Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава, технологии и стандартизация офтальмологической лекарственной формы, направленной на профилактику и лечение синдрома сухого глаза

На правах рукописи

Придачина Дарья Викторовна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА, ТЕХНОЛОГИИ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ОФТАЛЬМОЛОГИЧЕСКОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ, НАПРАВЛЕННОЙ НА ПРОФИЛАКТИКУ И ЛЕЧЕНИЕ СИНДРОМА СУХОГО ГЛАЗА

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

13 НОЯ 2014

Белгород - 2014

005554984

Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Жилякова Елена Теодоровна Официальные оппоненты:

Степанова Элеонора Федоровна, доктор фармацевтических наук, профессор Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет», профессор кафедры технологии лекарств

Гузев Константин Сергеевич, доктор фармацевтических наук, ЗАО «Ретиноиды», ведущий специалист отдела обеспечения качества, уполномоченное лицо

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет»

Защита состоится «8» декабря 2014 г. в 14 00 часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 при Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений» (117216, г. Москва, ул. Грина, д. 7) по адресу: 123056, г. Москва, ул. Красина, д. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии www.vilarnii.ru

Автореферат диссертации разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

Громакова Алла Ивановна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования.

Статистические данные последних лет свидетельствуют о значительной распространенности синдрома сухого глаза (ССГ) во всем мире, что позволяет считать его болезнью XXI века (Е.А. Егоров, 2007). Поиск новых эффективных методов лечения ССГ остается актуальным до настоящего времени.

ССГ зарегистрирован у 9-18% населения развитых стран, за последние 30 лет отмечен рост заболеваемости им в 4,5 раза и тенденции к снижению не наблюдается (С.Э. Аветисов, 2008; Э.В. Супрун, 2013).

Все клинические разновидности роговично-конъюнктивального ксероза могут являться проявлениями многофакторного заболевания слезы и поверхности глаза, так называемого ССГ (Е.Е. Сомов, 2011). ССГ может быть как самостоятельным заболеванием в офтальмологии, так и сопутствующим.

К развитию ССГ могут привести такие факторы, как неблагоприятные условия окружающей среды, применение рефракционных операций, использование мягких контактных линз, воздействие электромагнитного излучения при работе с компьютером, кондиционированного воздуха, применение лекарственных средств отдельных фармакологических групп.

Нужно отметить тот факт, что аллергические заболевания глаз и ССГ нередко одновременно регистрируются у пациента, кроме этого, они имеют общие симптомы (зуд, «сухость» глаз), что вызывает необходимость коррекции лечения (G.J. Berdy, 2004; L. Bielory, 2013). Исследования, направленные на изучение сочетания у пациентов ССГ и аллергических заболеваний глаз, указывают на сложность их диагностики и дифференцирования, поэтому наиболее продуктивным направлением является лечение сразу обоих заболеваний (L. Bielory, 2013).

В настоящее время на фармацевтическом рынке России зарегистрирован достаточно широкий ассортимент лекарственных средств и медицинских изделий группы слезозаменителей для профилактики и лечения ССГ.

Ассортимент лекарственных средств и медицинских изделий представлен преимущественно монопрепаратами, позволяющими воспроизвести только искусственную защитную слезную пленку на поверхности глаза и таким образом защитить роговицу. Для оптимизации лечения ССГ необходим комплексный подход.

Перспективным для профилактики и лечения рассматриваемой патологии является использование витаминов группы В: цианокобаламина (витамин В^) и пиридоксина гидрохлорида (витамин В6), а также дифенгидрамина гидрохлорида, что особенно важно ввиду клинических проявлений ССГ.

Введение антигистаминного компонента — дифенгидрамина гидрохлорида, блокатора Ш-гистаминовых рецепторов - позволяет уменьшить проявления симптомов раздражения тканей глаза (покраснение, зуд, ощущение инородного тела). Введение комплекса витаминов группы В: цианокобаламина и пиридоксина гидрохлорида, участвующих в регуляции обменных процессов,

улучшает регенерацию поврежденных тканей глаза, нормализует общее состояние пациента, ускоряет процесс выздоровления.

Глазные капли для профилактики и лечения ССГ должны быть пролонгированными, так как именно это обеспечивает основной терапевтический эффект - создание защитного искусственного барьера на поверхности глаза. Введение гидрофильного полимера - гидроксипропилметилцеллюлозы -обладающего высокой вязкостью в рекомендуемых пределах, увеличит продолжительность контакта раствора глазных капель с роговицей, кроме того, полимер выполнит роль протектора эпителия роговицы и при этом восстановит оптические характеристики слезной пленки.

Разработка комбинированных глазных капель с пиридоксина гидрохлоридом, цианокобаламином, дифенгидрамина гидрохлоридом, гидроксипропилметилцеллюлозой позволит обеспечить комплексную терапию ССГ, поэтому настоящее исследование является актуальным. Степень разработанности темы.

Разработка комбинированных глазных капель комплексного действия представляет огромный интерес, и в то же время это направление разработано недостаточно: технологические исследования разработки комбинированных глазных капель комплексного действия для профилактики и лечения ССГ ограничены, отсутствуют исследования, в которых рассмотрена возможность использования комплекса витаминов для улучшения метаболических процессов в тканях глаза и антигистаминного компонента для уменьшения аллергических симптомов.

Цель и задачи исследования.

Целью диссертационного исследования является разработка состава, технологии комбинированных глазных капель для профилактики и лечения синдрома сухого глаза, а также их стандартизация. Для достижения данной цели поставлены следующие задачи:

- изучить физико-химические свойства производных целлюлозы (гидроксипропилметилцеллюлозы, гидроксиэтилцеллюлозы), обосновать выбор гидрофильного полимера для глазных капель;

- обосновать и разработать состав комбинированных глазных капель комплексного действия для профилактики и лечения синдрома сухого глаза;

- разработать технологию производства глазных капель;

- осуществить стандартизацию разработанного состава глазных капель;

- провести биофармацевтические исследования глазных капель;

- разработать нормы качества и установить сроки годности. Научная новизна исследования.

На основании технологических, аналитических и биофармацевтических исследований впервые разработан состав комбинированных глазных капель комплексного действия для профилактики и лечения ССГ в двух видах первичной упаковки: одноразовых тюбиках-капельницах из полиэтилена и флаконах многоразового использования из стекла.

В состав комбинированных глазных капель для профилактики и лечения синдрома сухого глаза впервые введены следующие активные компоненты: гидроксипропилметилцеллюлоза, пиридоксина гидрохлорид, цианокобаламин, дифенгидрамина гидрохлорид.

Разработаны и валидированы методики анализа активных компонентов и консерванта, входящих в состав глазных капель. Разработаны технологические схемы, нормы качества, установлены сроки годности для лекарственной формы.

Новизна основного фрагмента исследования подтверждена свидетельством о регистрации в качестве ноу-хау результата интеллектуальной деятельности № 162 «Состав комбинированный офтальмологический для профилактики и лечения синдрома «сухого глаза» от 14 ноября 2013 г.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Теоретическая значимость работы заключается в изучении и обобщении имеющихся в мировой научной литературе данных о проводящихся на современном этапе исследованиях, касающихся профилактики и лечения ССГ, доказательств необходимости комплексного лечения и разработки комбинированных глазных капель, а также в проведении анализа составов зарегистрированных в Российской Федерации лекарственных средств и медицинских изделий для профилактики и лечения ССГ группы «искусственная слеза».

Практическая значимость работы — заключается в разработке комбинированных глазных капель для профилактики и лечения ССГ с использованием витаминов группы В, антигистаминного компонента и гидрофильного полимера.

Основные положения диссертации внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической технологии (акт внедрения от 09.09.2013 г.), кафедры фармацевтической химии и фармакогнозии (акт внедрения 09.09.2013 г.) ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет»; кафедры фармацевтической технологии (акт внедрения № 311 от 27.08.2014 г.), кафедры фармацевтической, токсикологической и аналитической химии (акт внедрения № 312 от 27.08.2014 г.) ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет».

Проведена наработка лекарственного средства во флаконах из стекла гидролитического 1-го класса в условиях производства на предприятии ООО «Дубна-Биофарм», Московская область, г. Дубна (акт внедрения предложения от 25.08.2013 г.).

Проведена наработка лекарственного средства в одноразовых тюбиках-капельницах в условиях производства на предприятии ООО «Гротекс», г. Санкт-Петербург (акт внедрения предложения от 08.04.2014 г.).

Разработан проект нормативной документации глазных капель «АкваВит» в одноразовых тюбиках-капельницах (проект апробирован ООО «Гротекс» 08.04.2014 г.).

Методология н методы исследования.

В диссертационном исследовании использованы физико-химические, физические, технологические, биофармацевтические, микробиологические методы исследования. Методология исследования базируется на основных технологических условиях разработки глазных капель.

Разработанный алгоритм исследования отражает структуру и последовательность выполнения всех этапов работы.

Положения, выносимые на защиту.

1. Результаты технологических, биофармацевтических исследований с целью разработки оптимального состава комбинированных глазных капель комплексного действия для профилактики и лечения синдрома сухого глаза с гидроксипропилметилцеллюлозой, пиридоксина гидрохлоридом, цианокобаламином и дифенгидрамина гидрохлоридом.

2. Технологические схемы производства глазных капель для профилактики и лечения синдрома сухого глаза во флаконах многоразового использования и в одноразовых тюбиках-капельницах.

3. Результаты разработки методик анализа методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии и их валидации.

4. Результаты разработки норм качества и установления сроков годности глазных капель для профилактики и лечения синдрома сухого глаза во флаконах многоразового использования и в одноразовых тюбиках-капельницах.

Степень достоверности результатов.

Благодаря комплексному подходу к выполнению научно-исследовательской работы, использованию современных технологических, физико-химических, химических методов исследования, методов биологического контроля, нами получены воспроизводимые и однозначные результаты.

Результаты проводимых исследований обработаны статистически при помощи программы Microsoft Excel с использованием параметрического t-критерия Стьюдента согласно требованиям ГФ XI (выпуск 1, раздел «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний») и в соответствии с требованиями руководства по валидации методик анализа лекарственных средств (B.JL Багирова, 2007). Для получения достоверных статистически сходимых результатов соблюдены правила повторности опытов.

Апробация результатов.

Основные результаты диссертационной работы обсуждены на международных, всероссийских и региональных конференциях, материалы диссертации доложены на IV Международной медицинской научной конференции молодых ученых и студентов (к 300-летию со дня рождения М.В. Ломоносова, Архангельск, 2011 г.); региональном отраслевом форуме «Медицинская биотехнология. Биофармацевтическая промышленность» (Белгород, 2012 г.); 5-й юбилейной Международной научно-практической конференции «Геронтологические чтения - 2012» (Белгород, 2012 г.);

68-й региональной научной конференции по фармации, фармакологии и подготовке провизоров «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2013 г.); III Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, 2013 г.); первой научно-практической конференции аспирантов и молодых ученых «Молодые ученые и фармация XXI века» (Москва, 2013 г.).

По результатам диссертационной работы опубликовано 13 научных работ, из них 5 научных статей в изданиях, входящих в перечень, рекомендуемый ВАК РФ.

Содержание диссертационной работы соответствует паспорту специальности 14.04.01 - технология получения лекарств. Результаты проведённых исследований соответствуют пунктам 3, 4 и 6 данного паспорта специальности.

Диссертационная работа включает в себя 151 страницу машинописного текста, содержит 34 таблицы, 18 рисунков.

Состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследований, трех глав собственных экспериментальных исследований, выводов, заключения, списка литературы, который включает 187 источников, из них 121 зарубежный, а также приложений.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении изложены актуальность, цель и задачи исследования, обоснована его научная новизна, теоретическая и практическая значимость работы, представлены методология и методы исследования.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В первой главе представлены сведения о современном состоянии исследований профилактики и лечения синдрома сухого глаза, рассмотрен вопрос о необходимости его комплексного лечения.

На основании проанализированной научной литературы, нормативной документации, поиска данных среди патентов проведен анализ зарегистрированных лекарственных средств и медицинских изделий, используемых для профилактики и лечения ССГ группы слезозаменителей, установлены небольшой ассортимент монокомпонентных лекарственных средств отечественного производства и отсутствие комбинированных глазных капель комплексного действия.

В свете современного развития фармацевтического производства проведена гармонизация фармакопейных требований к глазным каплям в соответствии с требованиями фармакопей стран Европы, США и России, проанализированы фармакопейные требования к качеству глазных капель и предложен ряд дополнений и уточнений, направленных на расширение и актуализацию фармакопейных требований к качеству глазных капель.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Во второй главе приведены характеристики субстанций пиридоксина гидрохлорида («Асгоэ О^атсБ», Бельгия), дифенгидрамина гидрохлорида («Полисинтез», Россия), цианокобаламина («Аите Oгganics», Испания), производных целлюлозы: гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ), гидроксиэтилцеллюлозы (ГЭЦ), а также вспомогательных веществ, используемых в ходе исследования; описаны приборы и оборудование; методы исследования. Краткие характеристики используемых марок ГПМЦ, ГЭЦ, их диапазоны вязкости, производители представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Производные целлюлозы, используемые в работе

Название Диапазон вязкости, мПа-с Производитель

гпмцз TopMill® D clear 2,7-3,6 Hydroxypropyl methylcellulose, «Biogrund» (Германия), партия 808042-L

ГПМЦ BonuCel® D 6 Н 2910 4,8-7,2 Hydroxypropyl methylcellulose, «Biogrund» (Германия), партия 103095-L

ГПМЦ 4000 BonuCel® 3000-5600 Hydroxypropyl methylcellulose, «Biogrund» (Германия), партия 103103-L

ГЭЦ Natrosol 250НХ Pharm 1500-2500 Hydroxyethylcellulose, «Ashland» (Нидерланды), партия 0017, № 431292

Определение рН, плотности, вязкости, осмолярности, прозрачности, стерильности модельных растворов проводили согласно методикам общих фармакопейных статей: ОФС 42-0048-07 «Ионометрия», ОФС 42-0037-07 «Плотность», ОФС 42-0038-07 «Вязкость», ОФС 42-0047-07 «Осмолярность», ОФС 42-0051-07 «Прозрачность и степень мутности», ОФС 42-0066-07 «Стерильность» ГФ XII издания.

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ГЛАЗНЫХ КАПЕЛЬ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ СИНДРОМА СУХОГО ГЛАЗА

Экспериментальный блок состоит из трех этапов - технологический, аналитический и биофармацевтических исследований.

На этапе технологических исследований проведено изучение физико-химических и реологических свойств производных целлюлозы, разработаны модельные растворы комбинированных глазных капель и технологические схемы производства.

При разработке состава комбинированных глазных капель проведен выбор гидрофильного полимера как основного действующего вещества и дисперсионной среды глазных капель. Изучены физико-химические свойства гидрофильных полимеров - производных целлюлозы. Критериями рационального выбора полимера являлись водородный показатель (рН), динамическая вязкость, плотность.

Для исследования физико-химических и реологических свойств приготовлены растворы ГМПЦ в концентрациях 0,3%-5,0% и ГЭЦ в концентрациях 0,1%-0,4%, в таблице 2 представлены результаты исследований рН, динамической вязкости и плотности.

Таблица 2 - Физико-химические показатели растворов полимеров

№ п/п Наименование и концентрация раствора полимера Плотность, г/см3 Динамическая вязкость, мПа-с рН

1 ГЭЦ 250 НХ (0,1%) 0,995 3,03 7,36

2 ГЭЦ 250 НХ (0,2%) 0,994 7,95 7,18

3 ГЭЦ 250 НХ (0,3%) 0,996 19,94 7,00

4 ГЭЦ 250 НХ (0,4%) 1,0 25,3 7,14

5 ГПМЦ D 4000 Н 2208 (0,3%) 0,995 7,02 6,85

6 ГПМЦ D 4000 Н 2208 (0,4%) 0,997 12,6 7,01

7 ГПМЦ D 4000 Н 2208 (0,5%) 0,997 21,5 7,14

8 ГПМЦ TopMill D clear 290.04 (1%) 0,990 2,15 7,23

9 ГПМЦ TopMill D clear 290.04 (2%) 0,990 3,29 6,69

10 ГПМЦ TopMill D clear 290.04 (3%) 1,0 4,9 6,97

11 ГПМЦ TopMill D clear 290.04 (4%) 1,0 17,7 6,51

12 ГПМЦ TopMill D clear 290.04 (5%) 1,0 27,5 6,62

13 ГПМЦ BonuCel D6 H 2910 (1,0%) 0,997 2,56 7,23

14 ГПМЦ BonuCel D6 H 2910 (2,0%) 1,004 5,16 6,69

15 ГПМЦ BonuCel D6 H 2910 (3,0%) 0,998 9,89 6,97

16 ГПМЦ BonuCel D6 H 2910 (4,0%) 0,994 17,73 6,51

17 ГПМЦ BonuCel D6 H 2910 (5,0%) 0,998 28,5 6,62

Учитывая тот факт, что водородный показатель (рН) всех исследуемых растворов находится в пределах допустимых значений, комфортных для глаза (4,5-9,0), показателем выбора оптимального раствора полимера считали вязкость (ротационный вискозиметр «ГигщПаЬ ЭА»),

Близкими к значениям рекомендуемого диапазона вязкости глазных капель (15-30 мПа-с) являются растворы ГЭЦ № 3 и № 4 со значениями 19,9 мПа-с, 25,3 мПа-с соответственно и растворы ГПМЦ № 6, № 7, № 11, № 12, № 16 и № 17 со значениями 12,6; 21,5; 17,7; 27,5;17,3; 28,5 мПа-с соответственно. Образцы № 4, № 7, № 11, № 12, № 16 и № 17 имеют высокую вязкость, что может затруднить формирование капли из дозирующего устройства. Поэтому в качестве протектора эпителия роговицы для модельных растворов глазных капель выбраны растворы № 3 (0,3%-й раствор ГЭЦ марки 250 НХ; вязкость 19,94 мПа с; рН = 7,0) и № 6 (0,4%-й раствор ГПМЦ марки Б 4000 Н 2208; вязкость 12,6 мПа с; рН = 7,01). Результаты исследования реологических свойств 0,4%-го раствора ГПМЦ и 0,3%-го раствора ГЭЦ позволили установить зависимость динамической вязкости растворов от скорости сдвига. Вязкость растворов ГПМЦ и ГЭЦ снижается с увеличением скорости сдвига от 12 до 36 с"1. Такая зависимость свидетельствует о том, что растворы гидрофильных полимеров являются псевдопластическими неньютоновскими жидкостями, кроме того, их вязкость снижается с увеличением

температуры и можно предположить равномерное растекание и распределение по роговице глазных капель при соприкосновении с поверхностью глаза, что особенно важно для создания искусственной слезной пленки.

Терапевтическое действие разрабатываемых глазных капель направлено на восполнение дефицита слезной жидкости и стабилизацию слезной пленки, а также уменьшение симптомов раздражения тканей глаза (покраснение, зуд, ощущение инородного тела), раздражение глаз, вызванное дымом, пылью, ветром, солнцем, соленой водой, аллергией, т.е. проведение комплексной терапии ССГ. В состав комбинированных глазных капель введены витамины группы В: цианокобаламин (В]2) в концентрации 0,02%, пиридоксина гидрохлорид (В6) в концентрации 0,1%, участвующие в регуляции обменных процессов, и дифенгидрамина гидрохлорида (блокатор //7-гистаминовых рецепторов) в концентрации 0,1%. Для обеспечения качества глазных капель согласно регламентируемым и рекомендуемым требованиям в состав модельных растворов глазных капель введена фосфатная буферная система (0,98%-й натрия гидрофосфат и 0,16%-й калия дигидрофосфат), обеспечивающая изогидричность глазных капель и экспериментальным путем установлено количество натрия хлорида для достижения регламентируемого значения растворов по показателю «изотоничность». В состав глазных капель для обеспечения стерильности лекарственной формы во флаконах многоразового использования введен бензалкония хлорид в концентрации 0,01%. В таблице 3 приведены составы разработанных модельных растворов комбинированных глазных капель.

Таблица 3 - Состав модельных растворов глазных капель

Модельный раствор

Компонент № 1 №2 №3 №4

Количество (г/л)

Пиридоксина гидрохлорид 1,0 1,0 1,0 1,0

Цианокобаламин 0,2 0,2 0,2 0,2

Дифенгидрамина гидрохлорид 1,0 1,0 1,0 1,0

ГПМЦ 4,0 - 4,0 -

ГЭЦ - 3,0 - 3,0

Бензалкония хлорид 0,1 0,1 - -

Натрия хлорид 4,0 4,0 4,0 4,0

Натрия гидрофосфат 9,8 9,8 9,8 9,8

Калия дигидрофосфат 1,6 1,6 1,6 1,6

Вода для инъекций до 1000 мл до 1000 мл до 1000 мл до 1000 мл

Модельные растворы № 1, № 2 предназначены для выпуска глазных капель во флаконах многоразового использования (5 мл) из стекла гидролитического 1-го класса, модельные растворы № 3, № 4 - для выпуска в одноразовых тюбиках-капельницах (0,5 мл) из гранул полиэтилена низкой плотности марки «РЕ Риге11 3020 О». Все модельные растворы содержат цианокобаламин, пиридоксина гидрохлорид, дифенгидрамина гидрохлорид.

В модельные растворы № 1, № 3 в качестве гидрофильного полимера введен ГПМЦ, в модельные растворы № 2, № 4 введен ГЭЦ. Модельные растворы представляют собой прозрачные жидкости ярко-красного цвета. Окраска растворов обусловлена введением в их состав цианокобаламина. Осмолярность модельных растворов находится в регламентируемом диапазоне (258-269 мОсм/л), значения рН растворов после введения фосфатного буфера составили 7,18-7,2. Модельные растворы глазных капель получили рабочее название «АкваВит».

Проведено изучение поверхностного натяжения (тензиометр Кшвв; метод дю Нуи) модельных растворов глазных капель, установлено совокупное снижение значения их поверхностного натяжения после введения бензалкония хлорида и ГПМЦ/ГЭЦ.

Разработаны технологические схемы (рисунки 1, 2) для модельных растворов во флаконах из стекла, а также в одноразовых тюбиках-капельницах. Технологические схемы являются традиционными для глазных капель и учитывают особенности использования в качестве гидрофильных полимеров ГПМЦ или ГЭЦ, а также влияние первичной упаковки на стадии производства. Важной особенностью технологического процесса является соблюдение температурных параметров при приготовлении растворов полимеров как

ВР.1.1. Подготовка помещений

ВР.1.2. Подготовка персонала

ВР.1.3. Подготовка оборудования

ВР.1.4. Подготовка воздуха

ВР.2.1. Получение воды очищенной

ВР.2.2. Получение води для инъекций

ТП.3.1. Отвешивание активных и вспомогательных веществ

ТП.3.2. Приготовление раствора фосфатного буфера

ТП.3.3. Введение гидрофильного полимера

ТП.3.4. Растворение активных и вспомогательных веществ

ТП.3.5. Стерильная фильтрация раствора

ВР.1. Кт. Кх. Км Санитарная подготовка проюводства

ВР.2. Кт, Кх. Км Подготовка воды

ТП.З. Кт, Кх Приготовление раствора глазных капель с рабочим названием "АкваВит"

1

ТП.4. Кт "Выдув-налолненпе-запайка" одноразовых тюбиков-капельниц, маркировка

i

УМО.5. Кт Упаковка, передача на склад ГОТОВОЙ ПрОДуКЦИИ

~Н Потеря

-С

^перераоогеу

п ер ераоотку

Рисунок 1 - Технологическая схема производства глазных капель в одноразовых тюбиках-капельницах

ВР.1.1. Подготовка помещений

ВР.1.2. Подготовка персонала

ВР.1.3. Подготовка оборудования

ВР.1.4. Подготовка воздуха

ВР.2.1. Получение воды очищенной

ВР.2.2. Получение воды для инъекпий

ТП.4.1. Отвешивание активных и вспомогательных веществ

ТП.4.2. Приготовление раствора фосфатного буфера

ТП.4.3. Введение гидрофильного полимера

ТП.4.4. Растворение активных и вспомогательных веществ

ВР.1. Кт. Кх. Км Санитарная подготовка производства

ВР.2. Кт, Кх. Км Полготовка воды

ВР.З. Кт. Кх. Км Подготовка флаконов из стекла и укупорочных средств

ТП.4. Кт.Кх Приготовление раствора глазных капель с рабочих! названием "АкваВ1гт"

1

ТП.5. Кт, Кх Фильтрация раствора

1

ТП.6. Кт Наполнение, укупорка флаконов

1

ТП.7. Кт. Кх, Км Стерилизация флаконов с раствором

*

УМО.8. Кт Маркировка. упаковка, передача на склад готовой продукции

—*] Потери |

Отсозы I

Н Отходы -3-►

_-_{переработку

Готовый продукт |

Рисунок 2 - Технологическая схема производства глазных капель во флаконах из стекла гидролитического 1 -го класса (Кт, Км, Кх - контроль технический, микробиологический и химический соответственно)

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИК АНАЛИЗА

В основу разработанных методик идентификации и количественного определения положен метод высокоэффективной жидкостной хроматографии как наиболее современный, точный и экспрессный.

Идентификацию и количественное содержание пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина, дифенгидрамина гидрохлорида, бензалкония хлорида проводили на хроматографе ЬС-20 (8Ытас1ги, Япония). Для идентификации и количественного определения пиридоксина щдрохлорвда,

цианокобаламина и дифенгидрамина гидрохлорида в составе глазных капель использовали стальную колонку размером 150х2,0 мм, заполненную сорбентом ReproSil С18 Aqua с размером частиц 3 мкм, с предколонкой размером 10х2,0 мм, с размером частиц 5 мкм. Детекцию проводили спектрофотометрически при длине волны 220 нм, объем вводимой пробы составил 10 мкл. В процессе хроматографирования проб состав подвижных фаз программировали в соответствии с данными, представленными в таблице 4 (подвижная фаза А: 475 мл фосфатного буферного раствора и 25 мл ацетонитрила; подвижная фаза Б: 400 мл фосфатного буферного раствора и 100 мл ацетонитрила). Скорость подвижной фазы 0,25 мл/мин, температура колонки 35°С. В результате эксперимента получены хроматограммы растворов сравнения СО пиридоксина гидрохлорида, СО цианокобаламина, СО дифенгидрамина гидрохлорида (рисунок 3) и испытуемого раствора глазных капель (рисунок 4).

Таблица 4 - Состав и время программирования подвижных фаз

Время Концентрация подвижной фазы А Концентрация подвижной фазы Б

0-0,5 100 0

0,5-15 100-20 0-80

15-20 20 80

20-22 20-100 80-0

22-30 100 0

uV WOOOO 1 i 1

1K0W 3 1 !

° 24 ЗЛ 7.5 10.» 12J \iJ>

Ret. Time 1424 Ana 3318611 Height 659484 Сове Nat 31.43« В 6 OB

8342 1096639 218352 10357 В 12

13 832 6162782 4966S6 58.205 Dimdrol

Рисунок 3 - Хроматограмма раствора сравнения СО пиридоксина гидрохлорида (В6), СО цианокобаламина (Bi2) и СО дифенгидрамина гидрохлорида (Dimedrol)

500000 1 J 1

250000 1

u Ii iA а ■ й* Ш 15.0

let. "Шве 1.428 Abs» 3326317 Heighi 659249 Сове 31.421 Name В6

8343 1095389 218042 10347 В 12

13.839 6154710 496403 58232 Dimedrol

Рисунок 4 - Хроматограмма исследуемого раствора глазных капель

Пики пиридоксина гидрохлорида (1,4 мин), цианокобаламина (8,3 мин) и дифенгидрамина гидрохлорида (13,8 мин) на хроматограмме раствора сравнения СО и исследуемого раствора глазных капель характеризуются достаточной интенсивностью и симметричностью и совпадают по времени удерживания, что свидетельствует о возможности использования разработанной методики для анализа раствора глазных капель.

Количественное содержание анализируемых веществ рассчитано по величине площадей пиков с учетом полученных хроматограмм стандартных образцов исследуемых веществ.

Содержание пиридоксина гидрохлорида в одном миллилитре должно быть 0,90-1,10 мг (± 10 %), содержание цианокобаламина в одном миллилитре должно быть 0,18-0,22 мг (± 10 %), содержание дифенгидрамина гидрохлорида в одном миллилитре должно быть 0,90-1,10 мг (± 10%).

Для анализа бензалкония хлорида в составе глазных капель использовали колонку стальную размером 150x4,6 мм, заполненную сорбентом Discovery® С18 с размером частиц 5 мкм. Детекцию проводили спектрофотометрически при длине волны 220 нм, объем вводимой пробы составил 20 мкл; - подвижная фаза: фосфатный буферный раствор pH 3,0 -ацетонитрил (20 : 80); скорость подвижной фазы 0,8 мл/мин; температура колонки 30°С.

В результате эксперимента получены хроматограммы раствора сравнения СО бензалкония хлорида (рисунок 5) и испытуемого раствора глазных капель (рисунок 6).

Пики бензалкония хлорида раствора сравнения и исследуемого раствора глазных капель характеризуются достаточной интенсивностью и симметричностью. В соответствии с полученными результатами пики гомологов Cl2 (4,0 мин) и С14 (около 6,3 мин) на хроматограмме исследуемого раствора глазных капель совпадают по времени удерживания с таковыми на хроматограмме СО бензалкония хлорида, что свидетельствует о возможности использования разработанной методики для определения консерванта в растворе глазных капель.

1 ;

Ш Ж, .

«« С.чхиитюк РЕ СИ РК,\0 Т1МЕ : : 1.008 3 5.972 4 0.367 РОКТ «« АЙЕА II? НЕГОНТ 391 " 501 647 9516 «К !»» СО\С ,\АМЕ 1 55.9804 Вввха:.С 12 V 2 1.9283 8«пха:.С14 2 42.0849 8«пха:.СМ

ТОГА«. 279 548 24262 160

Рисунок б — Хроматограмма испытуемого раствора глазных капель

Количественное содержание бензалкония хлорида рассчитано по величине площадей пиков с учетом полученных хроматограмм стандартного образца бензалкония хлорида.

Содержание бензалкония хлорида в одном миллилитре должно быть 0,09-0,11 мг(± 10%).

Методики идентификации и количественного определения пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина, дифенгидрамина гидрохлорида и бензалкония хлорида в диапазоне 80 %-120 % от номинального значения валидированы по следующим показателям: специфичность, правильность, прецизионность, линейность и диапазон применения.

ГЛАВА 5. БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ, РАЗРАБОТКА НОРМ КАЧЕСТВА ГЛАЗНЫХ КАПЕЛЬ И ИЗУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ

С использованием разработанных аналитических методик проведены исследования процесса высвобождения активных веществ из растворов гидрофильных полимеров ГПМЦ, ГЭЦ в модельных растворах № 1, № 2 методом диализа по Крувчинскому, сделан выбор оптимального состава глазных капель.

Результаты исследования свидетельствуют об интенсивном высвобождении пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина. дифенгидрамина гидрохлорида из раствора 0,4% ГПМЦ, отсутствии относительно резких колебаний их количества. Графики высвобождения активных веществ представлены на рисунках 7-8. Введение гидрофильного полимера - ГПМЦ - в модельный раствор № 1 позволяет поддерживать концентрацию активных веществ на относительно постоянном уровне в течение всего времени эксперимента, что подтверждает наличие выраженного пролонгированного эффекта у данного состава глазных капель.

•гпмц

(модельный раствор N51)

--- ГЭц

(модельный раствор №2)

| - 0,0004

5 2 0,0005 й |

0.0002 | 0,0001

Рисунок 7 - Высвобождение пиридоксина гидрохлорида в модельных растворах № 1, № 2

и 0,0000$ 2 0,000045 | 0.00СС4 I 0,000035 | 0,00033

1 о.оооааэ I

0,00032 § с,соаз15 § 0,00001 | 0,000005

у

/.....

— ■ гпмц

(«оделвный распор

--ГЭЦ

рэсткор

Рисунок 8 - Высвобождение цианокобаламина в модельных растворах № 1, № 2

Исследование высвобождения активных веществ из раствора 0,3% ГЭЦ показывает, что концентрация пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина, дифенгидрамина гидрохлорида в диализате составляет 36%, 9,9%, 14,6% соответственно. Максимальная концентрация пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина, дифенгидрамина гидрохлорида в диализате наблюдается в диализате модельного раствора № 1 (0,4% ГПМЦ) и составляет 46%, 18%, 28% соответственно, что почти в 2 раза превышает концентрацию активных веществ по сравнению с раствором ГЭЦ. Таким образом, в качестве гидрофильного полимера выбран 0,4 %-й раствор ГПМЦ марки Э 4000 Н 2208, определен следующий оптимальный комбинированный состав глазных капель «АкваВит» для комплексной терапии синдрома сухого глаза.

активные вещества:

гидроксипропилметилцеллюлоза, г........................................0,4

пиридоксина гидрохлорид, г........................................................0,1

цианокобаламин, г................................................................................0,02

дифенгидрамина гидрохлорид, г..................................................0,1

вспомогательные вещества:

бензалкония хлорид, г..........................................................................0,01

натрия хлорид, г..........................................................................................0,4

натрия гидрофосфат, г..................................................................................0,98

калия дигидрофосфат, г......................................................................0,16

вода для инъекций................................................................................до 100 мл

Разработаны нормы качества глазных капель «АкваВит» во флаконах из стекла и в одноразовых тюбиках-капельницах, они представлены в таблице 5.

Для изучения стабильности на хранение закладывали три серии глазных капель во флаконах из стекла (010612, 020612, 030612) и три серии в одноразовых тюбиках-капельницах (010513, 010513, 010513). Проведено исследование, направленное на изучение стерильности глазных капель после вскрытия флакона из стекла через 5 и 10 суток (серии 010612, 020612, 030612), капли глазные сохраняют стерильность в течение 10 суток после вскрытия флаконов.

Срок хранения глазных капель «АкваВит» на момент наблюдения составляет 18 месяцев во флаконах из стекла гидролитического 1 -го класса при температуре 8±2 °С и 6 месяцев в одноразовых тюбиках-капельницах из полиэтилена при температуре 8±2 °С. Результаты стабильности глазных капель во флаконах из стекла и в одноразовых тюбиках-капельницах по следующим показателям: прозрачность, рН, механические включения, вязкость, количественное определение, стерильность представлены в таблицах 6-7.

При изучении стабильности глазных капель «АкваВит» по показателям: «описание», «подлинность» все серии глазных капель (010612, 020612, 030612, 010513, 010513, 010513) сохраняют прозрачность и ярко-красную окраску растворов, обусловленную содержанием в их составе цианокобаламина.

Таблица 5 - Нормы качества глазных капель с рабочим названием «АкваВит»

Показатель Метод Норма

Описание Визуальный Прозрачная жидкость ярко-красного цвета

Подлинность: ГПМЦ (гипромеллоза) Качественная реакция При нагревании раствор мутнеет, при охлаждении становится прозрачным. Вязкость препарата должна соответствовать требованию раздела «Вязкость».

пиридоксина гидрохлорид цианоко бал амин дифенгидрамина гидрохлорид ВЭЖХ (методика раздела «Идентификация и количественное определение») Время удерживания пиков пиридоксина гидрохлорида, цианокобал амина, дифенгидрамина гидрохлорида на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пиков пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина, дифенгидрамина гидрохлорида на хроматограмме раствора сравнения.

бензалкония хлорид* ВЭЖХ (методика раздела «Идентификация и количественное определение») Время удерживания двух основных пиков (пиков гомологов С12 и Сн) бензалкония хлорида на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания двух основных пиков (пиков гомологов С12 и Сы) бензалкония хлорида на хроматограмме раствора сравнения

Прозрачность ОФС 42-0051-51 (ГФХН, ч. 1, с. 98) Препарат должен быть прозрачным

Водородный показатель (РН) ОФС 42-0048-07 (ГФРФХН, ч. 1, с. 89) От 7,0 до 7,4

Механические включения РДИ 42-504-00 Препарат должен соответствовать требованиям РДИ 42-504-00 «Инструкция по контролю на механические включения глазных капель»

Вязкость ОФС 42-0038-07 (ГФХН, ч. 1, с.41) От 12 до 13 мПа-с

Осмолярность ОФС 42-0048-07 (ГФ РФ XII, ч. 1, с. 78) От 239 до 376 мОсм/л

Стерильность ОФС 42-0066-07 (ГФХН, ч. 1, с. 150) Препарат должен быть стерильным

Количес твенное определение:

пиридоксина гидрохлорид цианокобаламин дифенгидрамина гидрохлорид ВЭЖХ (методика раздела «Идентификация и количественное определение») 0,90-1,1 мг/мл 0,18-0,22 мг/мл 0,90-1,1 мг/мл

бензалкония хлорид* 0,090-0,11 мг/мл

* - для глазных капель во флаконе многоразового использования из стекла гидролитического 1-го класса |

Таблица 6 - Результаты определения качества глазных капель в процессе храпения во флаконах из стекла

Показатели качества

Количественное определение

Л» серии Дата проведения контроля Прозрачность рН Механические включения Вязкость Осмолярность пиридокенна гидрохлорид X а я я (О о ■л о я 5 Я я ¡3 я В-а. £ £ = 8 I с в ч з Си О 8 В О •л Я 4» «О Стерильность Срок хранения Выводы

препарат должен быть прозрачным от 7,0 до 7,4 препарат должен соответствовать требованиям РДИ 42-504-00 «Инструкция по контролю на механические включения глазных капель» от 12,0 до 13,0 мПа-с от 239 до 376 мОсм/л 0,90-1,1 мг/мл 0,18-0,22 мг/мл 0,90-1,1 мг/мл 0,090-0,11 мг/мл препарат до.зжен быть стерилен

27.06.12 прозрачен 7,10 выдерживает 12,5 269 1,05 0,20 1,02 0,09 стерилен 0 годен

27.12.12 прозрачен 7,10 выдерживает 12,4 269 1,04 0,20 1,01 0,09 стерплен 6 мес годен

о о 27.06.13 прозрачен 7,0 выдерживает 12,3 267 1,04 0,19 1,01 0,09 стерилен 12 мес годен

27.12.13 прозрачен 7,0 выдерживает 12,3 267 1,04 0,19 1,01 0,09 стерилен 18 мес годен

27.06.12 прозрачен 7,1 выдерживает 12,5 266 1,04 0,20 1,02 0,1 стерилен 0 годен

гч 27.12.12 прозрачен 7,0 выдерживает 12,4 267 1,04 0,19 1,01 0,1 стсрилсн 6 мсс годен

о о 27.06.13 прозрачен 7,0 выдерживает 12,4 268 1,03 0,19 1,00 од стерилен 12 мес годен

27.12.13 прозрачен 7,0 выдерживает 12,4 267 1,03 0,19 1,00 0,1 стерилен 18 мсс годен

27.06.12 прозрачен 7,11 выдерживает 12,5 266 1,03 0,20 1,01 0,11 стерилен 0 годен

Г) 27.12.12 прочрачен 7,12 выдерживает 12,4 265 1,03 0,19 1,01 0,10 стерилен 6 мес годен

о ГО О 27.06.13 прозрачен 7,12 выдерживает 12,3 265 1,02 0,19 1,00 оло стерилен 12 мес годен

27.12.13 прозрачен 7,12 выдерживает 12,3 265 1,02 0,19 1,00 0,10 стерилен 18 мес годен

Таблица 7- Результаты определения качества глазных капель в процессе храпения в одноразовых тюбик-капелышцах

№ серии Дата Проведения контроля Показатели качества Срок хранения Выводы

Прозрачность рН Механические включения Вязкость Осмол яри ость Количественное определение Стерильность

пиридоксина гидрохлорид цианокобаламин дифеигидрамина гидрохлорид

препарат должен быть прозрачным от 7,0 до 7,4 препарат должен соответствовать требованиям РДИ 42-504-00 «Инструкция по контролю на механические включения глазных капель» от 12,0 до 13,0 мПа с от 239 до 376 мОсм/л 0,90-1,1 мг/мл 0,18-0,22 мг/мл 0,90-1,1 мг/мл препарат должен быть стерилен

010513 09.05.13 прозрачен 7,1 выдерживает 12,5 259 1,05 0,20 1,02 стерилен 0 годен

09.08.13 прозрачен 7,1 выдерживает 12,4 258 1,04 0,19 1,01 стерилен 3 мес годен

09.11.13 прозрачен 7,1 выдерживает 12,3 258 1,03 0,19 1,00 стерилен 6 мес годен

020513 09.05.13 прозрачен 7,11 выдерживает 12,5 260 1,05 0,20 1,02 стерилен 0 годен

09.08.13 прозрачен 7,12 выдерживает 12,4 259 1,04 0,20 1,01 стерилен 3 мое годен

09.11.13 прозрачен 7,12 выдерживает 12,4 258 1,04 0,19 1,01 стерилен 6 мес годен

030513 09.05.(3 прозрачен 7,1 выдерживает 12,5 256 1,04 0,20 1,01 стерилен 0 годен

09.08.13 прозрачен 7,0 выдерживает 12,4 256 1,04 0,19 1,01 стерилен 3 мес годен

09.11.13 прозрачен 7,0 выдерживает 12,3 254 1,03 0,19 1,00 стерилен 6 мес годен

о

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, впервые разработан комбинированный состав глазных капель для профилактики и лечения ССГ с рабочим названием «АкваВит», позволяющий проводить комплексную терапию.

1. На основании результатов изучения физико-химических и реологических свойств гидрофильных полимеров, а также результатов биофармацевтических исследований модельных растворов глазных капель в опытах in vitro обоснован и сделан выбор активного компонента, гидрофильного полимера - 0,4% ГПМЦ марки BonuCel D4000.

2. Обосновано использование основных действующих веществ комбинированных глазных капель - пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина, дифенгидрамина гидрохлорида. Обоснована необходимость использования вспомогательных веществ комбинированных глазных капель, обеспечивающих качество лекарственного средства по таким показателям, как изотоничность, изогидричность, стерильность.

3. Для разработанного состава комбинированных глазных капель предусмотрен выпуск в двух видах первичной упаковки: во флаконах из стекла гидролитического 1-го класса и в одноразовых тюбиках-капельницах из полиэтилена низкой плотности.

4. Разработаны технологические схемы производства глазных капель для профилактики и лечения ССГ в одноразовых тюбиках-капельницах и во флаконах моногоразового использования, даны рекомендации по стадиям технологического процесса. Важной особенностью технологического процесса является соблюдение температурного параметра на стадии приготовления раствора полимера.

5. Разработаны методика идентификации и количественного определения пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина, дифенгидрамина гидрохлорида методом обращенно-фазовой ВЭЖХ и методика идентификации и количественного определения бензалкония хлорида методом обращенно-фазовой ВЭЖХ. Разработанные методики являются специфичными, имеют достаточно высокую чувствительность и эффективность. Методики валидированы по следующим показателям: специфичность, правильность, прецизионность, линейность и диапазон применения.

6. Разработаны нормы качества глазных капель с рабочим названием «АкваВит». Изучена стабильность, установлены сроки годности глазных капель, которые составили 18 месяцев во флаконах из стекла гидролитического 1-го класса и 6 месяцев в одноразовых тюбиках-капельницах из полиэтилена низкой плотности при температуре не выше 10 °С.

В перспективе дальнейшая разработка темы диссертационного исследования включает в себя проведение фармакологических исследований, а также отработку методик анализа в условиях производства, детализацию сроков годности опытно-промышленных образцов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Разработка состава глазных капель для лечения и профилактики синдрома сухого глаза «Искусственная слеза» с применением методик супрамикроструктурирования полимеров [Текст] / Д. В. Придачина, Н. Н. Попов, М. Ю. Чайкина [и др.] // Бюллетень Северного государственного медицинского университета. - Архангельск, 2011. - № 1, вып. XXVI. - С. 288-289.

2. Придачина Д. В. Анализ составов и номенклатуры лекарственных средств для профилактики и лечения синдрома сухого глаза [Текст] / Д. В. Придачина, М. А. Халикова, Д. А. Фадеева // Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм / материалы Всерос. науч.-практ. интернет-конф. с междунар. участием, Курск, 27 апр. 2011 г. / Курск, гос. мед. ун-т, каф. фармац. технологии ; редкол.: Т. А. Панкрушева [и др.]. - Курск , 2011. - С. 266-269.

3. Современное состояние исследований по офтальмологическим лекарственным формам, направленным на профилактику и лечение синдрома «сухого глаза» [Электронный ресурс] / Д. В. Придачина, Е. Т. Жилякова, М. Ю. Новикова [и др.] // Современные проблемы науки и образования : электрон, науч. журн. - 2011. - № 6. - Режим доступа: \vww.science-education.ru/100-4990.

4. Жилякова, Е. Т. Синдром «сухого глаза» - технологические и фармакологические подходы в разработке препаратов для лиц пожилого и старческого возраста [Текст] / Е. Т. Жилякова, Д. В. Придачина // Геронтологический журнал им. В. Ф. Купревича. - 2012. - Т. 3, № 1-2. -С. 70-71. - (Геронтологические чтения - 2012 : материалы 5 юбил. междунар. науч.-практ. конф., Белгород, 2012 г.).

5. Придачина, Д. В. Исследование физико-химических показателей растворов гидроксипропилметилцеллюлозы [Текст] / Д. В. Придачина, М. А. Халикова, Н. Н. Сабельникова // Вестник новых медицинских технологий.-2012.-Т. 19, №3,-С. 11-12.

6. Придачина, Д. В. Определение водорастворимых витаминов группы В методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в лекарственных препаратах [Текст] / Д. В. Придачина // Медична наука : нов1 ще! та концепцн = Медицинская наука : новые идеи и концепции : зб. матер1ал1в М1жнар. наук.-практ. конф., Дншропетровськ, |9-10 листоп. 2012 р. -Дншропетровськ, 2012. - С. 121-122.

7. Жилякова, Е. Т. Изучение процесса высвобождения пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина из модельных смесей глазных капель [Текст] / Е. Т. Жилякова, Д. В. Придачина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. науч. тр. / Пятигор. мед.-фармац. ин-т - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России. - Пятигорск, 2013. -Вып. 68.-С. 241-243.

8. Придачина, Д. В. Разработка оригинального препарата для лечения и профилактики синдрома «сухого глаза» [Текст] / Д. В. Придачина, Е. Т. Жилякова // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2013. - № 5. - С. 43.

9. Жилякова, Е. Т. Разработка метода анализа многокомпонентных глазных капель для профилактики и лечения синдрома «сухого глаза» [Текст] / Е. Т. Жилякова, А. А. Зинченко, Д. В. Придачина // Фармацевтический кластер как интеграция науки, образования и производства : сб. материалов П1 междунар. науч.-практ. конф. в рамках Науч. сессии НИУ «БелГУ», Белгород, 12-17 апр. 2013 г. / Белгор. гос. нац. исслед. ун-т ; [редкол.: И. В. Спичак, И. С. Ворона]. - Белгород, 2013. - С. 133-134.

10. Придачина, Д. В. Синдром «сухого глаза» - многофакторное заболевание, требующее создания комплексного препарата [Текст] / Д. В. Придачина // Молодая фармация - потенциал будущего : сб. материалов III всерос. науч. конф. студентов и аспирантов с междунар. участием, Санкт-Петербург, 25-26 апр. 2013 г. / С.-Петерб. гос. хим.-фармац. акад. М-ва здравоохранения Рос. Федерации. - Санкт-Петербург, 2013. - С. 193-194.

11. Применение методики ВЭЖХ для анализа бензалкония хлорида в глазных каплях с рабочим названием «АкваВит» [Электронный ресурс] / Е. Т. Жилякова, А. А. Зинченко, Д. В. Придачина [и др.] // Современные проблемы науки и образования : электрон, науч. журн. - 2013. - № 5. - Режим доступа: www.science-education.ru/111-10478.

12. Жилякова, Е. Т. Анализ российского рынка лекарственных средств, направленных на профилактику и лечение синдрома «сухого глаза», группы «искусственная слеза» [Электронный ресурс] / Е. Т. Жилякова, Д. В. Придачина, О. О. Новиков // Современные проблемы науки и образования : электрон, науч. журн. - 2013. - № 6. - Режим доступа: www.science-education.ru/113-10556.

13. Жилякова, Е. Т. Гармонизация требований к глазным каплям в свете современного развития фармацевтического производства [Текст] / Е. Т. Жилякова, М. Ю. Новикова, О. О. Новиков, Д. В. Придачина [и др.] // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2014. - № 1. - С. 20-25.

Подписано в печать 10.10.2014. Формат 60x84/16 Гарнитура Times. Усл. п. л. 1,0. Тираж 120 экз. Заказ 257. Оригинал-макет подготовлен и тиражирован в ИД «Белгород» НИУ «БелГУ». 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85