Пастушенков, JI.B. Лекарственны растения: использование в народной медицине и быту: методическое пособие / Л.В. Пастушенков, А.Л. Пастушенков, В.Л. Пастушенков. СПб.: ДЕАН, 1998. - 340 с.

88. Перспективы создания сухих экстрактов / И.А. Самылина и др. // Фармация. 2006. - № 2 - С. 43-46.

89. Плюснин, А.Н. Кинетика набухания лекарственного сырья растительного происхождения. Набухание горечавки крупнолистной в воде и водно-спиртовой смеси / А.Н. Плюснин, Л.А. Тихонова // Хим. фармац. журн. - 1996.-Т. 30, №2.-С. 39-41.

90. Погабало, A.B. Иммунотропная активность природного каротин-токоферолового комплекса: автореф. дис. канд. мед. наук: 14.00.25 / Погабало Андрей Владимирович. М., 1997. - 23 с.

91. Погорелов, В.И. О новом способе получения облепихового масла репрессованием / В.И. Погорелов, И.А. Муравьёв, В.А. Пинчук // Всесоюз. съезд фармацевтов (3; 1980; Кишинёв): тез. докл. Кишинёв, 1980. - С. 115.

92. Подгорная, Ж.В. Исследование цветков бархатцев распростертых, с целью получения биологически активных веществ: автореф. дис. канд. фармац. наук: 15.00.02 / Подгорная Жанна Валериевна. Пятигорск, 2008. -23 с.

93. Пономарев, В.Д. Экстрагирование растительного сырья / В.Д. Пономарев. М.: Медицина, 1976. - 202 с.

94. Программно алгоритмический комплекс решения задач производства жидких экстрактов / В.В Верещагина и др. // Фармация. - 1999. - Т. 48, № 1. -С. 21-22.

95. Промышленная технология лекарств: учеб.: в 2 т. / В.И. Чуешов и др.. -Харьков: МТК Книга, 2002. - Т. 2. - 716 с.

96. Протодьяконов, И.О. Гидродинамика и массообмен в дисперсных системах жидкость — твердое тело / И.О. Протодьяконов, И.Е. Люблинская, А.Е. Рыжков. Л.: Химия, 1987. - 334 с.

97. Пшуков, Ю.Г. Метод нормирования качества жидких экстрактов и настоек / Ю.Г. Пшуков // Проблема стандартизации и контроля лекарственных средств: тез. докл. М, 1991. - Т. 1. - С. 63-64.

98. Пшуков, Ю.Г. Методика одновременного определения коэффициента поглощения, образования внутреннего сока и увеличения объема при растворении экстрактивных веществ / Ю.Г. Пшуков // Фармация. 1990. - № 4.-С. 24.

99. Пшуков, Ю.Г. Проблема стандартизации жидких экстрактов и настоек / Ю.Г. Пшуков // Регион, конф. по фармации и фармакологии (47; 1992; Пятигорск): материалы. Пятигорск, 1992. - С. 24.

100. Пшуков, Ю.Г. Равновесный метод определения экстрактивных веществ в сырье / Ю.Г. Пшуков, И.А. Муравьев // Фармация. 1987. - Т. 36, № 6. - С. 17-21.

101. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав и использование. Сем. Аз1егазеае Л., 1988. - С. 56-59.

102. Ребиндер, П.А. Успехи коллоидной химии / П.А. Ребиндер. М.: Наука, 1973.-С. 15-23.

103. ПЗ.Сентебова, H.A. Предложения по унификации методов определения триглицеридов в сыворотке крови / H.A. Сентебова, Н.В. Салицкая // Унификация лабораторных методов исследований. М:, 1978. - Вып. 8. - С. 67 - 75.

104. Сергеева, Н.В. Качественное и количественное изучение каротиноидов в некоторых галеновых препаратах / Н.В. Сергеева, Н.Д. Захарова // Фармация.- 1977. Т. 26, № 1. - С. 34-38.

105. Совершенствование технологии производства растительных масел, пищевых и кормовых белковых продуктов: сб. науч. тр. / ВНИИ жиров, Научно-производственное объединение "Масложирпром.- Д.: ВНИИЖ, 1987.- 138с.

106. Содержание каротиноидов и флавоноидов в соцветиях некоторых сортов Calendula officinalis. / С.А. Ивасенко и др. // Раст. ресурсы. 2000. - Т. 36, вып.2. - С. 107-110.

107. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям. Фитотерапия / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: Медицина, 1990. - 463 с.

108. Сопоставление антиоксидантных свойств новых препаратов, производных биофлавоноидов и дубильных веществ / JI.B. Яковлева и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. — 2001. — Т. 64, № 2. — С. 55- 59.

109. Справочник по лекарственным растениям / A.M. Задорожный и др.. -М.: Лес. пром-сть, 1990. 250 с.

110. Стрелков, Р.Б. Статистические таблицы для ускоренной оценки фармакологического эффекта / Р.Б. Стрелков // Фармакология и токсикология. 1986. - № 4. - С. 100 - 104.

111. Строев, Е.А. Практикум по биологической химии / Е.А. Строев, В.Г. Макарова. -М: Высш. шк., 1986.-231 с.

112. Сур, C.B. Состав эфирных масел лекарственных растений / C.B. Сур // Раст. ресурсы. 1993. - Т. 29, вып. 1. - С. 98-117.

113. Тавлинова, Г.К. Цветоводство / Г.К. Тавлинова. Л.: Лениздат, 1970. -575 с.

114. Тамова, М.Ю. Теория и практика конструирования продуктов питания функционального назначения на основе натуральных структурообразователей и каротиноидов: автореф. дис.д-ра. технич. наук: 05.18.01 / Тамова Майя Юрьевна. Краснодар, 2003. - 50 с.

115. Технология и стандартизация лекарств / под ред. В.П. Георгиевского, Ф.А. Конева. Харьков: Рирег, 1996. - 784 с.

116. Технология производства растительных масел / В.М. Копейковский и др. -М.: Лёгкая и пищ. пром-сть, 1982. 352 с.

117. Флора СССР: в 30-ти томах / под общ. ред. В.Л. Комарова. М.-Л.: Изд-воАНСССЗ.

118. Хаззаа, И.Х. Экстрагирование липофильных БАВ из травы зверобоя водно-масляными эмульсиями / И.Х. Хаззаа, В.А. Вайнштейн, Т.Х. Чибиляев // Хим.-фармац. журн. 2003. - Т. 37, № 7. - С. 20-23.

119. Хамидов, Н.И. Высокоэффективная технология производства хлопкового масла: автореф. дис. д-ра. техн. наук: 05.18.06 / Хамидов Нематулла Ибрагимович. СПб., 1996. - 38 с.

120. Чибиляев, Т.Х. Комбинированные антимикробные лекарственные средства с Ь-каротином: автореф. дис. канд. фармац. наук: 15.00.01 / Чибиляев Тимур Хайдарович. СПб., 1998. - 27с.

121. Шелестова, В.В. Современные подходы к стандартизации лекарственных средств, содержащих каротиноиды: бета-каротин и ликопин: автореф. дис. канд. фармац. наук: 15.00.02 / Шелестова Валентина Васильевна. М., 2002. - 26с.

122. Шиков, А.Н. Растительные масла и масляные экстракты: технология, стандартизация, свойства / А.Н. Шиков, В.Г. Макаров, В.Е. Рыженков. М.: Рус. Врач 2004.-С. 8-53.

123. Шинкаренко, А.Л. К вопросу об экспериментально клиническом изучении препарата из Тамбуканской грязи / А.Л. Шинкаренко // Учебные записки ПГФИ. - Пятигорск, 1957. - Т. 2. - С. 453-459.

124. Элементы экспериментальной фармакологии / под ред. Л.Н. Сернова, В.В. Гацура.- М.: Медицина, 2000. 352 с.

125. Эффективность растительного полифенольного препарата пифламина при лекарственном поражении печени / Л.В. Яковлев и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. 1998. - Т. 61, № 6. - С. 48- 50.

126. Acylated quercetagetin glycosides with antioxidant activity from Tagetes maxima/ Parejo I. et al.// Phytochemistiy. 2005. - Vol. 66, № 19. - P. 23562362.

127. Antioxidant and hepatoprotectiv effect of Bauhinia racemosa agains paracetamol and carbon tetrachloraide indused liver damage in rats / M. Gupta et al. // Iranian of pharmacology and therapeutics 2004. - Vol. 3, № 1. - P. 12 - 20.

128. Bader, W. Die Carotinoide / W. Bader // Chem. Unserer Zeit. 1972. - Bd.6., № 3. - P. 94-96.

129. Bensky, D. Chinese herbal medicine material madica / D. Bensky, A. Gamble. Seattle: Eastland Press, 1986. - 690 p.

130. Biosynthesis of thiophenes in Tagetes patula/ Morgl L. et al.// Phytochemistiy. 2001 - Vol. 58, № 6. - P. 875-887.

131. Bragdon, J.H. Method for extraction of serum lipids / J.H. Bragdon, P.W. Sunderman // Lipids and the steroid hormones in clinical medicine. Philodelphia; Monreal, 1960.-278 p.

132. Carotinoid composition of marigold (Tagetes erecta) flower extract used as nutritional supplement /Hadden W.L. et al.// J. Argic Food Chem. 1999. - Vol. 47, № 10. - P. 4189-4194.

133. Karting, K. Modern methods in plant analysis / K. Karting // Pharmacy j.-1989.-№1 .p. 3.

134. Krishnamurty, H. G. Chemistry of the colour tests for chalkones, flavonones and aurones / H. G. Krishnamurty, T.A. Seshardi // Current Sci (India). 1965.-Vol. 34, №24.- P. 681-685.

135. Mabry, T.J. Analysis of flavonoids / T.J. Mabiy // Persbectives in phytochemistry. London: Pegamon press, 1994. - P. 176.

136. Ma, T.S. Microchemical investigation of medical plants / T.S. Ma, R. Koper // Mikrochim. acta.- 1968.- Vol.1, № 1.- p. 167-181.

137. Miller, G.L. Protein determination for barge numbers of samples / G.L. Miller // Anal. Chem. 1959. - Vol. 35, № 5. - P. 964-966.

138. Montgomery, R. Determination of glycogen / R. Montgomery // Arch. Biochem. Biophys. 1957. - Vol. 67, № 2. - P. 378.

139. Ohkawa, H. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thyobarbituric acid reaction / H. Ohkawa, N. Ochihi, K. Vagi // Anal. Biochem.- 1979. Vol. 95, № 2. -P. 351-358.

140. Okabe, M. Emulsifiers for oil used in food, chemical industry, pharmaceutical and cosmetics / M. Okabe, H. Hashimoto // Jpn. Kokai Tokkkyo Koho JP- 1989. -№2.-P. 3.

141. Jewell, C. Effect of dietary supplementation with carotenoids on xenobiotic metabolizing enzymes in the liver, lung, kidney and small intestine of the rat / C. Jewell, N.M. O'Brien // J. Nutr.- 1999.- Vol. 81, № 3.- P. 235-242.

142. Rajasekaran, T. Production of thiophenes from callus cultures of Tagetes Patula L. and its mosquito larvicidal activity/ Rajasekaran T., Ravishanakan G.A., Reddy B.O. // Indian J. Exp Biol. 2003. - Vol. 41, № 1. - P. 63-68.

143. Tierra, M. The way of herbs / M. Tierra. — New York; London; Toronot: Pocket Books, 1990. 380 p.

144. Trinder, P. Antioxidant activity flavonoids / P. Trinder // Ann. Clin. Biochem. 1969. - Vol. 6, №. 2. - P. 24.

145. Wilde, P.E. New solvents for extraction / P.E Wilde, P.G. McClory // Perfumer and Flavorist. 1994. - Vol. 19. - P. 25-28.

146. Kiyomi, K. P-carotene effectively scavenges toxic nitrogen oxides: Nitrogen dioxide and peroxynitrous acid / K. Kiyomi, H. Kazuyuki, T. Susumu // FEBS Lett.- 1997.- Vol. 404, № 2-3.- P.175-178.