Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Разработка и внедрение методов ранней диагностики хронической интоксикации соединениями фосфора

с Ь, 3I

*

АЛМА-АТИНСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАИСТВЬНЯЫИ МЬДИЦИпСКИИ ИНСТИТУТ им. С. Д. АСФЕНДИЯРОВА

На правах рукописи

ОРМАНОВ Намазбай Жаппаровим

РАЗРАБОТКА И ВНЕДРЕНИЕ МЕТОДОВ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНТОКСИКАЦИИ СОЕДИНЕНИЯМИ ФОСФОРА

14.00.07 — гигиена (профзаболевания)

АВТОР ЕФ ЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

АЛМА-АТА — 1992

Работа выполнена в Чимкентском отделе профзаболеваний НИИ гигиены и профзаболеваний и на кафедре госпитальной терапии с курсом профзаболеваний Алма-Атинского ордена Трудового Красного Знамени государственного медицинского института им. С. Д. Асфендиярова Министерства здравоохранения Республики Казахстан.

Научные консультанту: — академик Росс. АМН, профессор

Н. Ф. Иг-меров

— доктор медицинских наук, профессор М. И. Даулетбакова

Официальные оппоненты: — доктор медицинских наук, профессор

Б. А. Неменко

— доктор медицинских наук, профессор А. А. Лукашов

— доктор медицинских наук, профессор А. Б. Утешеа

Ведущее учреждение — Центральный ордена Ленина институт

усовершенствования врачей (г. Моек-ва)

Защита диссертации состоится «_» _ 1992 г.

В___ часов на заседании Специализированного совета (Д 079.04.03)

по защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук при Алма-Атинском ордена Трудового Красного Знамени государственном медицинском институте (480012, г. Алма-Ата, ул. Комсомольская, 88).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Алма-Атинского государственного медицинского института.

Автореферат разослан «_ _ ¡992 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат медицинских наук,

доцент Р. Ф. СИДОРЕНКО

6 wninm

Ш::С im

♦■»• - "■ i: IM«

■ тдел М^сссртлиий

ОЫцАЯ ХАРАКГ ЕР1СТ ИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Все более интенсивное развитие получает в Казахстане производство желтого фосфора и фосфористых минеральных удобрений, обусловленное гас большой народнохозяйственной значимостью.

Фосфорная промышленность Республики Казахстан представлена Шымкентским производственным объединением "Фосфор", Джамбулским производственным объединением "Химпром" и Новоджамбулским фосфорным заводом, которые выпускали 90% фосфора в бывшем СССР. В перспективе намечено введение новых мощностей по добыче фосфори-: тов по производству «елтого фосфора и минеральных удобрений в Каратауском бассейне Джамбулской области и в Актюбинской области. Подобный масштаб этой отрасли промышленности вовлекает в cbod сферу все возрастающие контингента рабочих и инженерно-технических работников, которые в производственных условиях могут подвергаться воздействию ряда вредных факторов. Используемый в настоящее время технологический процесс получения желтого фосфора сопровождается выделением в воздушнуо среду производственных помещений паров желтого фосфора, фосфористого водорода /фосфина/, фосфорного ангидрида, окислов фосфора, угарного газа, концентрации которых на отдельных участках превышает- Д^К боле» 10 раз и создают опасность развития у них хронической профессиональной интоксикации фосфором и его неорганическими соединениями /В.А.Козловский, А.Г.дардик, 1У00; В.А.Козловский, 1984; 1984 а/. В связи о этим одной из актуальных проблем профессиональной патологии является разработка надежных способов первичной профилактики, ранней диагностики, определения степени тяжести процесса и экспертиза трудоспособности при хронической фосфорной интоксикации. Существующие методы мало действенны, т.к. неспецифичны /Г.М.Ьело-

«¡курская и еоавт., .1978:1983/ и больше ориентированы не на диагностику ХИСФ, а на диагностику поражения'отдельных органов или систем при ней /Е.И.Корольчук, 1983; 1984; Б.Н.Айтбембетов,1984; И.Е.Зельцер и соавт., 1988; Ю.В.Крылов, 1977/. К тому же они сложим,требуют для своего выполнения дефицитных реактивов , и , что еще существенно - не пригодны для скрининговых целей.

Однако решение названных выше насу|цных вопросов тесно сея -зано с ананием обших механизмов развития фосфорной интоксикации

Между тем общепринятой теории патогенеза фосфорной интоксикации еще нет. Имеющиеся в литературе сведения касаются лииь частных механизмов патогенеза. В частности, речь идет о наруши-нии под влиянием фосфора активности ферментных систем организма, отвечающих за окислительно-восстановительный потенциал, что выражается в неполноценной утилизации кислорода тканями и накоплении недоокисленных продуктов обмена /А.С.Некрасова, А.А.Лукашев, Х.С.Сабырбаева, Г.И.Беяоскурская, 1978; И.Т.Тулеев, 1982/. Сравнительно большое внимание уделено механизму развития жировой дис! рофии печени при экспериментальной фосфорной интоксикации /Н.А. Стредвхнна и соавт., 1981; 1982; Н.А.Стрелюхина,1888/, флюорозе /А.П.Авцын,, А.А.Жаворонков, 1981/, фтористой интоксикации/Д.М.' Зисмен, Е.Я.Гирская, 1971/, фосфина /В.Н.Окунева и соавт,,1985; 1987; СШе dat . 1970; MOfkinodcd ,

в клинике фосфорной интоксикации /Б.Н.Айтбембетов и соавт.,1984; 1984 а/. Все приведенные исследования представляют несомненный интерес как звенья патогенеза ХИСФ.Однако приходится констатировать, что концепцией, ■позволявшей Понять сущность патогенетиче! ких сдвигов в организие « объяснявших полнтропность влияния вред, ных факторов фосфорного производства на работающего, еще не располагав^. Меяду геи в более ранних исследованиях /Kjm¿ia eiai, IÍ6S\MSbí4maai, .1972; 1976/ было высказано цнение о той, что

- о -

жировая инфильтрация печени связана с перекиснш окислением мили-дов /ГШ/ мембран гепатоцитов. Позже это нашло подтверждение в экспериментальных исследованиях С.Ш.Шалхарова, Т.Н.Конакбаевой /1У84/ и многоплановых экспериментах Р.К.Татаевой /19Й5/ и Г.А. Кулкыбаева /1957; 19ЬЬ/. Б наших параллельно проводимых предварительных исследованиях /ПЛ.Орланов и соавт., 19еЗ;198о; Н.Ж. Орманов, 19Ьо; 19ьо а/ были получены новые факты о важной роли ГШ в механизме фосфорной интоксикации у рабочих фосфорного завода. Однако для суждения о-закономерности выявленных изменений именно для ХМСФ требуется углубленное изучение вопроса с привлечением современных методов квантовой биологии у репрезентативной группы раоочих и больных Х*СФ с адекватным подбором контрольных групп. Эти нерешенные проблемы ХИСФ и определили выбор темы.

Цель исследования. Целью данной работы явилось совершенствование первичной профилактики и ранней диагностики хронической интоксикации соединениями фосфора на основе изучения роли ПОя в ее патогенезе.

для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить роль СРО липидов клеточных мембран и активности антиоксидантных ферментов в механизме развития и прогрессирова-ния хронической интоксикации соединениями фосфора.

2. В течение ряда лет провести динамические наблюдения и ежегодное изучение процессов ГШ и активности антиоксидантных ферментов у группы рабочих, вновь поступивших на работу в печной цех фосфорного завода.

3. Изучить хемилвмкнометрические свойства плазмы крови у практически здоровых рабочих фосфорного производства с различным стажем работы в печном цехе, а также у больных ХЖФ с различной степенью тятести.

4. Изучить генерации сверхслабого свечения в гомоггнатах органов крыс при остром и хроническом воздействии желтого фосфора. Изучить раздельно / СП I'^l^O / роль желтого фосфора, фосфорной кислоты и солей фосфорной кислоты как индикаторов ЮЛ. С помощью различных акцепторов определить природу радикалов, образующихся при воздействии »елтого фосфора.

5. Разработать и внедрить для первичной профилактики Х1СФ способ определения профессиональной пригодности лиц к работе в условиях воздействия желтого фосфора.

6. На основе особенностей сверхслабого свечения биообъектов сталированных рабочих и больных ХЖФ разработать и внедрить оптимальные способы диагностики фосфорной интоксикации:

- способ диагностики фосфорной интоксикации и степени ее и ракенности;

- способ определения поражения гепато-бидиарной системы у вольных XiC4>;

- способ диагностики токсической миокардиодистрофии при ХИ

?. Изучить возможности кристаллографии в диагностике ХИЖ

Научная новизна. Комплексные клинико-экспериментальные ис

следования с параллельным применением биохимических и биофизич« ких методов позволили установить впервые следующие научные поле пения в изучаемой проблеме:

I. В патогенезе фосфорной интоксикации установлена ведуну роль усиления CPU липидов клеточных мембран, индуцируемое желт! фосфором. С помощью различных акцепторов - "ловушек радикалов" удалось выявить, что под воздействием желтого фосфора образуют* свободные радикалы, в том числе: гидроксильные /1иЦ/, перекиси: супероксид-радикал синглентный кислород /о'£/.

Z. Длительные наблюдения группы вновь поступивших на заво рабочих показало, что лероксидация липидов у работающих усилие

ся в первый не год работы. Однако компенсаторней активация анти-оксидантных механизмов подавляет к началу второго года ПО!. На третьем году работы в производстве фосфора антиоксидантная активность у работавших постепенно, но неуклонно снижается, что в свою очередь ведет к усилению ПОЛ. Дальнейший контакт с фосфором поддерживает активацию ПОЛ у наблюдаемых. Резервы антиокыадантных механизмов истощаются при стаже 15-19 лет. При этом у сталированных рабочих /ста» !5-19 лет/ при избыточном накоплении продуктов ПОЛ в ¿3,3% случаев на хемилюминограмыах появляется аномальный добавочный пик с небольшой амплитудой, при стаже 20 лет и более этот дополнительный пик, названный нами четко формируется у 56% рабочих. Серия контрольных исследований позволила нам квалифицировать пик Укак ранний /доклинический/ признак фосфорной интоксикации.

о. В опытах <Л'л1го при воздействии на плазму здоровых людей желтого фосфора хемилюминометрически установлен факт наличия индивидуальной чувствительности к желтому фосфору. Среди рабочих фосфорного производства 75$ оказались резистентными к желтому фосфору, 17% - чувствительными и 8% - сверхчувствительными. Среди больных ХИСФ не было лиц резистентных к желтому фосфору, что свидетельствует о роли индивидуальной чувствительности в механизме фосфорной интоксикации..

4. При продолжении работы во вредных цехах завода у стажи-рованных рабочих идет дальнейшее накопление продуктов ПОЛ /пере-кисных радикалов/, которые при отсутствии надежной антиоксидант-ной зашиты ведут к дестабилизации мембран клеток, нарушению их функции и развитию фосфорной интоксикации. Преимущественно развитию ХИСФ подвержены лица с индивидуальной чувствительностью к желтому фосфору.Процесс носит "цепной характер", что и определяет политропноеть поражения при ХИСФ, о чем свидетельствует

наши исследования интенсивности ГОЛ в гомогенатах органов крыс с фосфорной интоксикации. Одним из ведущих признаков ХИСФ является увеличение на ХЛ-грамме амплитуды пика 3 % параллельно тя-кести процесса.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ БЫНОСШЫЕ На ЬаЩИГУ

1. Активация процессов СЮ липидов и депрессия антиоксидантных систем организма является главным пусковым механизмом в патогенезе хронической интоксикации фосфором и его соединениями.

2. Установлена характерная динамика нарушения СРО липидов в биологических средах организма при воздействии желтого фосфора.

3. Хемилюминесцентный метод объективно отражает состояние СРО липидов в биообъектах организма, прост по выполнению, мояет быть применен в условиях профилактического осмотра рабочих. На основе хемилюыинометрии плазмы крови у стакированных рабочих и больных ХМСС& выявлены аномальные кривые с дополнительным-пи-кои У 2» специфичным для фосфорной интоксикации. На основе этих биофизических свойств крови разработаны и внедрены способы диагностики доклинической и клинически выраженных стадий фосфорной интоксикации, дифференциальной диагностики поражений гепато-билиарной системы и сердца при ХМЖ

4. Установлено наличие индивидуальной чувствительности организма к «елтоцу фосфору, что позволило разработать скрининг-тест для определения ш условиях первичного осмотра пригодности рабочих для работы а фосфорной промышленности.

о. Разработан и внедрен метод кристаллографической диагностики фосфорной интоксикации.

.Апробация и*боты. Основные положения диссертационной работы доложены: 4!а 1У съезде гигиенистов, эпидемиологов и инфекционистов Мзахсгйна» г.Чимкент /ГгоЗ/; на республиканской конфе-

ренции "Состояние мониторга загрязнения окружающей среды в Казахстане", г.Алма-Ата /1УоЗ/; на заседании Ученого Совета НИИ гигиены и профзаболеваний Ыо Каз.ССР, г .Алма-Ата /1УИ4, 1УЬЬ, 1уоо-1УуО, 1уУ1/; на клинической конференции гШ ГГ и ¡Ъ Л!1Н СССР, Г.Москва /1Уьо/; на Всесоюзном совещании "Развития фосфорной промышленности в X пятилетке, г.Чимкент /1Уоо/; на Всесоюзной проблемной комиссии ЛШ СССР "Научные основы гигиены труда и профпатологии" секции профпатологии, г.Уфа /1Уо7/; Всесоюзном симлозиу-ме "Хемилюминесценция в биологии, медицине и сельском хозяйстве" г.Ташкент /1Уо7/; I-съезда гигиенистов, эпидемиологов и инфекционистов Киргизской ССР г.Фрунзе /15з?/; на конференции терапевтов Казахстана г.Актюбинск /1Ув7/; на I-съезде невропатологов, нейрохирургов и психиатров Каз.ССР г.Алма-Ата /1УЬ7/; на 2-ой межобластной научно-практической конференции "Гигиена окружающей среды и здоровье человека" г.Актюбинск /I9Ь9/; на научно-практической конференции■"Экология и здоровье" г.Чимкент /1УУ0/; на Всесоюзной школе-семинаре "Био-Термо-Хемилюминесценции" г.Москва, Суздаль /1УУ0/; на Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы в профпатологии" г.Рига /1УУ0/; на Республиканском съезде терапевтов Казахстана, г.Караганда /1УУ0; на объединенного научном заседании сотрудников Чимкентского отдела профзаболеваний. НИИ гигиены и профзаболеваний. Чимкентского государственного фармацевтического института и Н/1Й "Гипрофосфора" Минудобрений СССР /1УУ0, IУу1/.

Структура диссертации. Диссертация включает: введение, обзор литературы, главу "Материал и методы исследования", 4 главы собственных исследований, обсуждение полученных результатов и заключение, выводы, указатель литературы. Объем диссертации 2УУ страниц, работа содержит ей рисунка и 49 таблиц. В указателе литературы приведены 331 отечественных и 172 зарубежных ис-

- ю - 1 •

точников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕГОда ИССЛЕДОВАНИЯ Настоящая работа основана на обследовании 782 практически здоровых рабочих вредных цехов фосфорного завода, 154 здоровых мужчин завода "Пресс-автомат", 100 доноров мужчин и 356 больных

егиеисрцгИ-оСТы

ХИСФ. С целы» доказательства ' .......: для ХИСФ выявленных

сдвигов в системе ПОЛ мы прибегли к сравнительному исследованию процессов СРО у рабочих со свинцовой интоксикацией. Для этого были обследованы 254 рабочих Чимкентского свинцового завода и 68 больных хронической свинцовой интоксикацией. Для решения частных вопросов темы возникла необходимость сравнительного анализа выявленных изменений с аналогичными показателями соматических боль-ных:с вирусным гепатитом "В" /98 больных/,хроническим пиелонефритом /52 больных/,хроническим алкоголизмом /36 больных/.

Для апробации новых диагностических методов и решения частных вопросов, механизма фосфорной интоксикации, наряду с клини-ническими исследованиями или предваряя, их, проводились опыты* на экспериментальных моделях фосфорной интоксикации1. Экспериментальные исследования проводились на 40 беспородных крысах-самцах с^ начальным весом 140-160 гр. Животные содержались в виварии на обычном пищевом рационе и перед опытом в течение 2-х недель выдерживались на карантине-. Желтый фосфор вводили крысам внутрикел; дочно через зонд в виде раствора на подсолнечном масле /Е.И.Ко-рольчуи, 1983, У.Шагпеб е* аЯ, 1973/.

Все животные были разделены на две серии: острый опыт и хр> нический опыт. В первой группе /острый опыт/ кивотныв получали однократно келтый фосфор в дозе 10 ыг/кг массы. В хроническом эксперименте животные получали желтый фосфор в дозе I мг/кг массы в течение 3-х месяцев /Н.А.Стрелюхина и соавт., 1982.

Приметенные методы исследования

В соответствии с целевой установкой работы для изучения процессов ГОЛ исследовали:

- гидроперекиси липидов /ГЯ/ в эритроцитах и плазме крови -по методу /К.%.$итгп£1, 1943/ в модификации /В.В.Мирончик,, 1964/;

- диеновые конаогаты /Щ/ по методу №асгх. , 1960/ в модификации Гаврилова В.В., Мишкорудной М.И. /1983/;

- малоновый диальдегид /ВДАЛ^Г.И.Андреевой и соавт. ,/1988/;.

- общие липиды определяли с помощью набора реактивов "Лакома -тест";

- содержание продуктов ГОЛ /ГП, ДК/ вдракали 5 единица» оп<-тичесиой плотности /ЕОЛ/ на мг липидов*. а ЩА> нмоль/мг липидов;

- реакцию пвреокисления липидов - по В.^.Куликову, о соакг. -/1977/;

- хемилюмянесценцио биосред /плазмы, гемолизатв> крови^ чи, желчи/ на приборе ХЛМЦ-01 /Я.И.Серкиз,-1983/.

для оценки активности ангионсидантных систем определяли:

1. Общую антиокислительную активность /дОд/ плазш крови - по методу /Слехтор Ь.Е. и др., 1984/.

2. Антирадикальную активность /АРА/ - по методу Е.Б.Бурлаковой /1972/ в нашей модификации /рац.предложение Ж370 от 20.03.I9S6/ по хемилюминесценции инициированнъй/фосфолшидов.

3. Альфа-токоферол в эритроцитах и плазме крови - по методу Н.К. Рудаковой-Шириной и соавт./19В2/.

4. Активность супероксиддисмутазы /СОД/ - по методу / £ В&&и.~ сА&тр г/я/, 1у71/ в модификации В.Н.Чумаковой, Л.Ф.Осинской /1977/.

5. Активность глютатион-пероксидазы /ГЦ/ - по методу й Ра^-ка. &£а£ /1967/.

6. Активность глютатион-редуктазы - по методу hi.PCn.io сЛ, 1969

7. Содержание сульфгидрильных групп- о использованием реактива Элмана /Ю.М.Торчинский, 1977/.

8. Перекисную и механическую резистентности эритроцитов - по модифицированному методу Ю.А.Юркова и соавт., /1964/.

9. Фосфолипидный спектр мембран эритроцитов - по методу Д.И.Величко и соавт.ДУЬО/.

Ю.Фосфолипазную активность - по методу Х.Брокерхофа и Р.Джэксона /1*78/.

Математическая обработка материала производилась на микро- . ЭВМ "Электроника ЬК 0010" с использованием языка Бейсика.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ исследований

При исследовании 722-х практически здоровых рабочих с различным стажем работы а печных цехах фосфорного завода установлено избыточное накопление'.у них продуктов ЮЛ /диеновые коньюгаты, гидроперекиси липедоз, малшовый диальдегид/ в эритроцитах и плазме крови. Повышение ©одержания продуктов ЮЛ отмечено во всех ' станевых группах с максимумом /в 1,5-2,9 раз выше контрольных величин/ у лиц со ставец 20 лет и более. Наряду с этим наблюдалось у рабочих снижение перекисной и механической стойкости мембран эритроцитов - неспецифических тестов "непрочности" мембранных комплексов. Обращает на себя внимание факт, что заметные признаки пароксидации лилидов возникают у рабочих после 10-14 лет работы в печных цехах, тогда как степень снижения активности антиок-сидантша механизмов менее выравена и наступает позже /при стаже 16-19 лет/. Это позволяет предполокить, что в патогенезе усиления процессов ПОл при интоксикации фосфором антиоксидантным иеханиз-

мам принадлежит не пераенотвувшая роль, как трактует отдельные авторы /Р.К.Татаева, 1985; Т.Ш.Шарманов и соавт.,1986;Г.А.Нулкы-баев,1Э88/. Выявленные наш серьезные сдвиги в гомеостазе у практически здоровых стажированных рабочих фосфорного завода видимо являются как бы "предвестниками" патологии илиТЬ;.,клиническими проявлениями хронической интоксикации с о един снижи фосфора.

Зажность полученных результатов не ограничивается установлением закономерных изменений динамического равновесия СРО и антиокислительных механизмов у стажированных рабочих.Полученные данные открывают перспективу проведения более углубленных исследований с применением методов квантовой биологии: во-первых, по пытаться "вычленить" роль различных фосфорных соединений / желтый фосфор.фосфин,фтористые соединения/ в механизме нарушения СРО ; во-вторых,разработать скрининг-тесты, позволявшие а условиях профосмотров выявлять у рабочих завода ранние признаки фосфорной интоксикации.

Решению названных задач предшествовали исследования процессов ПОЛ и антионсидантных механизмов у 356 больных ХИСФ, в т.ч. 125 больных с начальной, 161 - с умеренной и 77 - с выраженной степенью интоксикации.

У больных ХИС5 в плазме крови выявлено значительное накопление продуктов ПОЛ /ДК,ГЛ,ВДА/, превышающее контрольные величины в 2 - 3,9 раза. Наблюдается закономерность зарастания перекисей липидов в плазме крови больных по мере выраженности степени фосфорной интоксикации, достигая максимума /в 3,7 - 3,9 раза/ при тяжелой интоксикации.Аналогичная закономерность прослеживается и при анализе результатов исследования продуктов ПОЛ в эритроцитах тех же больных. Разница лишь в меньшей выраженности повышения уровня перекисей липидов в мембранах эритроцитов по сравнению с плазмой /в 1,3 - 2 раза против 3,7-3,9 раза соответственно/.

Поскольку мембраны эритроцитов признаны универсальной модель» мембранного комплекса /А.А.Покровский, 197?; Л La^-^ai íía 1973/, можно допустить, что активация ГОЛ и накопление перекисей липидов в органах и тканях у больных Х»£Ф характерно в целом для организма. Накопление продуктов пероксидации липидов, как известно, ведет к нарушению структурно-функциональной организации мембран, ингибирует их ферменты /и.А.Владимиров и соавт., 1у72; А.И. Куравлев, 1975/. Для косвенной оценки функциональной организации биомембран нами изучены: реакция окисляемости липидов биомембран, а также перекисный и механический гемолиз эритроцитов у больных. При этом установлено усиление реакции окисляемости липидов, зависящее от степени интоксикации: двухкратное - при начальной степени, трехкратное - при умеренной и четырехкратное - при выраженной степени интоксикации. Есть мнение, что окисляемость липидов мембран эритроцитов при фосфорной интоксикации увеличивается- l, ¿следствие изиенаний в антиоксидантной системе и составе липк-дов /Р.К.Татеева, 1985; А.С.Ыухиддинов и соавт., 19Ь6/. Иы склонны объяснить уеадамение окисляемости липидов их способностью к радикалообразоеанио, которая растет со степенью непредельности липидов /Е.Б.Вурлакова и соавт., 1976/. '

Вместе с вышеописанными косвенными признаками лабилизацин мембран, у больных ХИС5 имеется повышение активности эндогенных фосфолипаз в эритроцитах, а также изменение соотношения фракций фосфолииидов в них за счет повышения трудноокисляомых /¡Ш., ФС, Ш/ и снижения легиоокисляемых фракций /ФХ и ФЭА/. Все приведенные сдвиги в структурно-функциональной организации мембран эритроцитов были тем значительнее, чем выраженнее тяжесть фосфорной интоксикации /Р < С,001/. Корреляционный анализ показал наличие прямой, связи /ч « + 520, Р <0,01/ между повышением активности ондогаккыж фосфолипаз и содержанием лизофосфатидила ДФ/ в мемб-

Таблица I.

Содержание продуктов ПОЛ в плазме и эритроцитах крови у больных ХИС$ в зависимости от степени интоксикации

Группы обследованных! Контрольная группа^

Больные с ХИСЗ

Показатели

В плазме :

1. ДК

2. ГП

а. мда

3 эритроцитах I. ДК

2. ГП

3. вда

! п= 154

! Начальная степень ! Умеренная степень ! Выраженная степень ! п= 120 ! П= 160 ! П= 47

0,237 ± 0,001 0,250 ± 0,030 0,600 £ 0,005

0,260 ± 0,003 2,250 ± 0,018 40,300 * 0,510

0,352 ± 0,033 0,620 ± 0,036 1,880 ± 0,021

0,629 ± 0,007 3,590 ± 0,088 78,360 - 0,060

/ 0,407 - 0,019 ' 1,035 ± 0,040 2,010 ± 0,013

0,769 ± 0,040 5,460 i 0,051 92,300 ~ 0,090

0,435 ± 0,010 1,231 ± 0,064 , 2,230 - 0,031 5

I

0,825 ± 0,060 6,470 - 0,084 118, 400 - 0,090

Примечание : ДК- диеновые конъюгаты (аД^^, на мг. ли ледов); ГП-гидроперекиси липидов (¿Д^о на мг.липидов); МДА - малоновый диальдегид (нмодь на мг.липидов}-.Различия показателей достоверны.

- Ib -

ранах эритроцитов и обратной связи /ч « - 0,430, Р < 0,01/ uea-ду активностью эндогенных фосфолипаз и содержанием фосфатилэтано-лаыи^/ФЭл/. Отсюда ФЭА клеточных мембран у больных ХИСФ испытывает двойное детаргентное действие со стороны процессов СРО липидов и со стороны фосфолипаз. Это позволяет допустить, что одним из механизмов дезорганизации клеточных мембран у больных ХИСФ является воздействие на них избыточной активности эндогенных фосфолипаз, возможно индуцируемых вредными факторами фосфорного производства .

Однако главным в механизме мембранопатологического эффекта у больных ХИСФ считаем активацию у них процессов СРО липидов. Активизация 1Ш вызывает лабилизацию лизосом, в которых сосредоточена осношая часть клеточных фосфолипаз. Освобождавшиеся в большом количестве из лизосом фосфолипазы могут играть важную роль в разрушении липидного би: слоя мембран и образовании лизофосфа-тидов. Последние, как и жирные кислоты, в высокой концентрации за-счет своего детергентного действия нарушают упорядоченное расположение фосфолипидов в мембранах и активировать 1Ш. Таким образом замыкается порочный xpjir, ведущий, в конечном итоге, к гибели клеток /¡O.A.Владимиров и соавт., 1972;,Ф.З.Меерсон и соавт'., 19В2/.

Как известно, реакция свободаорадикального окисления липидов находится под контролем антиоксиданткых механизмов защиты /b.JJUwiKUH, I97t>; М.В.Биленко, I97b; В.А.Гусев и соавт., 19а0; Ivo'¿.\%Xlc.CcideJa£, Ivo»; ЪЬ2/. Известно, что наибольшим анти-оксидангным эффектом обладают альфа-токоферол, а также продукты окислительных превращений токоферолов /И.Г.Храпова, 1^76; В.В. ' Спириче« и соавт., ivTv; L.H.then eidt, 197о/. Изследование наш* альфа-токоферола в плазме крови и эритроцитах больных ХИСФ показало его заметное снижение, причем несколько большее в эрит-

Таблица 2.

Показатели антиоксидантных механизмов зашиты в плазме и эритроцитах крови у больных ХИС5 в зависимости от степени интоксикации

! Группы обследованных ! Контрольная группа !_____Больные_с X И С $

Г показатели » ! п= 154 ! Начальная степень ! п- 120 ' Умеренная степень'Зараженная степень ! 160 ! п- 47

I. сод 62,20 - 2,010 45,170 i 0,390 36,750 - 0,850 27,060 ± 0,210

2. ТЗ эр. 0,54 0,012 0,395 i 0,012 ' 0,321 ± о.ооа 0,290 i 0,016

3. Т« пл. 2,23 * 0,040 1,515 ± 0,023 1,389 ~ 0,008 1,285 i 0,027

4. ГП эр. 36,70 ± 1,900 20,100 - 0,690 18,100 * 0,590 18,030 * 0,720 ^

5. ГР эр. 55,60 * 2,600 40,300 ± 1,370 33,000 ± 0,930 27,400 ± 0,940 ?

6. т. 57,50 ± 1,600 43,100 ± 1,300 30,500 i 0,720 15,600 ± 0,550

7. АРА пя. 57,30 £ 0,300 27,060 ± 1,300' 21,650 ± 0,310 20,030 - 0,330

8. АОА пл. 37,70 i 0,200 26,220 ± 0,330 17,140 ± 0,420 10,310 - 0 180

Примечание: СОД-супероксиддисмутаза ( Ю3 на I мл.зр.масс); ТФ-токоферол (на мг.липидов);

ГП -глютатион-пероксидаза (ыкМ Г5Н/час на I мд.эр.иасс); ГР-глстатион-редук-

таза (мкМ НАД® на I мл.зр.масс) ;.ГН-сульфгидрияьная группа (мкыоль/мл);АОА -антиокислительная активность (в%);АРА - антирадикальная активность (в %); эр-эритроциты; пл.-плазма; цк.-цельная кровь¡различия показателей достоверны.

роцитах. Уровень альфа-токоферола у больных ХИСФ был неодинаков, наиболее низкие его величины установлены у лиц с выраженной степенью интоксикации и составили в плазме крови 57,6%, в эритроцитах - 53,3% от контрольных величин. Среди природных антиоксидан-тов только токоферол в организме существует в енольной форме,активно реагирующей со свободными радикалами /Е.Б.Бурлакова и соавт. 1979/. В этой связи даже незначительное изменение его концентрации будет существенно влиять на скорость окислительных процессов в лилидах /Н.Г.Храпова, 197Ь/. Но всей вероятности, процесс интоксикации соединениями фосфора, для которого характерна значительная активация ГОЛ, сопровождается интенсивным потреблением, а также нарушением транспорта, токоферола, чем и объясняется его дефицит. Об этом свидетельствует следующая закономерность. Между уровнями в эритроцитах диеновых конъюгатов и Л- токоферола существует обратная связь /ч » - 0,502, Р <0,001/.

Ключевой фермент антирадикальной защиты СОД обезвреживает супероксидные анион-радикалы путем их дисмутации и превращения в менее агрессивные молекулы перекисного водорода и триплентного кислорода /В.А.Гусев и соавт., \4km\fJ.DskLaO ^ 0.1, 1975; /-гг-¿опсЬЖа^ 1981/. - '

У больных На в наших исследованиях активность СОД в эритроцитах претерпевает значительные изменения; на ранних этапах Х№Ф активность СОД у больных соответствовала 65,3% от контрольных величин, принятых за 100%, а "при выраженной интоксикации лишь 39,1%. Как видно, у наблюдаемых больных нарушен первый барьер защищающий организм от токсического действия активных форы кислорода /А.Ф.Панченко и соавт., 1981;ГЯапаЗата. Н1982/.

Вторую линию ферментной аациты составляют каталаза и глюта-тион-лероксиддза. Ыы у больных ХИСФ исследовали глютатион-перо-кскдазу, т.к. ока катализирует реакции разложения перекисей более

широкого спектра, чем каталаза. Основная часть ее представлена в митохондриях и цитозоле. Активность глютатйон-пероксидазы у больны* Х1ЕФ была еде более низкой: при начальной интоксикация составляла 54,8%, при выраженной - 49$ к показателям контроля /Р-¿0,001/. Такова ее была направленность изменения активности НАДЙ-Н - зависимого фермента глютатион-редуктазы, участвующего в реакции восстановления глютатиона. Были снижены у больных антиокеидантныз и антирадикальные свойства крови, свидетельствующие о несостоятельности в организме антиокислительных и антиоксидантных механизмов.

Таким образом при ХЙСФ характерно 2-х и 3-х кратное накопление в плазме и мембранах клеток перекисей лгшидов с одновременным снижением антиоксидантных механизмов защиты, а также повышением активности эндогенных фосфолипаз и изменением соотношения в мембранах фосфолилидов за счет снижения легноокисляешк фракций. В сочетании с соответствующими клиническими симптомами /астено-орга-ническкм синдромом, полиневропатии, желудочные изъявления/ это составляет так называемый "синдром пероксидации". Четкая корреляция "синдрома пероксидации" со степенью фосфорной интоксикации убедительное свидетельство его важной роли в патогенезе Х<С2>. В пользу постулата о роли усиления процессов СРО липидов как главного звена в патогенезе ХгСФ свидетельствует положительный эф- • фект антиоксвдантной терапии больных ХЙСФ /Д.А.Адильбекова, 19У1/

Закономерность выявленных нарушений процессов СГО могла бы быть использована для диагностики Х1СФ, оценки тяжести патологического процесса. Однако трудоемкость биохимических тестов ограничивает их появление в повседневной практике.

В этом плане более перспективен биофизический метод- хеми-люминесценция, объективно отражавшая, процессы СРО липидов /А.И. Журавлев и соавт., 1975; 1977/. Простота и доступность метода, его адекватное отражение кинетики СГО в организме побудили нас

использовать хемилюминометрио для поиска скрыто протекающих явлений в организме работающих на доклинической этапе развития фосфорной интоксикации. Хемилюминоиетрически в плазме крови 782 практически здоровых рабочих печных цехов фосфорного завода изучены следующие параметры ХЛ: спонтанное, индуцированное перекисью водорода свечение и скорость образования перекисных радикалов. Контрольную группу составили 154 практически здоровых рабочих завода "Пресс-автомат".

Хемилюмшометрические исследования плазмы у рабочих проводили в 5 стажевых группах. При этом в 3-х начальных группах сохранялась одна закономерность - неуклонное повышение интенсивности и спонтанного, и индуцированного свечений, и скорости образования перекисных радикалов по мере увеличения длительности стана работы в основных цехах завода. При стажа работы 15-19 лет, а$ряду с увеличением интенсивности свечения, у ^/3 рабочих на ХЛ-грэмме появляются качественные изменения. Помимо пика, возникающего• обычно после инициации водородом, появляется второй пик /скорее "намек" на второй пик/. В следующей стажевой группе второй пик определяется у 56$ обследованных и становится четче, интенсивность спонтанного, индуцированного свечений значительно повышены., увеличена значительно и скорость образования перекисных радикалов.

Частая повторяемость этого признака и отсутствие у лиц црнт-рольной группы позволяет считать его специфичным для фосфорной интоксикации. Наличие дополнительного пика / йможет слу№г> критерием доклинического этапа ХЮ1, позволяющего провести во время профосмотра рабочих отбор "группы риска" для углубленного обследования их на предмет ранней диагностики профессиональной патологии.

Ё соответствии с задачами работы нами проведено *емилюмине-метрическоа исследование плазмы крови у всех 356 больных ХИ$, у

которых изучены были процессы ПОЛ известными биохимическими тестами.При этом у больных установлено 2-х 3-х кратйов повышение активности спонтанного и индуцированного с помощью перекиси водорода свечения,а также скорости образования пёрекисннх радикалов в плазме крови, что убедительно подтверждают на'да Постулаты о повышении СРО яяпидов у больных ХЙСФ. Хеыйлшгоесцентные признаки повышения ПОЛ прогрессировали параллельно тяжести фосфорной интоксикации и, таким образом, демонстрировали свои связь 6 ней.

Вместе с описанными количественными сдалгаьш хемилюминесцент-ных свойств плазмы, привлекают пристальное внимание качественные изменения хемилвминограмм плазмы у больных ХЙСФ. В частности, на ХЛ - граммах, отражавших кинетику индуцированного свечения, у 84,7^ больных обнаружен второй пик. По существу это ХЛ - признак, который был выявлен нами у большинства ствжированных рабочих и названный ранее "пик У^. Но у больных он имел четкую форму и амплитуда вспышки была, значительно выше. Амплитуда пика У^ на~ растала по мере выраженности степени X1IC2. Это закономерное для фосфорной интоксикации явление обнаружено нами впервые. В доступной литературе встретились указания на двух-фазное Изменение биохекилшинесценции при введении избытка 2-х валентного железа в качестве инициатора Л).А.Владимиров и соавт,, 1973; 1974; P.P. Фархуддинов, 1984/. Первый-гик1 автор объясняет разложением имею-пихся в системе гидроперекисей, второй - инициированием свободных радикалов,образующихся при взаимодействии 2-х валентного железа с кислородом. Мц а своих исследованиях использовал» не 2-х валентное железо, а раствор перекиси водорода. При инициации пврекисьа водорода наблюдалось появление второй фазы в плазме у крыс и морских свинок /Я.И.Серкиз, 1983/. У человека 2-х фазовая хемйлюмйнограмма описана нами впервые. С целью уточнения специфичности для фосфорной интоксикации этого явления было предпринято

Рис, J /Срмие июуцкйсиаянои хамилмлгинесценкхч шалмъ

Хро*к улиц KovrmsoMixoú jpymtbt (О, сто^си/юлаглг/хра&о **/Х (i) к OartHAtX XUCSP с va ¡¿альмой (3J, xttefiewoii (4f) К &H¿¿*c9i*itQú (S) скнлгохсилячни

изучение хемилюминесцентных свойств плазмы крови у больных вирусным гепатитом, хроническим алкоголизмом, хронической свинцовой интоксикацией. У изученных групп больных с различной патологией отмечено повышение интенсивности спонтанного и индуцированного свечения плазмы крови и увеличения скорости образования перекисных радикалов, но ни в одном случае не достигало величин больных ХИЗФ. Самым существенным отличием явилось отсутствие у всех групп больных на хемилюминограммах второго пика УВсе это дает основание считать наличие на ХЛ-граммах пика ,У ^ специфичным для фосфорной интоксикации. На этой основе был разработан "Способ диагностики фосфорной интоксикации" /авторское свидетельство № 1614о61/, в котором по величине индекса фосфорной интоксикации "Е" выявляется Х>4_й> и ее степень.

Возникает вопрос - может ли индуктором ШЛ быть желтый фосфор? В попытка изучения этого вопроса нами было предпринято исследование накопления в эритроцитах диеновых коньюгатов при воздействии желтого фосфора /0,05 мл - 0,1% водной суспензии/ в качестве индуктора. Исследования проведены у 535 человек, в т.ч. 170 здоровых лиц, 35 больных с свинцовой интоксикацией, 25 больных с ртутной интоксикацией, 32 больных хроническим алкоголизмом, 25 больных с вирусным гепатитом, 87 стажированных рабочих печного цеха фосфорного завода и 186 больных ХИСФ. У всех больных, не контактировавших с фосфорным производством, независимо от характера заболевания, содержание диеновых коньюгатов в эритроцита рн ой взвеси находилось на уровне контрольных величин, небольшое снижение оказалось недостоверщм. У стажированных рабочих фосфорного завода уровень диеновых коньюгатов в зритроцитар-ной взвеси превышал контрольные величины в 2 раза; у больных с начальной Х*КФ - в 3 раза, с умеренной - в 4 раза и выраженной -в 5 раз /разница достоверна/. Объясняя результаты опыта, можно

допустить, что у сенсибилизированных к фосфору лиц /стажирован-ныа рабочие, больные с ХИСФ/ суспензия желтого фосфора, добавленная к эритроцитам в качестве индуктора ПОЛ, вызвала избыточное накопление диеновых коньюгатов. Жаче говоря, желтый фосфор оказался инициатором ШЛ. В механизме этого процесса можно предположить, что взаимодействие сенсибилизированных клеток со специфическим антигеном /фосфором/ вызвало повышение процессов СРО липидов. Икается сообщения об усилении хеьшлюиинесценции при взаимодействии сенсибилизированных лимфоцитов со специфическим антигеном /А.Б. Цыпин и соавт., 1986/. Отвечая на поставленный ранее вопрос, можно сказать - желтый фосфор может индуцировать ЮЛ в сенсибилизированном организме, что следует учитывать в объяснении патогенеза ХИЖ

На основе проведенных исследований предложен "Способ диагностики хронической фосфорюй интоксикации" /авторское свидетельство № 16304В7/, шедренных в МСЧ "Фосфор".

Для понимания механизма активации СРО липидов при фосфорной интоксикации и возможного диагностического значения была предпринята хешлвшшометрия мочи. Хемилюминесцентные параметры мочи изучены у 354 больных ХЛСФ и 154 здоровых, лиц. '

Исследования показали низкие параметры свечения мочи у всех больных ХИЛ, но наиболее выражено это было у больных с тяжелой интоксикацией,/¿>7-00%,к.контрольным величинам/. Наряду с коли-чествен..аыи >изменениями*п^раме^ров, .измендлась и форма хемилюми-нограмм. Резкое снижение амплитуды пика Уснижение ^величин светоеуммы придавала ХЛ*гра1ше<«очи '.трапецевидную :форцу. .Для сравнения были исследованы дам сгруппы больных с пиелонефритом /с признаками почечной недостаточности и без таковых/. Результаты ХЛ-«етрии мочи при пиелонефрите дали разнонаправленные результаты. В случае без почечной недостаточности отмечена активация

спонтанного и инициированного свечения, а также скорости образования перекисных радикалов. В случаях, осложнивоихся ХПН, уровень сверхслабого свечения мочи был крайне низок /22-322 к контроле/. У обследованных нами больных ХИС® клинико-лабораторных признаков явной почечной недостаточности не было. Можно предположить, что у больных ХЖФ избыточная экскреция с мочой токсических неорганических продуктов фосфора,продуктов пероксидации липидов может привести к функциональному перенапряжению почечных структур. В этих условиях, по мнению автора /А.В.Алексеенко, 1972; К.А.Зу-фаров, 1978/ происходит локальное увеличение антиокислительной активности тканевых липидов почек, что может обусловить низкий уровень свечения мочи. В.этой связи было предпринято исследование свечения мочи после дезинтоксиквционкьгх мероприятий. После предварительной ХЛ-метрии больному внутривенно капельно вводили 400 мл.гемодеза и на следующий день ХЛ-метрия мочи повторялась. В результате заметно повысилось сверхслебое свечение мочи. У больных с начальной степенью ХИ05 ХЛ-показатели увеличивались в 1,5-1,8 раза, с умеренной степенью - в 3 раза и выраженной степенью интоксикации - в 4-5 раз, в сравнении с исходными.

Наряду с активацией сверхслабого свечения после дезинтокси-кационного мероприятия изменился характер ХЛ-грамм: 'В результате увеличения амплитуды пикаУ^ изменилась исходно трапециевидная форма кривой, она приблизилась к ХЛ-грамме плазмы крови, тем более, что появился второй пик характерный для ХИС5.Экскреция липоперекисей с мочой может быть результатом поступления их с крозью, но может быть и следствием процесса мембранолиза клеточных структур почечной ткани под влиянием избыточного"ПОЛ мембран. Результаты данных исследований важны для понимания обших механизмов развития ХИСФ, а также использованы нами в сочетании с яззестными метода!.«/ для диагностических целей.

Для понимания общих механизмов нарушения СРО липидов в организме при фосфорной интоксикации представляет интерес изучение процессов 1Ш в гомогакатах органов. Изучение Хл-параметров в гомогенатах органов крыс с экспериментальной моделью острой и хронической фосфорной интоксикации выявило следующее. При острой интоксикации происходит повышение активности свечения органов, но наиболее выраженное в почках /в У раз/, в мозге /во раз/, далее идут сердца и легкие /в 3,У раза/и печень / в 2,о раза/. При хронической интоксикации ашлитуда Хл-параметров гомогена-тов органов крыс меньше, чем при острой интоксикации, но вьше чем в контроле в 1,5-3 раза. Меняется соотношение свечения органов. Максимальные величины.Хл-параметров наблюдались в гоморе-натах легких, далее идет аелудок, печень, сердце, почки и мозг. Параллельно о повышением 1ВД при хронической интоксикации снижаются и антиоксидантные механизмы защиты. Подобная политропность поражения органов при хронической фосфорной интоксикации, по-видимому и определяет имеющуюся в клинике ХИСФ полисиндромность. Естественно, что результаты экспериментов нельзя полностью экстраполировать на клинические наблюдения. Дело еще в том, что в условиях фосфорного производства на работающего оказывает влияние комплекс вредных факторов производства. Среди химических факторов основными являются: желтый фосфор, фосфорная кислота, соли фосфорной кислоты. Нам представилось важным вычленить роль кахдог» из них в активации Шл. С этой целью в плазме крови доноров изучались исходные показатели хемилюминесценции. После этого к плазме добавлялись различные неорганические соединения фосфора в одинаковых концентрациях, оатем в каждой пробе изучались параметры хемилсшнесценции /табл.3/.

Результаты опытов показали /тао'л.З/, что в плазме крови / ¿V «/ под воздействием желтого фосфора двухкратно уси-

Таблица 3.

Хемилюминесцектные параметры плазмы крови при воздействии различных соединений фосфора в дозе 10~3 М

т !объект иссле-'спонтанное 'довчния 'свечение 'показатели яд:имп/сек г < !изм.'о6езя свето~!изм.!средкяя !изм. !в % 'сумма Ю~йимп'в ^'скорость ! в % ' '/5 мин. ! 'обр.пер.рад. ' ' . ! !имп/сек !

1. Плазма крови 3,22-0,07 100 28,7-0,8 100 95,7-2,8 100

2. Плазма+желтый

фосфор 6,81-0,05 211 69,7-2,1 243 232,3*2,4 242

Е 0,001 Р 0, 01 Р 0,001

3. Плаэмв+й3Р04 2, ¡¿0,03 65 24,3-0,7 84,7 82,4 ±2,7 86

Р 0, С5 Р 0,001 Р 0,001

4. Плазуа+- аНР04 2,80^0,04 87 25,9-1,2 90 86,4 ¿2,4 90,2

Р о,ссп Р 0, 05 Р 0.С01

5. Плазма + 2,92-^3,05 90,6 26,1*0,9 91 88,8 ¿1,8 92,8

* а^ТО., Р С.С01 Р 0, С5 Р 0, 05

6. Плазма* еэНР043,43±0,07 106 30,4-1,4 106 103,5-2,1 108

Р 0, 05 Р 0, С5 Р 0, 05

Примечание: Р - достоверность различия с плазмой крови.

яивается свечение, что свидетельствует об образовании перекисных радикалов. Другие неорганические соединения фосфора не оказывают на процесс ПОЛ индуцирующего влияния, а как бы даже оказывают ин-гкСирусвее действие. Следовательно усиление процессов ПОЛ при фосфорной интоксикации возникает в--следствии инициации его желтим фосфором. С ш?»©см> различных акцепторов - "ловушек радикалов" /СОД, »аиикт, азяд натрия, каталаэа / удалось установить природу образу-веихся при этом радикалов /табл.4./. Под воздействием желтого фосфора образуются следующие свободные радикалы: гидроксильные /10%/, перекиснь» /28%/, супероксид анионрадикал /Г2$/, синглектный кислород /Ь%/. Комбинированное применение всех четырех акцепторов позволило снизить обшув светосумму свечения на 58%, а остявшие-

Таблица 4.

Влияние различных акцепторов >на -иницированные желтым фосфором /10"3И/ хемишоминесцентные свойства плазмы.

!коли-!общая светосуи-!изм.!средняя скорость'изм.в !чест-!ма инициирован-!в % ¡образования пере! % Iво ис'ного свечения ! !кисных радикалов! 'след.! 10 имп./свк. ! ! !

I. Контроль

плк + ф 5 83,4 ± 2,5 100 278 ± 8 100

2. плк + « + сод 5 65,1 ± 2,1 78 196 ± 5 70,5

Р < 0,001 Р * 0,001

3. плк +« + АН 5 76,7 ± 3,4 92 256 ± 7 92

Р > 0, 05 Р > 0, 05

Рх> 0, '05 ' Рх< 0,001

4. ГШ « ы 5 75,1 * 2,6 90 252 * 6 90,6

Р > 0, 05 Р > 0, 05

Р1>б, 05 Рх< 0,001

Р2>0, 05 Р2»0, 05

б. плк » + к 5 60,0 * 2,1 72 206 ± 4 ■ 74

Р « 0,001 Р < 0,001

Р1»0, 05 Р1>0, 05

Р2>0, 05 Р2< 0,001

Р3»0, 05 Р3^ 0,001

6. плк +« + сод + 1

♦ к +11 5 35,0 ± 2,1 42 ! 106 ± 4 за

Р < 0,001 Р ^ 0,001

Р{< 0,001 РГ< 0,001

Рг < 0,001 Р2^ 0,001

Р3< 0,001 Р3< 0,001

Р4< 0,001 . Р4-< 0,001

о

Обозначение : ЩШ-ллазма крови;$-желтый фосфор;С0Д-супероксид-дисмутаза;М-маннит;АН-азид натрия; К-каталаза. Примечание : Р - по сравнению с контролем.

-гуся 4 ¿У» свободных радикалов, видимо являются свободными радикалами фосфора.

С целью изучения природы пика ^ нами проведена серия опытов с донорской кровью. Б плазме крови при воздействии на нее 3% - 0,0 мл раствора перекиси водорода измеряли и эаписыэали Хй-параметры, при этом пик У ^ " отсутствовал.

Затем из опытной плазмы разливали по I мл в а кювет и после добавления к каждой порции - /3$ - 0,6 мл/ исследовали в них содержание гидроперекисей липидов /в 1-й порции через I мин, во-второй - через 2 мин и т.д. до Ь мин/. Эти данные взяты как исходные /рис.2/.

600

«О

200

а? о

ЧМЛ .

ГЙ Чк

№ 0.35

Рис.2 Хелгмхигхл'ог/хгмлкг яяазмыхроаи долераЛ (/},

4 ктллт я лгияе—ике генерации саерююбога /,г, 3, У и 4 -то-луда-

fine, 3 Хемилшгтагбшина п*азмнх/>оеи донора (/У ссдер^еахае ги&оперехг&ей лг/Нидоа f с-4 гиюзле а хил/елгггке ¿ехерссагги свечения f н $ жхгяг а}.

г

Во-второй части опыта к о-У мл плазмы донора добавляли водную суспензию желтого фосфора в дозе Х0"3М, инициировали перекись водорода и изиэряли XJi-параметры. Кривая характеризуется повышени ем амплитуды пика увеличением светосуммы и появлением пика

У й /рис.з/.

Оставшуюся плизму инкубированную с желтым фосфором, разливаем в а кювет по I ил и в каждой из них исследуем гидроперекиси л* пидое через те «е временные промежутки /I,ii,3,4 и о мин/.

Как видно из рисунка 2в плазме крови без инкубации желтого

фосфора на Xh-грамме отсутствовал пик Cf ^ соответственно не было и избыточного накопления в плазме ГЛ. Лри воздействии ка плазму келтым фосфором Хл-грамма характеризует повышение Шл л отличается наличие» второго пика У На рисунке 3 видно, что имеет место избыточное накопление Гл в плазме, максимальная величина их приходится в периоды кинетики генерации свечения от 3-х ДО 4-х минут и совпадает с пиком & Эти факты позволяют прздпило-жить, что при избыточном накоплении ГЛ во взаимодействии с кислородом образуют новж свободные радикалы, что приводит к повторению процесса накопления радикалов FO^ и гидроперекисей P0GH /ti.il. Эмануэль и соавт., 1уь5; Н.М.Эмануэль, 1979/. ¿1о нашему мнению именно это лежит э природе пика ^

На основании данных литературы /С.Ш.Ыалхарэв и соавт., Д.А.Кулкыбаев, Wo?; et ос" , I^tn\Mlf.0icy/tzon/r.

1У72; Га7и/ и результатов собственных комплексных исследований нами сделана попытка изложить свое видение патогенеза Фосфорной интоксикации /схема прилагается/.

Как известно /Н.Н.Семенов, 1уоо; при окислении элемен-

тарного фосфора образуются свободные радикалы фосфора и его окислов, находящиеся в активном состоянии, а также активные фор\;ы кислорода - инициаторы 1Ш. На фосфорном производстве уровень содержания желтого фосфора и его соединений в несколько раз превышает ¡¡¿jji /В.Л.Козловский, iaoü-ivo4/. Отсюда рабочие, занятые на производстве желтого фосфора, подвержены значительному воздействию свободных радикалов желтого фосфора и его окислов, а также активных форл кислорода. Фосфор, попадая в организм, в реакции с органическими соединениями, образует свободные рад/.каги /гидрокснль-ные, перекисные, супероксид-анион радикал, синглентнкй кислород/, что было установлено С использованием различных а:-:це:. гороз -"ловушек радикалов". Как видно, в механизме перзичного действия

СХлМ МьХАНУ^МЛ РАЗВ»! № Ш(ШЙАЦйИ Си&лН&ШМй 40С50РА

Усиление окислитель нкх процес

Ф О С 4> и Р

иОразование активных форм свооодных радикалов

Антиоксидантная система защиты

Усиление цепного сво-боднорадикального окисление липидов крови и ткани

X

иол-супероксид-дисмутаза

Образование липвдных босфоротоксинов_

X

Леиоксидаза

Внутриклеточные липиды Разветвление цепной реакции

<г

К

К

Глютатион-перок-сидаза

Образование вторичных фэсфоротэксинов

X

Витамин ь

5 Н-групп

Витамин К

Разрушение структуры клеток и субклеточных образований /лизосом, митохондрий .макросом и т.д./ и наруаечие активности энзимной системы мембран, энергетической функции клеток

ЦИТИфОЫ Р42о"

| Лизис /гибель клеток/ [

структурные антиоксиданты

Стабилизаторы клеточных мембран и др.

\

Обозначение?

-усиливающий эффект

___». угнетающий эффект

фосфора ведущее место принадлежит образований свободных радикалов или как условно они названы нами "фосфоротоксинов"."5осфо -ротоксины" /первичные радикалы/, вызывавТтоксемию-, как было показано нами ¿п ¡/¿1ъО при инициации желтым фосфорам эритроцитов сталированных рабочих и больных ХИС<Е, фосфорос'екскбили-зируюший эффект, играющие болыгу» роль в развитии фосфорной интоксикации. Эти метаста'бильные частицы с носпаренкыми врзбужден-ными электродами /Д.Корбридж, 1982/' обладают высокой химической активностью /Т.А-.Крокова, 1976;Д.Корбридж, 1962/. Оки, атакуя ненасыщенные жирные ■кислоты, фосфолипиды и липиди клеточных митохондрия льных мембран-, ведут к образованно нозых радикалов /О, О", 00' /. Свободные радикалы /первичные и вторичные/ инициируют в клеточных йембравах оргак'йзма процессы цепного свободноради-кального характера-. При ьзаийод'еЯйвий активных радикалов с фосфо-липидами образуются фойфоякпйдй с гидроксильными группами /гид-ропероксиды/. Появление дополнйтелькой группы в фосфолкггадах изменяет физико-химические 'св'ойбТйа-. В дальнейшем из них образуются диеновые соединения кетоны, эпоксиды, спирты/. В наших наблюдениях убтайЬалеН'о -2-х 3-х кратное накопление перекисей липидов /гидропе'рёкЯС'й\диен'озые койъюгаты,малоновый диальде-гид / в плазме крови й Кембранах клеток больных ХИС5. Диеновые соединения, вступая в рёайцйв, образуют альдегиды, в частности малоновый диальдегид. Накопление этих вепеств в клеточных мембранах призодит к появлению Модифицированных, так назьгааймых, пе-роксидных кластеров. На этих участках нарушаются функциональные свойства клеточных мембран и они переходят гидрофобного состояния в гидрофильное /А.В.Викторов и соавт.,1579; $.З.Меерсон, 1984/. Это приводит к изменению ионной проницаемости клеточных мембран и появлению избытка ионов в клетках //.аг, Са*~ /, что вызывает их повревдение /Ф.З.Иеерсон, 1584/. В исследованиях

у бальных Х/С4 установлено нарушение структурно-функциональной организации мембран клеток параллельно-тяжести процесса интоксикации. Ь дальнейшем продукты ;Х)л взаимодействуют со свободными аминогруппами кеу.бранных оелков с образованием ме«молекулярных схиеок и инактивирую? функции белков и ферментов. При этом образуется пигмент изнашивания - липофусцин /белок + шиффово основание/. Тлеются данные о накоплении липофусцина в гепатоцитах при хронической фосфорной интоксикации /Н.дХтрелюхина и соавт., М.АХтрелюхкна, С.Ьарабалин, 1уо4; ь.Н.Айтбембетов и

соавт., 1ъ-о4/.

,лбатэчное накопление продуктов »ЮЛ на первых порах стимулирует антиоксидантную систему организма. Однако продолжающаяся активация процессов СРО в мембранах клеток организма вызывает истощение антиокислительных механизмов защиты. На рисунке 4 представлены результаты динамического наблюдения за группой рабочих фосфорного завода в течение 4-х дет работы их в печном цехе. Ь течение 1-го года в ответ на избыточное накопление перекисей ли-пидзв, видимо, компенсаторно повышается и активность СОД в эритроцитах. Ь результате содержание-перекисей в клетках снижается, но не достигает нормальных величин, ^едо в том, что в результате избыточного расхода наблюдается неуконяое падение активности СОд, которая в течение 3-го года находится на предельно низком уровне. Лерохсидация либидо в в этот период вновь нарастает. Б дальнейшем у рабочих, продолжающих контакт с фосфором и его соединениями , постепенно увеличивается накопление продуктов шЛ, снижаются резервы антиоксидантных механизмов, на Хл-грамыах большей части сталированных рабочих появляется пик $ ■ - предвестник фосфорной интоксикации. Цепной характер процессов СРО липидов на сенсибилизированном фосфором фоне оказывает цитодетергентное действие и ведет к развитию фосфорной интоксикации, а также участ-

вует в механизме ее препрессирования.

Конечной цельо данной работы является изыскание новых, более специфичных, простых по выполнению методов профилактики и диагностики ХЯСФ. применение в работе комплекса биофизических и биохимических методов, помимо раскрытии некоторых общих механизмов развития позволило использовать ряд биофизических свойств

биосред организма длл разработки и внедрения методов профотбора,' ранней диагностики и экспертизы трудоспособности больных.

Б этом плане большие преимущества имеет метод хемилюминес-ценции, обладающей высокой точностью, воспроизводимостью результатов и ьида кривой и позволявшей количественно оценить кинетику СРО - как окислительные, так и энтиокислительные процессы /а.к. Владимиров и соазт., л.Й.Вуравлев и соавт., 1у7а; 1У77/. С

помоцьв хемилвмотометрии нами разработаны 3 метода.

ЛркчинэЯ развитие ХПСФ, г.ри прочих равных условиях, может быть повышенная индивидуальная чувствительность к желтому фосфору. У;евду тем метода определения индивидуальной чувствительности к желтому фосфору нет.

На основе выявленных при изучении кинетики СРО закономерных хемилюм^несцентньгх признаков у сталированных рабочих и больных /¿¡СО нами разработан скрининг-тест, позволяющий определять индивидуальную чувствительность к желтому фосфору. Метод выполним в условиях профосмотра, прост, потребность крови - 1,0-1,2 мл. Результаты выражаются в виде коэффициента чувствительности - "г^" отражающего разность отношения опытной пробы к контрольной по

По величине коэффициента все обследования условно разделены на три группы:

формуле:

1. "Резистентная" - ^ = 2,13-0,23 отн.ед., крайние варианты отк-

лонений 0,83 - 3,50 отн.ед.

2. "Чувствительная" - ^ = 5,68-0,37 отн.ед., крайние варианты от-

клонений в пределах 3,51 - 7,50 отн.ед.

3. "Сверхчувствительная" - К, = 13,72-1,09 отн.ед., крайние вариан-

ты в пределах 7,51 - 16,7 отн.ед.

Результаты исследований были подтверждены в эксперименте на крысах.

С помощью данного метода э период 1983-1988 г. обследовано 1570 рабочих фосфорного завода-. Среди них к группе "резистентная" отнесены 75%, к группе ''^увст'вйтельная" - 1755. "сверхчувствительная" - 8% обследованных-.

При обследований на предмет индивидуальной чувствительности 174 больных ХИСФ обнаружено отсутствие среди них резистентных к г желтому фосфору. К группе "чувствительная" было отнесено 43,3%, "сверхчувствительная" - 51,7% больных. Эти данные свидетельствует о роли индивидуальной чувствительности лиц к желтому фосфору в частоте заболеваемости ХИСФ.

Результаты исследования позволяют заключить, что существует индивидуальная чувствительность к желтому фосфору. Среди обследованных рабочих фосфорного завода 25$ оказались "чувствительными" в т.ч. - *сйе£^йетш,ек'ьнши™,кроме того обращает на себя внимание отсутегейе Ь'редй больных ХИСФ "резистентных"« фосфору >!иц. Это дйкт.уе* Необходимость профотбора рабочих фосфорного производства производить на основа определения индивидуальной чувствительности к желтому фосфору. Данное мероприятие при его обязательном внедрении явится основой первичной профилактики ХИСЗ. Ес-"Ш 'Лица Из группы "резистентная" могут быть рекомендоза.-ш на лю -'бом участке фосфорного производства, а из группы "чувствительная" - в вспомогательных цехах, то лицам из сверхчувстзигельной группы работа в контакте с фосфором противопаказана.

На основе результатов исследования предложен "Способ определения профессиональной пригодности лиг. дял работы в условиях действия желтого фосфора", который по ааяваэ 5 442479 с приоритетом от 10.05.1988 г. Госкомитетом по изобретениям и открытия« при ГКНТ СССР признан -изобретением /авторское свидетельство л-1628701/. Способ внедрен .с 1988 г. как скринтаг-гест при профэс-ыотрах рабочих Чимкентского производственного объединения "Фосфор"

Возвращаясь к результатам хемилшином-лтрии .плазмы у сталированных рабочих и больных ХИСФ, заметим: что на ХЛ-граммах Сила обнаружена еше одна закономерность - появление дополнительной вспышки - пик амплитуда которого увеличивается в 2-3,5 рам по мере тяжести фосфорной интоксикации. Пш*^ откачен на ХЛ -граммах 45% рабочих со стажем во вредных цзхах 14-19 лет, у 01% - при стыке 20 лет и более и у 84,7? больных ХИСФ. Динамическое наблюдение в течете б лег 167 рабочих печного цеха со стажем 10-14 яет показало, что через 3 года наличие пига^ зарегистрировано у 41%, через 6 лет у 63% наблюдаемых. Приведенные факты после серии контрольных исследований«! хроническим вирусным гепатитом В, хронической свинцовой интоксикацией, хроническим алкоголизмом, где этот признак отсутствовал убедили нас в специфичности пика ^ для фосфорной интоксикации, Это дало нам ос -нование предложить "Способ диагностики фоофорной интоксикации", Хемилюминесцентным методом с инициацией перекисью водорода изучается сверхслабое свечение. Из параметров ХЛ-грамм берутся величины амплитуды пиков и 11 по предложенной формуле производится вычисление индекса фосфорной интоксикации "Е" :

и

Е = 2_ , отн.ед., где

I

"Е" - индекс фосфорной интоксикации, - интенсивность пика

- ЗУ -

/имл/сек/, - интенсивность пика.^^ /вдзЛек/.

При знаяевш "Ь," равно» 0,30 и болте дадтчетируется у гбеле-дуеяого фосфдаая интоксикация. Новизна » амвзноми г.фюдз Гос-коийзобра?ея;ий СССР подтверждена аеторскк» СЁИДЗЛ&ЗЛМ&ОУ > Ы4оо1 как изойрапенца. Способ- еаедрем & МС4 "йсй^эр" /Чшкент/ и "Хивдром" /йядабул/- Ци гпйй-б'Ляе.т диагносетрйбйТа ХДЙ на только на этапе. яуттичес-хих -проябл'бнйй, но л у ста^йрйьанных рабочих на дотйтомгггомкси зтада/^рёдбйлёаиь"/, корда с&от&ед&рвуш^в лечебно-профилакг^даскй,^ -йероприя^ия Г.з?В?Ь!-ЙТ прадэтзрлгль про-ч Гресеировашга-

Вели- исследование сверхслабо'г.О- Свечен'и'я; ••рдаа»^ » иояйц гоыогенатов оргеков в- К& фед*

Ш5 ^Ачйуйурамев» 19сО~Х«32; Ца-Мадамиров-'й'соДвт>.ц. 'I

ФарХуЛйШв й сой»., 1985-№оЛто-работы :по- изучению «еййШмёсг?»

о

центных 'Свйййтв «елчи- нам. не- встреналй&Ь, нет сведений и о мето.--дических Подходах по проведению ХЛ-гелчи..- Н'айи была предпринята попытка к разработке и обоснованию! оптимальной методики -кэд'^зКчЙ сверхслабого стечения желчи-, а также изучухь эрзйоето'с^й испбдвд'Ог» вания хемил¡сминесцзктнкх свойств жёлчи для; диагностики. геаато-бштрной системы у больных хХйСФ.

На основании многочисленных опытов по из'-удёнйю- влияния на хй» милвминесцентные свойства велчи ее рН и количества до'ба-ёляймрк} инициатора наш было установлено, что оптимальной для регистрации свечения является рН келчи в пределах ?,5-Ь,2 при добавлении О,о мл ЗЛ перекиси водорода. Было доказано, что на ХЛ-СзоЯ'СТЕа желчи влияют длительность и условия хранения желчи. Оптимальным определено время исследования желчи в течение первого часа после забора; температура кюветной камеры должна поддерживаться на уровне 37°С. С соблюдением этих условий при измерении свечения получены вперше хемилвминограммы желчи здоровых людей и кнтактных ярые с

соответствующими параметрами.

изучение Свечения желчи у больных- ХИСФ предшествовали экспериментальные исследования на модели фосфорной интоксикации у крыс в условиях острого и хронического опыта.

Результаты экспериментальных исследований свидетельствуют & накопления яри фосфорной интоксикации продуктов ¡ЮЛ в гепатоци-тах и активное их выделение с желчью. ХЛ-граммы характеризовались наличием второго пика - ^ Это побудило нас к изучению ХЛ-сбойств келчи у здоровых людей, больных ХИСФ и другими патологическими состояниями для оаеякв диагностических возможностей метода. М-свойства желчи были изучены у 277 больных ХЮ, 45 здоровых мужчин /контроль/, в качестве дополнительного контроля проведена хемшшмкнометрия желчи у 62-х больных вирусным гепатитом, 32-х больных алкогольным гепатитом, '¿0 больных хронической свинцовой интоксикацией, ¿^следование свечения проводилось у всех в 3-х порциях желчи /А, В и С/.

При этом установлено повышение интенсивности инициированного свечения и скорости образования перекисных радикалов, нарастающие по мере выраженности фосфорной интоксикации, па Хл-грам-мах обнаружено наличие второго пика аналогичного такОвому

на ХД^-граммах плазмы крови. У больных с свинцовой интоксикацией отмечено незначительное повышение свечения в порции "Б", при алкогольном гепатите параметры ХЛ-желчи были выше контрольных в 1,3 - 1,У раза» при вирусном гепатите - 2,3-2,о раза, йшче говоря, степень повышения ХЛ-параметров был заметно ниже, чем у больных ХЙ2Ф» Главным отличием было отсутствие у них на ХЛ-граммах желчи йика На этом основании можно допустить, что выявленные из-

менения закономерны для ХйСФ, Возможно выделение избыточных продуктов Шй с желчью, будучи компенсаторны« механизмом, в го же время ведет к усилению процессов 'ШЛ в гепатоцитах и лабилизация

их мембран. Этим вероятно и обусловлена частота поражения печени при Х1ЕФ. Полученные при исследовании результаты с одной стороны проливают свет на механизм нарушения ЮЛ в мембранах гепатоци-тов при фосфорной интоксикации и роли в этом желтого фосфора. С другой стороны - на основе полученных данных разработан "Способ определения поражения гепато-билиарной системы у больных УЛСО" признаний Госкомизобретений СССР как изобретение /автор.свид. 15Ьсз132/. Способ внедрен в МСЧ "Фосфор" для дифференциальной диагностики поражений гепато-билиарной систем при ХИСФ.

В последний Годы все ойра внедряются в практику методы качественного определения хи*лй*гескйх веществ по Их кристаллографическим признакам: т.н. метод "кристаллических налетов" и микрокристаллических реакций Д»А.Мороз, д.В.Каликштейн, 1уоО $ ДЛЗ.Каликшт'ейн и соавт,, 1990/* Преимущество метода ■ "кристаллически* налетрв" заключается в том-, что он позволяет идентифицировать вещества без применений реактивов.

В диагностике фосфорной, интоксикации прежде метод крийтал-' лографии не применялся. Мь! сочли целесообразным внедрить его в практику профпатологическрй клиники для- диагностики ХИЖ Метод предельно прост, разработан на основе ¡С - аминОуксусноЙ кислоты /глицина/, что обеспечивает сохранность белковых структур сыворотки крови.

Нами были исследованы кристаллограммы 15 доноров /контроль/, 214 рабочих печного цеха фосфйрного завода и 119 больных ХИЖ Анализ показал, что у 190 /6И,7$>/ рабочих кристаллограммы были схожи. Они характеризовались отсутствием центров кристаллизации, в поле зрения тожество узких цилиндрических кристаллов длиной от 10 до 30 мы, местами с хаотичным или перекрестным расположением, по периферии были расположены монокристаллы, имеющие разкуо величину, но в целом повторяющую форму кристаллов доноров.

У /ПД*/ рабтояс кристалл от ракмы заметно отличались от предадуайк. Главкам отличием было наличке Т-2-зс наметаезихся центров кристаллизации, от которых отходят короткие накные кристаллы И напоминает это "узелок спутаеяихея нитон". В остальном картина прежняя, Углубленное изучение свидетельствует об отсутствии у них клгададаскйх признаков фосфорной интоксикации или другой патологии. Хеиадсмшесцентные параметра гм&ада крови были в 2-2,3 раза выше контрольных, форма ХЛ-^сршаой не изменена. При определении вдди-зддуалоной чувствительности они стоеятом либо к "чувствительной" - 1о чел,, либо к "сверхчувствительной'"' - Ь чел. группам, при стаже работы от о до 1а лет. Еоэникнавение единичных центров кристаллизации типа "узелка спутавшихся ниток" при отсутствии Клинических проявлений, по нашему мнению, является предвестником фосфорной интоксикации /доклиническая стадия/.

У больных ХУО> кристаллограммы были своеобразны. При начальной интоксикации видны 2-4 центра кристаллизации, от которых отходят нежные кристаллы и в целом это имеет форму "клубочков" размерами 16x10, 15х2р мм. Кроме того в поле зрения видны цилиндрические кристаллы длиной от 30 до 30 мм разрозненные, местами с распадом и поломками.

У больных с умеренной степенью интоксикации количество центров кристаллизации от 6 до 7 пт., форма в виде "клубочков", размеры 15x10, 25x20 мм. Между центрами и по периферии разбросаны разные по ширине и длине цилиндрические кристаллы, много обломков, есть распавшиеся.

Крксгаялограшгы больных с выраженной интоксикацией имеют неповторимый рисунок. Занимая все поля зрения разбросаны центры кристаллизации от 7 до 10 шт. За счет удлинения цилиндрических нристаллов, о-ксодяддих от центра, "клубэтк укрупняются и доходят до £0x35. Между ни.зд единичные цилиндрические кристаллы

длиной до 25-30 мм, местами превышавшиеся, есть отломки.

Таким образом у рабочих, чувствительных к фосфору и у больных ХЮ имеется визуально различимая кристаллографическая картина сыворотки крови. Для сравнения изучены кристаллсгргмуы сыворотки больных с свинцовой интоксикацией и вирусным гепатитом 3. Кристаллографические рисунки их нисколько не повторяли описанные выше, а каждая патология имеет свою кристаллограшу.

Повторяемость описанных впервые нами кристаллограмм у репрезентативной группы больных ХИС5, полная несхожесть их с кристал-лограммами больных с другими заболеваниями и вместе с тем их полная идентичность с кристаллограммами, полученными при воздействии желтого фосфора /I мг %/ на донорскую сыворотку дают основание считать полученные кристаллоградаы специфичными для фосфорной интоксикации. Они предложены как скрининг-тест при прфосмотрах, а, также в сочетании с индексом фосфорной интоксикации "Е" для диагностики ХИСФ, уточнения степени выраженности интоксикации и оценки эффективности лечения. Предложенный "Способ диагностики токсического воздействия желтого фосфора", который по заявке № 4664932/14/039261 Госкомизобретений СССР признан как изобретение и принято решение о выдаче авторского свидетельства /23.05.1991/.

Простота, доступность метода, и его информативность позволили внедрить а практику ЦСЧ "Фосфор" и "Химпром", начиная с медпунктов.

Таким образом, результаты комплексных исследований позволили получить ряд новых фактов, объясняющих механизм развития фосфорной интоксикации и ее прогрессироэания. Вместе с тем применение методов квантовой биологии и кристаллографии способствовало успешной разработке ряда новых методов первичной профилактики и диагностики фосфорной интоксикации, новизна и полезность которых подтверждена авторскими свидетельствами на изобретение.

Практические рекомендации по поэтапному использование разработанных методов диагностики фосфорной интоксикации

К» 1

пЛг Название способа, метода

'Подтвержден.I ¡новизны !Метод !(№ авт.св.) ( ._

Мед.учрежден.

?Задачи 1цель)исрлед. ! под> !

кл.

I. Способ определения профессиональной пригодности лиц для работы в условиях действия желтого фосфора

Способ диагностики фосфорной интоксикации

3. Способ поражения гепатобилиарной системы при ХИСФ

Авт.свидет. № 1626701

Авт.свидет. X 161466

Авт.свидет. * 1586132

ХЛ Определение яндириду-

альной чувствительное- + ти лиц к желтому фосфору с целью первичной профилактики ХИСФ

ХЛ Диагностика доклинического этапа,а также степени выраженности ХИСФ в целях экспертизы трудоспособности; оценка эффективности лечения

ХЛ В сочетании с традиционными методами диагности-_ ки заболеваний гепатобилиарной системы в плане дифференциальной диагностики

л» а»

2

I! 2 ! 3 14 ! 5 16} 7(8

4. Способ диагностики токсической миокардиодистрофии фосфорного генеза Авт.свидет. № 10131427 ХЛ В сочетании с традиционными методами для дифференциальной диагностики токсической миокардиодистрофии. + +

5. Способ диагностики хронической фосфорной интоксикации Авт.свидет. » 1630487 Биол. Диагностика ХИСФ,определение тяжести процесса в целях экспертизы трудоспособности (при отсутствии хемилюминометра) + 1'

б. Способ определения тояеичвежяяг воздействия желтого фосфора Польж.реа,-т эаятв $ АШ$Ж/и /093926£ Кристаллограф. . Выявление "группы риска",ди- + агностика ХИСФ,оценка тяжести процесса и эффективности лечения ся + +1

7. Методика исследования ХЛ-свойств желчи - ХЛ Может быть использована в целях дифференциальной диагностики + +

х) М.п. - медпункт, -п - поликлиника, к- клиника

ВЫВОДЫ

1. У практически здоровых рабочих основных цехов фосфорного завода при стаже 10-14 лет возниквут повшение процессов ПОЛ, характеризующееся избыточным накоплением в плазме крови и эритроцитах продуктов пероксидации липидов ( диеновые коньюгаты, гидроперекиси, малоновый диальдегид). По мере увеличения стажа работы /15 лет и более/ наблюдается дальнейшее нарастание этих явлений.

2. В ответ на активацию ПОЛ у рабочих в течение 1Г0-2Г0 годов контакта с фосфором возникает компенсаторное повышение показателей антиоксидантньгх механизмов /альфа-токоферол, СОД, глутатион-редук-таза, глютатион-пероксидаза, £Н-грулпы, антиокислительная и антирадикальная активность плазмы/, которые в дальнейшем закономерно снижаются.

3. Хемилюминометрия адекватно отражает состояние СРО в организме, о чем свидетельствует совпадение его результатов с показателями биохимических тестов. У рабочих печных цехов завода установлено повышение интенсивности спонтанного и индуцированного свечений, а 'также повышение скорости образования перекисных радикалов, прогрессирующие по мере увеличер^я стажа работы. У 567 стажированных рабочих, наряду с количественными изменениями параметров генерации света, на хемилюминограммах регистрируются аномальные кривые с дополнительным пиком чУ^, которые при профосмотрах могут служить критерием доклинической стадии ХИСФ.

4. У больных с хронической интоксикацией фосфором и его соединениями имеется повышение ПОЛ с избыточным накоплением в плазме крови и эритроцитах токсических продуктов перексидации липидов прямо пропорционально степени выраженности интоксикации. Накопление продуктов ПОЛ в сочетании с повышением активности эндогенных фосфоли-паэ оказывают мембранопатологическое влияние, о чем свидетельству-

ет - повышение у больных процента перекйсно'го Я механического гемолиза эритроцитов, нарушение структурно-функциональной организации клеточных мембран за счет увеличения в ни/, суммы трудноокисля-емых / лизофосфатидилхолин, сфигмомиелин, фосфатидилсерин/, и снижения суммы легкоокисляемых /фосфатилхолин, фосфатидилэтаноламин/ фракций фосфолипгдов.

5. Наряду с повышением ПОЛ, у больных ХИСФ имеется депрессия антиоксидантных механизмон защиты, что характеризуется снижением содержания в плазме крови и эритроцитах альфа-токоферола, СОД,

-глютатин-редуктазы, глютатион-пероксидаэы, сульфгидрильных групп, снижением антирадикальной и антиокислительной активности плазмы крови. Выраженность депрессии зависит от степени фосфорной интоксикации.

6. У больных ХИСФ начальной степени хемилюминометрически установлено повышение активности спонтанного свечения пяазш в 1,8 раз, индуцированного 'СвёНгей'иА й ■екорост'й о'брааования перекисльгх радикалов - в 3 ^й'аДя^ЗЮШ-айдадаШ <йрй'з«а'ки повмаения ПОЛ прогрес-

ч

«яруят с в^орастШ С'ольИьй, йо 'более значительно - параллельно тяжести ин^ойейй&Цйй, йреййгая контрольные величины в 3 и 5 рчз. У 64,7% болшйс ХйС2 йЗ шлйММййо^аммах, отражающих кинетику йндуцировайНЬЙ (зеаВДй Й0Й> 'о'бнар^кен пик .7^. амплитуда которого №рас»ает по йерё №гракенйаетй степени интоксикации.

7» ХекяжгйНометрия мочи у больных ХИСФ показала снижение параметров свечения ее, наиболее выраженное при тяжёлой интоксикации, Что прядает ХЛ-грамме трапецивидчуи форму. После предварительной ¡ййа»;уне йнфузии гемодеза ХЛ-парамэтры мочи увеличивается я 1,55 раз й зависимости от степени фосфорной интоксикации, ХЛ-грамма по форме повторяет таковуп плазмы с типичным для ХКС5 пиком Низкий исходный уровень свечения мочи может бить результатом до-

кального увеличения антиокислительной активности тканевых липидов почек в ответ на избыточную экскрецию с мочой токсических продуктов фосфора и пероксидации липидов. Хемилюминометрия с пробой гемодеэом рекомендуется как диагностический тест.

8. Хемилюминометрия гомогенатов органов крыс с острой и хронической моделью фосфорной интоксикаций свидетельствует о повышении ПОЛ во всех изученных органах. При остром отравлении активность свечения была повышена максимально в почках / в 9 раз/, далее- в моз' ге /в 5 раз/,сердце и легких /в 3,9 раза/, печени /в 2,6 раза/. При хронической фосфорной интоксикации максимальное повышение ХЛ-пара-метров отмечено в гомогенатах легких /в 2,6 раза/, далее- желудка

и печени / в 2 раза/, сердца и почек / в 1,6 раза/, мозга /в 1,5ра-за/. Подобная полтропность поражения органов при фосфорной интоксикации, вероятно и определяет имеющуюся в клинике ХИСФ полисиндром-ность.

9. В патогенезе хронической интоксикации фосфором и его соединениями ведущая роль принадлежит активации ПОЛ с последующей депрессией антиоксидантных механизмов защиты. Активация ПОЛ при этом возникает вследствие инициации желтым фосфором, другие неорганические соединения фосфора /Н^РО^, Л/а^РО^.¿г^НРО^, М^РО,,/ индуцирующего на ПОЛ влияние не оказывают. С помощью "ловушек радикалов" установлено, что при воздействии желтого фосфора образуются следующие свободные радикалы фосфора и липоперекиси: гидроксильные /10^/, перекисные /28Я/, суперксиданион-радикал /12^/, синглентный кислород /£?*/.

10. Свободные радикалы фосфора и липоперекиси, возникающие при воздействии желтого фосфора, при их избыточном накоплении, взаимодействуя с кислородом, ведут к образованию новых свободных радикалов и повторению процесса накопления радикалов и гидропереки-

- 49 - "

сей КООН. На ХЛ-грамме это проявляется новой вспышкой, что и лежит в основе пика ^ или аномальных кривых, свойственных фосфорной интоксикации. Закономерность выявленных аномальных кривых для фосфорной интоксикации позволяет использовать их в диагностике ХИСФ,

11. Установлено наличие индивидуальной чувствительности организма к желтому фосфору по данным ХЛ-метрии. При атом среди здоровых лиц 75$ оказались резистентными к желтому фосфору /Кч=0,83-3,50 отн.ед./, 17%- отнесены к группе "чувствительная" /Кч=3,51-7,50 отн.ед./, 8$- к группе "сверхчувствительная" /^=7,51/. Среди больных ХИСФ резистентных'нет, к группе "чувствительная" отнесено 48,3$ и "сверхчувс'тви^е'йьйая" - 51,7$. При профотборе лица " резистентные" мсй^т 'бй^ь рекомендованы на все участки работы фосфорного производСИй», >НШха ;из группы "чувствительная" - для работы в вспомогатеЛьШх ЧГФйх завода, лицам из группы "сверхчувствительная" работа на фосфйрЖо'м производстве противопоказана.

12. КриеЧ&!ШЯ1рамма сыворотки крови рабочих фосфорного завода в 83,7% была еходе'Й, характеризовалась отсутствием центров кристаллизации ^ множеством цилиндрических кристаллов местами с хаотическим расположением; у 11,3$ рабочих кристаллограммц отличались наличием 1-2х намечавшихся центров, напоминающих '' узелок спутавшихся ниток" что может быть "предвестником* интоксикации. У больных ХИС5 начальной степени появляются 1-4 центра кристаллизации, имеющие форму

° клубочков ". При умеренной степени количество центров кристаллизации насчитывает 5-7, при выраженной - до 10 и более. Этот признак предложен как скрининг-тест гри профосмотрах и для диагностики степени выраженности ХИС8.

13. Разработана методика хемилюминесцентного анализа желчи. На ХЛ-граммах желчи больных ХИСФ установлено повышение интенсивности индуцированного свечения и скорости образования перекиснык ради-

- 50 -калов и наличие пика Степень.выраженности' стечения и аыпли-.туда пика нарастают параллельно тяже-сте. фосфорной интоксикации. Установленная закономерность легла в основу предложенного способа диагностики поражения гепатобилиарной система у больных ХИСФ,

14. В гемолизатах крови больных ХЮ с клиническими и электрокардиографическими признаками миокардиодистрофии после велоэрго-метрии обнаружено появление на ХЛ-граммах амплитуда которого нарастала параллельно тяжести интоксикации. Разработан способ дифференциальной диагностики токсической миокардиодистрофии фосфорного генеза.

- 51 -

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАНИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Орманов Н.Ж., Карымсаков К.Е..Адильбекова Д.А., Изменение свободнорадикального окисления липидов при хронической интоксикации фосфором и основные направления поиска средств патогенетической терапии // в сб. .'Материалы 1У объединенного съезда гигиенистов, эпидемиологов и инфекционистов Казахстана.-Чимкент,1985.//

2. Бердыходжин f.l.T. .Орманои Н.Е. .Абралиева Г.И. ,Конксиди А.К. К вопросу диспансеризации фосфорного производства // В сб.¡Научные основы организации медицинской помоци населению.-Алма-Ата»1965.-с, 46-50.

3. Орманов Н.К. .Еердычодаин М..Т,^Енусметов И.Р.,Орманов Б.К. Способ определения токсичности крови у лиц контактирующих сфосфо-ром // A.C. » I448fc№.-1985.

4. Орманов Н.К..Гнусметов T.Ii.Д5ердаходяин М.Т» Использование метода хемилюминесценцйи в диагносгике- хронической интоксикации соединениями фосфора // Б кн.: Развитие фосфорной промпленности

в ХП пятилетке.- Чимкент,1966,- 4.3.- Е. 140-142.

5.'Еердыходжин М.Т.,Орманов Н.К.,Юнусметов Т.И. К вопросу о критериях оценки состояния здоровья фосфорного производства. Там же,-с. 122-124.

6. Бердыходжин М.Т.,Орманов Н.К..Кнусметоп И.Р.,И6раей С.А. К вопросу диагностики хроническгй интоксикации соединения,*® фосфора // В сб. .-Вопросы соперпенстяоваяия терапевтической сщпбы я республике.-Актюбинск,1086с.II9-I2I.

7. Енусметов И.Р..Бердыходжин М.Т..Орманов H.H..йанадилов Ш. К вопросу динспансерного наблюдения за больными с иронической интоксикацией соединениями фосфора. Там же, -с. Г06-Г09.

8. Орманов H.Ii., Бердыходжин И.Т. О воздействии на организм людей комплекса токсических веществ фосфорного производства

//В кк.¡Тезисы докладов I съезда гигиенистов,эпидемиологов и инфекционистов Киргизии.- Фрунзе,1986.- с. 28-29

9. Орманов H.H..Юнусметов Т.И. Свободнорадикальное окисление лил'/дов npv, хронической фосфорной интоксикации // В кн.-.Гигиена труда у. профессиональная патология в химической промышленности и сельском хозяйстве Казахстана. -Алма-Ата,1966. -С. 76-60.

10. Орманов Н.К..Юнусметов K.P. .Бердыходаин- М.Т. ,Адильбенова Д.А. Показатели перекисного окисления липидов при хронической фосфорной интоксикации.// Здравоохранение Казахстана. -I9B6., № 4. -с. 45-47.

11. Еердкходжин М.Т., Юнусметов И.Р.,Орманов Н.Ж.,Ибраев С.А. Вопросы диспансеризации, экспертизы трудоспособности и реабилитации больных с хронической интоксикацией соединениям фосфора.

// В сб.:Актуальные вопросы диспансеризации населения.-Алма-Ата, ISS6. -с. 82-86.

12. Орманов H.Xi. .Адильбекова Д.А. Пероксидация липидов я мембрана* эритроцитов у больных хронической интоксикацией соединениями фосфсра.// В сб.:Г/гисгна труда, ггрофпатология и токсикология при добыче фосфоритов,производстве и использовании фосфорных удобрений. -Алш-Ата,1986, -I7I-I74.

13. Еердыхсщжкн М.Т..Орманов Н.К.,Юнусметов И.Р.,Канадилов ÜJ.I. О воздействия на организм людей комплекса токсических веществ фосфорного производства // Тезисы докладов I съезда гигиенистов,эпидемиологов, инфекционистов Киргизии. -Фрунзе,1966. -с. 28-29.

14. Орманов Н.К. .Енусметов Т.И. Изучение биохемилюминесценции сыворотки и плазмы крови больных с хронической фосфорной интоксикацией .//Здравоохранение Казахстана,1987. № 5. - С.

15. Орманов Н.К.,Бердыходжин М.Т..Юнусметов Т.Н..Хемилюминесцент-ные свойства крови у рабочих фосфорного завода.// В кн.:Материалы

Всесоюзного симпозиума "Еиохемилюминесценция в медицине и сельском хозяйстве" -Ташкент, 1987. - С.

16. Еердыходдин М.Т.,0рнанов Н.Ж.Сосудистые изменения при хронической нейроинтоксикации соединениями фосфора // В кн.:1 съезда невропатологов, нейрохирургов и психиатров-наркологов Кяз. ССР.Материалы. -Алма-Ата,1987.-с.

17. .Вау.летбакова М.И.,Орманов Н.Е. .Еердьгсоддин М,Т. ,Екусме-тов Т.И. Способ диагностики фосфорной интоксикации //A.C. ¡"1614661. 1987.

18.0рманов Н.Й.Цероксидация липидов и состояние антиперекис-ной системы у больных хронической интоксикацией соединениями фосфора // В сб„Гигиена труда и профзаболевания в химической промышленности Казахстана* -Алма-Ата, 1987. -С. 76-81

19.Орманов Рысь сяо'бодных радикалов в патогенезе хронической интоясйКаТ^й соединениями фосфора // Гигиена труда и профзаболевания., -1988» - V9. -с. 15-18.

20. Орманов Н.Ж.,Еердьгходжин М.Т.,Орманов Б.Я.Данздилов Ш. Способ диагностики хронической фосфорной интоксикации //A.C.

» 1630487. - 1988.

21. Орманов Н.Ж.,Жанадилов И.,Югай Н.М. Способ определения поражения гепатобйлйарноЯ системы у больных- с хронической интоксикацией соеДйн'ёНйШй фосфора // A.C. Ii I568I32. -1968.

22. Орманов H.S» Содержание токсических веществ в сыворотке крови у больных хронической фосфорной интоксикацией соединениями фосфора.// В кн.: Хроническая фосфорная интоксикация и ГЕО,-Москва, 1968, -с. 10-12.

23. Орманов Н.Ж. Роль свободных радикалов в гатогенезе хронической интоксикации соединениями фосфора // Там же.-с. 3-10.

24. Орманов H.H. Пероксидация липидов и состояние антиперекис-

s

s

ной системы у больных хронической интоксикацией соединениями фосфора // В кн.: Влияние химических и физических факторов окружающей среды на организм.-Алма-Ата, -с.72-77

25. Орманов H.H..Канадилов Ш.Ж..Бердыходаин М.Т. Способ определения профессиональной пригодности лиц для работ в условиях действия желтот-о фосфора // A.C. И62У701, - 1988.

26. Орманов Н.К..Бердыходаин М.Т. К вопросу патогенеза хронической фосфорной интоксикации соединениями Фосфора // В сб.".Патогенез, клиника, лечение и профилактика профессиональной интоксикации на фосфорном производстве. -Чимкент,1988. -с. 20-23.

27. Еердыходжин М.Т.,Орманов H.H..Канадилов Ш.Ж.,Адильбекова Д.А. К вопросу совершенствования классификации хронической интоксикации соединениями фосфора. -Там же. -с. 31-34.

28. Орманов H.jK.,Бердыходаин М.Т. Влияние токсических веществ фосфорного производства на здоровье людей по данным биохимических показателей // В кн.: Гигие-иа окружающей среды и здоровья человека. -Актюбинск, 1989. -с. 107-108.

29. Орынбаев Т.0.,Койфман М.А.,Орманов Н.К. Опыт применения

о

ГБО в комплексной терапии в профессиональной интоксикации соединениями фосфора // В кн. /Современные машины и аппарг.ты химического • производства. -Чимкент, 1988. -е..

30. Ор'ынбаев Г.0.,Койфман М.А..Ибраев С.А.,Орманов Н.Ж. Использование гипербарическсй оксигенации для коррекции окислительно-восстановительных процессов при хронической фосборной интоксикации // Методическая рекомендация. -Черкассы,1968. - с. 9.

31. Бердыходжин М.Т..Орманов Н.Ж.Данадилоч Ш. О совершенствовании классификации профессиональной интоксикации на фосфорном производстве // В сб.:Гигиена труда и состояние здоровья работников промышленных гредтриятий и сельского хозяйства Казахстана. -Алма-Ата, 1989. -с. 125-133.

32. Орманов Н,Ж.,Адильбекова Д.А. Свободнорадикальное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы у больных с хронической интоксикацией соединениями фосфора // В сб.:Срободнора-дикальное окисление в эксперименте и клинике.-Караганда,1989. - с. 48-53.

33. Аоильбекова Д.А., Орманов H.H. Состояние систем перенис-ного окисления липидов-антиоксидантная защита при -хронической интоксикации соединениями фосфора и принципы патогенетической терапии.// Там же. - с. I16-123.

34. .йу.летбакова М.Й. .Бердыходаин М.Т. Орманов Н.Ж. »Суворова К. Профессиональная интоксикация фосфором и его неорганическими соединениями.// В учебной :п6со'б«й для студентов мед.институтов: Профессиональные заболеват№.-АМа-Ата-,"Мектеп'',19£9,-с.252- •

257. ;

35. Орманов Н.Ж. Пероксидация ЛйййДо'й й й'ООтояние антаперек^с-

ных систем у больных с хронической интокйикат^йеЯ соединениями фосфора //Гигиена труда и профзаболевания, 1990.52-54.

36. Орманов Н.Ж. Хемилюминесценные свойства биологических объектов при воздействии желтого фосфора //В сб. :Актуальные вопросы промышленной интоксикации.-Алма-Ата,1989. -с.29-35.

37. Орманов H.S.Дендибаев К.Б. Влияние соединений фосфора и свинца на кристаллографические свойства биологических средств организма // В сб. .-Экология и здоровье.-Чимкент, 19Э0. -с.£6.

38. Орманов H.H.Данадилов Ш. Некоторые стороны воздействия ! факторов окружающей среда на здоровье населения.гЛимкент//Там же.| -с. 30-31.

39. Орманов Н.Ж. Влияние вредные факторов фосфорного к евин- ; цового производства на свободнорадикальный процесс организма

// Там же. -с. 57-58. •

40. йанадилов Ш.,Орманов H.H. Влияние факторов фосфорного про-;. изводства на здоровье работающих //Там жэ. -с. 32.

41. Ибраер С.А., Орманов Н.Ж, Хемилшинесцентные показатели крови при токсической даокардиодистрофии.//Там же.-с. 39.

42. Жаьадилов Ё.,Орманов Н.Н,.Еайдаулетов И.0.,Лмреев Н. Некоторые стороны воздействия факторов окружающей среды на здоровье населения г.Чимкента ./Дам же -с. 30-31. .

43. Орманов H.H. Использование хемилюминесцентного метода в диагностике и прогнозировании состояния здоровья рабочих фосфорного завода // В методическом указании "Всесоюзной школы-семинара" по "Био-Термо-Хемилюминесценции" (квантовая биология).часть П.' - Москва-Суздаль, 1990, -с. 33.

44. Орманов НД. Использование хемилюминесцентного метода в профпатологии// В кн.: Актуальные проблемы профпатологии. -Рига,

1990. -с.

45. летбакова М.И.,Орманов Н.К..Берлыходкин М.Т.,Енусметов Т.И.,Адильбекова Д.А. Хроническая интоксикация соединениями фосфора (диагностика, лечение,профилактика)// В сб.-.тезисы докладов 1У съезда терапевтов Казахстана.-Караганда. -1990. -с.130-131.

46. двулетбакова М.И..Орманов НД.Бердыходжин М.И..Юнусметов Т.И..Горблянский Ю.Ю.,Адильбекова Д.А. Хроническая интоксикация соединениями фосфора (вопросы патогенеза,клиники,диагностики,экспертизы трудоспособности)//Методическу.е рекомендации.-Алма-Ата,

1991. -22с.

47. Ибраев-'С.А..Орманов Н.Ж..Жанадилов Ш.Дргешбаев К..Орманов Б.К. Способ диагностики миокардиодистрсфии фосфорного генеза //A.C. № 1631427. -БИ, J№. 1991.

48. Орманов Н.Ж..Бердыходаин М.Т..Еанг.дилов Ш.,Мендибаея К.Б. Способ диагностики токсического воздействия желтого фосфора.// Положительное решение Госкомитета по изобретениям и открытиям по заявке № 4664932/30 от 23.05.91 г.

- 57 -

49. Орманов Н.Ж.Ддильбекова Д.А..Мендибаев К.Б..йумабаев У.А. Определение токсичности сыворотки крови рабочих фосфорного производства и меры профилактики я лечения фосфорной интоксикации //Инструктивное письмо. -Шымкент,1992. -Вс-.

50. Орманов Н.Ж..Бердыходжин М.Т.,ЗКан&ДИЛо'й Ш. К ЪйпрОсу патогенеза хронической интоксикации соединениями фосфора // В с'б-. Гигиена труда и профпатология в производство фосфора и его неорганических соединений. -Алма-Ата, -1991.-с. 34-44.

51. Патсаев А.К.,Орманов Н.Ж.. Гидрохлорид амийоселенидов

ароматического ряда проявляющий фосфорно-протекторное действие. Положительное решение о выдаче патентной экспертизы по заявке № 4950667/04 (054339) от 26„06.91г.