Автореферат и диссертация по медицине (14.00.45) на тему:Психотропная активность новых производных фосфинилуксусной кислоты и их эффективность при лечении экспериментального алкоголизма

министерство здравоохранения россии государственный научный центр наркологии

ргв

од

УДК 615.212.7:9.547./4:015

j Q q^ На правах рукописи

хайрутдинова эльвира ильгизаровна

пототропная активность новых производных фошшилуксусной кислоты и и эффективность при лечении экспериментального алкоголизма

14.00.45 - наркология 14.00.25 - фармакология

автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Модква 1994 '

Работа выполнена в Институте медико-биологических проблем наркологии (даректор-Чл.кор. И.П.Анохина), ГНЦ Наркологии (даректор-проф. А.Г.Врублевский) МЗ России

Научные руководители: Член-кор, РАМН, профессор. И.П. АНОХИНА кандидат биологических наук В.В.РОЖАНЕЦ

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор А.И.Майский доктор медицинских наук С.К.Судаков

Ведущее учреждение - Российский Государственный Медицинский Университет (кафедра молекулярной фармакологии)

Защита диссертации состоится " _ 1994 г.

в часов на заседании специализированного совета Д 074.50,01. ГНЦНаркологии по адресу: 121921, Москва, Малый Могильцевский . пер., дом 3.

О диссертацией можно ознакомиться в библиотеке центра.

Автореферат разослан " "_ 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

О.Ф.Львова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ЖЕ^МЬНОСТЬ_ПЮБЛЕШ Широкое распространение алкоголизма и яйства представляет серьезную угрозу для общества. В настоящее время для лечения зависимости от алкоголизма «меняются антвдепрессанты , нейролептики, транквилизаторы, отропы. Многие из этих средств, оказывая присущее им (ецифическое психотропное действие, способны уменьшать |раженность первичного патологического влечения к алкоголю ¡.Б.Альтшулер 1983, 1985, О.В.Буров и др. 1985).

Вместе с тем, существующие метода психофармакотерапии коголизма во многих случаях не обеспечивают становления ительной ремиссии ( Н.Н.Иванец, Нейман 1988), а ряд препаратов, юаде всего анксиолитики бензодиазепинового ряда, способны 1зывать лекарственную зависимость. Возможность применения многих .'ихотропных препаратов ограничена в условиях амбулаторной >актики, ввиду выраженности седативного компонента в . спектре мхотропной активности этих средств и других присущих им Юочных эффектах.

На первый план выходит задача разработки новых лекарственных »пиратов, обладаюцих меньшим числом побочных эффектов,лишенных юсобности вызывать пристрастие и, самое главное, прицельно «действовать на основные звенья' патогенеза болезни (МагапЗо А. ег а1., 1987). Одним из перспективных путей, поиска новых- психотропных вещестЕ антиалкогольными свойствами является выявление необходимой ¡рмакологической активности в ряда производных фосфинилуксусной юлоты. Это обусловлено тем, что в этом ряду обнаружен препарат )сфабензид, обладающий оригинальной психотропной активностью, метающий транквилизирующее и вегето'тропное действие, а в шнике показавший и "антиалкогольный" эффект. {.Н.Иванец, 1993).

"Антиалкогольная" активность фосфабензида имеет существенные »имущества перед применяемыми препаратами, они заключаются в эедупрекдении формирования алкогольной мотивации, в отсутствии

привыкания к нему и отсутствии синергизма с алкоголем, ч позволяет применять ¿го в периоде ремиссии. Препар соответствует наиболее оптимальным методам лечения.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Поиск веществ эффективных пр экспериментальном алкоголизме среди нового ряда производил фосфинилуксусной кислоты; изучение спектра психотропно активности и механизма действия наиболее активных соединений

§МАЧИ_ИССЛЕДОВАНШл

1. Изучить некоторые стороны нейротропной активности гидразидов фосфинилуксусной кислоты и 6 гидразониевых сол гидразидов фосфинилуксусной кислоты, установить связь ме* химической структурой и действием.

2. Выявить соединения с наиболее выраженным действием на ЦН и изучить их воздействие на основные нейромедиаторные системы.

3. Выявить спектр "антиалкогольного" действия наиболее актив» соединений но различных моделях алкоголизма в сравнении фосфабензидом, а также решить вопрос о возможности их применен в практической медицине.

НАУЧНАЯ,_НОВИЗНА. Впервые проведено изучение психотрот свойств 6-ти новых гидразидов фосфинилуксусной кислоты и 6-гидразониевых солей гидразидов фосфинилуксусной кислот Установлено, что все они являются малотоксичными веществами и ладвют психотропной активностью, которая у гидразидов связана Г АМН-миметическим действием, а у гидразониевых солей . адреполитическим действием. '"Антиалкогольная" активно! гидразониевых солей гидразидов фосфинилуксусной кислоты выше, » у фосфабензида. Среди этого ряда выявлено два наиболее актив! соединения и исследован их характер действия на ОДС.

Установлено, что гидразониевая соль гидраз1 метилфенилфосфинилуксусной кислоты обладает антидепрессивной анальгетической активностью, что обусловь

серотониномимегическиы и адренолитическим действием соединен Установлено, что препарат сникает патологическое влечение этанолу, повышая уровень серотонина в мозге и уменьшая содержа] дофамина в крови хронически алкоголизированных крыс.

Гидразониевая соль гидразида' фторфенилфосфинилуксусн кислоты проявляет антидепрессивную активность. Установлено, ч

препарат способен эффективно подавлять проявления экспериментальной алкогольной зависимости, а также снижать тяжесть синдрома отмены этанола. Нормализация препаратом физиологических проявлений хронической алкогольной интоксикации сопровождается восстановлением параметров, характеризующих функциональное состояние дофаминергической системы:

характеристик -дофаминовых рецепторов стриатума и содержания медиатора в крови. Введение данного соединения на фоне хронической алкогольной интоксикации эффективно обращает кок нарушения дофаминергической рецепции, так и изменения содержания дофамина в крови. Показано, что действие препарата на состояние дофаминовой системы опосредовано его взаимодействием с -дофаминовыми рецепторами головного мозга.

" ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Полученные данные о нейротропной и психотропной активности гидразидов и гидразониевых солей гидразидов фосфинилуксусной кислоты существенно дополняют характеристику этого перспективного для фармакологии и клиники химического класса и позволяют рекомендовать рациональные пути синтеза новых, еще более активных ■производных., которые могли бы стать об'ектом доклинического изучения. Наиболее перспективные препараты - гидразокиевая соль гидразида фторфенилфосфинилуксусной кислоты и гидразониевая соль ; гидразида метилфзнилфосфинилукеусной кислоты были изучены более подробно для выяснения механизма действия на ЦНС с целью решения вопроса о целесообразности углубленного доклинического изучения безвредности препарата и подготовки материалов ' в фармакологический комитет МЗ Р£ для получения разрешения, их клинических испытаний в качестве антидепрессантов .и средств, подавляющих патологическое влечение к этанолу.

По материалам изучения производных гидразидов и гидразскиевых солей гидразидов фосфинилуксусной кислоты Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министоров -РФ • выдал положительные решения на 3 авторских свидетельства.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты работы доложены и обсуждены на заседании лаборатории фармакологии алкоголя и фармакотерапии алкоголизма; Проблемной комиссии по вопросам наркологии Государственного Научного Центра Наркологин, Москва, 1991; 1993.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит введения, оОзора литература, экспериментальной части (3 главы обсуждения, выводов и списка литературы. Работа излажена на 14 страницах машинописного текста, проиллюстрирована . . 14 рисунка и 39 таблицами. Библиографический ■' указатель ' содержит 21 наименований, в г,ч. 90 отечественных и. '•".• •. 120 инострани авторов.

МАТЕРИАЛ И МШДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работа использовано 1930 мышей и IÏ40 крыс.

Синтез исследуемых соединений осуществлен на кафедре орган ческой химии Казанского химико-технологического института. В к чесгве препаратов сравнения были использованы мэлипрашн, седукс и фосфабензид.

"Острую" токсичность соединения определяли на белых мышах л внутрибршинном введении. Средние смертельные дозы вычисляли мет дом "накопления частот" по Беренсу (ISS3) с последующим построек ем характеристических кривых.

Для скршшнгоюй оценки нейротропной активности примент тест с подкожным введением абсолютно смертельной (125 мг/кг) дс • коразола и методику "групповой токсичности" $енашша (10 мг/кг).

Для выявления "антиалкогольных" свойств било проведено new дование блмгйалй соединений на формирование первичной алкогольг мотивации, на потребление зтаяола хронически алкоголизироваша (6-8 мес.) крысами в условиях свободного выбора мевду ÎQ% pacTi ром этанола и водой, на реакцию отмены этанола (тест îlajohrowic 1975) и на продолжительность этанолового наркоза (5г/кг вО).

Для нейрофармакологической оценки анализа действия на ВДС i иболее активных соединений использовали стандартные анализа^ применяемые для изучения действия веществ на ГАМК-ергические, < ротонин-, дофамин-, адренегрические структуры: пикротоксин (2 » кг/п/к), 5-окситрипгофан (300 мг/кг), апоморфин (5 мг/кг мкш и мг/кг крысы), L-ДОФА (150 и 500 мг/кг), галоперидол (Б мг/кг n/i клофелин (0,5 мг/кг в/бр). Исследовали влияние соединений эффекты барбитала-натрия (175 мг/кг), морфина (10 мг/кгi. Abhj тельную активность измеряли на приборе "Small апшшХ movers monitor" (Colbourn Inetrumente ).

Спектр психотропного действия соединений изучали на следующих 'дедях: анксиолитпческое действие - модель "конфликтной сигуа-1И" (тест Vogel, 1971). Оценку антидепрессивной активности провоют нэ модели "поведенческого отчаяния" (R.Porsoit et ai.v.m) в >Юфткати Д.Ю.Русакова и A.B. Валъдаэнэ (1983) и "выученной Оес-мошности" (S. Mair, M.Seli^man, 1976) в модификации A.Amisman и (авт.- 11979).

Содержание катехоламинов в крови крыс определяли методом вы-«оэффективной жидкостной хроматографии на аппарате "gilson" в щификзции Б.М.Когана и соавт. (1993) с применением колонки с 00-вденнсй фазой CIS (3-5 мкм 4 х 100 - 3 х 150 мм) с соответствую-ми преколонками.

Изуче'ние основных характеристик а} ,а3- здренергических, S0-¡ротонинергических, ц-опиатных рецепторов коры и о2-дофаминерги-!ских рецепторов стриатума мозга крыс проводили радиолигандным ¡тодом в модификации Д.й.Русакова (1992). Белок определяли по ме-)ДУ О.Н. bowry at al, (1951).

Исследуемые соединения вводили в виде водных растворов в дозе 10 ДЯ50, нерастворимые соединения в виде взвеси в 2% крахмальной шзи. Результата экспериментов обработаны статистическим методом lipothesis Test for Means".

Результаты исследований и их обсуждение.

I. Биологическая активность некоторых производных гидразидов мида) фосфинилуксусной кислоты и гидразсниевых солей гидразидов фосфинилуксусной кислоты.

Исследуемые соединения представляют 2 ряда химических Beide."

1). Гидразиды (амид) фосфинилуксусной кислоты

2). Гидразониевыа соли гидразидов фосфинилуксусной кислоты.

Химическая•структура исследуемых соединений представлена в

»блице I. Все соединения ряда гидразидов фосфинилуксусной кислоты ?ляюгся практически нетоксичными. Мх средние смертельные дозы не гределяются даже при введении в дозе 5000 мг/кг. Почти все ве-

' . Таблица I

Химическая структура и основные дозы характеризующие "острую токсичность" I ряда соединений

соединение химическая формула ШДЙ-й дозы в мг/кг дат дао ДЛ100

фосфабензид 1 2 3 4 5 6 .ЯИ-иНг ■О [|ÜDbMH-g-CH2-g-о ЩЦ-Н-СН^ - С(0)-NH2 Вг Hi-N=CH-< > НО Вг ||i-N=CH-<_> Nao Вг BBD-NHg 200 315*24,8 400 не определяются при введении 5000 мг/кг не -определяется при введении 5000 мг/кг не определяется при введении 5000 мг/кг не определяется при введении 5000 мг/кг не определяется при введении 5000 мг/кг не определяется при введении 5000 мг/кг

Химическая структура и основные дозы , характеризующие " острую токсичность" соединений 2 ряда ■

соединение химиче ская^структура дег дозы в мг/кг дао длюо'-

7 400 655*24,3 800

а 500 666*¿7,1 800

9 450 646*40,2 830

10 H-,C-0-Ph—Щ 4 60 631*39.2 800

11 F-Ph-Сш 350 531*39,3 700

12 cH^-CHg-^J 230 317*19,3 400

щества данного ряда проявляют антогониэм с коразолом, что позволяет утверждать присутствие у препаратов ГАМК-миметической эктивнос-• ти..В дозе 500 мг/кг соединения 3, 4, 5, имеющие дибромфенильные радикалы в гидразидной группе, проявляли анксиолитическое действие, определяемое на модели "конфликтной ситуации" у крыс, кото-

рая являетей прогностически важным тестом для клинической оценки транквилизирующих веществ. Препарат 3 увеличивал число подходов к поилке в 4,1 раза, превосходя эффект препарата сравнения - седуксена в данном тесте.

Все соединения данного ряда снижали потребление этанола животными в тесте на Предпочтение и уменьшали степень тяжести • постинтоксикационного синдрома отмены, что, очевидно, связано с ГАМК-миметическим действием соединений. Известно, что вещества с ГАМК -миметической активностью, в частности транквилизаторы уменьшают потребление этанола за счет седативного эффекта и потенцирования фармакологических эффектов этанола (В.В.Рожанец, 1999). В отличие от классических бвнзодиазепиновых транквилизаторов, ни одно из соединений данного ряда не потенцировало наркотическую дозу этанола.

Установлено, что ЛД50 всех гидразониевых солей гидразидов фосфинилуксусной кислоты находится в пределах от 316 мг/кг до 666 мг/кг. Соединения данного ряда проявили, как и фосфабензид, эдре-нолитическую активность, уменьшая гибель мышей от токсической дозы фенамина и более эффективно снижали потребление этанола в тесте на предпочтение, причем это действие у гидразониевых солей, в отличие от гидразидов, не связано с анксиолитическими свойствами соединений.

В итоге из этого ряда выделено два соединения - соединение 9 и соединение II, которые проявили наибольшую активность в проведенных экспериментах. Они в большей степени подавляли алкогольную мотивацию, чем фосфабензид. Наличие в спектре действия этих соединений выраженного адренолигнческого действия является важной предпосылкой для выявления "антиалкогольной" активности у данных препаратов, т.к. катехоламинергической системе принадлежит важное место в патогенезе хронического алкоголизма (И. П.Анохина и соавт. 1989,1990), а анденергичесние средства нашли широкое применение в наркологическое практике (Н.Н.Ивонец, 1Э90). ■

2.Фармакологические эффекты гидразониевой соли гидрззида ме-тилфенилфосфинилуксусной кислоты (пр.9) и гидразониевой соли гид-разида фторфенилфосфишшуксусной кислоты (пр.П).

Фармакологическое изучение препарата 9 показало, что данное соединение обладает выраженным серотонинмиметическим действием. Острое и хроническое введение препарата усиливает эффекты 5-оксит-риптофана в 2,3 раза (опыт 5,1т 3,4; контроль 2,2*1,3; р<0,05) и в 2,9 раза (опыт 23,6^8,8; контроль a, IT4,4j р<о,оо5) соответственно.

Радиолигандный анализ s2- серотонинергических. рецепторов фронтальной коры мозга интактных крыс показал, что препарат 9 не проявляет ьффинности к данному рецептору in vitro. Однако хроничес кое введение соединения приводит к снижению связывания s2-r со специфическим лигаадои (Kd опыт 0,82*0,36пМ; контроль 0,4*0,2пЫ; р<0.05), при неизменном значении Вшах, что очевидно, связано с изменением концентрации медиатора в ЦНС. Известно, что экспозиция рецепторов с увеличенным количеством нейромедиатора может продуцировать явление "субчувствительности" рецепторов (K.Minneman. et al, 1979).

Адренолигаческое действие исследуемого соединения 9 обнаружено по его способности потенцировать гилотермический эффект клофе-лина в 1,3 раза (опыт - 4,4ïO,6°Ci контроль - 3,5*0,6°с; 140.05; при однократном и в 1,2 (опыт - 5,8+1,0°С; контроль - 4,3*0,5°С; Р<0.005 ) при хроническом введении.

Анализ взаимодействия препарата с анализаторами дофаминерги-ческой системы показал наличие у соединения 9 дофаминолитическогс эффекта. Препарат при однократном введении снижает "групповую' токсичность (^намина на 50%, уменьшает на 57% апоморфиновую гипотермии (опыт - I,3f0,3°0i контроль - 3,0*0,4°С; Р<0.05), при 10-даевном введении снижает продолжительность апоморфиново; стереотипии на 51,5% (ошт 60,4*5,7 мин; контроль 124,5+15, мин; Р<0.005).

Центральное адренолитическов и дофаминолитическое действи препарата 9 можно объяснить его непосредственным серотонишозитив ним, действием, т.к. согласно литературным источникам серотониномн метики сшисают содержание норадреналина и дофамина (H.Kawasaki, К Takasaki,1966), а некоторые серогонинергические нейроны функциои руют как антагонисты дофамин- и норадренергических структ) (O.Kaoagni et al, 19S3).

-Потенцирование действия снотворных агентов выявило наличие

-У -

препарата 9 депримируодего действия на центральную нервную систему. Однако механизм этого действия не связан с влиянием на ГАМК-ергическив я опиатныэ структуры, т.к. препарат не потенцирует эффекты анализаторов ГАМК-ергической системы, наркотических агентов, этанола.

Гшотермяческлй эффект соединения, возможно, связан с его центральным серотонинпоэмтиышм эффектом, т.к. согласно литературным данным центральные серотоншомиметики снижают температуру тела животных (Л.Н.Белорыокина, 1985).

Анальгетическое действие, Которое проявило соединение 9 (опыт 9,4*2,5 сек; контроль 6,3*1,1 сэк; р<0,05), требует дальнейшего детального изучения, однако необходимо отметить, что одним из воз-мокных механизмов является вмешательство препарата в деятельность нейромедаюгорных систем, в частности, он обладает адренолитическим эффектом, а этот механизм очень важен при анальгезии (А.В.Дмитриев, 1990).

Фармакологическое изучение препарата II Показала, что он оказывает выраженное дофаминолическое действие. ОДНоКратНоэ й хроническое введение препарата снижает "групповую" токсичность фенамина на 70% и 50% соответственно. Механизм взаимодействия ПреПйраТо с агонистами и антагонистами дофаминовых рецепторов позволяет предположить его стимулирующее влияние ■ на дофаминовые рецепторы( 6 пользу чего свидетельствует антагонизм препарата с блокатороМ ЭТИХ рецепторов - галоперидолом, и потенцирование эффектов агониста дофаминовых рецепторов - апоморфина. Острое и длительное применение препарата уменьшает выраженность каталепсии, вызванной галоперйдо-лом у мышей на 62% (сшт 16,7*11,7 сек; контроль 43,4*8,2 сек; р<0.005) и на 30% (опыт 35,0*14,3 сек; контроль 50,0*8,3 сек; рс0.005) соответственно. В пользу данного предположения говорит и потенцирование препаратом апоморфиновой гипотермии (опыт - 5,4*0,8 °С; контроль 3,1*0,8°С; р<о.'о5). Дофамшомиметики и антагонисты дофаминовых рецепторов противодействуют гипотермии апоморфина (Е.Л.Щелкунов,1978).

Радиолигандный анализ с2-дофаминовых рецепторов стриатума головного мозга ингактных крыс показал, что добавление в инкубационную смесь препарата II в концентрации 10~5М снижает плотность ре-цепторного связывания 3н-Спиперона (В-тах: опыт 650,3*40,8

$моль/мг; контроль 846,1+100,1 фмоль/мг; Р<0.05) при неизменном значении Kd. При хроническом введении соединения II снижается чувствительность Рг-дофаминовых рецепторов стриатума (Kd: опыт 0,34*0,04 гШ; контроль 0,19? 0,05 пМ; Р<0.05). Возможной предпосылкой для взаимодействия соединения II с D0-дофаминовыми рецепторами является наличие в его химической структуре группы ш для азота которой имеются неспецифические места связывания в рецепторе (C.Gj Grol et al, 1985). Наличие амидной группы характерно для дофамина и его агонистов.

•Уменьшение выраженности апоморфиновой стереотипии (опыт 54,15 10,9 мин; контроль 124,5+25,4 мин; Р<0.005) при хроническом введении соединения можно объяснить десенситизацией дофаминовых рецепторов, в результате чего поведенческие эффекты апоморфина ослабевают (A.M.Марковский и соавт., 1у84). Вакно отметить, чтс преимущественное влияние препарат оказывает на мезолимоическую до-фаминергическую систему, о чем свидетельствуют результаты изучение его действия на отдельные компоненты апоморфиновой стереотипии. í стереотипных движениях животных, которым апоморфин вводили на фон£ длительного введения препарата,сокращалось время обнюхивания, г оно опосредуется, как азвестно СК.С.Раевский, В.П.Георгиев, 1986), именно через мезолимоическую систему. МезолимОическая дофаминерги-ческая система играет важную роль в обеспечении поведенческих ая-тов в реализации адаптивного поведения в условиях стресс) (А.В.Вальдман и соавт,,1987).

Дофаминергическиэ механизмы функционируют в тесной связи < другими медиаторными системами, в том числе серотонинергической ГАМК-ергичесКой И опиатной (S.Bonanno.k.Raiterl, 1987; N.G.Bower et al, 1983). Haae внимание было привлечено к выяснению возможное влияния соединения на эти система, которые имеют ключевое значена в регуляции моторных и эмоциональных компонентов поведена (а.В.Вальдман и соавт. 1979).

Полученные данные позволяют утверздать наличие у препарата I слабо выраженного-ГАШ-миметического действия. При однократно введении соединение увеличивает продолжительность кизки животных отравленных пикротоксином в 1,4 раза (опыт 22,7+1,7 мин; контрол 16,4 +0,9 мин; Р< о.05). Центральное серотоншшозативное действа препарата, которое проявляется в потенцировании эффектов 5-01

Рис.1

Влияние соединений но эффекты 5—ОТ'?' у мышей, в модели "выученной беспомощности".

мин

ш 1 га 2 ш з tm* EMI ь

1-KOHT.l 2-K0HT.2 З-преп.9 4-преп.11 5-м«/1ипрамин

РИС. г

Характеристика питьевого поведения кг крыс после 5-дневной меприваиии

Oi ИЯ 2, 1-до отмены 2-после коеффициент предпочтения

• Рс0,05.по сравнению с "отвергающими" птанол

* Р<0,С5 по сравнению с "предпочитающими" этанол

животными

(опыт 16,5 ?3,1; контроль 8,IT4,4; р< 0.05) при хроническом введе нии соединения. Согласно литературным .источникам стимуляторы дофа миновых рецепторов ускоряют оборот серотонина как путем увеличена синтеза, так и посредством,усиления его выброса из нервных оконча ний (И.И.Абрамец, 1989).

Препарат II не потенцирует действие наркотических агентов этанола, не проявляет анальгетическую и анксиолитическую актив ность.

Способность исследуемых соединений взаимодействовать с дофа минвргическими и серотонинергическими структурами послужила осно ванием для исследования их антидепрессивного действия. Препарат I проявил активность на двух моделях депрессии - "поведенческого от чаяния" и "выученной беспомощности", которые в настоящее время яе ляются адекватным комплексом для предварительного изучения вещее! с потенциальной антидепрессивной активностью (Н.Д.Данчев, 1985] Исследуемое соединение II уменьшило время иммобилизации мышей плавательном тесте ("метод поведенческого отчаяния") при однократ ком введении на 46,6% (опыт 114,Oí17,5 мин; контроль 213,3*19, мин; р<0.05) при 5-дневном введении на 32,5% (опыт-130,0*17,8 миг контроль-192,5*15,7 мин; Р<0,05). Механизм ангидепрессивно] эффекта препарат II можно объяснить его активирующим влиянием i дофаминергические структуры, которые принимают участие поведении мышей в "плавательном тесте" (F.Borsini et а l985;S.KuIcarini, М.Parale, 1986), причем неподвижность животн опосредуется через ДА-ергическую систему миндалины (Н. Aralo. et 1985 и др.), которая относится к мезолимбической области является местом приложения действия антидепрессантов и, к показали эксперименты, изучаемого соединения II.

Тест "выученной беспомощности" в некоторой степени имитиру состояние реактивной депрессии и позволяет оценивать относительк скорость развития эффектов антидепрессантов при хроническом введ нии. Исследувше препараты 9 и II проявили выраженный антидепре сивный эффект, определяемый по уменьшению латентного периода изс гания и процента неизбегания мышей, подвергнутых предварительнс неизбегаемому стресс-воздействи» (табл.2). Антидэпрессивное дейс вне препаратов 9 и II развивалось после 5-кратного введения, отличие от мэлипрамина, который был эффективен лишь на 10 де]

ito соответствует латентному периоду развития антидеярессивного

Таблица 2

Влияние соединений на показатели реакции избегания у мышей, подвергнутых предварительному стресс-воздействию на модели "выученной беспомощности"

совд доза мг/кг Хнэизбеганий от общего числа проб I день 5 день 10 день средняя латенция периода избеганий I день 5 день 10 день

kohti конт2 9 II мелил 60 50 7 19 19 18 73# 65# 64* 19«» 5»* 2«* 38 15*»' 12» 43 29 II* II .'1*1,4 10,2*0,9 9,8*1,0 17,2*1,8# 16,1*2,0* 15,2*1,7* 13,8*2,5 10,7*1,5« 7,9*0,9» I4,7Tl,9 II,1*0,8* 8,9*1,2* 13,5*1,8 11,8*1,5 9,2*1,1»

♦Р<0,05) **Р<0,005 по сравн. с конт.2; #Р<0,05 по сравн. с конт.1

эффекта в клинике (Г.Я.АвруцкиЙ и соавг., 1981) и согласуется с экспериментальными данными Д.О.Русакова и А.В.Вальдмана (1983). Для выявления механизма антидепрессивного эффекта препаратов проведены опыты с 5-ОТФ, которые выявили значительное снижение числа "кивков" у стрессированных мышей и их повышение у животных, которым вводили препараты 9 и II и мелипрамин. Эти эксперименты (рис,1) подтвердили сообщения о ведущем значении в поведенческих проявлениях "выученной беспомощности" дефицита серотоншш (М.Hamilton et al., 1986).

3. Активность соединений 9 и II на различных моделях экспериментального алкоголизма

В качества моделей экспериментального алкоголизма использовали тесты, предполагающие выявление следующих специфических свойств веществ: способность предупреждать или ослаблять патологическое влечение к алкоголю и выводить из состояния алкогольной абстиненции и алкогольной интоксикации.

В качестве экспериментального критерия зависимости от этанола использовали тест на предпочтительное потребление животными раствора 5ТИЛОВОГО спирта в условиях свободного выбора. При этом отбирала крыс устойчиво потребляющих алкоголь, разделив ш. на д^е

группы: с коэффициентом предпочтения 20-40-% ("малопьющие") и более 50$ ("многопыздие"). Влияние соединений на потребление алкоголя оценивали в течение 10 дней на фоне ежедневных внутрибрюшинных инъекций соединений и в течёние 10 дней после их отмены.

Показано, что соединения 9 и II кислоты эффективно уменьшали потребление этанола хронически алкоголизированными крысами обеих групп, снижая при этом индекс предпочтения первой группы животных. Эффект соединений сохранялся в течение 10 дней после их отмены, что свидетельствует об отсутствии у веществ так называемых собственных "подкрепляющих" свойств (габл.З и 4).

Таблица 3

Влияние препаратов на потребление этанола у "многопыощих" крыс

группа животных введение соединений доза этанола КП в г/кг в % отмена доза этанола КП в г/кг в %

контроль соед.9 соед.II фосфабен. 4,6*0,3 2,6*0,4»» 2,4*0,4»« 3,8*1,2 ' 49,4*5,9 25,7*5,7»» 25,9*6,9»* 40,7*5,7 4,8*0,4 2,8*0,3« 2,6*0,25** 4,2*1,0 50,2*4,5 26,9*3,2» 25,6*4,5»» 51,4*5,7

«Р<0,05; *»Р<о,оо5 по сравнению с контролем

Таблица А

Влияние препаратов на потребление этанола у "малопьющих* крыс

группа животных введение соединений доза этанола КП в г/кг в % отмена доза этанола КП в г/кг в %

контроль соед.9 соед.ii фосфабен. 2,8*0,2 27,6*9,9 1,5+0,3«» 27,7*8,5 1,8*0,3» 23,1*10,3 2,5*1,2 28,6*7,8 2,6*0,2 27,9+8,6 1,6*0,3«» 27,3+7,6 1,6*0,2** 26,4*4,9 2,4*0,9 27,6+4,9

обозначения те же что в таблице. N3

При другом режиме лечения, когда соединения вводили в течени( 5 дней на фоне отмены этанола, получены аналогичные результат: *(рис.2). Контрольные, хронически алкоголизированиые животные, пот-

еблявшие больше дозы этанола после депривации по алкоголю увели-ивали потребляемую дозу этанола. Введение изучаемых соединений в ериод отмены приводило к снижению дозы потребления в последующей итуации свободного выбора, при этом снижался и коэффициент пред-очтения.

В связи с тем, что дофаминергическая и серотонинергическая истемы играют важаую роль в контроле за потреблением этанола, мы редположшш, что наблюдаемые изменения обусловлены влиянием сое-инений на их состояние.

У алкоголизированных животных была отмечена более выраженная ; продолжительная стереотипия (рис.3).'Увеличение продолжительное-и стереотипного поведения свидетельствует в пользу того, что у данной группы животных чувствительность дофаминовых рецепторов по-мена. Введение .изучаемых соединений и фосфабензида привело к меньшею» продолжительности стереотипии у алкоголизированных :рыс, что предполагает возможное участие дофаминергических меха-[кзмов в релизации эффектов изучаемых соединений.

Введение 5-ОТФ алкоголизированным животным показало значи-•вльнаа снижение числа "кивков" (рис.4). Это показывает, что ал-соголизация ведет к прогрессивному снижению уровня серотонина в юзгв. Введение соединений 9 и II восстанавливало уровень серотошна в мозге до исходного.

Таким образом, выявлено нормализующее влияние соединений 9 и [I на проявление зависимости хронически алкоголизированных крыс от этанола. При этом нормализация поведенческих реакций солровоздает-:я коррекцией состояния дофаминергической и ' серотонинергической зистем, измененных потреблением этилового спирта.

Изучение влияния соединений 9 и II на формирование первичной алкогольной мотивации показало, что введение изучаемых соединений I препарата сравнения - фосфабензида в течение 10 дней 'предпочитавшим" этанол животным приводило к достоверному знижению дозы потребляемого этанола (рис.5).

Изучение функциональных характеристик с^-адренегрических, з0-серотониновых, ц-опиатных рецепторов коры и с0-дофамшовых рецепторов сгриагума показало, что крысы, проявляющие различную исходную предрасположенность к потреблению этанола имеют различия б нейрохимической реактивности опиагной и моноаминергическсй систем

Влияние соединений на эффекты 5-ОТФ у хронически алкого визированных крыс

Рис-.2

50

01 ВВС г ШШЬ Ш* ЕШШ 5 1 -"отвергающие" 2—"предпочитающие" 3-"пред".+ пр.9 4-"пред"+ пр.11 5~"лрвд".+ фосср.

Рис.4

Длительность апомор<риновой стереотипии у хронически алкоголиэированных крыс

мим.

<™Ь ЯВ 2 Ши

Т-"отвергают««" 2-"предпочитающие"

3^"преа."+ пр.9 ♦-"пред.'Ч пр.11 5-"пред."+ фосф.

мозга. Из данных радиолигандного анализа (табл.5 и 6) следует, что концентрация с^-и существенно выше у крыс "предпочитающих" этанол по сравнению с "отвергающими". Противоположный результат наблюдали в случае Б2-н. У "предпочитающих" этанол животных была обнаружена гшочувствительность ц-олиатвдх рецепторов коры и гиперчувствн-тельность стриатума. Изменения фукнциональных характеристик рецепторов, очевидно, связаны с различиями в обмене эндогенных аминов и ошоидных пептидов. В литературе имеются данные, указыва-

ТаСлица 5

Влияние субхронического введения соединений на б2-до-

фаминовые рецептора стриатума и ц-опиатше рецепторы коры мозга крыс

группа Кс1 Втах Ш Гто1/тз ц- опиатные Кй Вшах пЫ £то1/т^

"отвергающие" "предпочитающие" пред+пр.9 пред+пр.П пред+фосф. 0,37*0,1 828,1*77,9 0,2+0,05«» 822,9*76,5 0,35*0,3« 733,1*181,1 0,39*0,1$ 830,1*90,5 0,3*0,04$» 845,7*39,6 0,7*0,2 147,1+25,4 1,1*0,3* 156,9*37,9 1,0*0,1 118,2*44,6 0,5*0,г#»120,1*42,9 1,0*0,3 97,1 + 17,9)

**Р<0,005 по сравнению с "отвергающими" этанол животными #Р<0,05, #йР<0,005 по сравнению с "предпочитающими" ¡кивотными

Таблица 6

Влияние субхронлческого введения соединений на характеристики сц-адренергическйх, з„-серотониновых рецепторов

корн головного мозга крыс

группа животных Кс1 & Вшах Ш 1пю1/щ Оо-Я Кй ^ Втау . Ш 1то1/т®

1.отвергающие 2.прэдпочит. 3.пред.+ пр.9 4.пред.+ пр.П 5.пред.+ фос. 0,43*0,1 0,51+0,2 1,5*0,4## 0,4*0,2 0,6*0,2 201,3*39,3 98,7*17,4»* 79,2*38,2 458,3*98,3## 325,9*37,1## 0,75*0,2 0,83*0,29 0,69+0,1 0,99+1,2 0,84*0,2 983 ,'7* 19,7 155,5*40,7** 215,1+29, 130,4+25,8 257,4+41,1##

**Р<0,001 по сравнению с "отвергавшими" этанол животными ##р<0,001 по сраттеючв с "предпочитающими" этанол кивотными

пцие на отличия в базальных. концентрациях дофамина, серотонинв v опиоидных пептидов в мозге крыс с различным отношением к алкогол! (Cloninger, 1992).

Сопоставление результатов радиолигандного анализа показало, что введение трех соединения животным "предпочитающим" этанол снижало чувствительность дофаминовых рецепторов, которые у данно! группы крыс находятся в состоянии гигорчувствительности. Очевидно что нарушения обмена дофамина играют важную роль в феномене предпочтения. Одновременно-выявлена нормализация состояния серотони нергичвской рецепции при введении соединения II и фасфабензида Снижение чувствительности s2-r в случае введения соединения ' мокет быть обусловлено собственным серотонинмиметически действием, т.к. установлено, что данное соединение увеличивав содержание серотонина в мозге. Повышение концентрации с^-наблюдалось при введении препаратов с адренолитическим действие; (соед. 9 и фосфабензид), а опиатные структуры отреагировал снижением мест связывания специфического лиганда только пр введении фосфабензида, обладающего анальгетической активностью.

Таким образом, выявлено, что введение всех трех соединений уменьшающих первичную алкогольную мотивацию у штатных "предпочи тающих" этанол, сопровождается нормализацией параметров дофаминер гической и серотонинергической рецепции. Можно предположить, \чч взаимодействие 2-х систем: дофаминергической и серотонинергическс контролирует первичную алкогольную мотивацию, соединения 9 и II сочетающие дофаминолитическое и серотониномиметическое действ! .могут быть эффективны при лечении алкоголизма в качестве средст! снижающих патологическое влечение к этанолу.

Синдром абстиненции моделировали путем отнятия этанола хронически алкоголизированньа крыс. При отнятии этанола на фо1 хронической алкоголизации в катехоламиновой системе происходи значительные перестройки (Н.Н.Иванец, И.П.Анохина, 1990). Э' подтвердили и эксперименты по определению содержания катехолам] нов. На фоне отнятия этанола резко возрасла концентрация дофамк и адреналина в крови (табл.7). Однократное введение соединен: восстанавливало контрольный уровень дофамина в крови и снижало т. кесть синдрома отмены, определяемого по шкале líajohrowi.cz (1975

Существенным в действии изученных соединений является т

что в дозах, в которых они подавляют алкогольную мотивацию, они не потенцируют наркотическое'действие этанола, что дает возможность применять эти препараты для амбулаторного лечения алкоголизма а период ремиссии, не опасаясь возможности злоупотребления (совместного применения с алкоголем с целью получения более глубокого опьянения ).

Таблица ?

Влияние соединений на содержание катехоламинов в крови крыс на фоне абстиненции в нг/мл

группа ДОФА ДА НА А ДиФУК

1 .интактные. 2.предпоч. 3.пред.+пр.9 4.пред.+пр.11 0,32+0,5 0,28+0,1 0,72+0,1** 0,42*0,2 0,09*0,04 0,46*0,1"" 0,12*0,09** 0,13*0,09** 2,6+0,8 4-, ОТО, 7 3,19*0,9 3,4-ГО,9 3,5+2,4 6,9*1,7" 4,7*1,5 5,8*2,1 1,76*1 ,и 2,1*1,8 0,97*0,5 3,1*2,5

"Р<0,05; ""Р<0,005 по сравнению с первой группой *Р<0,05; **?<о,оо5 по сравнению со второй группой

Рис.5

алиям*» соединения на формирование

СЭ( ВЯ г в» Ш}^ ]~"гред." 2-пр.з 3-/7.» 11 4-ч>0ср.

г выводы . ;

1. Исследовано 12 новых производных■ фосфшшлуксусной кислоты. Обнаружено, что соединения ряда гидразидов(амида) фосфинилуксусной кислоты (вещества 1—6) • обладают ГАМК-миметическим . действием. Анксиолитическая активность проявляется только у соединений, имеющих дибромфенилметильшй радикал при атоме азота в гидразидной группе. Присоединение карбазидаой группы к атому азота в гидразидной группе приводит к усилению анксиолигических свойств.

2. Соединения ряда гидразониешх солей гидразидов фосфинилуксусной . кислоты (вещества . 7-12) обладают адренолитическим действием; подавляют первичную алкогольную мотивацию у крыс в условиях свободного выбора, .По мере присоединения различных радикалов к атому фосфорапроисходит уменьшение токсичности и ослабление адренолитичэских свойств. Из этого ряда было выбрано два вещества: соединение 9 и соединение II "антиалкогольные" свойства которых превышают активность препарата сравнения - фосфабензида.

3. Соединение 9 проявляет антидепрессивную и анальгетическую активность, обладает серотошшпозитивным и адренолитическим действием.

4. Соединение II проявляет ангидепресоивную активность, обладает дофаминолитическим, серотоншшозитианим, ГАМК-миме тиче ским действием, проявляет свойства агониста дофаминовых рецепторов.

5. Показвно, что крысы, проявляющие различную исходную предрасположенность к потреблению этанола различаются по характеристикам , о^-адренергических, з2-серотонинергических, р-опиатных рецепторов фронтальной коры и п2-дофаминергических рецепторов стриатума.-

6. Субхроническое введение изучаемых соединений 9 и II и препарата сравнения - фосфабензида приводит к достоверному снижению первичной алкогольной мотивации у животных, изначально "предпочитающих" этанол, что сопровождается полной нормализацией параметров дофаминовой и серотониновой рецепции.

7. Обнаружено, что соединения 9 и II подавляют алкогольную мотивацию у хронически алкоголизированных крыс, вызывая снижение потребления этанола в условиях свободного выбора за счет

уменьшения как суточной дозы этилового спирта, так и величины индекса предпочтения.

8. Показано, что хроническая алкоголизация животных вызывает повышение чувствительности дофаминовой рецепции и снижение функциональной активности серотонинергической системы. Иньекции соединений Э и II приводят к нормализации параметров функциональной активности дофаминергических и серотонинергичес-ких процессов.

9. Отмена этанола вызывает повышение концентрации дофамина в крови хронически алкоголизированных крыс. Однократное введение соединений 9 и II в период депривации нормализует ■ концентрацию дофамина в плазме крови, и уменьшает дозу потребляемого животными этанола при возвращении в условия свободного выбора.

10. Обнаруженное у соединений 9 и ' II свойства снижать алкогольную мотивацию в экспериментальных моделях алкоголизма и нормализовать при этом измененная функциональную активность дофаминергической и серотонинергической систем позволяют рекомендовать их в качестве средств, подавляющих патологическое влечение к алкоголю.

Практические рекомендации .

1. Целесообразно дальнейшее изучение фармако-токсиколошческих свойств гидразокиевых солей гидразвдов фторфенилфосфинилуксусной и метилфенилфосфенилуксусной килоты с целью представления в Фармакологический комитет МЗ РФ для получения разрешения на клинические испытания в качестве антидепрессантов и средств, снижающих патологическую зависимость от алкоголя.

2. Перспективен дальнейший направленный сиятез и-фармакологическое изучение в ряду гидразониевых солей п дразидов фосфсшлуксусной кислоты.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. A.C. N 4916717 "Гидразониевые соли С-гидразиноацетил(влкил) фосфиновых кислот, проявлящие нейротропную активность" от 5 марта 1991 г. ( в соавторстве.с Тарасовой Р.И., Москвой В.В., Анохиной И.П., Заиконниковой И.В,, Роканец В.В., Байчуриной А.З., Семиной И.И..Щелкунова 11.А»)

2. A.C. N 5050848 "М^- дифенял^осфинилацетил, Ыа - 2-гидрокси(2-натрокси) - 3,5 - дибрсмфнилметилидвнгидразшш, проявляющие нейротропную активность" от 14 апреля 1992 г. (в соавторстве с Твр&совой Р.И., Москвой В.В., Роканец В.В., Байчуриной А.3., Мухамедаева P.P.).

3. A.C. N Б050847 пМр- дифенилфосфинилацетал (2 гидрокси 3,5 дибром) . фенилметилсемикарбазид, проявляющий нейротропную активность и способ его получения" от 14 апреля 1993 г,(в соавторстве с Тарасовой Р.И., Москвой В.В,, Роканец В.В.» Байчуриной А.З., Мухамедаева P.P.)

4."Оценка состояния с^-адрено-, г^-дофамин-, Sg-cepoTOHHHepnrrecKHi и ц-опиатных рецепторов головного мозга крыс, "отвергающих" и "предпочитающих" этанол в условиях свободного выбора.// В сб.: "Вопросы медико-социальной реабилитации больных алкоголизмом и наркоманией (Материалы республиканского совещания психиатров-наркологов) 16-21 марта 1992 г., Москва; 1993.- стр.164-167.(в соавторстве с Анохиной И.П., Русаковым Д-D., Роканец B.B.)