Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Противоишемические, кардиопротективные и антигипертензивные свойства нового антиоксидантного препарата Валеокор-Q10 (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

СЕЛЕЗНЕВА Арина Игоревна

ПРОТИВОИШЕМИЧЕСКИЕ, КАРДИОПРОТЕКТИВНЫЕ

И АНТИГИПЕРТЕНЗИВНЫЕ СВОЙСТВА НОВОГО АНТИОКСИДАНТНОГО ПРЕПАРАТА ВАЛЕОКОР-<2Ю (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.03.06 — фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 2 АВГ 2013

005532233

Санкт-Петербург - 2013

005532233

Работа выполнена в Федеральном Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова" Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук профессор Георгий Иванович Дьячук

Официальные оппоненты:

Николай Андреевич Лосев, доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией фармакологии и химии лекарственных веществ Научно-исследовательского института экспериментальной медицины РФ

Вячеслав Павлович Ганапольский, доктор медицинских наук, начальник научно-исследовательского отдела обитаемости Научно-исследовательского центра ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ

Ведущее учреждение:

ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова Минздрава России

Защита диссертации состоится «24» сентября 2013 г. в 13-00 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 215.002.07 при ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова МО РФ» (194044, Санкт-Петербург, ул. Акад. Лебедева, д.6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ

0

Автореферат разослан » ШЫ/СМОу 2013 г.

Ученый секретарь совета

доктор медицинских наук, профессор

Богомолов Борис Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования

Заболевания системы кровообращения составляют основу смертности людей в различных странах (Oganov R.G. et al. Demographic tendency in Russian Federation: Impact of cardiovascular diseases // Cardiovascular therapy and prevention. 2012. T.l 1 № 2. C.5-10). В России ее показатели в среднем составляют 56-60 % от общей смертности. При этом в структуре смертности от сердечно-сосудистых заболеваний 2 % составляет смертность от гипертонической болезни, 53 % - от ИБС, 31 % - от мозгового инсульта, 14 % - от других болезней кровообращения (Федеральная служба государственной статистики: [электронный ресурс]

www.gks.ru/free_doc/2013/demo/edn02-13.htm). ИБС и артериальная гипертензия, представляя непосредственную опасность для жизни, являются также и причиной ухудшения качества жизни населения. В связи с этим, является актуальной разработка и внедрение в лечебную практику эффективных средств патогенетической терапии и профилактики ишемической болезни сердца и гипертензии.

Известно, что нормальное функционирование всех органов и систем осуществляется с участием свободных радикалов. Однако усиление генерации активных форм кислорода предшествует и способствует прогрессированию таких заболеваний как атеросклероз, ИБС, артериальная гипертензия, сахарный диабет и многие другие. На сегодняшний день доказана ведущая роль оксидативного стресса в патогенезе большинства заболеваний сердечно-сосудистой системы (Сыровая А.О. и др. Биологическая роль свободных радикалов в развитии патологических состояний // Международный медицинский журнал. 2012. Т. 18, № 3(71). С. 98-104).

В современной терапии существует большое количество лекарственных препаратов для лечения патологий сердечно-сосудистой системы (Чазов Е.И. и др. Рациональная фармакотерапия сердечно-сосудистых заболеваний: руководство для практикующих врачей / Под общ. ред. Е.И. Чазова, Ю.Н. Беленкова. М.: Литтерра. 2004. 972 е.). Комплексная лекарственная терапия сердечно-сосудистых заболеваний приносит положительные результаты, однако длительное применение большинства лекарственных средств сопровождается побочными эффектами, кроме того для получения эффекта препаратов базовой терапии часто необходимо их использование в высших терапевтических дозах (Инжутова А.И. и др. Клиническая эффективность комплексной терапии кардиоваскулярной патологии // CardioCoMaTHKa. 2011. №4. С. 45-48). Таким образом, существует необходимость снижения риска развития побочных эффектов, протекции органов-мишеней и уменьшение доз, эффективных для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Эти цели достижимы при включении в терапию эффективного антиоксидантного препарата, обладающего высокой биодоступностью.

Степень разработанности темы исследования

Валеокор-QlO является принципиально новым лекарственным средством на основе убидекаренона, характеризующимся высокой биодоступностью, достигнутой благодаря новой технологии производства и разработке новых лекарственных форм коэнзима-QlO. Эффективность и механизмы действия нового препарата убидекаренона в отношении ишемии миокарда и артериальной гипертензии до сих пор не была изучена.

Клинически и экспериментально установлено, что уровень убидекаренона в тканях резко снижен при сердечно-сосудистых заболеваниях (Molyneux S.L. et al. Coenzyme Q10: an independent predictor of mortality in chronic heart failure // J. Am. Coll. Cardiol. 2008. № 52. P.1435-1441; Медведев O.C. и др. Коэнзим-QlO в кардиологической практике - теоретические основы и результаты клинических исследований // РМЖ. 2009. Т. 17. № 18. С.1177-1181). Это привело к развитию гипотезы о том, что именно дефицит Q10 вносит вклад в прогрессивный характер сердечных нарушений. Кроме того коэнзим-QlO влияет на ключевые процессы в митохондриях, являющихся функционально значимыми органеллами в кардиомиоцитах. Были отмечены противоишемические, кардиопротективные и антигилертензивные свойства убидекаренона (Kumar A. et al. Role of coenzyme Q10 (CoQIO) in cardiac disease, hypertension and Meniere-like syndrome // Pharmacology & Therapeutics. 2009. № 124. P.259-268), однако ключевые механизмы этих фармакологических эффектов до конца не установлены.

До сих пор антигипертензивные свойства убидекаренона использовались редко, несмотря на то, что снижение системного артериального давления является одним из важнейших фармакологических эффектов, способствующих патогенетической терапии большинства заболеваний сердечно-сосудистой системы. Отчасти ограничение использования убидекаренона при артериальной гипертензии было обусловлено отсутствием четкой схемы доз, кратности и длительности применения препаратов убидекаренона.

Недостаточно данных о зависимости «доза-эффект» убидекаренона, что оставляет открытым вопрос эффективного дозирования и схемы применения препаратов убидекаренона при сердечно-сосудистых заболеваниях - как известно, точность дозирования и подбор оптимальной дозы является важнейшим критерием эффективности лекарственной терапии.

На сегодняшний день существует большое количество лекарственных средств на основе убидекаренона за рубежом и 2 лекарственных препарата, зарегистрированных в России. Однако вещество убидекаренон практически нерастворимо в воде, что ограничивает его биологическую доступность при пероральном приеме (Wajda R. Et al. Increase of bioavailability of coenzyme Q10 and vitamin E // J.Med.Food. 2007. V.10(4). P.731-734). Кроме того, он имеет относительно большую молекулярную массу (863,34), что затрудняет

проникновение подобных веществ через клеточные мембраны (Матюшин A.A. и др. Оценка липофильности некоторых антиоксидантов нового поколения // Фармация. 2008. №5. С. 23-29). В связи с этим, разработка, исследование и внедрение в лечебную практику новых препаратов и новых лекарственных форм убидекаренона с повышенной биодоступностью является важным и необходимым условием для получения высокоэффективного антиоксидантного средства патогенетической терапии и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний. Все вышеописанное определило цель и задачи настоящего исследования.

Цель и задачи исследования Целью настоящего исследования явилось экспериментальное изучение противоишемического, кардиопротективного и антигипертензивного эффектов нового антиоксидантного препарата Валеокор-QlO. Задачи исследования:

1. Изучить фармакологические эффекты и механизмы действия убидекаренона (Валеокор-QlO) при ишемии.

2. Исследовать кардиопротективные свойства убидекаренона (Валеокор-QlO). Установить механизмы реализации этих свойств.

3. Оценить влияние нового антиоксидантного препарата Валеокор-QlO на артериальное давление у спонтанно-гипертензивных животных. Разработать схему подбора доз, длительности и кратности применения нового препарата Валеокор-QlO при артериальной гипертензии.

4. Определить дозозависимость фармакологической активности убидекаренона (Валеокор-QlO) при ишемии и гипертензии.

5. Провести сравнительный анализ фармакодинамики и фармакокинетики зарегистрированных препаратов убидекаренона и Валеокор-QlO, обладающего повышенной биодоступностью (в новых лекарственных формах — жевательные таблетки и раствор для инъекций).

6. Подготовить и направить документы в Фармакологический комитет с целью получения разрешения на клинические испытания препарата Валеокор-Q 10 в качестве противоишемического средства.

Научная новизна исследования В работе получены оригинальные данные об эффективности и механизмах действия нового препарата убидекаренона при ишемии и гипертензии в эксперименте. Выявлено кардиопротективное и кардиотоническое действие препарата Валеокор-QlO. Механизмы реализации этих эффектов связаны с ингибированием свободно-радикальных процессов, что подтверждено исследованиями in vitro. Установлено, что одним из ключевых механизмов противоишемического эффекта убидекаренона является ускорение неоваскуляризации и дифференцировки сосудов поврежденного миокарда.

Впервые выявлены дозозависимые эффекты нового препарата убидекаренона (Валеокор-QlO): в экспериментах in vivo наибольшая противоишемическая, кардиопротективная и антигипертензивная активность установлена при применении препарата Валеокор-QlO в диапазоне доз 1,6 - 7,4 мг/кг, дальнейшее увеличение дозы не приводило к увеличению эффекта. Разработана схема подбора доз, длительности и кратности применения нового препарата Валеокор-QlO при артериальной гипертензии. Установлено преимущество нового препарата убидекаренона Валеокор-QlO в лечении ишемии и гипертензии, которое заключается в высокой биодоступности, более выраженном антигипертензивном и кардиотоническом эффекте по сравнению с некоторыми другими препаратами убидекаренона.

Полученные результаты важны для организации экспериментальных исследований с методологической точки зрения, с точки зрения определения спектра возможных механизмов действия противоишемических средств, а также для планирования и проведения клинических испытаний сердечно-сосудистых препаратов и применения их в медицинской практике.

Научно-практическая значимость

Теоретическое значение работы состоит в установлении новых механизмов действия коэнзима-QlO (убидекаренона). Влияние убидекаренона на ишемизированный миокард реализуется за счет усиления процессов неоваскуляризации и дифференцировки сосудов, а также за счет его антиоксидантного действия. Практическое значение работы заключается в обосновании необходимости применения нового препарата убидекаренона при ишемии и гипертензии, установлении эффективных доз и длительности приема препарата. Получено экспериментальное подтверждение фармакологической эффективности нового препарата убидекаренона, обладающего повышенной биодоступностью за счет новой технологии производства и новых лекарственных форм. Доказанные эффекты нового препарата убидекаренона позволили рекомендовать Валеокор-QlO для клинических испытаний с целью последующей регистрации в качестве противоишемического средства. Установлена зависимость «доза-эффект» нового препарата Валеокор-QlO. Выявлена закономерность эффективности препарата в наименьших исследуемых дозах, дальнейшее увеличение дозы не приводит к возрастанию эффекта, что позволит провести правильное дозирование при использовании препаратов убидекаренона в лечебной практике.

Методология и методы исследования

Методология исследования включала оценку эффективности нового препарата убидекаренона «in vivo», «ex vivo», «in vitro». Модели «in vivo» включали исследования фармакологического действия Валеокор-QlO при экспериментальном инфаркте миокарда с помощью перевязки левой коронарной артерии, а также

влияние препарата на артериальное давление у спонтанно-гипертензивных животных. Проводили оценку кардиопротективных и кардиотонических свойств «ex vivo» на модели ишемии-реперфузии изолированного сердца по методу Лангендорфа. «In vitro» исследовали механизмы действия и роль антиоксидантной активности убидекаренона при генерации перекисного, гидроксильного радикала, а также проводили оценку его восстанавливающих свойств. В работе использовались физиологические, биохимические и патоморфологические методы исследования.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Выявлен противоишемический эффект нового препарата убидекаренона, который связан с ускорением неоваскуляризации и дифференцировки сосудов поврежденного миокарда.

2. Установлено кардиопротективное и кардиотоническое действие препарата убидекаренона (Валеокор-QlO). Механизм кардиопротективного действия нового препарата убидекаренона реализуется за счет угнетения процессов цитолиза кардиомиоцитов и связан с ингибированием перекисного окисления липидов.

3. Выявлен антигипертензивный эффект убидекаренона в дозах от 1,6 до 7,4 мг/кг и противоишемический эффект в тех же дозах, что позволяет установить диапазон эффективных доз для лечения гипертонической болезни и ишемической болезни сердца.

4. Разработана схема подбора доз, длительности и кратности применения нового препарата Валеокор-QlO при артериальной гипертензии. Установлено, что максимальный антигипертензивный эффект наблюдается через 1 ч после введения препарата, длительность антигипертензивного эффекта составляет 3 ч, что соответствует данным экспериментальной фармакокинетики препарата Валеокор-QlO. При курсовом применении препарата наблюдается стойкое снижение АД с переходом эффекта на следующие сутки и стабилизацией его на этом уровне к концу курса лечения.

5. Проведен сравнительный анализ фармакодинамики и фармакокинетики нового препарата убидекаренона. Валеокор-QlO, полученный согласно новой технологии производства, в новых лекарственных формах жевательных таблеток и раствора для инъекций обладает повышенной биодоступностью. Фармакологическая активность препарата коррелирует с его фармакокинетикой.

Степень достоверности и апробация материалов исследования Степень достоверности определяется достаточным количеством экспериментальных данных, полученных с использованием 320 крыс, применением современных методов рандомизации, включением в исследование интактной, контрольной групп и групп сравнения, сроками наблюдения, достаточными для экстраполяции полученных данных в клинику, выбором адекватных методов

физиологического, биохимического и патоморфологического исследования, использованием современных методов медицинской статистики.

Реализация результатов работы. Результаты работы легли в основу материалов, представленных в Министерство Здравоохранения с целью получения разрешения на клинические испытания препарата Валеокор-Q 10 в качестве противоишемического средства:

- BAJIEOKOP-QIO, таблетки жевательные 50 мг - Вх. № 409054 (МЗ РФ). Препарат зарегистрирован и внесен в Государственный Реестр под номером ЛП-000650 от 28.09.2011 г.

- BAJIEOKOP-QIO, раствор для внутривенного и внутримышечного введения, 10 мг/мл - Вх. № 420733 (МЗ РФ). Проведены клинические испытания I фазы. В настоящее время проводится экспертиза с целью выдачи разрешения на проведение клинических исследований II фазы.

Исследование выполнено в соответствии с планом научно-исследовательской работы Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И.Мечникова.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на конференции «Питание здорового и больного человека» (Санкт-Петербург, 2004), 7-ой Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2006), 9-м международном съезде «Phytopharm» (Санкт-Петербург, 2005); 10-м международном съезде «Phytopharm» (Санкт-Петербург, 2006), научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицины и биологии» (Санкт-Петербург, 2010), научно-практической конференции "Метаболический синдром: междисциплинарные проблемы" (Санкт-Петербург, 2010), 1-ой Всероссийской научно-практической конференция молодых ученых по профилактике и лечению сердечно-сосудистых заболеваний (г. Барнаул, Россия, 2012), на 4-м Съезде фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (г. Казань, 2012), 3-й Всероссийской Интернет - конференции: "Современные проблемы анатомии, гистологии и эмбриологии животных" (Казань, 2012), 1-ой Международной Интернет-конференции «Медицина в XXI веке» (Казань, 2012), 8-м международном съезде «Phytopharm» (Санкт-Петербург, 2012), 1-ой отчетной сессии научных подразделений СЗГМУ им. И.И. Мечникова «Фундаментальные исследования в современной медицине: достижения и перспективы» (Санкт-Петербург, 2013). По теме диссертации опубликованы 9 статей (7 в журналах, рекомендованных ВАК РФ) и 11 тезисов. Апробация диссертации прошла на заседании проблемной комиссии №2 «Внутренние болезни, другие терапевтические заболевания, восстановительная медицина» государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Северо-Западного государственного медицинского университета имени И.И.Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Личное участие автора в выполнении исследования

Исследования были выполнены на базе кафедр фармакологии и биохимии СЗГМУ им. И.И. Мечникова. Автор лично осуществлял планирование экспериментов и их непосредственное выполнение, статистическую обработку полученных результатов, обсуждение, написание статей, тезисов и докладов, диссертации и автореферата.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, состоящей из 4 разделов, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Работа изложена на 147 страницах машинописного текста, иллюстрирована 46 рисунками и 20 таблицами. Библиографический указатель содержит 211 наименований, в том числе 86 отечественных и 125 иностранных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1 представляет собой обзор литературы и описывает механизмы действия, эффективность, аспекты клинического применения и роль антиоксидантных препаратов в современной медицине. Особое внимание уделяется роли убихинона в процессах метаболизма и антиоксидантной защиты тканей сердечно-сосудистой системы.

В Главе 2 отражены основные методы и экспериментальные модели исследования, которые были использованы при выполнении диссертационной работы. Глава 3 объединяет результаты собственных исследований автора. В Главе 4 представлено обсуждение полученных результатов. В заключении приведены выводы, практические рекомендации и список источников литературы, использованных автором.

Материалы и методы исследования

Объект исследования. Объектом исследования явился новый препарат под рабочим названием Валеокор-С^Ш, полученный согласно новому методу, позволяющему повысить биодоступность убидекаренона. Препарат исследовали в двух новых лекарственных формах — жевательные таблетки и раствор для инъекций.

Выбор животных. Опыты выполнены на 230 крысах-самцах линии Вистар и 90 спонтанно-гипертензивных крысах массой 200-220 г. Животных содержали в стандартных условиях в соответствии с правилами, утвержденными ГОСТ Р 53434—2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики (йЬР)» от 2 декабря 2009 г, в каждой клетке размещали по 5 крыс-самцов. Выбор в качестве модельной системы данного вида и линий животных подтвержден опытом исследований в области экспериментальной фармакологии сердечно-сосудистой системы.

Исследование противоишемических свойств Валеокор-QlO на модели острого инфаркта миокарда

Противоишемические свойства препарата Валеокор-QlO исследовали на модели перевязки левой коронарной артерии сердца крысы (Дьячук Г.И., Лапкина Г.Я. Способ получения экспериментального инфаркта миокарда у крыс: Удост. на рац. предл. № 1309. СПб. 1992). Под внутривенным наркозом рассекали кожу и подкожную жировую клетчатку, ткани отделяли по фасции, грудные и межреберные мышцы разъединяли вдоль хода волокон. После вскрытия грудной клетки сердце выводили в операционную рану, левую коронарную артерию прошивали и перевязывают лигатурой. Контроль наступления ишемии миокарда проводили электрокардиографически. Исследуемый препарат и препарат сравнения Милдронат вводили животным внутрибрюшинно и внутривенно по лечебной схеме ежедневно в течение 14 дней. Эффективность препарата оценивали по летальности, показателям ЭКГ, результатам биохимических (активность ACT, ЛДГ и КФК) и гистологических исследований, а также показателям антиоксидантного статуса (уровень ПОЛ плазмы крови и восстановленного глутатиона в эритроцитах). В исследование включали группу интактных животных, животных с инфарктом миокарда (ИМ) без лечения, ложнооперированных животных, которым проводили операционный доступ без лечения и группы, получавшие исследуемый препарат и препарат сравнения в пероральных и инъекционной лекарственной форме.

Исследование кардиопротективных свойств Валеокор-QlO на модели ишемии-реперфузии изолированного сердца по Методу Лангендорфа

Кардиопротективные и кардиотонические свойства препарата исследовали на модели ишемии-реперфузии изолированного сердца по методу Лангендорфа (Skrzypiec-Spring М. et al. Isolated heart perfusion according to Langendorff—Still viable in the new millennium // J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 2006. V. 55. №2. P. 113126). Этот метод позволяет оценить непосредственное влияние препарата или его метаболитов на миокард при отсутствии влияния гуморальной и нервной систем. Через 2-3 мин после извлечения сердца из грудной полости животного канюлю, обеспечивающую поток перфузата, вводили в аорту так чтобы не повредить клапан. Запускали перфузию сердца в течение 10 мин для адаптации. После адаптации регистрировали исходные параметры деятельности сердца, отбирали перфузат для оценки активности ферментов ACT и КФК, после чего перекрывали поток перфузата — таким образом формировалась ишемия. В то время, пока система была отключена, в перфузат вводили препарат. Через 30 мин поток восстанавливали, моделируя реперфузию в течение 30 мин. По окончании реперфузии регистрировали исследуемые параметры: максимальное давление в левом желудочке LVP (мм рт.ст.), скорость сокращения левого желудочка dP/dt max (мм рт.ст/сек) и ЧСС (ударов/мин).

В систему изолированного сердца вводили не сам убидекаренон, а плазму крови, содержащую препарат. Для этого предварительно экспериментальным животным в хвостовую вену вводили раствор препарата в эффективной дозе 7,4 мг/кг. По данным фармакокинетики препарата Валеокор-QlO при введении раствора убидекаренона в вену экспериментальным животным максимальная концентрация достигается через 10 мин. Поэтому через 10 мин у животных проводили забор крови с целью получения плазмы, содержащей препарат и его метаболиты. После ишемии эту плазму вводили в систему изолированного сердца.

Исследование влияния Валеокор-QlO на артериальное давление у крыс линии SHR

В качестве модели экспериментальной гипертензии была использована уникальная порода животных - крысы SHR. Линия SHR выведена доктором Окамото в медицинской школе г. Киото в 1963 из аутбредных крыс Wistar Kyoto путем скрещивания самцов, имеющих сильно повышенное кровяное давление с самками, имеющими слегка повышенное кровяное давление. Уровень артериального давления выше, чем у крыс породы Wistar Kyoto или Sprague Dawley в среднем на 40-60 мм рт.ст. Согласно мнениям ведущих специалистов в области экспериментальной фармакологии в развитии гипертензии крыс SHR участвуют все механизмы, формирующие гипертоническую болезнь у человека (Журавлёв Д.А. Модели артериальной гипертензии, Спонтанно - гипертензивные крысы // Артериальная гипертензия. 2009. Т. 15. № 6. С.721 - 722).

Антигипертензивный эффект оценивали на 90 спонтанно-гипертензивных крысах-самцах в возрасте 4 месяца. Исследование анигипертензивной активности препарата осуществляли в два этапа. На первом этапе проводили скринингрвую оценку влияния Валеокор-QlO в инъекционной и таблетированной лекарственной формах на АД в диапазоне доз 0,2, 0,5, 1,6, 2,1, 7,4, 22,2 и 29,6 мг/кг, определяли эффективную дозу препарата и время, необходимое для достижения терапевтического эффекта. На втором этапе изучали антигипертензивное действие исследуемого препарата при курсовом лечении в эффективных дозах с целью установления явлений при повторном применении.

Оценка антиоксидантных свойств и восстанавливающей активности убидекаренона in vitro

Исследование антирадикальной активности проводили в четырех модельных системах in vitro. Определяли действие нового препарата убидекаренона на гидроксильный радикал (Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. — М.: Гриф и К, 2012. С. 769-778). Изучали способность препарата тормозить перекисное окисление липидов, индуцированное FeS04 и 2,2'-азобис(2,4-диметилвалеронитрилом) (Masahiko Tsuchiya et al. Propofol versus Midazolam Regarding Their Antioxidant Activities // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2001. V.163. №1. P.26-31). Исследовали

восстанавливающую способность препарата по отношению к калия ферроцианиду и цитохрому С (Макаров В.Г. и др. Методические указания по изучению антиоксидантной активности фармакологических веществ// Ведомости НЦ ЭСМП. 2007. №2. С. 96-103).

Статистическая обработка результатов. Выборка для каждой группы животных составляла 10-20 крыс. Статистический анализ полученных данных выполнялся с помощью программного обеспечения Статистика 6.0 (StatSoft, USA). Для всех данных применена описательная статистика: данные проверены на нормальность распределения критерием Шапиро-Уилка. Были подсчитаны среднее значение и стандартная ошибка среднего. В качестве параметрического критерия использован критерий Стьюдента для зависимых и независимых переменных. Различия определены при 0,05 уровне значимости.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение противоишемической активности препарата Валеокор-QlO на модели экспериментального инфаркта миокарда. В результате ишемии миокарда, полученной методом перевязки левой коронарной артерии, наблюдалась гибель 25-30 % экспериментальных животных. У животных контрольной группы на ЭКГ наблюдали подъем сегмента ST в 4 раза по сравнению с нормой. Острая ишемия проявлялась также в увеличении активности ACT, КФК и ЛДГ и подъеме сегмента ST в течение 24 часов после перевязки. Через 7-14 суток у экспериментальных животных, не получавших препараты, отмечали снижение вольтажа сегмента ST ниже изолинии, увеличение продуктов ПОЛ в плазме крови и снижение концентрации восстановленного глутатиона в эритроцитах. Гистологически у животных с инфарктом, не получавших лечения, отмечали распространение ишемии вглубь стенки левого желудочка. Отмечали субэпикардиально-интрамуральный инфаркт и инфаркт, поражающий все слои стенки миокарда. К 14 суткам в поврежденном миокарде наблюдалось образование новых сосудов недиффиреренцированного типа (синусоидов) и небольшое количество диффереренцированных - артериол и венул.

Противоишемические свойства нового препарата убидекаренона проявлялись менее выраженным подъемом сегмента ST, меньшим числом крыс с подъемом сегмента ST и меньшим числом крыс с аритмиями по сравнению с контрольной группой животных через 24 ч после инфаркта. При исследовании пероральных форм препаратов был отмечен статистически значимый эффект Валеокор-QlO в отношении этих показателей в дозе 1,6 мг/кг, что было сопоставимо с эффектом препарата сравнения милдронатом (табл.1).

Таблица 1

Параметры ЭКГ через 24 ч после инфаркта миокарда

Характеристика группы Доза, мг/кг % крыс с подъемом БТ Амплитуда БТ, мВ, М ± т % крыс с аритмиями

Интактные 0 0 0,050 ± 0,003 0

Ложнооперированные 0 0 0,060 ± 0,005 0

Контрольные 0 89 0,190 ±0,011 39

Значение показателей при применении пероральных лекарственных форм

Милдронат 37 78 0,150 ±0,010* 33

Валеокор-(310 таблетки 0,2 84 0,160 ±0,014 37

Валеокор-СЬо таблетки 1,6 63 0,130± 0,011* 32

Валеокор-С^ю таблетки 7,4 84 0,170 ±0,010 37

Значение показателей при применении инъекционных лекарственных форм

Милдронат 74,3 79 0,110 ±0,006* 26

Валеокор-(310 1,6 74 0,100 ±0,009* 26

Валеокор-С^Ю 2,5 74 0,100 ±0,008* 26

Валеокор-(ЗЮ 7,4 79 0,130 ±0,005* 32

Валеокор-СНО 22,2 79 0,140 ±0,011* 32

Примечание. * р < 0,05 в сравнении с контрольной группой.

При применении препаратов в инъекционной форме было отмечено уменьшение числа случаев возникновения аритмий, а также уменьшение вольтажа БТ в 2 раза по сравнению с контрольной группой. Эффект Валеокор-С^Ю не уступал таковому препарата сравнения. Наибольшая эффективность была отмечена при применении Валеокор-(210 в дозах 1,6 и 2,5 мг/кг.

Через 14 дней после индукции инфаркта в контрольной группе наблюдалась депрессия сегмента ЯТ ниже изолинии. В группах животных, получавших препарат, сегмент 8Т на 14 сутки после инфаркта был положительным, что может говорить об ускорении восстановления сократительной способности миокарда на фоне применения Валеокор-С)10. Применение исследуемого препарата было эффективным в дозах 1,6 и 2,5 мг/кг (табл. 2).

Таблица 2

Параметры ЭКГ через 14 суток после инфаркта миокарда

Характеристика группы животных Доза, мг/кг Амплитуда 8Т, мВ, М ± ш

Интактные 0 0,050 ± 0,004

Ложнооперированные 0 0,050 ± 0,006

Контрольные 0 - 0,020 ± 0,002

Милдронат, капсулы 37 0,010 ±0,002*

Валсокор-Рю таблетки 0,2 0,010 ±0,004*

ИМ +Валеокор-С2 ю таблетки 1,6 0,020 ±0,001*

ИМ +Валеокор-С2ю таблетки 7,4 0,010 ±0,002*

Милдронат, раствор для инъекций 74,3 0,030 ± 0,002*

ИМ +Валеокор-С?10, раствор для инъекций 1,6 0,030 ± 0,003*

ИМ +Валеокор-<310, раствор для инъекций 2,5 0,040 ±0,006*

ИМ +Валеокор-С?10, раствор для инъекций 7,4 0,010 ±0,003*

ИМ +Валеокор-<310, раствор для инъекций 22,2 0,010 ± 0,002*

Примечание. * р < 0,05 в сравнении с контрольной группой.

По данным патоморфологического исследования на 14 сутки после инфаркта миокарда было установлено, что механизм противоишемической активности нового препарата убидекаренона связан с усилением процессов неоваскуляризации и дифференцировки сосудов ишемизированного миокарда. Для восстановления деятельности сердца в постинфарктный период в миокарде происходила активизация процессов образования новых сосудов. Это сосуды с тонкой стенкой, недифференцированные, обладающие слабой функциональной активностью. Поэтому в дальнейшем подобные сосуды дифференцировались на артериолы и венулы. Было отмечено, что при применении препарата Валеокор-С^Ю происходит увеличение количества дифференцированных сосудов относительно синусоидов. Этот процесс был выражен как коэффициент дифференцировки сосудов (рис. 1).

Наибольшая эффективность в отношении процессов неоваскуляризации была отмечена при применении Валеокор-<310 в дозах 1,6 мг/кг в таблетках и в дозах 1,6 и 2,5 мг/кг в растворе (рис.2).

*

Восстановление трофики поврежденного миокарда

Образование сосудов нерегулируемого типа

Коэффициент дифференцировки сосудов = количество артериол и венул количество сосудов нерегулируемого типа

Артериола

Венула

Рис. 1. Дифференцировка сосудов при ишемии миокарда

Примечание. Выражаем благодарность за выполнение патоморфологических исследований и помощь в интерпретации результатов анализа гистологических параметров к.м.н., доц. кафедры патологической анатомии СЗГМУ им. И.И. Мечникова Самусенко Игорю Алексеевичу.

4 275

I

1 2

2 1,5

1

0,5 0

Н Контрольная

□ Милдронат

□ Валеокор-ОЮ 0,2 мг/кг

□ Валеокор-ОЮ 1,6 мг/кг

□ Валеокор-ОЮ 7,4 мг/кг

3,5

2,5

1,5

0,5

■ Контрольная

Милдронат, 74,3 мг/кг ЕЗ Валеокор-ОЮ, 1,6 мг/кг В Валеокор-ОЮ, 2,5 мг/кг О Валеокор-ОЮ, 7,4 мг/кг □ Валеокор-ОЮ, 22,2 мг/кг

Таблетки

Раствор

Рис. 2. Влияние применения препаратов на коэффициент дифференцировки сосудов поврежденного миокарда

В баллах проводили гистологическую оценку глубины поражения миокарда. Наибольшая глубина поражения наблюдалась в контрольной группе животных и выражалась в субэпикардиально-интрамуральном инфаркте. Применение препаратов приводило к уменьшению этого показателя. Наиболее эффективным в отношении глубины поражения миокарда было применение Валеокор-QlO в дозе 1,6 мг/кг в таблетках и в дозах 1,6 и 2,5 мг/кг в растворе.

Применение препарата Валеокор-QlO способствовало уменьшению активности ферментов ACT, КФК и ЛДГ (табл. 3).

Таблица 3

Влияние препаратов на активность ферментов при ИМ

Характеристика группы Активность ферментов, ЕД/л

КФК ЛДГ ACT

Интактная 179,5 ±8,5 401,2 ± 10,8 59,3 ± 3,4

Ложнооперированная 271,7 ± 11,2 458,5 ± 15,5 90,4 ± 3,9

Контрольная 446,8 ± 32,5 937,3 ± 48,9 151,8± 11,5

Милдронат капсулы 74,3 мг/кг 432,3 ± 12,9 826,3 ± 14,0 136,0 ±9,8

Валеокор-С>10 таблетки 0,2 мг/кг 426,7 ± 10,7 808,2 ± 22,3 99,6 ± 5,3*

Валеокор-С>10 таблетки 1,6 мг/кг 354,9 ±8,5* 683,7 ± 25,8* 99,8 ± 4,2*

Валеокор-С2Ю таблетки 7,4 мг/кг 442,6 ±7,2 839,9 ± 10,7 96,9 ±4,5*

Милдронат, раствор 37,0 мг/кг 445,7 ± 15,8 680,7 ± 8,5 95,0 ± 4,3*

Валеокор-(310, раствор 1,6 мг/кг 303,5 ±21,3* 665,2 ± 6,9* 97,0 ± 2,2*

Валеокор-С>10, раствор 2,5 мг/кг 351,3 ±22,0* 674,6 ± 7,7* 136,6 ±8,3

Валеокор-С>10, раствор 7,4 мг/кг 376,8 ± 5,4* 709,9 ± 9,8* 105,9 ±6,8*

Валеокор-(210, раствор 22,2 мг/кг 387,5 ±26,5 742,5 ± 59,5 92,9 ± 2,5*

Примечание. * р < 0,05 в сравнении с контрольной группой.

Наибольший эффект в отношении этих показателей наблюдался при применении исследуемого препарата в таблетированной форме в дозе 1,6 мг/кг, в форме раствора для инъекций в дозах 1,6, 2,5 и 7,4 мг/кг.

Цитопротекторное действие препарата осуществлялось за счет его антиоксидантных свойств. При применении препарата было отмечено снижение ПОЛ и увеличение концентрации восстановленного глутатиона в крови (рис. 3).

МДА, мкмоль/л

ЧШк

ЧШк

таблетки

раствор

ВГ, м моль/л

¿г.'ьЬ 6 6 6 %%%%%%

таблетки

раствор

Рис. 3. Влияние препарата Валсокор-С) 10 на уровни ПОЛ и восстановленного глутатиона при инфаркте миокарда

Таким образом, в результате исследования влияния нового препарата Валсокор-С) 10 в условиях экспериментального инфаркта миокарда было установлено противоишемическое действие, проявляющееся в увеличении функциональной активности миокарда, отражающееся на ЭКГ, уменьшении распространенности ишемии по слоям стенки миокарда при применении инъекционных форм препарата, усилении процессов неоваскуляризации и дифференцировки сосудов поврежденного миокарда. Кардиопротективный эффект выражался снижением активности ЛДГ и ферментов цитолиза. Механизм уменьшения активности процессов цитолиза вероятно был связан с антиоксидантным действием препарата, проявлявшимся в уменьшении ПОЛ плазмы крови и увеличении концентрации восстановленного глутатиона в эритроцитах.

Исследование кардиопротективной активности препарата Валеокор-ОЮ на модели ишемии/реперфузии изолированного сердца по методу Лангендорфа

При ишемии и последующей реперфузии изолированного сердца по методу Лангендорфа наблюдалось увеличение ЧСС и снижение сократительной способности миокарда, отражавшееся в снижении давления в левом желудочке и скорости его сокращения. Показатели давления и скорости сокращения левого желудочка отражают силу сердечных сокращений.

При применении Валеокор-<310 происходило статистически значимое увеличение этих параметров, что может свидетельствовать о положительном инотропном действии препарата (рис. 4, 5, 6).

5000+ dP/dt max, мм.рт.ст/сек

4000

3000

2000

1000

V \ V \ 4

140 LVP, MM.pi.CT.

<S> $ <s

4> \ '% '%

4 x % ч 4

Рис. 4. Влияние применения Валеокор- Рис.5. Влияние применения

<310 на скорость сокращения ЛЖ Валеокор-Р10 на максимальное

изолированного сердца при давление в ЛЖ изолированного сердца

ишемии-реперфузии при ишемии-реперфузии

При этом применение препарата не приводило к увеличению ЧСС, а в ряде случаев снижало ЧСС в сравнении с контрольной группой, что говорит о возможном кардиотоническом механизме действия препарата.

Рис. 6. Влияние применения с на ЧСС изолированного миокарда при ишемии-реперфузии

Было отмечено влияние препарата на активность ACT и КФК в перфузате, оттекающем от изолированного сердца при ишемии и реперфузии. Наибольшее снижение активности этих ферментов при ишемии и последующей реперфузии изолированного сердца наблюдался при применении препарата в концентрации 700 мкг/л. При применении Валеокор-QlO в этой концентрации отмечали снижение активности ACT и КФК в среднем в 2 раза в сравнении с контрольной группой.

Результаты исследования влияния препарата на изолированное сердце по методу Лангендорфа позволили подтвердить кардиопротективный эффект, который проявился снижением активности ферментов цитолиза в перфузате, а также установить положительный инотропный эффект препарата Валеокор-QlO, проявляющийя вероятно за счет его кардиотонического действия.

Исследование антигипертензивной активности препарата Валеокор- Q10

На первом этапе исследования антигипертензивной активности Валеокор-QlO было установлено, что однократное применение исследуемого препарата в инъекционной форме у спонтанно-гипертензивных животных приводило к снижению САД на 16-32 мм рт.ст., ДАД - на 10-16 мм рт.ст. Терапевтический эффект препарата Валеокор-QlO достигал максимума через 30 мин после внутривенного введения в наиболее эффективной дозе 7,4 мг/кг. При тестировании инъекционных форм было отмечено, что препарат убидекаренона уступал по эффективности препарату сравнения нифедипину. Применение нифедипина приводило к снижению артериального давления уже через 15 мин после внутривенного введения, а наибольший антигипертензивный эффект наблюдался через 30 мин и составлял 45 мм рт.ст. Однако такое резкое снижение АД оказывает неблагоприятное влияние как на состояние пациентов, так и на стабильность показателей функциональной активности сердечно-сосудистой системы, что было неоднократно отмечено в клинике при применении нифедипина и некоторых других антигипертензивных средств (Кукес В.Г. и др. Сравнительная клинико-фармакологическая характеристика гипотензивной эффективности и безопасности блокаторов медленных кальциевых каналов короткого и пролонгированного действия: нифедипин, нефедипин-ретард и Нифекард XL у больных с мягкой и умеренной артериальной гипертензией // Рус. мед. журн. 2003. № 14. С.800-802).

Однократное введение Валеокор-QlO в таблетированной лекарственной форме в дозах 0,2, 0,5, 1,6, 2,1, 7,4, 22,2, 29,6 мг/кг приводило к снижению систолического артериального давления в диапазоне от 6 до 23 мм рт..ст, диастолического - в диапазоне от 10 до 20. Наблюдали наиболее выраженное снижение АД при применении исследуемого препарата через 1 ч после введения. Наиболее эффективным было применение таблетированной формы препарата Валеокор-QlO в дозах 1,6 и 7,4 мг/кг. Эффективность препарата убидекаренона при энтеральном пути введения уступала эффекту эналаприла, но превышала эффективность препарата сравнения кудесан на 30-50%.

В результате однократного внутрижелудочного введения препарата убидекаренона было установлено, что антигипертензивное действие достигает максимума через 1 ч после введения и сохраняется в течение 3 ч, что коррелирует с данными фармакокинетики препарата (Карлина М.В. и др. Влияние полиэтиленгликоля на доступность коэнзима-QlO из наносистем in vitro // Химико-фармацевтический журнал. 2012. N 4. С.42-45). В связи с этим была принята

следующая схема курсового лечения: проводили измерение артериального давления перед введением препарата, затем вводили препарат ежедневно 3 раза в день и регистрировали АД через 1 и 3 ч после третьего введения (табл. 4).

Таблица 4

Изменение АД при курсовом применении препарата Валеокор-QlO

Время измерения АД при применении таблеток Валеокор- Q10, мм рт.ст., М±ш

в дозе 1,6 мг/кг в дозе 7,4 мг/кг

САД ДАД САД ДАД

1 день лечения

До введения 190 ±2 108 ±4 196 ±2 103 ± 1

Через 1 ч после введения 170 ± 2 * 87 ± 1 * 172 ±2* 90 ± 1 *

3 день лечения

До введения 188 ± 1 104 ± 1 188 ± 2 102 ± 1

Через 1 ч после введения 175 ±2 * 88 ± 1 * 169±2 * 87 ± 1 *

5 день лечения

До введения 174 ±3** 102 ± 1 185 ±2 99 ± 1

Через 1 ч после введения 154 ±2 * 87 ± 1 * 174 ±2 * 86 ±1 *

Примечание. * р < 0,05 в сравнении с контрольной группой; ** р < 0,05 в сравнении с АД до начала лечения

При курсовом применении исследуемого препарата в дозах 1,6 и 7,4 мг/кг было установлено выраженное гипотензивное действие. Наиболее эффективным было применение Валеокор-QlO в дозе 1,6 мг/кг, в этой дозе был отмечен устойчивый антигипертензивный эффект - снижение САД на 20 мм рт..ст. и ДАД на 15 мм рт..ст. на пятый день лечения. Следует также обратить внимание на динамику исходных уровней САД и ДАД с первого по пятый дни введения. В случае применения исследуемого препарата исходный уровень как САД, так и ДАД снижался к пятому дню исследования.

Исследование антиоксидантной активности препарата Валеокор- Q10 in

vitro

Для установления возможных механизмов действия нового препарата был проведен блок исследований антиоксидантной активности в модельных системах in vitro. Существует взаимосвязь между состоянием антиоксидантной системы, активацией процессов свободно-радикального окисления и патологиями сердца и

сосудов (Сыровая А.О. и др. Биологическая роль свободных радикалов в развитии патологических состояний // Международный медицинский журнал. 2012. Т. 18, № 3(71). С. 98-104).

Коэнзим-QlO принимает непосредственное участие в процессах энергообеспечения. В частности, Q10 является мембранным переносчиком электронов в дыхательной цепи митохондрий, необходимой для синтеза АТФ. В литературе описаны уровни эндогенного содержания коэнзима-QlO в органах и тканях. Отмечено, что больше всего эндогенного коэнзима содержится в ткани сердца (Kumar A. et al. Role of coenzyme Q10 (CoQIO) in cardiac disease, hypertension and Meniere-like syndrome // Pharmacology & Therapeutics. 2009. № 124. P. 259-268). Установлено, что с возрастом происходит снижение концентрации эндогенного убидекаренона в крови и тканях, также уменьшение его содержания в тканях наблюдается при патологиях сердечно-сосудистой системы. Вероятно, кроме участия в процессах энергообеспечения коэнзим реализует свои эффекты за счет антиоксидантного действия. Следовательно, актуальным является установление механизмов реализации антиоксидантного эффекта.

При исследовании антирадикальной и восстанавливающей активности было установлено, что препарат реализует свое антиоксидантное действие за счет ингибирования ПОЛ, гидроксильного радикала, а также восстанавливающей способности (табл.5). Активность исследуемого препарата уступала таковой аскорбиновой кислоты, была сопоставима с активностью тролокса -водорастворимого аналога витамина Е и превышала активность препарата сравнения в отношении всех исследуемых показателей кроме восстановления Цитохрома С.

Таблица 5

Антирадикальная и восстанавливающая активность Валеокор-QlO in vitro

Исследуемые соединения С1/2 мг/мл, LOO-, инициированное С1/2 мг/мл НО» Восстановление, С Vi мг/мл

FeS04 AMVN K4[Fe(CN)6] Цитохром С

Аскорбиновая кислота 0,034 ±0,0004 0,045 ± 0,0006 0,16 + 0,02 0,030 ± 0,006 0,004 ±0,0007

Тролокс 0,040 ±0,0001 0,031 ±0,003 0,26 ±0,02 0,360 ± 0,040 0,050 ± 0,003

Валеокор-QlO 0,070 ± 0,0040 0,084 ±0,006 0,43 + 0,03 0,030 ±0,005 0,150 ±0,005

Кудесан 0,081 ±0,0070 0,087 ± 0,002 0,49 + 0,01 0,120 ±0,010 0,090 ± 0,004

Применение Валеокор-С>10 в модельной системе ПОЛ было эффективным в большей степени при инициации процесса с помощью Рс504. Следует отметить,

что избыток металлов переменной валентности играет ключевую роль в развитии многих патологических процессов, таких как ПОЛ плазмы крови, клеточных мембран эдотелиоцитов, кардиомиоцитов и др. (Sarkar R, et al. Amelioration of iron overload-induced liver toxicity by a potent antioxidant and iron chelator, Emblica officinalis Gaertn // Toxicol Ind Health. 2013. № 22. P. 115-123). Следовательно, способность ингибировать процессы, вызванные металлами переменной валентности, может явиться одним из путей реализации антиоксидантного механизма действия убидекаренона.

Активность Вапеокор-QlO в отношении гидроксильного радикала также вносит существенный вклад в реализацию механизма антигипертензивного эффекта препарата. Избыточное образование гидроксильного радикала может быть следствием увеличения продукции пероксинитрита, и являться одним из механизмов развития эндотелиальной дисфункции и артериальной гипертензии.

Таким образом, антиоксидантная активность Вапеокор-QlO in vitro подтверждает полученные данные антиоксидантного статуса in vivo при инфаркте миокарда и артериальной гипертензии и свидетельствует о непосредственном вкладе антирадикальной и восстанавливающей активности в развитие фармакологических эффектов убидекаренона.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования позволили установить эффективность применения нового препарата убидекаренона, обладающего повышенной биодоступностью, при экспериментальной ишемии миокарда и артериальной гипертензии. Были выявлены механизмы реализации препаратом этих фармакологических эффектов. Так, при остром инфаркте миокарда противоишемическое действие препарата реализуется за счет влияния на антиоксидантный статус животных, что отражается в уменьшении продуктов ПОЛ плазмы крови и увеличении концентрации восстановленного глутатиона на фоне применения Вапеокор-QlO, а также за счет усиления процессов неоваскуляризации поврежденного миокарда на фоне лечения исследуемым препаратом. На модели изолированного сердца по методу Лангендорфа было установлено кардиотоническое и кардиопротекгивное действие препарата. При применении Валеокор-QlO наблюдался положительный инотропный эффект, при отсутствии увеличения ЧСС, что может характеризовать препарат как средство, обладающее кардиотоническим действием. После реперфузии активность ферментов цитолиза в перфузате, оттекающем от изолированного сердца, была снижена на фоне применения Валеокор-QlO, что свидетельствует о кардиопротекторном действии препарата. При применении нового препарата убидекаренона у спонтанно-гипертензивных животных наблюдалось снижение систолического и диастолического АД в среднем на 20-30 мм рт.ст. в течение 3 часов. В случае длительного применения исследуемого препарата наблюдалось

стойкое снижение АД с переходом эффекта на следующие сутки и стабилизацией его на этом уровне к концу курса лечения. Механизм гипотензивного действия Q10 связан с его протективным влиянием на эндотелий сосудов, антиоксидантными свойствами, улучшением диастолических функций, снижением вязкости крови (Kumar A. et al. Role of coenzyme Q10 (CoQIO) in cardiac disease, hypertension and Meniere-like syndrome // Pharmacology & Therapeutics. 2009. № 124. P.259-268). Ключевую роль в реализации фармакологических эффектов Валеокор-QlO играет его антиоксидантная активность, что было подтверждено в исследованиях антирадикальной и восстанавливающей способности убидекаренона in vitro.

ВЫВОДЫ

1. Новый препарат убидекаренона Валеокор-QlO обладает противоишемическим эффектом, проявляющимся уменьшением выраженности биометрических, электрофизиологических, биохимических и патоморфологических маркеров ИМ. Механизм противоишемического действия убидекаренона связан с ускорением неоваскуляризации и дифференцировки сосудов поврежденного миокарда.

2. При моделировании ишемии-реперфузии изолированного сердца установлено кардиопротективное и кардиотоническое действие препарата Валеокор-QlO. Механизм кардиопротективного действия препарата реализуется за счет угнетения процессов цитолиза кардиомиоцитов и связан с ингибированием перекисного окисления липидов.

3. Антигипертензивный эффект убидекаренона установлен при применении препарата в дозах от 1,6 до 7,4 мг/кг, противоишемический эффект - в тех же дозах, что позволяет установить диапазон эффективных доз для лечения гипертонической болезни и ишемической болезни сердца.

4. Результаты доклинических исследований показали, что максимальный антигипертензивный эффект наблюдается через 1 час после введения препарата, длительность эффекта составляет 3 часа, что соответствует данным экспериментальной фармакокинетики препарата Валеокор-QlO. При курсовом применении препарата наблюдается стойкое снижение АД с переходом эффекта на следующие сутки и стабилизацией его на этом уровне к концу курса лечения.

5. Проведен сравнительный анализ фармакодинамики и фармакокинетики нового препарата убидекаренона (Валеокор-QlO), полученного согласно новой технологии производства, в новых лекарственных формах в сравнении с зарегистрированными на территории РФ препаратами убидекаренона (Кудевита, Кудесан). В результате анализа установлено, что новый препарат убидекаренона Валеокор-QlO в лекарственных формах жевательных таблеток

и раствора для инъекций обладает повышенной биодоступностью, и

эффективность препарата коррелирует с его фармакокинетикой.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

При использовании новой технологии производства возможно получение препаратов природного происхождения с повышенной биодоступностью в новых лекарственных формах. Разработанный согласно новой технологии препарат Валеокор-QlO отличается выраженной эффективностью и силой действия, проявляющейся благодаря повышенной биодоступности.

Сведения о противоишемической, кардиопротективной и антигипертензивной активности препарата in vivo позволят экстраполировать данные экспериментальных исследований в клинику, что может быть использовано для повышения эффективности планирования клинических испытаний нового препарата.

Учитывая поливалентность действия препарата Валеокор-QlO, применение его может быть рекомендовано при сочетанных патологиях, таких как ИБС с гипертонией, ХСН с гипертонией, метаболический синдром и др.

Данные экспериментальных исследований о разработке подбора доз, длительности и кратности применения нового препарата Валеокор-QlO при гипертензии позволяют рекомендовать его использование у пациентов с артериальной гипертензией с учетом эффективных доз и установленной длительности действия.

Необходимость разработки пролонгированных форм оправдана для большинства антигипертензивных средств, влияющих на тонус сосудов и функциональную активность миокарда. Принимая во внимание выраженную антигипертензивную эффективность препарата Валеокор-QlO, но более длительное время его достижения и меньшую продолжительность по сравнению с нифедипином и эналаприлом, следует отметить, что особую практическую значимость по результатам проведенной работы будет иметь поиск и разработка новых методов получения пролонгированных форм убидекаренона (Валеокор-QlO).

В результате диссертационной работы были представлены документы в Министерство Здравоохранения с целью получения разрешения на клинические испытания препарата Валеокор-Q 10 в качестве противоишемического средства -В AJI EOKOP-Q10, таблетки жевательные 50 мг - Вх. № 409054 (МЗ РФ) - препарат зарегистрирован и внесен в Государственный Реестр под номером ЛП-000650 от 28.09.2011 г. и ВАЛЕОКОР-Q 10, раствор для внутривенного и внутримышечного введения, 10 мг/мл - Вх. № 420733 (МЗ РФ) (проведены клинические испытания I фазы раствора. Проводится экспертиза с целью выдачи разрешения на проведение клинических исследований II фазы).

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Макаров, В.Г. Сравнительная оценка антирадикальной активности флавоноидов по отношению к гидроксильным и супероксиданион радикалам в экспериментах in vitro И В.Г.Макаров, М.Н.Макарова, А.И.Селезнева // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И.Мечникова. - 2004. - № 4. - С.108-110.

2. Макаров, В.Г. Изучение механизма антиоксидантного действия витаминов и флавоноидов // В.Г.Макаров, М.Н.Макарова, А.И.Селезнева // Вопросы питания. - 2005. - Т.74, №1. - С.10-13.

3. Макаров, В.Г. Изучение антиоксидантной и антигипоксической активности экстрактов бадана толстолистного / В.Г.Макаров, М.Н.Макарова, А.Е.Александрова, А.И.Селезнева, С.В.Тесакова // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения. Матер. IX международного съезда. - Санкт-Петербург, 2005. - С.94-102.

4. Зенкевич, И. Г. Новые примеры участия кислорода в химических реакциях в растворах // И. Г.Зенкевич, В.Г.Макаров, М.Н.Макарова, А.И.Селезнева // Журнал общей химии. - 2008. - Т.78, № 9. - С.1449 - 1456.

5. Абрашова, Т.В. Вариабельность биохимических и гематологических показателей у лабораторных крыс в зависимости от линии и возраста //

A.П.Соколова, А.И.Селезнева, О.Э.Хуттунен, М.Н.Макарова, В.Г.Макаров // Международный вестник ветеринарии. - 2010. - № 2. - С.55-60.

6. Соколова, А.П. Сравнительная характеристика биохимических и гематологических показателей у лабораторных крыс разных линий и возрастов // Т.В.Абрашова, О.Э.Хуттунен, А. И.Селезнева, М.Н.Макарова, В. Г.Макаров // Международный вестник ветеринарии. - 2010. - № 4. - С.58-62.

7. Макарова, М.Н. Влияние сока аронии черноплодной на артериальное давление экспериментальных животных // М.Н.Макарова, А.И.Селезнева,

B.Г.Макаров, Г.И. Дьячук, А.Н.Шиков, О.Н.Пожарицкая // Профилактическая и клиническая медицина. - 2012. - № 3. - С.45-49.

8. Ковалева, М.А. Эффективность убидекаренона при метаболическом синдроме и артериальной гипертензии в эксперименте //А.И.Селезнева, М.Н.Макарова, В.Г.Макаров, А.А.Забозлаев, Г.И.Дьячук // Профилактическая и клиническая медицина. - 2012. № 4. - С.81-84.

9. СПРАВОЧНИК. Физиологические, биохимические и биометрические показатели нормы экспериментальных животных. Под ред. Макарова В.Г., Макаровой М.Н. Коллектив авторов: Абрашова Т.В., Гущин Я.А., Ковалева М.А., Рыбакова A.B., Селезнева А.И., Соколова А.П., Ходько C.B. - СПб.: Изд-во «ЛЕМА». - 2013. - С.17-33.

Подписано в печать 25.07.13 Формат 60x84'/i6 Цифровая Печ. л. 1.3 Тираж 150 Заказ 04/07 печать

Отпечатано в типографии «Фалкон Принт» (197101, г. Санкт-Петербург, ул. Большая Пушкарская, д. 54, офис 2)