Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Растворимый Fas-антиген в сыворотке крови больных раком и доброкачественными новообразованиями яичников и его клиническое значение

Па щитах рукописи

ОБУШЕВА Мария Нармаповна

РАСТВОРИМЫЙ Гая-АНТИГЕН В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ И ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ЯИЧНИКОВ И ЕГО КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

(14.00.14 - онкология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 1999

Pañol a выполнена в Российском онкологическом научном центре им. Н.Н.Нломша ГАМ11 (директор - академик H.H.'Грапеишков)

Научные руководи i елп:

доктор медицинских наук, профессор 1С.II. Лактионов члсн-коррсепондент РАМН, профессор 11.Е. Кушлинский Официальные он нонеты:

доктор биологических наук, профессор JI.I». Горбачева доктор медицинских паук, профессор В.Г. Вреусенко

Ведущее учреждение: Российский Научный Центр Рептгенораднологии Министерства Здрапоохранення России.

Защита состоится « » 1999г. на заседании

диссертационного совета К.001.17.01 при Российском онкологическом научном центре им. Н.Н.Ьлохина РАМН (115478, Москва, Каширское шоссе. 24).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Ьлохина РАМП.

Автореферат разослан « /У » ^Ж^М/УЦхА1999г.

Ученый секретарь Специализированного совета доктор медицинских паук, профессор В.С.Турусов

Рпз. ¥/г ¿Аи. - з о

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. В общей структуре онкологических заболеваний женской репродуктивной системы рак яичников составляет свыше 20% всех злокачественных опухолей, является трудным как для ранней диагностики, так и для адекватного лечения. Рак яичников объединяет группу разнообразных гистогенетических вариантов опухоли, которые отличаются обширным метастазированием и агрессивным клиническим течением, у 2-3% больных во время установления диагноза имеются гематогенные метастазы в печени, головном мозге и легких (B.I I.Ko зачеико, 1998).

Средний показатель заболеваемости раком яичников достигает ог 5,4 "- до 10 на 100 тысяч женского населения. Значение проблемы злокачественных опухолей яичников определяется тем, что рак яичников занимает 7 место по частоте заболевания и 5 место среди причин смерти от всех опухолевых заболеваний у женщин в России и при этом средний возраст больных составляет 58 лет (Е.М.Аксель, В.В.Двойрин, Н.Н.Трапезников, 1994). Несмотря на успехи в терапии рака яичников и совершенствовании методов диагностики за последние десятилетия, к сожалению, не отмечено улучшения отдаленных результатов его лечения (В.С.Свиницкий, 1992).

С целью дальнейшего углубленного понимания патогенеза рака яичников возникает необходимость изучения роли биологически активных веществ в механизмах регуляции опухолевого роста и метастазироваиия. Особое внимание в последние годы исследователи уделяют изучении) апоптоза или программированной гибели клетки с характерными морфологическими и биохимическими признаками (Thompson C.B., 1995).

Апоптоз - исключительно важный механизм поддержания гомеостаза многоклеточного организма. Благодаря программированной гибели

удаляются поврежденные, завершившие свой жизненный путь, а также «нежелательные» клетки, без повреждения клеточного микроокружения (Patel 'Г. и соавт., 1995). Нарушение процессов клеточной гибели может приводить к возникновению патологических состояний, к числу которых относятся и онкологические заболевания. Различные патологические процессы, подавляющие механизмы активации апоптоза, могут приводить к выживанию клеток с онкогенными мутациями (Bedi А. и соавт., 1995).

В последние годы стало известно, что одной из ключевых молекул, участвующих в развитии ^«.«-опосредуемого апоптоза, является Fas-рецептор. Л»--рецептор - трансмембранный гликопротеин 1 тина (синонимы ЛРО-1, СД-95) и индуцирует апоптоз в клетке после взаимодействия с Fas-лигандом или атомистическими моноклонапьными антителами против Fas. Причиной устойчивости опухолевых клеток к /•«^-зависимому апоптозу может быть повышенная продукция растворимого /ч«-антигена (sFas-антигепа) этими клетками, который является продуктом альтернативного сплайсинга полноразмерной молекулы Fas (Cheng J. и соавт., 1994; Cascino I. и соавт., 1995) и способен подавлять /чк-опосредуемый апоптоз. Повышенная концентрация растворимого Fas (sFas) была выявлена при аутоиммунных заболеваниях, таких как болезнь Грейвса (Sliimaoka Y. и соавт., 1998), а также при системном туберкулезе кожи (Fushimi М. и соавт., 1998). Повышенный уровень sFas наблюдали также при гепатоцеллюлярной карциноме, причем у больных множественной гепатоцеллюлярной карциномой концентрация sFas была выше по сравнению с его уровнем при локализованной опухоли (Jotlo S. и соавт., 1998).

В связи 'ним определение концентрации «/-'¿«-антигена в сыворотке крови больных злокачественными опухолями яичников позволит выяснить взаимосвязь его с особенностями клинического течения рака яичников и прогнозом заболевания.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ - изучение содержания растворимого /чк-ангигена в сыворотке крови больных доброкачественными и злокачественными новообразованиями яичников для оценки его взаимосвязи с основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания и прогнозом.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Провести сравнительное определение содержания растворимого /ч*5-антигена в сыворотке крови больных злокачественными и доброкачественными опухолями яичников, а также практически здоровых женщин соответствующего возраста.

2. Изучить уровень растворимого Fяí-aнтигeнa в сыворотке больных раком яичников с учетом основных клинико-морфологических характеристик заболевания (возраста, стадии болезни, морфологического варианта строения опухоли и степени ее дифференцировки).

3. Провести сравнительный анализ концентрации растворимого /чг.?-антигена в сыворотке больных раком яичников и ее взаимосвязь с эффективностью адыовантной химиотерапии.

4. Оценить клиническое значение растворимого /чм-антигена в прогнозе безрецидивной выживаемости больных раком яичников.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Впервые проведено сравнительное определение содержания растворимого Яял-антигена в сыворотке крови больных злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников с учетом основных клинико-морфологических характеристик заболевания, а также изучена его связь с клиническим течением и прогнозом заболевания.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Настоящая работа представляет практический интерес для оценки взаимосвязи концентрации растворимого /чм-антигена в сыворотке крови больных раком яичников и длительности безрецидшшой выживаемости.

Сравнительное исследование содержания растворимого /чк-аптигена в сыворотке больных раком яичников с целью возможного использования этого показателя как критерия прогноза болезни, а также возможною введения в схемы комплексной терапии заболевания препаратов, влияющих на экспрессию Fa^-peцeптopa и Fa$-лигaндa у больных раком яичников.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Основные результаты диссертации доложены на VI Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1999), на симпозиуме . «Национальные дни лабораторной медицины России» (Москва, 1999).

Материалы диссертации доложены 25 апреля 1999г. на совместной научной конференции хирургического отделения гинекологии, хирургического отделения опухолей органов женской репродуктивной системы, лаборатории клинической биохимии НИИ клинической онкологии Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН и кафедры онкологии Московской медицинской Академии им. И.М.Сеченова

ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

По теме диссертации опубликованы 4 научные работы.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ.

Диссертация написана на 108 страницах машинописною 1екхта. включает введение, обзор данных литературы, главу материалы и методы исследования, результаты собственных наблюдений, обсуждение полученных данных, заключение, выводы и список цитируемой литературы, который состоит из 11 работ отечественных и 139 работ зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 13 таблицами, 8 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Клиническая характеристика больных. В исследование включены больные злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников, которые находились на лечении в Российской онкологическом научном центре им. Н.Н.Блохина РАМН с апреля 1994 по февраль 1998 гг.

Все обследованные больные были разделены на 2 группы: I группа -больные доброкачественными новообразованиями яичников и II группа -больные раком яичников.

В I группе обследованы больные раком яичников в возрасте от 24 до 85 лет в разных стадиях заболевания. Из них: в возрасте до 40 лет было 4 больных; от 41 до 50 лет - 11; от 51-60 лет - 9; старше 60 лет - 9 больных.

Из 33 больных раком яичников у 22 выявлен асцит (больные 3-4 стадии заболевания и возрасте - от 28 до 72 лет). У 11 больных раком яичников асцита не отмечено (больные в 1,2,3 стадиях заболевания и возрасте - от 24 до 85 лет).

Во II группе было обследовано 27 больных доброкачественными новообразованиями яичников в возрасте от 18 до 66 лет.

Контрольную группу составили 60 практически здоровых женщин в возрасте от 17 до 67 лег.

Всем больным проводилось обследование, которое включало асппрационную биопсию эндометрия, пункцию полости малого таза через задний свод, лапароцентез, ультразвуковое исследование органов малого таза, печени, почек и забрюшинного пространства, рентгенографию легких, эзофагогастродуоденоскопию, маммографию по показаниям, общеклинические и функциональные методы исследования для оценки состояния сердечно-сосудистой и дыхательных систем, печени и почек.

Среди больных раком яичников: в 1 стадии заболевания - 3, во 2 стадии - 2, в 3 стадии - 23, в 4 стадии - 5 больных (табл. 1).

Таблица 1.

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ ПО СТАДИЯМ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Стадия заболевания Число больных

FIGO TNM Абсолютное число %

1 T,N„M0 2 9,0

2 Т2Ц,М0 2 6,0

3 T,N,M0 23 69,6

4 T.|N|M, 5 15,4

У 12 из 33 больных раком яичников были выявлены сопутствующие заболевания: гипертоническая болезнь (2 больных); ИБС, атеросклеротический кардиосклероз (2); язвенная болезнь желудка (1); неспецифический язвенный колит (1); мочекаменная болезнь (2); хронический холецистит (2); хронический гастрит (1); желчекаменная болезнь (1).

Сопутствующие заболевания репродуктивной системы выявлены у 12 (41%) больных раком яичников: из них хроническое воспаление придатков матки у 4 (14%); миома матки - у 2 (7%); полип шдометрия - у 1 (3,4%);

полип цервикального канала - у 1 (3,4%); синхронный рак тела матки 1а стадия - у 1 (3,4%); рак молочной железы во 2а стадии - у I (3,4%); фиброаденома молочной железы - у 1 (3,4%); нейрообменношдокринный синдром, опсоменоррея - у 1 (3,4%) больной.

Менструальная функция была сохранена у 14 (42,4%) больных раком яичников: из них в возрасте до 40 лет - 4 больных, 41-45 лет - 9 больших. Постменопауза до 5 лет была у 6 больных, 6-10 лег - у 4, более 10 лег - у 10 больных.

Всем больным проводилось предоперационное лечение с учетом их общего состояния и сопутствующих заболеваний.

Больным раком яичников были выполнены следующие виды хирургических операций, которые представлены в таблице 2.

Таблица 2.

ВИДЫ ХИРУРГИЧЕСКИХ ОПЕРАЦИЙ, ПРОИЗВЕДЕННЫЕ БОЛЬНЫМ РАКОМ ЯИЧНИКОВ

Виды операций Число больных

Абсолютное число %

Надвлагалищная ампутация матки с придатками и резекция большого сальника 15 45,5

Экстирпация матки с придатками и резекция большого сальника 9 27,3

Экстирпация культи шейки матки с придатками и резекция сигмовидной кишки. Резекция большого сальника 1 3,0

Удаление придатков, резекция большого сальника 4 12,1 6,|

Лапароцентез 2

Лапаротомия, биопсия большого сальника I 3,0

Лапаротомия, наложение цекостомы, дренирование брюшной полости 1 3,0

При морфологическом исследовании удаленных препаратов выделены следующие гистологические варианты опухолей: аденокарцинома яичников - 29; серозный рак - 4. Из 29 аденокарнином яичников серозная папиллярная цистадепокарцинома обнаружена в 13 наблюдениях, серозная цистаденокарпинома - в 10, муципозная цистадепокарцинома - в 4, эндометриоидная цистадепокарцинома - в 2 наблюдениях. Данные по ценке степени дифференцировки опухоли представлены в таблице 3.

Таблица 3.

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ С УЧЕТОМ СТЕПЕНИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ОПУХОЛИ

Степень дифференцировки опухоли яичников Число обследованных опухолей

Абсолютное число %

Высокодифференцированная 4 13,8

Умереннодифференцированная 3 10,3

Низкодифференцированная 26 75,9

Всего: 33 100

Во II группе обследованы больные доброкачественными опухолями яичников: в возрасте до 40 лет - 10, 41-50 лет - 6, 51-60 лег - 3, старше 60 лет - 6 больных.

В группу из 27 больных доброкачественными новообразованиями яичников вошли: дермоидная киста (7 наблюдений), серозная папиллярная цистаденома (5), эндометриоидная киста (3), цистаденофиброма (3), фиброма (3), киста желтого тела (3), простая серозная киста (2), киста желтою тела (2), муципозная цистаденома (2) (табл.4).

Таблица 4.

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ЯИЧНИКОВ С УЧЕТОМ ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ

Доброкачественные новообразования яичников Число наблюдений

Абсолютное число %

Дермоидная киста 7 25,9

Серозная папиллярная цистаденома 5 18,6

Эндометриоидная киста 3 11,1

Цистаденофиброма 3 11,1

Фиброма 3 11,1

Простая серозная киста 2 7,4

Киста желтого тела 2 7,4

Муцинозная цистаденома 2 7,4

Всего: 27 100

В группе больных доброкачественными опухолями сопутствующие заболевания выявлены у 5 больных: гипертоническая болезнь (1), ожирение II стадии (1), варикозное расширение вен нижних конечностей (1), хронический тонзиллит (1), язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки (1).

Больным доброкачественными новообразованиями были выполнены следующие виды хирургических операций (табл.5).

Сопутствующие заболевания репродуктивной системы выявлены у 11 (52%) больных II группы: хроническое воспаление придатков 4 (19%), первичное бесплодие 2 (9%), миома матки 3 (14%), рак шейки матки 2 стадии 1 (5%), полип цервикального канала и фиброаденома молочной железы 1 (5%), гиперплазия эндометрия 1 (5%).

Таблица 5.

ВИДЫ ХИРУРГИЧЕСКИХ ОПЕРАЦИЙ, ПРОИЗВЕДЕННЫЕ БОЛЬНЫМ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ЯИЧНИКОВ

Число наблюдений

Виды операций Абсолютное %

число

Экстирпация матки с придатками 4 14,8

и резекция большого сальника

Надвлагалищная ампутация матки с

придатками и резекция большого 6 22,?

сальника

Резекция яичника 1 3,7

Правосторонняя тубоовариоэктомия 11 40,8

Левосторонняя тубоовариоэктомия 4 14,8

Экстирпация шейки матки, удаление

правого яичника, резекция большого ,1 3,7

сальника

Всего: 27 100

Контрольную группу составили 60 практически здоровых женщин в возрасте от 17 до 67 лет. В репродуктивном возрасте было 25 женщин в возрасте от 17 до 47 лет. Остальные 35 женщин были в постменопаузе от 1 до 20 лет.

Метод определения «/-до-антигена.

Для определения концентрации растворимого /чк-антигена антигена) в сыворотке крови больных раком и доброкачественными новообразованиями яичников перед лечением и в группе контроля (60 практически здоровых женщин) кровь натощак забирали из локтевой вены с 8.00 до 9.00 часов утра. После свертывания крови пробирки центрифугировали при 500xg в течение 10 мину!, сыворотку отбирали и

разливали по промаркированным пробиркам и хранили при температуре -20°С до использования.

Концентрацию л/чм-антигена определяли иммуноферментным методом с использованием моноклональных антител против Fas SA-8 (IgGl(k); (8,8±0,6)х107, которые сорбировали на планшетах (Linbio) в 0,05 М карбонатном буфере (рН 9,6) в концентрации 5,0 мкг/мл в течение ночи при С.

Для инактивации свободных центров связывания плашжмы инкубировали с 1% раствором бычьего сывороточного альбумина (БСЛ) в фосфатно-солевом буфере (PBS) (рН 7,2) 1 час при 37"С. Затем в планшеты вносили сыворотки больных и практически здоровых женщин контрольном группы, которые хранили до использования при температуре -20"С. В качестве положительного контроля в каждый планшет вносили последовательные двукратные разведения полноразмерного рекомбинантного Fas от 40 нг/мл до 0,15 нг/мл. Планшеты инкубировали 1,5 часа при 37°С.

После инкубации планшеты шесть раз интенсивно промывали раствором PBS, содержащим 0,1% Tween 20 («Sigma», США) (буфер для отмывки). Процедуру отмывки далее повторяли после каждой стадии теста.

После отмывки в планшеты вносили биотинилированные моноклональные антитела против Fas SA-7 (IgG ЦК); (9,52±l,4)xl0s в концентрации 12 мкг/мл в буфере для отмывки, содержащем 0,1% БСЛ. Планшеты с биотинилированными антителами инкубировали 2 часа при 37"С или ночь при +4°С.

Затем в планшеты вносили раствор сфепгавидпн-мероксидан,! («Amersham», Великобритания) в рабочем разведении в буфере для отмывки. Планшеты инкубировали 1 час при 37"С. Далее в планшеты вносили свежеприготовленный раствор 0,04% ортофенилендиамина в 50 мМ цитрат-

фосфатном буфере (рН 5,0), содержащем 0,03% перекиси водорода. Планшеты инкубировали 15-20 минут при комнатной температуре до развития окраски. Реакцию останавливали добавлением в каждую лунку 50 мкл 10% серной кислоты, оптическую плотность измеряли при длине волны 492 им на спектрофотометре MR 700 Microplate Reader («Dynatech Labs», США). Концентрацию .v/b.ç-ain игена определяли по калибровочной кривой, соответствующей каждому планшету.

Математический анализ полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ SAS.

УРОВЕНЬ РАСТВОРИМОГО Fi/.v-АНТИГ ЕНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫМИ И ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ЯИЧНИКОВ

Определение концентрации растворимого л/чм-антигена проводили иммуноферментпым методом в сыворотке крови 21 больной, страдавших доброкачественными новообразованиями яичников.

Больные были в возрасте от 18 до 66 лет (средний возраст 45,7±5,8 лет).

Концентрация у/ч/л-антнгена в сыворотке крови эюй группы больных колебалась в широких пределах. При этом следует отметить, что у 6 больных sFas-антиген не выявлен, что составляет 22,2%.

Следует отметить, что лГал-антиген выявлялся чаще у больных доброкачественными новообразованиями яичников и уровень его был выше (частота выявления - 77,8%, уровни колебания - 0,65-20,0 мг/мл, средний уровень - 4,9+2,3 нг/мл), по сравнению с группой контроля (частота

выявления - 57,0%, уровни колебания - 0,52-1,4 нг/мл, средний уровень -0,86+0,23 нг/мл).

При этом отмечена обратная корреляционная зависимость между возрастом больных доброкачественными новообразованиями яичников и уровнем ^/ч75-антигена в сыворотке крови (коэффициент корреляции г= -0,95).

Выявлены следующие гистологические варианты доброкачественных новообразований яичников (табл.6).

Таблица 6.

КОНЦЕНТРАЦИИ ^як-АНТИГЕНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ЯИЧНИКОВ С УЧЕТОМ ИХ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО СТРОЕНИЯ

Гистологическое строение опухоли Средний уровень х/чк-антигена в сыворотке крови больных (нг/мл)

Зрелая тератома 8,3 ± 6,8

Серозная цистаденома 3,2 ± 2,3

Простые кисты 3,6 ± 1,3

Все больные в зависимости от гистологического строения опухоли были разделены на подгруппы:

1 подгруппа - зрелые тератомы (7 наблюдений);

2 подгруппа - серозная цистаденома (13 наблюдений);

3 подгруппа - простые кисты, различные по гистогенезу (7 наблюдений).

В 1 подгруппе .т/чк-антиген определяли у больных зрелой тератомой яичников в возрасте от 18 лет до 61 года (средний возраст 37,4±5,6 лет). Растворимый ^.$-антиген выявлен у 6 из 7 пациентов, что составляет 85,7%.

Средняя концентрация БРаБ-аптигепа составила 8,3±6,6 нг/мл (пределы колебания - от 1,5 до 20,0 нг/мл).

Следует отметить, что у 3 больных этой подгруппы выявлены максимальные значения л/чк-антигена, которые равнялись, соответственно, 20,0 нг/мл - тератома яичника; 20,0 нг/мл - дермоидная киста и 6,5 нг/мл -дермоидная киста.

Во 2 подгруппе было обследовано 13 больных серозной цистаденомой, средний возраст которых был равен 52,6+9,3 лет.

Концентрация л/чи-ашигена выявлена в сыворотке крови у 8 из 13 больных, что составляет 61,5%, а колебания концентрации л/чм-антигена были в пределах 0,8 - 6,3 нг/мл и в среднем составила - 3,2+2,3 нг/мл).

Третью подгруппу составили 7 больных простыми кистами яичников в возрасте от 28 до 66 лет (средний возраст 48,4±6,5 лет). У всех этих больных был выявлен л/чм-антиген в сыворотке крови, концентрация которого колебалась от 1,1 до 10,0 нг/мл. В среднем в 3 подгруппе уровень я/ч75-антигена равнялся 3,6±1,3 нг/мл.

Следует отметить, что максимальный уровень а/чи-антигена был выявлен в сыворотке крови двух больных эндометриоидной кнегой яичника и равнялся 10,0 и 7,6 нг/мл, соответственно.

При сравнении средних уровней ¿Тчм-антигена в трех выше указанных подгруппах пациентов с доброкачественными новообразованиями яичников нами выявлена следующая зависимость. Наиболее высокие концентрации л/чи-антигена обнаружсы в сыворотке крови больных зрелой тератомой и эндометриоидной кистой яичников.

Таким образом, у большинства обследованных нами больных доброкачественными новообразованиями яичников в сыворотке крови выявлен л/чк-аитигеп (77,8% обследованных образцов сыворотки крови).

При этом, преобладающего большинства больных концентрация яр'а.ч-антигена была менее 5,0 иг/мл, что составляет 77,8%.

Количественное содержание 5/чк-антигена определяли в обра¡пах сыворотки крови 33 больных раком яичников в возрасте от 24 до 85 лег (средний возраст - 53,9+4,7 лет) в разных стадиях заболевания.

Диагноз рак яичников у всех больных установлен впервые и до определения .^¿ю-антигена больные не получали лечения.

Растворимый /-ял-антиген выявлен в сыворотке 21 больной раком яичников, что составляет 66,7%. Концентрация л/чи-антигена колебалась в пределах от 0,65 до 20,0 нг/мл. Среднее значение концентрации антигена по группе составило 4,6+1,7 нг/мл.

При сравнении средних значений концентрации .т/чм-антнгена в сыворотке крови больных доброкачественными (4,9+2,3 иг/мл) и злокачественными (4,6+1,7 нг/мл) новообразованиями яичников достоверных различий нами не было выявлено (р>0,05).

Однако, необходимо указать на обнаруженную нами тенденцию к прямой корреляционной зависимости (коэффициент корреляции г 0,8) между возрастом больных и уровнем яЛк-атигена в сыворотке крови больных раком яичников в отличие от группы пациентов с доброкачественными новообразованиями, у которых выявлена обращая корреляционная зависимость (г= -0,95).

Также следует отметить, что в отличие ог группы наблюдения с доброкачественными новообразованиями яичников, у большинства больных раком яичников (55,6%) концентрация .т/-ш-аптнгена в сыворотке крови была выше 5,0 нг/мл.

Среди обследованных больных раком яичников выделены следующие его морфологические варианты.

Серозная аденокарцннома - 24 наблюдения, которые составили основную группу больных раком яичников. Концентрация $/чк-антигена была выявлена у большинства из них (14 наблюдений, что составило 58,4%).

Уровень «Рол-антигена колебался в пределах от 0,65 до 20,0 нг/мл и составил в среднем - 4,8+2,3 нг/мл. Более, чем у половины больных (8 из 14 наблюдений) с наличием х/чи-антигена в сыворотке крови его концентрация не превышала 2,0 нг/мл (от 0,65 до 1,9 нг/мл).

При этом, у большинства больных (71,4%), у которых был обнаружен л/ч/л-антиген в сыворотке крови, его уровень был менее 5,0 нг/мл и только в 4 (28,4%) наблюдениях - более 5,0 нг/мл. Последнее также не отличало группу больных раком яичников от группы пациентов с доброкачественными новообразованиями.

Мунпнознап аденокарцннома - 3 наблюдения и концентрация ¿/чк-антигена была равна 4,9; 4,0 и 1,9 нг/мл.

Эндомегриоиднан аденокарцннома - 2 наблюдения и уровень л/чи-антигена был равен 3,2 и 1,2 нг/мл, соответственно.

Серозный рак - 4 наблюдения и уровень ,?/чм-антигена в сыворотке крови больных был равен 1,5 и 1,7 нг/мл, в двух наблюдениях íFa9-aнтигeн не был выявлен.

Следовательно, если разделить больных раком яичников с учетом концентрации ¿/чю-антигена в сыворотке крови, то можно получить 4 подгруппы больных (рис.1).

1 подгруппа - зРаэ-антиген в сыворотке крови не определяется (12 наблюдений - 36,3%);

2 подгруппа - уровень я/чгя-антигена <=2,0 нг/мл (И наблюдений -33,3%);

3 подгруппа - уровень л/чм-антигена >2,0<=5,0 нг/мл (6 наблюдений -18,1%);

4 подгруппа - уровень я/чм-антигена >5,0 нг/мл (4 наблюдения -

12,3%).

Следовательно, концентрация л^а.т-антнгена в сыворотке кропи больных раком яичников у половины больных (51,4%) была в пределах 5,0 нг/мл.

Проведено исследование концентрации растворимого /чк-ангигена в сыворотке крови больных раком яичников с учетом возраста. Для ¡того все обследованные больные были разделены на 4 подгруппы:

Рнс.1.Частота выявления ^<к-антнгена в сыворотке крови больных раком яичников с учетом его уровня.

40 35 30

§ 20

ю

а? 15

10 5 0

Концентрация вРаз-антигена, нг/мл

1 подгруппа - 5 (15,2%) больных в возрасте <=40 лет. Уровень .у/-'ах-антигена в сыворотке крови колебался от 1,4 до 3,1 нг/мл, в 2 наблюдениях .^ял-антиген не выявлен. Среднее значение я/чк-ангигена составило 2,010,8 нг/мл.

2 подгруппа - 11 (33,3%) больных в возрасте от 41 до 50 лет. Концентрация ,?Га.у-антигена колебалась от 0,65 до 8,70 нг/мл, в 6 образцах

5 25

сыворотки крови л/чк-антиген не выявлен, что составляет 54,5%. Среднее значение л7-'го-антигена равнялось 1,72±0,57 нг/мл.

3 подгруппа - 6 (18,2%) больных в возрасте 51-60 лет. Уровень я/чи-антигена колебался от 1,1 до 20,0 нг/мл, в 1 наблюдении ^ау-антиген не выявлен. Среднее значение ,у/ч«-антигена в подгруппе составило 8,5±6,6 нг/мл.

4 подгруппа - II (33,3%) больных старше 60 лет. Уровень ¿/•го-антигена колебался ог 1,17 до 9,90 нг/мл, в 3 образцах сыворотки крови ,у/ч/$-антшен не выявлен. Среднее значение составило - 4.8±2,6 нг/мл.

При анализе полученных нами данных о концентрации \/ч»-антигена » сыворо!ке крови больных раком яичников в зависимости от возраста выявлено следующее: в возрасте <=50 лет средняя концентрация ^см-антигена была ниже (1,72+0,57 нг/мл), чем в возрасте 51-60 лет, среднее " значение которого равнялось 8,5+6,6 нг/мл и старше 60 лет - 4,76±2,6 нг/мл, соответственно. ^

При этом следует отметить достоверную корреляцию уровня sFas-ангигена в сыворотке крови с возрастом больных.

При сравнении средних концентраций .у/чм-антигена в сыворотке крови больных раком яичников с асцитом (4,2±3,1 нг/мл) и без асцита (4,5±1,9 нг/мл) достоверных различий нами не выявлено.

Не выявлено достоверной корреляционной зависимости между концентрацией л/чк-антигена в сыворотке крови больных раком яичников и степенью дифференцировки опухоли. Обнаружено также, что концентрация .у^м-антигена в сыворотке крови больных низкодифференцированным раком яичников с выше, чем в сыворотке больных высокодифференцированной опухолью (табл.7).

Таблица 7.

УРОВЕНЬ ^ах-АНТИГЕНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ОПУХОЛИ

Степень дифференцнровкн опухоли Среднее значение

5/чг5-антнгена (нг/м.ч) Высокодифференцированная 1,45 ± 0,20

Умереннодифференцированная 8,95 ± 6,24

Низкодифференцированная 4,34 ± 2,50

У обследованных нами больных раком яичников не выявлена корреляционная зависимость между уровнем я/чм-антигеиа в сыворотке крови больных и стадией заболевания.

Концентрацию лРау-антигена определяли в сыворотке крови 33 больных раком яичников с учетом размеров опухоли все они были ращелены на 2 подгруппы (рис.3):

1 подгруппа - больные с размерами опухоли <=10,0 см;

2 подгруппа - больные с размерами опухоли больше > 10,0 см;

При анализе полученных данных нами выявлена достоверная корреляционная зависимость (г=0,95) между уровнем л/чк-антигена I! сыворотке крови больных раком яичников и размером опухоли (рис.2).

Рнс.2.Корреляция концентрации ^де-антигеиа в сыворотке крови больных раком яичников в зависимости от рашера опухоли.

25

20

от га и. от

15

10

■■ ■■ ■■ ■ ■

10 20 30

Размер опухоли, см

40

Уровень я/чк-ангнгена в сыворотке крови больных раком яичников с размерами опухоли <=10,0 см колебался от 1,1 до 20 нг/мл. Среднее значение составило 7,9±6,8 нг/мл. В данной подгруппе ^¿м-антиген не выявлен у 7 больных, что составляет 38,9% (рис.3).

Концентрация л/чи-антигена в сыворотке крови больных 2 подгруппы колебалась от 1,17 до 14,9 нг/мл, у 5 больных ¿/чи-антиген не выявлен, что составляет 15,3%. Среднее значение составило 9,2±5,6 нг/мл.

2.1

Рис.З.Сравненне средних уровней концентрации А/чм-апгигена в сыворотке крови больных раком ячнников в зависимости от размера опухоли.

Уровень ¿/чи-антигена анализировали у 19 пациенток в возрасю от 49 до 85 лет с длительностью постменопаузы - от 1 года до 33 лет (табл.8).

Таблица 8.

УРОВЕНЬ *Лк-АНТИГЕНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ И ДЛИТЕЛЬНОСТЬ ПОСТМЕНОПАУЗЫ

Длительность постменонаузы Среднее значение х/чю-ан гигепа,

нг/мл

Менее 5 лет 5,20 ±4,30

От 6 до 10 лет 1,8 ±0,73

Более 10 лет 5,80 ±3,90

Концентрация ,?/ч«-антигсна в сыворотке крови больных раком яичников в постменопаузе колебалась от 1,1 до 20,0 нг/мл. Расмюримый 5^о5-антиген не выявлен у 5 из 19 больных, что составляет 26,3%.

Среднее значение концентрации /•ял-антигена в сыворотке крови больных раком яичников с длительностью ностменонаузы <-5 ле! сосмвн.ю

5,2±4,3 нг/мл. Растворимый я/ч75-антиген не выявлен в 1 образце сыворотки крови, что составляет 20%.

Среднее значение л/ч/л-антигена в сыворотке крови больных с длительностью постменопаузы от 6 до <=10 лет составило 1,8+0,73 нг/мл.

Концентрация я/ч/л-антигена выявлена у 7 (63,7%) больных с длительностью постменопаузы больше 10 лет. Уровни 5/чк-антигена колебались от 1,2 до 14,9 нг/мл. Среднее значение л^Ъх-антигена составило 5,8+4,9 нг/мл.

13 подгруппе больных, у которых менструальная функция сохранена, было 14 пациенток в возрасте от 24 до 49 лет.

Концентрация л/чк-антигена была выявлена у 7 больных данной подг руппы, что составляет 50%. Их уровни колебались от 0,65 до 3,1 нг/мл и . в среднем равнялись 2,1 + 1,1 нг/мл.

Анализ представленных данных свидетельствует о том, что 5/42.5- -антиген более часто выявлялся в сыворотке крови больных раком яичников в периоде постмснопаузы (73,7%), чем у пациенток в репродуктивном возрасте (50%) и уровни растворимого ^¿и-антигена были выше у первых.

Вместе с тем не отмечено четкой корреляционной зависимости между уровнем я/чк-антигена в сыворотке крови больных раком яичников и длительностью постменопаузы.

Среди больных с более длительным и коротким периодом постменопаузы выявлялись образцы сыворотки крови, в которых с одинаковой частотой определялись как высокие, так и низкие значения ^си-антигена.

Анализ концентрации растворимого ^¿-антигена в сыворотке крови больных раком яичников с учетом безрецидивной выживаемости больных проводился в 2 подгруппах:

1 подгруппа - 12 (39,4%) пациенток, у которых ^ял-антиген п сыворотке не был выявлен. Средний возраст больных 49,5±3,6 лет.

2 подгруппа - 19 пациенток, у которых концентрация л/чм-ат нгена и сыворотке крови колебалась от 0,65 до 20,0 нг/мл (среднее значение составило 4,6±1,7 нг/мл). Средний возраст больных в подгруппе 53,9±4,7 лет.

У 90,9% больных 1 подгруппы медиана безрецидивной выживаемости составила 12 месяцев (1 больная из этой подгруппы умерла). Длительность безрецидивной выживаемости в данной подгруппе составила 21,()±7,8 месяцев.

Медиана безрецидивной выживаемости 12 месяцев у 68,4 % больных из 2 подгруппы, умерло 6 (31,4%) больных из данной подгруппы. Безрецидивная выживаемость во 2 подгруппе составила 14,6+7,3 месяцев.

Из всей группы обследованных больных раком яичников умерло 7 больных, что составляет 21,2%. Концентрация ¿/'"(«-антигена в образцах сыворотки крови умерших колебалась от 1,2 до 8,7 нг/мл, в 1 обрате сыворотки крови .у/чи-антиген не выявлен. Среднее значение .у/чм-антпгспа равнялось 3,25±1,76 нг/мл.

Уровень 5/чи-антигена в сыворотке крови больных раком яичников, которые не имелют рецидива, колебался от 0,65 до 20,0 нг/мл. Среднее значение ¿/чм-антигена составило 4,8±2,9 нг/мл.

Из анализа представленных данных следует, что наиболее часто л/чк-антиген определялся в образцах сыворотки крови, умерших больных.

При этом следует отметить, что средний уровень конпенфацпп растворимого /чи-антигепа в образцах сыворотки кропи умерших больных (3,25±1,76 нг/мл) были более низкими, чем в сыворотке крови больных (4,84±2,90 нг/мл), у которых нет признаков рецидива заболевания.

Более длительный период безрецидивной выживаемости выявлен среди больных раком яичников, в сыворотке которых растворимый ^«-антиген не выявлен (табл.9).

Таблица 9.

ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ БЕЗРЕЦИДИВПОЙ ВЫЖИВАЕМОСТИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ С УЧЕТОМ УРОВНЯ ^ял-АНТИГЕНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Концентрация х/чи-ан гнгена в сыворотке крови Продолжительность безрецндивного периода (месяцы)

л/;'ш'-антиген не обнаружен 21,4 ±7,8

л/чи-антиген от 0,65 до 20,0 иг/мл 14,6 ±7,3

Таким образом, нами установлено, что средняя концентрация антигена в сыворотке крови больных раком яичников выше в 5,34 раза по сравнению со здоровыми женщинами. У больных доброкачественными новообразованиями средний уровень ¿Гоу-антигена в сыворотке крови был в 5,7 раза выше, чем в сыворотке крови практически здоровых женщин.

Значение sF(/s•aнтиrcнa как прогностического критерия в прогнозе общей выживаемости при раке яичников до конца не выяснено. Необходим дальнейший анализ уровня ^а5-антигена в сыворотке крови больных с выявлением рцидива опухоли, при прогрессировании заболевания, а следовательно, и в оценке чувствительности опухоли к проводимой химиотерапии.

л

В ы воды

1. Растворимый /-го-антиген (лУ-го-антигеп) в сыворотке крови выявлялся чаще у больных доброкачественными (77,7%) и злокачественными (66,7%) новообразованиями яичников по сравнению с группой контроля (практически здоровыми женщинами) (36,9%) соответствующего возраста и менструального статуса.

2. Не обнаружено достоверных различий в уровне .^го-антигена между больными раком (4,6+1,7 нг/мл) и доброкачественными новообразованиями яичников (4,9+2,3 нг/мл). Самые низкие значения л/чм-антигена выявлены в сыворотке крови практически здоровых женщин (0,86+0,23 нг/мл, пределы колебания 0,52-1,14 нг/мл).

3. Обнаружена обратная корреляционная зависимость между возрастом здоровых женщин и больных доброкачественными новообразованиями яичников и концентрацией у/го-антигена в крови (г= -0,95 и к- -0,95, соответственно) в отличие от больных раком яичников, у которых имела место тенденция к прямой корреляционной связи уровня л/^го-антигена и возраста (г= 0,8).

4. Концентрация лТ-го-антигена в сыворотке крови больных раком яичников не зависит от стадии заболевания, гистологической структуры и степени дифференцировки опухоли, наличия асцита, но зависит от размеров опухоли, а именно, выявлена прямая корреляционная связь показателей данного белка в крови с размерами опухоли. Это может свидетельствовать о том, что клетками-продуцентами л/-го-антигена являются опухолевые клетки.

5. Показано, что уровень ¿/^«-антигена в сыворотке крови больных раком яичников зависел ог менструального статуса пациенток. Наиболее низкие уровни антигена выявлены у больных в репродуктивном возрасте.

6. Продолжительность безрецидивной выживаемости была выше среди больных раком яичников, в сыворотке крови которых .т/чю-антиген не определялся.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.Рас торимый /-ш-антиген в сыворотке крови онкологических больных // Бюллетень -экспериментальной биологии и медицины. - 1999. -N.3. - с.328-331 (в соавторстве с Аббасовой С.Г., Кушлинским U.E., Мурашевым А.П., Костанян H.A., Никогосям С.О., Бритвиным Т.А., Багировой 11.Ф., Соловьевым IO.I I., Липкиным В.М.. Трапезниковым 11.H.).

2.Клинические исследования растворимого /•я.г-антигена в сыворотке крови больных опухолями яичников // Тезисы докладов VI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 19-23 апреля 1999г. - с.1 86 (в соавторстве с Кушлинским Н.Е., Аббасовой С.Г., 11пкогосян С.О., Костанян И.А.. Липкиным Ü.M.).

3.Рас творимый /чм-ашиген (sFas) в сыворотке крови больных злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников // Тезисы докладов симпозиума «Национальные дин лабораторной медицины в России». - Москва, 12-15 октября 1999г. - с.76-80 (в соавторстве с Аббасовой С.Г., Кушлинским U.E., Никогосян С.О., Нрмиловой В.Д., Чеснокомой A.B., Костанян H.A.).

ч.

4.Soluble Fas-antigen (sFas) in the serum of patients with ovarian tumors // Seventh Biennial Meeting of the International Gynecologic Cancer Society. -September 26-30, 1999. - Rome Italy. - p. 186 (in colaboration Kushlinsky N., Abbasova S., Nikogosyan S., Obusheva M., Kostanyan I., Lipkin V., I aktionov K„ Kozachcnko V.).

Участок множительной техники OHli им. H. Н. Блохина РАМН

Подл, к печати g ¿ 1/ 9

Заказ 7¿i

Тираж 100 экз.