Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Противотуберкулезные антитела и туберкулиновая чувствительность у вакцинированных BCG и инфицированных детей

.4 / Я т:

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КАЗАХСКОЙ ССР НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ, МИКРОБИОЛОГИИ И ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

На правах рукописи

УДК 616.24-002.5-07:616.163.96-097-079.4

БАРДИСЯВИЧЕНЕ Ираида Мотеевна

ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫЕ АНТИТЕЛА И ТУБЕРКУЛИНОВАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ У ВАКЦИНИРОВАННЫХ ВСв И ИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Алма-Ата 1991

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте пульмонологии и фтизиатрии МЗ Литвы и в Центральном научно-исследо-вательскоы институте туберкулеза МЗ СССР

Научный руководитель, доктор медицинских наук, профессор В.И.Литвинов

Официальные оппоненты доктор медицинских наук, профессор Б.В.К&ральник кандидат биологических наук Т.Л.Клышев

I

Ведущее учрездение - Московский Научно-исследовательский инс титут эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского МЗ РСФС

Защита состоится " " 1991г. в " "часов

на заседании специализированного Совета Д 079.05.01 при Научно-исследовательском институте впидемиологии, микробиологии и ин-' фекционных болезней МЗ Казахской ССР( 480002, г.Алма-Ата, ул. Пастсра 34.)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ннст

тута

Автореферат разослан " '" мая 1991 г.

Ученый секретарь специализированного Совета

кандидат медицинских наук Н.Ы.Нуркина

. / ОНЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

"Актуальность работы. Вакцинация 3CG - это основной метод профилактики туберкулеза во шопгх странах. Общепршктыст кр.ч-?ер:!л>л1 эффективности проведенной прививки вакциной являзтся налнчиэ рубчика (вакцинного а нагл) на нест е ее введения и развитие поствакциналъной туберкулиновой аллергии (полоттелысл: губеркулгаюзнх проб). Вместе с тем, размер вакцинного знака rte имеет прямого отношения к форыироважш противотуберкулезного пм-!^,'нз:тста, а величина туберкулиновых реакций зависят от ггкогих факторов. Известно, что после вакцинации BCG-развиваются п другие феномены специфического противотуберкулезного иммунитета, в -частности, синтез' противотуберкулезных антител (АверСах М.М. и др., 1970, 1980; Turner и. et al. , 1988). Кроме того, в связи с наличием значительного числа перекрестно реагируют* антигенов в разных видах мииобактерлй возникают трудности пря выявлении особенностей иммунного ответа (как гуморального, так и клеточного), связанного с вакцинацией BCG или инфицированием вирулентными шхобаст ерияки (как правило, человеческого вида) (Авербах М.М. и др., 1980; Gr enge J. , 1934; Paniel T. 1983).

В последнее десятилетие разработана теста количестгенного микроанализа (для определения антигенов и антител), в первую очередь ишукоферментный анализ (И5А) и радиоикмунологичесний анмяэ (РИА), которые с определенным эффектом были применены и для изимр-нодиагносгики туберкулеза (Гильбурд В.Ш., 1987; Дитвн>«в В.И. и др., 1989;Daniel T.et al. , I9B5; iîohemon S, et til. , 10:48). Вместе с тем, до настоящего времени нет четчкх даячых J погмоадпс-ти использования этих методов для оценки эфгсктипн'оти а к.ишт; -и

и развития противотуберкулезного ишунитета. В частности, определение противотуберкулезных антител не дало пока существенной информации при характеристике различий ишунного ответа, связанных с инфицированием вирулентными никобактерияыи или вакцинацией ВХ.

Цель работы. В связи с Бышеизлокенкым целью настоящей работа явилась оценка возможности использования современных методов определения противотуберкулезных антител (ИМ и РИА) для характеристики вакцинного эффекта ВСС- и дифференциальной диагностики ынфекционнрй и поствакцлнальной аллергии.

Задачи исследования.

1. Определить уровень противотуберкулезных антител методой Й2А и РИД с использование« РРо - к антигенов (соникатов), выделенных из ьахксбактерий ВСС- и Н^Еу , у детей разных возрастных групп.

2. Сопоставить уровень противотуберкулезных антител к раз-15Л1 еляигеиаы у туберкулшшолозштельных и туберкулинотрицатель-!шх детей.

3. Охарактеризовать изменения продукции антител на микобак-териальные'антигены в разные сроки после вакцинации ВСС.

4. Изучить коррелятивные взаимосвязи размеров поствакцинных рубчиков, туберкулиновых проб с уровнем противотуберкулезных антител.

5. Сопоставить уровень противотуберкулезных антител у "виражных" (предположительно инфицированных) и вакцинированных детей.

6. Охарактеризовать различия в уровне антител к микобакте-риалькым антигенам у вакцинированных и зараженных линейных мышей

Научная нозкзна. С использованием количественных методов микроанализа охарактеризованы особенности продукции антител к микобактериалышм ант и генам у вакцинированных и инфицированных детей разного возраста. Показано, что у детей более старшего возраста уровень антител является более высокий. Установлено, что через 3 ыес после вакцинации BCG- имеет место существенное повышение уровня противотуберкулезных антител; к году после вакцинации содержание их в сыворотке снижается и остается на том уровне до 2 лет. Показано, что у туберкулинполозительных детей кьл до, так и после вакцинации уровень антител является более высоким, чем у туберкулинотрицательшх детей. Впервые показана прямая коррелятивная зависимость медцу размером поствакциниых знаков и уровнем противотуберкулезных антител. Такне впервые установлена прямая коррелятивная взаимосвязь медцу размером туберкулиновых проб и уровнен противотуберкулезных антител. Установлено, что у шшей лигам D ВА/2 уровень противотуберкулезных антител (особенно против антигена, полученного из микобактерий Hg^Rv ) существенно выпе после зараяения вирулентной культурой, чем после вакцинации BCG-. Впервые установлено, что гуморальный ямдунный ответ (оцениваемый методам микроанализа - ИМ и РИА) отличается у инфицированных ("вирааных") и вакцинированных детей. У инфицированных детей более высоким является уровень антител на антиген из микобактерий человеческого вида (H-^Rv), а у вакцинированных - на антиген, приготовленный из микобаетервй BOG.

Практическое значение работы состоит в том, что пгказана возможность использования методов микроанализа (ИГА и ГШ) для определения противотуберкулезных антител в качестве хркгерчя эффективности вакцинации BCG-. Количественные микромегдды и?гргцеле -

ния антител с применением антигенов, полученных из микобактерий человеческого и бычьего вида, могут быть использованы также в качестве дополнительных методов дифференциальной диагностики ыелду инфицированием ("вираг." туберкулиновых проб) и вакцинным эффектом BCG.

Положения, выносимые на защиту»

1. Количественные метода микроанализа {Шк и РИА) с применением антигенов (ультразвуковых дезинтегратов) из микобактерий человеческого (H-^Rv ) и бычьего (BCG) видов могут быть использованы для определения уровня противотуберкулезных антител у _ вакцинированных и инфицированных детей.

2. После вакцинации и ревакцинации BCG- имеет место увеличение содержания в сыворотке противотуберкулезных антител. Степей такого увеличения гаЕИОкт сг ч;гсла проведенных прививок. Уровен; противотуберкулезных антител (и до, и после вакцинации) выше у туберкулинположительных, чем у туберкулинотрицательных детей.

3. Имеется прямая выраженная коррелятивная зависимость между величиной вакцинного знака и уровнем противотуберкулезных антител. Имеется также прямая коррелятивная зависимость между размером туберкулиновых проб и уровнем противотуберкулезных антите; Это позволяет использовать определение противотуберкулезных анл тел в качестве критерия эффективности вакцинации BCG.

4. Имеются существенные различия в гуморальном иммунном ответе на разные микобактериальные антигены у вакцинированных и инфицированных детей - у вакцинированных выше уровень антител против ультразвукового дезингеграта BCG, а у инфицированных -%7Нт • ®то позволяет использовать указанные серологические реакции в качестве дополнительных критериев дифференциальной диаг

ностики поствакцинной и инфекционной аллергии.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы, в которой описываются материалы и методы, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы ( 43 отечественных и 76 зарубежных источников). Работа иллюстрирована 27 таблицами и 14 рисунками.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Апробация работы. Основхие положения диссертации доложены и обсувдеш на конференции молодых ученых фгизиопульконологов в Москве (1988 г.), на 7-й конференции фтизиопульмонологов Литвы в г.Клайпеде (1589 г.), на рабочем совещании иммунологов и педиатров республики в г.Вильнасе (1989 г.), ка международной конференции "Здоровье, заболеваемость и причины смертности в странах Европы" в г.Вильнасе (1990 г.).

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ •

• Материалы и методы исследования. Всего было обследовано 475 детей (31 новорожденный, 244 детей в возрасте 7 лет, 44 ребенка в возрасте 9-10 лет и 156 детей в возрасте 12 лет). Исходя из задач исследования были сформированы следующие группы:

1. Дети с отрицательными туберкулиновыми пробами (в последующем ревакцинированные) 7 и 12 лет.

2. Дети с положительными туберкулиновыми пробами (величина папулы 3-14 мм) 7 и 12 лет.

3. Дети с "виражом" туберкулиновых проб (вероятно, инфици-

рованные).

4. Новорожденные здоровые дети (перед вакцинацией).

У всех вакцинироваших детей определяли размеры вакцинного рубчика и размер туберкулиновой пробы на 2 ТЕ PPd , а также противотуберкулезные антитела до вакцинации и через 3 месяца, I и « года после вакцинации.

Кроме того, були проведены исследования на 70 мышах лиши D ВА-2. 28 мышей заражали 3-х недельной культурой лабораторного человеческого штамма'Hg^Rv (0,025 ыг культуры в 0,1 мл в хвостовую вену), 24 ьыеи вакцинировали ECO (0,025 ыг в 0,1 мл внут-риколгно), 18 ыышей той же линии слунили контрольной группой. Всей мышам ставили туберкулиновые пробы с 2 ТЕ PPD ', у них так» определяли противотуберкулезные антитела черэз 4 недели после заражения или вакцинации.

Противотуберкулезные антитела определяли методами непрямого твердофазного №А и РИА.

В качестве антигена использовали PED - стационарный препа^ рат, применяемой для коекых туберкулиновых проб, и антигены, вы• деленные из шкобактерий BCG и H^Jiv ультразвуковой дезинтегр цией. Дяя приготовления ультразвуковых дезинтегратов (соникатов вирулентные шкобактерии (H^Rv ) предварительно подвергали ¿'-облучанжо (2,5 ыегарад). Соникати готовили на ультразвуковом дезинтеграторе Bxansonlo I5II при мощности 100 вт.

При постановке И2А твердую фазу (поливииилхлоридиые гшаше ты) сенсибилизировали антигеном (100 икд б коцентрации 8 ккгДи РИ> , согаглтоы BCG или H^v , наследуемые сыворотки вносили в развздеша 1:200 и затем добавляли вторые антитела - козьи ан титела против человег», моченые пароксидазсй хрена. В ка-

честве субстрата служили о-фенилендиамин и перекись водорода. Реакцию останавливали серной кислотой.

Для постановки РИА антител: против ХеО человека гарки-

тре

ровали радиоактивным I. При постановке реакции поливинилхло-ридные планаеты сенсибилизировали (как и в И®А) антигеном, иссло-

тос

дуемые сыворотки вносили в разведении 1:300, а меченые I (50 тыс.имп/мин) антитела против человека по 10 шт. Опре-

деляли процент относительного связывания (по сравнению с 150 человека) на ^ счетчике ( Оапша-Тгцс 1290, Нидерланды).

Результаты исследований. Было установлено, что положительные туберкулиновые пробы определяются лишь у части детей (21,7%-в возрасте 7 лет и 28,9^ - 12 лет). То есть, во-первых, частота положительных туберкулиновых проб, несмотря на проведение практически "сплошной" вакцинации ВСб, не является высокой, а, во-вторых, число положительных туберкулиновых реакций выше у детей более старшего возраста. Это вполне понятно, так как кожные пробы являются отражением развития клеточного иммунитета, который усиливается после повторного введения антигена (вакцинации).

Показано также, что у детей и 7, и 12 лет уровень антител выпе, чем у новороадеикых (табл.1). Известно, что антитела 1еО класса передаются через плаценту. В связи с этим низкий уровень противотуберкулезных антител у новоровдегогых иогшо о(5ьяснить невысокой степенью инфицирования ьспсобактершши туберкулеза населения Литвы (в частности, матерей обследованных детей). Уровень антител был выше у детей более старшего возраста; то еоть, в это« случав по вполне понятным причинам обнаруживалась та же закономерность, что и при определении туберкулиновой чувствительности кожи.

Уровень противотуберкулезных антител в ИМ у детей разных возрастных групп (в единицах оптической плотности - ОД^д^)

Антигены Í веские™*! Дети 7 лет ! ^ети лет ' Новорожденные

f пилсюел— ¡ тати ' т ! ! 1 I 2 ' 3 ! J

М+ Ш (Г 0,557+0,03 0,468 0,799+0,04 0,150+0,01 0,499 0,05

г % 84,02 62,52 37,13

РР D ' п. 244 156 31

Р1-2 Р1-3 Р2-3 <•0,01 <0,001. <0,001'

• М+ и 'а- 0,806+0,04 0,624~ 0,902+0,05 0,163+0,01 0,625 0,06 "

V * /о 77,52 69,23 34,17

BCG П ' Р1-3 Р2-3 244 156 31 <0,001 ^0,001

М+ m 0,704+0,04 0,965+0,04 0,275+0,02

ff" 0,625 0,499 а, ш

V % 88,77 51,71 40,51

H^Rv п 244 156 31

Р1-2 Р1-3 Р2-3 -0,01 с 0,001 с0,001

При сопоставлении уровня антител у туберкулинполояительных и туберкулинотрицательннх детей (к до, и после ревакцинации) было установлено, что у-туберкулинполояительных он существенно (достоверно) выше (табл.2)« Эта закономерность (но не количесг-

венными методами) определялась и ранее в ряде работ. Однако имеются исследования, в которых не было обнаружено различий в уровне противотуберкулезют а .'ител у туберкулшшоложитель-ных и туберкулкнотрнидтелыых здоровых и больных туберкулезом людей. Таким образом, проведенные исследования (выполненные с использованием современных количественных методов) внесли определенную ясность в эту проблему.

Таблица Z

Уровень противотуберкулезных антител в И2А у детей с разной туберкулиновой чувствительностью (OJCjgg)

Антчгрнн I Статистичес- ! Туберкулинотряца-i Туберкулкнпологя-1 KJJe показатели! тельные дети j тельные дети

_I_L__I_

М+ и 0,562+0,03 0,927+0,05

0~ 0,521 0,495

FPD v % 92,94 53,39

а 302 ' 98

Р <0,001

М+ m 0,720+0,04 . 1,221+0,06

Г 0,695 0,594

BCG- V % 96,55 4S.-35

п 302 . 98

Р <-0,001

М+ га 0,735+0,04 1,023+0,05

(Г 0,695 00495

H37Rt V % 94,55 48,38

п 302 93

Р ¿0,001

Было показано, что после вакцинации BCG имеет место увеличение уровня противотуберкулезных антител. Причем, высокий уровень антител определялся черйз 3 ыес после вакцинации, содержание антител снижалось через.I .год и оставалось на том же уровне через 2 года (табл.3). При этом можно отметить, что подобная Tei денция имела место при определении антител и ИМ, и РИА. Можно было такке констатировать» что несмотря на принципиально сходны« показатели при использовании всех 3 антигенов, более высокие результаты были получены при постановке реакции с антигеном ЕС&. Следует подчеркнуть, что хотя данные об увеличении уровня, антител после вакцинации ВС& получены и в других исследованиях, проведенных ранее, ванно было их подтвердить количественными методами. Кроме того, впервые показано, что в данной ситуации вьшэ уровень антител к гомологичному (BCG), чем гетеролоточному (Hgj,Rv ) антигену. •

Выло установлено также, vio у ревакцинированных туберкулин положительных детей уровень антител был вше, чем у туберкулин-отрицательных (табл.4).

Для углубленного изучения взаимосвязи кожных туберкулино-' вых реакций и уровня противотуберкулезных антител был проведен регрессионный анализ с использованием методов наименьших квадратов. Были рассчитаны уравнения регрессии, характеризующие зависимость уровня специфических антител от туберкулиновой чувствительности коаи.

Анализ полученных'данных наглядно продемонстрировал взаима связь уровня противотуберкулезных антител к разным антигенам с туберкулиновой чувствительностью (рис.1). При этом линия регрес сии, построенная с антигеном ВСС (и в ®Л, и в РИА), была распо

1,5 1,0

0,5

1,5

1,0 0,5

I

• 1..... • 0 0 * l • • • » J^ •

i • •

12 мм

2

• • • •

• » --р i "T* ¿sJB3» •

• 9

12

мм

1,5

о,;

• 3

• * ter*

• f^ * 0 •

12

мм

Рис. I Зависимость урозня лигител от размер»

туберкулиновой реакции у дятрй 12 лет

I) с антигеном £) с янтигрнгч Ira л) с антигеном 14.о

Влияние вакцинации ВС& на уровень противотуберкулезных антнтел в И2Д у детей 12 лет (0Д492)

Антигены

Статистик

ческие

показа-

Сроки исследований

до вакци-

после вакцинации

; тели { .нации } 3 ыес | I год } 2 года

! I | 2 | 3 ! ^

Ы+ в 0,737+ 0 ,03 - 1,436+ 0,987+ 0,06 ~ 0,04 ~ 0,842+ 0,04 ~

РРю п III 96 80 73

Р1-2,3,4 ¿0,001 <0,001 <0,5

Р2-3,4 <0,001 <0,001

и о,еао+ 0,04- 1,611+ 1,27+ 0,07 ~ 0,05" 1,103+ 0^04 -

ВС& п III 96 80' 73

Р1-2,3,4 <0,001 <0,001 ^0,001 .

Р2-3,4 <.0,001 <0,001

М+ в 0,720+' 0,03 - 1,501+ 1,120+ 0,07 " 0,05 ~ 0,925+ 0,04 "

н^ат и III 96 80 73

Р1-2,3,4 < -0,001 <0,001 ¿0,001

Р2-3,4 <0,001 <0,001

лохена на графике выше, чем линии, построенные с другими анти генами, что отражаем большую специфичность реакции с антигено ВС&. Эти результаты вносят еще большую ясность в спорный вопр о соотношении (и возможной взаимосвязи)' уровня противотуберну нас антител и туберкулиновой чувствительности. Наличие такой

Уровень противотуберкулезных антител в ИМ у детей через год после ревакцинации (ОД490)

! Статистичес-! Туберкулинотрица- { Туберкулинполозш-I кие показатели | тельные дети } тельные дети

!4+ т 0,736+0,03 1,151+0,04

<Г 0,368 0,358

РРВ V % 50,00 ■ 31,07

п 151 80

Р ¿0,001■

М+ га 0,915+0,03 1,419+0,06

£Г 0,368 0,536

БС& V % 40,22 37,78

п 151 80

Р ¿0,001

М+т 0,873^0,03 1,334+0,06 '

V С 0,368 0,536

V % 42,15 40,18

п 151 80

Р * Л);001

взаимосвязи служит основанием для более широкого применения определения противотуберкулезных антител (методами количественного микроанализа) для оценки эффекта вакцинации ВС&.

Было проведено и изучение (с использованием того же метода) взаимосвязи размеров поствакцинного знака и уровня противотуберкулезных антител. При этом была также обнаружена прямая корреляционная зависимость (рис.2). При постановке реакций (ИФА и РИА)

1,6 1,0 о;5

I •

[ « • • 4

3 5 _ 7 9 мм

3 5 7 ? км

Рис, 2 .Зависимость уровня антител от размера ПОСТПОКЦИННОГО знака у детей 13 лот I) с лнтигеном Н3?Ку 21 с янгигеном РРЬ о) с «нтигонои ВС»

с антигеном BCG-этА зависимость была наиболее выражена. Наличие поствакцинного знака является критерием "приживления" вакцинного штамма BCS, а его размер, по данным литературы (Митинская Л.А., 1985), зависит от дозы "прижившейся" вакцины и от реакции защитных факторов макроорганизма. То есть предполагается, что чем больше размер вакцинного знака, тем более эффективным должен быть протективный и стимулирующий эффект действия вакцины. Исходя из этого положения, взаимозависимость размеров вакцинного знака и уровня противотуберкулезных антител представляется вполне закономерной и, следовательно, уровень антител может служить косвенным показателем "удавшейся" вакцинации.

Как уже сказано выше, туберкулиновые пробы являются общепризнанным критерием развития поствакцинного иммунитета. Исходя из этого положения, обнаружение коррелятивных связей между размерами вакцинных знаков и туберкулиновых проб, с одной стороны, и уровне противотуберкулезных антител, с другой, является серьезным основанием для использования, определения противотуберкулез-нех антител методами количественного микроанализа с целыэ оценки эффективности вакцинации EGG. Большим преимуществом этйх методов, в первую очередь Шк (перед другими иммунологическими тестами la vitro ), является использование в них микроколичеств (шкролитров) крови.

Для изучения возможности использования примененных серологических тестов для дифференциальной диагностики инфицирования и вакцинного эффекта было проведено экспериментальное исследование на шшах линии D ВА/2 и популяционныз исследования на вакцинированных и "инфицированных" детях.

В экспериментальном исследовании мышей либо вакцинировали

BCG, либо заражали вирулентной культурой микобактерий (Н^Ет ). Было установлено, что вакцинация слабо стимулировала синтез противотуберкулезных антител. Уровень антител был существенно выше у зараженных мышей. При^м, эта закономерность была наиболее выражена при постановке реакции с антигеном H^Rv - . О том, что уровень антител является более высоким у зараженных, чем у вакцинированных животных было известно и ранее (Авербах М.М., Литвинов В.И., 1980). Однако'в настоящей работе получены также данные, свидетельствующие о том, что определяемые у зараженных вирулентной культурой мышей антитела в большей' степени реагируют с гомологичным (H-^Rv ) антигеном.

В популяциокном исследовании было установлено, что высокий уровень противотуберкулезных антител определяется у инфицированных детей (с виражом туберкулиновых проб). При этом показатели содержания антител у инфицированных детей были выло при постановке реакции (ИФА и РИА) с антигеном (соникатом) H^Rv , чем с соникатом BGG или PPD (табл.б); •

В настоящее время установление диагноза инфицирования детей вирулентными микобактериями является чрезвычайно сложной проблемой и поэтому следует считать целесообразной постановку И2А (как более простого по сравнению с другими типами микроанализа, в том числе РИА, метода, для которого, кроме того, имеются отечественное оборудование и реактивы) с соникатами BCG и Hg^Rr в качестве дополнительного метода диагностики инфицирования детей; дифференциальной диагностики между поствакцинальной и инфекционной аллергией при положительных туберкулиновых пробах.

Уровень противотуберкулезных антител в И£А у "зиражных и вакцинированных детей (ОД492)

! Антигены | ! ! Статистичес- ! кие показатели { 1 по,, и Вакцинированные ту-у { беркулинполонитель-ные

М+ и 1,531+0,08 1,151+0,04

Г 0,530 0,356

РРИ т % 22,62 31,07

п 44 80

Р «0,001

М+' □ 1,567+0,09 1,219+0,06

0,596 0,536

всо V % 38,08 43,97

п 44 80

Р «0,01

М+ п 2,105+0,12 ( 1,134+0,06

<7- 0,795 0,536

Н^Нг V % 37,79 40,21 '

п 44 80

Р ¿0,001

Таким образом, проведенная работа продемонстрировала, что методы количественного микроанализа (в первую очередь, И5А) могут быть' с успехом использованы для определения противотуберкулезных антител как в качестве критерия оценки эффективности вакцинации ВС&, так и для выявленшЛинфицированин детей вирулентными микобактериями.

ВЫВОДЫ

1. Уровень противотуберкулезных антител, определяемых в УШ. и РИА, у детей в возрасте 7-12 лет выие, чем у новорожденных. Эта закономерность определена при постановке реакции как с FPd , так и комплексными антигенами (ультразвуковыми дезинтегратаыи), выделенными из микобактерий туберкулеза штаммов BCG и H-^Rv .

2. Обнаружены существенные различия в уровне противотуберкулезных антител у туберкулинположительных и туберкулинотрица-тельных детей, причем эта закономерность была наиболее выражена при постановке реакции с соникатом BCG и в наименьшей степени -с РРо . Эта закономерность определялась в обеих возрастных группах (7 и 12 лет).

3. Отмечена тенденция к повышению уровня противотуберкулезных антител с возрастом - содержание антител в сыворотке было1 вше у детей 12 лет, чем 7 лет.

' 4. Уровень противотуберкулезных антител существенно увеличивается через 3 месяца после ревакцинации BCG, падает к году после ревакцинации и сохраняется на том же уровне через 2 года. Такая закономерность определяется у детей и 7, и 12 лет. При этом сходные данные получены при постановке реакции со всеми 3 антигенами, но наиболее выраженное повышение уровня антител отмечается при постановке тестов с антигеном BCG.

5. У вакцинированных детей имеется тенденция к повышении уровня противотуберкулезных антител,э груше туберкулинположи-тельных по'сравнений с туберкуликотрицательными.

6. Обнаружена прямая сильная корреляция между размерами поствакцинального рубчика (вакцинного знака) и уровнем противотуберкулезных антител. Следовательно, уровень антитол может

быть косвенным показателем эффективности проведенной вакцинации ("приживления вакцины").

7. Обнаружена такие прямая, выраженная корреляция между размером кожной реакции (Манту) и уровнем противотуберкулезных антител у вакцинированных детей. Следовательно, вакцинация BCG одинаково эффективно стимулирует как клеточный, так и гуморальный противотуберкулезный иммунитет (отражением развития которого является вышеуказанные иммунологические тесты).

8. У вакцинированных BCG мышей d ВА/2 не было обнаружено различий уровня противотуберкулезных антител при постановке ИФА и РИА с FPD , антигенами (соникатами) BCG и H^Rr . У зараяенных вирулентной культурой мыз ей существенно повышался уровен- противотуберкулезных антител. Особенно выраженное увеличение уровня антител отмечалось при постановке реакций с антигеном H^Ry .

9. У "виражных" (инфицированных) детей уровень противотуберкулезных антител при постановке ИША и РИА с соникатом Hjfiv существенно выше, чем у туберкулинположительных, тем более ту-беркулинотрицателышх вакцинированных детей.. Следовательно, определение уровня противотуберкулезных антител монет служить дополнительным критерием для дифференциальной диагностики инфицирования от Еако1нного эффекта (дифференцирования поствакцинальной и инфекционной аллергии).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

I. Рекомендуется применение иимунофермектного агализа (И2А) с антигеном (ультразвуковым дезинтегратом ECG) для определения противотуберкулезных антител с цельи оценки вакцинного аффекта BCG у детей, в связи с тем, что результаты этого теста имепт вы-

с о кую прямую коррелятивную взаимосвязь с размерами п.ост вакцинных знаков и кожных туберкулиновых реакций.

2. Рекомендуется использование ИМ с антигенами (ультразвуковыми дезинтегратаыи (Ш? и Н^Еу ) для дифференциальной диагностики поствакцинной и инфекционной туберкулиновой аллергии (дифференцирования и.инфицирования детей от вакцинного эффекта ВОЗ), в связи с тем, что определяются существенные различия в уровне антител против указанных антигенов в этих группах детей.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Результаты определения антител иымунофермектныы методом у ингактных и инфицированных микобактериями детей // Проблемы диагностики и лечения заболеваний локоматоркого аппарата в по-килом возрасте. Лабораторная диагностика нарушений обмена веществ и другие актуальные вопросы / Тез.докл.совместной конф. науч.обцеств врачей-геронтологов и врачей лаборантов Литовской ССР. Паланга, 13-14 октября 1938 г. - Вильнюс, 1988. - С.84-85. Соавт. Пятрапкайге А., Гильбурд Б., Ыицкус Э.

2. Изучение уровня противотуберкулезных антител в сыворотке вакцинированных БЦЯ детей с различной туберкулиновой чувствительностью П Иммунодефицита и Н1. А-система. Ташкент, 1989. ■ С.34-35./ Соавт. Гильбурд Б.

3. Уровень противотуберкулезных антител у детей и подрост, ков до и пос-йе ревакцинации БЦЕ // Актуальные вопросы профилак тики и раннего выявления туберкулеза у подростков. - М., 1989. С. 138-140. / Сб.тр.ЦНИИ туберкулеза, т.53./ Соавт. Гильбурд 5. Пятрашкайте А.

4. Использование антигенов PPD и M.tuberculoais H^rv

' для определения противотуберкулезных антител у детей // Актуальные вопросы эпидемиологии и клиники туберкулеза и других заболеваний легких. Вильнюс, 1989. - С.140-142. / Соавт. Гильбурд Б.

5. Влияние вакцинации ЕЦШ на уровень противотуберкулезных антител у школьников // Актуальные вопросы эпидемиологии и клиники туберкулеза и других заболеваний легких. Вильнюс, 1989. -С.142-143.

6. Humoralinla priegtuberculiosinia inunit et аз po BOG re-vaooinaci jo-3 .// Siuolaikiniai mediclnos mokslo laime;)imai, Viliiiua11920,p.66-67. ( bendr* Idubartaite !.!., Fetraskalte A.).

7.Информативность иммуноферментного метода при инфицировании детей микобактериями туберкулеза / / Эпидемиология,диагностика, клиника и лечение туберкулеза и неспецифических заболевании легких /Тез.докл.II съезда фтизиатров и пульмонологов ССР Молдовы.-Кишинев,1991.-С.114./ Соавт.Жуклис И.,Лебедникиене.Г.

Ъ.Применение ИФА в дифференциальной диагностике туберкулеза и саркоидоза //Эпидемиология,диагностика,клиника и лечение туберкулеза и неспецифических заболевании легких/Тез.дскл.II съезда фтизиатров и пульмонологов ССР Молдовы.-Кишинев,1991.-С.1П./

9.Оценка гуморального противотуберкулезного иммунитета методом ИФА у ревакцинированных детей//Соярименные вопросы клинической иммунологии и региональной аллерголсгии/Тез.докл.1 республиканского съезда иммунологов и аллергологов Узбекистана.-14-16 мая 1991 Самарканд.-CI50.