Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава и технологии получения инъекционной лекарственной формы налтрексона с модифицированным высвобождением

На правах рукописи

Табу-

Петрова Елизавета Александровна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ИНЪЕКЦИОННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ НАЛТРЕКСОНА С МОДИФИЦИРОВАННЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва-2014

1 6 ОКТ 2014

005553400

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова»

Научный руководитель:

доктор технических наук, профессор Кедик Станислав Анатольевич Официальные оппоненты:

Оборотова Наталия Александровна, доктор фармацевтических наук, профессор, ФГБУ «Российский онкологический научный центр имени H.H. Блохина» РАМН, Научно-исследовательский институт экспериментальной диагностики и терапии опухолей, лаборатория разработки лекарственных форм, заведующая

Жилякова Елена Теодоровпа, доктор фармацевтических наук, профессор, ФГАОУ ВПО "Белгородский государственный национальный исследовательский университет", кафедра фармацевтической технологии, заведующая

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт синтетических полимерных материалов имени Н.С. Ениколопова РАН

Защита состоится «24» ноября 2014 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 при Государственном научном учреждении Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (117216, г. Москва, ул. Грина, д. 7) по адресу: 123056, г. Москва, ул. Красина, д. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии www.vi 1 amii.ru

Автореферат диссертации разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

Громакова Алла Ивановна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Среди многих проблем, стоящих сегодня перед российским обществом, проблема алкоголизма, как глобальная угроза здоровью населения страны и национальной безопасности, занимает одно из первых мест. Это связано с масштабами распространенности алкогольной зависимости в России. Современные подходы к лечению алкоголизма строятся на принципах комплексности, дифференцированное™ и патогенетической обоснованности применения тех или иных лекарственных средств.

Наибольший интерес в этом направлении представляет группа блокаторов опиоидных рецепторов. Одним из представителем данной группы является налтрексон. Несмотря на то, что алкоголь не является агонистом опиоидных рецепторов, многие его эффекты реализуются посредством эндогенной опиоидной системы. Исследования на животных показали, что антагонисты опиоидных рецепторов блокируют подкрепляющие эффекты алкоголя. Так, налтрексон предотвращал повышение уровня дофамина, вызванное введением алкоголя, причем этот эффект был дозозависимым. Наиболее сложной проблемой при лечении блокаторами опиоидных рецепторов является поддержание комплаенса больным. Такие особенности пациентов с алкогольной зависимостью, как нестойкая мотивация на длительное лечение, аутохтонные обострения синдрома патологического влечения, связанные как с тяжестью проявлений болезни, так и с её последствиями, диктуют необходимость усовершенствования имеющихся подходов к терапии этого контингента больных.

Ретроспективный анализ терапии пероральной формой налтрексона показал, что большинство пациентов не завершило курс лечения. Это, по сути, мешает установить реальную эффективность данного препарата. Несоблюдение режима лечения вызывает повышение риска рецидива заболевания более чем в 4 раза. Таким образом, все вышеперечисленные проблемы в значительной степени ограничивают клиническое использование перорального препарата и требуют использования пролонгированных лекарственных средств, не обладающих перечисленными недостатками.

Таким примером является препарат Вивитрол® (Алкермес, Инк. США) с модифицированным (пролонгированным) высвобождением налтрексона. Основу препарата составляют полимерные микросферы на основе сополимера молочной и гликолевой кислот с инкапсулированным в них налтрексона основанием, которые вводятся внутримышечно в виде суспензии в водном растворе. Длительность действия препарата составляет 4 недели при дозе 380 мг в пересчете на налтрексона основание. В 2006. г. Вивитрол® был одобрен для клинического применения и утвержден Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA). В России Вивитрол® используется для лечения алкогольной зависимости с июля 2008 г. Однако широкому применению препарата Вивитрол® препятствует его достаточно высокая стоимость -15-20 тыс. руб./доза.

В связи с этим создание доступного отечественного препарата с аналогичными Вивитролу® характеристиками в виде инъекционной лекарственной формы (ЛФ) налтрексона с модифицированным высвобождением, является важной и актуальной задачей. Её решение повысит доступность эффективного лечения алкогольной зависимости для всех категорий больных.

Цель: Целью диссертационной работы является разработка технологии получения полимерных микросфер, содержащих инкапсулированный налтрексон, и оригинальной инъекционной лекарственной формы на их основе, аналогичной по фармакологическим свойствам препарату Вивитрол® зарубежного производства.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить влияние различных факторов на процесс инкапсулирования и свойства полимерных микросфер, содержащих налтрексона гидрохлорид (г/хл) или основание;

- провести сравнительное изучение полученных полимерных микросфер с микросферами, входящими в состав препарата Вивитрол®, и определить оптимальный состав и параметры процесса получения полимерных микросфер с характеристиками, наиболее близкими к характеристикам полимерных микросфер препарата Вивитрол®;

- разработать состав и технологию получения инъекционной лекарственной формы на основе полимерных микросфер, содержащих инкапсулированный налтрексон;

- разработать методы анализа и контроля качества инъекционной ЛФ на основе полимерных микросфер;

- исследовать стабильность инъекционной ЛФ при хранении;

- провести сравнительное изучение безопасности и фармакологической активности разработанной инъекционной ЛФ и препарата Вивитрол®;

- разработать и апробировать нормативную документацию (проект НД) и лабораторный регламент для инъекционной ЛФ.

Научная новизна. Разработан и научно обоснован подход к созданию оригинальной инъекционной лекарственной формы на основе полимерных микросфер, содержащих инкапсулированный налтрексон.

Впервые с использованием многофакторного дисперсионного анализа изучено влияние различных факторов на свойства полимерных микросфер и кинетику высвобождения налтрексона из них. На основании полученных результатов разработан состав полимерных микросфер с инкапсулированным в них налтрексоном.

Разработаны методики анализа полимерных микросфер с инкапсулированным в них налтрексоном.

На основании проведенных комплексных физико-химических исследований теоретически и экспериментально обоснован оптимальный состав и разработана технология получения инъекционной ЛФ на основе

полимерных микросфер, содержащих инкапсулированный налтрексон и обладающих сходными с полимерными микросферами препарата Вивитрол® фармакологической активностью и безопасностью.

Практическая значимость работы. Разработана и запатентована оригинальная инъекционная лекарственная форма налтрексона с модифицированным высвобождением на основе полимерных микросфер, содержащих инкапсулированный налтрексон (патент РФ № 2471478 от 08.12.2011 «Фармацевтическая композиция для лечения алкоголизма, наркомании и токсикомании с улучшенным профилем высвобождения налтрексона»).

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- состав и методы стандартизации инъекционной ЛФ «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» (проект нормативной документации (НД) на «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций», апробированный ЗАО «Институт фармацевтических технологий», 04.09.13);

- технология получения инъекционной лекарственной формы налтрексона с модифицированным высвобождением - «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» (лабораторный регламент, апробирован ЗАО «Институт фармацевтических технологий», 16.09.13);

- основные положения диссертации внедрены в учебный процесс кафедры биомедицинских и фармацевтических технологий МИТХТ имени М.В. Ломоносова (акт внедрения от 14.05.13).

Положении, выносимые на защиту:

- результаты экспериментальных исследований по изучению влияния различных факторов на характеристики полимерных микросфер, содержащих инкапсулированный налтрексона г/хл и основание;

- способы получения полимерных микросфер с налтрексона г/хл и основанием;

- результаты сравнительного изучения полимерных микросфер с инкапсулированным налтрексона г/хл и налтрексона основанием в сравнении с препаратом Вивитрол®;

- состав и технология получения оригинальной инъекционной лекарственной формы с модифицированным высвобождением налтрексона, аналогичной препарату Вивитрол®, обладающей сходными с ним фармакологической активностью и безопасностью.

Личный вклад автора. Диссертантом изучены процессы получения полимерных микросфер с инкапсулированным налтрексоном в виде г/хл или основания; проведена статистическая обработка результатов; разработан состав и технология получения оригинальной инъекционной ЛФ с модифицированным высвобождением; разработаны методики анализа полимерных микросфер с инкапсулированным налтрексоном.

Связь задач исследования с планом НИР учреждения, где выполнялась диссертация. Диссертационная работа выполнена в рамках НИР

кафедры Биомедицинских и фармацевтических технологий федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова» (НИР 2Б-18-357).

Диссертация соответствует формуле специальности 14.04.01 - технология получения лекарств. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 3 и 4 паспорта специальности «Технология получения лекарств».

Степень достоверности и апробация результатов исследования. Достоверность полученных результатов достигается благодаря использованию современных технологических, химических и физико-химических методов, позволяющих получать воспроизводимые и однозначные результаты. Исследования физических, физико-химических и технологических параметров: вязкости, размеров частиц, степени включения, результатов теста «Высвобождение» и др. - производились с помощью вискозиметров, лазерного анализатора размера частиц, ВЭЖХ и ГЖХ хроматографов, УФ-спектрофотометра и специализированного программного обеспечения (Beckman Coulter LS, Хроматэк - Аналитик, Aquilon Control Center, UVWin). Результаты измерений обработаны математическим методом и являются статистически достоверными (Statistica Advanced for Windows v. 10, Microsoft Excel 2010).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 16 работ, из них в научных изданиях, входящих в перечень ВАК, опубликованы 4 работы.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (объекты и методы, результаты исследований и их обсуждение), выводов, списка литературы, а также Приложений. Работа иллюстрирована 29 таблицами и 24 рисунками. Библиографический указатель включает 140 источников, из них 99 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении изложены актуальность, цель и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы.

ГЛАВА 1. ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ С МОДИФИЦИРОВАННЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ: ПОЛИМЕРНЫЕ МИКРОСФЕРЫ (обзор литературы)

В первой главе представлены сведения о лекарственных формах с модифицированным высвобождением лекарственного вещества (ЛВ) в виде полимерных микросфер, предназначенных для парентерального применения, и методы их получения. Рассмотрено влияния различных параметров процесса микрокапсулирования лекарственных веществ в полимерную матрицу.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовали налтрексона гидрохлорид производства N.V. Organon (Нидерланды) и налтрексона основание производства Cilag AG (Германия). В качестве полимера для получения микросфер использовали сополимер Б,Ь-молочной и гликолевой кислот (СМГК) (75:25) производства Evonik Industries (Германия).

Для изучения факторов, влияющих на характеристики полимерных микросфер при инкапсулировании налтрексона г/хл и основания, использованы методы двойного и одинарного эмульгирования с последующей экстракцией/испарением растворителя.

Количественное содержание налтрексона в микросферах и определение посторонних примесей осуществляли методом ВЭЖХ на хроматографе «Стайер» (Аквилон, Россия), колонка Luna С,8(2), 250 х 4,6 мм, 5 мкм. Для оценки распределения частиц полимерной суспензии по размерам использовали лазерный анализатор частиц Beckman Coulter LS 13320 (США). Остаточное содержание метиленхлорида определяли методом ГЖХ на хроматографе «Кристалл 2000М» (Россия), колонка CP Select 624 СВ, 60 м х 0,32 мм, 1,8 мкм. Изучение кинетики высвобождения налтрексона из микросфер проводили при 37 °С в термостатирующей бане LOIP LB-224 (Россия) в фосфатном буфере (рН 7,35 - 7,45) с добавлением эмульгатора (0,018 % полисорбат 20 по объему); концентрацию налтрексона, перешедшего в раствор, определяли спектрофотометрически при длине волны 281 нм на спектрофотометре СФ -104 (Аквилон, Россия). Оценку микросфер методом сканирующей электронной микроскопии проводили на приборе S-570 "Hitachi" (Япония). Определение вязкости и рН жидкой дисперсионной среды для приготовления суспензии для внутримышечного введения, остаточного содержания воды в полимерных микросферах проводили по общепринятым методикам, описанным в ГФ. Устойчивость восстановленной суспензии полимерных микросфер оценивали гравиметрическим методом. Проходимость полимерной суспензии через иглу проверяли с помощью шприца, снабженного иглой для инъекций с внутренним диаметром 0,9 мм.

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА СОСТАВА, ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ И МЕТОДОВ КОНТРОЛЯ ИНЪЕКЦИОННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ НАЛТРЕКСОНА С МОДИФИЦИРОВАННЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ

В настоящее время налтрексон используется в лекарственных препаратах в двух формах: налтрексона основание и налтрексона гидрохлорид. Поэтому при создании оригинальной инъекционной ЛФ была исследована возможность использования в качестве лекарственного вещества как налтрексона г/хл, так и налтрексона основания.

3.1. Изучение факторов, влияющих на характеристики полимерных микросфер при инкапсулировании палтрексона гидрохлорида

Первоначально изучили возможность получения пролонгированной ЛФ налтрексона, сходной по действию с препаратом Вивитрол©, на основе налтрексона гидрохлорида, субстанция которого зарегистрирована на территории РФ.

Инкапсулирование налтрексона г/хл в полимерные микросферы проводили методом двойного эмульгирования с последующей экстракцией/испарением растворителя.

Водный раствор налтрексона г/хл эмульгировали с раствором полимера в органическом растворителе в течение 1,5 минут при помощи высокоскоростного гомогенизатора (6500 об/мин). Первичную эмульсию «вода/масло» смешивали с дисперсионной средой, представляющей собой водный раствор стабилизаторов, и диспергировали с помощью лопастной мешалки (200 - 250 об/мин). Затем полученную эмульсию «вода/масло/вода» смешивали с внешней водой фазой, предварительно охлажденной до 3 - 3,5 °С, в соотношении 1:17 соответственно. Полученную смесь выдерживали при постоянном перемешивании для удаления метиленхлорида и затвердевания частиц при температуре от 0 до 30 °С. Суспензию концентрировали на центрифуге (8000 об/мин) и лиофильно высушивали.

Исследования проводили с применением многофакторного симметричного дробного плана на основе греко-латинского квадрата по следующим параметрам: А - вид стабилизатора в дисперсионной среде; В -соотношение внутренней водной фазы и дисперсионной среды; С -соотношение налтрексона гидрохлорида и сополимера; Б - скорость механического воздействия (лопастная мешалка); а] - поливиниловый спирт (ЛВС), а2 - ПВС+метилцеллюлоза (МЦ); Ь, - 1:127,5, Ь2 - 1:85, Ь3 - 1:51; с, -1,17:1, с2 - 1:1; с!1 - 200 об/мин, - 250 об/мин. В таблице 1 представлены параметры процесса инкапсулирования налтрексона гидрохлорида в полимерные микросферы.

Таблица 1 - Параметры процесса инкапсулирования налтрексона гидрохлорида в полимерные микросферы

- _ ИЩЫ 1 : 1 1 5 6 7 ! 9 10 11 12 1.1 14 15 16 17 11 19 20 21 22 а 24

«I ы/м 0.75 1 0,75 0.75 0.75 0.75 МЛ 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75 0,75 0.75 0,75 0,75 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75 0,75 0,75 0.75

МЦ,«»'« - 2.0 2.0 2,0 2.0 2.0 2,0 2,0 2.0 2Л 2.0

Сооткашсввг виутр«1в(в юд.фиы ■ двспгрсвоннов срезы 1:П7,5 1:127,5 1:127,< 1:127,5

1:85 - В5 135 1:85

131 И1 1:51 - 1.51

Скорого мсЕаквческого вошхпгня. ов/ывв 200 :оо 200 200 200 200 200 200 200 200 200

250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250 250

Налтрексом Г1Л, % м/н 19,7 19,7 19,7 19,7 И,7 ",9 1«,» 1М Ш 15.9 IV 16,9 Ш 16,9 16,9 и* 19,7 19,7 19,7 19,7 19,7 19,7

СМГК, »1 »•» 1« 1« 16.9 и» ш 16.9 Ш 16,9 1« 1« 1«,9 16,9 16.9 16,9 16,9 I» ш 16.9 165 16.9 16,9 Ш

Дясперсясквов сред) {вед» дляхяьгкЛг 5М 51,0 51.0 51,0 51,0 ш 51Л 51,0 51Л 51,0 51Л 51Л 51,0 51,0 ¡и 51.0 51.0 яр 51,0 51.0 51,0 51,0 51,0 51,0

Влияние выбранных факторов на характеристики полученных микросфер оценивали по следующим показателям: размер частиц (мкм), содержание налтрексона гидрохлорида в микросферах (мг/г); количество налтрексона гидрохлорида, перешедшее в раствор в 1-й, 7-й, 14-й и 28-й дни (%).

Полученные данные подвергали дисперсионному анализу (таблица 2).

Однородность дисперсии проверяли с помощью И критерия Фишера (р < 0,05, Рэксп > Ргабл). На основании полученных результатов рассчитали суммы квадратов отклонений (ББ), позволившие выявить факторы, оказывающие существенное влияние на процесс получения микросфер.

Таблица 2 - Результаты дисперсионного анализа

Показатель качества (размерность) Источник дисперсии Число степеней свободы Сумма квадратов (58) Средний квадрат (МБ) ЭКС» таол р-1еуе1

Фактор А 1 52098.80 52098,80 8,257. 4,3 6,03*10" 15

Размер частиц, мкм Фактор И . 2 2024,11 1012,05 5,369 3,47 0,0066

Фактор С 1 45,68 45,68 0,017 4,35 0,0257

Фактор Б 1 260,04 260.04 12,578 4.3 0,04

Остаток ББсл 23 1599,5 5434,77 - - -

Фактор А I 533,93 533,93 90,403 4,30 ?..9>П о"

Содержание Фактор В 2 23,95 . 11.97 3,929 3.47 0,0068

налтрексона в Фактор С 1 85,13 85,13 7,214 4,30 0,0086

микросферах, Фактор I) 1 9,375 9,375 0,315 4,30 0,5802

мг/г Остаток БЗсл 23 11,48 0,4993 - - -

Факгор Л '1.' 552,96 : 552,96 41,934 4,30 1.63*10'''

Фактор В 2 31,15 15,57 0,403 3,47 0,6735

Высвобождение Фактор С 33,607 33.607 11.078 4,30 0,0028

1-й день, % Фактор О :: ,17.34 17,34 9.841 4.30 0,0002

Остаток 55сл 23 208,003 9,044 - - -

Фактор А 1 138,72 138,72 3,063 4,30 0,0941

Фактор В Т1м 2,: ' г : . ш;бЙ 4.665 3.4? : 0,0211

Высвобождение Фактор С 1 0,1838 0,1838 0,0036 4,30 0,9529

7-й день, % Фактор Р 1 17,17 17,17 0,338 4,30 0,5669

Остаток ББсл 23 29,97 27,39 - - -

Фактор А 129.74 129,74 5,426 4,30 0.0294

Фактор В 2 1395,03 697,52 2,768 3,47 0,0857

Высвобождение Фактор С 1 0,4267 0,4267 0,0143 4,30 0,9058

14-й день,% Фактор О 1 6,20 6,20 0,210 4,30 0,6512

Остаток БЗсл 23 75,59 38,07 - - -

Фактор А 1 10,80 10,80 0,727 4,30 0,4030

Фактор 5 146.18 73,09 8,446 РЗ,405У 0,0017

Высвобождение Фактор С 1 0,0504 0,0504 0,0033 4,30 0,9548

28-й день, % Фактор Б 1 10,8 10,8 0,727 4,30 0,4030

Остаток 55сл 23 369,98 7,39 - - -

Выявлено, что наибольшее влияние на размер частиц оказывали: вид и комбинация введенных в состав стабилизаторов - фактор А, равный 29,04 %; соотношение внутренней водной фазы и дисперсионной среды - фактор В, равный 27,14 % и скорость вращения мешалки - фактор О, равный 17,12 %. Соотношение налтрексон : СМГК - фактор С - оказывал незначительное влияние на размер частиц и его величина составила 0,03 %. На содержание налтрексона в полимерных микросферах наибольшее влияние оказывал тип стабилизатора (фактор А - 80,42 %), наименьшее - скорость механического воздействия (фактор О - 1,41%).

На параметры высвобождения налтрексона в 1-й день существенное влияние оказывали как выбор типа стабилизатора (фактор А - 65,5 %), так и соотношение налтрексон : СМГК (фактор С - 3,99 %) и скорость механического воздействия (фактор О - 3,69 %), фактор В вносил вклад, соизмеримый по величине с ошибкой. Данные подтверждены результатами сравнения Рэксп с табличным значением критерия Фишера.

Проверка влияния факторов на количество налтрексона, перешедшего в раствор на 7-й день, показала следующие результаты: степень влияния факторов - 12,22 % для фактора А, 30,76 % для фактора В, 0,016 % для фактора Си 1,512 % для фактора О.

Для количества налтрексона, перешедшего в среду растворения за 14 дней, наиболее значимым фактором являлся фактор В - соотношение внутренней водной фазы и дисперсионной среды (57,96 %). Процент ошибки -36,3 %.

Дисперсионный анализ влияния указанных выше факторов на параметры высвобождения на 28-й день дал следующие результаты: 3,2 % для фактора А (тип стабилизатора), 43,27 % для фактора В (соотношение фаз), 0,015 % для фактора С (соотношение налтрексона и СМГК) и 3,197 % для фактора О (скорость механического воздействия). Следовательно, наименьшее влияние оказывало количество налтрексона и сополимера.

На основании проведенного дисперсионного анализа установили, что на свойства микросфер главным образом влияли вид стабилизатора, соотношение внутренней водной фазы и дисперсионной среды и количество налтрексона гидрохлорида и сополимера. Скорость механического воздействия не оказывала существенного влияния на характеристики микросфер.

3.2. Изучение факторов, влияюица иа характеристики полимерных микросфер при инкапсулировании иалтрексоиа основания

Для разработки состава полимерных микросфер с инкапсулированным налтрексоном использовали субстанцию налтрексона основания производства фирмы СЛай АС (Германия), находящуюся на стадии регистрации на территории РФ, что позволило сделать предположение о перспективности выбора метода одинарного эмульгирования для изготовления инъекционной пролонгированной лекарственной формы налтрексона с модифицированным высвобождением.

Налтрексон основание смешивали с полимером и растворяли в метиленхлориде, полученный раствор диспергировали в водном растворе стабилизатора с помощью лопастной мешалки (200 - 400 об/мин) и получали эмульсию «масло/вода». Затем эмульсию смешивали с внешней водной фазой, предварительно охлажденной до 3 - 3,5 °С, в соотношении 1:17 соответственно. Полученную смесь выдерживали при постоянном перемешивании для удаления метиленхлорида и затвердевания частиц при температуре от 0 до 30 °С. Суспензию концентрировали на центрифуге (8000 об/мин) и лиофилыю высушивали.

Исследования проводили с применением многофакторного симметричного дробного плана на основе греко-латинского квадрата по следующим параметрам: А - вид стабилизатора в дисперсионной среде; В -скорость механического воздействия (лопастная мешалка); С - соотношение налтрексона основания и сополимера в метиленхлориде соответственно; а] -ПВС, а2 - МЦ, а3 - ПВС+МЦ, гц - ПВП+МЦ, а5 - ПВП; Ь! - 400 об/мин, Ь2 - 200 об/мин; С1 - 1:1, с2 - 2:1.

Влияние различных факторов на характеристики полученных микросфер оценивали по следующим показателям: размер частиц (мкм), содержание налтрексона основания в микросферах (мг/г); количество налтрексона основания, перешедшее в раствор в 1-й, 7-й, 14-й и 28-й дни (%).

В таблице 3 представлены параметры процесса инкапсулирования налтрексона основания в полимерные микросферы.

Таблица 3 - Параметры процесса инкапсулирования налтрексона

основания в полимерные микросферы

-— 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 и 12 13 ; 14 15 16 17 18 19 20

ПВС, м/м 2,0 - 2.0 - 2,0 - 2.0 - - 2,0 - 2,0 - - 2,0 - 2.0 - -

МЦ, м /и - 2,0 2,0 2.0 - - 2.0 2,0 2,0 - - 2.0 ы> 2,0 - - 2,0 2.0 2,0 -

ПВП, •/. л'м - - - 1.51 5,51 - 1,51 3,51 - »: 1,51 3.51 - 1.51 3,51

Скорость мшхпккого воздействия, об/мяВ 400 400 400 400 400 400 400 400 400 400

200 200 200 200 200 200 200 200 200

СМГК,м'м 16,9 16,9 16,9 16.9 16,9 16.9 16,9 и.* 16,9 16.9

16,9 16,9 16,9 16,9 16,9 16,9 16,9 16,9 16,9 16,9

На-ттрексова оса, •/• >1 м 16,9 16,9 16,9 16,9 16,9 33,8 33,8 33,8 33,8 33,8 16,9 16,9 16,9 16,9 33,8 33,8 33,8 33,8 33,8

Метялевхлорвл г 8.89 8,89 8.89 8,89 8.89 8,89 8.89 8,89 8.89 8,89 8,89 8.89 8.89 8.89 8,89 8,89 8.89 8,89 8,89 8,89

Двсперсвовяая среза (вола лля ввъекЛ г Я 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51 51

Полученные данные подвергали дисперсионному анализу (таблица 4).

Таблица 4 - Результаты дисперсионного анализа

Показатель качества (размерность) Источник дисперсии Число степеней свободы Сумма квадратов (ЭБ) Средний квадрат (МБ) И чксп ^ тавя р-1еуе!

Размер частиц, мкм Фактор А 4 "у ( 57,65658 2,9 0.0032

Фактор И 1 к 2-1 №.42

Фактор С 1 306,54 306,54 0,355263 4,38 0,5789

Остаток ББсл 19 15531,58 817,4515

Содержание налтрексона в микросферах, мг/г Фактор А 4 306682 76670,49 72,68294 2.9 0,0412

Фактор В 1 233.93 233,93 0,062131 4,38 0,0359

Фактор С 1 5320,32 5320,32 1,413068 4,38 0,8793

Остаток 58сл 19 67771,54 832,7861

Высвобождение 1-й день, % Фактор А 4 10161,36 2540,341 45,38065 2,9 ион.;')

Фактор В 1 885,7805 885,7805 19,25197 4,38 0,0052

Фактор С 1 29,5245 29,5245 0,611699 4,38 0,6257

Остаток БЭсл 19 828,1775 44,19355

Высвобождение 7-й день, % Фактор А 4 5197,55 1299,388 3,54459 2,9 0,049

Фактор В 1 854,91 854,91 26,48407 4,38. 0,0050

Фактор С 1 42,52 42,52 1,317074 4,38 0,0724

Остаток 88сл 19 581,042 30,58116

Высвобождение 14-й день, % Фактор А 4 1273,51 318,3769 9.019231 2,9 0,0356

Фактор В 1 101,57 101,57 3,452664 4,38 0,0527

Фактор С 1 33,1 33,1 1,125275 4,38 0,0558

Остаток ББсл 19 529,4968 27,86825

Высвобождение 28-й день, % Фактор А 4 119,41 29,85175 0,003448 2,9 0,7894

Фактор В 1 45,6 45,6 0,006321 4,38 0,9316

Фактор С 1 74,49 74,49 0,010326 4,38 0,6442

Остаток ББсл 19 129862,9 6834,891

Исходя из полученных значений суммы квадратов отклонений (ББ) выявлено, что наибольшее влияние на размер частиц оказывал вид и комбинация введенных в состав стабилизаторов, а также скорость вращения мешалки, факторы А и В: 85,6 % и 8,68 %, соответственно. Фактор С (соотношение налтрексон : СМГК) оказывал незначительное влияние на размер

частиц (0,11 %). На содержание налтрексона существенное влияние оказывал как выбор типа стабилизатора (фактор А - 80,7 %), так и скорость вращения мешалки (фактор В - 2,06 %), фактор С вносил вклад, соизмеримый по величине с ошибкой. Данные подтверждены результатами сравнения Рэксп с табличным значением критерия Фишера.

Степень влияния факторов на параметры высвобождения в 1-й день составляла: 85,3 % для фактора А, 7,43 % для фактора В, 0,25 % для фактора С. На долю неконтролируемых, случайных ошибок приходилось 7,05 %. Наибольшее значение имел фактор А - тип стабилизатора, а наименьшее -соотношение сополимера и налтрексона.

Проверка влияния факторов на количество налтрексона, перешедшего в раствор на 7-й день, показала следующие результаты: степень влияния факторов - 77,9 % для фактора А, 12,8 % для фактора В, 0,64 % для фактора С. Следовательно, наименьшее влияние оказывало количество налтрексона и сополимера СМГК.

Для количества налтрексона, перешедшего в среду растворения за 14 дней, наиболее значимым фактором являлся фактор А - тип стабилизатора (65,7 %). Процент ошибки - 27,3 %.

Дисперсионный анализ влияния указанных выше факторов на параметры высвобождения на 28-й день дал следующие результаты: факторы имели незначительное влияние - 0,09 % для фактора А (тип стабилизатора), 0,04 % для фактора В (скорость механического воздействия) и 0,06 % для фактора С (соотношение налтрексона и сополимера). Доля неконтролируемых, случайных факторов равна 99,8 %. Такой большой процент ошибки объясняется незначительной разницей между взятыми показателями, что не позволило оценить данный показатель с большой достоверностью либо влияние факторов достоверно не установлено, что подтверждает значительный уровень ошибки.

Таким образом, исходя из проведенного анализа, можно заключить, что на качество микросфер, главным образом, влияли вид стабилизатора и скорость механического воздействия. Соотношение налтрексона и сополимера не оказывало существенного влияния на характеристики микросфер.

3.3. Сравнительная оценка характеристик полученных полимерных микросфер с полимерными микросферами препарата Вивитрол®

Полученные полимерные микросферы сравнили с полимерными микросферами, входящими в состав препарата Вивитрол®, и определили наиболее близкие к ним по характеристикам: размер частиц, содержание лекарственного вещества и кинетика его высвобождения из полимерных микросфер (таблица 5).

Таким образом установили, что микросферы с характеристиками, наиболее близкими к микросферам препарата Вивитрол®, удается получить на основе налтрексона основания в условиях получения микросфер серии № 13 (табл. 3).

Полимерные микросферы с инкапсулированным налтрексона основанием имели показатели, наиболее близкие к показателям препарата Вивитрол® по

следующим параметрам: количественное содержание налтрексона в полимерных микросферах и кинетика высвобождения.

Следует отметить, что полученные полимерные микросферы отличались по размеру от микросфер, входящих в состав препарата Вивитрол® (рисунок 1) и при этом имели бимодальное распределение. Полимерные микросферы с инкапсулированным налтрексона основанием характеризовались более равномерным повышением концентрации ЛВ в среде растворения по сравнению с микросферами препарата Вивитрол® (рисунок 2).

Таблица 5 - Сравнение характеристик полимерных микросфер с инкапсулированным налтрексона г/хл и основанием и полимерных микросфер

препарата Вивитрол®

Показатель Вивитрол® Полимерные микросферы с налтрексона г/хл (Эксперимент № 6, табл.1) Полимерные микросферы с налтрексона осн. (Эксперимент № 13, табл. 3)

Размер частиц, мкм (110:>51 ± 1,5; д50: 83 ± 1,5; с190:< 146 ±2,1 <110:> 15 ± 0,7; а50: 31,3 ±1,0; с190:<88± 1,1 ё,0:> 9,1 ±0,4; ё50: 35,2 ± 0,8; (190:< 64 ± 1,5

Содержание налтрексона, мг/г 416± 1,7 27,7 ± 0,5 411,4 ±3,28

Высвобождение, % 1-й день 7-й день 14-й день А 7 день - 14 день 28-й день 3,33 ± 1,1 40,6 ± 1,09 58,6 ± 1,5 18 ± 1,6 55,2 ± 1,1 50.7 ± 5,4 62,3 ± 2,7 80,1 ± 1,5 17.8 ± 1,1 89.9 ± 1,9 7,4 ± 0,4 34,8 ± 0,2 45,7 ± 0,3 11.1 ±0,5 67.2 ± 3,0

Ричер частпп, мкм

я >а к ж

Размер частиц, мкм

6

1!!

ИПгпиЖОр» имя

« »в л «в 'м гя «и

Размер частиц, »1101

Рисунок 1 - Распределение частиц по размерам: а - микросферы, входящие в состав препарата Вивитрол®; б - микросферы с инкапсулированным налтрексона гидрохлоридом; в - микросферы с инкапсулированным налтрексона основанием

День

•препарат Внвнтрол

•полимерные микросферы с инкапсулированным налтрексона основанием •полимерные мнкросферы с инкапсулированным налтрексона г/хл

Рисунок 2 - Кинетика высвобождения налтрексона из полимерных микросфер

Такие особенности позволили создать оригинальную инъекционную ЛФ налтрексона, защищенную патентом РФ № 2471478 от 08.12.2011 «Фармацевтическая композиция для лечения алкоголизма, наркомании и токсикомании с улучшенным профилем высвобождения налтрексона».

В таблице 6 приведен оптимальный состав для получения полимерных микросфер, который проверен экспериментально и теоретически обоснован.

Таблица 6 - Оптимальные количества исходных веществ для получения 2,5 г полимерных микросфер с инкапсулированным налтрексоном

Компоненты Количество, г

Органическая фаза

Налтрексона основание (Cilag AG) 1,5

Сополимер молочной и гликолевой кислот (75:25) (Evonik Industries, Германия) 1,5

Метиленхлорид (ГОСТ 9968-86) 8,89

Водная фаза

Поливиниловый спирт (USP, Chang Chun Petrochemical со. LTD, Тайвань) 1,02

Метилцеллюлоза (USP, Schin Etsu, Япония) 1,02

Вода для инъекций (ФС 42-0325-09) 51

3.4. Разработка состава жидкой дисперсионной среды для приготовления суспензии для внутримышечного введения

В состав инъекционной лекарственной формы входят лиофилизат полимерных микросфер налтрексона основания и жидкая дисперсионная среда для приготовления суспензии для внутримышечного введения.

В качестве жидкой дисперсионной среды для приготовления суспензий используют изотонический раствор натрия хлорида (0,9 %) и полисорбата 20 (0,18 %) с добавлением различных количеств натрия карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ), обеспечивающей необходимую стабильность получаемой суспензии.

Для подбора рецептуры жидкой дисперсионной среды для приготовления суспензии исследовали зависимость вязкости получаемых растворов и свойств восстановленной суспензий полимерных микросфер в зависимости от концентрации натрия карбоксиметилцеллюлозы (таблица 7).

Таблица 7 - Рецептуры жидкой дисперсионной среды для приготовления

суспензии

№ Кармел-лоза натрия, %м/м Вязкость полученного раствора, сСт (ГФ XII, ч.1, с. 41) Свойства восстановленной суспензии

1 1,5 24,7 ±0,1 Восстановленная суспензия расслаивается в течение 5 минут. Суспензия проходит через иглу без сопротивления

2 2 35,6 ± 0,2 Восстановленная суспензия расслаивается в течение 5 минут. Суспензия проходит через иглу без сопротивления

3 2,25 48,6 ± 0,2 Восстановленная суспензия расслаивается в течение 5 минут. Суспензия проходит через иглу с небольшим сопротивлением

4 2,5 51,6 ±0,1 Восстановленная суспензия не расслаивается в течение 5 минут. Суспензия проходит через иглу с небольшим сопротивлением

5 3 125 ±0,1 Восстановленная суспензия не расслаивается в течение 5 минут. Суспензия проходит через иглу с большим сопротивлением

В качестве состава раствора выбран состав № 4, обеспечивающий необходимые свойства получаемой суспензии.

На основании результатов проведенных исследований разработан состав (таблица 8) и спецификация инъекционной лекарственной формы налтрексона, получившей рабочее название «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций».

Таблица 8 - Состав инъекционной лекарственной формы «Налтрексон

пролонгированного действия для инъекций»

Компоненты Количество

Лиофшизат (состав на 1 флакон)

Действующее вещество

Налтрексона основания (Cilag AG, Германия) 415 мг

Вспомогательное вещество

Сополимер молочной и гликолевой кислоты (75:25) (Evonik Industries, Германия) 585 мг

Жидкая дисперсионная среда для приготовления суспензии 'состав на 4 мл)

Кармеллоза натрия (натрия карбоксиметилцеллюлоза) (Eur. Ph., Ashland, США) 100,0 мг

Полисорбат 20 (Eur. Ph./USP, Industria Chimica Panzeri, 4,0 мг

Италия)

Натрия хлорид (ФС 42-2572-95) 36,0 мг

Вода для инъекций (ФС 42-0325-09) до 4,0 мл

Нормы параметров качества лиофилизата «Количественное содержание», «Размер частиц» и тест «Высвобождение», включенные в спецификацию, были основаны на значениях, полученных для полимерных микросфер оптимального состава (табл. 3, эксперимент № 13). Также в спецификацию были включены параметры «Внешний вид», «Остаточные растворители», «Вода», «Посторонние примеси», «Пирогенность» и «Стерильность», нормирование которых предписываются требованиями ГФ для парентеральных форм.

Нормы параметров качества жидкой дисперсионной среды для приготовления суспензий включены в спецификацию на основании требований ГФ.

Совместно с ЗАО «Институт фармацевтических технологий» для контроля качества полученных полимерных микросфер в соответствие со спецификацией были разработаны методики анализа: «Количественное определение», «Посторонние примеси», «Остаточные органические растворители» и тест «Высвобождение».

Результаты проведенной метрологической оценки позволили сделать вывод о пригодности разработанных методик анализа полимерных микросфер, входящих в состав инъекционной лекарственной формы.

3.5. Разработка технологии получения лиофилизата микросфер и лсидкой дисперсионной среды для приготовления суспензии, входящих в состав инъекционной ЛФ «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций»

Технология получения ЛФ «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» разработана на основе результатов проведенных исследований и требований ОСТ 64-02-003-2002.

Технология включает процессы получения лиофилизата полимерных микросфер и жидкой дисперсионной среды для приготовления суспензии.

Для получения лиофилизата предварительно готовили растворы исходных веществ в количествах и соотношениях, которые были подобраны при изучении влияния различных факторов на процесс инкапсулирования налтрексона основания (таблица 3).

В связи с низкой скоростью растворения поливинилового спирта в воде в нормальных условиях и понижением растворимости метилцеллюлозы при нагревании был подобран режим приготовления раствора смеси этих веществ. Сначала проводили растворение поливинилового спирта при температуре 80 - 85 °С, затем в полученный раствор добавляли метилцеллюлозу и после ее набухания раствор медленно охлаждали при перемешивании, при этом происходило образование однородного раствора.

Для предотвращения загрязнения лиофилизата посторонними механическими примесями было предусмотрено фильтрование полученных растворов через мембранные фильтры с размером пор 0,45 мкм.

Профильтрованные растворы смешивали и осуществляли процесс эмульгирования при подобранных оптимальных параметрах (таблица 3, эксперимент № 13).

Полученную эмульсию смешивали с водой и выдерживали до образования суспензии полимерных микросфер. Процесс инкапсулирования налтрексона основания в полимерные микросферы осуществляли при постепенном повышении температуры. В ходе разработки технологии был подобран температурный режим формирования частиц, предусматривающий повышение температуры на последней стадии процесса до 35 "С, что позволило сократить время проведения процесса с 18 до 16 часов и снизить в них содержание остаточного органического растворителя в два раза (таблицы 9, 10).

Таблица 9 - Температурный режим получения микросфер

№ Температура воды в реакторе, °С Продолжительность стадии, ч

10 ±0,5 12

1 15 ±0,5 2

20 ± 0,5 1

30 ±0,5 3

10 ± 0,5 12

15 ±0,5 2

20 ± 0,5 1

35 ± 0,5 1

Таблица 10 - Изучения влияние температуры на остаточное содержание органического растворителя в полимерных микросферах

Температурный режим, № Остаточное содержание метиленхлорида, %

1 0,58 ± 0,2

2 0,21 ±0,4

В связи с наличием в получаемой суспензии фракции частиц размером менее 10 мкм, концентрирование полимерных микросфер осуществляли центрифугированием. Для проведения которого был подобран режим, обеспечивающий полноту осаждения микросфер, определяемую по прозрачности надосадочной жидкости (таблица 11).

Таблица 11 - Изучения влияние времени центрифугирования на полноту

осаждения полимерных микросфер

№ Время центрифугирования, мин Внешний вид надосадочной жидкости

1 2-4 Мутная

2 5-7 Прозрачная

Полученную концентрированную суспензию полимерных микросфер разливали во флаконы для лиофильной сушки, прикрывали крышками, лиофилизировали, укупоривали, маркировали и подвергали радиационной стерилизации.

Для получения жидкой дисперсионной среды для приготовления суспензии был подобран режим растворения исходных веществ. В связи с высокой скоростью растворения КМЦ в горячей воде, расчетные количества исходных веществ загружали в воду при перемешивании и выдерживали при температуре 70 - 80 °С до полного растворения твердых компонентов. Жидкую дисперсионную среду охлаждали, стерильно фильтровали, разливали в ампулы и запаивали.

Технологические схемы производства ЛФ «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» представлены на рисунках 3 и 4.

Рисунок 3 - Технологическая схема производства лиофилизата полимерных микросфер с инкапсулированным налтрексоном (Кх- контроль химический, Кб-контроль биологический, Кт - контроль технологический).

В канализацию

врл. Санитарная обработка

производства

Поласорбат20

Лиофилтат полимерных мнкросфер со сгслада готовой продукции

КМЦ ВР.2.1. | Подготовка КМЦ -

БР.2.2. Подготовка Полисорбат 20

вр.23. Подготовка хлорида натрия

ВР.2. Кт.Кк

Подготовка сырья

ТП.З. Првготовленис жид.

Кх, Кт дисперсионной среды

для получения сусиенши

для внутримышечного

введения

ТП.4. Кб,Кт Стерилизующая фильтрация. Роз-тив я зяаяйка

-с

УМО.5. Упаковка и маркировка

Кт

Рисунок 4 - Технологическая схема производства жидкой дисперсионной среды для приготовления суспензии (Кх- контроль химический, Кб- контроль биологический, Кт - контроль технологический).

5.6. Контроль качества и исследование стабильности в процессе хранения инъекционной лекарственной формы

Наработанные в соответствии с технологией и лабораторным регламентом опытные серии инъекционной ЛФ соответствовали требованиям разработанного проекта НД.

На примере трех серий инъекционной ЛФ «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» была изучена и установлена стабильность препарата при хранении в течение 2,5 лет в температурных условиях, рекомендованных для хранения препарата Вивитрол® - 2 - 8 °С (таблицы 12, 13), что позволяет установить «Срок годности препарата» - 2 года.

Изучение стабильности препарата с целью продления срока годности продолжаются.

3.7. Сравнительное изучение безопасности и эффективности инъекционной ЛФ «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» и препарата Вивитрол®

На базе Института токсикологии ФМБА России (Санкт-Петербург) для инъекционной ЛФ «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» проведено экспериментальное сравнительное изучение безопасности

(общетоксического действия, раздражающих свойств) в сравнении с зарегистрированным препаратом Вивитрол®.

Близость по показателям острой токсичности (их ЛД50 отличаются менее чем на 10 %), одинаковая картина интоксикации, отсутствие у обоих макро- и микроскопически выявляемых признаков поражений внутренних органов позволяет заключить, что лекарственная форма «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» и зарегистрированный препарат по показателям острой токсичности являются эквитоксичными.

Результаты исследований подострой токсичности инъекционной ЛФ «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» при его внутримышечном введении один раз в сутки в течение 14 дней в дозах 55 и 220 мг/кг у крыс обоих полов в сравнении с зарегистрированным аналогом показали, что разработанная ЛФ и препарат Вивитрол® не вызывают каких-либо заметных сдвигов биохимических показателей крови за исключением увеличения уровня трансаминаз. Кроме этого наблюдались физиологические сдвиги в уровне ректальной температуры и состоянии сердечно-сосудистой системы, характерные в целом для группы наркотических анальгетиков.

В соответствии с классификацией опасности лекарственных препаратов для клинического применения (ИБ > 5) «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» относится к III классу малотоксичных (малоопасных) лекарственных препаратов.

Изучение фармакологической активности показало, что инъекционной ЛФ «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» оказывает выраженное противоалкогольное действие, которое проявляется снижением тревожности и ослаблением алкогольной мотивации в условиях экспериментального алкоголизма.

Таблица 12 - Результаты анализа «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» жидкой дисперсионной среды для приготовления суспензии для внутримышечного введения пролонгированного действия.

Хранение при температуре от 5 ± 3 °С.

Серия № Срок хранс-ния,год Описание Подлинность Прозрачность pH Вязкость Поминальный объем

1 2 3 4 Соотв. 6 7 8

Требования л о проекту НД Прозрачная бесцветная жидкость Должен образовываться тонкий белый осадок (карбоксиметилцеллюлоза) Раствор должен бЫ'1Ь прозрачным Ог 5,8 ДО 7,2 От 50 до 70 сСт Не менее 3,4 мл

241011 - Соотв. Образ, юн кий белый осадок Соо1в. 6,45 51,6 3,4

2,5 Соотв. Образ, тонкий белый осадок Соотв. 6.6Ü 51,9 3,4

261011 Соотв. Образ, тонкий белый осадок Соотв. 6,80 53,1 3,4

2,5 Соотв. Обра*, тонкий белый осадок Соотв. 6,73 53,5 3,4

311011 Соотв. Образ, тонкий белый осадок Соотв. 6,62 51,6 3,4

2,5 Соотв. Образ, тонкий белый осадок Соотв. 6,47 51,4 3,4

Жидкая дисперсионная среда для приготовления суспензии указанных выше серий по показателям «Механические включения», «Пирогенность» и «Стерильность» соответствует требованиям проекта НД.

Таблица 13 - Результаты анализа «Налтрексон пролонгированного действия для инъекций» лиофилизат для приготовления суспензии для внутримышечного введения пролонгированного действия.

Хранение при температуре 5 ± 3 °С

Серия Ка Срок хранения, год. Описание Растворимость Подлинность Размер частиц, мкм Высвобождение, % Вода, % Пост, примеси, % Метилен- хлорид, % Пироген-ность Стерильность Кол. опр., мг/г

2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

Требования по проекту НД Порошок от белого до светло-желто-коричневого цвета, без видимых посторонних включений Легко растворим в хлороформе, метиленхло-риде, ацетоне и этилацетате. Практически нерастворим в воле Время удерживания основного пика на хроматограм-ме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика налтрексона на хроматог-рамме стандартного раствора с! ю- > 9 мкм; Среднее (¿50): 30-50 мкм; ¿ч^ < 65 мкм 1 день: от 7 % до 13 % 7 день: от 35 % до 48 % 14 день: от 50 % до 58% Д7-14: от 13 % до 20 % 28 день: от 58 % до 70 % Не более 1,3% Суммарное содержание примесей не более 2 % Не более 0,6, % Должен быть апиро-генным Должен быть стериль-ным Не менее 340 и не более 420 мг/г

171011 Порошок светло-желтого цвета Соотв. Выдерж. с110:> 10,8 ±1,0; а«,:31,8± 1,8; а90:<62± 1,7 1 дн-7,3 ± 0,2; 7 дн-36 ± 1,0; 14 дн-53 ± 1,64; Д7-14дн- 17± 1,0; 28 лн-68 ± 1,2 1,0 1,6 0,21 Соотв. Соотв. 395

2,5 Порошок желтого цвета Соотв. Выдерж. а|0'.> 10,6 ±1,2; <150: 32,8 ± 1,9; с190:< 62,5 ± 1,1 I дн-7,5 ± 0,5; 7 дн-35,9 ± 0,6;14 дн-53,1 ± 1,7; Д7-14 дм - 16,7 ± 1,1; 28 дн-68,7 ± 1,2 0,96 1,61 0,19 Соотв. Соотв. 394

211011 Порошок желтог о цвета Соотв. Выдерж. а[0:> 10,5 ± 1,5; с150: 35,7 ± 1,3; с190:< 61± 1,5 1 дн-8,2 ± 1,1; 7 дн-37,5 ± 1,1;14дн-51,9± 1,54; Д7-14 дн - 15,4 ± 1,6; 28 ди-64,6± 1,3 0,89 1,5 0,17 Соотв. Соотв. 412

2,5 Порошок желтого цвета Соотв. Выдерж. аш:> 10,5 ± 1,5; с150: 35,7 ±1,3; &>(,:< 61 ± 1,5 1 дн-8,2 ± 1,1; 7 дн-37,5 ± 1,1;14дн-51,9± 1,54; Д7-14 дн - 15,4 ± 1,6; 28 дн-64,6± 1,3 0,9 1,53 0,17 Соотв. Соотв. 411

311011 Порошок светло-желтого цвета Соотв. Выдерж. £)10:> 12,6 ± 1,5; 39,2 ±1,4; 62,4 ± 0,5 1 дн-7,9±ОД5;7дн-37± 1,6;14дн-54,5± 1,52; Д7-14 дн - 17,4 ± 1,34; 28 дн-68,2± 1,2 0,93 1,47 0,25 Соотв. Соотв. 405

2,5 Порошок желтого цвета Соотв. Выдерж. а10:> 12,5 ±2,3; 41,8 ± 1,0; с19О:<60,3± 1,7 1 дн-8,1 ± 1,1; 7 дн-36,7 1 1,6;14 ди-54,8 1,5; Д7-14 дн - 17,8 ± 1,7; 28 дн-68,4± 1,2 0,91 1,51 0,25 Соотв. Соотв. 406

ВЫВОДЫ

1. Разработан состав и технология получения инъекционной лекарственной формы налтрексона.

2. Установлено, что наибольшее влияние на свойства полимерных микросфер, содержащих инкапсулированный налтрексона г/хл, оказывали соотношение ЛВ и сополимера, соотношение внутренней водной фазы и дисперсионной среды и тип стабилизатора. Наибольшее влияние на свойства полимерных микросфер с инкапсулированным налтрексона основанием оказывал тип стабилизатора в дисперсионной среде и скорость механического воздействия.

3. Сравнительное изучение полученных полимерных микросфер и микросфер, входящих в состав препарата Вивитрол©, показало, что полимерные микросферы с инкапсулированным налтрексона г/хл характеризуются более высокой скоростью высвобождения ЛВ (более 40 % за первые сутки), что делает невозможным использование субстанции налтрексона г/хл для получения пролонгированной ЛФ.

4. Установлено, что полимерные микросферы с инкапсулированным налтрексона основанием наиболее близки к показателям препарата Вивитрол® по следующим параметрам: количественное содержание налтрексона и кинетика высвобождения.

5. Разработан состав и технология получения инъекционной ЛФ (Патент РФ № 2471478) на основе полимерных микросфер, имеющих распределение частиц по размерам, обеспечивающее более равномерное высвобождение налтрексона в сравнении с препаратом Вивитрол®.

6. Разработаны методы анализа и контроля качества инъекционной ЛФ на основе полимерных микросфер: «Количественное определение», «Посторонние примеси», «Остаточные органические растворители» и тест «Высвобождение».

7. Изучена стабильность инъекционной ЛФ при температуре от 2°С до 8°С в течение 2,5 лет, позволившая установить срок годности препарата - 2 года. Изучение стабильности продолжается.

8. Проведены сравнительные исследования безопасности и фармакологический активности инъекционной ЛФ и препарата Вивитрол®, показана их эквитоксичность и выраженное противоалкогольное действие, которое проявляется в снижениии тревожности и ослаблении алкогольной зависимости в условиях эксперимента.

9. Разработан проект НД (апробирован ЗАО «Институт фармацевтических технологий», 04.09.13) и лабораторный регламент (апробирован ЗАО «Институт фармацевтических технологий», 16.09.13) на инъекционную ЛФ «Налтрексон пролонгированного действии для инъекций».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в ведущих рецензируемых журналах ВАК

1. Петрова, Е.А. Подбор вспомогательных веществ и параметров процесса при разработке состава микросфер налтрексона с пролонгированным высвобождением с применением дисперсионного анализа / Е.А. Петрова, Е.В. Блынская, С.А. Кедик, К.В. Алексеев, Н.В. Тихонова, A.B. Панов, В.В. Суслов // Фармация. - 2013. - № 4. - С. 28-31.

2. Петрова, Е.А. Оценка эффективности метода двойного эмульгирования при получении микросфер налтрексона на основе сополимера молочной и гликолевой кислот / Е.А. Петрова, С.А. Кедик, К.В. Алексеев, Е.В. Блынская, A.B. Панов, В.В. Суслов, Н.В.Тихонова // Вестник МИТХТ. - 2013. -Т. 8, № 2. - С. 58-63.

3. Кедик, С.А. Факторы, влияющие на закономерности высвобождения биологически активных веществ из полимерных микрочастиц фармацевтического применения / С.А. Кедик, Е.А. Петрова, Е.С. Жаворонок,

A.B. Панов, В.В. Суслов, И.П. Седишев // Биофармацевтический журнал,- 2013. -Т. 5,№4.-С. 9-15.

4. Петрова, Е.А. Изучение параметров микроинкапсулирования при получении пролонгированной формы налтрексона / Е.А.Петрова, С.А. Кедик, К.В. Алексеев, Е.В. Блынская, A.B. Панов, В.В. Суслов, Н.В. Тихонова // Химико-фармацевтический журнал. - 2014. - Т. 48, № 1.- С. 50-53.

Статьи в прочих научных изданиях, патент и материалы конференций

5. Кедик, С.А. Полимеры для систем доставки лекарственных веществ пролонгированного действия (обзор). Полимеры и сополимеры молочной и гликолевой кислот / С.А. Кедик, Е.С. Жаворонок, И.П. Седишев, A.B. Панов,

B.В. Суслов, Е.А. Петрова, М.Д. Сапельников, Д.О. Шаталов, Д.В. Ерёмин // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2013. - № 2(3). - С. 18-35.

6. Кедик, С.А. Полимеры для систем доставки лекарственных веществ пролонгированного действия (обзор). Перспективные синтетические и природные полимеры / С.А. Кедик, Е.С. Жаворонок, И.П. Седишев, A.B. Панов, В.В. Суслов, Е.А. Петрова, М.Д. Сапельников, Д.О. Шаталов, Д.В. Ерёмин // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2013. - № 3 (4). - С. 22-35.

7. Патент РФ на изобретение № 2471478. Фармацевтическая композиция для лечения алкоголизма, наркомании и токсикомании с улучшенным профилем высвобождения налтрексона / С.А. Кедик, A.B. Панов, В.В. Суслов, Е.А. Петрова, Н.В. Тихонова, М.Д. Сапельников, К.В. Алексеев, Е.В. Блынская // заявка от 8.12.2011, опубл. 10.01.2013.- Бюлл. № 1.

8. Petrova, Е.А. The influence of surfactant type on middle particles size of PLGA microspheres and encapsulation efficience of model drug / S.A. Kedik, E.V. Blinskaya, A.V. Panov, N.V. Tichonova, E.A. Petrova, M.D. Sapelnikov // Hellenic Symposium with International Participation and Young Scientist's Scholl, BIONANOTOX, Heraklion, 2011. - P. 60-61.

9. Петрова, Е.А. Определение корреляционных связей между составом вспомогательных веществ и показателями качества микросфер налтрексона с пролонгированным высвобождением / Е.А. Петрова, Е.В. Блынская, Н.В. Тихонова, С.А. Кедик, К.В. Алексеев, М.Д. Сапельников, A.B. Панов, В.В. Суслов // «Химическая технология и биотехнология новых материалов и продуктов», Москва, 2012 - С. 138-139.

10. Петрова Е.А. Изучение кинетики высвобождения налтрексона из микросфер на основе сополимера молочной и гликолевой кислот / Е.А. Петрова, С.А. Кедик, Н.В. Тихонова, М.Д. Сапельников, Е.В. Блынская, A.B. Панов // Материалы международной научно-практической конференции «Фармацевтические и медицинские биотехнологии», Москва, 2012 - С. 86-87.

П.Петрова, Е.А. Влияние протонирования налтрексона на степень включения в полимерную матрицу / Е.А. Петрова, Е.В. Блынская, С.А. Кедик, К.В. Алексеев, Н.В. Тихонова, A.B. Панов, В.В. Суслов // Материалы международной научно-практической конференция «Перспективы развития науки и образования», Тамбов, 2012 - С. 98-99.

12. Кедик, С.А. Способ введения налтрексона в микросферы с модифицированным высвобождением / С.А. Кедик, Е.А. Петрова, М.Д. Сапельников, Н.В. Тихонова, Е.В. Блынская // Материалы XIX Российского конгресса «Человек и лекарство»: сб. материалов конгресса,- М. 2012 - С.412.

13. Петрова, Е.А. Влияние условий получения микросфер налтрексона на эффективность инкапсулирования / Е.А. Петрова, С.А. Кедик, К.В. Алексеев, Е.В. Блынская, A.B. Панов, В.В. Суслов, Н.В. Тихонова // Материалы IV международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки», Владикавказ, 2013 - С. 242-243.

14. Петрова, Е.А. Изучение влияния типа механического воздействия на размер и полидисперсность микросфер налтрексона / Е.А. Петрова, С.А. Кедик, К.В. Алексеев, Е.В. Блынская, С.Г. Бексаев, A.B. Панов, В.В. Суслов, Н.в' Тихонова // Материалы I международной интернет-конференции «На стыке наук. Физико-химическая серия», Казань, 2013- С. 183-186.

15. Петрова, Е.А. Сравнение свойств налтрексона гидрохлорида и оснований налтрексона с целью обоснования метода получения микросфер на основе сополимера молочной и гликолевой кислот / Е.А. Петрова, С.А. Кедик, A.B. Панов, В.В. Суслов, К.В. Алексеев, Е.В. Блынская, Н.В. Тихонова, С.Г.' Бексаев // Материалы международная заочная научно-практическая конференция «Актуальные научные вопросы и современные образовательные технологии», Россия, 2013 - С. 125-126.

16. Кедик, С.А. Изучение влияния условий проведения процесса получения полимерных микросфер, содержащих гидрофильные лекарственные вещества, на их характеристики / С.А. Кедик, A.B. Панов, В.В. Суслов, Е.А. Петрова, С.Г. Бексаев // Материалы II международной научно-практической виртуальной конференции "На стыке наук.Физико-химическая серия" Казань 2014-С. 174-177.

Петрова Елизавета Александровна Разработка состава и технологии получения инъекционной лекарственной формы налтрексона с модифицированным высвобождением Формат 60x90/16 Тираж 120 экз. Подписано в печать 22.09.2014. Заказ № 205 Типография ООО «Генезис» 8 (495) 434-83-55 1 19571, г. Москва, пр-т Вернадского, 86