Автореферат и диссертация по медицине (14.00.30) на тему:Разработка и эпидемиологическая оценка стимуляции поствакцинального противосибиреязвенного иммунитета тактивином

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНСКОЙ ССР

Киевский научно-исследовательский институт эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л. В. Громашевского

На правах рукописи ЭКЪ. 000001

ГЫЛКА

Владимир Васильевич

УДК: 616.981.51—614.446—576.8.093.2

РАЗРАБОТКА И ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СТИМУЛЯЦИИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ПРОТИВОСИБИРЕЯЗВЕННОГО ИММУНИТЕТА ТАКТИВИНОМ

14.00.30 — эпидемиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Киев — 1988

Работа выполнена в Кишиневском Государственном медицин' ском институте.

Научный руководитель:

заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук, профессор Э. Н. Шляхов.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Е. А. Шабловская, кандидат медицинских наук, доцент Ю. Д. Гоц.

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи

Защита состоится « ? » 1983г. в часов на заседании специализированного Совета (Д-088.04.01) при Киевском научно-исследовательском институте эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л. В. Громашевского (252038, г. Киев, Спуск Степана Разина 41

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института

Ученый секретарь специализированного Совета,

кандидат медицинских наук Л. С. Красюк

л ■

- з -

Актуальность пробками. Несмотря на большие достижения совете-, кого здравоохранения в борьба с инфекционными заболеваниями, в последние года отмечается стабилизация уровня заболеваемости рядом инфекций, в том числе и сибирской язвой. Применяемый в настоящее время комплекс противосибиреязвенных мероприятий не позволяет существенно снизить уровень заболеиаемооти: единичные, а иногда и групповые случаи заболевания продолжают регистрироваться на довольно обширных территориях (Э.Н.Шляхов, В.Ф.Кику, 1984; Б.ЛЛеркасокий, 1979).

Высокая устойчивость опоровых форм возбудителя сибирской язвы затрудняет решение вопроса коренной эрадикации данного заболевания. Существующие методы санации почвенных очагов не дают жалаембго эффекта. Большая приспособительная способность возбудителя обусловила aró расселение практически во все климатические зоны и пояса, в связи с чем случаи заболе- . вания возникают на территории, ранее считающейся благополучной в отношении сибиреязвенной инфекции. По данным Б.Л.Черкасского (1979), примерно 50% населенных пунктов следует считать неблагополучными в отношении данной инфекции. Вышеизложенное свидетельствует о правомерности проведения, о целью индивидуальной защиты, специфической профилактики сибирской язвы у декретированного контингента лиц. Это вы-, нувденное мероприятие останется актуальным до тех пор, пока не появится возможность искоренить естественный резервуар сибиреязвенной инфекции в природе (Н.Н.Гинсбург, 1975; Э.Н.Шляхов и соавт., 1975, 1984;.Н.Н.Приз, 1985).

Последние 40 лет для иммунопрофилактики сибирской язвы у людей и животных в СССР используется вакцина СТИ. Однако эта вакцина требует как конструктивных изменений, совершенствова-

нийг так и разработки предложений, направленных на повыше* ,4

ниа иммунного ответа на ее введение.

Так как не у всех иммунизированных вакциной СТИ вырабатывается достаточно напряженный, защищающий от последующего заражения иммунитет, естественно, немаловажное значение имеют работы, направленные на изучение возможности снижения доли неиммунных лиц ореди вакцинированных. О учетом имкуногенетической гетерогенности популяций людей добитьоя этого путем .использования стандартных схем вакцинации практически невозможно. В то же время, в последние года получаны и стали довольно интенсивно внедряться в медицинскую практику ряд препаратов, обладающих шладуноюдулирудащими свойствами, позволяющих купировать фоновые имцунодефицитные состояния.

Изложенное свидетельствует об актуальности попытки изыскания и использования возможности повышения иммунологичеокой, а следовательно, и эпидемиологической эффективности вакцины СТИ путем потенцирования реакции именной системы организма, прививаемого, имцуномодулируицими препаратами.

Цель работы: изучение возможности повышения эпидемиологической эффективности иммунизации вакциной СТИ и сокращение времени, необходимого дая поствакцинальной противосибиреяз-венной перестройки при помощи имцуномодулятора тактивина.

В задачи исследования входило:

1. Провести ретроспективный эпидемиологический.анализ эффективности применения вакцины СТИ в Молдавской ССР (19641986 гг.).'

2. Изучить влияние сибиреязвенного вакцинального процесса на Т-клето^ный иммунитет и оценить воздействие ишуностивдлятора тактивина при его совместном введении с вакциной СТИ.

3. Экспериментально обосновать возможность стимуляции тактивином поствакцинального противосибироязвонного иммунитета.

4. Исоледовать стицулирущае влияние тактивина на формирование иммунитета у людей однократно и первично привитых (на-кожно или подкожно) вакциной СТИ.

5. Изучить возможность использования РБТЛ со специфическим сибиреязвенным антигеном для определения и оценки поствакцинального иммунитета.

Научная новизна работы:

1. Впервые показана возможность использования иммуномодулятора, тактивина для стимуляции противосибиреязвенной поствакцинальной перестройки.

2. Выявлена возможность сокращения времени, необходимого для появления эффективного иммунитета уже после однократной накожной или подкожной иммунизации у первично вакцинированных лиц, а также возможность повышения эффективности при использовании небольших доз вакцины СТИ.

3. Шервые показана возможность повышения резистентности ла-' бораторных животных к последуювдму заражению сравнительно

набольшими дозами (50 ХДзд) сибиреязвенной культуры штамма 71/12 путем введения тактивина предварительно и одновременно, только одновременно, или в первые два часа после заражения.

4. Впервые показана возможность выявления поствакцинальной сенсибилизации лимфоцитов к сибиреязвенным антигенам при помощи РБТЛ со специфическим сибиреязвенным штогеном.

. "Цтктичэокад ценность Работы. Предложен onoood стимуляции поогвакцинального противосибираязванного иммунитета, позволяющий получить высокую имцунную прослойку среди однократно привитых, что мокат снять некоторые организационные трудности, связанные о реглашнтированной двукратной иш.униаацией. Применение данного споооба позволяет значительно сократить время, необходимое для эффективной поств^кцинальной парестройки, что дает возможность решить положительно вопрос допуска на работу лиц, входящих в группу риска,за более короткий промежуток времени. По этим результатам соотавлено информационное пись-,мо Минздрава МОСЗР в адрео санэпидстанций республики. Результаты внедрены в учебный прчцасо на факультете специализации и усовершенствования врачей Кишинавокого медицинского института и в Григориопольоком района Молдавской OOP,

V Разработан способ выявления сеиоибилвзаоди организма к сибиреязвенному возбудителю и определения поствакцинального иммунитета in vitro путем постановки РБТЛ оо специфическим сибиреязвенным йнтигеноц/митогеном.

Аццобацид работр, Основные материалы работы представлена, долокены и обсувдены на втором оъезда гигиенистов, оанитарныЖ врачей, микробиологов, эпидемиологов и паразитологов Молдавии (Кишинев, 1988); научных конференциях сотрудников Кишиневского государственного медицинского института, секция: "Эпидемиология, микробиология и клиника бактериальных и ви-рурных инфекций".(1965, 198?); республиканской научно-практической -конференции "Молодеть и интенсификация агропромышленного комплекса". По -материалам, содержащим основные поло-кения данной диссертационной работы, диссертанту прксукдзно звание-лауреата предай комсомола Молдавии имени Б.Главана в области науки и техники за 1988 год.

Публикации. По тэме диооертации опубликовано семь научных работ. Получено 6 свидетельств на рационализаторские предложения. Подана заявка на изобретение, по которой получено положительное заключение (приоритетная оправка й 181563). Основные положения, выносиша на защиту:

1. Способ, ускорения поствакцинальной противосибиреязвенной иммунологической перестройки путем введения тактивина одновременно о имцунизациай вакциной СТИ.

2. Усиление, под влиянием тактивина иммунного ответа морских овинок и людей на введение небольших и оптишльных доз вакцины СТИ.

3» Возможность использования РБТЛ со специфическим протектйвным сибиреязвенным антигеном для определения поотвакцинальной сенсибилизации организма. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 2 глав обзора литературы, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы, включающего 179 отечественных и 96 зарубежных источников. Объем диссертации - . 115 страниц машинописи. Работа иллюстрирована 16 таблицами и . 14.рисунками.

Содержание 'работы; Материал и методы. Анализ проявлений сибиреязвенного , эпидемического процесса и влияние на них иммунопрофилактики проведен по материалам Республиканской и районных санэпидстанций Молдавской ССР,

В экспериментах по изучению иммуностимулирующего действия тактивина использовали морских свинок. Иммунизацию животных проводили жидкой вакциной СТИ. Доза варьировала от I до 40 млн. спор.

' В опытах использовалц. тактивин, полученный из 1ДШЛ II . МОШИ им, Н.И.Цирогова и коммерческий препарат, серия 380686. Морским свинкам вводили по 10 мкг, людям - по 100 мкг Фактивина.

Дня изучения специфической поотвакцинальной перестройки как лвдей, так и животных, попользовали препарат антраксин. Дня контрольного заражения животных использовали сибиреязвенную теот- заражающую культуру штамма 71/12 в дозе от 5Q до 200 I%D.

Реакции розеткообразования ставили до общепринятым методикам. Бласттрансформационную опоообнооть лимфоцитов изучали в микромодафикации метода М.П.Григорьевой и И.И.Ко-шлян (1972)* По этой,же методика, но о заменой ФГА на специфический сибиреязвенный протективный антиген-митоген, определяли- предварительную сенсибилизацию 'организма. Специфический протективный антиген получали в лиофшшэированном вида из Ставрополя

'Влияние тактивина на шлму нологичаскую перестройку людей, иммунизированных вакциной СТИ, изучали в динамике на 3-4} ' 7-8} 14-15 и 180 день путем постановки антраксиновых проб. В исследованиях были охвачены 507 человек, из них 259 иммунизированы накожно и 248-подкожно при помощи безыгольного.инъек-тора. Дозы использованной вакцины соответствовали дейотвукь щим наставлениям. Одновременно с вакциной 201 человек получали 100 мкг .тактивина,. Тактивин вводили подкожно безыгольным инъектором.

При сопоставлении.экспериментальных данных, полученных в контрольных и опытных группах, для определения достоверности результатов применяли критерий'Стьюдента (Д.Сепетлиев, 1968);

Для статистической обработки результатов эпидемиологического исследования использовали метод определения достоверности при , альтернативном варьировании (Э.Н.Шляхов, 1986).

Основные результаты исследования;

I.. Современные особенности сибиреязвенного эпидемического процесса в Молдавской ССР. Влияние иммунопрофилактики на его проявления.

Уровень заболеваемости сибирской язвой как среди людей, так и среди животных снизился по сравнению с допрививочным периодом, однако широко используемая в настоящее время для иммунопрофилактики вакцина СТИ и весь комплекс противосибире- • язвенных мероприятий не позволяют предотвратить возникновение новых случаев. Последние 40 лет в республике ежегодно (за исключением 1976 года) регистрируются случаи заболевания.

Лица, входящие в группу- риска и владельцы частного сек- \ тора составляют соответственно по 42,6$ от общего числа заболевших за последние два десятилетия.

Подтверждается определенная зависимость между степенью проявления эпидемического процесса и охватом вакцинацией лиц, подвергающихся профессиональному риску заражения. Количество привитых лиц возрастало, начиная с 1964 года - 39093, по 1981 год - 114468 человек. Охват прививками за это время возрос почти в 3 раза, уровень заболеваемости снизился в 9 раз. Тем не менее на протяжении всего этого периода регистрировались случаи заболевания, причем в отдельные годы заболеваемость среди привитых занн&ает довольно высокую долю от общего количества регистрирусшх случаев (до 50$). За последние 2 десятилетия около 14/5 случаев зарегистрировано среда лиц, ранее иммунизированных вакциной СТИ.

• / Переход к двукратнойламмунизации начиная о 1981 гсда не дад желаемого результата. Случаи заболевания продолжают регистрироваться, в том числа 8,3/о случаев среда лиц, ранее привитых по двукратной схема.

Изучение' влияния тактивина на поотвакцинальный сибиреязвенный иммунитет в эксперименте,

• В последние года большое внимание уделяется поиску эффективных 'методов коррекции иммунного ответа. Одно из ведущих тот среди шх занимают препараты из тимуса, которые отнооят-оя к наиболее физиологичным.

В то же время, по данным литературы, использование им-муномодуляТоров этой группы в инфекционной иммунологии еще большая редкость. -В частности, лишь единичные работы поовя-щаны применению тимуоных препаратов дня .повышения поствакцинального имцунитдта.

Наш изучены возможности использования в качаотва стимулятора поствакыянального противооибиреязвенного имл^нитата отечественного имцуномодулятора-тактивина.

Поскольку общепризнанной экспериментальной иммунологической моделью для изучения противооибиреязвенного имщуните-та являются морские свинки, опыты проводшшоь на этих животных.

В результате было установлено, что тактивин оказывает стимулирующий эффект на поствакцинальный имьунитет. Этот эффект бш наиболее выражен при использовании тактивина из расчета 30-35 мкг/кг веса. Одновременное' с разными дозаш вакцины (1-40 щн. спор) введение тактивина способствовало повышению количества животных, положительно реагировавших на введение антраксина. С увеличаниам дозы иммунодти%лятора возрастало их число. В-группе, получавшей одновременно с

вакциной СТИ 3-3,5 мкг/кг тактивина-12 из 16{ 15-18 мкг/кг -14 из 16, а в группе, получавшей 30-35 мкг/кг тактивина, все животные дали положительный ответ на антраксин. В 1,5-3 раза выше была интенсивность положительных антраксиновых реакций в опытных группах, получавших дополнительно тактивин по сравнению с получавшими только вакцину СТИ.

Введение только стимулятора (без вакцин) не приводит к появлению неспецифических положительных реакций на введение антраксина и совсем незначительно повышает резистентность-морских свинок к последующему (через 14 дней) заражению сибиреязвенной тест-культурой (в дозе 200 ВДзд).

Сочетанное использование тактивина с Еакциной СТИ позволило выявить определенную разницу в течение« поствакцинального периода.

Результаты показывают (табл. I), что наиболее высокий показатель падежа животных в процессе вакцинации наблюдался в группе животных, вакцинированных 40 млн. спор - 31,3$. Не на много ниже этот показатель падежа и в группе животных, вакцинированных 10 млн. спор - 2Ь,9$ животных. При вакцинации теш же дозами вакцины (и той же серии) в тех же условиях, но с дополнительным введением тактивина отход животных значительно ниже - 1ь,6% (Р<0,05).

Контрольное заражение <¡00 культуры штамма 71/12 подтвердило как значение дозы вакцины, так и стимулирующую роль такт?вина в созданш. достаточно эффективного защитного иммунитета. В трех из восьы; вакцинированных групп наблюдали 100$ выживаемость поело контрольного заражения. Это группы, имкуни-знровашше 40 млн. спор СТ1», п опытная группа, в которой жи- . вотные получали по 10 млн. спор СТИ и дополнительно 30-35 мкг/кг тактивина. В контрольно!; грушю животных, ки.ункзированных

Таблица Л I. Результаты стимуляции такташном поствакцинального противосибиреязвенного иммунитета при подкожной аппликации морским свинкам различных доз вакцины СТИ

Группа животных, получивших

Показатель '.Контроль- : ! ная !! ! группа | 1 . 1 I млн спор СТИ ! I мдн ! ! агор ! !СТЩ. 10 ! !мег так-! ¡тиввна ! 5 мдн спор ОПТ ! 5 млн ! ! спор ! !СТИ + 10! !мкг так-! !тивина ! 10 шхн спор СНГ ! 10 млн!40 шн!40 млн ! спор !спор !спор !ЙШ- 101 СТИ ¡СТЙ+Ю '.мкг.такЧ ' !мкг.так-!тивина I 'тивина

Число животных в груше 35 28 22 23 23 28 27 16 16

Число погибших после вакцинации 0 0 ■ (4.5) 3 (13,0) 4 (17,3) 8 (28,9) 6 (21,5) 5 ' 2 (31,3) (12,5)

Число животных, давших положительный ответ на антраксин 0 7 (25,0) П (52,3) 14 (70) 16 (84,2) 16 (80,0) 21 (100,0) 8 14 (72,7) (100,0)

Степень интенсивности антраксиновых реакций 0 0,5- 0,9 1,25 " 1,6 .1,45" 2,1 1,4 ' 2;9

Число выживших посла контрольного заражения 200 ЗДдо 0 8 (28,5) 12 . (57,1) 14 . (7С) 17 (89,5) 16 (80,0) 21 (100,0) II с 14 (100,0)(100,0)

Индекс резистентности,$ 22;5 ' '4&,7 ' 72,3 79,2 ' 94,2 85,3 100,0 "100,0 100,0'

Примечание: В скобках приведены процентные показатели.

10 млн. спор СТИ, индекс резистентности равен 65,3$, а выжило после заражения 80$ животных (Р< 0,05).

В опытной группе, иммунизированной 5 млн. спор СТИ, эти показатели выше по сравнению как с результатами, полученными в соответствующей контрольной группе (79,2 и 70,0$), так и с вышеприведенными при иммунизации - 10 млн. спор. Индекс резистентности - 94,2$, а выжило после контрольного заражения 89,5$ морских свинок. Еще более выраженно проявляется стимулирующее свойство тактивина при использовании минимальных доз вакцины СТЙ. При иммунизации I млн. спор в контрольной группе индекс резистентности был равен 46,7$, а в опытной - 72,3$ (Р<0,05). В опытной группе животных, иммунизированных I млн. спор СТИ и получавших 30-35 мкг/кг тактивина, выживаемость в два раза выше, чем в контрольной группе, иммунизированной той т дозой вакцины, но без стимулятора (соответственно 28,5 и 57,1$; Р< 0,05).

Ни в одном случае после положительной реакции на антраксин не зарегистрировано летальных исходов после контрольного заражения.

Для изучения возможности повышения неспецифической резистентности к последующему контрольному заражению дозу тактивина, обладающую иммуностимулирующими свойства!®, вводили в разное время по отношению к моменту заражения.

Результаты показали, что при введении больших доз тест-культуры (100 п 200 1Д5д) основная масса животных погибает. Исходя из этого, в дальнейшем для заражения была использована доза в 50 (табл. 2 ).

Полученные данные свидетельствуют о повышении резистентность жшютных к сибирской язве под влиянием тактивина. Наиболее высокие показатели неспецифической резистентности наблюдались при введении игмуностимуллтора двазды - предварительно и одно-

Таблица 2. Результаты изучения возможности повышения неспеци-фи час кой резистентности морских овинок к заражению сибиреязвенной культурой 71/12 (50 ВДзд) при ввада-нии тактивина в разное время по отношению к моменту заражения.-

Группа животных, {Выжившие! Число ! Индекс

получавших по 10 мкг !кивотша|выживших|рвзистантности, %

тактивина 1 % ! !

I. Контроль . ' 10 2 35,7 ± 10,9

2. Одновременно о заражением 40 8 59,3 ± 11,3

3. Через 2 часа после заражен 40 ния 8 60,2 t 11,2

4. Через 4 часа после заране- 25 ния 5 47,2 ± 11,6

5. Через 24 часа после заража- 10 ния 2 31,7 ± 10,7

6, За 24 часа до заражения и 46 одновременно с заражением 9 62,2 ± 11,1

7. За 24 часа до заражения 35 7 53,5 ± 11,4

' Р1,2<°.°5 > 0,05

Р}- з<0,05. Р1,6 < 0,05

Р1>4»0,05 Р1,7 ^0,05

временно или в первые два часа после зарашния. При введении в более поздние сроки тактивин вообще не влиял на резистентность к заражению, либо его эффект был незначительным,

Исследование влияния тактивина на скорость образования и продолжительность противосибиреязвенного иммунитета

Сроки образования напряженного противосибиреязвенного иммунитета после иммунизации вакциной СТИ, как известно, равняв ются 14-21 дню. Что касается болев ранних сроков, то этот вопрос ■ освещен в очень ограниченном количестве работ. Сокращенна Браме-

ни, необходимого для поствакцинальной перестройки, могло бы сделать вакцину СТИ конкурентноспособной о препаратами, используемыми для проведения экстренной профилактики.

Для изучения окорости образования поотвакцинального иммунитета были выбраны следующие сроки исследования: 3, 5 и 7 день после вакцинации, а продолжительность иммунитета изучали на 180-й день после иммунизации.

Выявлена разница при сравнении данных, полученных в группе иммунизированных вакциной СТИ и получанных в опытной группа, которой дополнительно вводили тактивин.

Установлено, что в контрольной группа (иммунизированных вакциной ОТИ) первые положительные кожные реакции наблвдаются только на Б день пооле вакцинации. В опытной группа получивших тактивин уже на 3 день после иммунизации 15$ иооледованных животных дали положительный ответ, а на 5 день - 73,7$. Этот показатель, полученный в опытной группе на 5 день, почти в шесть раз выше, чем в контрольной (Р < 0,05). Количество животных, давших положительную реакцию на антраксин в опытной группе на 7 день,больше, чем во воех остальных группах (81,3$).

Уровень интенсивности антраксиновых реакций, наблюдаемых в разные сроки после иммунизации вакциной СТИ и СТИ + тактивин, во все сроки исследования выше в опытных группах. Одновременно четко прослеживается зависимость уровня интенсивности этих проб от времени, прошедаего после вакцинации.

Бо все сроки показатели выживаемости животных после контрольного заражения выше в опытных группах. Статистически достоверная разница между результатами, полученными в контрольных и > опытных группах, зарегистрированы на 4 и 6 день посла вакцинации.

Полученные результаты доказывают способность тактивина ускорять поствакцинальную иммунную перестройку орга^з/ла. Поста-

новка антраксиновых проб через шесть месяцев после вакцинации показала, что оказываемый тактивином на ранних этапах поствакцинального иммуногенеза симулирующий эффект продолжает проявляться и в отдаленные от момента вакцинации сроки. В группе животных, иммунизированных 5 млн. спор СТИ, только у '¿8,6% животных наблюдали положительную антраксиновую реакцию, а в группе, иммунизированных той жа вакциной, но получивших дополнительно тактквин - 68,8$ (Р<0,05). Эта закономерность наблюдалась и при иммунизации 10 млн. спор СТИ; в опытной группе, получавшей дополнительно к этой дозе вакцины тактивин, полога-тельную реакцию дали на 38,9$ больше животных (Р<0,05).

Данные, полученные в результате контрольного заражения сибиреязвенной культурой штампа 71/12 на второй дань после постановки антраксиновых проб, также свидетельствуют о сохранении более высокой иммунной прослойки среди привитых животных, получавших дополнительно тактивин (Р < 0,05).

Влияние иммуностимуляции тактивином на Т-клаточное звено иммунитета привитых (в эксперименте)

Об изменениях, имеющих место е субпопуляциях иммунокомпе-тентных клеток в разные сроки посла введения только пи уности-ь-улятора, только вакцины СТИ и сочетанного применения тактивина с вакциной СТл (4,7 и 14-е сутки), судили по результатам, полученным в реакции розеткообразования. Результаты, заре?гистрированные на 4 день после иммунизации в опытной груше, шл.увизированных вакциной СГм с одновременным введением тактивина, отличаются от контрольных тем, что в этой группе било выше об^ее количество лейкоцитов и лимфоцитов, увеличился, но смотря на некоторое повышение количества В-шшток, показатель соотношения Т/Б лимОю-

цитов. Статистически достоверная разница между данными, полученными в группе животных, иммунизированных вакциной СТИ и получавших дополнительно иммуностимулятор, имеется в отношении общего количества Т-лимфоцитов, многорецепторных Т-лимфоцитов, Т-активных, термостабильных и теофиллинрезистентных Т-лимфо-цитов, и показателя соотношения Т/В лимфоцитов, которые выше в последней группе.

На 7 день после иммунизации значительное повышение количества лейкоцитов наблюдалооь и в группе животных, иммунизиро-• ванных только вакциной СТИ. В этих группах -наблюдали рост количества Т-активных и Т-термостабилышх (индукторных) клеток, а в группе животных, получавших дополнительно тактивин, увеличилось и количество многорецепторных Т-лимфоцитов.

При исследовании на 14 день после иммунизации, несмотря на высокое количество лейкоцитов в иммунизированных группах, статистически достоверной разницы между контрольными и опытными группами нет. Статистически достоверная разница на этот срок сохраняется только между показателями контрольной (получавшей 0,5 Ш1 физраствора) группы и опытной,' получавшей вакцину СТИ + + тактивин,в отношении таких показателей, как количество Т-ап-тивных и Т-термостабилы-шх клеток, которое выше в последней, а также в отношении количества таофиллинчувствительных Т-клеток, которое, в группа животных, получавших дополнительно тактивин, меньше по сравнению с группой, привитой одной вакциной СТИ.

Результаты, полученные в группе, которой вводили только иммуностимулятор тактивин, мало чем отличаются от получошшх в интактноп группа.

На 4 и 7 дни после иммунизации отмочонп наиболее существенные сдвиги в субпопуляцкях ншукойошзтзитньс :азгс.< п^;

дополнительном введение к вакцине тактивина. Более высоким уровнем Т-лим$оцитов и их субпопуляций и особенно многореприторных, активных, термостабильных и теофиллинрезистентных Т-кле-. ток можно объяснить более раннее появление защитного уровня поотвакцинального иммунитета при дополнительном вводении одновременно с ишунизацией тактивина, то еоть более ранним вовлечением Т-системы иммунитета привитых в поствакцинальную перестройку .

Изучение бласттрансформавдонной способности лимфоцитов привитых и непривитых при использовании различных митогенов

Сравнение полученных в РБТЛ результатов показало зависимость индуцированного специфическим антигеном бластогенеза от наличия предварительной сенсибилизации к нему организма. У экспериментально иммунизированных животных результаты этой реакции более чем в 2,5 раза выше по сравнению с контролем (соответственно 21,5 ± 4,8$ к 7,5 ± 1,6$; Р<0,05).

При постановке реакций с ФГА каких-либо существенных отличий между опытной и контрольной группами не выявлено. Бдастоге-нез в.опытах без митогена (контрольные реакции) примерно одинаков во всех изучаемых группах.

Сопоставление результатов в динамике показали зависимость индуцироБанного специфическим сибиреязвенным антигеном РБТЛ от времени, прошедшего после иммунизации. На 4 день количество бластов было равно IЬ,Ъ%, а на 7 и 14 дни - соответственно 20^1$ и 26,8$ от общего числа учтенных лимфоцитов. Динаижа этих показателей коррелирует с динашкой наблюдаешх положитель них антракскновых реакций, степенью их интенсивности и выживаемостью после экспериментального ш.фицирошния.

Полученные данные позеоляют гоЕорить о еоз;,:0шюсти исполь-

зования РБТЛ оо сиецыфиче оким сибиреязвенным протективным антигеном (ПА) для выявления предварительного контакта организма о сибиреязвенной клеткой. При достижении в РБТЛ с ПА 14 и более процентов бластов в наших опытах случаев гибэли морских овинок после заражения не наблюдалооь. Этот уровень наблюдаемых бластов южно считать предварительным критерием наличия эффективной резистентности к заражению в дозе 200

При исследовании возможности использования индуцированной специфическим сибиреязвенным антигеном-митогеном РБТЛ дая оценки иммунитета изучали также результаты, полученные в группе животных, которым при вакцинации дополнительно вводили тактивин. Ука на 4 оутки поола иммунизации в этой группе животных наблюдали значительно более высокий процент бластов, как по оравнанию о контрольными группами, так и с группой, иммунизированной одной вакциной СТИ (Р < 0,05). На 7 и 14 оутки поола введения вакцины и тактивина количество бластов в этой опытной группа такжа выша, чем во воех остальных, однако статистически доотоварно отличается только от полученного в контрольных

V

наищунизированных группах.

Таким образом, и результаты этой реакции подтверждают более ранюю иммунологическую перестройку посла оочатанного введения еакцины СТИ и тактивина. Корреляция между этими данными и результатами такого достоверного критерия выявления защитного поотвакцинального иммунитета, как выживаемость поола массивного заражения сибиреязвенной вирулентной культурой, свидетельствует о том, что данный тест может оказаться ценным при постановке научных опытов и практических исследований, направленных на определение эффективности противосибиреязвенной иммунизации, а при соответствующей доработке, возможно, и в целях уточнения.клинического диагноза.

Эпидемиологический Опыт противосибиреязвенной вакцинации с применением тактивина

Полученные в экспериментах на лабораторных животных результаты послужили основой для организации и проведения двух серий практических эпидемиологических исследований на людях.

А) При проведении накожной вакцинации.

Минимальное количество положительных реакций выявлено при постановке антраксиновых проб на 3 день после иммунизации, а максимальное - на 14 день. Такая динамика наблюдалаоь и в опытной, и в контрольных: группах. Однако во все сроки в опытных группах процент лиц, давших положительную реакцию на введение антраксина, был выше, чем в контрольных в те же сроки (Р<0,05).

При сравнении показателей, полученных на каждый срок в отдельности, было выявлено, что наибольшая разница между результатами в группах отмзчается при постановке проб на 7 день посла иммунизации. В контрольной группе на этот срок положительный ответ на введение антраксина дали 33,3% привитых, а в опытной - '¡¿,7%, На 3 день после вакцинации разница между этими показателями была 23,2$, на 14 день - 32%, а на 180 день - 2А%. Наиболее высокие индексы интенсивности реакции отмечались на 14 день, соответственно они были равны 17,8$ в контрольной группе к 23,7$ - в опытной.

Тот факт, что при использовании тактивина уже на 3 день количество иммунных лиц выше, чем в контрольных группах, указывает на возиоеность использования этого стимулятора в особых эпидемиологических условиях, когда возникает необходимость получить в скатые сроки защитный уровень иммунитета у определенных групп лиц. Показатели положительных проб на 7 и 14 дни в опытных группах (по 12,1%) свидетельствуют о том, что г.м/уно-логическач перестройка б группе привитых, получавших одновре-

данно о накожной вакцинацией тактивин, заканчивается раньше, чем у иммунизированных скарификавдонио одной вакциной ОТИ.

Б) При проведении подкожной вакцинации.

Проведенный анализ данных антраксиновых проб, полученных в группе привитых одной вакциной ОТИ (контрольная) и в,группе, получавших дополнительно тактивин, показывает, что количество положительных антраксиновых проб выше в опытных группах. При исследовании на 3,7 и 180 дни после вакцинации между показателями, полученными в этих группах, имеется статистически достоверная разница (Р <-р,05). Она наиболее выражена в опытной и контрольных группах не на 7 день (21,9$), как при накожной вакцинации, а на 3 день (26,6$). Это, на наш взгляд, указывает на зависимость стидцулирующего эффекта тактивина от дозы и способа введения.

Полученные данные позволяют говорить о том, что в группе лиц, иммунизированных вакциной СТИ и получавших дополнительно тактивин,ужа на'З день достигается уровень иммунитета, который в контрольной группе, привитой одной вакциной ОТИ, вырабатывается только на 7-14 сутки. •

На это указывают и индекоы интенсивности антракоиновых реакций. Уже на 3 день пооле введения вакцины СТИ + тактивин у 8 из 15 (53,33$) лиц, давших положительный ответ"на введение антраксина, реакции были оценены в (++) и (+++), в то время как в контрольной группе, получавших "одну вакцину СТИ, у всех 4, давших положительный ответ на антракоиновую пробу, реакция была оценена в (+). Наиболее высокий индекс интенсивности наблюдался в опытной группе на 14 день. Он равен 37,9$.

При проведении сравнительного анализа данных, полученных

в контрольных группах при накожной и подкожной вакцинации, было выявлано, что в группа иммунизированных подкожно, начиная о 7 дня, процент лиц, давших положительный ответ на антракои-ровуи пробу, соответственно выше на 12,6$ - на 7 дань и на ' 18,1% - на 14 день посла введения вакцины. Результаты антрак-синовых проб, поставленных на 3 и 180 дни после иммунизации, практически на зависят от опособа введения вакцины (разница в 0,8-3,1$).

Результаты указывают на то, что способ введения вакцины практически не оказывается на скорости образования иммунного ответа организма при иммунизации вакциной СТИ, но в целом подкожный способ вакцинации позволяет получить более высокую иммунную прослойку среди привитых.

вывода?

1. Введение о 1981 г. в Молдавской ССР двукратной иммунизации против сибирской язвы обусловило некоторое они-кениа удельного веса заболеваний среди привитых (0 14 до 8,3$), но полностью их не предотвратило.

2. Тактивин, введенный одновременно о различными дозами вакцины СТИ (минимальные, субоптимальные, оптимальные), повышает эпидемиологическую эффективность иммунизации. Самостоятельное введение тактивина животным (без вакцины) повышает их резистентность к заражению вирулентной сибиреязвенной культурой в дозе, не превышающей

50 ВДзд.

3. Введение тактивина совместно с вакциной СТИ сокращает сроки эффективного поствакцинального иммуногенеза; стимулирующий эффект наблюдается в течение 6 мое.

4. Под действием тактивина повышается общее количество Т-лим$оцитов, в основном шогорецепторных, Т-актив-ных и Т-теофиллинреэистантных (в Е-РОК), увеличиваются функциональные возможности лимфоцитов к бласто-генезу,

б. Разработанная модификация ЕБТЛ о сибиреязвенным про-тективным антигеномнштогеном позволяет определить in vitro специфическую сенсибилизацию организма к сибиреязвенным антигенам и наличие поотвакцинального иммунитета. •

6, Тактивин стимулирующе воздействует на сибиреязвенный иммунитет независимо от опособа введения вакцины; отимулирувдий эффект более выражен при скарификацион-ной вакцинации.

7. Использование тактивина совместно о противосибиреязвен-ной вакциной позволяет сократить в 3 раза (о 31 до 9-10 дней) сроки недопущения первично привитых лиц на работу, овяэанную о риоком заражения оибирокой язвой.

ОПУБЛИКОВАННЫЕ РАБОТЫ ГО ТЕШ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гнлка В.В., Пути снижения реактогенных овойств вакцины СТИ 1 //Проблемы эпидемиологии, микробиологии и паразитологии:

Таз.докладов II Съезда гигиенистов и санитарных врачей, микробиологов, эпидемиологов и паразитологов Молдавской ССР. - 4.2.- Кишинев, 1987.-С.284-286.

2. Гылка В.В., Кику В.Ф., Шляхов Э.Н. Повышение антибактериаль-

ной резистентности Т-активином //Там же С.285-286.

3. Гылка В.В., Шляхов Э.Н. Способ определения сенсибилизации

организма к сибиреязвенному возбудителю //Здравоохранение

(Кишинев) - принята в печать-1989 151

4. Кику В.Ф,, Гылка В.В,, Шляхов Э.Н. Эпидемиологическая эф-

фективность иммунопрофилактики сибирской язвы вакциной СТИ в Молдавской ССР //Проблемы эпидемиологии, микробиологии и паразитологии:Таз.докладов II Съезда гигиенистов, и санитарных врачей, микробиологов, эпидемиологов и паразитологов Молдавской ОСР. - 4,2, - Кишинев, 1987.-С.292-293,

5. Шляхов Э.Н., Гылка В,В, 0 возможности стимуляции поствакци-

нальной перестройки с помощью иммуномодулятора тактивина //Здравоохранение (Кишинев) - 1988 - ЖЗ-С.23-26.

6. Шляхов Э.Н., Гылка В.В., Кику В.Ф., Арион В.Я. Опыт исполь-

зования иммуномодулятора Т-активина для стимуляции поствакцинального иммунитета //Известия АН МССР. - 1988-М -0,46-50.

7. Шляхов Э.Н,, Арион В.Я., Гылка В.В., Кику В.Ф. Повышение

эпидемиологической эффективности вакцины СТИ путе!,. стимуляции поствакцинального иммунитета. /Дурн. микробиологии, эпияенивдйищ и иммунобиологии - 19Ь8 - й 10 - С.109-П0.